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TECHNIQUES D'ANALYSES BIOLOGIQUES
CORRIGÉ: EPREUVE DE MOYENNE DURÉE
E.M.D N°1 ANNÉE 2003/2004 >VERSION IMPRIMABLE

1- Exercice 1 :

Une prépara on de Lactate Déshydrogénase (LDH) est u lisée dans l’expérimenta on

suivante. On cons tue une série de 3 essais dont la composi on est la suivante ;

Essai n° 1 2 3

H2O 2

Solu on étalon (ml) 2

Prépara on de LDH 2
(ml)

Réac f du Biuret(ml) 8 8 8

Absorbance mesurée 0.02 0.25 0.29

après 30 min

Concentra on de la solu on étalon : 1mg/ml. Trajet op que : 1 cm.

Quelle est la concentra on en protéines dans la prépara on de LDH ?

Réponse : la concentra on en protéines de la prépara on enzyma que est de : 1.174 mg/ml.

2- La LDH catalyse la réac on :

Pyruvate + NADH + H+ - - - > Lactate + NAD+

Dans la cuve d’un spectrophotomètre, on introduit 2.95 ml d’un tampon adéquat contenant du
pyruvate et du NADH+H+ en concentra ons saturantes. On ajoute 50 µl de la prépara on de LDH
précédemment u lisée. Comment varie l’absorbance ? jus fier votre réponse.

Réponse : L’absorbance varie en fonc on de la longueur d’onde u lisée.

Jus fica on : L’absorbance décroît lorsqu’on u lise la longueur d’onde spécifique du co-facteur
NADH+H+. L’absorbance est maximum correspondant à la concentra on ini ale du NADH+H+
présent dans le tube à essai (tube n° 2 au temps t0).

-1
On suit la varia on d’absorbance en fonc on du temps, elle est égale à 0.048 min .
+ -1
Le coefficient d’absorbance molaire de NADH+ H est de 6300 M-1.cm .

a) Donner la défini on du coefficient d’absorp on molaire et sa rela on avec

l’absorbance.

Réponse : Le coefficient d’ex nc on molaire est caractéris que de la substance à doser. Sa

valeur est constante pour une solu on donner. La valeur de l’absorbance est égale au coefficient
d’ex nc on molaire pour une concentra on molaire de la solu on étudier.

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b) Calculer la quan té de NADH transformée en 1 min.

Réponse : 22.86 nmole de NADH transformée en 1 min.

Exercice 2 :

Dans un protocole opératoire nécessitant une déprotéinisa on, il est indiqué de centrifuger
10min à 3500 tours/min.

Sachant que l’on u lise un rotor dont le rayon de centrifuga on est de 50 mm, calculer la valeur
de l’accéléra on en mul ple de g.

Quelle serait la valeur de l’accéléra on centrifuge si on u lise un autre rotor de rayon de

centrifuga on égale à 8 cm ? Quelle conclusion en rez vous ?

Réponse : Environ 700 g et 1156 g l’accéléra on augmente avec le rayon de centrifuga on.

Exercice 3 :

Une solu on d’acide sulfurique a les concentra ons suivantes :

Densité 1.83, degré de pureté en masse 94%.

a) Quelle est sa concentra on molaire ?

b) Comment procédez vous pour préparer 300 ml d’une solu on d’acide sulfurique de
concentra on molaire 0.125 à par r de la solu on concentrée ayant les
caractéris ques ci-dessous ?

Réponse : a) 18.30 mol/l. b) 2.2.01 ml de H2SO4 concentré compléter à 300 ml.

Exercice 4 (Ques ons de cours)

Citez les techniques de photométrie d’émission atomique que vous connaissez ?

Quelle est celle qui donne les meilleurs résultats expérimentaux ?

Quels inconvénients présente t-elle ?

Réponse : Voir cours.

EmailA.Bedrane & F.Lahfa

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