Universidad Nacional Autnoma de Mxico

Facultad de estudios superiores Zaragoza

Martnez Olivares Gabriel

Mara Teresa Mendoza Mata

Grupo: 1306

Lunes 06 de octubre de 2014
Resumen:
Se realiz cromatografa en capa delgada con el principal objetivo de conocer los
disolventes y las proporciones ms adecuadas para llevar a cabo la separacin de los
compuestos de colores amarillos y rojos (, y carotenos) que se encuentra en el
chile guajillo, para posteriormente realizar la cromatografa en columna empleando la
mezcla de disolventes con proporcin inicial de 9 a 1 heptano-tolueno con la que se
obtuvieron buenos resultados
Introduccin:
Comentarios:
Fundamento teorico:
La cromatografa es una tcnica que se emplea para separar entre si los
componentes de una sustancia. Esta tcnica fue creada por el botnico ruso Michael
Tswett en 1906, el cual llam a su mtodo cromatografa, palabra griega que significa
escritura a color, porque lo utilizo para separar compuestos coloreados. Tswett llev a
cabo una extraccin de una mezcla de pigmentos de hojas verdes utilizando ter de
petrleo, un disolvente no polar, y descubri que era capaz de separar los pigmentos
al hacer pasar el extracto a travs de una columna, un tubo de vidrio rellenado con
carbonato de calcio (tiza). Tswett utiliz como detector del experimento la simple
observacin, ya que los compuestos que separ tenan color y era posible detectar
bandas o zonas de distintas materias por su color en la columna, demostrando que la
clorofila es solo uno de los muchos pigmentos que se encuentran en las hojas de las
plantas. Las tcnicas cromatogrficas para el anlisis y purificacin de los productos
de reaccin son ampliamente utilizadas en el laboratorio orgnico. La tcnica
cromatogrfica de purificacin consiste en separar mezclas de compuestos mediante
la exposicin de dicha mezcla a un sistema bifsico equilibrado. Todas las tcnicas
cromatogrficas dependen de la distribucin de los componentes de la mezcla entre
dos fases inmiscibles: una fase mvil, llamada tambin activa, que transporta las
sustancias que se separan y que progresa en relacin con la otra, denominada fase
estacionaria. La fase mvil puede ser un lquido o un gas y la estacionaria puede ser
un slido o un lquido. Las combinaciones de estos componentes dan lugar a los
distintos tipos de tcnicas cromatogrficas.
Es difcil definir rigurosamente el trmino de cromatografa, ya que se ha aplicado ese
nombre a varios sistemas y tcnicas. Sin embargo, todos esos mtodos tienen en
comn el uso de una fase estacionaria y una fase mvil.
En todas las separaciones cromatogrficas, la muestra se desplaza con una fase
mvil, que puede ser un gas, un lquido o un fluido supercrtico. Esta fase mvil se
hace pasar a travs de una fase estacionaria con la que es inmiscible, y que se fija a
una columna o a una superficie slida. Las dos fases se eligen de tal forma, que los
componentes de la muestra se distribuyen de modo distinto entre la fase mvil y la
fase estacionaria. Aquellos componentes que son fuertemente retenidos por la fase
estacionaria se mueven lentamente con el flujo de la fase mvil; por el contrario, los
componentes que se unen dbilmente a la fase estacionaria, se mueven con rapidez.
Como consecuencia de la distinta movilidad, los componentes de la muestra se
separan en bandas o zonas discretas que pueden analizarse cualitativa y/o
cuantitativamente.


Cromatografa de adsorcin.

Dentro de esta tcnica pueden diferenciarse dos tipos de cromatografas de adsorcin
denominadas cromatografa cromatografa de columna y de capa fina (abreviada TLC,
del ingls Thin Layer Chromatography). Para la tcnica de cromatografa de adsorcin
en columna se emplean columnas verticales de vidrio cerrada en su parte inferior con
una llave que permita la regulacin del flujo de la fase mvil. Las columnas se rellenan
con un adsorbente, como almina o gel de slice (fase estacionaria), mojado con el
disolvente que se vaya a emplear en el proceso cromatogrfico. En la parte superior
de la columna se pone la disolucin de la mezcla a separar y a continuacin un
depsito que contenga el eluyente (fase mvil) que se va a utilizar en la separacin.
Se abre la llave inferior de manera que el eluyente comience a bajar por la columna.
En este proceso, los componentes de la mezcla son adsorbidos por la fase
estacionaria con diferente intensidad, de manera que el proceso de adsorcin-
desorcin hace que unos componentes avancen ms rpidamente que otros.
El lquido que sale por la parte inferior de la columna se recoge de manera
fraccionada. Si los componentes de la mezcla avanzan a muy diferente velocidad se
podrn obtener fracciones cromatogrficas constituidas por un solo componente.[16]

matriz de la columa. Sustancia que est empapada de solvente y que se empaqueta
en la columna. Tambin se denomina el lecho de la columna.
longitud de la columna. Longitud del dispositivo en el que se empaqueta la columna.
Es importante en algunos tipos de cromatografa como la de filtracin en gel y poco
importante en otras como la cromatografa de afinidad.
volumen de la columna. Volumen total de gel que se empaqueta en una columna
cromatogrfica.
volumen muerto de la columna. Cantidad de solvente que tiene que atravesar la
columna para asegurar que se ha reemplazado completamente.
Coincide con el volumen de solvente que sale de la columna desde que se aplica la
muestra hasta que empieza a salir la primera protena. En general, y dependiendo del
tipo de cromatografa puede ser de 1 a varias veces el volumen de la columna.
'Run Throught'. Es, en columnas de intercambio inico o de afinidad, el volumen de
solvente ms protenas que atraviesa la columna sin quedar retenido en ella.
Correspondera en el caso de la cromatografa de afinidad al volumen de solvente que
contiene las protenas no afines al ligando.
En la cromatografa de columna las molculas de una mezcla son separadas en base
a la afinidad de las molculas por la fase estacionaria o por la fase mvil.
Si una molcula A tiene ms afinidad por la fase estacionaria que la B, B bajar ms
rpido que A. Existen muchos tipos de cromatografa de columna. En el laboratorio se
usan tres tipos de ellas.
Filtracin en gel: En esta las molculas son separadas por su tamao. El gel
consiste de una cama de esferas con poros de un tamao dado. El gel se conoce
como sefadex, el cual viene con poros de distintos tamaos. Las molculas de igual o
menor tamao que el poro entran a las esferas mientras que las molculas ms
grandes pasan rpidamente por la columna. Las molculas de tamao intermedio
pueden entrar las esferas pero pasan menos tiempo en ellas.
Las molculas salen en orden de tamao por el eludo. Aunque para efectos de este
laboratorio las muestras que usaremos estn coloreadas, al hacer esta cromatografa
en la vida real hay que usar otras pruebas para determinar qu fracciones contienen
las muestras de inters, las cuales suelen ser protenas. El material que se escoja
para la fase estacionaria depender del tipo de muestra que estemos corriendo. Cada
tipo de gel presenta poros de distinto tamao.
Intercambio inico: Se usa para purificar protenas. Separa molculas en base a su
carga inica. La fase estacionaria presenta una matriz con carga. Al eluir una muestra,
las molculas de igual carga salen con el amortiguador. Las molculas de carga
opuesta se adhieren al material de empaque con distintos grados de afinidad. Para
desprender las protenas adheridas se usa una solucin alta en cloruro de potasio o
de sodio. Esto puede hacerse usando soluciones con incrementos moderados de
salinidad, o de un solo paso, echando la solucin de mayor concentracin de sal
primero. Al subir la concentracin poco a poco podemos recolectar las muestras
desde las que menos afinidad por la columna tiene hasta las de mayor afinidad.
Durante la elucin, la sal va compitiendo con la protena por las cargas de la matriz de
la columna, hasta que la desprende. La columna puede ser de matriz negativa
(intercambio catinico) o positiva (intercambio aninico). El tipo de empaque
depender de qu queremos aislar. En este tipo de columna el pH es importante
porque puede alterar la carga de la columna.
Fase inversa: Esta es una cromatografa de interaccin en la que la fase
estacionaria, con molculas hidrofbicas, interacta con molculas hidrofbicas en la
muestra. La matriz consiste de fibras de silicato con cadenas de hidrocarburos. Estas
atraern a las molculas hidrofbicas de la muestra mientras que las hidroflicas salen
con el amortiguador. Las molculas son eludas de la columna lavando con soluciones
de distinta concentracin de alcohol o cualquier otro solvente no polar. Se utilizan
columnas de vidrio rellenas de Almina (Al2O3), Slica u Oxido de Magnesio. La fase
estacionaria esta constituida por un slido poroso, el cual queda soportado en el
interior de una columna generalmente fabricada en plstico o vidrio. La fase mvil se
encuentra formada por la solucin que lentamente va atravesando la fase
estacionaria. La solucin que sale al final de la columna se reemplaza constantemente
por nueva solucin que se suministra desde un contenedor por la parte superior de la
columna.
La migracin de las sustancias de la mezcla a travs de la columna se encuentra
retardada en diferente grado por las interacciones diferenciales que cada una de ellas
pueda ejercer con la fase estacionaria. Las sustancias se separan gradualmente
formando bandas dentro de la banda total, la separacin, y por tanto la resolucin,
aumenta con la longitud de la columna. La banda individual de cada sustancia puede
ensancharse con el tiempo debido a procesos difusinales, disminuyendo por tanto la
resolucin.

Objetivos
Aplicar experimentalmente los mtodos de extraccin de cromatografa en capa
fina y cromatografa en columna
Identificar los solventes ideales para extraer los pigmentos del chile guajillo.
Hiptesis
Si realizamos una extraccin de los pigmentos del chile guajillo que es un chile de
color rojo, con disolventes orgnicos como el heptano en el cul los carotenos son
solubles, y adems realizamos una cromatografa de adsorcin por columna,
utilizando disolventes apropiados como tolueno en heptano los cules presentan
afinidad por estos pigmentos, entonces podremos separar y obtener los carotenos ,
y del chile guajillo que componen los pigmentos

Material y reactivos

Cromatografa en capa fina
9 frascos de boca ancha
Papel filtro
Porta objetos
Pipetas de 5 mL (una para cada disolvente)
Vaso de precipitado de 50 mL
Probeta de 50 mL
Tubos capilares
Superficie de vidrio de 20 x 20
Regla

Hexano
Heptano
ter de petrleo
Cloruro de metileno
Alcohol etlico
Acetato de etilo
Tolueno
Cloroformo
Dicloro etano
Gel de slice para cromatografa en capa fina

Equipo
Estufa
Campana de extraccin

Esquema de aparatos


Cmara de elucin



Etapas del empleo de la C.C.F a) aplicacin de la disolucin a la placa, b) desarrollo
de la placa, c) clculo del R
F
.

Procedimiento
Para la cromatografa en capa fina del chile guajillo se debe primero macerar el chile
guajillo para lo cual lo cortamos en trozos pequeos y lo depositamos en un frasco
mbar ya que en los pigmentos se descomponen con la luz, le colocamos ter de
petrleo (que apenas cubra el chile picado dentro del frasco, este proceso de
maceracin necesita de tiempo (2 o tres das). Para preparar las palcas se prepar
una papilla de gel de slice con metileno, y se unto sobre los porta objetos de manera
uniforme, para activar las placas se metieron sobre una placa de vidrio a la estufa
durante unos minutos una ves listas se les coloco tres gotas de la muestra con un
capilar a unos .5cm del borde inferior de la placa se introduce la placa en las cmaras
de elucin que se prepararon previamente con diferentes proporciones y
combinaciones de disolventes y con un papel filtro que cubre por el interior las
paredes del frasco dejando un espacio de 2cm de ventana para poder observar el
avance del disolvente sacar la placa antes de que este llegue a la parte superior dejar
secar la placa dibujar la placa y calcular el R
F
.

































Material y reactivos para cromatografa en capa delgada.
Bureta de 50mL
Soporte universal
Pinzas dobles para soporte universal
10 Matraz bola de 50mL
Matraz Erlenmeyer de 250mL
Gradilla
Tubos de ensaye
Gradilla
Algodn
Arena fina
Varilla de vidrio

Heptano
Tolueno
Cloruro de metileno
Muestra macerada de chile guajillo en heptano

Macerar el chile guajillo con
heptano
Prepara la papilla con gel
de slice y heptano
Untar la papilla en los porta objetos para
preparar las placas
Para activar las placas meter las
placas sobre una placa
preparativa durante unos 5
minutos
Aplicar la muestra en las placas
activadas a unos .5 cm del borde
inferior e introducir la placa en la
cmara de elucin
Sacar la placa antes de que el eluyente
llegue a la parte superior
Secar, dibujar, medir y calcular el R
F
Equipo
Campana de extraccin
Rota vapor
Bomba de vaco

Esquema de aparatos





Mezcla de disolventes
9:1 heptano-tolueno
Matraz erlenmeyer
como receptor del
eluyente
tapn de algodn
Capa de arena aprox.
Un centmetro
embudo
Soporte universal
Fase estacionaria gel
de slice aprox. 35 cm
Pinzas de tres dedos
Procedimiento
Hacer un tapn que entre exacto en la buera sin que quede apretado y empujarlo con la
perilla de vidrio hasta el fondo de la bureta, montar la bureta en el soporte universal
cuidando que quede bien nivelada agregar una capa de arena de un centmetro
aproximadamente, preparar la papilla con gel de slice para cromatografa en columna y
agregar una capa de 35 cm aprox. Agregar otra capa de arena, agregar una porcin de la
mezcla de eluyentes para mantener humectada la fase estacionaria (nunca dejar de
agregar el eluyente ya que la columna se podra secar) agregar la muestra del chile
guajillo en heptano y volver a llenar constantemente la columna con las proporciones
adecuadas de disolventes segn el avance de los pigmentos.
Una vez obtenida la primera muestra de color colocarla en un matraz bola y llevarla al rota
vapor, realizar C.C.F. a las muestras obtenidas.






kdk



Costo de los reactivos.
1L heptano anhidro 99% 1418.00
1L tolueno anhidro 99.8% 914.00
1L Hexano anhidro 95% 1455.00
1L Cloroformo anhidro 99% 1206.00
1L Benceno anhidro 99.8% 1346.00
1L Etanol -
1L Acetato de etilo -
1L ter de petrleo -
1L Acetona -
1L ter etlico -
1L Cloruro de metileno -
1Kg Gel de slice p/CCF 18580.00
1Kg Gel de slice p/CC 29120.00
Montar la columna
Agregar la mezcla de disolventes y la
muestra del guajillo
Llenar contantemente la columna sin
permitir que se seque la papilla
Separar todo el eluyente que presente
pigmentacin y colocarlo en pequeas
muestras en los matraces bola
Llevar las muestras al rota vapor y posteriormente
realizar C.C.F a las muestras obtenidas
Anlisis de resultados
Los mtodos de cromatografa en capa delgada y cromatografa en columna se llevaron a
cabo de manera correcta y se obtuvieron, en primera instancia la combinacin de
disolventes, ideal para la separacin de los pigmentos por cromatografa en columna la
cual tambin resulto y con lo cual se cumpli la hiptesis. Se sugiere el uso de un fondo
blanco debajo de los tubos de ensaye que reciben el eluyente para una mejor distincin
del pigmento
Conclusiones
La cromatografa de capa delgada es un mtodo que requiere mucha prctica y dado que
la tcnica se aplic de manera correcta tanto en cromatografa en columna como en capa
delgada se obtuvieron buenos y se cumpli el objetivo.
Bibliografa
Domnguez XA, E. Limusa, Qumica Orgnica Experimental, 1982.
Dupont H, E. Reverte, Qumica Orgnica Experimental, 1985
Scribd.com, Laboratorio de qumica orgnica. Disponible en:
http://es.scribd.com/doc/63927220/Laboratorio-Quimica-Organica














A qu grupo de compuestos pertenecen los pigmentos?
, y carotenos.
A qu se debe que estos compuestos sean coloridos?
El color de un pigmento depende de la absorcin selectiva de ciertas longitudes de onda de la
luz y de la reflexin de otras.

Explique la diferencia entre cromatografa de adsorcin y particin.
Se llama efecto de particin a la distribucin de un soluto entre dos o ms solventes que
no se mezclan. El solvente o el lquido que es atrapado por el medio del sostn sea este
papel, gel, slice o almina, se llama fase estacionaria. Al solvente revelador se le llama
fase mvil.
La cromatografa de adsorcin o liquido-slido, es la forma clsica de cromatografa de
lquidos. La adsorcin se lleva a cabo cuando hay una concentracin ms alta en la
superficie de un slido que en la solucin circundante. La adsorcin se refiere al enlace de
una sustancia a la superficie de otra.
Cules son las ventajas y desventajas de la cromatografa en capa fina en comparacin
con la cromatografa en columna?
Ventajas: la cantidad de disolvente y de gel empleados, el tiempo para obtener los
resultados
Desventajas: la C.C.F es un proceso de separacin que solo sirve como criterio de
identificacin y si no se cuenta con todo el material necesario se vuelve un proceso muy
laborioso.
Explique las diferencias que existen entre el adsorbente usado en cromatografa en capa
delgada y el de columna hacer una lista de ellos en orden creciente de actividad.
Los adsorbentes se dividen en dos grupos principales: los polares y los no polares. Entre
los del primer grupo la intensidad de adsorcin es determinada por la polaridad de las
molculas. En los del segundo grupo el papel fundamental es desempeado por las
dimensiones y formas de las molculas.
Adsorbentes en orden de menor a mayor
Azcar, almidn, insulina, talco, carbonato sdico o potsico, magnesia, gel de slice y
almina.
Hacer una lista de los eluyentes usados comnmente en cromatografa en columna y en
capa delgada en orden creciente de polaridad.
ter de petroleo, hexano, heptano, benceno, ter etlico, tolueno, cloroformo, cloruro de
etilo, cloruro de metilo, dicloroetano, cetona, etanol, metanol.
Hacer una lista de la capacidad de adsorcin de los grupos funcionales de los
compuestos orgnicos
Qu compuesto es ms retenido una amina o un alqueno, ejemplifique en una placa
cromatogrfica?
Cmo se prepara el capilar para aplicar la muestra en la cromatoplaca?
mediante calentamiento de una varilla de vidrio para volverla maleable, se retira y se tira
de ambos extremos para formar un capilar delgado fcil de cortar
Por qu es necesario que la cmara de elucin este saturada con los vapores del
eluyente?
Para alcanzar un equilibrio entre el disolvente y la atmosfera y ayudar a una mejor elucin
de la muestra.
Adsorbente: fase sobre la cual se acumula el adsrbato.
Eluyente: disolvente o mezcla de disolventes usados
Elato: fracciones obtenidas durante la cromatografa en columna
Particin: solubilidad de las sustancias en dos fases diferentes
Elucin: es el recorrido de los pigmentos en las cromatoplacas
Cmo se clasifica la cromatografa en funcin de su fase estacionaria?
Fase mobil-fase estacionaria y tipo de cromatografia
Vapor-solida cromatografa de gases
Vapor-liquida cromatografa de gases (CGL)
Liquida-solida cromatografa de adsorcin (CLS)
Liquida-liquida cromatografa liquido-liquido (CLL)
Cul es la funcin de la fase mvil?
Eluir o desplazar un componente a lo largo de la fase estacionaria
Cmo se prepara la papilla para la cromatografa en capa fina?
En un frasco de 150 a 200mL se pesa el recipiente elegido, se aade la cuarta parte de
gel de slice o de almina, y se pesa de nuevo la diferencia entre ambos pesos es el peso
de adsorbente se aade ahora de tres a cuatro veces el peso de cloruro de metileno y se
agita hasta tener un pasta de consistencia similar a la de un biscocho.
Como se activa una placa?
Metindola en la estufa por un lapso de 10 a 15 min.
Que espesor debe tener la fase estacionaria en la CCD?
0.1 a 0.2 mm aprox.