54 MENTE Y CEREBRO 67 - 2014

NEUROLOG A
A
pesar de los esfuerzos de la medici-
na por minimizar el impacto de las
enfermedades o lesiones del siste-
ma nervioso central (SNC), la inca-
pacidad del cerebro de recupe-
rarse por completo conlleva a menudo dcits
neurolgicos permanentes. Este problema ha
motivado la bsqueda de nuevas estrategias
teraputicas para la regeneracin del tejido le-
sionado, entre ellas, la terapia con clulas madre
neurales (CMN).
Hasta el momento se conocen dos centros proli-
ferativos en el cerebro de mamferos adultos don-
de residen clulas madre: la zona subventricular
(ZSV) de los ventrculos laterales y el giro dentado
hipocampal. Aunque se han encontrado clulas
con potencial proliferativo en otras regiones del
SNC, como el tercer ventrculo, el canal ependi-
mario de la mdula espinal o la corteza cerebral,
todava sabemos poco sobre la actividad neuro-
gnica en estas regiones y su implicacin en el
funcionamiento cerebral.
Las primeras CMN que se identicaron fue-
ron las que se alojan en la ZSV. A nales del si-
glo xx, el grupo de Arturo lvarez Buylla, de
la Universidad de California en San Francisco,
y nuestro equipo de la Universidad de Valencia
demostramos en roedores que las clulas de tipo
B o astrocitos radiales eran las clulas madre del
SNC adulto. De los numerosos experimentos que
llevamos a cabo, uno result clave. Mediante una
bomba osmtica, introdujimos en el ventrculo
cerebral de los animales una droga antimitti-
ca (arabinsido de citosina), la cual produjo la
muerte de los tipos celulares que se dividan
activamente durante el tiempo de actuacin de
la bomba. Al analizar la ZSV inmediatamente
despus de la infusin intraventricular, solo se
encontraron astrocitos radiales (clulas en divi-
sin lenta) y clulas ependimarias (de revesti-
miento ventricular y que no se dividen). A los
pocos das de retirar la sustancia antimittica, la
zona subventricular se hallaba completamente
repoblada de neuronas jvenes.
Por otro lado, mediante la inyeccin de un mar-
cador de clulas en proliferacin y el posterior
estudio de la ZSV en momentos diferentes tras la
infusin de la droga antimittica se observ que
en un primer momento se marcaban los astroci-
tos radiales, mientras que otros tipos celulares,
incluso neuronas, presentaban la marca a los po-
cos das, lo que indicaba que estas procedan de
aquellos astrocitos radiales.
En condiciones naturales, las nuevas neuronas
que proceden de la zona subventricular forman
cadenas protegidas o aisladas por una envoltura
de gla y se incorporan a una ruta de migracin
hacia el bulbo olfativo. All dan lugar a un tipo
de neuronas maduras de carcter inhibitorio que
se integran formando parte de los circuitos ner-
viosos existentes. Estas neuronas no son capaces
de migrar a otras regiones ni de dar lugar a otros
tipos de neuronas. Pese a ello, este descubrimien-
to representa un gran avance en el campo de la
neurociencia y la terapia celular, ya que ha permi-
tido conocer el tipo de clula con el que hay que
mantener un dilogo. La perseverancia de los
investigadores en este campo podra, en el futuro,
permitir desviar la ruta de migracin hacia zonas
lesionadas o generar tipos neuronales a la carta.
EN SNTESIS
Terapia
neurorregenerativa
1
Ciertas estrategias neu-
roprotectoras novedosas
han permitido minimizar el
dao tras una lesin neuro-
lgica. Sin embargo, la medi-
cina actual se ha quedado a
las puertas de la neurorrege-
neracin.
2
El hallazgo de las clulas
madre neuronales abri
hace ms de dos decenios
la posibilidad de investigar
su uso teraputico. Desde
entonces, la medicina rege-
nerativa del sistema nervio-
so central avanza a pasos
agigantados.
3
Hoy en da, numerosos
ensayos con clulas
madre para regenerar las le-
siones neurolgicas revelan,
en animales, la inocuidad de
esta terapia.
Clulas madre neurales:
las grandes reparadoras?
La clave del tratamiento del sistema nervioso adulto lesionado podra encontrarse
en entender cmo actan las clulas madre
JOS MANUEL GARC A VERDUGO Y SARA GI L- PEROT N
MENTE Y CEREBRO 67 - 2014 55
Existen en el cerebro humano?
La neurognesis adulta en mamferos, tanto en la
zona subventricular como en el giro dentado, se
ha descrito primero en ratones y, con posteriori-
dad, en otras especies, como ratas, gatos, vacas,
conejos, perros, monos e incluso humanos. Pero,
si bien la naturaleza de las clulas madre es la
misma, existen algunas diferencias citoarquitec-
tnicas entre especies, lo que obliga a ser cautos
a la hora de establecer correlaciones. Una de las
limitaciones para el estudio de la neurognesis
adulta en humanos reside en la carencia de mues-
tras anatomopatolgicas en buen estado de con-
servacin y jacin. Por cuestiones legales, ha de
pasar un nmero de horas determinado desde la
muerte hasta la jacin de los tejidos, fenmeno
este ltimo necesario para frenar los procesos
de muerte celular que desencadena la falta de
nutrientes y oxgeno. Tampoco es posible admi-
nistrar sustancias marcadoras de proliferacin in
vivo, ya que son citotxicas.
En los humanos, los astrocitos actan, asimismo,
como clulas madre neuronales. Adems, poseen
multipotencialidad: no solo son capaces de gene-
rar neuronas, sino que, en la etapa adulta, tambin
producen clulas de la gla. Sin embargo, el nmero
de CMN en las personas resulta mucho menor en
proporcin comparado con el que presentan los
roedores. Por otra parte, todava no se ha escla-
recido cul es el destino nal de la descendencia
celular. Mientras que en los ratones, como ya se
ha comentado, son los bulbos olfativos, ese mis-
mo destino migratorio de las neuronas jvenes no
existe en los humanos adultos. As lo corroboraron
C
O
R
T
E
S

A

D
E

J
O
S

M
A
N
U
E
L

G
A
R
C

A

V
E
R
D
U
G
O

Y

S
A
R
A

G
I
L
-
P
E
R
O
T

N
NEUROESFERAS
Las clulas madre neurales
pueden expandirse in vitro
a partir de la zona subven-
tricular formando estructuras
redondeadas, similares a una
mora, llamadas neuroesferas.
A la izquierda se observa
una neuroesfera que ha in-
corporado un marcador de
divisin (bromodeoxiuridina),
en verde, y otra que expresa
un marcador de clula madre
glial, la protena GFAP, en rojo.
Cuando las neuroesferas se
siembran en un medio que
propicia la diferenciacin dan
lugar a neuronas, astrocitos
y oligodendrocitos (abajo, de
izquierda a derecha).
56 MENTE Y CEREBRO 67 - 2014
NEUROLOG A
Jonas Frisn, del Instituto Karolinska, y sus cola-
boradores mediante la prueba de carbono-14 (
14
C).
El
14
C constituye un istopo de carbono poco
abundante; en los organismos vivos se presenta
en concentraciones muy bajas. El equipo de Frisn
bas su investigacin en la elevacin de los niveles
atmosfricos de
14
C tras los ensayos con bomba
atmica que se realizaron durante la Guerra Fra
(entre 1955 y 1963). En cada momento, el
14
C ge-
nmico celular se correlaciona con el
14
C atmos-
frico, el cual se incorpora en el momento de la
duplicacin del ADN previo a la divisin celular.
De esta manera, en funcin de la concentracin
de
14
C poda conocerse la edad de las clulas de las
personas. Mediante centrifugacin y citometra
de ujo especca para marcadores de neuronas
se obtuvieron los ncleos neuronales con ADN
genmico de los sujetos. A modo de ejemplo, si la
muestra proceda de un varn nacido en 1930 y el
ADN mostraba niveles de
14
C elevados correspon-
dientes a etapas posteriores a 1955, ello indicaba
que haban nacido nuevas neuronas durante di-
cha etapa y posteriormente al nacimiento. Segn
concluyeron los autores, la neurognesis postnatal
en los bulbos olfativos humanos resulta insigni-
cante, pues alcanza algo ms de un 1 por ciento
de recambio neuronal en 100 aos, si pudiramos
llegar a vivirlos. Como veremos ms adelante,
esta tcnica conrm la neurognesis adulta en
otras regiones del cerebro como el giro dentado
hipocampal. A pesar de que la neurognesis en el
bulbo olfativo adulto en humanos sea anecdtica,
se ha demostrado la existencia de actividad pro-
liferativa en la ZSV, si no dirigida a la formacin
de neuronas, probablemente relacionada con la
formacin de astrocitos u oligodendrocitos (c-
lulas productoras de mielina).
A diferencia del cerebro adulto, el estudio his-
tolgico cerebral de fetos y nios menores de un
ao ha demostrado que en esas edades existe pro-
liferacin celular y migracin de nuevas neuronas
al sistema olfativo y, lo que es ms sorprendente,
hacia la corteza cerebral prefrontal. Ello podra
indicar que, en el curso de la evolucin, nuestro
cerebro ha aprendido a realizar un renamiento
de sus conexiones en etapas tempranas.
El giro dentado hipocampal (regin que se re-
laciona con el aprendizaje y la memoria) tambin
posee clulas madre neurales, en concreto, astro-
citos radiales que generan neuronas funcionales
in situ. Hace ms de un decenio, Peter Ericksson,
del Instituto Salk para Estudios Biolgicos, cons-
tat que en el hipocampo humano persiste la
formacin de nuevas neuronas durante la edad
adulta, a diferencia de lo que ocurre en la zona
subventricular.
Destino:
el bulbo olfativo
En el cerebro de ratn adulto
(corte sagital) se han constata-
do dos regiones como fuente
de clulas madre. Por un lado,
la zona subventricular (ZSV)
que tapiza los ventrculos
laterales y que contiene una
poblacin de clulas madre
capaces de diferenciarse a
neuronas en el bulbo olfativo
(BO). Para ello tienen que mi-
grar varios milmetros ( flecha).
Por otro, el giro dentado del
hipocampo (GD) donde las
clulas madre que se encuen-
tran en la porcin subgranular
o basal se diferencian a neu-
ronas funcionales en la misma
regin.
Astrocitos: las clulas madre neurales en los roedores
La zona subventricular (ZSV) en el cerebro
de ratones adultos (a) se halla compuesta
por varios tipos celulares: clulas ependi-
marias (violeta), astrocitos (azul), precur-
sores de amplificacin (verde) y neuronas
migradoras (rojo). El arabinsido de citosina
(Ara-C) es una droga antimittica, capaz de
eliminar a las clulas que se estn dividien-
do: durante la fase de sntesis estas incor-
poran la citosina alterada que desencadena
la muerte celular. Tras la infusin intraven-
tricular de Ara-C durante seis das (0 das
postinfusin; b), la ZSV no presenta proge-
nitores (neuronas jvenes) o precursores de
amplificacin, pero s astrocitos, cuya tasa
de divisin es baja (son clulas en reposo).
Asimismo persisten las clulas ependima-
rias, ya que no se dividen. Con frecuencia se
observan astrocitos en contacto con la luz
ventricular ( flecha). Dos das despus de la
infusin (c) comienzan a aparecer de forma
ocasional algunos progenitores; a los 14 das
(d), la ZSV muestra todos los tipos celulares
y en la proporcin con que conforman la
zona subventricular de control (no tratada),
es decir, completamente regenerada.
BO
GD
ZSV
ZSV no tratada
a b c d
A los 0 das
Tras 6 das de infusin intraventricular
A los 2 das A los 14 das
C
O
R
T
E
S

A

D
E

J
O
S

M
A
N
U
E
L

G
A
R
C

A

V
E
R
D
U
G
O

Y

S
A
R
A

G
I
L
-
P
E
R
O
T

N
MENTE Y CEREBRO 67 - 2014 57
Esto lo ha corroborado de nuevo el grupo de
Frisn a partir de la medicin de los niveles de
14
C atmosfrico en humanos: que constat que al
menos un tercio de las neuronas del giro dentado
hipocampal se recambian durante la vida , lo que
supone el nacimiento de 700 neuronas al da o,
lo que es lo mismo, un 1,75 por ciento de nue-
vas neuronas al ao. De hecho, las personas con
alzhimer presentan una importante afectacin
del giro dentado e incluso los sntomas iniciales
de la enfermedad se derivan de manera directa de
la lesin de dicha estructura.
Potencial teraputico
La constatacin de que en los humanos existan,
aunque en pequeas cantidades, CMN capaces de
dividirse y formar nuevas neuronas y gla invita a
pensar de forma inevitable y con cierta esperanza
que estas clulas puedan utilizarse para reparar
zonas daadas. Se podran aplicar en las reas
que han sufrido una prdida de neuronas, con
los correspondientes sntomas neurolgicos.
Las CMN poseen la propiedad del patotropis-
mo, es decir, una anidad para anidar en tejidos
lesionados. Esta caracterstica la comparten con
otras clulas madre, entre ellas, las mesenquima-
les. Aunque todava se desconoce el mecanismo
molecular del patotropismo, se sabe que expre-
san una gran variedad de receptores capaces de
responder a seales qumicas que emanan de las
regiones deterioradas.
En modelos animales se ha visto que la muer-
te neuronal estimula la divisin de las clulas
madre propias del SNC, adems de su migracin
e incluso su establecimiento en las regiones da-
adas a travs de la conexin con las neuronas
locales en plena funcionalidad. Estas clulas se
diferencian in situ de tipos neuronales y gliales
maduros. El pero viene determinado por la pe-
quea cantidad de clulas madre neuronales que
acceden y se integran a la regin deteriorada. La
escasa mejora del animal se relaciona ms con
la plasticidad neural (reconexin de las clulas
supervivientes) que con la neuroproteccin o
la reposicin celular. Para superar este inconve-
niente, podra estimularse la produccin de CMN
mediante la administracin de factores de cre-
cimiento intraventriculares, la promocin del
desplazamiento de un mayor nmero de clulas
hacia las regiones lesionadas, o ambos. Tambin
podran aprovecharse las propiedades intrnse-
cas de las CMN y amplicarlas in vitro, puesto
que las clulas madre neurales pueden cultivarse
articialmente con factores de crecimiento. Ello
propiciara neuroesferas (clones de clulas), las
cuales pueden expandirse y dar lugar a grandes
cantidades de clulas con sus propiedades pre-
servadas. No obstante, existen ciertos lmites: a
partir de un cierto nmero de das de cultivo,
estas corren el riesgo de perder su potencial, en-
vejecer o presentar daos en su ADN.
Las CMN expandidas o amplicadas en el labo-
ratorio para su uso teraputico pueden proceder
del mismo individuo (clulas autlogas) o de otro
de la misma especie (alognicas). Las primeras
Cadenas de migracin neuronal en el ratn
La imagen del cerebro de ratn adulto (a)
muestra la zona subventricular (ZSV), en
los ventrculos laterales. En esta regin (b),
las nuevas neuronas presentan forma fusi-
forme (rojo) y aparecen envuel-
tas por los astrocitos (azul), as
como por las clulas de amplifi-
cacin (verde). Ocasionalmente,
algunos astrocitos contactan
con la luz ventricular. Las clu-
las ependimarias (violeta), con
sus caractersticos cilios, aslan
las cadenas de la luz ventricular.
Las clulas migradoras son las
nicas clulas que se mueven por la ZSV en su camino hacia los bulbos olfativos.
La micrografa de microscopa electrnica (c) muestra la imagen real de una ca-
dena de clulas migradoras (rojo), astrocitos (azul), precursoras de amplificacin
(verde) y ependimarias (violeta).
c
ZSV
Capa de clulas
ependimarias
Astrocitos
Precursor
de amplificacin
Clulas
migradoras
a
b
E
N
R
I
Q
U
E

L
L
U
C
H

(
i
l
u
s
t
r
a
c
i

n
)
;

C
O
R
T
E
S

A

D
E

J
O
S

M
A
N
U
E
L

G
A
R
C

A

V
E
R
D
U
G
O

Y

S
A
R
A

G
I
L
-
P
E
R
O
T

N

(
m
i
c
r
o
g
r
a
f

a
)
58 MENTE Y CEREBRO 67 - 2014
NEUROLOG A
son de acceso ms complicado, pues tapizan los
ventrculos laterales o se hallan en el hipocampo,
por lo que se requieren mtodos invasivos para
su obtencin. Las clulas alognicas pueden ob-
tenerse en intervenciones quirrgicas llevadas
a cabo para tratar otras patologas, pero con un
inconveniente: el trasplante alognico requeri-
ra la adicin de medicacin inmunosupresora
sistmica a n de evitar el rechazo inmunitario.
En la actualidad se estn investigando fuentes
alternativas y ms accesibles de clulas capaces de
reparar el sistema nervioso central de mamferos
adultos. Hasta el momento se han obtenido po-
blaciones celulares multipotentes a partir de los
bulbos olfativos o el lum terminal de la mdu-
la espinal. Tambin se ha aislado un tipo celular
especial: la gla envolvente olfativa. Se trata de
clulas gliales que recubren los axones del nervio
olfativo sirvindoles de gua en su recorrido desde
la mucosa nasal hasta el bulbo olfativo, donde es-
tablecen sinapsis. Su gran accesibilidad y su fun-
cin facilitadora en la remielinizacin axonal y la
angiognesis, a travs de la secrecin de factores
de crecimiento, las ha hecho objeto de aplicacin
en lesin medular y otras enfermedades neurode-
generativas; entre estas, la esclerosis mltiple, la
esclerosis lateral amiotrca o la ataxia. Aunque
ensayos clnicos en humanos han demostrado
escasos efectos secundarios, tambin las mejoras
clnicas resultan modestas.
En los ltimos decenios, diversas pruebas en
modelos animales han revelado la capacidad de
las clulas madre de inducir la regeneracin ner-
viosa en caso de infarto cerebral, lesin medular
traumtica o enfermedades neurodegenerativas
(esclerosis mltiple, enfermedad de Alzheimer o
de Parkinson). Sin embargo, cuando hablamos de
terapia celular debe andarse con precaucin a la
hora de extrapolar los resultados en modelos ani-
males a los humanos. Bien es cierto que, si hace
unos aos alguien nos hubiera dicho que hoy sera
posible desarrollar un esbozo cerebral in vitro en
una placa de laboratorio, no le habramos credo.
El equipo de Jrgen Knoblich, del Instituto de
Biotecnologa Molecular en Viena, ha conseguido
en fecha reciente generar porciones de cerebro
(organoides) a partir de clulas madre que haban
crecido en un biorreactor. Incluso han desarro-
llado un esbozo de corteza cerebral que remedaba
la estructura en capas y las regiones proliferativas
in vivo. Estos resultados constatan que la neuro-
ciencia avanza a pasos agigantados y que las me-
tas propuestas se encuentran cada vez ms cerca.
Vas hasta la zona lesionada
El mtodo de administracin de las clulas ma-
dre tambin es objeto de estudio. Qu es mejor,
En el cerebro humano
La zona subventricular (ZSV) humana pre-
senta caractersticas propias que la diferen-
cian de otras especies. Alojada en los ventrcu-
los laterales del cerebro (a), se organiza en
tres capas. Como muestra el
diagrama tridimensional (b),
la ZSV presenta una capa de
clulas ependimarias (I) que
revisten el ventrculo lateral
y contienen numerosos cilios
y una expansin radial hacia
el neuropilo; una segunda
capa (II o GAP) formada por
expansiones de las clulas
ependimarias y de astrocitos
y que aloja pocos cuerpos celulares, y una tercera donde se hallan los cuerpos
celulares de astrocitos, que, al expandirse, contribuyen a formar la capa GAP.
Las clulas madre se encuentran en la tercera capa. Por debajo de ella apare-
cen numerosos axones mielnicos, y es donde surgen las primeras neuronas. La
micrografa de microscopa electrnica de la ZSV humana (c) muestra las tres
capas caractersticas. Obsrvese que en la capa GAP de los humanos no existen
ni cuerpos celulares ni clulas migradoras ni precursores de amplificacin, a
diferencia de lo que ocurre en los mridos.
Neurona
madura
Axones
mielnicos
Astrocitos
Capa de clulas
ependimarias
Capa I Capa II (GAP) Capa III
c
a
b
Capa I Capa II (GAP) Capa III
E
N
R
I
Q
U
E

L
L
U
C
H

(
i
l
u
s
t
r
a
c
i

n
)
;

C
O
R
T
E
S

A

D
E

J
O
S

M
A
N
U
E
L

G
A
R
C

A

V
E
R
D
U
G
O

Y

S
A
R
A

G
I
L
-
P
E
R
O
T

N

(
m
i
c
r
o
g
r
a
f

a
)
MENTE Y CEREBRO 67 - 2014 59
ponerlas en el lugar donde se necesita que ani-
den, es decir, donde existe el dao neuronal, o
aplicarlas de forma sistmica, por vena o arteria,
tcnicamente ms sencillo, con la esperanza de
que lleguen a su destino?
El trasplante in situ asegura que todas las c-
lulas madre neuronales alcancen la diana. Ello
resulta sobre todo interesante en las lesiones fo-
cales o no difusas del sistema nervioso (la lesin
secundaria en un infarto cerebral, por ejemplo).
No obstante, el acceso directo al SNC constituye
un procedimiento invasivo que incluye la inter-
vencin quirrgica bajo anestesia general.
Si bien la administracin sistmica es la mejor
opcin en caso de lesiones difusas del sistema
nervioso, presenta, asimismo, una contrapartida:
aunque supone un riesgo mnimo, no asegura la
llegada de todas las clulas al tejido daado. El
rendimiento de CMN que alcanzan por va ve-
nosa su destino es bajo. Las clulas pasan por los
diferentes rganos de la circulacin general, los
cuales actan como ltro y retienen un nmero
elevado de ellas (sobre todo el pulmn y el hga-
do). Otra posibilidad sera utilizar la va arterial,
en concreto la arteria cartida. De esta manera se
favorecera la llegada de clulas al tejido diana,
pero con el riesgo de provocar una microemboli-
zacin de pequeas arterias cerebrales. Entonces,
cul es la mejor solucin? La va de administra-
cin sistmica podra optimizarse con mtodos
que beneciaran la llegada de clulas a su lugar
de accin. Una posibilidad sera la modicacin
de las clulas para que reconocieran receptores
especcos del sistema nervioso. En este mbito,
la nanomedicina, una nueva ciencia, ha aportado
un elemento crucial para la terapia celular: las
nanopartculas.
En nuestro laboratorio estamos desarrollando
un mtodo de marcaje de subtipos de clulas ma-
dre con pequeas partculas de xido de hierro.
Estas nanopartculas, que se recubren con ma-
teriales biocompatibles, poseen la propiedad del
ferromagnetismo. Asimismo, resultan inocuas
para las clulas y son agentes de contraste, pues
pueden visualizarse mediante imagen por reso-
nancia magntica nuclear (RMN).
La RMN ofrece varias ventajas. Por un lado, se
trata de una tcnica no invasiva que no implica
radiacin ionizante, pero que detecta clulas con
alta resolucin espacial y temporal. Por otro, per-
mite contextualizar las clulas en una ubicacin
anatmica especca, pudiendo localizar el ori-
gen y destino de las clulas administradas. Estas
ventajas posibilitan el seguimiento evolutivo del
trasplante celular y, a largo plazo, comprobar los
efectos teraputicos del mismo (por ejemplo, la
variacin volumtrica de las lesiones en el tiem-
po). Por ltimo, y no por ello menos importante,
ofrece la posibilidad de analizar aspectos funcio-
nales de los tejidos mediante tcnicas espectros-
cpicas. Por tanto, en modelos animales, la RMN
puede ayudar a reducir el nmero de individuos
de experimentacin y a predecir qu cambios
cabe esperar de la terapia con clulas madre en
la traslacin clnica.
Como ventaja adicional, puede aprovecharse el
ferromagnetismo de las nanopartculas de hierro
para dirigir las CMN hacia las regiones de inte-
rs, ya que resultados obtenidos recientemente
en nuestro laboratorio muestran que al aplicar
externamente campos magnticos en las tres
dimensiones del espacio, las clulas cargadas de
hierro quedan retenidas all donde se las necesita.
Por tanto, con este sistema llegaran ms clu-
las al destino prejado; tambin necesitaramos
cantidades menores para los ensayos, factor que
se debera tener en cuenta en caso de baja dispo-
nibilidad. El uso de biomateriales que faciliten la
migracin entre dos puntos del cerebro ya se ha
Bajo el microscopio
Las clulas madre mesenquimales y neurales captan nanopartculas de hierro.
Estas ltimas pueden utilizarse como agentes de contraste de imagen por reso-
nancia magntica nuclear, de manera que permiten el seguimiento in vivo de las
clulas infundidas sin que por ello se altere su potencialidad o viabilidad. En la
micrografa de la izquierda (a) se observa una clula en cultivo con partculas de
hierro de aspecto dorado ( flechas) en su interior. En b aparece la internalizacin
de las nanopartculas en los lisosomas ( flechas) de clulas viables. Probablemen-
te, el sistema lisosomal elimine el hierro con el tiempo.
5 m 5 m
a b
C
O
R
T
E
S

A

D
E

J
O
S

M
A
N
U
E
L

G
A
R
C

A

V
E
R
D
U
G
O

Y

S
A
R
A

G
I
L
-
P
E
R
O
T

N
60 MENTE Y CEREBRO 67 - 2014
NEUROLOG A
planteado para restablecer algunas conexiones a
media o larga distancia.
Terapia gnica con clulas madre
Pese a las trabas tcnicas, el campo de la terapia
gnica y el uso de las clulas madre como vehcu-
los de genes est desarrollndose con rapidez. Las
caractersticas biolgicas y el comportamiento de
las clulas madre in vivo, en cuanto a su tropis-
mo por los tejidos lesionados y su capacidad de
comunicarse con el entorno, las hace no solo me-
diadoras de neuroproteccin (por liberacin de
factores trcos) o neurorreparacin (por reem-
plazo neuronal), sino que adems las convierte en
medios de transporte para vehiculizar profrma-
cos o genes teraputicos y liberarlos en el lugar
deseado de accin.
Sera vehculo ideal aquella clula capaz de
expresar las molculas teraputicas de manera
sostenida y, si es posible, regulada. Adems, ten-
dra que poseer un comportamiento predecible,
diferenciarse al fenotipo ms conveniente tanto
en cultivo como tras el trasplante, sobrevivir a
medio o largo plazo, y no producir tumores. El
principio bsico en el que se basa el uso de c-
lulas madre para la terapia gnica es que las en-
fermedades causadas por el dcit de protenas
especcas pueden tratarse mediante la expresin
de los genes que codican esa protena por vecto-
res de expresin. Hasta ahora se ha propuesto el
tratamiento gnico para diversos trastornos cere-
brales: la expresin de acetilcolina transferasa en
la enfermedad de Alzheimer, proceso que aumen-
tara la sntesis de este neurotransmisor; el uso de
clulas a modo de bombas expresoras de L-DOPA
para tratar el prkinson, as como la aplicacin de
clulas con expresin de factores de crecimiento
para diversas enfermedades neurodegenerativas
(entre ellas, la esclerosis lateral amiotrca).
La transduccin gentica de las clulas madre
se realiza de forma ms eficiente mediante el
uso de vectores lentivirales, lo que suscita preo-
cupacin por dos razones: el silenciamiento del
transgn in situ y la integracin en el genoma,
que puede activar oncogenes adyacentes con el
riesgo de una proliferacin de clones tumorig-
Otras fuentes de clulas para neuropatologas
La exploracin en el campo de la terapia celular ha permitido descubrir nuevas fuentes de clulas madre adultas que, por su versatilidad
y sus caractersticas biolgicas, se erigen junto a las clulas madre neuronales como candidatas para su uso generalizado en medicina
regenerativa para tratar diferentes patologas del sistema nervioso central. Veamos algunas de esas posibilidades:
Clulas madre mesenquimales adultas
(CMM): Una gran ventaja de estas clulas
reside en que pueden obtenerse, en canti-
dades elevadas, a partir de la mdula sea
o grasa del propio paciente. Se caracterizan
por su adherencia al plstico y por la expre-
sin de antgenos de superficie especficos.
Debido a que las CMM no expresan el com-
plejo mayor de histocompatibilidad tipo II,
tampoco producen rechazo inmunitario ni
requieren la prescripcin de medicacin in-
munosupresora en el husped.
Las CMM son capaces de modular el
sistema inmunitario, ya que poseen pro-
piedades antiinflamatorias. Ello resulta til
sobre todo en el caso de enfermedades con
desregulacin inmunitaria, como la escle-
rosis mltiple, entre otras. De igual modo
que las clulas madre neuronales, las CMM
poseen tropismo por regiones daadas o,
mejor dicho, por el componente inflamato-
rio asociado al dao tisular, lo que supone
un aumento del porcentaje de clulas que
llegan a la diana teraputica. Pese a que
mltiples modelos animales de enfermeda-
des neurolgicas tratados con estas clulas
demuestran mejora, no se ha comprobado
que, in vivo, sean capaces de diferenciarse
como neuronas. A las CMM se les atribuye
ms bien un efecto trfico: liberan sustan-
cias o factores protectores que aumentan la
supervivencia de las clulas locales, en lugar
de participar en la reposicin neuronal. En
la actualidad existen ms de 200 ensayos
clnicos en humanos que utilizan CMM y
hasta el momento no han producido efectos
adversos graves.
Clulas madre pluripotentes inducidas
(CMPI): En el ltimo decenio se han logra-
do avances importantes en el campo de
las CMPI. Estas se obtienen a partir de la
transformacin de clulas procedentes de
distintos tejidos adultos, inducida por la so-
breexpresin de factores de transcripcin
[vase El poder teraputico de nuestras c-
lulas, por K. Hochedlinger; Investigacin y
Ciencia, julio de 2010].
Se trata de clulas diferenciadas que se
han sometido a un proceso de desdiferen-
ciacin (borrado de los elementos que la
definen como clula diferenciada) y que
terminan comportndose como clulas
madre embrionarias, aunque no proceden
directamente de un organismo en desarro-
llo. La adicin de medios especficos de dife-
renciacin a las CMPI ha permitido obtener
en cultivo clulas de las tres capas embrio-
narias, entre ellas, neuronas.
En fecha reciente, el grupo de Manuel
Serrano, del Centro Nacional de Investiga-
Para saber ms
Unique astrocyte ribbon in
adult human brain contains
neural stem cells but lacks
chain migration. N. Sanai et al.
en Nature, vol. 427, pgs. 740-
744, febrero de 2004.
Identification and characte-
rization of neural progenitor
cells in the adult mammalian
brain. S. Gil-Perotn, A. lvarez-
Buylla y J. M. Garca Verdugo
en Advances in Anatomy,
Embryology and Cell Biology,
vol. 203, pgs. 1-101-ix, 2009.
Adult neural stem cells from
the subventricular zone: A re-
view of the neurosphere assay.
S. Gil-Perotn et al. en Anatomi-
cal record (Hoboken), vol. 296,
n.
o
9, pgs. 1435-1452, 2013.
Reprogramming in vivo pro-
duces teratomas and iPS cells
with totipotency features.
M. Abad et al. en Nature, vol.
502, pgs. 340-345, octubre
de 2013.
MENTE Y CEREBRO 67 - 2014 61
nicos. Existen otros mecanismos de transduccin
como el derivado del uso de vectores episomales
de alta eciencia, que no se integran en el genoma,
lo que conlleva un menor riesgo oncognico, pero,
como contrapartida, son de expresin limitada
en el tiempo.
La terapia gnica tambin es aplicable para sol-
ventar limitaciones tcnicas, como en el caso de la
expansin in vitro de las clulas madre. Mediante
la insercin de un transgn que conera una ven-
taja proliferativa bajo un promotor condicional,
podra inmortalizarse la poblacin de clulas
madre para su expansin indenida y de esta
manera poseer grandes cantidades de clulas con
propiedades intrnsecas estables a lo largo de los
pases celulares. En el futuro se requiere utilizar
mtodos seguros de transfeccin y asegurar la
inocuidad de estas clulas.
Es posible que, en unos aos, numerosas en-
fermedades neurolgicas sean tratadas mediante
terapia celular en combinacin con terapia gnica.
No hace tanto, ni siquiera se habra considerado
esta opcin teraputica, pero en la actualidad
la ciencia bsica nos demuestra que existe una
mejora clnica en modelos animales de distin-
tas enfermedades neurolgicas y con diferentes
tipos celulares. Sin embargo, para hacerlo realidad
en pacientes humanos deben resolverse algunos
puntos prcticos. Las posibilidades son innitas,
y los medios al servicio del avance cientco de-
beran ser los sucientes. El objetivo, reparar lo
(presuntamente) irreparable.
Jos Manuel Garca Verdugo es catedrtico de biologa
celular en la Universidad de Valencia y dirige el laborato-
rio de neurobiologa comparada en el Instituto Cavanilles
de Biodiversidad y Biologa Evolutiva. Sara Gil-Perotn
es licenciada en medicina y bioqumica e investiga en la
Unidad Mixta de Neurorregeneracin y Esclerosis Mltiple
de la Universidad de Valencia y el Hospital la Fe.
ciones Oncolgicas, ha revelado median-
te animales transgnicos con induccin
condicional de los genes Oct4, Sox2, Klf4
y c-Myc, la posibilidad de reprogramacin
in vivo.
Las CMPI suponen un gran avance en el
campo de la terapia celular, ya que pueden
utilizarse como modelo in vitro de enferme-
dades neurodegenerativas, o incluso tras-
plantarse al propio individuo sin riesgo de
rechazo. Sin embargo, la comunidad cient-
fica se muestra cautelosa sobre su uso por
diversas razones, entre ellas, la sobreexpre-
sin de genes (por la utilizacin de virus), la
persistencia de mutaciones somticas pre-
sentes en las clulas de origen, la reprogra-
macin anmala de la memoria epigentica
(el perfil de metilacin) y la posibilidad de
generar tumores. Con todo, estas clulas
podran convertirse en una buena opcin
teraputica a medida que se vayan resol-
viendo dichas limitaciones tcnicas.
La reprogramacin somtica directa ha-
cia el tejido nervioso, sin pasar por el estado
embrionario, tambin est convirtindose
en una realidad. Adems, posee ciertas ven-
tajas con respecto al uso de las CMPI.
FUENTES DE CLULAS MADRE ADULTAS
Las clulas madre neuronales (CMN) crecen
en el sistema nervioso central a modo de
esferas en suspensin. Las clulas reprogra-
madas (CMPI) se obtienen de tejidos diferen-
ciados, entre ellos, los fibroblastos de la piel.
Las clulas madre mesenquimales (CMM)
adultas proceden de mltiples tejidos, entre
los que se encuentran el tejido adiposo y de
la mdula sea. Mientras las CMN y las CMPI
podran reintroducirse en el organismo por
va sistmica (vena o arteria) o inyeccin in-
tracerebral, se investiga administrar las CMM
por va venosa.
En nuestro archivo
Clulas madre de la mdula
sea. S. Martnez en MyC
n.
o
12, 2005.
Neurognesis. G. Kemper-
mann en MyC n.
o
19, 2006.
Clulas madre
neurales
Clulas
reprogramadas
Sistema nervioso
central
Piel
Tejido
adiposo
Mdula
sea Clulas madre
mesenquimales
Inyeccin
intracerebral
Administracin
sistmica
C
O
R
T
E
S

A

D
E

J
O
S

M
A
N
U
E
L

G
A
R
C

A

V
E
R
D
U
G
O

Y

S
A
R
A

G
I
L
-
P
E
R
O
T