Microscopia

I. Introduccin
Los procesos tecnolgicos han posibilitado la investigacin cada vez ms profunda de la
materia viva y los procesos vitales. Por ello el microscopio que data de finales del siglo
XVI desempe!o un papel fundamental contribuyendo a la elaboracin de hiptesis y
teor"as que condu#eron a duraderas pol$micas.
%l microscopio es un instrumento ptico destinado a observar de cerca ob#etos
e&tremadamente diminutos la combinacin de sus lentes produce el efecto de la que se
mira aparezca con dimensiones e&traordinariamente aumentadas haci$ndose perceptible lo
que no lo es a simple vista.
II. Objetivos
o 'eterminar el estudio de la microscopia
o (onocer las diferentes clases de microscopio
o 'eterminar las partes del microscopio
III. Marco Terico
)*icroscopia+ %s la e&ploracin mediante el microscopio de elementos peque!os que no
son observables a trav$s del o#o desnudo. La microscopia en cuanto ha permitido descubrir
los microbios de las enfermedades infecciosas y conocer la intima estructura celular de los
rganos y de los te#idos ha proporcionado unos servicios e&traordinarios al rea de salud.
Microscopia ptica:
Microscopio ptico compuesto.-
Sistema ptico
o ,(-L./+ Lente situada cerca del o#o del observador. .mpl"a la imagen del
ob#etivo.
o ,01%2IV,+ Lente situada cerca de la preparacin. .mpl"a la imagen de
$sta.
o (,3'%34.',/+ Lente que concentra los rayos luminosos sobre la
preparacin.
o 'I.5/.6*.+ /egula la cantidad de luz que entra en el condensador.
o 5,(,+ 'irige los rayos luminosos hacia el condensador.
Sistema mecnico
o 4,P,/2%+ *antiene la parte ptica. 2iene dos partes+ el pie o base y el
brazo.
o PL.2I3.+ Lugar donde se deposita la preparacin.
o (.0%7.L+ (ontiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular
binocular8..
o /%V9LV%/+ (ontiene los sistemas de lentes ob#etivos. Permite al girar
cambiar los ob#etivos.
o 2,/3ILL,4 '% %35,:-%+ *acrom$trico que apro&ima el enfoque y
microm$trico que consigue el enfoque correcto.
Manejo y uso del Microscopio ptico
;. (olocar el ob#etivo de menor aumento en posicin de empleo y ba#ar la platina
completamente. 4i el microscopio se recogi correctamente en el uso anterior ya
deber"a estar en esas condiciones.
<. (olocar la preparacin sobre la platina su#etndola con las pinzas metlicas.
=. (omenzar la observacin con el ob#etivo de >& ?ya est en posicin@ o colocar el de
;A aumentos ?;A&@ si la preparacin es de bacterias.
>. Para realizar el enfoque+
a. .cercar al m&imo la lente del ob#etivo a la preparacin empleando el
tornillo macrom$trico. %sto debe hacerse mirando directamente y no a trav$s
del ocular ya que se corre el riesgo de incrustar el ob#etivo en la preparacin
pudi$ndose da!ar alguno de ellos o ambos.
b. *irando ahora s" a trav$s de los oculares ir separando lentamente el
ob#etivo de la preparacin con el macrom$trico y cuando se observe algo
n"tida la muestra girar el microm$trico hasta obtener un enfoque fino.
<. Pasar al siguiente ob#etivo. La imagen deber"a estar ya casi enfocada y suele ser
suficiente con mover un poco el microm$trico para lograr el enfoque fino. 4i al
cambiar de ob#etivo se perdi por completo la imagen es preferible volver a enfocar
con el ob#etivo anterior y repetir la operacin desde el paso =. %l ob#etivo de >A&
enfoca a muy poca distancia de la preparacin y por ello es fcil que ocurran dos
tipos de percances+ incrustarlo en la preparacin si se descuidan las precauciones
anteriores y mancharlo con aceite de inmersin si se observa una preparacin que ya
se enfoc con el ob#etivo de inmersin.
=. %mpleo del ob#etivo de inmersin+
a. 0a#ar totalmente la platina.
b. 4ubir totalmente el condensador para ver claramente el c"rculo de luz que
nos indica la zona que se va a visualizar y donde habr que echar el aceite.
c. 6irar el revlver hacia el ob#etivo de inmersin de#ndolo a medio camino
entre $ste y el de &>A.
d. (olocar una gota m"nima de aceite de inmersin sobre el c"rculo de luz.
e. 2erminar de girar suavemente el revlver hasta la posicin del ob#etivo de
inmersin.
f. *irando directamente al ob#etivo subir la platina lentamente hasta que la
lente toca la gota de aceite. %n ese momento se nota como si la gota
ascendiera y se adosara a la lente.
g. %nfocar cuidadosamente con el microm$trico. La distancia de traba#o entre
el ob#etivo de inmersin y la preparacin es m"nima aun menor que con el
de >A& por lo que el riesgo de accidente es muy grande.
h. -na vez se haya puesto aceite de inmersin sobre la preparacin ya no se
puede volver a usar el ob#etivo >A& sobre esa zona pues se manchar"a de
aceite. Por tanto si desea enfocar otro campo hay que ba#ar la platina y
repetir la operacin desde el paso =.
i. -na vez finalizada la observacin de la preparacin se ba#a la platina y se
coloca el ob#etivo de menor aumento girando el revlver. %n este momento
ya se puede retirar la preparacin de la platina. 3unca se debe retirar con el
ob#etivo de inmersin en posicin de observacin.
#. Limpiar el ob#etivo de inmersin con cuidado empleando un papel especial
para ptica. (omprobar tambi$n que el ob#etivo >A& est perfectamente
limpio.
Microscopio de campo claro.-
(onsiste en una fuente luminosa un condensador que enfoca los rayos de luz sobre la
muestra una platina sobre la cual se coloca la muestra un ob#etivo y un ocular a trav$s del
cual se puede observar directamente el esp$cimen.
La utilidad del microscopio ptico reside en su capacidad de magnificacin y lo que es ms
importante su capacidad de resolver detalles estructurales. %l poder de resolucin es la
capacidad de una lente o sistema ptico de producir imgenes separadas de ob#etos que se
encuentran muy pr&imos.
Microscopio de contraste de fase.-
Permite observar c$lulas y te#idos sin colorear y por eso resulta especialmente Btil para el
e&amen de c$lulas vivas y cortes gruesos de material plstico no coloreados.
%&isten peque!as diferencias del "ndice de refraccin en diferentes partes de la c$lula y en
distintas partes de una muestra de te#ido. La luz que pasa por regiones de mayor "ndice de
refraccin e&perimenta una defle&in y queda fuera de fase con respecto al haz principal de
las ondas de luz.
*odificaciones del microscopio de contraste de fase son+
)Microscopio de interferencia+ Permite tambi$n la cuantificacin de la masa de un te#ido
)Microscopio de interferencia diferencial+ Ctil especialmente para estudiar las
propiedades de superficie de las c$lulas y otros elementos biolgicos
Microscopio de fluorescencia.-
Permite detectar mol$culas que fluorescen es decir que emiten luz de longitud de onda
que se encuentra dentro del espectro visible cuando son e&puestas a la luz ultravioleta. 4e
usa este microscopio para revelar mol$culas fluorescentes naturales como la vitamina .
pero como este tipo de mol$culas no es numeroso su aplicacin mas difundida es para
revelar una fluorescencia agregada a sustancia como en el caso de la deteccin de
ant"genos o anticuerpos en procedimientos de coloracin inmunecito qu"mica.
Microscopio de barrido con focal.-
%s un sistema relativamente nuevo se usa para estudiar la estructura de sustancias
biolgicas.
%n este microscopio se utiliza un rayo lser de iluminacin que es fuertemente convergente
y por lo tanto produce un punto de barrido muy poco profundo. La luz que emerge del
punto es dirigida a un tubo foto multiplicado donde es analizada. 4e utiliza un sistema de
espe#os para mover el rayo lser a trav$s del esp$cimen iluminando un solo punto por vez.
4e registren los datos de cada punto y se guardan en una computadora luego se puede
llevar la informacin a un monitor de alta resolucin para crear una imagen visual. 4u
venta#a es su capacidad de tomar imgenes de la muestra en cortes pticos muy finos.
Microscopio de lu ultravioleta.-
4e utiliza una fuente de luz ultravioleta y depende de la absorcin de esa luz por las
mol$culas de la muestra. 4us resultados se registran fotogrficamente.
3o es posible e&aminar en forma directa el esp$cimen en el ocular ya que la luz
ultravioleta da!a la retina.
%ste m$todo sirve para detectar cidos nucleicos espec"ficamente bases puricas y
pirimidicas del nucletido.
2ambi$n es Btil para detectar prote"nas que contienen ciertos aminocidos.
Microscopio de polariacin.-
%s una simple modificacin del microscopio ptico pero el esp$cimen es atravesado por
luz paralizada y se usa otro polarizador que se hace rotar para detectar la orientacin
molecular en muestra de te#idos.
Microscop!a "lectrnica:
Microscopio electrnico de transmisin #M"T$.-
4e utiliza un haz de electrones en lugar de un haz de luz visible para producir una imagen.
Los electrones deben pasar a trav$s de la muestra y chocar luego con la placa fotogrfica.
La formacin de la imagen en el microscopio electrnico depende del hecho de que algunos
electrones no atraviesan el esp$cimen y en consecuencia no llegan a la placa fotogrfica
sino que e&perimentan una defle&in provocada por sustancias de alta densidad que
encuentran normalmente en la muestra o han sido agregadas a ellas durante el proceso de
fi#acin y tincin.
Microscopio electrnico de barrido.-
%n este los electrones no atraviesan la muestra en el proceso de formacin de imgenes. %n
cambio se e&plora la superficie de la muestra desplazando un haz de electrones estos al
refle#arse de la superficie son recogidos por un detector y procesados de manera tal que
puede verse en imagen tridimensional en una pantalla de televisin.
%artes de un microscopio:
&.- %ie o baseD da estabilidad
'.- (olumnaD sirve para sostener las diferentes partes
).- %latinaD all" se coloca el ob#eto que se quiere estudiar
*.- (arroD colocado sobre la platina permite desplazar la preparacin
+.- ,raoD sirve para tomar el microscopio y se encuentran dos tornillos reguladores
-.- "l tornillo macrom.tricoD para efectuar movimientos verticales grandes que permiten
un enfoque rpido
/.- "l tornillo microm.tricoD permite movimientos lentos para afinar y precisar el enfoque
0.- "l tuboD esta unido al brazo en su parte superior hay un orificio donde se coloca el
ocular y en la parte inferior se encuentra el revolver
1.- 2evlverD donde van enroscados los ob#etivos
&3.- Ocular esta en la parte superior del tubo cumple la funcin de aumentar la imagen
&&.- ObjetivosD son una serie de lentes montados sobre cil"ndricos de diferentes tama!os
que se enroscan en el revlver
&'.- "spejoD permite dirigir la luz ya sea natural o artificial
&).- (ondensadorD es un sistema de lentes situado deba#o de la platina que permite variar
la iluminacin del campo y concentrar la luz sobre el ob#eto en observacin
&*.- 4iafra5ma o irisD es un disco situado en la parte inferior del condensador que regula la
cantidad de luz
Mantenimiento y precauciones
;. .l finalizar el traba#o hay que de#ar puesto el ob#etivo de menor aumento en
posicin de observacin asegurarse de que la parte mecnica de la platina no
sobresale del borde de la misma y de#arlo cubierto con su funda.
<. (uando no se est utilizando el microscopio hay que mantenerlo cubierto con su
funda para evitar que se ensucien y da!en las lentes. 4i no se va a usar de forma
prolongada se debe guardar en su ca#a dentro de un armario para protegerlo del
polvo.
=. 3unca hay que tocar las lentes con las manos. 4i se ensucian limpiarlas muy
suavemente con un papel de filtro o me#or con un papel de ptica.
>. 3o de#ar el portaob#etos puesto sobre la platina si no se est utilizando el
microscopio.
E. 'espu$s de utilizar el ob#etivo de inmersin hay que limpiar el aceite que queda en
el ob#etivo con pa!uelos especiales para ptica o con papel de filtro ?menos
recomendable@. %n cualquier caso se pasar el papel por la lente en un solo sentido y
con suavidad. 4i el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el ob#etivo hay que
limpiarlo con una mezcla de alcoholFacetona ?G+=@ o &ilol. 3o hay que abusar de
este tipo de limpieza porque si se aplican estos disolventes en e&ceso se pueden
da!ar las lentes y su su#ecin.
H. 3o forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio ?macrom$trico
microm$trico platina revlver y condensador@.
G. %l cambio de ob#etivo se hace girando el revlver y dirigiendo siempre la mirada a
la preparacin para prevenir el roce de la lente con la muestra. 3o cambiar nunca de
ob#etivo agarrndolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se est observando a
trav$s del ocular.
I. *antener seca y limpia la platina del microscopio. 4i se derrama sobre ella algBn
l"quido secarlo con un pa!o. 4i se mancha de aceite limpiarla con un pa!o
humedecido en &ilol.
J. %s conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesin
prctica y al acabar el curso encargar a un t$cnico un a#uste y revisin general de
los mismos.
I6. (onclusin
Los diferentes tipos de microscopio y sus diversos usos y funcionamientos en la actualidad
develan al hombre muchas formas y e&plicaciones de aquellos elementos peque!os que
encierran un sin nBmero de utilidades para el campo de la salud.
%n la -(%0,L los laboratorios cuentan con la presencia de microscopios pticos o de
campo claro.
6. ,iblio5raf!a
)Irving 3. 4a& K /ichard 1 LeLis 4r. 'iccionario de qu"mica y de productos qu"micos
ediciones ,mega 4...
)'r. 4%6.2,/% Luiqi 'r. Polo6ianangelo 'iccionario *$dico %ditorial 2eid$ :uinta
%dicin.
) http+KKLLL.#oseacortes.comKpracticasKmicroscopio.htm