GENERALITES ET SECURITE AU LABORATOIRE

Le travail du collaborateur ( trice ) scientifique et technique reprsente, dans les

laboratoires, des risques quil est important de connatre.
Ce rglement a pour but dattirer lattention du personnel de lUNIL sur les dangers et les
risques rencontrs frquemment dans les laboratoires.
En gnral, les collaborateurs ( trices ) scientifiques et techniques sont confronts
essentiellement aux dangers rsultant des manipulation: fluides cryogniques, biologiques,
produits chimiques et solvants . A ces dangers sajoutent les risques habituels lectriques,
dexplosion et dincendie.

Responsabilits individuelles:
Chaque membre de lUNIL veille assurer sa propre scurit et celle de son entourage. Il est
impratif de connatre les rgles de scurit en vigueur lUNIL et surtout de les appliquer.

Responsabilits de lemployeur:
Le chef de chaque groupe de recherche est responsable de la scurit dans son ( ses )
laboratoire ( s ). Il doit sassurer que ses collaborateurs ( trices ) respectent, appliquent et
transmettent les rgles.

Bonnes Pratiques au Laboratoire ( BPL ):

Au laboratoire, il est interdit :
De fumer, boire, manger, pipeter avec la bouche
De stocker des aliments dans les rfrigrateurs ou chambres froides

Il est obligatoire :
Dutiliser le matriel de protection (blouse, gants, lunettes, masque appropri).
De se laver les mains avant et aprs une manipulation.
Denlever ses gants avant toute saisie du combin tlphonique, avant tout dplacement
ncessitant louverture de portes, avant lutilisation de clavier informatique, la consultation
de livres, de protocoles communs etc.
De travailler sous une hotte avec les produits toxiques ou volatils voire dans un local
convenablement ventil.
De stocker les produits volatils loin des sources de chaleur.
De raliser les manipulations avec des microorganismes gntiquement modifis et les
expriences de transformations gntiques uniquement sous les flux laminaires.
De dsinfecter les flux laminaires avant et aprs utilisations et de les vider de tout matriel
sale.
De respecter les consignes de gestion des dchets.

Il est souhaitable :
De ne pas travailler seul (surtout en dehors des horaires habituels).
De travailler avec des appareils en bon tat ( signaler au responsable toute anomalie).
De ne pas porter de lentilles de contact.
De se protger les yeux avec des lunettes spciales lors de travaux avec des rayons UV,
lasers etc.

Utilisation des produits chimiques/biologiques:

Ne stocker que les produits utiliss couramment et uniquement pour les protocoles en
vigueur dans le laboratoire.
Ne stocker que des quantits limites.
Identifier les solutions: nom et concentration du produit, nom du prparateur et date, sur
une tiquette et jamais directement sur le verre ( mme le plus indlbile des feutres
sefface
Ranger par famille chimique, correctement identifis en fonction de leurs risques et de leur
comportement chimique.

Compatibilit des produits:
Certains produits peuvent ragir violemment les uns avec les autres, ils ne doivent donc pas
tre stocks au mme endroit.
+ peuvent tre stocks ensemble
O ne doivent tre stocks ensemble que si certaines conditions sont remplies
- ne doivent pas tre stocks ensemble




Transport des produits:

NE JAMAIS PORTER DES PRODUITS OU DU MATERIEL DANGEREUX A LA MAIN
Transporter le matriel et les bouteilles (acides, solvants, milieux, etc) dans un conteneur
appropri (bac, bote, plateau).



Les risques chimiques au laboratoire:

Proprits des substances

Tous les produits chimiques sont susceptibles de prsenter un danger. Ce danger peut tre
li :
Leurs proprits physiques: inflammabilit, explosibilit.
Leurs proprits chimiques: actions nocives sur l'organisme.
Conduite tenir pour lutilisation/stockage: phrases P ex: P1 Conserver sous cl.
Anciennement S.
Risque et toxicit: phrases H ex: H1 Explosif l'tat sec. Anciennement R.
Ne jamais oublier que:


A APPLIQUER AVEC LES NOVEAUX PICTOGRAMMES SGH

Prvention:

Lire les tiquettes, cest dj se protger!

Connatre, consulter et appliquer les rgles d'tiquetage pour identifier les dangers des
produits chimiques: symboles de danger, phrases H et P.
Lire les fiches de scurit des produits chimiques ( MSDS ).
Ne pas oublier les avertissements CMR ( mutagne, tratogne etc ).
Ne mlangez pas n'importe quoi sans en connatre les effets!
Choisir dans la mesure du possible les produits les moins dangereux.
Respecter les rgles de rangement des produits.
Stocker les produits sensibles dans les armoires adquates.
La manipulation de tout produit ncessite une protection approprie
Dispositif de filtration de l'air (hotte de protection).
Protection individuelle (lunettes, gants, blouse, masque ).
Pour obtenir des informations plus prcises sur la classe de toxicit dun produit envisag
pour une exprience, consulter la littrature du produit avant de lutiliser.
MANIPULATION DES PRODUITS CHIMIQUES/BIOLOGIQUES ET GESTION DES
DECHETS
Les dchets chimiques et biologiques sont soumis une procdure d'limination et transport
dfinie par l'Ordonnance sur les mouvements de dchets (OMoD )

Le Dpartement fdral de lenvironnement, des transports, de lnergie et de la
communication (DETEC) dicte une ordonnance comprenant une liste des dchets. Il tient
compte de la liste tablie par la Communaut europenne. Il dsigne dans la liste des
dchets comme:

Dchets spciaux: les dchets qui, pour tre limins de manire respectueuse de
lenvironnement, requirent, en raison de leur composition, de leurs proprits
physicochimiques ou biologiques, un ensemble de mesures techniques et organisationnelles
particulires mme en cas de mouvements lintrieur de la Suisse

Autres dchets soumis contrle: les dchets qui, pour tre limins de manire
respectueuse de lenvironnement, requirent, en raison de leur composition ou de leurs
proprits physico-chimiques ou biologiques, un nombre restreint de mesures techniques et
organisationnelles particulires mme en cas de mouvements lintrieur de la Suisse.

ACIDES ET BASES


Le contact avec des acides et bases concentrs peut provoquer des brlures graves de la
peau, des muqueuses et des yeux.

Manipulations:
Blouse, gants adquats et des lunettes de protection.
Le port de verres de contact ne constitue en aucun cas une protection contre les projections
dacide/base.
Travailler sous hotte type Sorbonne avec les acides concentrs.


Jamais deau dans lacide ou la base
En cas de contact avec des acides/bases, rincer immdiatement et abondamment leau

Destruction des acides minraux: HCl, HBr, HI, HNO3, HClO4, H2SO4 etc
Neutralisation progressive par une base minrale dilue : NaHCO3, Na2CO3, NaOH ou KOH,
puis vrifier que le pH est proche de 7.
Eliminer lvier sous courant deau.
Destruction des bases minrales: NH4OH, NaOH, KOH, Ca(OH)2 etc
Neutralisation progressive par un acide minral dilu HCL ou H2SO4.
Avec Ca(OH)2 utiliser uniquement HCl car le sulfate de calcium est insoluble!
Vrifier que le pH est proche de 7.
Eliminer lvier sous courant deau.
Rcupration pour destruction Dchets Spciaux:
Diluer leau et recueillir dans un bidon plastique ( type PEHD ) libell ACIDES/BASES
DILUES
En cas dlimination du produit pur, laisser dans le contenant dorigine

Toutes les informations se rapportant ce type de substances font lobjet dune fiche
spare disponible sur notre site

LES SOLVANTS


A l'exception de certains drivs halogns, tous les solvants sont inflammables.
Aucun solvant ne doit tre stock dans un rfrigrateur, ni un conglateur. Les solvants
dont le point dclair est infrieur la temprature du frigo sont susceptibles de
provoquer une explosion!!!!!!

Les solvants peuvent pntrer dans l'organisme par 3 voies:

Voie respiratoire (grce leur volatilit)
Voie cutane (quel que soit l'tat de la peau)
Voie digestive (absorption accidentelle)

Manipulations des solvants:
Eviter l'inhalation de vapeurs: travailler sous hotte type Sorbonne.
Eviter le contact avec la peau: utiliser des gants appropris.
Ne pas transvaser un solvant dans un flacon ayant contenu un autre produit chimique.
Travailler loin dune source de chaleur.
Utiliser des systmes daspiration mcanique et des pipettes ( en verre pour certains
solvants ).
Eviter tout dversement vers l'gout.
Limiter les pertes dues l'vaporation ( flacons ouverts etc).
Conserver les dchets dans des rcipients spcialement prvus cet effet.
Dchets solvants
Les solvants halogns et non-halogns usags doivent se stocker dans des bidons spars,
(mme les solutions souilles).
Attention ne pas y verser d'acide. Explosion !!!

Solvants halogns ( chlors ): sont considrs comme des solvants halogns les solvants
qui contiennent au total plus de 2 % masse de substances halognes.

Par exemple:
Dichloromthane
1,1-dichlorothane
Chloroforme (sans phnol ) Bidon: DECHETS SOLVANT HALOGENES
Trichlorthylne
Ttrachlorthylne

Solvants non-halogns ( non-chlors ):
Par exemple:
Ethanol
Mthanol
Tetrahydrofurane Bidon: DECHETS SOLVANT NON-HALOGENES
Benzne
Acetonitrile

En cas de fuite ou de dversement accidentel, rcuprer immdiatement les produits aprs
les avoir recouverts de matriau absorbant inerte appropri la substance, dont on
maintient une rserve disposition dans ou prs des laboratoires.
Si le dversement est important, supprimer toute source potentielle d'ignition, arer la zone,
vacuer le personnel en ne faisant intervenir que des oprateurs entrans munis
d'quipements de protection appropris.

Toutes les informations se rapportant ce type de substances font lobjet dune fiche
spare disponible sur notre site

PHENOL


Stocker le phnol dans des locaux frais, bien ventils, labri des rayons solaires, de toute
source dignition ou de chaleur et lcart des produits oxydants.



Eviter tout contact avec la peau et les yeux.
Eviter linhalation de vapeurs.
Provoque des brlures.
En cas de projection cutane, laver immdiatement grande eau pendant 15 minutes.

En cas de souillure sur le sol, rcuprer immdiatement le produit en lpongeant avec un
absorbant sil est en solution. Laver grande eau la surface ayant t souille.

Si le versement est important, vacuer le personnel et faire intervenir des oprateurs munis
dquipement de protection.

Dchets phnol:
Ce produit et ses rsidus doivent tre considrs comme des dchets spciaux.
Phnol, Phnol-Chloroforme Contenant en verre: PHENOL/PHENOL-CHCl3
(Solution)

Toutes les informations se rapportant ce type de substances font lobjet dune fiche
spare disponible sur notre site

AZOTE LIQUIDE


Risque d'asphyxie.
Surpression.
Risque explosion.

Lazote dont la temprature est de -196C, entrane des brlures par le froid qui peuvent
tre extrmement graves surtout si lazote atteint la corne.
Il y a aussi risque dasphyxie en cas de dgagement massif. Cest pourquoi il est recommand
de le stocker dans un local suffisamment ventil.
Le port de gants de protection contre le froid ( cryogants ) et surtout de lunettes sont
obligatoires!

La prvention repose sur:

Pas de rejet de lazote dans tout endroit o son accumulation pourrait tre dangereuse
(gouts, sous-sols, fosses, salle ferme).
Pas de givre dans la soupape de scurit.
Agissez lentement quand vous plongez un lment dans le bain d'azote liquide.
Jamais dazote dans des rcipients ferms, ni dans une bouteille thermos.

UTILISER DE RCIPIENTS SPCIAUX LARGES OUVERTURES

Brlures lazote liquide:

ATTENTION! La temprature de la lsion doit retrouver le plus rapidement possible celle du
corps!
Rincer la brlure l'eau tide au minimum 15 minutes.
Recouvrir d'un pansement strile et consulter un mdecin.


Toutes les informations se rapportant ce type de substances font lobjet dune fiche
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LES PRODUITS GENOTOXIQUES


Cancrognes, mutagnes, tratogne

Se rapporter aux recommandations CMR. Attention, il sagit de produits tiquets
Toxiques comportant en plus les phrases suivantes sur ltiquette ( liste non exhaustive ):
R45 peut provoquer le cancer, R46 peut provoquer des altrations gntiques hrditaires,
R49 peut provoquer le cancer par inhalation, R60 peut altrer la fertilit, R61 risque
pendant la grossesse d'effets nfastes pour l'enfant
Les femmes enceintes ne doivent pas manipuler les produits portant les indications
suivantes
R46, R60, R61

Produits trs cancrognes: bromure dthidium, -mercaptothanol ,
Acrylamide/Bisacrylamide

Toutes les informations se rapportant ce type de substances font lobjet dune fiche
spare disponible sur notre site

Tout les rcipients contenant des produits gnotoxiques (purs ou en solution) doivent porter
de faon claire et indlbile la mention DANGER GENOTOXIQUE.

Manipulations de produits gnotoxiques:
Blouse, double paire de gants appropris, lunettes de protection, masque avec filtre adapt
et sous hotte type Sorbonne ou flux laminaire

Pour les liquides trs volatils un masque cartouche est indispensable!
Pese:
Si possible, utiliser une balance prvue exclusivement pour les produits gnotoxiques.
Utiliser le systme de double-pese: dans un flacon pralablement tar, placer une quantit
de produit et effectuer la pese. Ajouter la quantit de solvant ncessaire pour obtenir la
concentration dsire. Refermer le flacon.

Dcontamination du matriel:
La vaisselle doit tre dcontamine par le manipulateur lui-mme avant quelle ne rejoigne
le circuit habituel de lavage. Cette dcontamination dpend du produit utilis. Lutilisation
de vaisselle usage unique est prfrable.

Stockage des dchets:
Pour les produits purs ou en solutions concentres, conserver les rcipients dorigine et
neffectuer aucun transvasement. Ces rcipients doivent tre placs dans un double
emballage scell incassable et immobilis par un absorbant.
Il ne faut pas jeter lvier mme des solutions dilues des produits gnotoxiques

Rcupration dans des bidons DECHETS GENOTOXIQUE (LIQUIDES)

Au fur et mesure de la manipulation, les dchets solides liminer sont emballs avec un
plastique rsistant et placs dans le bidon DECHETS GENOTOXIQUE (SOLIDES),
ainsi que les pipettes et embouts usages uniques dj utiliss.

ACRYLAMIDE/BIS-ACRYLAMIDE


L'acrylamide (C3H5NO): non polymrise, c'est un neurotoxique, mme par contact. Pipeter
avec une poire, travailler sous hotte Sorbonne, porter une blouse, un masque et des gants
appropris


Dchets:
Conserver les dchets dans les bidons prvus cet effet DECHETS ACRYLAMIDE
En cas de souillure sur le sol, rcuprer immdiatement le produit en lpongeant avec un
matriau absorbant inerte. Laver grande eau la surface souille

Toutes les informations se rapportant ce type de substances font lobjet dune fiche
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BROMURE DETHIDIUM: BET


Le bromure dthidium (C21H20BrN3, N CAS : 1239-45-8) est un mutagne puissant
manipuler avec prcaution (trop de risque en jeu), le port dune double paire de gants est
souhaitable.

Destruction des dchets liquides BET : Absorption sur charbon actif

Traiter la solution de BET par du charbon actif, quantit minimale efficace: 1000 mg de
charbon par mg de BET. liminer la solution traite dans les bidons appropris
BROMURE D ETHIDIUM LIQUIDE ( vrifier lefficacit du traitement avec les UV, la
solution doit tre incolore).

Les dchets solides contenant du BET (charbon actif contamin) doivent tre stocks dans
les bidons appropris. Eliminer galement les gels (emballs dans un plastique rsistant) et
gants dans le mme bidon BROMURE DETHIDIUM SOLIDE

Produits de substitution:

Nous citons ici cet exemple tout en sachant quil existe dautres produits sur le march.

SYBR SafeTM DNA Gel Stain
http://probes.invitrogen.com/products/sybrsafe/
SYBR SafeTM DNA Gel Stain The safer ethidium bromide alternative
PAS SI SAFE QUON NOUS LE DIT. AUCUN RECUL OU ETUDE FIABLE SUR LE PRODUIT!
Destruction des dchets liquides Bidon : SELS ( ni acide/base, ni oxydants, ni
mtaux lourd )
Destruction des dchets solides: Les gels peuvent tre emballs et jets dans les poubelles
spcifiques. Ce sont les prcautions minimales lheure actuelle.

AUTRES DECHETS



Le dchet collecter contient-il des oxydants?
MnO4, ClO4, (Cr2O7)2, Ce4+, (CrO4)2, (S2O8)2 etc Bidon : SELS OXYDANTS.
Eau oxygne, H2O2: diluer et verser dans lvier.

Le dchet collecter contient-il des sels de mtaux lourds?
Cu2+, Zn2+, Pb2+, Sn2+, Al3+ , Cd2, Fe2+ , Fe3+ etc Bidon: SELS DE METAUX
LOURDS.

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DECHETS CHIMIQUES SOLIDES

Il est interdit de jeter des produits chimiques potentiellement dangereux avec des ordures
mnagres!
Les produits encore tiquets seront laisss dans leur emballage dorigine.
Les produits qui ne sont plus identifis seront laisss dans leur emballage indiquant
PRODUITS INCONNUS.

DECHETS DES BAINS DE DEVELOPPEMENT PHOTOGRAPHIQUE

Bains de dveloppement Bidon: REVELATEUR PHOTO.

Bains de blanchiment et bains de blanchiment/fixations Bidon: FIXATEUR PHOTO.

ELIMINATION DES BOUTEILLES VIDES AYANT CONTENU UNPRODUIT CHIMIQUE

Rincer le rcipient vide sous l'eau courante. Jeter le bouchon et tracer clairement l'tiquette
l'aide d'un feutre noir.

OBJETS TRANCHANTS

Lames de rasoir, aiguilles, etc... Bidon spcial ( doit pouvoir tre scell ): OBJETS
TRANCHANTS POUBELLE SPECIFIQUE.

Toutes les informations se rapportant ce type de substances font lobjet dune fiche
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MATERIEL VEGETAL: TERRE ET PLANTES

Strilisation des dchets vgtaux: mettre uniquement la terre et les dchets des plantes
dans les poubelles jaunes: BIOHAZARD BAG.

RESPECTER L'UTILISATION DES POUBELLES ET LA GESTION DES DECHETS

AUCUN DECHET, PRODUIT, MATERIEL OU CARTON NE SERA ABANDONNE EN UN
QUELCONQUE ENDROIT, A L'INTERIEUR OU A L'EXTERIEUR DU LABORATOIRE/ BATIMENT.
PILES, PAPIER, CARTON, VERRE, SAGEX, CARTOUCHES LASER, CAPSULES NESPRESSO,
BOUTEILLES DE GAZ, ALU, VERRE, FER BLANC SONT A APPORTER AU LOCAL RECYCLAGE DE
VOTRE BATIMENT.

BIOSECURITE



La plupart des micro-organismes utiliss sont rangs par groupes ( groupes de risque des
microorganismes et les classes dactivit ).

La manipulation des microorganismes gntiquement modifis et les expriences de
transformation gntique doivent tre effectues uniquement sous les hottes flux
laminaire.
Avant et aprs utilisation, les hottes doivent tre nettoyes avec un dsinfectant.
Afin d'viter tout risque de dissmination de matriel gntiquement modifi (ADN,
microorganismes, ou matriel vgtal transform), les tubes, les pipettes, les botes de Ptri
et les Kleenex contamins par les microorganismes ou les plasmides recombinants doivent
tre inactivs avant limination. Il en est de mme du matriel vgtal et des cultures
bactriennes.

Les dchets liquides: sont traits lhypochlorite de sodium (eau de javel 1/3 javel 13%-14%
+ 2/3 eau ), ou par dautres dsinfectants dont lefficacit est connue.
Ils peuvent tre autoclavs avant dtre limins dans lvier, pour autant quil ne sagisse
pas de dchets liquides chimiques ou radioactifs qui doivent tre limins comme dchets
spciaux.

Les dchets solides: les objets tranchants ou coupants qui ont servi la culture ou la
manipulation de matriel biologique sont collects respectivement dans des sacs ou des
conteneurs spciaux avec le sigle BIOHAZARD avant dtre autoclavs.

Dcontamination l'thanol: utiliser une solution aqueuse 70 % pour dcontaminer par
exemple les plans de travail, la vaisselle, les pots et rotors de centrifugeuse.

Attention ne pas autoclaver le matriel trait la javel. Les vapeurs de chlore sont
dangereuses pour les utilisateurs et corrosives pour lautoclave.

Chaque groupe assigne un responsable de lautoclavage des dchets biologiques

Pour plus de renseignements consulter:

http://www.lyon.inserm.fr/RiskBio/Decontamination/index.html