N

EL

PROFESSIO
E
N
R

HMATOLOGIE
RGLES NORMATIVES

DU

QUBEC

DES TECHN
O

GI

STE

S M

C
DI

AU

HMATOLOGIE
- RGLES NORMATIVES -

Ordre professionnel des technologistes mdicaux du Qubec

281, avenue Laurier Est, Montral (Qubec) H2T 1G2
Tl. : 514 527-9811 800 567-7763 Tlc. : 514 527-7314
Courriel : optmq@qc.aira.com Internet : www.optmq.org
Dpt lgal 2e trimestre 2001
Reproduction permise avec avis lO.P.T.M.Q. et mention de la source

AVANT-PROPOS
Le prsent document est une premire parution des rgles normatives en hmatologie. Il a pour but de colliger les renseignements disponibles ce jour, afin de renforcer les critres de qualit et de scurit relis aux analyses dhmatologie. Ces rgles
ont t labores partir de rfrences documentes et dopinions de spcialistes
dans le domaine.
Ces rgles ne se prtendent pas exhaustives et peuvent tre enrichies afin de rpondre aux exigences de chaque laboratoire. Compte tenu de lvolution technologique,
elles feront lobjet de rvisions et toute suggestion susceptible damliorer le contenu
sera accueillie avec intrt.
Nous tenons remercier particulirement les technologistes mdicaux qui ont collabor la rvision scientifique de ces rgles normatives : Mme Clmence Bastien,
Mme Suzanne Brousseau, M. Serge Comtois, Mme Christiane L. Di Biasio,
Mme Paule Ct, Mme Hlne Lord Dub, Mme Sandra Gagnon, Mme Claudette Girard,
Mme Guylaine Lafrance, Mme Lorraine Andre Parent, Mme Diane Jarry Savard,
Mme Claudette Tremblay et Mme Rgina Zver, ainsi que les personnes suivantes :
M. John dAngelo, Mme Suzanne Bourassa et Mme Evelyne Kokoskin.
Nous remercions aussi sincrement toutes les personnes qui ont particip
llaboration de cette publication.

Comit des normes de la pratique :

Suzanne Deschnes Dion, T.M., prsidente
Mance Brard, T.M.
Shirley Callaghan, T.M.
M.-Debbie Provencher, T.M.
Danielle Cousineau, T.M., charge de dossiers scientifiques

O.P.T.M.Q.

III

Mai 2001

TABLE DES MATIRES

AVANT-PROPOS .................................................................................................................. III
1.0 INTRODUCTION............................................................................................................ 1
2.0 DFINITIONS................................................................................................................. 1
3.0 MESURES DE SCURIT..............................................................................................2
4.0 RESSOURCES HUMAINES............................................................................................3
5.0 MATRIEL DIDACTIQUE ET DE RFRENCE EN HMATOLOGIE ................4
6.0 PRLVEMENT ET ACHEMINEMENT DES CHANTILLONS ...........................4
6.1 RPERTOIRE DES ANALYSES ...........................................................................................................4
6.2 ANTICOAGULANTS POUR CHANTILLONS HMATOLOGIQUES ...............................................4
6.2.1 EDTA................................................................................................................... 5
6.2.2 Citrate de sodium................................................................................................. 5
6.2.3 Hparine............................................................................................................... 5
6.3 RATIO SANG/ANTICOAGULANT.....................................................................................................6
6.4 IDENTIFICATION DE LCHANTILLON ..........................................................................................6
6.5 TRANSPORT ET DLAIS DE CONSERVATION ................................................................................6
6.6 CONDITIONS PRANALYTIQUES RELATIVES LANALYSE DE LA FSC ....................................7
6.6.1 Prlvements veineux pour la formule sanguine ................................................. 7
6.6.1.1 Dlais de conservation des spcimens veineux avec EDTA.......................................... 7

6.6.2 Prlvements capillaires pour la formule sanguine ............................................. 8

6.6.2.1 Dlais de conservation des spcimens capillaires ............................................................ 8

7.0 RCEPTION ET TRAITEMENT DES CHANTILLONS .........................................8

7.1 CONFORMIT DU PRLVEMENT ET CRITRES DE REJET ........................................................8
7.2 REGISTRE DCHANTILLONS ..........................................................................................................9
7.3 ENVOI DANALYSES DAUTRES LABORATOIRES .......................................................................9
8.0 MANUELS DE LABORATOIRE .................................................................................. 10
8.1 MANUEL DES POLITIQUES ET DES DIRECTIVES ........................................................................10
8.1.1 Politiques et directives gnrales....................................................................... 10
8.1.2 Procdures en cas de panne de courant.............................................................. 11
8.1.3 Procdures en cas de panne informatique.......................................................... 11
8.2 MANUEL DES TECHNIQUES ET DES PROCDURES....................................................................11
8.3 MANUEL DES PROCDURES DUTILISATION DES APPAREILS..................................................12
8.4 MANUEL DES PROCDURES DU SYSTME INFORMATIQUE .....................................................13
8.5 RVISION ANNUELLE .....................................................................................................................13
8.6 REGISTRE DES INCIDENTS ET DES MESURES CORRECTRICES .................................................13
8.7 REGISTRE DES ACTIONS POSES ET DES CHANGEMENTS .......................................................13
9.0 POLITIQUES GNRALES DU CONTRLE DE QUALIT ................................. 14
9.1 APPLICATION GNRALE DU CONTRLE DE QUALIT...........................................................14
9.2 ANALYSES SANS MATRIEL COMMERCIAL DE CONTRLE ......................................................14
9.3 CONTRLE DE QUALIT EXTERNE .............................................................................................15
9.4 POLITIQUES RELATIVES LA NON CONFORMIT.....................................................................15
10.0 RACTIFS....................................................................................................................... 15

O.P.T.M.Q.

Mai 2001

Hmatologie

11.0 INSTRUMENTATION.................................................................................................. 16
11.1 CONNAISSANCES DE LINSTRUMENTATION...............................................................................16
11.2 MANUEL DES PROCDURES DUTILISATION DES APPAREILS..................................................16
11.3 RFRIGRATEUR, CONGLATEUR, BAIN-MARIE ET TUVE ....................................................16
11.4 CENTRIFUGEUSE ET CYTOCENTRIFUGEUSE..............................................................................16
11.5 MICROSCOPE ....................................................................................................................................16
11.5.1 Ajustement de lclairage de Khler ................................................................. 17
11.6 PIPETTES AUTOMATIQUES ET DILUTEURS .................................................................................17
12.0 CONTRLE DE QUALIT DES ANALYSEURS CELLULAIRES ........................... 17
12.1 PRINCIPES DE MESURE ...................................................................................................................18
12.2 CALIBRAGE .......................................................................................................................................18
12.2.1 Solutions de calibrage........................................................................................ 18
12.2.2 Procdure de calibrage....................................................................................... 19
12.2.2.1 Vrification du calibrage ................................................................................................. 19

12.2.3 Frquences de calibrage..................................................................................... 19

12.3 UTILISATION DES SOLUTIONS COMMERCIALES DE CONTRLE .............................................19
12.3.1 Caractristiques des solutions commerciales de contrle.................................. 20
12.3.2 Vrification dun nouveau lot de solutions de contrle ..................................... 20
12.3.3 Validation des valeurs cibles du nouveau lot de solutions de contrle.............. 20
12.3.3.1 Valeurs cibles conformes aux valeurs attendues.......................................................... 21
12.3.3.2 Valeurs cibles hors limites .............................................................................................. 21

12.3.4 Frquence dutilisation des solutions commerciales de contrle....................... 21

12.3.5 valuation des rsultats des solutions commerciales de contrle...................... 22
12.4 CONTRLE DE REPRODUCTIBILIT JOURNALIER AVEC UN CHANTILLON CLIENT .........22
12.4.1 valuation des rsultats ..................................................................................... 23
12.5 CONTRLE DE QUALIT EN UTILISANT LES RSULTATS DES CLIENTS ................................23
12.5.1 Algorithme de Bull ou moyenne flottante pondre ou XB ............................... 23
12.5.2 Rgle de trois ..................................................................................................... 24
12.6 DTECTION DERREUR ALATOIRE LAIDE DU DELTA CHECK ...................................24
12.7 CORRLATION ENTRE LAPPAREIL PRINCIPAL ET LAPPAREIL DE SOUTIEN .......................25
12.8 POLITIQUES RELATIVES AUX INTERVENTIONS SELON LES SIGNAUX DALARME ET LES
MESSAGES DERREUR ......................................................................................................................25
12.9 SOURCES POSSIBLES DERREURS ANALYTIQUES ........................................................................26
13.0 FROTTIS SANGUIN PRIPHRIQUE ...................................................................... 26
13.1 IDENTIFICATION DU FROTTIS SANGUIN ....................................................................................26
13.2 DLAIS POUR CONFECTIONNER UN FROTTIS ............................................................................27
13.3 CONFECTION DU FROTTIS SANGUIN...........................................................................................27
13.4 COLORATION DE BASE...................................................................................................................27
13.4.1 Colorants............................................................................................................ 28
13.4.2 Technique et procdure...................................................................................... 28
13.4.3 Critres de qualit de la coloration .................................................................... 28
13.5 EXACTITUDE ET UNIFORMIT DE LEXAMEN DU FROTTIS SANGUIN ...................................28
13.5.1 Mthode dexamen du frottis sanguin ............................................................... 28
B

13.5.1.1 Examen macroscopique.................................................................................................. 28

13.5.1.2 Examen microscopique faible grossissement............................................................ 29
13.5.1.3 Examen microscopique fort grossissement............................................................... 29

13.5.2 Standardisation de lapprciation de la morphologie cellulaire......................... 29

13.5.2.1 Lecture et identification .................................................................................................. 29
13.5.2.2 Charte de nomenclature et de quantification ............................................................... 29

13.5.3 Mthodes destimation des numrations globulaires......................................... 29

O.P.T.M.Q.

VI

Mai 2001

Hmatologie

13.5.4 Correction de la numration des leucocytes en prsence drythroblastes........ 30

13.5.5 Correction des autres sources dinterfrences avec les paramtres
hmatologiques .................................................................................................. 30
13.5.6 Artfacts du frottis sanguin priphrique........................................................... 30
13.5.7 Cellules clates................................................................................................. 31
13.6 RDACTION DU RAPPORT DE LA FORMULE LEUCOCYTAIRE..................................................31
13.7 POLITIQUES DENVOI DES FROTTIS SANGUINS LHMATOLOGUE ....................................31
13.8 RECHERCHE ET IDENTIFICATION DES PARASITES SANGUINS................................................32
13.8.1 Considrations spcifiques la recherche de parasites...................................... 32
13.8.1.1 Prlvement et dlais de conservation pour la recherche de parasites ..................... 32
13.8.1.2 Prparation des frottis..................................................................................................... 33
13.8.1.3 Colorations ....................................................................................................................... 33
13.8.1.4 Examen microscopique................................................................................................... 33
13.8.1.5 Taux de parasitmie......................................................................................................... 34

13.8.2 Contrle de qualit pour les parasites ................................................................ 34

13.9 PARTICIPATION UN CONTRLE EXTERNE DE LA QUALIT ................................................34
13.10 DLAI DE CONSERVATION DES FROTTIS SANGUINS ................................................................35
13.11 FORMATION CONTINUE.................................................................................................................35
14.0 RTICULOCYTES......................................................................................................... 35
14.1 DFINITION DU RTICULOCYTE..................................................................................................35
14.2 PRLVEMENT REQUIS ..................................................................................................................35
14.3 DLAIS DE CONSERVATION DES CHANTILLONS POUR LA NUMRATION DES
RTICULOCYTES ..............................................................................................................................35
14.4 MTHODE MANUELLE DE NUMRATION DES RTICULOCYTES............................................36
14.4.1 Coloration .......................................................................................................... 36
14.4.2 talement du frottis............................................................................................ 37
14.4.3 Examen microscopique...................................................................................... 37
14.4.3.1 Artfacts ............................................................................................................................ 37
14.4.3.2 Interfrences avec dautres inclusions cellulaires......................................................... 37

14.5 MTHODES AUTOMATISES DE NUMRATION DES RTICULOCYTES ..................................38

14.5.1 Coloration .......................................................................................................... 38
14.5.2 Contrle de qualit des appareils de mesure...................................................... 38
14.5.3 Interfrences ...................................................................................................... 39
14.6 VALEURS DE RFRENCE ..............................................................................................................39
15.0 VITESSE DE SDIMENTATION DES RYTHROCYTES ...................................... 40
15.1 PRINCIPE DE LA MTHODE ...........................................................................................................40
15.2 SPCIMEN REQUIS POUR LA VITESSE DE SDIMENTATION ....................................................40
15.3 DLAIS DE CONSERVATION DES CHANTILLONS POUR LA SDIMENTATION ...................41
15.4 CONTRLE DE LA QUALIT ..........................................................................................................41
15.4.1 Contrle avec solutions commerciales .............................................................. 41
15.4.2 Contrle des lments de variabilit.................................................................. 41
15.4.2.1 Facteurs relis lchantillon sanguin ........................................................................... 41
15.4.2.2 Facteurs environnementaux ........................................................................................... 42
15.4.2.3 Facteurs techniques ......................................................................................................... 42

15.4.3 Validation de lexactitude des rsultats ............................................................. 43

15.4.4 Validation de lexactitude dune nouvelle technique ou dun changement dans
lquipement ...................................................................................................... 43
15.5 VALEURS DE RFRENCE ..............................................................................................................43
15.6 SIGNIFICATION CLINIQUE .............................................................................................................44

O.P.T.M.Q.

VII

Mai 2001

Hmatologie

16.0 MOELLE OSSEUSE....................................................................................................... 44

16.1 MATRIEL NCESSAIRE AU PRLVEMENT DE MOELLE.........................................................44
16.2 TRAITEMENT DU PRLVEMENT AU CHEVET DU CLIENT ......................................................44
16.2.1 Biopsie de moelle osseuse ................................................................................. 44
16.2.1.1 Confection des frottis - Empreintes.............................................................................. 44
16.2.1.2 Traitement de lchantillon de biopsie de moelle ........................................................ 45

16.2.2 Ponction de moelle osseuse ............................................................................... 45

16.2.2.1 Traitement de lchantillon de ponction....................................................................... 45
16.2.2.2 talement direct du liquide daspiration ....................................................................... 45
16.2.2.3 Confection de frottis prpars partir de particules crases.................................... 46
16.2.2.4 Autres analyses ................................................................................................................. 46

16.3 TRAITEMENT DU SPCIMEN DE MOELLE OSSEUSE AU LABORATOIRE .................................46

16.4 MTHODE DEXAMEN DES FROTTIS DE MOELLE OSSEUSE ....................................................46
16.4.1 Examen macroscopique ..................................................................................... 46
16.4.2 Examen microscopique faible grossissement ................................................. 47
16.4.3 Examen microscopique limmersion .............................................................. 47
16.5 RAPPORT PRLIMINAIRE DE LEXAMEN DE LA MOELLE OSSEUSE ........................................47
17.0 COLORATIONS CYTOCHIMIQUES .......................................................................... 48
17.1 CONSIDRATIONS TECHNIQUES ..................................................................................................48
17.2 RACTIFS ..........................................................................................................................................48
17.3 LAMES TMOINS ..............................................................................................................................48
17.4 INTERPRTATION ET RSULTATS ................................................................................................48
18.0 LIQUIDES BIOLOGIQUES .......................................................................................... 49
18.1 PRLVEMENT ................................................................................................................................49
18.1.1 Liquide cphalorachidien .................................................................................. 49
18.1.2 Liquide synovial et liquide sreux ..................................................................... 49
18.2 IDENTIFICATION DE LCHANTILLON ........................................................................................49
18.3 DLAIS DE CONSERVATION DES CHANTILLONS DE LIQUIDES BIOLOGIQUES .................50
18.3.1 Liquide cphalorachidien .................................................................................. 50
18.3.2 Autres liquides ................................................................................................... 50
18.4 CONSIDRATIONS TECHNIQUES ..................................................................................................50
18.4.1 Examen macroscopique du liquide .................................................................... 50
18.4.2 Numration des lments cellulaires ................................................................. 50
18.4.3 Confection des frottis......................................................................................... 51
18.4.4 Ractifs .............................................................................................................. 51
18.4.5 Examen microscopique du frottis ...................................................................... 51
18.4.6 Rdaction du rapport.......................................................................................... 51
18.5 CONTRLE DE LA QUALIT DE LEXAMEN DES LIQUIDES BIOLOGIQUES...........................51
18.6 SIGNIFICATION CLINIQUE .............................................................................................................52
19.0 TRANSMISSION DES RSULTATS ............................................................................ 52
19.1 VRIFICATION DE LA VALIDIT DU RSULTAT .........................................................................52
19.1.1 Validation automatique...................................................................................... 52
19.2 PROTOCOLE DES VALEURS PANIQUES ........................................................................................53
19.3 MODE DE TRANSMISSION DES RSULTATS.................................................................................53
19.4 CONSERVATION DES RSULTATS .................................................................................................53
19.5 PROTOCOLE DE CORRECTION DERREURS SUR LES RAPPORTS ..............................................53

O.P.T.M.Q.

VIII

Mai 2001

Hmatologie

20.0 GESTION DE LINFORMATION ............................................................................... 54

20.1 MCANISME DINFORMATION DU PERSONNEL ........................................................................54
20.2 SYSTME INFORMATIQUE..............................................................................................................54
20.3 CONSERVATION DES DOCUMENTS ET DES DOSSIERS DE LABORATOIRE ............................54
ANNEXE 1 DISQUE DE MILLER ...................................................................................... 55
ANNEXE 2 ANALYSEURS - SOURCES D'ERREURS ANALYTIQUES ......................... 56
ANNEXE 3 SDIMENTATION - SIGNIFICATION CLINIQUE ................................... 58
ANNEXE 4 ALGORITHME DE BULL............................................................................... 59
ANNEXE 5 CONSERVATION DES DOCUMENTS, LAMES, CHANTILLONS ........ 60
ANNEXE 6 NUMRATION DES RTICULOCYTES - INTERFRENCES................. 62
ANNEXE 7 MICROSCOPE - AJUSTEMENT DE L'CLAIRAGE DE KHLER........... 63
BIBLIOGRAPHIE.................................................................................................................. 64
COMMENTAIRES................................................................................................................. 69

O.P.T.M.Q.

IX

Mai 2001

Hmatologie

1.0

Introduction
Ces rgles normatives en hmatologie ont t conues dans le but de maintenir et
damliorer la qualit globale des services offerts en hmatologie. Lobjectif final
consiste promouvoir latteinte dun degr optimal dexcellence en ce qui a trait la
qualit des services rendus aux clients.
Le souci de la qualit des services rendus est devenu une proccupation internationale. En ce qui a trait la gestion de la qualit dans les laboratoires de biologie mdicale, le Comit Technique ISO/TC 212 de lOrganisation internationale de normalisation (ISO) a produit des normes internationales dans le domaine des analyses
biomdicales25. Le National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS), organisme amricain de rputation internationale, labore des normes pour le maintien
dun systme de qualit dans les laboratoires de biologie mdicale64.
En plus de cette orientation vers un systme de qualit des laboratoires, les tendances
futures de la profession, tant sur le plan de la formation que de la pratique, sont bases sur une approche de comptences. Cela implique laffirmation, par le technologiste mdical, de limportance de son jugement et de son expertise dans la gestion de
sa pratique.
Plusieurs lments influencent la qualit des examens de laboratoire et ils font partie
intgrante du programme dassurance de la qualit.
Lassurance de la qualit comprend des activits systmatiques pour suivre toutes les
tapes dune preuve de laboratoire et implique donc la prise en considration, sans
restriction, des lments suivants : les ressources humaines, la gestion de la documentation, le choix des ressources matrielles (instruments, etc.), le processus analytique,
le contrle de la qualit, le mcanisme de transmission des rsultats, la communication avec les clients, la conservation et larchivage des documents.
Cest en tenant compte de tous ces lments et en conformit avec les pratiques gnralement reconnues en laboratoire, que nous abordons et dcrivons ces rgles
normatives en hmatologie.

2.0

Dfinitions
Assurance de la qualit :

Coordination de lensemble des activits continues et planifies qui visent latteinte dun degr
optimal dexcellence en ce qui a trait la qualit
des services rendus aux clients.

Contrle de la qualit :

Oprations techniques et ensemble des activits

qui sont utilises pour rpondre aux exigences
de la qualit.

Politique :

nonc gnral et lignes directrices sur le droulement et lapplication des procdures du service.

O.P.T.M.Q.

Mai 2001

Hmatologie

Protocole :

nonc de rgles.

Procdure :

Instructions dtailles du droulement des oprations effectuer, des mesures utiliser et des
prcautions prendre pour appliquer les politiques.

Mode opratoire :

Instructions dtaillant comment effectuer, tape

par tape, lexcution dune tche prcise associe une procdure.

Signification des termes :

Doit, devrait et peut dans ce document

Doit :

Dans ce document, ce mot signifie lobligation

de respecter ou dappliquer les exigences dcrites.
Dans ce document, ce mot signifie que des bases
scientifiques appuient la rgle dcrite et quil est
recommand de la respecter ou de lappliquer.
Dans ce document, ce mot signifie que lnonc
est considr valable, que son application est
souhaitable, mais quelle demeure la discrtion
du technologiste mdical.

Devrait :

Peut :

3.0

Mesures de scurit
Il est essentiel de dvelopper et de mettre en place un programme de prvention des
risques lis la sant et la scurit au laboratoire. Ce programme, tout en respectant
la rglementation en cours, devrait inclure32-61-66 :

Une procdure crite dtaillant les risques inhrents et les risques propres au laboratoire de ltablissement concern, la liste des quipements de protection individuel et collectif disponibles au laboratoire ainsi que la liste et les informations
spcifiques sur les produits chimiques dangereux utiliss;

Un programme de formation lembauche ainsi quun programme de formation

continue pour le personnel;

La mise en place dune documentation relative la sant-scurit et dun systme

dinformation servant enregistrer les incidents et les accidents ainsi que les mesures correctrices apportes.

Les mesures et les quipements de scurit mis en place serviront diminuer les risques lis la sant et la scurit des employs. Ils se jumellent aux mesures de prvention des infections, lesquelles visent protger le patient et le travailleur de la sant. Le technologiste mdical doit tre en mesure de dterminer les situations dans
lesquelles une collaboration ou de l'quipement de protection spcifique est ncessaire.

O.P.T.M.Q.

Mai 2001

Hmatologie

Lors de la manipulation dchantillons sanguins, de liquides biologiques et autres

chantillons, les Pratiques de base et prcautions additionnelles visant prvenir la
transmission des infections dans les tablissements de sant32 doivent tre suivies.
Les quipements de protection individuel et collectif appropris doivent tre disponibles (gants, sarraus, visires, contenants rglementaires pour llimination des dchets dangereux, enceinte de bioscurit, etc.) dans les lieux immdiats o ils doivent
tre utiliss, et ce, en fonction du risque tabli et observ.
Le lavage des mains demeure le moyen le plus efficace de prvenir la transmission
des infections nosocomiales.
Les lieux doivent tre propres et les surfaces de travail doivent tre nettoyes tous les
jours avec un dsinfectant ou avec un germicide reconnu. Lors de tout dversement
accidentel ou chaque fois quune contamination de surface est visible ou souponne,
la surface de travail doit tre dsinfecte selon une procdure tablie.
Le matriel souill doit tre dsinfect, strilis sil y a lieu, et ce, conformment aux
politiques de l'tablissement et la lgislation en vigueur33.
Il faut souligner quun programme de prvention comprenant des mesures de scurit efficaces et reconnues est bas sur la responsabilit partage tous les niveaux :
personnel de laboratoire, gestionnaire, employeur, comits de prvention des infections et de sant et scurit.

4.0

Ressources humaines
Lapport des ressources humaines est une valeur importante dans lapplication dun
programme dassurance de la qualit.
Tout nouvel employ doit bnficier dune priode initiale dorientation et de formation. Par la suite, le technologiste mdical aura droit une priode de formation
avant la mise en application dune nouvelle procdure dans son champ dactivit.
Les renseignements suivants devraient tre accessibles tout le personnel du laboratoire :
Une description crite de la structure organisationnelle du laboratoire;
Un nonc de la politique et des objectifs du programme dassurance de
la qualit;
Une description crite du champ de pratique du technologiste mdical.
Il est souhaitable que ces renseignements soient inclus dans le manuel des politiques
et des directives (voir la section 8.1).
Le technologiste mdical a le devoir de maintenir ses connaissances jour dans son
champ de pratique et devrait rgulirement participer des activits de formation
continue, telles que confrences, programmes ou sminaires de formation continue,
lectures scientifiques, congrs30-60.
Il saura dvelopper un sentiment d'appartenance l'quipe et une capacit de communication ncessaire la ralisation d'un travail de qualit.

O.P.T.M.Q.

Mai 2001

Hmatologie

5.0

Matriel didactique et de rfrence en hmatologie

Pour laccomplissement du travail quotidien, ainsi que pour lorientation et la formation continue, les technologistes doivent disposer de matriel rcent dont :

6.0

Des volumes de rfrences;

Des planches reprsentant les lments cellulaires anormaux : atlas hmatologique ou logiciel traitant de la morphologie cellulaire;

Une collection de lames pour lidentification de cellules.

Prlvement et acheminement des chantillons

Lobtention dun chantillon sanguin de qualit est la base de tout rsultat danalyse
fiable. Toutes procdures inadquates relatives la ponction, lidentification, la
manipulation et au transport des prlvements peuvent entraner lmission de rsultats errons.
Toutes les tapes du prlvement doivent tre ralises selon les rgles normatives de
lO.P.T.M.Q., Prlvement de sang par ponction veineuse pour fins danalyse3 et
Prlvement de sang par ponction capillaire pour fins danalyse4 .

6.1

Rpertoire des analyses

Le laboratoire doit avoir un rpertoire des analyses maintenu jour contenant les renseignements suivants : le nom de lanalyse, le tube utiliser, la
quantit dchantillons prlever, les formulaires de demande appropris
(lorsque utiliss), les restrictions alimentaires, les conditions appropries pour
le transport, les dlais respecter entre le prlvement et lanalyse, ainsi que
toute information et directives spciales relatives lanalyse ou au prlvement.
Le laboratoire doit fournir ces directives crites toute personne ou tablissement lui soumettant des spcimens pour analyse.

6.2

Anticoagulants pour chantillons hmatologiques

Les anticoagulants prviennent la coagulation du sang in vitro et sont utiliss
lorsque lanalyse est effectue sur le sang entier ou sur le plasma. Les anticoagulants les plus utiliss pour les chantillons destins aux analyses hmatologiques sont lEDTA, le citrate de sodium et lhparine.

O.P.T.M.Q.

Mai 2001

Hmatologie

6.2.1 EDTA
LEDTA (acide thylnediaminettractique) est lanticoagulant utilis pour les analyses courantes dhmatologie, parce quil assure la
conservation des lments figurs du sang2. LEDTA prvient la
coagulation du sang par son action de chlation sur le calcium.
Dans les tubes de prlvement sous vide, lEDTA se retrouve sous
deux formes principales : EDTA K2 (dipotassium EDTA dihydrate
ou sels dipotassiques) et EDTA K3 (tripotassium EDTA anhydre ou
sels tripotassiques).
LEDTA K2 est lanticoagulant de choix pour les analyses de routine
en hmatologie2. Selon lInternational Council for Standards in Hematology
(ICSH) les rsultats des hmatocrites obtenus avec lEDTA K2 sont
moins variables7. De plus, selon lICSH, ladoption dun seul anticoagulant permettrait une meilleure normalisation des techniques
hmatologiques1-6-7.
6.2.2 Citrate de sodium
Le tube bouchon noir contenant du citrate de sodium un volume
de 1 :4 ( 1 volume de citrate de sodium pour 4 volumes de sang) est
utilis en hmatologie pour lanalyse de la vitesse de sdimentation
des rythrocytes selon la mthode Westergren originale17. Son action
anticoagulante se situe au niveau des ions calcium quil neutralise en
formant un complexe citrate de calcium.
Le tube bouchon bleu, pour les analyses de coagulation, contenant
du citrate de sodium un volume 1 :9 (1 volume de citrate pour 9
volumes de sang) est utilis en hmatologie dans les cas de satellitisme plaquettaire et dans certains cas dagrgation plaquettaire2.
cause du facteur de dilution du sang par lanticoagulant, il faut alors
corriger le nombre de plaquettes obtenu en le multipliant par 1,1 ou
additionner 10 % la numration plaquettaire12.
6.2.3 Hparine
Lhparine est lanticoagulant de choix si lon veut viter une hmolyse des rythrocytes. Il sera utilis, par exemple, pour la recherche
de la fragilit osmotique1.
Il agit comme antithrombine en inhibant directement laction de la
thrombine sur le fibrinogne.
Il ne faut pas utiliser de sang hparin pour la prparation dun frottis sanguin. Lhparine occasionne des distorsions morphologiques
au niveau leucocytaire et plaquettaire17.

O.P.T.M.Q.

Mai 2001

Hmatologie

6.3

Ratio sang/anticoagulant
La qualit et la stabilit du spcimen dhmatologie sont directement relies
au respect du ratio adquat de sang/anticoagulant dans le tube de prlvement.
Idalement, le ratio sang/anticoagulant de lchantillon doit tre optimal. Cependant, pour les cas difficiles, il semble quune variation du ratio
sang/anticoagulant infrieure de 10 %29 20 %53 du volume optimal
noccasionne pas de diffrence significative dans le rsultat et soit considre
comme acceptable29.
Nous suggrons fortement lutilisation de tubes tmoins affichant le volume
minimal et maximal pour chaque format de tubes utiliss.
Pour un spcimen ne contenant pas un minimum de 80 % de son volume
optimal, une annotation cet effet devrait accompagner le rsultat.
Dans un tube o la quantit de sang est moindre, lexcs danticoagulant provoque des changements morphologiques dans les cellules sanguines2. Par
exemple, ce milieu hypertonique entranera une dshydratation des rythrocytes6 (fausse diminution de lhmatocrite et du VGM).
Pour assurer un mlange sang/anticoagulant adquat, les tubes doivent tre
mlangs par inversion de 5 10 fois aprs le prlvement.

6.4

Identification de lchantillon
Lidentification adquate de lchantillon est une tape pranalytique importante, les lments suivants doivent tre respects :

Chaque chantillon doit tre identifi individuellement;

Chaque chantillon doit porter une double identification, soit le nom et

prnom du client et un numro didentification personnalis.

Pour obtenir plus de dtails, consulter les rgles normatives sur les ponctions
veineuses et les ponctions capillaires de lO.P.T.M.Q. 3-4.

6.5

Transport et dlais de conservation

Les dlais de conservation des spcimens peuvent varier selon lanalyse, la
condition clinique du client, linstrumentation, les ractifs et les conditions
dans lesquelles les spcimens sont conservs ou transports2.
Pour assurer la qualit de cette tape pranalytique, le laboratoire devrait tablir pour chaque analyse hmatologique, des procdures crites relatives :

O.P.T.M.Q.

Aux dlais de conservation;

Aux conditions de transport appropries;

Aux conditions particulires de conservation quexige lanalyse.

6

Mai 2001

Hmatologie

Les exigences pranalytiques, dont les dlais de conservation spcifiques

certaines analyses hmatologiques, seront abordes dans les sections correspondantes de ce document.

6.6

Conditions pranalytiques relatives lanalyse de la formule sanguine complte

Pour les prlvements sanguins destins lanalyse de la formule sanguine
complte, la procdure doit permettre de maintenir lintgrit des lments
figurs du sang, soit les leucocytes (ou globules blancs), les rythrocytes (ou
globules rouges ou hmaties) et les plaquettes (ou thrombocytes).
6.6.1 Prlvements veineux pour la formule sanguine
Effectuer le prlvement et la collecte de lchantillon selon les procdures reconnues et lordre de prlvement prconis dans les rgles normatives Prlvement de sang par ponction veineuse pour
fins danalyse de lO.P.T.M.Q.
Mlanger le sang lanticoagulant en inversant le tube de 5
10 fois. Un mlange inadquat du compos sang/anticoagulant
pourra entraner lagrgation des plaquettes et une altration des
lments cellulaires.
6.6.1.1 Dlais de conservation des spcimens veineux avec
EDTA
Les rfrences et les tudes sur les dlais de conservation des
spcimens sentendent sur le fait que la dure de conservation
varie selon le paramtre hmatologique analys, le type de
clientle, le mode de conservation de lchantillon, la technologie de lanalyseur hmatologique2-6-29.
Afin dobtenir les conditions optimales de conservation pour
tous les paramtres de la formule sanguine complte (FSC),
les dlais de conservation suivants sont recommands.

O.P.T.M.Q.

Effectuer lanalyse complte de la formule sanguine dans

un dlai de 4 6 heures7 pour un spcimen veineux avec
EDTA conserv entre 18 et 24 C.

Stabiliser le plus rapidement possible les spcimens qui ne

peuvent tre analyss lintrieur du dlai optimal de 4 6
heures. La stabilisation consiste raliser 2 frottis sanguins par spcimen pour analyse manuelle de la formule
leucocytaire et conserver ensuite le spcimen une temprature de 4 C 5 . Prolonger le dlai de conservation audel de 24 heures nest pas recommand 7.

Mai 2001

Hmatologie

Le spcimen conserv 4 C doit tre ramen la temprature de la pice avant lanalyse.

En ce qui a trait aux chantillons prlevs avec EDTA et
conservs la temprature de la pice (entre 18 et 24 C),
des tudes ont dmontr une augmentation significative du
volume globulaire moyen (VGM)20et de lindice de distribution volumtrique des rythrocytes (IDVE) aprs 8 heures
de conservation8-9.
Note : Le laboratoire devrait confirmer par ses propres tudes la validit des dlais de conservation recommands par
le fabricant lorsque ceux-ci excdent les normes.
6.6.2 Prlvements capillaires pour la formule sanguine
Effectuer le prlvement et la collecte de lchantillon selon les procdures reconnues et lordre de prlvement prconis dans les rgles normatives Prlvement de sang par ponction capillaire pour
fins danalyse de lO.P.T.M.Q.
Note : Mlanger lchantillon en effectuant une dizaine de retournements. Un mlange inadquat du tube microprlvement pourra entraner lagrgation des plaquettes et une altration des lments cellulaires.
6.6.2.1 Dlais de conservation des spcimens capillaires
Le sang capillaire est un mlange de sang provenant
dartrioles, de veinules et de vaisseaux capillaires qui peut
contenir aussi du liquide interstitiel et intracellulaire4-17.
cause de sa composition, la dure de conservation dun spcimen capillaire avec EDTA peut varier compar un spcimen veineux.

7.0

Effectuer lanalyse complte de la formule sanguine dans

un dlai de 4 heures56 pour un spcimen capillaire avec
EDTA.

Rception et traitement des chantillons

Le technologiste mdical doit sassurer que lchantillon reu est conforme aux critres de qualit dtermins pour lexamen avant de procder lanalyse10-11.

7.1

Conformit du prlvement et critres de rejet

Un protocole dcrivant les conditions de rejet de spcimens doit tre tabli
par chaque laboratoire en collaboration troite avec le technologiste mdical

O.P.T.M.Q.

Mai 2001

Hmatologie

et le ou les hmatologues. Le protocole de rejet de spcimens doit tenir

compte des conditions suivantes :

Lidentification adquate du spcimen; la double identification doit tre

respecte3-4;

La manipulation, les conditions et le dlai de transport du spcimen;

Lintgrit de lchantillon lui-mme : hmolyse, respect du ratio

sang/anticoagulant, prsence de caillot dans un spcimen anticoagul.

Tous les partenaires soumettant des spcimens au laboratoire doivent connatre ce protocole et en avoir une copie.
Si un spcimen est jug non acceptable, un rapport crit, expliquant la raison
du rejet, doit tre remis au requrant.

7.2

Registre dchantillons
La rception dun chantillon au laboratoire sera note dans un registre, soit
sur papier, soit sur support informatique avant de procder lanalyse23.
Ce registre, qui peut prendre la forme du double de la demande danalyse,
doit contenir tous les renseignements permettant didentifier le client, le professionnel demandeur, la ou les analyses prescrites, lheure et la date du prlvement, lheure et la date de rception du spcimen30. Ce registre devrait
aussi mentionner la personne qui effectue le prlvement.
On doit prvoir un espace pour inscrire la raison du rejet de tout spcimen
dont ltat est jug non satisfaisant (voir la section 7.1), toute inscription portera
les initiales du technologiste mdical.

7.3

Envoi danalyses dautres laboratoires

Si les chantillons sont envoys un laboratoire sous-traitant pour analyse, le
laboratoire requrant doit conserver un rpertoire de tous les laboratoires
auxquels il fait appel25. De plus, le technologiste mdical doit consigner, dans
un registre, les renseignements suivants :

Nom de lanalyse;

Nom et prnom du client;

Numro didentification personnalis du client;

Date de lenvoi;

Date de rception et dacheminement du rsultat - le nom et ladresse du

laboratoire responsable de lexamen doit apparatre sur le compte rendu25.

Lempaquetage des envois doit respecter la rglementation en vigueur, les rgles normatives de lO.P.T.M.Q. sur le Transport et manipulation de proO.P.T.M.Q.

Mai 2001

Hmatologie

duits biologiques et de matires infectieuses ainsi que les recommandations

du ministre de la Sant et des Services sociaux, Manipulation et transport
des spcimens biologiques : Normes et recommandations, laboratoire de biologie mdicale 24.
Un protocole crit doit permettre dassurer le suivi des rsultats23.

8.0

Manuels de laboratoire
8.1

Manuel des politiques et des directives

Le manuel des politiques et des directives du service de biologie mdicale
contient linformation sur la structure organisationnelle, les procds, les procdures et les ressources ncessaires lapplication gnrale du programme
dassurance de la qualit au laboratoire.
Un mcanisme dinformation devrait faire en sorte que tous les membres du
personnel connaissent ces politiques et directives et se sentent concerns par
leur mise en application.
Ce manuel devrait contenir les renseignements dcrits ci-dessous.
8.1.1 Politiques et directives gnrales
Le service au client devrait se placer au centre des proccupations
des technologistes mdicaux et se relier aux directives tablies.
Linformation produite dcoule des rgles et politiques de
ltablissement et tient compte de chaque service du laboratoire, elle
devrait dcrire25 :

O.P.T.M.Q.

La structure organisationnelle du laboratoire, la mission,

lthique, la rglementation en vigueur, la hirarchie et les responsabilits de chaque niveau de personnel;

Le contrle des documents (mthode de diffusion, processus de

mise jour, dlais de conservation ainsi que denregistrement et
darchivage, etc.);

Les politiques et directives qui encadrent la formation initiale et

continue de tout le personnel;

Les politiques et directives qui encadrent la confidentialit des

renseignements (les communications par tlcopieur, les codes
daccs aux systmes informatiques, la signature lectronique,
etc.), les changes et communications avec le client (mode de
transmission, correction derreurs sur un rsultat transmis, etc.);

Les politiques entourant les mesures de scurit du laboratoire;

10

Mai 2001

Hmatologie

Les relations avec tout autre organisme avec lequel il est associ
(centre de prlvement, laboratoire danalyses spcialises, etc.);

Les plans dintervention pour les mesures durgence;

Et toutes autres politiques internes de gestion au laboratoire.

8.1.2 Procdures en cas de panne de courant

Dans le manuel des politiques et des directives, il est utile de prvoir
et de dcrire les procdures en cas de panne de courant, de dfectuosit mineure ou majeure des appareils de laboratoire. Ces procdures
devraient contenir les renseignements relatifs :

La prsence dun systme dalimentation lectrique durgence;

Lutilisation dun appareil de soutien;

Lenvoi dun spcimen un autre laboratoire;

La procdure crite de remise en marche.

8.1.3 Procdures en cas de panne informatique

Des procdures crites doivent dcrire le mode opratoire du fonctionnement manuel en cas de panne informatique. Ce mode opratoire doit couvrir toutes les tapes de lanalyse, de la rception du
spcimen lacheminement des rsultats.
De plus, les procdures de remise en marche et de lenregistrement
de toutes les donnes doivent tre documentes.

8.2

Manuel des techniques et des procdures

Le manuel des techniques et des procdures doit dfinir clairement le mode
opratoire spcifique de toutes les techniques en usage au laboratoire.
Ce manuel doit tre accessible tout le personnel et doit dcrire :
(adapt du NCCLS GP2-A3 21)

O.P.T.M.Q.

Le principe et lutilit clinique de lanalyse;

Les exigences spcifiques lchantillon (prparation du patient, dite

spciale, conditions de conservation et dentreposage, conditions de rejet,
procdures denvoi pour les analyses effectues dans un autre centre);

Le mode de prparation des chantillons en vue de lanalyse. Ce mode de

prparation doit tre dcrit tape par tape. Lorsquil sagit
dinstrumentation, les recommandations du fabricant doivent tre prises
en considration;

La solution de calibrage et les solutions de contrle utiliser;

Le mode de prparation et de conservation des ractifs utiliss;

11

Mai 2001

Hmatologie

Lappareil ou le matriel utiliser;

La description, tape par tape, de la technique;

Les calculs;

La frquence dutilisation des solutions de contrle, la limite de tolrance

de ces contrles ainsi que les mesures correctrices apporter en cas de
valeurs de contrle situes hors des limites tablies;

Les valeurs de rfrence;

Les valeurs critiques et les valeurs paniques ainsi que la procdure suivre dans ces cas;

La linarit;

Les limites de la mthode, les interfrences et autres prcautions particulires. Les interfrences possibles doivent tre dtermines et dcrites. Il
est important den valuer toutes les catgories - les interfrences relies
au prlvement, aux mdicaments et ltat clinique du client;

Linterprtation des rsultats;

Les rfrences;

Le processus de validation de la technique : rdaction, vrification et approbation;

La date de lentre en vigueur, la date de rvision, lidentit du rdacteur

et de la personne qui approuve la technique.

Linformation relative au mode de saisie et de transmission des rsultats, la

conduite suivre lors de pannes lectriques et informatiques et les mesures
correctrices sy rapportant sont documentes dans le manuel des politiques et
des directives. Cependant, une rfrence ce sujet doit tre mentionne dans
le manuel des techniques et des procdures.

8.3

Manuel des procdures dutilisation des appareils

Tous les instruments et appareils du laboratoire doivent tre accompagns
dun manuel des procdures dutilisation.
Ce manuel doit tre accessible en tout temps et contenir les renseignements
minimaux suivants21-25 :

O.P.T.M.Q.

La description du matriel ainsi que tous les renseignements relatifs au

fabricant (nom, numro de srie, personne contacter, etc.);

La date de rception et de mise en service;

Le calibrage;

Le mode opratoire;

12

Mai 2001

Hmatologie

Le calendrier des entretiens prventifs;

La description des diffrentes tapes de lentretien prventif ou correctif;

La frquence de vrification de lexactitude et de la prcision (calibrage,

solutions de contrle).

Note : Le manuel dutilisation du fabricant, do provient linformation dtaille sur lappareil, peut aussi servir de manuel des procdures dutilisation
sil contient tous les points numrs et si la langue utilise est comprhensible pour tous les technologistes mdicaux.

8.4

Manuel des procdures du systme informatique

Ce manuel doit dcrire les modes opratoires de toutes les tapes du processus informatique, de la saisie de la requte jusqu lacheminement et
larchivage du rsultat.
De plus, un rpertoire des diffrents codes informatiques ncessaires la saisie des donnes (analyses, noms de mdecin, etc.) doit tre disponible.

8.5

Rvision annuelle
Les manuels de laboratoire devraient tre rviss annuellement et toute modification paraphe et date21.

8.6

Registre des incidents et des mesures correctrices

Le registre des incidents sert dcrire objectivement les problmes qui peuvent survenir au laboratoire, en dterminer la cause et documenter les mesures correctrices apportes.
Linformation ainsi recueillie permet dvaluer les besoins, de remdier ponctuellement aux problmes et damliorer long terme la qualit du service offert.

8.7

Registre des actions poses et des changements

Lenregistrement et le suivi des donnes touchent toutes les oprations et actions poses au laboratoire.
Toute action, quelle soit prventive ou correctrice doit tre enregistre, date
et paraphe sur un support adquat (papier ou informatique).

O.P.T.M.Q.

13

Mai 2001

Hmatologie

9.0

Politiques gnrales du contrle de qualit

Le contrle de qualit sinsre dans le programme dassurance de la qualit et comprend la mise en place de mesures techniques et statistiques dans le but de rduire les
erreurs systmiques et alatoires dans les procdures analytiques de laboratoire tout
en visant latteinte de lobjectif zro erreur.
On peut dfinir la qualit dune analyse ou dun examen de laboratoire daprs sa fiabilit reprsenter ltat clinique du client. La qualit de la mesure analytique peut
tre, quant elle, dfinit selon son exactitude et sa prcision.

9.1

Application gnrale du contrle de qualit

Le contrle de qualit sapplique aux ractifs, aux produits,
linstrumentation et lquipement spcialis.
Le contrle de qualit devrait :

tre adapt chaque procdure analytique en tenant compte des conditions environnementales propres chaque milieu;

tablir des procdures documentes pour chaque processus analytique;

Documenter les sources derreurs pouvant tre relies une analyse de

laboratoire spcifique;

Permettre de dpister et didentifier une erreur analytique (erreur alatoire

ou erreur systmique);

Dvelopper et appliquer les critres dinterprtation et les seuils de tolrance qui dterminent lacceptation ou le rejet dune srie danalyses19;

Prvoir lenregistrement et larchivage des rsultats de contrle selon les

politiques en vigueur.

Note : Nous aborderons, de faon plus dtaille, certaines mesures de surveillance de la qualit propres chaque processus analytique dans les sections
qui suivent.

9.2

Analyses sans matriel commercial de contrle

Certaines analyses dhmatologie sont difficiles contrler, parce quil
nexiste pas prsentement de matriel commercial de contrle appropri ou
facilement accessible.
Dans cette catgorie danalyses, nous retrouvons, par exemple, les analyses
manuelles comme la formule leucocytaire, la numration des osinophiles et
la numration des lments cellulaires dun liquide biologique.
Pour ces analyses, lexactitude et la prcision sont assures par lapplication et
le suivi des procdures de standardisation, ltablissement de mode opratoire
dtaill des techniques ainsi que par la formation continue des technologistes
mdicaux17.

O.P.T.M.Q.

14

Mai 2001

Hmatologie

9.3

Contrle de qualit externe

Il est fortement recommand dadhrer un programme externe de contrle
de qualit.
Les chantillons, analyss comme des inconnus, proviennent dun organisme
extrieur au laboratoire. Les rsultats sont ensuite retourns cet organisme
qui compile les donnes et remet un rapport aux participants.
La participation un programme de contrle de qualit externe permet
dapprcier la prcision et lexactitude de la mthode danalyse, de dtecter
des erreurs systmiques et de comparer la performance du laboratoire, sur le
plan de lexactitude, avec celle des autres participants.

9.4

Politiques relatives la non conformit

Pour toute non-conformit du contrle de qualit interne ou externe, un protocole crit devrait :

Dcrire les tapes suivre pour dceler et corriger le problme;

tablir un processus dcisionnel quant au sort des rsultats viss (rejet total, reprise partielle ou totale, valid tel quel);

Permettre de dterminer si lerreur a un impact clinique sur le patient et

dcrire les mesures prendre.

10.0 Ractifs
Un rpertoire des ractifs utiliss doit tre disponible et doit inclure :

La description des produits qui doit rpondre aux exigences SIMDUT;

Les directives dentreposage du fabricant;

La prparation, la vrification et les conditions de conservation des ractifs;

Lenregistrement des dates de premption et du numro de lot des solutions

commerciales;

Les modalits de prparation des ractifs en laboratoire, lesquelles doivent faire

partie intgrante du manuel des techniques et des procdures de lanalyse;

Le mode didentification du contenant : date de prparation, date de premption,

concentration, ainsi que les initiales du technologiste mdical.

O.P.T.M.Q.

15

Mai 2001

Hmatologie

11.0 Instrumentation
Linstrumentation est une composante importante du processus analytique. Malgr la
performance accrue des fonctionnalits des appareils, le technologiste mdical doit
connatre le fonctionnement de linstrument et demeurer vigilant quant son utilisation.

11.1 Connaissances de linstrumentation

Au sujet de linstrumentation utilise, le technologiste mdical doit connatre :

Le principe;

La linarit;

Les interfrences;

Les mesures correctrices;

Le contrle de qualit applicable;

Les entretiens prventifs;

Les sources derreurs.

11.2 Manuel des procdures dutilisation des appareils

Tous les instruments et appareils du laboratoire doivent tre accompagns
dun manuel des procdures dutilisation. (Voir la section 8.3.)

11.3 Rfrigrateur, conglateur, bain-marie et tuve

Le technologiste mdical vrifie, enregistre, date et paraphe quotidiennement
la temprature de chaque appareil. Les donnes doivent tre conserves par
le laboratoire pour au moins deux ans.

11.4 Centrifugeuse et cytocentrifugeuse

La vitesse de centrifugation doit tre vrifie laide dun tachymtre. Le
technologiste mdical tablit un protocole de vrification de la vitesse de centrifugation en incluant un calendrier des oprations. Toutes les interventions
doivent tre dates et paraphes. Les registres doivent tre conservs au
moins deux ans.

11.5 Microscope
Un microscope ajust et entretenu de faon optimale est un lment essentiel
lexactitude de tout examen microscopique visant la numration et la reconnaissance dlments cellulaires qui mnent lidentification de processus
pathologiques.

O.P.T.M.Q.

16

Mai 2001

Hmatologie

Le technologiste mdical devrait avoir des connaissances de base des composantes et des principes du microscope17.
Le technologiste mdical devrait :

Dterminer la frquence de lentretien prventif du microscope;

Sassurer quune vrification annuelle est effectue par un spcialiste;

Enregistrer, dater et parapher les deux procdures prcdentes.

11.5.1 Ajustement de lclairage de Khler

Lajustement de lclairage de Khler assure un clairage total et uniforme du champ microscopique et donne une image claire et prcise
de lobjet observ 55.
La procdure dajustement de lclairage, selon la mthode de Khler, doit tre dcrite et devrait tre effectue par le technologiste
mdical avant lutilisation du microscope17. (Voir lannexe 7.)

11.6 Pipettes automatiques et diluteurs

Le technologiste mdical doit vrifier le calibrage de toute nouvelle pipette
automatique ou diluteur. Par la suite, il tablit un protocole de vrification du
calibrage incluant le calendrier des procdures dentretien. Il date et paraphe
toutes les interventions.

12.0 Contrle de qualit des analyseurs cellulaires

Lapplication du contrle de qualit des analyseurs cellulaires dhmatologie est particulire cette discipline, compte tenu de la complexit de la mthode et des facteurs
qui peuvent influencer et altrer les rsultats des diffrents paramtres de la formule
sanguine. Parmi ces facteurs, notons :

Plusieurs analyses partir dun mme ractif sur les mmes cellules;

Interrelation des diffrents paramtres;

Analyse simultane des diffrents paramtres;

Spcimen ltat frais;

Suspension cellulaire pour les contrles commerciaux et les solutions de calibrage

qui sont sensibles aux conditions de transport, de conservation et de manipulation.

La vigilance, lexpertise et le jugement du technologiste mdical se placent donc la

base de toute approche du contrle de qualit des analyseurs dhmatologie.
Bien que le contrle de qualit puisse tre plus labor, les outils fournis ici devraient,
tout le moins, faire partie du programme de surveillance de la qualit en hmatologie.
O.P.T.M.Q.

17

Mai 2001

Hmatologie

Les points qui suivent devraient faire partie intgrante du protocole de contrle de
qualit :

tablir et rdiger un protocole de contrle de qualit pour lanalyseur cellulaire

en incluant, au moins, les points abords dans ce chapitre. Ce protocole devrait
se retrouver dans le manuel de procdures dutilisation de lanalyseur (voir la section 8.3);

Respecter les rgles et procdures dfinies dans les politiques gnrales du

contrle de qualit (voir la section 9.0);

Adopter une procdure de calibrage reconnue;

Intgrer une mthode de surveillance pour dceler les erreurs systmatiques et

alatoires de chaque srie danalyses (ou aprs un nombre dchantillons dtermin par le laboratoire) et un suivi journalier, hebdomadaire et mensuel des rsultats de contrle de qualit;

tablir, par crit, une procdure de rsolution de problme en cas de

non-conformit du contrle de qualit.

12.1 Principes de mesure

Les principes de mesure des analyseurs cellulaires dhmatologie varient en
fonction de lappareil utilis et du paramtre analys. Le technologiste mdical doit connatre le ou les principes de mesure de lappareil utilis pour ainsi
pouvoir dtecter une erreur alatoire ou une interfrence.
Lhmogramme est compos de plusieurs paramtres, dont certains sont
compts, dautres mesurs et calculs1. Le technologiste mdical doit connatre la nature de ces paramtres afin dtre en mesure dinterprter et de valider les rsultats.

12.2 Calibrage
Le calibrage se dfinit comme une srie doprations qui tablit des valeurs
pour un ou des paramtres donns, afin que le rsultat reflte la valeur relle,
qui est elle mme dfinie selon une mthode de rfrence reconnue17-38.
12.2.1 Solutions de calibrage
Sur les analyseurs dhmatologie, le calibrage seffectue partir dune
solution de rfrence commerciale, spcifique au calibrage, dont les
valeurs sont prdtermines de faon trs prcise par le fabricant.
Les solutions de calibrage doivent tre utilises et conserves en suivant rigoureusement les recommandations du fabricant.
Le calibrage avec du sang frais, qui ncessite ltablissement des valeurs pour chaque paramtre laide dune mthode de rfrence reconnue, est rarement utilis aujourdhui dans les institutions mdicales17-38. Cependant, cest la mthode employe par les fabricants pour
dterminer les valeurs de leurs solutions de calibrage commerciales38.

O.P.T.M.Q.

18

Mai 2001

Hmatologie

12.2.2 Procdure de calibrage

La procdure de calibrage peut varier selon le type dappareil et doit
tre dtaille dans le manuel des procdures dutilisation qui lui est
propre.
Pour viter quun problme de lappareil ne cause un mauvais ajustement des valeurs lors du calibrage, il faut, avant dentamer la procdure de calibrage38 :

Effectuer la maintenance prventive;

Vrifier les principales variables lectroniques, physiques et analytiques.

Aprs le calibrage, une procdure crite doit dcrire le mode opratoire servant vrifier si lappareil est adquatement calibr 38.
12.2.2.1 Vrification du calibrage
Il peut savrer utile, dans certaines circonstances, de vrifier
le calibrage de lappareil. La vrification du calibrage
seffectue en analysant les solutions de calibrage de la mme
faon quun chantillon dun client16.
12.2.3 Frquences de calibrage
Le calibrage de lappareil seffectue38 :

Lors de linstallation initiale;

Une deux fois par anne aprs une vrification complte;

Aprs une rparation majeure;

Lorsque le fabricant recommande un calibrage ou une vrification du calibrage plus frquent16;

Lorsque les valeurs des solutions de contrle de qualit se situent

en dehors des limites acceptables ou refltent un biais analytique16. La cause du problme doit tre dtermine et corrige
avant de procder au recalibrage.

12.3 Utilisation des solutions commerciales de contrle

La fonction premire des solutions commerciales de contrle consiste surveiller quotidiennement, de faon continue et plus ou moins long terme, les
performances et le niveau de prcision et dexactitude dun appareil17.
Les solutions commerciales ont gnralement trois niveaux de concentration : bas, normal, lev.

O.P.T.M.Q.

19

Mai 2001

Hmatologie

12.3.1 Caractristiques
contrle

des

solutions

commerciales

de

Les solutions commerciales de contrle sont sensibles aux variations

subies durant le transport et aux conditions de conservation. En effet, les cellules en suspension sont sujettes la dtrioration tant
donn leurs proprits biologiques.
Le produit doit tre conserv dans les conditions prescrites par le fabricant et sa stabilit doit tre assure pour la priode dutilisation.
La fiole doit tre ramene la temprature de la pice et la solution
mlange de faon homogne avant lutilisation, selon les recommandations du fabricant.
Le mode dutilisation et de conservation des solutions commerciales
de contrle doit tre expliqu dans le manuel des procdures
dutilisation de lappareil, et ce, dans la section consacre au contrle
de la qualit.
12.3.2 Vrification dun nouveau lot de solutions de contrle
Pour sassurer du bon tat de la solution commerciale de contrle :

Vrifier le surnageant de la solution pour voir sil y a prsence

dune hmolyse anormale;

Vrifier, en parallle avec lancien lot, la concordance des rsultats;

Observer lhistogramme de la distribution cellulaire sur votre

analyseur afin de dterminer sil y a une distribution anormale
des courbes.

Le fabricant doit tre avis de tout cart inacceptable et un nouveau

lot sera command.
12.3.3 Validation des valeurs cibles du nouveau lot de solutions commerciales de contrle
Lors de lutilisation dun nouveau lot de solutions de contrle, celuici devrait tre analys paralllement avec le lot en cours pendant quatre jours38, et ce, jusqu lobtention de 8 10 valeurs pour chaque
niveau.

O.P.T.M.Q.

20

Mai 2001

Hmatologie

12.3.3.1 Valeurs cibles conformes aux valeurs attendues

Les valeurs obtenues doivent se situer lintrieur de deux
carts types (de prfrence prs des valeurs moyennes) des
valeurs cibles fournies par le fabricant17.
Bien que le fabricant fournisse des valeurs attendues aux solutions commerciales de contrle, les moyennes obtenues
sur place doivent tre compares celles tablies par le fabricant1. Selon les bonnes pratiques, le laboratoire devrait
tablir ses propres valeurs moyennes pour chacun des paramtres et ce pour chaque appareil38.
12.3.3.2 Valeurs cibles hors limites
Lorsquun ou des rsultats des solutions commerciales de
contrle sloignent sensiblement des valeurs obtenues prcdemment, la qualit de la solution elle-mme doit tre vrifie en premier lieu17. (Voir la section 12.3.2.)
Par la suite, sil savre que la solution de contrle est
conforme, une comparaison avec les rsultats des contrles
du lot prcdent, lanalyse des rsultats de lalgorithme de
Bull (voir lannexe 4) et des autres outils du contrle de qualit devraient permettre de dterminer la cause et dapporter
les mesures correctrices appropries.
La participation un contrle externe et la vrification de
lindice de dviation standard de ce contrle sont des outils
prcieux qui permettent dliminer ou de confirmer la prsence dun biais analytique.
12.3.4 Frquence dutilisation des solutions commerciales de
contrle
Les trois niveaux de solutions commerciales de contrle devraient
tre analyss simultanment au moins une fois toutes les 24 heures.
Ces solutions de contrle devraient tre analyses aprs avoir effectu les procdures reconnues de mise en marche de lappareil1.
Au moins deux niveaux de solutions commerciales de contrle devraient tre analyss chaque quart de travail17-31.
Le processus de vrification du bon tat des solutions commerciales
de contrle est continu. Les critres utiliss pour valider un nouveau
lot permettent de surveiller la qualit de la solution commerciale de
contrle en cours dutilisation.

O.P.T.M.Q.

21

Mai 2001

Hmatologie

12.3.5 valuation des rsultats des solutions commerciales de

contrle
La mthode de surveillance et le suivi des rsultats des solutions
commerciales de contrle devront permettre, lorsque les rsultats
sont hors limites, de distinguer une erreur alatoire, dune perte de
prcision ou dune perte dexactitude.
Un protocole crit (voir la section 8.3) doit dcrire les carts acceptables et les mesures correctrices observer lorsque ces carts ne sont
pas respects.
Le technologiste mdical devrait connatre les rsultats obtenus avec
les solutions commerciales de contrle, tre apte interprter les
graphiques (par exemple, Levey-Jennings) et intervenir. Sur ce
plan, les rgles de Westgard peuvent tre utiles pour interprter les
valeurs des contrles et tablir un processus dintervention.
Linterprtation des rsultats des solutions commerciales de contrle
doit permettre au technologiste mdical daccepter ou de rejeter un
rsultat, de reprendre une analyse ou une srie dessais.
En plus du suivi continu, une analyse hebdomadaire et mensuelle des
rsultats du contrle de la qualit doit tre effectue par la personne
qui en est responsable.

12.4 Contrle de reproductibilit journalier avec un chantillon

client
Un chantillon client ou un chantillon provenant dun volontaire devrait tre
analys plusieurs reprises sur une priode de 24 heures. Ce contrle permet
de vrifier la reproductibilit tout au long de la journe.
Cet chantillon devrait idalement tre spar en aliquote pour prserver
lintgrit du spcimen et viter les contaminations causes par un pipettage
rptitif (particules de bouchon).
Choisir un chantillon dont les valeurs se situent prs des valeurs normales et
ayant un volume adquat pour servir 24 heures17. Conserver cet chantillon
4 C et ramener la temprature ambiante avant lanalyse.
La formule leucocytaire automatise ne peut tre contrle de cette faon, car
les lments ne sont pas stables 24 heures.
Chaque laboratoire devrait dterminer la frquence des mesures multiples effectues sur lchantillon client servant de contrle.
Note : La frquence laquelle cet chantillon devrait tre analys dpend du
volume des analyses et du type de clientle particulire chaque laboratoire.
Plusieurs laboratoires mesurent ce contrle chaque 20 chantillons ou tou-

O.P.T.M.Q.

22

Mai 2001

Hmatologie

tes les deux heures. Cependant, il devrait tre analys lorsque lappareil a t
en arrt pendant plus dune heure.
12.4.1 valuation des rsultats
Les valeurs obtenues doivent tre enregistres.
Vrifier si les coefficients de variation des paramtres se situent dans
les limites de variabilit tablies par le laboratoire ou par le fabricant.

12.5 Contrle de qualit en utilisant les rsultats des clients

Le suivi des rsultats de clients peut tre une source importante de renseignements en ce qui a trait au contrle de qualit. Ces mthodes de suivi sont
bases sur ltude mathmatique et statistique de paramtres hmatologiques.
Ces mthodes de contrle peuvent tre intgres au systme informatique de
lappareil. Le technologiste mdical doit tre en mesure de comprendre et
dinterprter les rsultats de ces mthodes de contrle.
Les points qui suivent dcrivent deux de ces mthodes.
12.5.1 Algorithme de Bull ou moyenne flottante pondre
ou XB
Le calcul de la moyenne flottante pondre ou XB (tudes de Bull,
1974, et de Koepke, 1981) sappuie sur le principe que les moyennes
respectives des indices rythrocytaires VGM, TGMH et CGMH
sont une constante universelle. Les moyennes des indices sont stables dans le temps sur diffrents chantillons dun mme client.
La plupart des composantes informatiques des analyseurs
dhmatologie effectuent ce calcul statistique sur des sries de 20
spcimens analyss. La moyenne des derniers 20 spcimens est compare la valeur cible pour chacun des indices et, tous les 400
clients, les moyennes globales sont compares.
Le calcul de la moyenne flottante pondre XB de ces indices rythrocytaires permet de dceler38 :

Une erreur systmatique ou de mthodologie (ex. : ractif dtrior);

Labsence de biais analytique, donc lexactitude des rsultats;

Un mauvais fonctionnement de lappareil.

Lalgorithme de Bull analyse les donnes et prvient loprateur par

lentremise dun message derreur quand la moyenne des carts dpasse les limites acceptables de 3 %.

O.P.T.M.Q.

23

Mai 2001

Hmatologie

Lorsque deux sries conscutives de 20 clients sont en dehors des

limites pour deux paramtres, des mesures correctrices doivent tre
prises. (Voir lannexe 4.)
Le technologiste mdical doit :

Sassurer quun processus danalyse et dinterprtation des

moyennes XB soit dcrit dans la section portant sur le contrle
de la qualit du manuel des procdures dutilisation de lappareil;

Aviser la personne responsable du contrle de qualit lorsque les

rsultats sont hors des limites acceptables et apporter les correctifs selon la procdure tablie;

Documenter les mesures correctrices.

Note : Lorsque le technologiste mdical responsable envisage

dapporter des correctifs, il doit prendre en considration la population qui compose les 20 derniers spcimens; par exemple, une clientle pdiatrique ou en oncologie pourra dmontrer un cart la
moyenne sans que lappareil nait un problme.
12.5.2 Rgle de trois
Bien que les appareils automatiss, par lentremise des indices rythrocytaires, nous fournissent dj une bonne information, la rgle
de trois, 3 x Hb (g/dL) = Hct (%) 3 , offre un autre outil permettant de vrifier, par exemple, la prsence dagglutinines froides
ou de lactescence dans le spcimen38.
Le technologiste mdical utilise son exprience et son jugement pour
cerner le problme et apporter la mesure correctrice adquate, tout
en respectant les protocoles tablis.
Cette rgle sapplique seulement lorsque les rythrocytes sont normochromes et normocytaires17.

12.6 Dtection derreur alatoire laide du Delta Check

Les erreurs alatoires sont plus difficiles dtecter que les erreurs systmatiques, qui sont mises en vidence par les mesures du contrle de qualit. Une
erreur alatoire est une erreur unique qui se retrouve isole parmi dautres rsultats valides1. Le calcul du Delta Check , qui seffectue en comparant le rsultat actuel dun client donn avec son rsultat prcdent, est lun des
moyens les plus efficaces de dtection de ce type derreur17.
La mthode de contrle du Delta Check est le calcul informatis ou manuel
tablissant la diffrence entre le rsultat actuel dun paramtre pour un client
donn et son rsultat antrieur le plus rcent et, ensuite, la comparaison de
cette diffrence du rsultat avec les limites acceptables prtablies pour ce paramtre17.
O.P.T.M.Q.

24

Mai 2001

Hmatologie

Les erreurs dceles laide de cette mthode de calcul sont gnralement relies :

Une erreur didentification du spcimen;

Un prlvement de qualit douteuse;

Un problme technique isol.

Lorsque le technologiste mdical interprte le rsultat de la comparaison (delta check) et sa concordance avec les limites acceptables tablies il doit :

Prendre en considration les interventions subies par le client et le dlai

coul entre le prlvement des deux spcimens;

Contrler lanalyse;

Vrifier lidentit et la qualit du spcimen;

Contrler avec un nouveau spcimen si ncessaire.

Note : Si le rsultat demeure inchang, un commentaire devrait accompagner

ce rsultat.

12.7 Corrlation entre lappareil principal et lappareil de soutien

Une corrlation entre lappareil principal et lappareil de soutien doit tre effectue rgulirement dans un processus continu de contrle de qualit et
plus forte raison, lors de linstallation, dune rparation ou dun calibrage.
Toute intervention doit tre documente, date et paraphe.
Les variations de rsultats obtenus sur les deux appareils ne doivent pas tre
cliniquement significatives17. Les valeurs de rfrence devraient tre les mmes pour les deux appareils.
Le suivi du contrle de qualit et un contrle externe permettent de suivre les
tendances de chaque appareil et de vrifier la corrlation entre les deux systmes.
Note : Dans le cadre dun processus dvaluation pour lachat dun appareil,
une corrlation initiale avec lappareil dj en place devrait faire partie des critres de slection.

12.8 Politiques relatives aux interventions selon les signaux

dalarme et les messages derreur
Plusieurs analyseurs dhmatologie sont munis de deux systmes de critres
pour avertir loprateur dun problme potentiel. Un des systmes dalarme
est ajust par le fabricant alors que lautre, gnralement quantitatif, est dtermin par lutilisateur.

O.P.T.M.Q.

25

Mai 2001

Hmatologie

Chaque laboratoire doit :

Documenter et dcrire, dans le manuel dutilisation de lappareil, dans la

section portant sur le contrle de qualit, les diffrents signaux dalarme
et messages derreur mis par lanalyseur;

Dfinir, avec le mdecin spcialiste du service, les valeurs cliniquement

significatives des paramtres hmatologiques et tablir en consquence
les messages derreurs;

Dterminer les interventions ou mesures correctrices observer pour vrifier ou valider un rsultat signal par un code derreur avant dmettre le
rsultat final;

tablir un protocole qui, une fois le message derreur identifi, indique si,
selon le type de clientle (ex. : hmodialyse, oncologie), ltude dun frottis sanguin pour la validation des rsultats par le technologiste mdical ou
par lhmatologue est ncessaire.

Note : Pour vrifier tous les paramtres hmatologiques des analyseurs cellulaires, ltude des frottis sanguins priphriques demeure la technique de
choix28.

12.9 Sources possibles derreurs analytiques

Il existe de nombreuses sources derreurs analytiques, le technologiste mdical doit connatre les causes possibles de rsultats errons. Il est donc important de lire la documentation inhrente chaque appareil. (Voir lannexe 2.)

13.0 Frottis sanguin priphrique

Lexamen du frottis sanguin priphrique a pour but :

Destimer la numration des leucocytes, des rythrocytes et des plaquettes;

Didentifier et de quantifier en valeur relative (pourcentage ou dcimale) les diffrents types de leucocytes;

Dapprcier la morphologie des leucocytes, des rythrocytes et des plaquettes;

De valider les rsultats des indices rythrocytaires;

De valider le rsultat des analyses des rticulocytes et de la vitesse de sdimentation.

13.1 Identification du frottis sanguin

Le frottis sanguin doit, au moins, porter une double identification, cest
dire : nom et prnom du client et numro didentification personnalis. De
plus, la date devrait tre inscrite sur chaque frottis17.

O.P.T.M.Q.

26

Mai 2001

Hmatologie

13.2 Dlais pour confectionner un frottis

Idalement, pour un chantillon de sang avec EDTA, le frottis sanguin devrait tre confectionn dans lheure suivant le prlvement54. Cependant, un
frottis sanguin de qualit acceptable peut tre confectionn dans les dlais
suivants :

Pour un chantillon veineux avec EDTA, confectionner le frottis dans

un dlai de moins de 4 heures29. Ne pas rfrigrer le spcimen avant la
confection du frottis29.

Pour un chantillon capillaire, dans un tube microprlvement

contenant de lEDTA, confectionner le frottis moins de 4 heures aprs
le prlvement29-56.
Idalement, deux frottis sanguins devraient tre confectionns directement partir du site de ponction capillaire. Ceci limine toute distorsion
ou interfrence due lanticoagulant6.

Note : Si le dlai optimal entre le prlvement et lanalyse complte de la

formule sanguine ne peut tre respect, confectionner deux frottis sanguins le
plus rapidement possible aprs le prlvement. Chez les clients prsentant
des anomalies hmatologiques, les distorsions cellulaires du spcimen avec
EDTA peuvent apparatre plus rapidement.

13.3 Confection du frottis sanguin

La confection du frottis sanguin, qui consiste taler une goutte de sang sur
une lame de verre, peut tre effectue manuellement ou mcaniquement
laide dappareils automatiques et semi-automatiques.
Le frottis sanguin doit rpondre aux critres de qualit reconnus suivants :

tre mince, rgulier et uniforme;

Se terminer en pointe arrondie (pinceau) ou carre;

Comporter des marges;

tre sch compltement et rapidement lair avant la coloration afin

dviter la formation dartfacts et une altration de la morphologie des
rythrocytes1.

13.4 Coloration de base

La coloration du frottis sanguin doit permettre didentifier les lments cellulaires en mettant en vidence les caractristiques propres chacun.

O.P.T.M.Q.

27

Mai 2001

Hmatologie

13.4.1 Colorants
Les colorations au Wright, Wright-Giemsa et May-GrnwaldGiemsa sont les plus utilises au Qubec.
Pour les critres de qualit relis lidentification, la prparation,
la vrification et aux conditions de conservation des colorants, suivre
les modalits tablies prcdemment dans la section traitant des ractifs. (Voir la section 10.)
13.4.2 Technique et procdure
Le mode opratoire de la coloration doit tre dcrit dans le manuel
des techniques et des procdures. Sil sagit dune technique automatise, le manuel des procdures dutilisation de lappareil devra aussi
tre disponible. (Voir la section 8.0.)
13.4.3 Critres de qualit de la coloration
Une coloration adquate est garante dune bonne diffrenciation des
lments cellulaires et de lexactitude du rsultat.
La qualit de la coloration est value par la teinte des lments cellulaires observs au microscope. Une description des couleurs attendues de chacun des lments cellulaires devrait tre dcrite dans le
cahier des techniques et des procdures1-17.
Le technologiste mdical doit connatre :

Les critres de qualit dune bonne coloration;

Les causes derreurs relies cette coloration;

Lentretien prventif des outils utiliss pour la coloration.

13.5 Exactitude et uniformit de lexamen du frottis sanguin

Pour assurer lexactitude et luniformit de lexamen microscopique du frottis
sanguin, un ensemble dtapes doivent tre excutes.
13.5.1 Mthode dexamen du frottis sanguin
Le technologiste mdical doit connatre le protocole dexamen du
frottis sanguin. Cet examen comporte les tapes dcrites ci-dessous.
13.5.1.1 Examen macroscopique
Pour vrifier la qualit de ltalement du frottis et, sommairement, la qualit de la coloration.

O.P.T.M.Q.

28

Mai 2001

Hmatologie

13.5.1.2 Examen microscopique faible grossissement

Pour vrifier la coloration, la distribution des lments figurs du sang, la prsence ou labsence danmie, estimer la
numration leucocytaire ainsi que choisir la zone idale
pour effectuer la formule leucocytaire.
13.5.1.3 Examen microscopique fort grossissement
Pour effectuer la formule leucocytaire, lestimation plaquettaire et lvaluation morphologique des lments figurs du
sang.
13.5.2 Standardisation de lapprciation de la morphologie cellulaire
Lapprciation de la morphologie cellulaire (leucocytes, rythrocytes
et plaquettes) doit suivre un protocole de standardisation crit.
13.5.2.1 Lecture et identification
Ce protocole doit dtailler la mthode :
Dobservation du frottis pour vrifier la qualit de
ltalement et de la coloration ainsi que la distribution
des lments figurs du sang;
De recherche et didentification des anomalies leucocytaires;
Dtude de la morphologie des rythrocytes et des plaquettes.
13.5.2.2 Charte de nomenclature et de quantification
Ce protocole doit dtailler la nomenclature et le degr de
notation des anomalies morphologiques observables au microscope pour les leucocytes, les rythrocytes et les plaquettes.
13.5.3 Mthodes destimation des numrations globulaires
Malgr des appareils extrmement sophistiqus en hmatologie, il
nen demeure pas moins que les mthodes destimation au microscope restent les mthodes de choix pour valider les numrations de
leucocytes et de plaquettes obtenues laide de ces appareils.
Le laboratoire dhmatologie doit tablir un protocole dtaill des
mthodes destimation des numrations globulaires. Tous les technologistes mdicaux doivent connatre les lments de ce protocole
et tre en mesure de les appliquer.
O.P.T.M.Q.

29

Mai 2001

Hmatologie

13.5.4 Correction de la numration des leucocytes en prsence drythroblastes

La prsence dun seul rythroblaste sur un frottis sanguin est anormale et doit tre documente sur le rapport.
La numration des leucocytes doit tre corrige lorsquil y a plus de 5
rythroblastes pour 100 leucocytes1-17. Les rythroblastes devraient
tre compts et le rsultat exprim en nombre par 100 leucocytes.
Une procdure crite doit dcrire le calcul, la mthode de correction
de la numration des leucocytes selon le nombre drythroblastes
observs, ainsi que la faon dinscrire le rsultat corrig sur le rapport final.
Si cette procdure est automatise et intgre au systme informatique, une mention ce sujet doit tre crite dans le manuel des techniques et des procdures.
13.5.5 Correction des autres sources dinterfrences avec les
paramtres hmatologiques
En plus des rythroblastes qui peuvent interfrer au niveau des paramtres hmatologiques, le technologiste mdical doit connatre les
autres sources dinterfrences (agglutinines froides, lactescence, hyperleucocytose, etc.) et tre en mesure dapporter les correctifs ncessaires pour assurer la validit des rsultats. (Voir lannexe 2.)
Des procdures crites doivent dcrire chacune de ces sources
dinterfrences et les mesures correctrices qui sappliquent. (Voir la
section 8.2.)
Si la procdure est automatise et intgre au systme informatique,
une mention ce sujet doit tre crite dans le manuel des techniques
et des procdures.
13.5.6 Artfacts du frottis sanguin priphrique
Le technologiste mdical doit connatre les artfacts qui peuvent tre
observs durant lexamen des frottis sanguins au microscope.
Pour les chantillons prlevs avec EDTA et conservs la temprature de la pice (de 18 24 C), voici quelques exemples dartfacts :

O.P.T.M.Q.

Une lgre vacuolisation des monocytes une heure aprs le prlvement;

30

Mai 2001

Hmatologie

Une vacuolisation modre des monocytes et lgre des granulocytes neutrophiles aprs trois quatre heures de conservation3-7;

Une augmentation du pourcentage des granulocytes et une diminution du pourcentage des lymphocytes et des monocytes aprs
huit heures de conservation8;

Les rythrocytes peuvent avoir une apparence crnele aprs six

heures de conservation du spcimen17;

Les ponctuations basophiles et les corps de Dhle peuvent disparatre17;

Les rythrocytes peuvent prsenter une pseudohypochromie

lorsque le schage est trop lent.

13.5.7 Cellules clates

En tablissant la formule leucocytaire, le technologiste mdical devrait retrouver moins de 0,02 0,05 de leucocytes clats ou non
identifiables (sauf dans certains tats pathologiques comme la leucmie lymphode chronique)29.

Les leucocytes altrs et non identifiables ne devraient pas tre

compts dans la formule leucocytaire, mais devraient plutt tre
classifis comme tels et rapports dans la section des commentaires sur le rsultat final17-29.

Note : Pour rduire sensiblement la formation dombres de Gumprecht (smudge cells), ajouter 1 goutte dalbumine bovine 22 %
5 gouttes de sang et taler le frottis partir de ce mlange29.

13.6 Rdaction du rapport de la formule leucocytaire

Le technologiste mdical doit savoir exprimer ses rsultats dans un langage
clair et scientifique.
De plus, il est souhaitable dtablir une terminologie ou une nomenclature
uniforme pour la rdaction du rapport.
Lors de la transcription de donnes, le cas chant, il est important de porter
une attention particulire lexactitude des donnes reproduites.

13.7 Politiques denvoi des frottis sanguins lhmatologue

Lorsque les frottis sont anormaux, des critres et des politiques doivent tre
tablis, avec lhmatologue, pour dcrire les cas o le frottis doit lui tre
transmis pour interprtation ou confirmation du rsultat.

O.P.T.M.Q.

31

Mai 2001

Hmatologie

13.8 Recherche et identification des parasites sanguins

Dans les maladies parasites sanguins, telles que la malaria, la babsiose, la
trypanosomiase, la filariose, etc., la dtection et lidentification des parasites
intracellulaires et extracellulaires du sang sur le frottis sanguin demeurent
cruciales pour tablir le diagnostic et le suivi.
Comme on remarque une recrudescence des parasitoses sanguines, le technologiste mdical doit tre vigilant lors de lexamen des frottis et doit maintenir
ses connaissances jour dans ce domaine.
La malaria est une infection qui peut mettre la vie du client en danger et toute
demande de recherche de malaria devrait tre considre comme une demande
urgente et tre traite, peu importe le jour ou lheure34.
13.8.1 Considrations spcifiques la recherche de parasites
Les techniques de recherche de parasites doivent tre dcrites dans le
manuel des techniques et des procdures (voir la section 8.2). Les
considrations spcifiques ci-dessous doivent aussi tre dcrites dans
ce manuel.
13.8.1.1 Prlvement et dlais de conservation pour la recherche
de parasites
Pour assurer la qualit du prlvement, le technologiste mdical doit tenir compte des facteurs pranalytiques suivants :
La confection de frottis sanguin directement partir
dune ponction capillaire, demeure prfrable pour la recherche de parasites34;
Si un prlvement veineux doit tre utilis, le spcimen
devrait tre prlev avec EDTA. Les frottis doivent tre
confectionns le plus rapidement possible, soit moins
dune heure aprs le prlvement pour la recherche de
malaria59 et moins de deux heures aprs le prlvement
pour la recherche des autres parasites sanguins34.
Le parasite de la malaria tant plus fragile, la prsence
danticoagulant peut occasionner la distorsion des parasites et la diminution de leur nombre prsent sur le frottis59.
De faon gnrale, le sang prlev depuis plus dune
heure ne devrait pas tre utilis pour la recherche de malaria59.
La priode optimale pour effectuer le prlvement doit tenir compte du type de parasite recherch.

O.P.T.M.Q.

32

Mai 2001

Hmatologie

13.8.1.2 Prparation des frottis

Un nombre suffisant de lames devrait tre prpar en prvision de colorations supplmentaires ou de besoins particuliers :

Au moins 4 frottis devraient tre tals : 2 frottis gouttes minces et 2 frottis gouttes paisses34;

Pour des colorations cytochimiques, prvoir un plus

grand nombre de frottis;

Des techniques de concentration peuvent tre utilises

pour la dtection dlments peu nombreux : triple centrifugation, filtration, couche leucoplaquettaire (buffy
coat).

13.8.1.3 Colorations
La coloration des frottis au Giemsa-Gurr est recommande
pour la recherche de parasites34-37-59.
Les colorations hmatologiques de base, telles que WrightGiemsa et May-Grnwald-Giemsa, ne sont pas recommandes pour lidentification de parasites.
Bien que les parasites sanguins puissent parfois tre visibles
sur le frottis ainsi color, le pH de 6,8, utilis habituellement
lors de ces colorations, nest pas optimal pour la conservation des caractres morphologiques des parasites de la malaria60. Le maintien dun pH entre 7,0 et 7,2 pour le tampon
de la coloration est critique.
Note : Lidentification de lespce peut ncessiter un autre
type de coloration.
13.8.1.4 Examen microscopique
Pour la dtection et lidentification des parasites, lexamen
microscopique devrait :

tre effectu faible et fort grossissement;

Couvrir au moins 300 champs avec lobjectif immersion 100x sur une goutte mince34 et 100 champs sur une
goutte paisse.

Note : Le technologiste mdical doit connatre les artfacts

qui peuvent tre observs lors de la recherche de parasites : plaquettes, dbris et inclusions des rythrocytes ainsi
que contaminants du processus de coloration.

O.P.T.M.Q.

33

Mai 2001

Hmatologie

13.8.1.5 Taux de parasitmie

Une mthode de dtermination du taux de parasitmie doit
tre tablie par chaque centre. Cette mthode doit tre constante, parce quelle est trs importante pour le suivi du traitement du client.
13.8.2 Contrle de qualit pour les parasites
En plus dtablir des mthodes gnrales internes de contrle de
qualit (voir la section 9), le laboratoire devrait :

Confirmer le rsultat de la recherche de parasites par un autre

technologiste mdical ou par un hmatologue ou un microbiologiste;

Standardiser les mthodes de prparation des frottis59;

Adopter un programme de contrle du processus et du rsultat de

la coloration59. Lutilisation de lames tmoins positives colores en
mme temps que les lames clients est recommande59;

Standardiser, laide dun protocole crit, la lecture microscopique

des parasites et le taux de parasitmie;

tablir un protocole pour dclarer les maladies dclaration obligatoire;

Maintenir jour les comptences des technologistes mdicaux qui

effectuent cette analyse;

tablir un lien avec un centre de rfrence en maladies tropicales

pour confirmer un diagnostic ou pour obtenir des renseignements
techniques;

Participer un programme externe de contrle de qualit, tel que

celui du Laboratoire de sant publique du Qubec (L.S.P.Q.).

Note : Des cas de non-dtection de parasites sanguins par des mthodes automatises de formule leucocytaire ont t rapports34. Par consquent,
lutilisation de la formule leucocytaire automatise (analyseur dhmatologie),
sans observation du frottis sanguin, nest pas recommande lorsquil y a probabilit de maladie parasites sanguins34.

13.9 Participation un contrle externe de la qualit

Il est recommand de participer un contrle externe de la qualit. Au Qubec, le Laboratoire de sant publique du Qubec (L.S.P.Q.) offre un programme externe de contrle de qualit pour les frottis sanguins.

O.P.T.M.Q.

34

Mai 2001

Hmatologie

13.10 Dlai de conservation des frottis sanguins

Pour le dlai de conservation des frottis sanguins, tablir un calendrier de
conservation et respecter la rglementation en vigueur.

13.11 Formation continue

Lexamen du frottis sanguin priphrique ncessite jugement et comptence.
Une formation initiale adquate, ainsi quun processus de formation continue
pour tous les technologistes mdicaux uvrant dans ce domaine devraient
faire partie du programme dassurance de la qualit.

14.0 Rticulocytes
Les techniques de numration des rticulocytes avec des colorants vitaux seffectuent
de faon manuelle depuis longtemps. Aujourdhui, bien que ces dernires soient toujours utilises, elles sont de plus en plus remplaces par des techniques automatises,
telles que la cytomtrie en flux, ce qui augmente lexactitude et la reproductibilit des
rsultats, sans toutefois liminer les causes dinterfrence.
La numration des rticulocytes permet destimer lactivit rythropotique de la
moelle osseuse, de classifier lanmie et dvaluer lefficacit dun traitement1-14.

14.1 Dfinition du rticulocyte

LICSH (International Council for Standards in Hematology) a dtermin quune
cellule, pour tre classe rticulocyte, doit contenir un minimum de deux
particules granulofilamenteuses de couleur bleue, visibles au microscope6-13.

14.2 Prlvement requis

La numration des rticulocytes seffectue sur un spcimen de sang entier
prlev dans un tube avec lEDTA comme anticoagulant.

14.3 Dlais de conservation des chantillons pour la numration des rticulocytes

Il est recommand deffectuer la numration des rticulocytes le plus rapidement possible aprs le prlvement.

Pour un chantillon sanguin prlev avec EDTA et conserv entre

18 et 24 C, effectuer la numration des rticulocytes dans un dlai de
6 heures aprs le prlvement13.

Dans les cas o le dlai optimal danalyse ne peut tre respect, il est recommand de rfrigrer le spcimen.

O.P.T.M.Q.

35

Mai 2001

Hmatologie

Selon le NCCLS (National Committee for Clinical Laboratory Standards), un spcimen conserv entre 2 et 6 C, peut tre stable jusqu 72 heures13, en respectant toutefois les conditions suivantes :

Le spcimen ne doit montrer aucune hmolyse visible;

La numration des rythrocytes devrait tre stable, cest--dire avoir un

coefficient de variation infrieur 3 %13.

Le laboratoire devrait effectuer une tude de corrlation afin de valider ce dlai de conservation compte tenu de sa mthode danalyse.
Note : Une maturation in vitro des rticulocytes peut se produire. Le degr
de maturation est influenc par le facteur temps ainsi que par la temprature
ambiante. Aprs 24 heures la temprature de la pice, on peut perdre jusqu 20 % des rticulocytes13 (ce pourcentage peut varier selon la mthode de
numration utilise).

14.4 Mthode manuelle de numration des rticulocytes

La technique de rfrence pour la numration manuelle des rticulocytes est
la coloration au bleu de mthylne nouveau13. Le colorant est plus stable dun
lot un autre et les particules granulofilamenteuses apparaissent, au microscope, plus nettes et uniformes quavec les autres colorants vitaux1.
Les points qui suivent dcrivent les critres de qualit de la mthode manuelle.
14.4.1 Coloration
La mthode de coloration doit tre dcrite (voir la section 13.4 et la section 17.0). De plus, le technologiste mdical devrait tablir et utiliser
des procdures pour contrler la mthode de coloration :

La filtration adquate, afin dviter les prcipits de colorant sur

la lame;

La proportion optimale du ratio sang/colorant;

Le temps dincubation du mlange sang/colorant.

La qualit dun nouveau lot de colorant devrait tre vrifie avant

lutilisation. La comparaison de la coloration en parallle avec
lancien lot peut tre utilise dans ce but.
Pour lidentification, la prparation et les conditions de conservation
des ractifs de coloration, respecter les conditions dcrites prcdemment dans la section traitant des ractifs (voir la section 10.0).

O.P.T.M.Q.

36

Mai 2001

Hmatologie

14.4.2 talement du frottis

Lagitation adquate du mlange sang/colorant, avant ltalement du
frottis, est primordiale la qualit de la numration des rticulocytes.
En effet, la densit des rticulocytes est plus faible que celle des rythrocytes matures, ils se retrouvent donc la surface du mlange
aprs la priode dincubation17.
14.4.3 Examen microscopique
Pour lexamen microscopique de la numration des rticulocytes, les
points suivants doivent tre respects :

Choisir une rgion du frottis o les globules sont rapprochs les

uns des autres, sans se toucher ni se chevaucher (par exemple,
100 rythrocytes par champ);

Compter les rticulocytes et les rythrocytes sparment dans

chaque champ. Au moins 1000 rythrocytes doivent tre compts sur deux lames (minimum de 500 par lame). Cette tape peuttre effectue par deux technologistes mdicaux13-17;

Sassurer que les carts entre le pourcentage de rticulocytes obtenu sur chaque lame ne dpasse pas 20 %. Compter une troisime lame si lcart est suprieur 20 %1-17;

Vrifier la corrlation entre un taux lev de rticulocytes, le degr de polychromatophilie observ sur le frottis color et la coloration de routine utilise dans le laboratoire.

Note : Lutilisation dun disque de Miller pour la numration des rticulocytes semble augmenter la prcision, parce quil permet de
compter un nombre plus grand drythrocytes. Le disque de Miller se
place dans lun des oculaires du microscope. Sassurer de respecter
une utilisation conforme et standardise du disque de Miller (voir
lannexe 1).
14.4.3.1 Artfacts
Un schage inadquat du frottis peut entraner lapparition
dartfacts rfringents dans les rythrocytes. Il importe de
diffrencier ces artfacts des particules granulofilamenteuses
dARN du rticulocyte, qui elles, ne sont pas rfringentes.
14.4.3.2 Interfrences avec dautres inclusions cellulaires
Les colorants vitaux colorent aussi les corps de HowellJolly, de Heinz, de Pappenheimer et les inclusions
dhmoglobine H 6.
Les lments suivants peuvent contribuer diffrencier le
rticulocyte des autres inclusions cellulaires :
O.P.T.M.Q.

37

Mai 2001

Hmatologie

Les corps de Heinz sont colors par les colorants vitaux.

Ils se retrouvent la priphrie du globule rouge et sont
gnralement plus gros que les particules granulofilamenteuses dARN du rticulocyte17;

Les corps de Pappenheimer et de Howell-Jolly sont colors par les colorations de Romanowsky alors que les particules dARN du rticulocyte ne le sont pas. La prsence
de ces inclusions peut tre vrifie par lexamen du frottis
color au Wright-Giemsa ou au May-GrnwaldGiemsa1-17;

La contre-coloration au Wright-Giemsa ou au MayGrnwald-Giemsa fera disparatre les corps de Heinz et

les inclusions dhmoglobine H alors que les corps de
Howell-Jolly et de Pappenheimer demeureront prsents;

La prsence de corps de Pappenheimer devrait tre

confirme par une coloration du fer (Perls, Bleu de
Prusse)17, ces inclusions tant plus facilement confondues
avec les rticulocytes17.
Malgr tout, lorsque plusieurs inclusions diffrentes occupent le globule rouge, il est parfois difficile de les diffrencier et le technologiste mdical doit demeurer vigilant.

14.5 Mthodes automatises de numration des rticulocytes

Plusieurs mthodes automatises de numration des rticulocytes ont t introduites dans les annes 1990. Ces mthodes permettent daugmenter la prcision du dcompte des rticulocytes principalement parce que la numration
seffectue sur un plus grand nombre drythrocytes15.
14.5.1 Coloration
Pour les mthodes semi-automatises, cest--dire qui requirent une
prparation manuelle de lchantillon avant la numration automatise, le mode opratoire de la prparation de lchantillon doit tre
dcrit dans le manuel des techniques et des procdures.
Pour lidentification, la prparation et les conditions de conservation
des ractifs de coloration, respecter les conditions dcrites prcdemment dans la section traitant des ractifs (voir la section 10.0).
14.5.2 Contrle de qualit des appareils de mesure
Le protocole de contrle de qualit de lappareil de mesure doit tre
dcrit dans le manuel de procdures dutilisation de lappareil vis.

O.P.T.M.Q.

38

Mai 2001

Hmatologie

Ce protocole doit dtailler les procdures de vrification de la prcision et de lexactitude, et dcrire lentretien prventif de lappareil en
ce qui a trait la numration des rticulocytes (voir la section 9.0 et la
section 11.0).
Comme la fonction de numration des rticulocytes est de plus en
plus souvent intgre lanalyseur cellulaire dhmatologie, les procdures de contrle de qualit relatives cette fonction de
lanalyseur, devraient tre conformes aux politiques tablies prcdemment dans la section traitant du contrle de qualit des analyseurs cellulaires (voir la section 12.0).
14.5.3 Interfrences
Lexactitude de la numration des rticulocytes peut tre altre par
la prsence dlments qui interfrent diffrentes tapes du processus analytique.
Le tableau, lannexe 6, numre des sources connues ou potentielles dinterfrences. Le technologiste mdical devrait connatre les interfrences inhrentes sa mthode danalyse et faire appel son jugement et ses connaissances pour viter lobtention de rsultats
errons.
Note : Il est important de vrifier, sur un frottis color au WrightGiemsa ou au May-Grnwald-Giemsa, la prsence dlments qui
pourraient fausser les rsultats.

14.6 Valeurs de rfrence

Chaque laboratoire devrait dterminer ses propres valeurs de rfrence selon
la mthode danalyse utilise13.
Les valeurs de rfrence des rticulocytes sont gnralement exprimes en
valeur relative (pourcentage ou dcimale) ou en valeur absolue. Les valeurs de
rfrence peuvent varier selon la mthode de numration et le colorant utilis.
Un rsultat de rticulocytes exprim en valeur absolue est cliniquement plus
significatif15.
Une application innovatrice de la numration automatise des rticulocytes
semble tre la mesure de la maturation des rticulocytes. De rcentes tudes
appuient lutilisation du IRF, immature reticulocyte fraction 13-15, pour exprimer
le degr de maturation. Bien quil ny ait pas encore de consensus sur la faon
de rapporter cette mesure, son utilit clinique parat de plus en plus vidente13-15-48.

O.P.T.M.Q.

39

Mai 2001

Hmatologie

15.0 Vitesse de sdimentation des rythrocytes

La vitesse de sdimentation est une analyse qui mesure la vitesse de chute des rythrocytes en suspension dans le plasma.
Bien quil existe diffrentes mthodes de sdimentation, la mthode Westergren demeure la mthode de rfrence reconnue par lInternational Council for Standards in Hematology (ICSH)22.

15.1 Principe de la mthode

Le processus de sdimentation seffectue en trois tapes distinctes :
1. La phase dagrgation, est ltape de la formation des rouleaux. Cest une
tape o il y a normalement peu de sdimentation;
2. La phase de chute ou de dcantation, influence par le nombre et la qualit des rouleaux;
3. La phase finale ou dentassement des agrgats drythrocytes au fond du
tube.
Les tubes de sdimentation tant de diamtre calibr, le rsultat de lanalyse
quivaut la mesure de la hauteur de la colonne de plasma aprs un intervalle
dtermin.

15.2 Spcimen requis pour la vitesse de sdimentation

La vitesse de sdimentation des rythrocytes seffectue sur un spcimen de
sang entier, non hmolys 22-47, prlev dans un tube avec EDTA ou dans un
tube de citrate de sodium 3,8 % ( rapport de 1 volume danticoagulant pour
4 volumes de sang, bouchon noir ).
Le ratio sang/anticoagulant doit tre respect. Lorsque nous utilisons le systme jetable de sdimentation, o le tube de prlvement est aussi le tube de
sdimentation, le remplissage adquat est essentiel la qualit de lanalyse.
Il nest pas ncessaire que le patient soit jeun, la vitesse de sdimentation
nest pas modifie par la prise de nourriture36-49.
Il existe un systme jetable conu pour raliser la sdimentation par la mthode de Westergren, directement dans le tube de prlvement. Lutilisation
de ce tube avec citrate de sodium (rapport de 1 volume danticoagulant pour
4 volumes de sang) vite les manipulations techniques. Il faut cependant se
procurer le support sdimentation spcifique22.
Note : Ne pas utiliser un tube avec du citrate de sodium ou tube de coagulation (rapport de 1 volume danticoagulant pour 9 volumes de sang, bouchon
bleu) pour lanalyse de la vitesse de sdimentation parce quun changement
de concentration sang/anticoagulant introduit une variable analytique qui
peut influencer le rsultat22.

O.P.T.M.Q.

40

Mai 2001

Hmatologie

15.3 Dlais de conservation des chantillons pour la vitesse

de sdimentation
Le dlai entre le prlvement et lanalyse ainsi que la temprature de conservation de lchantillon sont des facteurs pranalytiques importants pour la
qualit du rsultat de lanalyse de la vitesse de sdimentation.

Pour un chantillon sanguin conserv entre 18 et 24 C, effectuer

lanalyse de la vitesse de sdimentation des rythrocytes dans un dlai de
4 heures17-22.

Pour un chantillon sanguin conserv 4 C, lanalyse de la vitesse de sdimentation des rythrocytes devrait tre effectue dans un dlai de
12 heures, condition de ramener lchantillon la temprature de la
pice et de bien le mlanger avant lanalyse17-22.

15.4 Contrle de la qualit

Le contrle de la qualit de lanalyse de la vitesse de sdimentation des rythrocytes, doit permettre dvaluer lexactitude et la prcision de la mthode
danalyse ainsi que de contrler les facteurs de variabilit qui peuvent influencer les rsultats.
Lutilisation de solutions commerciales de contrle est lun des lments du
contrle de la qualit analytique de la vitesse de sdimentation. Cependant, le
protocole doit aussi tablir une mthode de contrle des lments de variabilit inhrents cette analyse.
15.4.1 Contrle avec solutions commerciales
Il existe des solutions commerciales de contrle pour lanalyse de la
vitesse de sdimentation des rythrocytes qui permettent de vrifier
de faon continuelle lexactitude et la prcision de la mthode
danalyse, quelle soit manuelle ou automatise.
Le protocole doit tablir la frquence dutilisation des solutions
commerciales, le mode denregistrement des donnes, le suivi et
lanalyse des rsultats.
15.4.2 Contrle des lments de variabilit
De nombreux facteurs de variabilit peuvent influencer le rsultat de
la vitesse de sdimentation. Ces facteurs dinfluence devraient tre
documents. Les lments de variabilit qui suivent en font partie.
15.4.2.1 Facteurs relis lchantillon sanguin
Contrairement aux facteurs dinfluence internes, telles les
protines plasmatiques et la pathologie rythrocytaire, les

O.P.T.M.Q.

41

Mai 2001

Hmatologie

facteurs dinfluence externes relatifs lchantillon sanguin

peuvent tre plus facilement contrls.

La collecte de lchantillon : la prsence dun petit caillot ou dhmolyse dans lchantillon sanguin pourrait
invalider le rsultat de la vitesse de sdimentation22-47;

Lentreposage et la prparation : lchantillon de sang

doit tre la temprature de la pice (de 18 24 oC) et
mlang jusqu ce quil soit parfaitement homogne,
avant de procder la sdimentation;

Le nombre de retournements successifs ncessaire au

mlange complet de lchantillon devrait tre dtermin
et inscrit dans le protocole22.
Note : Pour un tube standard de 10 12 mm x 75 mm
contenant 5 mL de sang et comprenant une bulle dair
quivalente au moins 20 % du volume du tube, au
moins 12 retournements successifs complets devraient
tre effectus22. Des tubes plus troits peuvent ncessiter plus de 12 retournements successifs complets pour
que le mlange de lchantillon soit parfaitement homogne22.

15.4.2.2 Facteurs environnementaux

La sdimentation seffectue dans un tube calibr plac sur
un support vertical. Le technologiste mdical doit connatre
les rgles dutilisation pour une meilleure application du
contrle de la qualit. Le support sdimentation doit tre :

De niveau et maintenir les tubes dans une position parfaitement verticale;

labri de toute vibration;

Dans un endroit o la temprature est constante (de 18

24 oC), labri du soleil, des courants dair et loign
des quipements de chauffage ou de refroidissement22.

15.4.2.3 Facteurs techniques

La mthodologie lie aux facteurs techniques dexcution de
lanalyse peut aussi influer le rsultat et doit tre prise en
considration afin den assurer la qualit.

O.P.T.M.Q.

La colonne de sang doit tre exempte de bulles dair;

La lecture de la sdimentation doit se faire 1 minute

de lintervalle recommand 22;

Lorsque la zone de sparation entre le plasma et les rythrocytes est diffuse, le point de lecture se situe la plus
42

Mai 2001

Hmatologie

grande densit de globules rouges22. Une note doit accompagner ce rsultat sur le rapport final.
15.4.3 Validation de lexactitude des rsultats
Le technologiste mdical devrait vrifier la corrlation entre le rsultat de la sdimentation et27:

Le rsultat des paramtres de la formule sanguine et le rsultat

prcdent de la vitesse de sdimentation, sil est disponible;

Les renseignements cliniques du client, sils sont disponibles;

La prsence de substances interfrentes, si cette information est

disponible - la prise de certains mdicaments rduit la vitesse de
sdimentation (cinchophen, phenylbutazone, salicylate de sodium et thiosemicarbazone);

Le frottis sanguin priphrique lorsque le rsultat de la sdimentation semble discordant.

La forme et le nombre des rythrocytes ont une influence sur la vitesse de sdimentation22. Pour obtenir plus de dtails propos de
linfluence de la morphologie des rythrocytes sur la vitesse de sdimentation, consulter lannexe 3.
Note : La prsence danmie peut augmenter la vitesse de sdimentation et donc rendre lanalyse non concluante pour la dtection ou
le suivi de certaines maladies. Il nest pas suggr de corriger le rsultat de la sdimentation en prsence dune anmie17.
15.4.4 Validation de lexactitude dune nouvelle technique ou
dun changement dans lquipement
Pour valider lexactitude de la mthode de sdimentation utilise, soit
lors de la slection dune nouvelle technique ou lors dun changement dans le matriel utilis, le laboratoire devrait effectuer une
tude comparative avec la mthode Westergren de rfrence (voir la
section 15.0)22.

15.5 Valeurs de rfrence

Les valeurs de rfrence de la vitesse de sdimentation devraient tre tablies
localement par chaque laboratoire. Les valeurs de rfrence variant avec lge
des individus et leur sexe, il est ncessaire dtablir des valeurs pour les femmes, les hommes et les enfants.
Selon le NCCLS (National Committee for Clinical Laboratory Standards), il est
souhaitable dtablir des valeurs de rfrence pour les hommes et les femmes
pour chaque tranche de dix ans de la vie adulte22.

O.P.T.M.Q.

43

Mai 2001

Hmatologie

15.6 Signification clinique

Examen non spcifique au niveau diagnostic, la vitesse de sdimentation reflte nanmoins la prsence et le degr de gravit dun processus pathologique gnralement infectieux ou inflammatoire. Cette analyse sert diffrencier certaines maladies, suivre lvolution dun traitement ou dune maladie.
(Voir lannexe 3.)

16.0 Moelle osseuse

Une procdure crite et dtaille du mode de prlvement, du traitement et de
lanalyse des chantillons de moelle osseuse doit couvrir la technique daspiration de
moelle osseuse et la biopsie mdullaire.

16.1 Matriel ncessaire au prlvement de moelle

Une liste descriptive du matriel ncessaire la ponction de moelle et la
biopsie mdullaire doit tre disponible. Le technologiste mdical doit connatre le matriel utilis.

16.2 Traitement du prlvement au chevet du client

Le technologiste mdical prte assistance lhmatologue au cours de la
ponction de moelle osseuse ou de la biopsie mdullaire. Au pralable, il doit
recevoir une formation adquate quant la prparation et la manipulation
des chantillons de moelle osseuse prlevs.
En plus des tches techniques de prparation des chantillons, le technologiste mdical sera attentif aux besoins du client durant lintervention17.
Dans le cas o deux chantillons sont prlevs deux sites diffrents, le
mode didentification des lames et du spcimen doit permettre, sans quivoque, dassocier les frottis et les tissus respectifs.
16.2.1 Biopsie de moelle osseuse
Lchantillon de biopsie de moelle osseuse contient la fois du tissus
dos et de la moelle osseuse.
16.2.1.1 Confection des frottis - Empreintes
La confection de ce type de frottis partir de lchantillon
de biopsie de moelle osseuse seffectue immdiatement sous
forme dempreintes multiples sur une lame.
Au moins deux frottis devraient tre confectionns ainsi17.

O.P.T.M.Q.

44

Mai 2001

Hmatologie

16.2.1.2 Traitement de lchantillon de biopsie de moelle

Aprs la prise des empreintes, lchantillon de biopsie de
moelle osseuse est plac dans un contenant avec fixateur.
Le type de fixateur, la quantit utiliser ainsi que la procdure didentification du spcimen doivent tre documents
dans le manuel des techniques et des procdures.
16.2.2 Ponction de moelle osseuse
Lchantillon daspiration est une suspension de sang, de tissus graisseux et de cellules hmatopotiques.
La prsence de mgakaryocytes et la libration de thromboplastine
tissulaire acclrent le processus de coagulation du liquide
daspiration. La rapidit de traitement de lchantillon est donc un
facteur important de la qualit des examens qui en dcoulent17.
16.2.2.1 Traitement de lchantillon de ponction
laide dune seringue, lhmatologue prlve de 1 3 mL
de moelle osseuse.
Le traitement de lchantillon doit tre fait le plus rapidement possible cause de la coagulation rapide de laspiration
de moelle osseuse. La dextrit du technologiste mdical et
sa rapidit sont essentielles lobtention dtalement de frottis de qualit.
Parfois, une partie de lchantillon est immdiatement transfre dans un contenant avec anticoagulant (lEDTA est
prfrable parce quil conserve lintgrit cellulaire des lments). Le choix du contenant et la quantit danticoagulant
doivent tre documents.
16.2.2.2 talement direct du liquide daspiration
La confection des frottis de moelle osseuse partir de la seringue seffectue immdiatement aprs laspiration pour viter la coagulation de lchantillon.
Il existe diffrentes mthodes pour ltalement direct du liquide daspiration (lame poussoir, particules crases, lamelle sur lamelle, etc.). La ou les mthodes utilises devront
tre dcrites dans le manuel des techniques et des procdures.
Les frottis devraient tre schs le plus rapidement possible
pour viter la formation dartfacts17.

O.P.T.M.Q.

45

Mai 2001

Hmatologie

16.2.2.3 Confection de frottis prpars partir de particules

crases
La confection des frottis de moelle osseuse partir de particules crases (squash preperation) est, de prfrence, effectue
au chevet du client. Dans les autres cas, les frottis peuvent
tre raliss au laboratoire sur le spcimen anticoagul avec
EDTA.
16.2.2.4 Autres analyses
Pour les tudes de bactriologie, de cytogntique,
dimmunologie fonctionnelle et dimmunophnotypage, le
technologiste mdical doit connatre les tapes de prparation de lchantillon au chevet du client.
Les protocoles de conservation et denvoi des spcimens
pour les analyses effectues lextrieur doivent tre documents dans le manuel des techniques et des procdures.

16.3 Traitement du spcimen de moelle osseuse au laboratoire

Le spcimen de moelle osseuse devrait tre trait dans un intervalle dune
heure17 au laboratoire.
Les tapes ou les procds suivants doivent tre documents :

Confection de frottis prpars partir de particules crases;

Confection de frottis prpars partir de la couche leucoplaquettaire (buffy coat);
Prparations histologiques;
Coloration de routine adapte la moelle osseuse (voir la section 13.4);
Colorations cytochimiques (voir la section 17.0).

16.4 Mthode dexamen des frottis de moelle osseuse

Un protocole dexamen et de standardisation de lapprciation des lments
cellulaires est recommand (voir la section 13.5.2). Le technologiste mdical
doit connatre le protocole dexamen des frottis de moelle osseuse. Cet examen comporte les tapes dcrites ci-dessous52.
16.4.1 Examen macroscopique
Cette tape de lexamen permet dvaluer la qualit du prlvement
de moelle osseuse en observant macroscopiquement la prsence de
particules sur le frottis52.

O.P.T.M.Q.

46

Mai 2001

Hmatologie

16.4.2 Examen microscopique faible grossissement

Cette deuxime tape permet de :

valuer la richesse cellulaire de la moelle;

valuer la prsence et le nombre des mgacaryocytes;

Rechercher les cellules anormales ou caractristiques (ex. : ostoclastes, amas de cellules noplasiques, mastocytes etc.).

16.4.3 Examen microscopique limmersion

En dernier lieu, lexamen microscopique permet de :

Dterminer le pourcentage de chaque ligne cellulaire, au moins

500 cellules devraient tre comptes pour obtenir un rsultat reprsentatif52;

Dterminer le rapport mylode/rythrode (M/E);

Dcrire les anomalies cytologiques suggrant un trouble qualitatif.

16.5 Rapport prliminaire de lexamen de la moelle osseuse

La responsabilit du rapport final de lexamen de la moelle osseuse incombe
lhmatologue. Il est souhaitable dtablir une terminologie ou une nomenclature uniforme pour la rdaction du rapport prliminaire qui sera envoy
lhmatologue.
Ce rapport devrait contenir les lments suivants52:

O.P.T.M.Q.

Nom, prnom, numro didentification du client;

Nom du mdecin;
Date du prlvement;
Site de la ponction;
Facilit ou difficult de la ponction;
Description du mode de confection des frottis (talement direct, empreintes, etc.);
Apprciation de la richesse cellulaire de la moelle;
Pourcentage de chaque type cellulaire ;
Rapport mylode/rythrode (M/E);
Description de la maturation et des anomalies morphologiques;
Bilan des rserves de fer;
Rsultats de colorations cytochimiques, lorsquelles sont demandes.

47

Mai 2001

Hmatologie

17.0 Colorations cytochimiques

Les colorations cytochimiques seffectuent le plus souvent, soit sur un frottis sanguin
priphrique, soit sur un frottis de moelle osseuse, selon la technique et les lments
que lon cherche mettre en vidence.
Les colorations cytochimiques servent orienter ou confirmer un diagnostic spcifique et diffrentiel de maladies hmatologiques, telles les leucmies, les anmies, etc.

17.1 Considrations techniques

Les procdures et les modes opratoires de chacune des techniques de colorations cytochimiques devront tre dcrits dans le manuel des techniques et
des procdures. (Voir la section 8.2.)

17.2 Ractifs
La plupart des substrats de coloration sont sensibles aux variations du pH, de
la temprature et de la lumire. Un changement dans lun de ces facteurs peut
causer un rsultat faussement positif ou faussement ngatif17.
Certains ractifs de colorations cytochimiques sont cancrignes. Ces ractifs
doivent tre identifis et les prcautions inhrentes leur manipulation dcrites dans les procdures opratoires de la technique.
Pour lidentification, la prparation et les conditions de conservation des ractifs de coloration, respecter les conditions dcrites prcdemment dans la
section sur les ractifs. (Voir la section 10.0.)

17.3 Lames tmoins

Pour les colorations cytochimiques, le technologiste mdical doit respecter
les points suivants :

Inclure un tmoin positif et un tmoin ngatif dans chaque coloration cytochimique;

Conserver une collection de lames tmoins colores mettant en vidence

les lments recherchs lors de la coloration cytochimique. Ces lames
peuvent servir valuer la qualit de la coloration.

17.4 Interprtation et rsultats

Les ractions rsultant de la coloration seront dcrites dans le manuel des
techniques et des procdures. De plus, une chelle de gradation doit tre tablie, lorsque pertinente, afin de permettre une standardisation de
linterprtation des ractions. Cette tape fera partie de linterprtation du rsultat.
Le processus de standardisation couvrira aussi les rsultats attendus des
contrles tmoins positif et ngatif.
O.P.T.M.Q.

48

Mai 2001

Hmatologie

Un tableau qui dfinit la corrlation entre le rsultat de la coloration et ltat

clinique du patient devrait tre disponible au laboratoire.

18.0 Liquides biologiques

Lexamen des liquides biologiques : cphalorachidien, synovial, sreux (pleural, pritonal, pricardique), etc., pourrait lui seul faire lobjet de rgles normatives. Cette
section couvre de faon minimale lexamen hmatologique de ces liquides et les lments considrer pour en assurer la qualit.
Lexamen dun liquide biologique, indpendamment de son origine, permet de dtecter ou de faire le suivi dun tat infectieux, inflammatoire, hmorragique ou malin.

18.1 Prlvement
Les liquides biologiques sont des spcimens uniques, parfois difficiles obtenir. Il ne faut pas rejeter un liquide biologique coagul, mme si la numration cellulaire est inexacte, lexamen microscopique pourra fournir des renseignements trs utiles. Un commentaire ce propos doit accompagner le
rsultat44.
18.1.1 Liquide cphalorachidien (LCR)
Le LCR est prlev dans 3 4 tubes striles numrots de faon squentielle selon lordre de prlvement. Le troisime tube prlev est
utilis pour lexamen hmatologique, parce quil est moins susceptible dtre contamin par les lments cellulaires issus du traumatisme
de la ponction1-44.
Note : Les critres de distinction entre un LCR hmorragique caus
par une ponction traumatique et une hmorragie sousarachnodienne doivent tre dcrits dans le cahier des techniques et
des procdures.
18.1.2 Liquide synovial et liquide sreux
Pour lexamen hmatologique de ces liquides, lchantillon est prlev dans un tube contenant, de prfrence, lanticoagulant EDTA.

18.2 Identification de lchantillon

Lchantillon doit porter une double identification tel que dcrit prcdemment (voir la section 6.4). De plus, les renseignements sur le type de liquide,
lheure et la date du prlvement doivent se retrouver sur lchantillon et/ou
le formulaire.
Note : Avant de rejeter un liquide biologique, toutes les dmarches doivent
tre entreprises pour obtenir les renseignements pertinents manquants.

O.P.T.M.Q.

49

Mai 2001

Hmatologie

18.3 Dlais de conservation des chantillons de liquides biologiques

Idalement, les liquides biologiques devraient tre analyss le plus rapidement
possible afin de prserver lintgrit cellulaire maximale. Si un dlai est invitable, lchantillon doit tre conserv 4 0C.
18.3.1 Liquide cphalorachidien (LCR)

Effectuer lanalyse du LCR le plus rapidement possible, idalement, dans les instants qui suivent le prlvement. Ceci tant pour
lurgence du rsultat que pour la dtrioration rapide de la qualit
du spcimen. Si un dlai est invitable, lchantillon de LCR doit
tre conserv 4 0C 17.
Note : Aprs deux heures de conservation la temprature de la
pice, les leucocytes sabaissent de 40 %1 . Aprs deux heures de
conservation 4 0C, les leucocytes sabaissent de 15 %1.

18.3.2 Autres liquides

Lanalyse hmatologique des liquides biologiques devrait

seffectuer moins dune heure aprs le prlvement17. Le spcimen devrait tre rfrigr si lanalyse est retarde44.

18.4 Considrations techniques

Le laboratoire doit avoir une procdure et un mode opratoire dtaills (voir
la section 8.2) de chacune des tapes suivantes pour chaque type de liquide biologique.
18.4.1 Examen macroscopique du liquide
La description des diffrents aspects macroscopiques de chaque type
de liquide biologique doit tre documente et la nomenclature standardise.
18.4.2 Numration des lments cellulaires
La numration des lments cellulaires dun liquide biologique devrait se faire laide dun hmatimtre.
Le mode opratoire de la mthode de numration cellulaire doit prciser sil y a dilution ou non de lchantillon et prvoir un guide du
taux de dilution pour les liquides hypercellulaires44.
Note : Il nest pas conseill deffectuer la numration des lments
cellulaires sur des compteurs lectroniques, parce que des particules,
prsentes dans les liquides, peuvent tre comptes par lanalyseur et

O.P.T.M.Q.

50

Mai 2001

Hmatologie

fausser les rsultats. Toutefois, si cette mthode est utilise, lordre

de grandeur cellulaire doit tre valid lhmatimtre.
18.4.3 Confection des frottis
Le mode opratoire de la confection des frottis dun liquide biologique doit tre standardis de faon obtenir une couche unicellulaire
sur le frottis.
Un frottis dont la concentration cellulaire est trop leve nuit
l'identification des cellules.
Note : Une lame 5 gouttes peut servir de lame tmoin.
18.4.4 Ractifs
Pour lidentification, la prparation et les conditions de conservation
des ractifs, respecter les conditions dcrites prcdemment dans la
section traitant des ractifs. (Voir la section 10.0.)
Pour vrifier la qualit des ractifs, une lame tmoin sans spcimen
permet de distinguer entre une contamination du ractif et la prsence relle de bactries dans le liquide.
18.4.5 Examen microscopique du frottis
Un protocole de standardisation doit dtailler : la mthode
dobservation du frottis, lidentification et la quantification des lments cellulaires. (Voir la section 13.5.)
La morphologie des lments cellulaires des liquides biologiques
tant particulire, il est recommand davoir des lames de collection
pour lidentification et linterprtation de ces lments.
18.4.6 Rdaction du rapport
Il est souhaitable dtablir une terminologie uniforme pour la description des lments faisant partie du rapport ainsi que pour la nomenclature utiliser pour les mentionner.

18.5 Contrle de la qualit de lexamen des liquides biologiques

Plusieurs tapes de lexamen des liquides biologiques demandent jugement et
interprtation de la part du technologiste mdical. Un processus de formation
continue, en cours de pratique, des technologistes mdicaux est souhaitable.
Un protocole standardis de toutes les tapes de lanalyse des liquides biologiques, dcrites dans les considrations techniques prcdentes, doit uniformiser les manipulations et linterprtation de cet examen.
O.P.T.M.Q.

51

Mai 2001

Hmatologie

18.6 Signification clinique

Il est souhaitable quun tableau, disponible pour le personnel, reprsente les
liens entre laspect du liquide, les lments cellulaires observs et les principales significations cliniques qui y sont associes44.

19.0 Transmission des rsultats

Comptence et jugement vont de pair lorsquil sagit de veiller ce que le rsultat
analytique transmis reflte ltat clinique du client dont provient le spcimen et, de
plus, ce que ce rsultat soit communiqu dans un dlai et selon un mode de transmission appropri.

19.1 Vrification de la validit du rsultat

Avant dmettre un rsultat, le technologiste mdical devrait :

Vrifier si les rsultats du contrle de qualit respectent les carts tablis;

Valider un rsultat situ en dehors des valeurs de rfrence ou qui atteint
les valeurs critiques;
Vrifier, lorsque disponible, la corrlation entre le rsultat et les renseignements cliniques, le diagnostic et le traitement du client;
Sassurer, le cas chant, de la corrlation entre le rsultat et les autres
examens de laboratoire;
Valider un rsultat peu plausible et en rechercher la cause (erreurs pranalytiques : non-respect du volume anticoagulant/sang, hmolyse,
contamination par un solut, transport ou conservation inadquats, etc.).

Note : Le technologiste mdical doit dans tous ces cas faire le suivi appropri, selon les protocoles tablis, et ragir dans lintrt vritable du client.
Cela signifie, entre autres, que les demandes urgentes sont traites en priorit.
19.1.1 Validation automatique
Une validation semi-automatique requiert que le technologiste mdical vrifie et valide chaque rsultat avant de le transmettre. Dans un
processus de validation automatique, les rsultats normaux sont
valids de faon lectronique uniquement, cest--dire que, sils sont
lintrieur des paramtres prtablis, ils sont transmis sans autre intervention.
Un suivi continuel du contrle de qualit est essentiel lorsque la validation des rsultats normaux est uniquement lectronique. Des
tapes de scurit devraient tre incluses dans le protocole danalyse,
par exemple :

O.P.T.M.Q.

La validation dun mme chantillon ne peut tre effectue automatiquement au cours de la mme journe;
52

Mai 2001

Hmatologie

Le delta check du rsultat du client sera intgr au contrle de

la qualit lorsque le systme informatique le permettra.

19.2 Protocole des valeurs paniques

En plus des valeurs de rfrence, qui doivent tre tablies pour chacune des
analyses effectues, le laboratoire doit dfinir des valeurs paniques, qui indiquent une dtrioration ou un tat clinique dangereux pour la vie du client.
Une fois ces valeurs dtermines, un protocole dtaill des mesures prendre
doit tre tabli. Il doit tenir compte de la vrification de la validit du rsultat
et du mode de transmission du rapport la personne approprie.
Le processus doit permettre denregistrer, de dater et de parapher les dmarches effectues jusqu la transmission finale du rsultat au mdecin ou au
professionnel de la sant assurant le suivi mdical du client.

19.3 Mode de transmission des rsultats

Plusieurs lois et rglements rgissent la transmission des rsultats. Mentionnons ceux relatifs laccessibilit de linformation et la confidentialit des
renseignements. Pour cette raison, un protocole de transmission des rsultats
devrait tre tabli par le laboratoire.
Le technologiste mdical est un professionnel qui doit mettre en application
les protocoles en respectant son Code de dontologie60 ainsi que les lois et les
rglements rgissant sa profession.

19.4 Conservation des rsultats

Le technologiste mdical doit conserver les documents selon les politiques
tablies et les lois en vigueur. (Voir lannexe 5.)

19.5 Protocole de correction derreurs sur les rapports

Un protocole de correction derreurs sur les rapports doit tre suivi par le
technologiste mdical lorsquune erreur dans un rsultat transmis est constate. Ce protocole doit prvoir toutes les tapes ncessaires la correction finale au dossier du client.
Les erreurs ne doivent, en aucune faon, tre effaces ou caches. La correction doit tre clairement indique ct de lerreur (rature, mais encore lisible), puis date et paraphe. Si un nouveau rapport est rdig, une note doit
tre inscrite sur le premier rapport mentionnant la correction; cette note doit
tre date et paraphe25-50.

O.P.T.M.Q.

53

Mai 2001

Hmatologie

20.0 Gestion de linformation

20.1 Mcanisme dinformation du personnel
Un mcanisme formel dinformation doit tre mis en place afin que toute
mise jour de techniques ou de politiques soit diffuse au personnel concern.
Il est du devoir du technologiste mdical de sinformer et de lire les mises
jour.
Les diffrents manuels de laboratoire (voir la section 8.0) doivent tre facilement accessibles au personnel.

20.2 Systme informatique

Lorsque la collecte, lenregistrement et la conservation des donnes des examens seffectuent dans un systme informatique, le laboratoire devrait tablir
et mettre en place des procdures pour25 :

Assurer la formation adquate du personnel en ce qui a trait au systme

informatique;

Attribuer un code daccs unique chaque technologiste mdical;

Fournir un rpertoire crit des procdures et des codes informatiques ncessaires la saisie des donnes (voir la section 8.4);

Protger lintgrit de toutes les donnes enregistres;

Assurer lentretien adquat du matriel informatique.

20.3 Conservation des documents et des dossiers de laboratoire

Dans les laboratoires de biologie mdicale, un calendrier de conservation doit
dterminer les priodes de conservation des documents et des dossiers de laboratoire. Ce calendrier doit respecter les lois et rglements en vigueur.
Vous trouverez, lannexe 5, un relev des dlais de conservation recommands par diffrents organismes.

O.P.T.M.Q.

54

Mai 2001

Hmatologie

Annexe 1
Numration des rticulocytes
DISQUE DE MILLER
Le disque de Miller est un disque calibr que lon place dans lun des oculaires du microscope. Lutilisation du disque de Miller aide la numration des rticulocytes en diminuant la
surface de dcompte des rythrocytes1.
Le disque de Miller comprend deux carrs. Le carr B mesure 1/9 de la surface du carr A et
peut tre plac au centre ou dans un coin du carr A.
Dans une zone adquate du frottis, compter jusqu 500 rythrocytes dans le petit carr B et
les rticulocytes dans le grand carr A. Un rticulocyte du carr B est compt la fois
comme rticulocyte et comme globule rouge. En principe, tant donn que le carr B quivaut un neuvime du carr A, on retrouve le nombre de rticulocyte par rapport 4 500
rythrocytes. Le calcul suivant permet dexprimer les rticulocytes en pourcentage1-17:
Rticulocytes (%) =

Nombre de rticulocytes dans le carr A 100

Nombre drythrocytes dans le carr B 9

NOTE : Si un disque de Miller est utilis pour la numration microscopique des rticulocytes, la loi des deux cts doit tre respecte (ne pas compter un globule rouge
qui touche au ct infrieur ou au ct droit du carr B). Ceci entranerait un biais significatif entre la numration avec et sans disque de Miller13.

O.P.T.M.Q.

55

Mai 2001

Hmatologie

Annexe 2
Analyseurs cellulaires
Sources possibles derreurs analytiques
PARAMTRE ERREUR
ANALYTIQUE

MCANISME

Numration
des
rythrocytes

Autres cellules ou
particules
comptes

Pseudoaugmentation

Agrgats compts
comme cellule
unique
rythrocytes
microcytaires ou
lyss (ne sont pas
compts)
Pseudo-leucocytose Prcipitant anormal

Pseudo-diminution

Numration
des leucocytes

rythrocytes
non lyss
Anomalies
plaquettaires
Prsence
dinclusions intra
rythrocytaires
Carry over
Pseudo-leucopnie

Hmoglobine

Hmoglobine

O.P.T.M.Q.

Pseudoaugmentation

Pseudo-diminution

CAUSES POSSIBLES

Augmentation importante des leucocytes

Augmentation importante des plaquettes ou
plaquettes gantes
Cryofibrinogne
Cryoglobuline
Agglutinines froides
Agglutinations causes par lEDTA

VGM < 50 fL
Patients avec brlures graves
Hmolyse in vitro

Cryoprotinmie
Paraprotinmie
Filaments de fibrine

Hmoglobinopathies varies
Agglutinines froides
Plaquettes en amas ou gantes
Agrgation plaquettaire due lEDTA
Prsence drythroblastes
Parasites de la malaria

Leucocytose importante du spcimen

prcdant
Artfact d la conservation du spcimen
Leucmie
Urmie
Immunosuppression
Agrgats due lEDTA
Agrgats relis la prsence danticorps ou de
mucopolysaccharides
Agglutinines froides
Hyperlipidmie
Leucocytose importante
Hmoglobinopathie
Hyperbilirubinmie
Cryoglobulinmie
Paraprotinmie

Lyse des leucocytes

due une fragilit
augmente

Agrgats de leuco-
cytes compts

comme
une cellule

Turbidit

Interfrence 540
nm
Interfrence 540
nm

56

Carboxyhmoglobine
Sulfhmoglobine

Mai 2001

Hmatologie

PARAMTRE ERREUR
ANALYTIQUE
VGM

Pseudoaugmentation

Pseudo-diminution

Hmatocrite
technique
automatis

Pseudoaugmentation

Pseudo-diminution

CGMH

Pseudoaugmentation

Pseudo-diminution

Numration
plaquettaire

Pseudoaugmentation

Pseudo-diminution

MCANISME
Leucocytes sont
compts et
mesurs avec les
rythrocytes
Agrgats
rythrocytaires
Gonflement des
rythrocytes

CAUSES POSSIBLES

Augmentation importante des leucocytes

Agglutinines froides
Agglutinations relies lEDTA
Artfact de conservation
tats hyperosmolaires : hyperglycmie et
hypernatrmie
rythrocytes hypochromiques

Artfact reli

linstrumentation
Particules ou autres
cellules comptes

Augmentation

artificielle du VGM

Augmentation

artificielle des

rythrocytes

Diminution artifi-
cielle du VGM
Diminution artifi-
cielle des

rythrocytes

Hmoglobine
faussement leve
ou hmatocrite

faussement abaiss
Hmoglobine ou
VGM faussement
abaiss ou hmatocrite faussement
lev
Autres cellules ou
particules comptes comme

plaquettes

Anomalies

plaquettaires

Plaquettes gantes
Cryoglobulinmie
Cryofibrinognmie
Augmentation importante des leucocytes.
tat hyperosmolaire
Agglutination des rythrocytes
Cryoglobuline
Cryofibrinogne
Plaquettes gantes
tat hypoosmolaire
Hmolyse in vitro
rythrocytes microcytaires
Agglutinines froides
Agglutinines froides
tat hypoosmolaire
Hmolyse intravasculaire ou in vitro
Hyperlipidmie
tat hyperosmolaire

Inclusions cellulaires (corps de Howell-Jolly,

de Pappenheimer, malaria, etc.)
Fragments leucocytaires ou rythrocytaires
Extrme microcytose
Agrgation plaquettaire, satellitisme plaquettaire
Plaquettes gantes
Spcimen partiellement coagul

SOURCES : BAIN, Barbara J. Blood Cells Practical Guide, Second Edition, London (Great Britain), Blackwell Science, 1995.
BICK, Rodger L. et al.. Hematology, Clinical and Laboratory Practice,, Mosby, 1993.
BRIGDEN, Malcolm L., Bakul I. DALAL. Cell counter Related Abnormalities, Laboratory Medicine, volume 30,
no 5, 1999.
CORNBLEET, Joanne. Spurious Results from Automated Hematology Cell Counters, Laboratory Medicine,
volume 14, 509-514, 1983.
LEHMANN, Craig A. Saunders manuel of clinical laboratory science, Philadelphia, W.B.Saunders Company, 1998.

O.P.T.M.Q.

57

Mai 2001

Hmatologie

Annexe 3
Vitesse de sdimentation dans certains tats cliniques
TATS CLINIQUES

COMMENTAIRES

SDIMENTATION AUGMENTE
Processus inflammatoire

Associ laugmentation, dans le plasma,

de certaines protines, en particulier le fibrinogne et les globulines et .

Infections aigus et chroniques

Fivre rhumatismale
Infarctus du myocarde
Nphrose
Tuberculose
Mylome multiple
Macroglobulinmie de Waldenstrm
Endocardite infectieuse subaigu
Hpatite
Menstruation
Grossesse

Aprs le troisime mois de grossesse

SDIMENTATION NORMALE
Sphrocytes

Sil y a une quantit importante dans le

sang priphrique

Drpanocytes

Sil y a une quantit importante dans le

sang priphrique

Hmoglobinose C
Sphrocytose hrditaire
Polyglobulie
Extrait de : LOTSPEICH-STEININGER, Cheryl A. Clinical Hematology, Principles, Procedures, Correlations, Second Edition, Philadelphia, J.B.Lippincott Co., 1998

O.P.T.M.Q.

58

Mai 2001

Hmatologie

Annexe 4
ALGORITHME DE BULL OU MOYENNE FLOTTANTE PONDRE OU XB
B

Lalgorithme de Bull est une formule statistique base sur lutilisation des rsultats des patients qui, par le suivi des moyennes des indices rythrocytaires, permet de mettre en vidence des erreurs systmiques et de vrifier lexactitude des rsultats.
Cette formule statistique est base sur les faits suivants : sur une population de 100 patients,
le coefficient de variation de la moyenne des indices rythrocytaires est denviron 1 %, peu
importe la nationalit ou le sexe des patients. Ces indices demeurent stables durant la plupart
des maladies, mis part les cas danmies microcytaires ou macrocytaires. Les indices sont
insensibles aux erreurs de manipulation ou de dilution du spcimen (exemple : mlange ou
quantit sang/anticoagulant inadquate).
Gnralement calcules par le logiciel de lappareil, les moyennes sont vrifies chaque 20
patients. Ensuite, lorsque le calcul de la moyenne flottante pondre des indices des 20 derniers spcimens analyss se situe en dehors du 3 %, (excluant les clientles pdiatriques et
de loncologie) pour 2 sries conscutives et pour deux paramtres, des mesures doivent tre
adoptes pour dterminer le problme et apporter les mesures correctrices qui simposent.
Le tableau qui suit prsente quelques exemples de problmes rcurrents1-17-26.
Moyenne flottante pondre des indices Problmes possibles
rythrocytaires
(variations systmatiques)
CGMH augmente et TGMH augmente

Hmoglobine = variation la hausse

rythrocytes = variation la baisse

CGMH diminue et TGMH diminue

Hmoglobine =variation la baisse

rythrocytes = variation la hausse

VGM augment et CGMH diminue

VGM diminu et CGMH augment

Hmatocrite : variation la hausse

Hmatocrite : variation la baisse

VGM diminu et TGMH diminu

VGM augment et TGMH augment

rythrocytes : variation la hausse

rythrocytes : variation la baisse

La dmarche suivante peut permettre dvaluer le problme et dapporter les mesures correctrices appropries17 :

Vrifier la clientle des 20 derniers spcimens;

Vrifier le calibrage et la prcision de lappareil avec des solutions de contrle;
Procder une inspection visuelle de lappareil;
Apporter les correctifs ncessaires;
Reprendre lanalyse des chantillons viss par lalarme de la moyenne flottante pondre.

O.P.T.M.Q.

59

Mai 2001

Hmatologie

Annexe 5
RELEV DES DLAIS MINIMAUX DE CONSERVATION DES DOCUMENTS,
LAMES ET CHANTILLONS, TELS QUE RECOMMANDS PAR
DIFFRENTS ORGANISMES
Attention : Les dlais de conservation prvus aux colonnes OPTMQ et LPSP constituent la
rglementation en vigueur. Les rfrences des trois autres colonnes sont prsentes uniquement titre dinformation.
OPTMQ I LPSP II
C-26, r.175

CJMT III

CAP IV

SCMT V

P-35,r.1

CHANTILLONS
Srums

48 heures

Liquides biologiques, LCR

30 jours

chantillon avec EDTA

3 jours

chantillon avec citrate

1 journe

48 heures

LAMES
Frottis sanguins

7 jours

Frottis sanguins anormaux,

anomalies courantes
Frottis sanguins anormaux,
tels que dsigns par le
pathologiste
Lames de moelle osseuse

3 mois
20 ans
10 ans

10 ans

2 ans

2 ans

DOCUMENTS
Ordonnances et rapports
dexamen

5 ans

Rsultats danalyses

5 ans

Rsultats de moelle osseuse 5 ans

O.P.T.M.Q.

(anatomopathologie :
10 ans)

2 ans

3 ans

(non relis
des transfusions)

10 ans

60

Mai 2001

Hmatologie

OPTMQ I LPSP II
C-26, r.175

CJMT III

CAP IV

SCMT V

P-35,r.1

Dossiers contenant la signature, les initiales et le

code didentification du
personnel

10 ans

Feuilles de travail (pour

analyses diagnostiques
spcialises)

5 ans

10 ans

10 ans

Dossiers des contrles de

qualit

2 ans

5 ans

Dossiers de contrle de
qualit de lquipement

2 ans

Selon la
dure de vie
plus 1 an

(Banque de
sang)

DOCUMENTS ET DOSSIERS DASSURANCE QUALIT

Rvision des techniques

Dure de la
technique

Dossier dentretien de
lquipement

Dure de vie
2 ans
de
lquipement

Indfiniment

OPTMQ : Rglement sur la tenue des dossiers des technologistes mdicaux, R.R.Q.,c. C-26, r.175. *

II

LPSP : Rglement dapplication de la loi sur la protection de la sant publique, R.R.Q.,

c. P-35, r.1, art. 138. Note : Ce rglement ne sapplique pas aux laboratoires de biologie mdicale du secteur public.

III

CJMT : WOODWARD, John F. Service de laboratoire rgional de Fraser Valley.

Conservation des dossiers de laboratoire , Canadian Journal of Medical Technology,
volume 53 , 1991, p. 119-121.

IV

CAP : College of American Pathologists. (1998)

SCMT99 : Socit canadienne de mdecine transfusionnelle, 1999.

* Dans le Rglement sur la tenue des dossiers des technologistes mdicaux, le technologiste mdical qui
exerce dans le secteur public, et qui peut faire inscrire ou inscrire des donnes relatives au
client dans le dossier de ltablissement, nest pas tenu de se conformer aux dlais de
conservation de 5 ans. Il doit cependant respecter les dlais de conservation prvus au calendrier de conservation de ltablissement.

O.P.T.M.Q.

61

Mai 2001

Hmatologie

Annexe 6
LMENTS CONNUS OU POTENTIELS DINTERFRENCES DANS LA
NUMRATION AUTOMATISE DES RTICULOCYTES
Lexactitude de la numration des rticulocytes peut tre altre par la prsence
dlments qui interfrent un niveau du processus analytique de lanalyseur utilis.

lments

Inclusions

cellulaires

cellulaires

Divers

Agrgation plaquettaire

Corps de Howell-Jolly

Autofluorescence avec
porphyrie et certains
mdicaments

Ponctuations basophiles

Corps de Heinz

rythrocytes anormaux

Leucocytes et fragments
de leucocytes

Corps de Pappenheimer

Paraprotines

rythroblastes

Parasites
(malaria, babesia)

Agglutinines froides
Hmolyse

Ce tableau est tir du NCCLS H44-A, 1997. (Rfrence no 13 de ce document)

O.P.T.M.Q.

62

Mai 2001

Hmatologie

Annexe 7
Microscope
Ajustement de lclairage de Khler
Lajustement de Khler assure un clairage total et uniforme du champ microscopique55 et donne une image claire et prcise de lobjet observ.
tapes dajustement de lclairage de Khler17-55
1. Allumer le systme dclairage et rgler lintensit de la source lumineuse laide
du rhostat;
2. Mettre lobjectif 10 X, placer la lame sur la platine et ajuster limage en utilisant
les boutons de mise au point (mcanisme crmaillre et vis micromtrique);
3. Fermer le diaphragme iris du condensateur et monter le condensateur sa position maximale;
4. Fermer le diaphragme de champ;
5. Abaisser la hauteur du condensateur jusqu ce que limage soit bien contraste et
dtaille;
6. Effectuer la mise au point prcise de limage laide des boutons de mise au
point;
7. Dplacer le condensateur laide des vis de centrage du condensateur jusqu
lalignement de laxe optique et de lobjectif (si cela sapplique au modle de microscope);
8. Ouvrir le diaphragme de champ pour que le faisceau lumineux claire compltement le champ microscopique;
9. Enlever un oculaire, ajuster louverture du diaphragme du condensateur jusqu
ce que le faisceau lumineux claire approximativement 75 % du champ. Remettre
loculaire.
10. Vous avez effectu lajustement de lclairage de Khler. Par la suite, pour ajuster
lintensit de la lumire, utiliser seulement le bouton de rglage du transformateur.

O.P.T.M.Q.

63

Mai 2001

Hmatologie

BIBLIOGRAPHIE
1. LITALIEN, Roselyne, et Hlne LORD DUB. Hmatologie, deuxime dition,
Sainte-Foy (Qubec), Le Griffon dargile, 1998, 434 p.
2. NATIONAL COMMITTEE FOR CLINICAL LABORATORY STANDARDS.
Evacuated Tubes and Additives for Blood Specimen Collection, Fourth Edition, Approved
Standard, Pennsylvania, NCCLS, H1-A4, 1996, 34 p.
3. ORDRE PROFESSIONNEL DES TECHNOLOGISTES MDICAUX DU
QUBEC. Prlvement de sang par ponction veineuse pour fins de diagnostic : Rgles
normatives, cinquime dition, Montral, 1999, 39 p.
4. ORDRE PROFESSIONNEL DES TECHNOLOGISTES MDICAUX DU
QUBEC. Prlvement de sang par ponction capillaire pour fins danalyse : Rgles normatives,
deuxime dition, Montral, 1999, 34 p.
5. ORDRE PROFESSIONNEL DES TECHNOLOGISTES MDICAUX DU
QUBEC. Transport et manipulation de produits biologiques et de matires infectieuses :
Rgles normatives, Montral, 1997, 35 p.
6. BAIN, Barbara J. Blood Cells a Practical Guide, Second Edition, London (Great Britain),
Blackwell Science, 1995.
7. INTERNATIONAL COUNCIL FOR STANDARDIZATION IN HAEMATOLOGY. Recommendations of the International Council for Standardization in
Haematology for Ethylenediaminetetraacetic Acid Anticoagulation of Blood for
Blood Cell Counting and Sizing , American Journal of Clinical Pathology, vol. 100,
no 4, October 1993, p.371-372.
8. PHILLIPS, J. et al. Performance of K2EDTA vs K3EDTA collected blood specimens on various hematology analyzers , Laboratory Hematology 4 : 17-20, 1998.
9. BRUNSON, D. et al. Comparing hematology anticoagulants : K2EDTA vs.
K3EDTA , Laboratory Hematology 1 : 112-119, 1995.
10. ORDRE PROFESSIONNEL DES TECHNOLOGISTES MDICAUX DU
QUBEC. Normes de pratique du technologiste mdical, Montral, mars 1989, 12 p.
11. SOCIT CANADIENNE DE SCIENCE DE LABORATOIRE MDICAL. Normes
de pratique de la SCSLM., approuv, fvrier 1999.
12. BAER, Daniel M. Platelet clumps in EDTA samples : Tips from the clinical experts ,
Medical Laboratory Observer, Medical Economics at Montvale, NJ, vol. 31, no 8, August
1999, p.8.
13. NATIONAL COMMITTEE FOR CLINICAL LABORATORY STANDARDS. Methods for Reticulocyte Counting (Flow Cytometry and Supravital Dyes), Approved
Guideline, Pennsylvania, NCCLS, H44-A, 1997, 31 p.

O.P.T.M.Q.

64

Mai 2001

Hmatologie

14. FRIEDMAN, Ellen W. Reticulocyte counts : How to use them, what they mean , Diagnostic Medicine, July 1984, p. 29-33.
15. SAVAGE, Richard A. Clinical practice in reticulocyte testing, College of American
Pathologists, Summing Up, Spring 1996.
16. CEMBROWSKI, G. S., P.J. CORNBLEET. Calibration verification in hematology : whats
necessary and whats not, College of American Pathologists, Summing Up,
Spring 1996.
17. STIENE-MARTIN E., Anne, Cheryl A. LOTSPEICH-STEININGER et John A.
KOEPKE. Clinical Hematology, Principles, Procedures, Correlations, Second Edition,
Philadelphia, J.B.Lippincott Co., 1998, 817 p.
18. ORDRE PROFESSIONNEL DES TECHNOLOGISTES MDICAUX
QUBEC. Normes de pratique du technologiste mdical, Montral, 1989, 12 p.

DU

19. LALUMIRE, Gaston. Le contrle de qualit, cours de perfectionnement, OPTMQ,

novembre 1995.
20. BRIGDEN, Malcolm L. et I. Dalal BAKUL. Cell counter Related Abnormalities ,
Laboratory Medicine, vol. 30, no 5, May 1999, p. 325-334.
21. NATIONAL COMMITTEE FOR CLINICAL LABORATORY STANDARDS. Clinical Laboratory Technical Procedure Manuals, Third Edition, Approved Guideline,
Pennsylvania, NCCLS, GP2-A3, 1996, 92 p.
22. NATIONAL COMMITTEE FOR CLINICAL LABORATORY STANDARDS. Reference and Selected Procedure for the Erythrocoyte Sedimentation Rate (ESR) Test, Fourth Edition, Approved Standard, Pennsylvania, NCCLS, H2-A4, 2000, 20 p.
23. COLLEGE OF PHYSICIANS AND SURGEONS OF ALBERTA. Extended Laboratory
Standards and Guidelines; January, 1998.
24. MINISTRE DE LA SANT ET DES SERVICES SOCIAUX. Manipulation et transport
des spcimens biologiques : normes et recommandations, laboratoires de biologie mdicale,
Bibliothque nationale du Qubec, 1997, 183 p.
25. ISO, ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION. Management de la
qualit dans les laboratoires danalyses de biologie mdicale. Projet de norme internationale,
ISO/DIS 15189, Genve (Suisse), 1999.
26. BICK, Rodger L., M.D. Hmatology, Clinical and Laboratory Practice. Volume One, St. Louis,
Missouri, Mosby, 1993.
27. CONSTANTINO, Benie T, ART, SH. Erythrocyte Sedimentation Rate : What Technologists Need to Know , Canadian Journal of Medical Technology, vol. 56, no 3, 1994,
p. 161-169.
28. CONSTANTINO, Benie T. et al. White blood cell and platelet estimation methods ,
Canadian Journal of Medical Technology, vol. 56, 1994, p. 224-228.

O.P.T.M.Q.

65

Mai 2001

Hmatologie

29. NATIONAL COMMITTEE FOR CLINICAL LABORATORY STANDARDS. Reference Leukocyte Differential Count (Proportional) and Evaluation of Instrumental Methods,
Approved Standard, Pennsylvania, NCCLS, H20-A, 1992, 55 p.
30. OGRAM, Dawn M. Lapprciation de la qualit dans les services de laboratoire; AHQ, Association des hpitaux du Qubec., 1987, 123 p.
31. CHAPMAN, Margaret. Hematology Analyzers Offer New Technology and UserFriendliness ; Laboratory Medecine, vol. 31, no 3, March 2000, p. 146-150.
32. SANT CANADA, DIRECTION GNRALE DE LA PROTECTION DE LA
SANT. Pratiques de base et prcautions additionnelles visant prvenir la transmission des
infections dans les tablissements de sant; volume 25S4, 1999.
33. Rglement sur les dchets biomdicaux., R.R.Q., Q-2, r.3.001.
34. NATIONAL COMMITTEE FOR CLINICAL LABORATORY STANDARDS.
Laboratory Diagnosis of Blood-borne Parasitic Diseases, Approved Guideline,
Pennsylvania, NCCLS, M15-A, vol. 20, no. 12, 2000, 40 p.
35. AMERICAN ASSOCIATION OF BLOOD BANKS. Technical manual; Arlington
Virginia, 13th Edition, 1999, 798 p.
36. YOUNG, Donald S., M.D., Ph.D. Effects of Preanalytical Variables on Clinical Laboratory
Tests, American Association for Clinical Chemistry, Second Edition,
Washington DC, 1997.
37. SANT CANADA. Relev des maladies transmissibles au Canada. Babsiose
post-transfusionnelle en Ontario : premier cas signal au Canada, vol. 26-02,
15 janvier 2000.
38. NATIONAL COMMITTEE FOR CLINICAL LABORATORY STANDARDS.
Calibration and Quality Control of Automated Hematology Analyzers, Proposed
Guideline, Pennsylvania, NCCLS, H38-P, 1999, 32 p.
39. FELD, Ronald D., Marian SCHWABBAUER et John D. OLSON. The Clinical Laboratory
Improvement Act (CLIA) and the Physicians Office Laboratory : Interpretive Guidelines :
Laboratories, University of Iowa., 1992-1999.
40. BAER, Daniel M.. Patient records, What to save, how to save it, how long to save it ,
Mdical Laboratory Observer, Medical Economics at Montvale, NJ, vol. 25, no 2, February
1993, p. 22-27.
41. WOODWARD, John F. Conservation des dossiers de laboratoire : Service de laboratoire rgional de Fraser Valley . Canadian Journal of Medical Technology, vol. 53,
1991, p. 119-121.
42. Loi sur les archives, L.R.Q., c. A-21.1, article 7.
43. Rglement sur lorganisation et ladministration des tablissements, R.R.Q., S-5, r. 3.01, article 58.

O.P.T.M.Q.

66

Mai 2001

Hmatologie

44. DESCHNES-DION, Suzanne, T.M. Hpital du Sacr-Cur de Montral. Les liquides

biologiques. Examen hmatologique des liquides cphalorachidien, pleural, pritonal,
pricardique, synovial, novembre 1999.
45. NATIONAL COMMITTEE FOR CLINICAL LABORATORY STANDARDS.
Protection of Laboratory Workers from Instrument Biohazards and Infectious Disease
Transmitted by Blood, Body Fluids, and Tissue : Approved Guideline, Pennsylvania,
NCCLS, M29-A, 1997, 90 p.
46. NATIONAL COMMITTEE FOR CLINICAL LABORATORY STANDARDS.
Procedure for the determination of packed cell volume by the microhematocrit method,
Approved Standard, Pennsylvania, NCCLS, H7-A, 1985, 16 p.
47. SIMMONS, Arthur. Technical Hematology, Third Edition, Philadelphia (Toronto),
J.B. Lippincott Company, 1980, 574 p.
48. KOEPKE, John A. M.D. Update on Reticulocyte Counting , Laboratory Medecine,
vol. 30, no 5, May 1999, p. 339-343.
49. LORD, Andr D. B.Sc., et Guy LETELLIER Ph.D. Guide des preuves diagnostiques,
Dcarie diteur inc., 1993, 528 p.
50. FRCHETTE, Jean-Guy, docteur en droit. Vision juridique du dossier de sant ( problmes
quotidiens), LAssociation qubcoise des archivistes mdicales, Rock Forest, 1990,
467 p.
51. ARCHIVES NATIONALES DU QUBEC. Recueil de rgles de conservation des documents des
tablissements de sant et de services sociaux du Qubec, Association des hpitaux du
Qubec, Montral, 2000.
52. DESCHNES-DION, Suzanne, T.M. Hpital du Sacr-Cur de Montral. Examen de la
moelle osseuse, juin 1999.
53. WINTROBE, M.M. & al. Clinical Hematology, Lea & Febiger, Philadelphia, 1974.
54. MCCALL, Ruth E., et Cathy M. TANKERSLEY. Phlebotomy Essentials. Philadelphia, J.B.
Lippincott Company, 1993, 291 p.
55. LALIBERT, Alain. Techniques instrumentales en biologie mdicale, tome 1, Teknix, CEGEP de
Saint-Hyacinthe, 1987, 205 p.
56. BECTON DICKINSON. Vacutainer systems. Microtainer Brand Tubes (package
insert 2001) , Becton Dickinson and Company, Franklin Lakes, New Jersey.
57. NATIONAL COMMITTEE FOR CLINICAL LABORATORY STANDARDS.
Procedures and Devices for the Collection of Diagnostic Blood Specimens by Skin Puncture,
Fourth Edition, Approved Standard, Pennsylvania, NCCLS, H4-A4, 1999, 46 p.
58. LEHMANN, Craig A. Saunders manual of Clinical Laboratory Science, Pennsylvania,
W.B. Saunders Company, 1998.

O.P.T.M.Q.

67

Mai 2001

Hmatologie

59. LIBMAN, Michael et al. Un atelier sur la malaria, Centre des maladies tropicales de
lUniversit McGill en collaboration avec le L.S.P.Q., octobre 1999.
60. Code de dontologie des membres de lOrdre professionnel des technologistes mdicaux du Qubec,
R.R.Q., c C-26., r.168.3.
61. SHEMATEK, Gene, et Wayne WOOD. La scurit au laboratoire. Directives de la SCTL;
quatrime dition, Socit Canadienne des technologistes de laboratoire,
1996, 63 p.
62. CORNBLEET, Joanne. Spurious Results from Automated Hematology Cell
Counters , Laboratory Medicine, vol. 14, 1983, p. 509-514.
63. BROWN, Barbara A. Hematology : Principles and Procedures, Sixth Edition, Pennsylvania,
Lea & Febiger, 1993.
64. NATIONAL COMMITTEE FOR CLINICAL LABORATORY STANDARDS.
A Quality System Model for Health Care, Approved Guideline, Pennsylvania, NCCLS,
GP26-A, 1999, 70 p.
65. Rglement dapplication de la loi sur la protection de la sant publique, R.R.Q., c. P-35, r.1,
article 138.
66. RODAK, Bernadette
Company, 1995.

O.P.T.M.Q.

F.

Diagnostic

Hematology.

68

Pennsylvania,

W.B.Saunders

Mai 2001

COMMENTAIRES
Compte tenu de lvolution technologique, les rgles normatives font
lobjet de rvisions priodiques. Nous vous invitons nous faire part de
toute suggestion susceptible damliorer le contenu du prsent document.
DOCUMENT :

HMATOLOGIE,
Premire dition, 2001.

COMMENTAIRES :

SIGNATURE :___________________________________DATE :_________

NOM : _________________________________________________________
NUMRO DE MEMBRE DE LO.P.T.M.Q. : __________________________