PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATLICA DEL ECUADOR

ESCUELA DE BIOANLISIS



CARRERA BIOQUMICA CLNICA


NIVEL 4


LABORATORIO DE ANLISIS INSTRUMENTAL


LABORATORIO # 2

Fecha: 13 / 02 / 2014

ESPECTRO VISIBLE DEL COLORANTE
AZUL DE BROMOFENOL

GRUPO # 2

Elaborado por: FRANCISCO SIGCHO


2
Ttulo: Obtener el espectro visible del colorante azul de bromofenol (AZB).

Resumen:

A partir de una solucin de azul de bromofenol de concentracin 10mg/L, se corri el
espectro visible, utilizando agua destilada como blanco y un espectrofotmetro como
equipo. Una vez corrido el anlisis se obtuvo el pico ms alto a un valor de 593nm y una
absorbancia de 0,461.

Objetivos:
a) Familiarizarse con el uso correcto del espectrofotmetro Thermo
Genesys 10.
b) Obtener el espectro del azul de bromofenol en el rango comprendido
entre 350 a 700 nm.
c) Determinar a qu longitud de onda del espectro visible se produce el
valor mximo de absorbancia del AZB.

Introduccin:

Este estudio fue realizado con la finalidad de aprender a utilizar el espectrofotmetro y
adems realizar el grfico del espectro visible de un compuesto para conocer la longitud de
onda () ideal para realizar las curvas de calibracin. La solucin que fue utilizada en este
experimento fue de azul de bromofenol con una concentracin de 10 mg/L.

El azul de bromofenol es un compuesto muy utilizado en anlisis de laboratorio y ensayos
de qumica fina. Por ello es importante conocer sus caractersticas:

CARACTERSTICAS DEL AZUL DE BROMOFENOL
Frmula
emprica
Frmula
desarrollada
Masa
molar
Solubilidad
en agua
Punto de
fusin
Densidad
C
19
H
10
Br
4
O
5
S

669.96 g/
mol
(20 C)
Prcticament
e insoluble
273 C 730 kg/m
3


El azul de bromofenol es un indicador de pH y su intervalo de transicin visuales: pH 3.0
(amarillo) - pH 4.6 (azul violeta o prpura).

El experimento fue realizado en un espectrofotmetro Genesys y se realizaron varias
mediciones d la absorbancia a diferentes longitudes de onda para encontrar y graficar el
espectro visible

Materiales y mtodos:
Equipo : Espectrofotmetro Thermo Genesys 10 Vis (# ).
Celdas : Plsticas.
Agua : Blanco.
Muestra : Solucin acuosa de azul de bromofenol de 10 mg/L.

Procedimiento: Se siguieron las instrucciones recibidas mediante videos y explicaciones
previas y durante la prctica.
3

Resultados y discusin:

El experimento se realiz bajo condiciones favorables y con todas las indicaciones
correspondientes para poder obtener un buen resultado. Antes de medir la absorbancia de
la muestra, siempre se midi el agua como blanco para tener el valor de referencia. No
todos los resultados obtenidos tienen un valor positivo debido a que la concentracin del
analito daba una absorbancia baja, pero tambin se pudo observar los picos a lo largo del
espectro visible, tal como se seala en la figura 1.

El pico ms alto estuvo a una longitud de onda de 593nm, un valor que difiere un poco del
valor terico, que es 591nm, pero no es muy significativo. La absorbancia a este valor fue
de 0,461 y por lo tanto en adelanter cuando se utilice azul de bromofenol se lo har con
una longitud de onda de 593nm.

Se utiliza el pico ms alto del espectro visible para que al momento de realizar un anlisis
por espectrofotometra los datos obtenidos no estn tan juntos en la misma lnea, ms bien
para que se los pueda distinguir con facilidad. Otro dato importante es que si se cambia la
concentracin del analito el pico ms alto se va a mantener a una longitud de onda muy
parecida, es decir, la concentracin no afecta el espectro visible pero si afecta a la
absorbancia.


Fig. 1 Espectro visible de Azul de bromofenol corrido en el rango de 350 a 650 nm.

Tabla 1. Longitudes de onda cercanas al mximo de absorbancia obtenidas en
corridas manuales y automticas del espectro del azul de bromofenol .

Rango entre 350 a 700 nm ( 50 nm)
Longitud de onda (nm) Absorbancia (UA)
a) 350 -0,053
b) 400 -0,076
c) 450 -0,068
d) 500 -0,021
e) 550 0,147
f) 600 0,388
g) 650 -0,079
h) 700 -0,067

Espectro Visible de Azul de Bromofenol (ABF)
-0,050
0,000
0,050
0,100
0,150
0,200
0,250
0,300
350 370 390 410 430 450 470 490 510 530 550 570 590 610 630 650
Longitud de onda (nm)
A
b
s
o
r
b
a
n
c
i
a

(
U
A
)





4
Rango entre 550 a 650 nm ( 25 nm)
Longitud de onda (nm) Absorbancia (UA)
a) 550 0,209
b) 575 0,330
c) 600 0,399
d) 625 -0,007
e) 650 -0,069

Rango entre 550 a 650 nm ( 10 nm)
Longitud de onda (nm) Absorbancia (UA)
a) 550 0,168
b) 560 0,213
c) 570 0,276
d) 580 0,419
e) 590 0,481
f) 600 0,384
g) 610 0,197
h) 620 0,052
i) 630 -0,053
j) 640 -0,080
k) 650 -0,081

Rango entre 580 a 610 nm ( 5 nm)
Longitud de onda (nm) Absorbancia (UA)
a) 580 0,374
b) 585 0,420
c) 590 0,425
d) 595 0,453
e) 600 0,397
f) 605 0,307
g) 610 0,243

Escaneo automtico en el rango entre 545 a 645 nm
Longitud de onda (nm) Absorbancia (UA)
a) 593 0,461


Bibliografa:

1. Harris, D. (2003). Anlisis Qumico Cuantitativo, Ed. Revert, 6
ed
, Barcelona, Espaa.

2. Merck Millipore. (20 de Febrero de 2014). Obtenido de
http://www.merckmillipore.com/spain/chemicals/azul-de-bromofenol/MDA_CHEM-
108122/p_ghGb.s1L_mIAAAEWs.EfVhTl