Rev. Invest. Mar.

22(1):57-62, 2001

FLOCULACIN DE Chlorella sp. CON LA UTILIZACIN DE

QUITOSANA
Teresita Romero L.1 y Cristina Ferrn G2.
(1) Centro de Investigaciones Pesqueras, Ministerio de la Industria Pesquera, 5ta Ave. y 248 Playa, Ciudad Habana,
Cuba
(2) Instituto de Higiene y Epidemiologa. Calle Infanta, esquina Manglar, Plaza, C. Habana, Cuba
RESUMEN.
La microalga Chlorella, cultivada en los efluentes de la industria pesquera, se ha venido utilizando con fines de saneamiento
de las aguas contaminadas. Cuando se separan del medio de cultivo por medio de centrifugacin, el remanente clarificado
disminuye la Demanda Bioqumica de Oxgeno (DBO) hasta niveles del 95%. Otro modo de separar las algas es con la
utilizacin de quitosana (deacetylated chitin), que se obtiene de la quitina (-N-acetyl-D-glucosamine), producto que se prob
en cultivos de Chlorella para flocular las algas, y a su vez, para disminuir la contaminacin orgnica. De las concentraciones
de prueba que fueron de 20; 50; 80; 100, 120 y 140 mg/l, el recobrado de las algas fue superior al 90% con concentraciones
de quitosana por encima de 80 mg/l, aunque el ptimo terico fue de 117 mg/l. La reduccin de la contaminacin orgnica del
sobrenadante despus de tratado el efluente con quitosana se mantuvo entre 43 y 64% en trminos de DBO y con la
centrifugacin entre 45 y 65%. Despus de realizar un anlisis de costo correspondiente al recobrado de las algas por ambos
mtodos se concluy que el mtodo tradicional por centrifugacin resulta ms econmico que si se utilizara la quitosana para
estos fines.
Palabras clave: fitoplancton; floculacin; cultivo; residuales industriales; Chlorella sp.
ABSTRACT.
The microalga Chlorella growing in the efluentes of the fishing industry, has been using with the porpuse of trating polluted
waters. When it is separated with centrifugation, the clarified remainder diminishes the Biochemical Oxygen Demand (BOD)
until levels of 95%. Another way of separating the algae is with chitosana (deacetylated chitin) obtained from chitina (-Nacetyl-D-glucosamine), product that was proven in culture of Chlorella with the aims to separate the algae, and in turn, to
diminish the organic contamination. The test concentrations were 20; 50; 80; 100, 120 and 140 mg/l, and the best recover of
the algae (superior to 90%) was with chitosana concentrations above 80 mg/l, although the good one theoretical was of 117
mg/l. The reduction of the organic contamination of the medium after treatment the efluente with chitosana was between 43
and 64% in terms of BOD and with centrifugation between 45 and 65%. After carrying out a cost analysis corresponding to
the recovered of the algae for both methods, we concluded that the traditional method for centrifugation is more economic
than chitosana one.
Key words: phytoplankton; flocculation; culture; industrial wastes; Chlorella sp.

INTRODUCCION
Desde hace aproximadamente tres dcadas, se
comenz el estudio de diferentes tcnicas de
floculacin con el fin de disminuir la carga orgnica
de los efluentes, y para decantar microalgas del
medio donde se cultivan (Tenney et al., 1969;
Tilton et al., 1972).

Chlorella sp. en lagunas estticas, donde se utiliza

como medio soporte los residuales lquidos de la
industria pesquera, con el doble propsito de
depurar
el efluente contaminado y obtener un
concentrado algal seco rico en protenas, vitaminas,
cidos grasos, etc.

Entre los agentes floculantes comnmente usados para

la separacin de las algas se pueden citar el FeCl3 (Ives,
1959); los polielectrolitos catinicos (Tilton et al., 1972); el
Ca(OH)2 (Nigam et al., 1980); la quitosana (Nigam et al.,
1980; Lavoide et al., 1984; Gutirrez et al., 1992) y otros.

La cosecha de las algas se realiz con centrfugas

continuas de 9500 r.p.m.
La centrifugacin, a pesar de ser uno de los
mtodos ms explotados internacionalmente por su
rapidez y calidad, tiene la desventaja de consumir
mucha energa, que para los pases pobres resulta
una gran limitante visto desde un punto de vista

En Cuba se desarrolla actualmente un proyecto de

investigacin dirigido
al cultivo de la microalga
57

Romero y Ferrn: Floculacin de Chlorella sp. con la utilizacin de quitosana

econmico; por eso se impone la necesidad de

probar otros mtodos que resulten econmicamente
viables y remuevan la biomasa algal y la carga
orgnica a niveles considerables que justifiquen su
costo de produccin.

respecto al
cultivo sin flocular. Las lecturas se
efectuaron en la cmara de Neubauer con la ayuda
del microscopio biolgico, segn la tcnica descrita
por Anido y Anido (1943).
Para la centrifugacin, que se realiz paralelamente
a la floculacin y con los mismos cultivos algales, se
utiliz una centrfuga de laboratorio. El contenido de
clulas se verific al igual que en el caso anterior, por
conteo al microscopio biolgico.

Por tal motivo se realiz este trabajo, con el objetivo

de demostrar la posibilidad que brinda la quitosana
para separar microalgas cultivadas en residuales
pesqueros, comparando la utilidad del mtodo con
el de centrifugacin, regularmente usado para el
recobrado del fitoplancton.

La concentracin ptima terica de quitosana a utilizar

para el recobrado de las algas se determin mediante
un polinomio de grado 3, donde se tom como variable
dependiente la remocin de las clulas algales
registrada para cada concentracin de trabajo.

MATERIALES Y METODOS
Para establecer la comparacin entre la floculacin y
la centrifugacin, se procedi a cultivar Chlorella sp.
en agua residual
de la empresa Industrial de
Alimentos (INDAL), perteneciente al Ministerio de la
Industria Pesquera (MIP).

La calidad del efluente clarificado por floculacin y

por centrifugacin, as como la carga orgnica del
cultivo y la del agua residual sin tratar, se determin
por la diferencia de oxgeno entre el 1er y 5to da
(DBO), segn el mtodo estndar del APHA (1992),
que da un estimado bastante certero del grado de
contaminacin orgnica de las aguas.

Al iniciarse la fase estacionaria

del crecimiento
celular, se tomaron las muestras para su recobrado,
utilizando como
agente floculante
la quitosana
(deacetylated chitin), producto que se obtiene de la
quitina
(-N-acetyl-D-glucosamine),
lograda
comercialmente a partir del tratamiento del
exoesqueleto de algunos crustceos, en este caso
especfico, de la langosta Panulirus argus (Muzzarelli,
1977; Nigam et al., 1980).

Con los valores de remocin de la DBO del efluente

clarificado con la disolucin de quitosana con una
concentracin de 100 mg/l y la del efluente clarificado
por centrifugacin, se realiz un anlisis de varianza
para verificar la existencia o no de diferencias
estadsticas significativas al 95% de confianza, lo que
brinda la sugerencia de usar un sistema u otro para
fines de depuracin.

Las lentejas de quitosana, suministradas por el

Instituto de Investigaciones Qumicas (IIQ) de Ciudad
de La Habana, fueron disueltas en una solucin de
cido actico al 1% hasta obtener una solucin final
de quitosana de 0.5 % (w/w) a un pH de 3.5

RESULTADOS Y DISCUSION
Remocin de Chlorella sp. con la utilizacion de
quitosana

Las concentraciones de quitosana utilizadas para el

recobrado de las algas fueron: 20; 50; 80; 100, 120 y
140 mg/l y se escogieron tomando en cuenta los
reportes aportados por diferentes autores que han
utilizado la quitosana con estos fines.

En los ocho experimentos realizados, donde el rango

de concentracin de la disolucin de quitosana se
mantuvo entre 20 y 140 mg/l, la foculacin de la
microalga fue muy baja, del orden de 20-30 % (Tabla
1), fluctuacin que se debe a las diferentes
densidades algales de los cultivos, las que se
presentaron en un intervalo entre 10.1 y 28.5 x 106
cel/ml. Con 50 ml/l de disolucin, la eficiencia fue del
55-60 % y con 80,100,120 y 140 mg/l, la decantacin
de las algas se report entre el 90 y 100 %.

Para las experiencias se tomaron erlenmeyers de

1 litro de capacidad y se agregaron 100 ml de cultivo
en cada uno de ellos, adems, las diferentes
concentraciones de quitosana, siguiendo la tcnica
modificada por Lavoide y de la Noue (1983).
Cada
concentracin estudiada cont con dos
rplicas, repitindose las pruebas en el tiempo a
razn de ocho veces, con cultivos de diferentes
densidades celulares (entre 10.1 y 28.5 x 106 cel/ml).

Un 90 % de floculacin se considera un valor

aceptable para estos fines, por lo que por un problema
econmico, se podra tomar como concentracin de
trabajo, 80 mg/l de disolucin de quitosana.

La remocin de las algas se midi por la diferencia

de la concentracin celular en el sobrenadante con
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Rev. Invest. Mar. 22(1):57-62, 2001

Tabla 1: Remocin de la microalga (%) al aplicar diferentes concentraciones de quitosana.

No DE EXPERIMENTO
CONC.
QUITOSANA
(mg/l)
20
50
80
100
120
140

20.3
56.0
97.6
98.0
99.0
100.0

25.5
58.4
90.0
99.5
99.6
100.0

25.0
60.0
91.1
96.6
99.6
99.9

30.0
59.0
95.0
98.0
98.9
99.7

30.0
55.0
97.0
98.1
99.3
99.8

27.9
59.0
98.2
98.9
99.7
99.7

26.0
60.0
97.5
98.4
99.1
100.0

20.0
56.0
97.8
99.2
99.6
100.0

Independientemente a esta apreciacin, despus de

tratar estadsticamente los efluentes operados con
quitosana, con un polinomio de grado 3, donde se
tom como variable dependiente el porciento de
remocin de las algas y como variable independiente
la concentracin de disolucin de quitosana, el punto
de inflexin de la curva se apreci entre 100 y 120
mg/l, para una concentracin ptima terica de 117
mg/l, que se enmarca en el intervalo de remocin entre
96.57 y 99.67 % (Fig. 1).

INTERVALO
DE
REMOCION
20.0-30.0
55.0-60.0
90.0-98.2
96.6-99.5
98.9-99.7
99.9-100.0

Remocin de la DBO con la utilizacin de

quitosana y mediante centrifugacin
En las investigaciones realizadas con el fin de depurar
los residuales lquidos de la industria pesquera
mediante el cultivo de la microalga Chlorella sp., se ha
logrado disminuir la carga orgnica hasta niveles del
80% (Surez et al. 1992).
Con los cultivos de Chlorella sp. en los efluentes de la
empresa INDAL, se obtuvieron remociones de la DBO
entre 60 y 80 % (Tabla 2), lo que demuestra una vez
ms que este tratamiento es eficaz para su aplicacin
en los residuales pesqueros.

Estos reportes estn por encima de los sealados por

Nigam et al. (1980) que fue del 50 %, as como el de
Lavoide et al. (1984) con 30%.
Morales et al. (1985) en sus experimentos con
diferentes gneros de microalgas logr flocular el
100% de Chlorella sp. con concentraciones de
disolucin de quitosana entre 40 y 80 mg/l, no as con
30 mg/l, donde la decantacin slo se logr en un
62.5%. Este ltimo resultado encontrado por Morales
et al. (1985) es comparable solamente con los 50 mg/l
aplicados en los estudios realizados con los residuales
pesqueros como substrato de las algas, por lo que se
comprende que parte de la materia orgnica contenida
en el medio de cultivo utiliza tambin la quitosana
para su remocin, lo que hace mayor la concentracin
de trabajo para lograr ambos fines. Segn los reportes
de estos autores, las microalgas utilizaron como
medio de cultivo sales inorgnicas disueltas en agua
limpia, lo que hace que disminuya la concentracin
ptima de floculante para lograr la decantacin de las
algas.

En los estudios de floculacin llevados a cabo con la

quitosana, la DBO del efluente despus de decantadas
las algas con 100 mg/l de disolucin, se mantuvo en
un intervalo entre 43 y 64 % y la del remanente
centrifugado entre 45 y 65 % (Tabla 2), no
presentndose diferencias estadsticas significativas
al
95 % de confianza
entre los resultados de
ambos mtodos, logrando un residual con una DBO
inferior al del efluente del proceso de pescado y al
tratado biolgicamente por las algas (Fig 2).

Ms recientemente se pueden citar los resultados de

Gutirrez et al. (1992), los que flocularon de 90 al
100% de Chlorella sp. con concentraciones de
quitosana entre 20 y 40 mg/l.

Para decantar las algas con la utilizacin de quitosana

de produccin nacional, el costo se reporta en $7.63
USD/kg de alga, tomando en cuenta que la quitosana
cuesta 8.75 $/kg. Por su parte, el costo de 1kg de alga
obtenido por centrifugacin es de $1.90 USD/kg.

Esto demuestra que si se toma en consideracin la

reduccin de la carga orgnica, es viable utilizar
cualesquiera de los dos mtodos como modo de
separacin de las algas, ya sea por floculacin o por
centrifugacin.
Anlisis de costo

59

Romero y Ferrn: Floculacin de Chlorella sp. con la utilizacin de quitosana

120

Remocin algas (%)

100
80

Conc. ptima

117

60
40
20
0
0

20

40

60

80

100

120

140

160

Conc. quitosana (mg/l)

Fig.1. Concentracin ptima de quitosana encontrada a travs de una curva polinomial, con los datos de los ocho
ensayos realizados

Tabla 2: Remocin (%) de la carga orgnica del efluente pesquero en diferentes fases de la
tecnologa aplicada.
EXP (#)
1
2
3
4
5
6
7

EFLUENTE
TRATADO CON
MICROALGA
73.0
65.0
77.0
65.0
60.0
61.0
80.0

EFLUENTE CLARIFICADO
CON QUITOSANA
49.0
48.0
56.0
64.0
50.0
43.0
46.0

Evidentemente, resulta ms econmico utilizar las

centrfugas continuas como mtodo para separar
Chlorella cultivada en residual lquido de la industria
pesquera, ya que el costo de obtencin del recobrado
es muy inferior al logrado con quitosana, aunque esta
ltima podra ser un sustituto que valdra la pena
emplear si se desea utilizar el producto con otros fines,
atendiendo a las mltiples propiedades que posee la
quitosana.

EFLUENTE
CLARIFICADO POR
CENTRIFUGACION
52.0
45.0
47.0
61.0
51.0
45.0
65.0

2- El ptimo terico para la separacin ms eficiente

de las algas es de 117 mg/l de concentracin de
quitosana.
3- La floculacin con la utilizacin de quitosana
provoca una reduccin de la contaminacin orgnica
del sobrenadante entre 43 y 64% en trminos de DBO
y con la centrifugacin entre 45 y 65%.
4- El costo que representa separar la microalga con
quitosana es de 7.63 $/kg alga y por centrifugacin es
de 1.90 $/kg alga por lo que resulta ms costeable la
separacin por el mtodo de centrifugacin.

CONCLUSIONES
1- Con concentraciones de quitosana a partir de 80
mg/l, el recobrado de las algas es superior al 90%.

60

Rev. Invest. Mar. 22(1):57-62, 2001

450
400

DBO (mg/l)

350
300
250
200
150
100
50
0
1

No de experimento

Agua con
Agua
i centrifugada
l

Agua sin tratar

Agua floculada

Fig. 2: Carga orgnica del efluente en diferentes fases del tratamiento

RECOMENDACIONES

Ives, K.J. (1959): The significance of surface electric

change on algae in water purification. J. Biochem.
Microbiol. Tecnol. Eng. 1(1): 37-47.

Tomar como alternativa el uso de la quitosana

para los fines de floculacin de la microalga
Chlorella sp. cultivada en residual lquido de la
industria pesquera, considerando que aporta una
eficiencia elevada como agente depurador y por
los posibles usos que se les pueda dar a la
mezcla microalga-quitosana.

Lavoide, A. and J. de la Noue (1983) : Harvesting

microalgae with chitosan. J. World Maricult. Soc., 14:
685-694.
Lavoide, A, J. de la Noue and J. Serodes (1984) :
Recuperation de microalgae en eaux usses : tude
comparative de divers agents floculants. Can. J.Civ.
Eng. 11(2). pp:266-272.

REFERENCIAS
Anido, F.V. y F.G. Anido (1943) : Laboratorio clnico.
Tcnicas e interpretaciones. La Habana, Cuba, Ed .
Cultural, S. A., Tomo 1, 82 pp

Morales, J, J. de la Noue and G. Picard (1985):

Harvesting marine microalgae species by chitosan
flocculation. Acuacultural Eng. 4., Els. App. Sci. Pub.
Ltd. England., pp: 257-270.

APHA (1992) : Standard methods for the examination

of wates and wastewaters. 18 th Ed. American Public
Healt Associations. Washington D.C. USA., 984 pp

Muzzarelli, R.A. (1977): Chitin. Pergamon Press,

Oxford; New York.

Gutirrez, D.I, M.O. Beato y H.A. Suri (1992):

Evaluacin de diferentes floculantes en el recobrado
de biomasa de algas. XXIII Congreso Interamericano
de Ingeniera Sanitaria y Ambiental. CUBAIDIS. La
Habana. Cuba. pp : 208-219.

Nigam,
B.P.,
P.K.
Ramanathan
and
L.V.
Venkataraman (1980): Application of chitosan as a
flocculant for the cultures of the green algae;
Scenedesmus acutus . Arch. Hydrobiol. 88(3):378-387.

61

Romero y Ferrn: Floculacin de Chlorella sp. con la utilizacin de quitosana

Surez, G., T. Romero y M.E. Parra (1992):

Evaluacin de una planta piloto para depuracin de
residual pesquero y produccin de microalgas en el
CIP de Manzanillo. XXIII Congreso Interamericano de
Ingeniera Sanitaria y Ambiental, CUBAIDIS. La
Habana. Cuba. Tomo II. Parte 2. pp : 847-855.

18(6):965-971.
Tilton, R.C., J. Mutphy and J.K. Dixon (1972): The
flocculation of algae with synthetic polymeric
flocculants. Water Res., 6:155-164.

Tenney, M.W, W.F. Echelberger Jr, R.G. Schusseler

and J.L. Pavoni (1969): Algae flocculation with
synthetic organic polyectrolytes. Appl. Microbiol.

Aceptado: 12 febrero del 2000

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