DQO. DEMANDA QUMICA DE OXGENO.

MTODO TITULOMTRICO DE REFLUJO

CERRADO (17,20).
1. REACTIVOS
a) Solucin estndar de dicromato de potasio, 0.01667M, 0.1N, solucin de digestin:
disuelva 4.913 g de K2Cr2O7 previamente secado a 150C por 2 horas, en aproximadamente
500 mL de agua destilada. Agregue 150 mL de H2SO4 concentrado. Enfre a temperatura
ambiente. Aparte disuelva 33.3 g de HgSO4 en 167 mL de agua destilada y lentamente
agregue 17 mL de H2SO4 concentrado. Enfre a temperatura ambiente. Vierta esta solucin
en la solucin de dicromato. Diluya a 1000 mL.
b) Reactivo de cido sulfrico: agregue 10.12 g de Ag2SO4 a 1 L de H2SO4 concentrado. Deje
en reposo durante 1 a 2 das para disolver el Ag2SO4.
c) Solucin indicadora de ferrona: disuelva 1.485 g de 1,10-fenantrolina monohidratada y
695 mg de FeSO4.7H2O en agua destilada y diluya a 100 mL. Diluya este reactivo por un
factor de 5(1 + 4).
d) Solucin tituladora estndar de sulfato ferroso amoniacal, aproximadamente 0.1M, 0.1N:
disuelva 39.2 g de Fe(NH4)2(SO4)2.6H2O en agua destilada. Aada 20 mL de H2SO4
concentrado, enfre y diluya a 1000 mL. Estandarice diariamente la solucin utilizando
solucin estndar de digestin de K2Cr2O7.
Normalizacin: coloque 10 mL de agua destilada en un erlenmeyer. Agregue 6 mL de
solucin de digestin de K2Cr2O7 y 14 mL de reactivo de H2SO4. Enfre a temperatura
ambiente, agregue 1 o 2 gotas de solucin indicadora de ferrona y titule con solucin
tituladora de sulfato ferroso amoniacal.

e) Acido Sulfmico: se requiere slo para eliminar la interferencia causada por los nitritos.
Esta normalmente se ignora cuando la concentracin de nitritos es menor de 2 mg/L-N.
Agregue 10 mg de cido sulfmico por cada mg NO2-N presente en el volumen usado de
muestra.
g) Solucin estndar de biftalato de potasio: triture y seque a 110C, hasta peso constante,
biftalato de potasio, KHC8H4O4. Disuelva 425 mg en agua destilada y diluya a 1000 mL. Esta
solucin tiene una DQO terica de 500 mg O2/L, es estable hasta por 3 meses, si se
almacena refrigerada, en ausencia de crecimientos biolgicos visibles y sirve para verificar
la exactitud y precisin de su tcnica y procedimiento de laboratorio.

2. PROCEDIMIENTO
a) Lave los tubos de digestin y sus tapas, con H2SO4 al 20%, antes de usarlos por primera
vez, para prevenir contaminacin. Coloque 10 mL de muestra en un tubo de digestin de
25x150 mm y aada 6 mL de solucin de digestin.
b) Aada cuidadosamente 14 mL de reactivo de cido sulfrico dejndolo escurrir en el
recipiente de modo que se forme la capa cida por debajo de la capa muestra-solucin de
digestin. Enrosque hermticamente el tubo e invirtalo varias veces para mezclar
completamente. PRECAUCIN: Use gafas de seguridad y guantes para protegerse del calor
producido al mezclar el contenido del tubo. Mezcle concienzudamente para prevenir
calentamiento local de la base del tubo y una posible reaccin explosiva.
Cuando se usen tubos de digestin de dimensiones diferentes a 25x150 mm, ajuste las
cantidades de muestra y reactivos segn se indica en la tabla incluida al final del
procedimiento.
c) Coloque el tubo en un digestor cerrado o en un horno precalentado a 150C y deje en
reflujo durante 2 horas.
d) Enfre a temperatura ambiente y transfiera el contenido del tubo a un erlenmeyer para
su titulacin.
e) Aada 1 o 2 gotas de solucin indicadora de ferrona y agite rpidamente en un agitador
magntico mientras titula con solucin de sulfato ferroso amoniacal 0.1N. Tome como
punto final de la titulacin el cambio de color preciso de azul verdoso a rojo carmelitoso.
Ignore cualquier reaparicin del color azul verdoso.
f) En la misma forma descrita previamente, someta a reflujo y titulacin un testigo con 10
mL de agua destilada y los reactivos.
TABLA. CANTIDADES DE MUESTRA Y REACTIVOS PARA VARIOS RECIPIENTES DE DIGESTIN.
Recipiente de
digestin
Tubos 16x100 mm
Tubos 20x150 mm
Tubos 25x150 mm
Ampolletas 10 mL

Volumen de
muestra
2.5
5.0
10.0
2.5

Solucin de
digestin
1.5
3.0
6.0
1.5

Reactivo de
H2SO4
3.5
7.0
14.0
3.5

3. CLCULOS
Calcule la demanda qumica de oxgeno por la frmula siguiente:

Volumen
total
7.5
15.0
30.0
7.5

Donde:

A = mL de sulfato ferroso amoniacal usados para el testigo

B = mL de sulfato ferroso amoniacal usados para la muestra
M= molaridad del sulfato ferroso amoniacal.

DBO. DEMANDA BIOQUMICA DE OXGENO (14,18,20)

1. REACTIVOS
Prepare los reactivos con anticipacin pero descrtelos si hay algn signo de precipitacin
o crecimiento biolgico en las botellas. Los equivalentes comerciales de estos reactivos son
aceptables y se pueden utilizar diferentes concentraciones si se ajustan las dosis
proporcionalmente.
a) Solucin buffer de fosfato: disuelva 8.5 g de fosfato dihidrgeno de potasio, KH2PO4;
21.75 g de fosfato hidrgeno de potasio, K2HPO4; 33.4 g de fosfato hidrgeno disdico
heptahidrato, Na2HPO4.7H2O; y 1.7 g de cloruro de amonio, NH4Cl, en unos 500 mL de
agua destilada y diluya a 1 litro. El pH debe ser 7.2. Altenativamente, disuelva 42.5g de
KH2PO4 o 54.3 de K2HPO4 en unos 700 mL de agua destilada. Ajuste el pH a 7.2 con NaOH al
30% y diluya a 1 litro.
b) Solucin de sulfato de magnesio: disuelva 22.5 g de MgSO4.7H2O en agua destilada y
diluya a 1 litro.
c) Solucin de cloruro de calcio: disuelva 27.5 g de CaCl2 , o 36.42 g de CaCl2.2H2O en agua
destilada y diluya a 1 litro.
d) Solucin de cloruro frrico: disuelva 0.25 g de FeCl3.6H2O en agua destilada y diluya a 1
litro.
e) Solucin de H2SO4, 1N: agregue lentamente, agitando, 28 mL de cido sulfrico
concentrado a agua destilada. Diluya a 1 L
f) Solucin de NaOH, 1 N: disuelva 40 g de hidrxido de sodio en agua destilada. Diluya a 1L
g) Solucin de sulfito de sodio, 0.025N: disuelva 1.575 g de Na2SO3 en 1000 mL de agua
destilada. Esta solucin es inestable, preprela diariamente.
h) Inhibidor de nitrificacin: 2 cloro-6 (triclorometil) piridina.
i) Solucin de glucosa cido glutmico: seque glucosa y cido glutmico agregue 150 mg
de glucosa y 150 mg de cido glutmico a 103C durante 1 hora agua destilada y diluya a 1
litro. Prepare esta solucin inmediatamente antes de su uso.
j) Solucin de cloruro de amonio: disuelva 1.15g de NH4Cl en unos 500 mL de agua
destilada, ajuste el pH a 7.2 con solucin de NaOH y diluya a 1 litro. La solucin contiene 0.3
mgN/mL.
k) SIEMBRA: el propsito del sembrado es introducir en la muestra una poblacin biolgica
capaz de oxidar la materia orgnica del agua residual. Cuando existe en la muestra una
poblacin de microorganismos apropiada, como en aguas residuales domsticas sin
cloracin, la siembra es innecesaria y no debe usarse.
Cuando la muestra no contiene una poblacin biolgica adecuada, (por ejemplo, algunos
residuos industriales, aguas residuales desinfectadas o con alta temperatura o con pH
extremo) es necesario hacer siembra. La siembra preferida es efluente o licor mezclado de

un sistema de tratamiento biolgico que trate dicha agua residual. Cuando esto no es
posible, use el sobrenadante de agua residual domstica previamente sedimentada a
temperatura ambiente durante 1 a 36 horas. Cuando use efluente o licor mezclado de un
proceso de tratamiento biolgico se recomienda inhibir la nitrificacin.
Para muestras que contengan materiales no degradables a las tasas normales por los
microorganismos del agua residual domstica desarrolle una siembra adaptada en el
laboratorio mediante aireacin contnua de agua residual domstica a la cual se agrega
diariamente pequeos incrementos del residuo. Determine la existencia de una poblacin
satisfactoria mediante ensayos de DBO sobre la muestra sembrada. Si los valores de DBO
aumentan con el tiempo de adaptacin hasta un valor estable alto, indican adaptacin
adecuada de la siembra.
2. PROCEDIMIENTO
a) Preparacin del agua de dilucin: sature el agua destilada con O.D mediante aireacin
con un suministro de aire limpio proveniente de un compresor por ejemplo. Coloque el
volumen requerido de agua destilada en un recipiente apropiado y agregue 1 mL de cada
una de las soluciones buffer de fosfato, sulfato de magnesio, cloruro de calcio y cloruro
frrico(soluciones a-d) por litro de agua de dilucin.
b) Sembrado: si es necesario, agregue 3 a 5 mL de siembra por litro de agua de dilucin.
Alternativamente, agregue 1 a 2 mL de siembra directamente en las botellas.
c) Pretratamiento:
c.1 Muestras con alcalinidad custica (pH > 8.5) o acidez (pH < 6.0) se neutralizan a pH
6.5 a 7.5 con H2SO4 de NaOH de tal concentracin que la cantidad de reactivo no
diluya la muestra a ms de 0.5%. Las muestras cuyo pH ha sido ajustado siembre deben
ser sembradas.
c.2 Muestras con cloro residual: Si es posible evite las muestras con cloro residual
tomando las aguas arriba del proceso de cloracin. Si la muestra ha sido clorada pero no
existe un residual detectable, siembre el agua de dilucin. Determine la cantidad
apropiada de solucin de sulfito de sodio agregando a 100 mL de muestra 1 mL de H2SO4
(1 + 50) y 1 mL de solucin de KI (10 g de KI/100 mL) y titulando, con solucin de
sulfito de sodio, al punto final de yodo liberado usando almidn como indicador.
Agregue a la muestra para DBO la cantidad de solucin de sulfito de sodio determinada
por el ensayo anterior, mezcle y analice nuevamente el cloro residual despus de 10 a 20
minutos. Para el ensayo de DBO siembre el agua de dilucin.
c.3 Muestras con sustancias txicas requerirn estudio y tratamiento especiales.
c.4 Ajuste la temperatura de las muestras a 20 1C antes de hacer las diluciones
c.5 Algunas muestras, tales como efluentes tratados biolgicamente, muestras
sembradas con efluentes tratados biolgicamente y aguas de ro, requieren inhibicin de
la nitrificacin. En dichas muestras agregue 3 mg de 2 cloro 6 (tricloro metil)
piridina (TCMP) a cada botella de 300 mL antes de taparlas o agregar una cantidad
suficiente al agua de dilucin para obtener una concentracin final de 10 mg/L.

d) DILUCIONES: Prepare varias diluciones de muestra que puedan resultar con un residual
de O.D de por lo menos 1.0 mg/L y un abatimiento de O.D de por lo menos 2.0 mg/L
despus de 5 das de incubacin. Use las siguientes diluciones: 0.0 a 1.0% para residuos
industriales fuertes, 1 a 5% para aguas residuales crudas o sedimentadas, 5 a 25 % para
efluentes tratados biolgicamente y 25 a 100% para aguas de ros polvdos. Tambin puede
usarse la tabla gua incluida a continuacin.
TABLA GUIA PARA ANLISIS DE DBO
DBO medible mg/L
mL de muestra en botellas de 300 mL
30000 105000
0,02*
12000 42000
0,05*
6000 21000
0,1*
3000 105000
0,2*
1200 42000
0,5*
600 2100
1,0
300 1050
2,0
120 420
5,0
60 210
10,0
30 105
20,0
12 21
50,0
6 12
100,0
0-7
300,0
*Para colocar cantidades menores de 1.0 mL, es necesario
dilur previamente.
Agregue cada botella de DBO la cantidad escogida de muestra usando una pipeta
volumtrica de punta ancha.
Agregue la cantidad apropiada de siembra (si no se agreg al agua de dilucin), llene la
botella con agua de dilucin y coloque el tapn si dejar burbujas al aire.
Prepare 2 botellas de DBO por cada dilucin. Determine el OD inicial en 1 de ellas e incube
la otra durante 5 das a 20C.
e) CHEQUEO DEL AGUA DE DILUCIN: Prepare adems, por lo menos, 2 testigos con agua
de dilucin sin siembra para control del agua de dilucin. Determine el O.D inicial de uno
de ellos e incube el otro durante 5 das a 20C. El abatimiento del OD de los testigos debe
ser menor de 0.2 mg/L.
f) INCUBACIN: incube un testigo con agua de dilucin, una botella de cada muestra diluida
y una botella de control de la siembra durante das a 20C 1 en oscuro. Mantenga un sello
de agua alrededor del tapn de las botellas.
g) Determine el O.D. final del testigo, las diluciones y el control de siembra.
h) CONTROL DE LA SIEMBRA: cuando se siembra el agua de dilucin, prepare una serie
separada de diluciones de la siembra para determinar su DBO. Determine el OD inicial de
cada dilucin de siembra y el OD final de cada dilucin de siembra despus de 5 das de
incubacin a 20oC. Para determinar la DBO real de la muestra debe restarse la DBO de la
siembra. El consumo de OD del agua de dilucin sembrada debe estar entre 0.6 y 1.0 mg/L
(14).

3. CLCULOS
Para cada dilucin cuyo abatimiento de OD sea mayor o igual a 2.0 mg/L y cuyo OD final
sea mayor o igual a 1.0 mg/L calcule la DBO5 asi:
3.1 Cuando se usa agua de dilucin sin siembra:
(

3.2 Cuando se usa agua de dilucin con siembra:

(

Donde:
D1 = OD de la muestra diluida, inmediatamente despus de preparada, mg/L
D2 = OD de la muestra diluida, despus de 5 das de incubacin a 200C, mg/L
B1 = OD de la siembra diluida antes de la incubacin, es decir, OD del control de
siembra antes de la incubacin, mg/L
B2 = OD de la siembra diluida despus de 5 das de incubacin a 200C, es decir, OD del
control de siembra despus de 5 das de incubacin a 20C, mg/L
f = relacin entre la siembra en la muestra diluida y la siembra en el control de
siembra.
f

p=

% siembra en la muestra diluida

% siembra en la siembra diluida

mL de siembra en la muestra diluida en D1

mL de siembra en elcontrol siembra en B1

fraccin volumtrica decimal de muestra usada

Informe los resultados como DBO5C si se inhibi la nitrificacin.

4. EJEMPLO DE CLCULO DE LA DBO CUANDO SE HACE SIEMBRA DIRECTA SOBRE LAS

BOTELLAS DE DBO
DATOS:
Botella
Volumen de muestra, mL
Volumen de siembra, mL
OD inicial, mg/L
OD final, mg/L

Testigo
0
0
8.0
8.0

Muestra
10
1
8.0(D1)
1.5(D2)

Control de siembra
0
3
8.0(B1)
5.9(B2)

CLCULOS
DBO

OD inicial OD final correccin

por siembra 300

mL de muestra

(
[(

)]

POR LA FRMULA:
(

)( )
)

SOLIDOS TOTALES VOLATILES Y FIJOS (18)

1. PROCEDIMIENTO
a) Calcine el residuo de evaporacin y secado, procedente del procedimiento anterior para
slidos totales, en la mufla previamente calentada a 550oC durante 15 minutos.
b) Enfre parcialmente al aire dentro de la mufla, transfiera para enfriamiento completo en
el desecador y pese hasta peso constante, o hasta que la diferencia en peso con la pesada
previa sea menor de 0.5 mg (C).
2. CALCULOS
(A - C) X 1000
mg/L de Slidos totales Voltiles = ------------------------mL de muestra

(C - B) X 1000
mg/L de Slidos Totales Fijos = -------------------------mL de muestra
Donde:
A = peso del residuo + cazuela, antes de la calcinacin, mg
C= peso del residuo + cazuela, despus de la calcinacin, mg
B = peso de la cazuela, mg

CALCIO. MTODO EDTA (18)

1. REACTIVOS
a) Hidrxido de sodio,NaOH, 1 N: disuelva 4 g de NaOH en 100 mL de agua destilada.
b) Mezcla indicadora de Murexide (purpurato de amonio): mezcle 200 mg de murexide con
100 g de NaCl slido. Colquelos en un mortero y mulalos hasta que el colorante rojo est
uniformemente distribudo a travs de la sal blanca. Almacene el indicador en una botella
bien tapada. Este indicador cambia de un color rosado a un color prpura para el punto
final de titulacin.
c) Solucin tituladora de EDTA-0.01M: pese 3.723 g de EDTA o Na2 EDTA. Disulvalos en
agua destilada y diluya a 1 litro con agua destilada. Tapone y mezcle bien. La solucin es
generalmente estable durante 6 meses.
2. PROCEDIMIENTO
a) Use 50 mL de muestra o un volumen ms pequeo (25 o 10 mL) diludo a 50
mL, en tal forma que el contenido de calcio sea 5-10 mg (100-200 mg/L).
b) Agregue 2 mL de NaOH-1N o un volumen suficiente para producir un pH de
12-13. Agite. Agregue 0.2 g de mezcla indicadora de murexide, mezcle para disolver el
indicador. Si la solucin se torna rosada, agregue, agitando, solucin tituladora de EDTA hasta
obtener el color prpura permanente.
Para facilitar el reconocimiento del punto final de titulacin, prepare un testigo
colocando 50 mL de agua destilada, 2 mL de NaOH, 0.2 g de mezcla indicadora de murexide y
0.1 mL (2 gotas) de solucin tituladora EDTA para producir un color prpura permanente.
3. CLCULOS
Calcule el contenido de calcio por las siguientes relaciones:

A X 400.8
mg Ca/L = ------------mL de muestra

mg Ca CaCO3/L = --------------

A x 1000
mL de muestra

Donde:
A= mL de solucin de EDTA para titular la muestra.

DUREZA. MTODO EDTA (18,20)

1. REACTIVOS
a) Solucin buffer: Disuelva 16.9 g de NH4Cl, cloruro de amonio, en 143 mL de hidrxido de
amonio concentrado NH4OH; agregue 1.25 g de sal de magnesio de EDTA (disponible
comercialmente) y diluya a 250 mL con agua destilada. Si no se dispone de la sal de
magnesio de EDTA disuelva 1.179 g de sal disdica de EDTA dihidrato y 780 mg de
MgSO4.7H2O 644 mg de MgCl2.6H2O en 50 mL de agua destilada. Agrgue esta solucin a
16.9 g de NH4Cl disueltos en 143 mL de hidrxido de amonio concentrado NH4OH, mezcle
bien y diluya a 250 mL con agua destilada. Mantenga la solucin bien tapada dentro de una
botella de plstico o de vidrio borosilicato y no la almacene por ms de un mes en un
recipiente que se abre continuamente. Descarte la solucin cuando al agregar 1 2 mL a la
muestra no se obtenga un pH de 10.0 0.1 al punto final de titulacin. Dispense esta
solucin con una pipeta operada con bulbo.
b) Indicador de Eriocromo Negro T: disuelva 0.5 g de Eriocromo Negro T, sal de sodio de cido
1-(1-hidroxi-2-naftilazo)-5-nitro-2-naftil-4-sulfnico, No. 203 en el ndice de color, en 100 g
de 2,22-nitrilotrietanol (trietenolamina) o de 2-metoximetanol (etileno glicol mono-metil
ter). Almacnelo en una botella bien tapada.
b.1 Solucin indicadora de Calmagita cido 1-(1- hidroxi-4-metil-2-fenilazo)-2 naftil-4
sulfnico: disuelva 0.1 g de Calmagita en 100 mL de agua destilada.
Ambos indicadores pueden usarse en forma de polvo seco teniendo cuidado de evitar un
exceso de indicador.
c) Agente acomplejante: la mayoria de las aguas no lo requieren, pero ocasionalmente es
necesario agregar este inhibidor de interferencias para obtener un vire claro del indicador
al punto final de titulacin.
c.1.Inhibidor de MgCDTA: sal de magnesio de 1,2 -ciclohexanodiamina-tetraactico. Agregue
250 mg por cada 100 mL de muestra y disuelva completamente antes de agregar el buffer.
c.2.Inhibidor II: Ajuste el pH de muestras cidas a 6 o ms con solucin buffer o NaOH 0.1N.
Agregue 250 mg de cianuro de sodio, NaCN, en polvo.Agregue suficiente buffer para ajustar el
pH a 10.0 0.1.
PRECAUCIN: el NaCN es extremadamente txico. Tome precauciones extra en su manejo.
Enjuague concienzudamente el drenaje del lavamanos para asegurar que no existecido para
liberar cianuro de hidrgeno voltil txico).
c.3.Inhibidor III: Disuelva 5.0 g de sulfuro de sodio nonahidrato, Na2S.9H2O, 3.7 g de
Na2S.5H2O en 100 mL de agua destilada. Excluya el aire tapando firmemente la botella con
tapn de caucho. Este inhibidor de deteriora por oxidacin con aire. Produce un precipitado

de sulfuro que obscurece el punto final de titulacin cuando existen concentraciones

apreciables de metales pesados. Use 1 mL del inhibidor.
d) Solucin tituladora estndar de EDTA-0.01 M: Pese 3.723 g de Na2EDTA,
Na2H2C10H12O8N2.2H2O. Disulvalos en agua destilada y diluya a 1 litro.Tapone y mezcle
bien. La solucin es generalmente estable durante 6 meses. Almacene preferiblemente en
frasco de polietileno o vidrio de borosilicato. Normalice con solucin standar de calcio.
d.1. Solucin estandar de calcio: pese 1.000 g de carbonato de calcio, CaCO3 en polvo en un
erlenmeyer de 500 mL. Coloque un embudo en el cuello del erlenmeyer y agregue poco a poco
cido clorhdrico HCl 1+1 hasta disolver el CaCO3. Agregue 200 mL de agua destilada y lleve a
ebullicin durante unos pocos minutos para eliminar el CO2. Enfre, agregue unas gotas de
indicador rojo de metilo y ajuste al color naranja intermedio aadiendo NH 4OH-3N HCl,
segn se requiera. Diluya a 1000 mL con agua destilada; 1mL =1.00 mg CaCO3.
Normalizacin: diluya a 10 mL de solucin estndar de calcio a 50 mL con agua destilada.
Transfiera a un erlenmeyer y agregue 1 a 2 mL de solucin buffer. Agregue 1 a 2 gotas de
solucin indicadora o una cantidad apropiada de indicador en polvo. Aada lentamente
solucin tituladora estndar de EDTA, agitando continuamente, hasta que desaparezca el
ltimo tinte rojizo. Agregue las ltimas gotas a intervalos de 3 a 5 segundos. En el punto final,
normalmente la solucin es azul.
mg CaCO3 equivalentes a 1.00 mL de EDTA = 10

mL EDTA

2. PROCEDIMIENTO
a) Coloque 50 mL de muestra en un frasco siempre y cuando no consuma ms de 15
mL de solucin tituladora. En caso contrario debe hacerse dilucin a 50 mL con agua destilada.
b) Agregue 1 a 2 mL de solucin buffer. Usualmente 1 mL de buffer es suficiente para
obtener un pH de 10.0 a 10.1. La ausencia de un punto de vire claro del indicador demuestra la
necesidad de agregar inhibidor o deterioro del indicador.
c) Agregue 1 a 2 gotas de solucin indicadora o una cantidad apropiada de indicador en
polvo.
d)
Aada lentamente solucin tituladora estndar de EDTA, con agitacin continua,
hasta que desaparezca el ltimo tinte rojizo. Agregue las ltimas gotas a intervalos de 3 a 5
segundos. En el punto final , normalmente la solucin es azul.(La titulacin debe hacerse a la
luz del da o con lmpara fluorescente de luz da pues la luz incandescente tiende a producir un
tinte rojizo en el color azul del punto final). La titulacin no debe durar ms de 5 minutos,
contados a partir de la adicin de la solucin buffer.

e) En muestras con dureza menor de 5 mg/L utilice un volumen de muestra mayor,

100 a 1000 mL, y ajuste proporcionalmente las cantidades de reactivos. Titule un testigo de
agua destilada siguiendo el mismo procedimiento de la muestra y reste el volumen de EDTA
del testigo del volumen utilizado en la muestra.
3. CLCULOS
Calcule la dureza en mg/L CaCO3 por la siguiente relacin:
mL de EDTA gastados X B X 1000
Dureza, mg/L - CaCO3 = ----------------------------------mL de muestra________________
Donde: B = mgCaCO3 equivalentes a 1.00 mL de EDTA.
4. Informe el resultado del ensayo de dureza, as:
Dureza total = _____________ mg/L CaCO3

ALCALINIDAD (14) (162-Ed) cul es la ms reciente con la cul coincide?

1. REACTIVOS
a) Solucin indicadora de pH 8.3 (ver acidez, 1.d)
b) Solucin indicadora de pH 4.5: disuelva 100 mg de bromocresol verde, sal
sdica, en 100 mL de agua destilada.
c) Solucin tituladora de H2SO4 - 0.02N: diluya 200 mL de H2SO4 - 0.1N a 1000
mL con agua destilada.
d) Solucin estndar de Na2CO3-0.1N: seque aproximadamente 6 g de Na2CO3,
en la estufa, a 250oC, durante 4 horas y enfre en el desecador. Pese 5.3000 g de Na2CO3 seco
y disulvalos en agua destilada, diluya a 1 L.

e) Solucin estndar de H2SO4-0.1N: inicialmente prepare una solucin de

H2SO4 aproximadamente 0.1N, agregando con cuidado, 3 mL de H2SO4 concentrado a 1 L de
agua destilada. Normalice la solucin de H2SO4 con solucin estndar de Na2CO3-0.1N como
se indica a continuacin:
Tome 20 mL de solucin de Na2CO3-0.1N y dilyalos a 100 mL con agua
destilada. Sumerja en la solucin los electrodos de medida de pH. Descargue, con una bureta,
solucin de H2SO4 hasta que el pH sea igual a 4.5; anote los mL de cido requerido para
neutralizar los 20 mL de solucin de Na2CO3-0.1N como = A.
Prepare 1 L de solucin estndar de H2SO4-0.1N diluyendo, a un litro, una
cantidad de solucin aproximadamente 0.1N igual a 50A.
f) Solucin de tiosulfato de sodio 0.1N (ver acidez, 1.e).
2. PROCEDIMIENTO
a) Llene la bureta con solucin tituladora H2SO4 -0.02N
esperado, asi:

b) Mida el volumen apropiado de muestra para el intervalo de alcalinidad

mL de muestra
100
50
25

Alcalinidad, mg/L-CaCO3
0 - 250
251 - 500
501 - 1000

Coloque volmenes iguales de muestra en dos frascos de 250 mL, uno de los
cuales ser usado como testigo para comparacin de color.
c) Si hay cloro residual, remuvalo agregando 1 gota de solucin de tiosulfato de
sodio a cada frasco y mezclando.
d) Aada 5 gotas de solucin indicadora de fenolftalena a un frasco y mezcle. Si
la muestra se torna rosada hay alcalinidad por carbonatos o hidrxidos (pH>8.3). Aada
lentamente solucin tituladora de H2SO4 agitando constantemente la muestra hasta que el
color rosado justamente desaparezca. Use el frasco sin indicador de fenolftalena como testigo
para comparacin del color. Alternativamente, titule hasta que el medidor de pH indique un
pH igual a 8.3.
el paso f.

Si al aadir fenolftalena la muestra permanece incolora siga directamente con

e) Determine el volumen en mL de cido gastado, el cual se llama,

abreviadamente, F.
f) Aada 5 gotas de indicador de bromocresol verde a ambos frascos.
g) Titule nuevamente con H2SO4 - 0.02N hasta que el color azul cambie a
amarillo. Alternativamente, titule hasta que el medidor de pH indique un pH de 4.5.
h) Determine el volumen total de cido gastado en la titulacin restando a la
lectura final de la bureta el valor de la lectura inicial, la cual es la misma lectura inicial del
paso d. A este valor se llama abreviadamente M
3. CLCULOS
Calcule los valores de F, alcalinidad a fenolftalena, y M, alcalinidad total, en
mg/L - CaCO3 de acuerdo con las siguientes relaciones:

F (mL de cido gastado)x0.02x50000

F, mg/L-CaCO3 = ---------------------------------mL de muestra
M (mL de cido gastado)x0.02x50000
M, mg/L-CaCO3 = ---------------------------------mL de muestra
4. RESULTADOS
Informe los resultados de alcalinidad por hidrxidos, carbonatos y bicarbonatos
de acuerdo con el cuadro siguiente:

RELACIONES DE ALCALINIDAD

Resultado
de la
titulacin

F=0

Alcalinidad
Por
Hidrxidos
como CaCO3

Alcalinidad
Por
Carbonatos
como CaCO3

Alcalinidad
Por
Bicarbonatos
como CaCO3

F<

1
M
2

2F

M 2F

F=

1
M
2

2F

F>

1
M
2

2F M

2(M F)

F=M

HIERRO. METODO DE LA FENANTROLINA (20)

1. REACTIVOS
a) Acido Clorhdrico, HCl, concentrado que contenga menos de 0.5 ppm de hierro.
b) Solucin de Hidroxilamina: disuelva 10 g de NH2OH.HCl en 100 mL de agua
destilada.
c) Solucin buffer de acetato de amonio: disuelva 250 g de NH4C2H3O2 en 150 mL de
agua destilada. Agregue 700 mL de cido actico concentrado o glacial. Prepare una nueva
curva de calibracin cada vez que cambie la solucin buffer.
d) Solucin de acetato de sodio: Disuelva 200 g de NaC2H3O2.3H2O en 800 mL de agua
destilada.
e) Solucin de Fenantrolina: disuelva 100 mg de Ortofenantrolina o 1,10 Fenantrolina
monohidratada, C12H8N2.H2O, en 100 mL de agua destilada mediante mezcla y calentamiento
a 80oC, sin hervirla. Descarte la solucin si se vuelve oscura. El calentamiento no es necesario
si se agregan 2 gotas de HCl concentrado al agua destilada. (Nota: un mL de este reactivo es
suficiente para concentraciones menores de 0.1 mg Fe).
f) Solucin de permanganato de potasio, 0.1 M: Disuelva 0,316g de KMnO4 en agua
destilada y diluya a 100 mL.
g) Solucin patrn de hierro: mida 50 mL de agua destilada y colquelos en un vaso de
precipitados de 250 mL. Agregue lentamente, mezclando, 20 mL de H2SO4 concentrado al
agua destilada. Realice esta operacin con cuidado y deje enfriar la solucin a temperatura
ambiente. Pese 1.404 g de Fe(NH4)2(SO4)2.6H2O, sulfato ferroso amoniacal, y disulvalo en la
solucin anterior mediante agitacin. Agregue solucin 0.1M de KMnO4, gota a gota, hasta que
persista un color rosado suave en la solucin. Diluya en un frasco volumtrico a 1000 mL con
agua destilada. La solucin patrn es tal que 1 mL = 0.2 mg Fe.
h) Solucin estndar de hierro: con una pipeta volumtrica mida 5 mL de solucin
patrn de hierro y colquelos en un frasco volumtrico de 100 mL. Diluya hasta la marca de
100 mL con agua destilada. Tapone y mezcle bien. Prepare los estndares de hierro cada da
de su uso pues la solucin es inestable; 1 mL = 0.01 mgFe.
Nota: Use reactivos bajos en hierro. Almanece los reactivos en botellas con tapn de vidrio. El
HCl y la solucin de acetato de amonio son estables indefinidamente si estn firmemente
cerradas. La fenantrolina, la hidroxilamina y la solucin patrn de hierro son estables por
varios meses.

2. PROCEDIMIENTO
2.1 PREPARACION DE LA CURVA DE CALIBRACION
a) Prepare la serie siguiente de estndares de hierro midiendo los volmenes indicados
de solucin estndar de hierro en frascos erlenmeyer de 125 mL
mL solucin estndar Hierro. Hierro, mg
0.0
5
10
15
20
30

0.00
0.05
0.10
0.15
0.20
0.30

mg/L - Fe
0.0
1.0
2.0
3.0
4.0
6.0

b) Diluya a 50 mL con agua destilada libre de hierro y aplique el mismo procedimiento

indicado en 2.2.
2.2 HIERRO TOTAL
a) Mezcle bien la muestra y mida 50 mL en un frasco erlenmeyer de 125 mL. Si la
muestra contiene demasiado hierro, ms de 200 g-Fe, prepare una dilucin apropiada
midiendo exactamente la porcin de muestra usada y diluyendo a 50 mL.
b) Agregue 2 mL de HCl concentrado y 1 mL de solucin de hidroxilamina, agregue
unas 4 o 5 bolas de vidrio y caliente hasta ebullicin. Para asegurar que todo el hierro sea
disuelto contine la ebullicin hasta reducir el volumen a unos 15 o 20 mL. Deje enfriar a
temperatura ambiente.
c) Transfiera la solucin a un frasco volumtrico de 100 mL, agregue 10 mL de solucin
buffer de acetato de amonio y 4 mL de solucin de fenantrolina. Diluya con agua destilada
hasta la marca de 100 mL. Mezcle bien y deje reposar durante por lo menos 10 minutos para
desarrollo mximo del color.
d) Para anular la interferencia de cualquier color o turbiedad de la muestra prepare un
testigo con la misma cantidad de muestra y aplicndole todos los pasos del procedimiento
anterior, pero sin agregar la solucin de fenantrolina.
e) Con el testigo en el portamuestras fije la lectura del espectrofotmetro en 0 de
absorbancia (100% de transmitancia) con el espectrofotmetro en 510 nm.

f) Coloque la muestra con fenantrolina en el aparato y haga la lectura correspondiente

de absorbancia. Convierta la lectura observada en mg de Fe mediante la curva de calibracin.
2.3 HIERRO DISUELTO
a) Inmediatamente despus de haber recogido la muestra filtre 100 mL a travs de un
filtro membrana de 0.45 m en un frasco de vaco que contenga 1 mL de HCl concentrado.
Analice el filtrado para hierro total filtrable aplicando el mismo procedimiento descrito en 2.2.
Calcule la concentracin de hierro suspendido restando al valor del hierro total el valor del
hierro filtrable.
3. CLCULOS
Calcule la concentracin de Fe en mg/L mediante la relacin siguiente:
mg Fe X 1000
mg Fe/L = -------------mL de muestra
4. RESULTADOS
Informe el resultado de hierro total, as:
Hierro total =_______ mg/L-Fe

NITROGENO AMONIACAL. METODO DE NESSLERIZACION DIRECTA (14)

1. REACTIVOS
a) Agua libre de amoniaco: preprela pasando agua destilada a travs de un
intercambiador inico apropiado con resina catinica y aninica.
b) Solucin de hidrxido de sodio, 6 N: disuelva 240 g de NaOH en 1 litro de
agua destilada libre de amoniaco.
c) Solucin de Arsenito de sodio: disuelva 1.0 g de NaASO2 en agua libre de
amoniaco y diluya a 1 litro. (precaucin: esta solucin es txica, evite su ingestin). Use 1 mL
de este reactivo para remover 1 mg/L de cloro residual en 500 mL de muestra.
d) Solucin de sulfato de zinc: disuelva 100 g de ZnSO4.7H2O en agua libre de
amoniaco y diluya a 1 litro.
e) Solucin de sal de Rochelle: disuelva 50 g de tartrato de sodio y potasio
tetrahidrato, KNaC4H4O6.4H2O en 100 mL de agua destilada.
Remueva el amoniaco usualmente presente en la sal hirviendo la solucin hasta
reducir su volumen a 70 mL. Enfre y diluya a 100 mL con agua libre de amoniaco.
f) Reactivo de Nessler: disuelva 100 g de HgI2 y 70 g de KI en una pequea
cantidad de agua libre de amoniaco. Pese 160 g de NaOH y disulvalos en 500 mL de agua
libre de amoniaco. Agregue lentamente y agitando, la solucin de yoduro mercrico y yoduro
potsico a la solucin de NaOH fra. Diluya a 1 litro. Almacene el reactivo en un frasco de
vidrio con tapn de caucho y en oscuro; bajo condiciones normales puede usarse hasta por un
ao. (Precaucin: este reactivo es txico).
g) Solucin patrn de amoniaco: disuelva 3.819 g de NH4Cl, secado a 100 oC, en
agua libre de amoniaco y diluya a 1 litro; 1mL=1mg N=1.22 mg-NH3.
h) Solucin estndar de amoniaco: diluya 10 mL de solucin patrn de
amoniaco a 1000 mL con agua libre de amoniaco; 1mL=0.01 mg N=12.2 g-NH3.

2. PROCEDIMIENTO
2.1 MUESTRA
a) Si la muestra contiene cloro residual, remuvalo con la cantidad equivalente
de solucin de arsenito de sodio.
b) Agregue 1 mL de solucin de ZnSO4 a 100 mL de muestra y mezcle bien.
Agregue 0.4 a 0.5 mL de solucin de NaOH 6N, para obtener un pH de 10.5.Mezcle, deje
reposar por algunos minutos hasta obtener el precipitado que deja un sobrenadante claro e
incoloro.
c) Filtre a travs del papel, descartando los primeros 25 mL de muestra filtrada.
d) A 50 mL de muestra filtrada o alcuota,agregue 2 gotas de solucin de sal de
Rochelle, mezcle bien. Agregue 1 mL de reactivo de Nessler usando una pipeta automtica y
mezcle bien. Deje desarrollar color por 10 minutos.
e) Prepare un testigo con la misma cantidad de muestra y aplicndole todos los
pasos del procedimiento anterior, pero sin agregar el reactivo de Nessler.
f) Con el testigo en el portamuestras fije la lectura del espectrofotmetro en 0 de
absorbancia (100% de transmitancia) con el espectrofotmetro en 415 nm.
g) Coloque la muestra con reactivo de Nessler en el aparato y haga la lectura
correspondiente de absorbancia.
Convierta la lectura en mg de N mediante la curva de calibracin.
2.2 PREPARACION DE LA CURVA DE CALIBRACION
a) Prepare la serie siguiente de estndares de nitrgeno amoniacal midiendo los
volmenes indicados de solucin estndar de amoniaco en frascos volumtricos de 50 mL

mL de solucin estndar de amoniaco

0
2
5
10
15
20

Amoniaco, mg-N

0.00
0.02
0.05
0.10
0.15
0.20
b) Diluya con agua libre de amoniaco hasta la marca de 50 mL de cada frasco.

c) Agregue a cada frasco 2 gotas de solucin de sal de Rochelle, mezcle bien.

Agregue 1 mL de reactivo de Nessler a cada frasco con una pipeta automtica y mezcle bien.
Deje desarrollar color por 10 minutos.
d) Mida la absorbancia de cada solucin con el espectrofotmetro a 415 nm.
Con los datos obtenidos construya una curva de calibracin de absorbancia vs. concentracin
de amoniaco en mg.
3. CALCULOS

siguiente:

Calcule la concentracin de nitrgeno amoniacal en mg/L mediante la relacin

mg N X 1000
mg de Nitrgeno Amoniacal N/L = -------------mL de muestra
4. RESULTADOS
Informe el resultado de Nitrgeno Amoniacal, as:
mg Nitrgeno Amoniacal/L = -------------- mg/L - N.

Manual del laboratorio

COAGULACIN. ENSAYO DE JARRAS PARA COAGULACIN

1. REACTIVOS
a) Solucin de alumbre: disuelva 10 g de sulfato de aluminio, Al2(SO4)3.14H2O
en 1 litro de agua destilada. Agite la suspensin antes de su uso y preprela con una
frecuencia no mayor de seis meses. Preferiblemente use el mismo alumbre de la planta de
purificacin. Cada 0.1 mL de esta solucin representa una dosis de 1 mg/L cuando se agrega a
1 litro de muestra, o sea, cada 1.0 mL de solucin de alumbre representa 10 mg/L en 1 litro de
muestra.
alcalinidad.

b) Todos los reactivos necesarios para determinar color, turbiedad, pH y

2. PROCEDIMIENTO
a) Lave bien 6 vasos del mezclador, limpie apropiadamente las paletas del
mezclador con un trapo hmedo. Determine pH, alcalinidad, turbiedad y color del agua cruda.
b) Mida 1 litro de muestra en cada uno de los 6 vasos del mezclador.

c) Con una pipeta agregue volmenes progresivos de solucin de coagulante, tan

rpido como sea posible, a c/u de las jarras, hasta cubrir el intervalo de dosis de coagulante
considerado como apropiado. Seleccione una serie de dosis tal que el primer vaso represente
subtratamiento y el ltimo sobretratamiento.

d) Mezcle rpidamente el coagulante con el agua.

e) Coloque el vaso en el agitador y agite lentamente (aproximadamente 30-40
RPM) por un perodo igual al tiempo de floculacin en la planta. Observe en cada vaso el
tiempo de aparicin del floc y el carcter del floc.

f) Suspenda la mezcla y deje sedimentar durante 15 a 60 minutos. Observe el

floc y sus caractersticas de asentamiento en cada vaso. Describa los resultados como pobre,
regular, bueno o excelente. Una muestra oscura indica una coagulacin pobre. Un agua
coagulada adecuadamente contiene un floc bien formado y el lquido entre las partculas o
flocs es claro.
g) Con una pipeta de volumen grande extraiga 100 mL de muestra de los 4 cm
superiores de cada vaso.

h) Determine color, turbiedad, pH y alcalinidad de cada muestra clarificada.

Alternativamente, contine el ensayo y repita los anlisis sobre muestras filtradas.

3. RESULTADOS
Determine la dosis ms efectiva de coagulante para tratamiento.
Alternativamente, explique las causas posibles de cambio en pH, alcalinidad, turbidez y color;
sugiera otro coagulante o coagulantes que podran usarse en el tratamiento de la muestra,
ayudas de coagulacin, adicin de agentes alcalinos, ablandadores o modificaciones en el
perodo de mezcla y sedimentacin.

COLOR. MTODO DE COMPARACIN VISUAL (14,18,20)

1. REACTIVOS
a) Solucin patrn de color: en la balanza analtica, pese
separadamente, 1.246 g de K2PtCl6 (equivalente a 500 mg de Pt metlico) y 1.00 g de cloruro
cobaltoso cristalizado, CoCl2.6H2O (equivalente a 250 mg de Co metlico), sobre vidrio, para
evitar que el cloroplatinato de potasio o el cloruro cobaltoso corroan las bandejas metlicas
de la balanza. Disuelvalos en agua destilada con 100 mL de HCl concentrado y diluya a
1000mL con agua destilada. Esta solucin tiene un color de 500 unidades. (1 mL = 0,5 mg Pt).
b) Si no se dispone de K2PtCl6, disuelva 500 mg de Pt metlico puro en agua regia con la
ayuda de calentamiento; remueva el HNO3 mediante evaporaciones sucesivas con porciones
frescas de HCl concentrado. Disuelva este producto junto con 1.00 g de CoCl2.6H2O
cristalizado como se inidic en a).
2. PROCEDIMIENTO
a)
Preparacin de los patrones de color: la serie siguiente de patrones de color
puede prepararse mediante la adicin de los volmenes indicados de solucin patrn de color
en tubos de Nessler altos de 50 mL
mL de solucin patrn de color
0.0
0.5
1.0
1.5
3.0
3.5
4.0
4.5
5.0
6.0
7.0

2.0
2.5

Unidades de color

0
5
10
15
30
35
40
45
50
60
70

20
25

b) Aada agua destilada hasta la marca de 50 mL y mezcle.

c) Proteja los patrones contra la evaporacin y la contaminacin, taponndolos
debidamente, si los va a usar por largo tiempo.

d) Coloque 50 mL de muestra, previamente clarificados mediante centrifugacin, en un

tubo separado de Nessler de 50 mL y compare el color de la muestra con los patrones, mirando
verticalmente hacia abajo, a travs de los tubos, sobre una superficie blanca que refleje la luz
hacia arriba a travs del tubo.
e) Si el color excede de 70 unidades, diluya la muestra, con agua destilada, en un tubo
de Nessler separado de 50 mL y en proporciones conocidas, hasta que el color caiga dentro del
intervalo de los patrones preparados.
f) Mida el pH de la muestra
3. CLCULOS
Calcule el color mediante la ecuacin siguiente:
A X 50
UNIDADES DE COLOR = -----------B
Donde:
A= color estimado de la muestra diluda
B= mL de muestra tomados para la dilucin.
4. RESULTADOS
a) Informe los resultados de color en nmeros enteros as:
Unidades de Color
1 - 50
51 - 100
101 - 250
251 - 500

Unidades de Redondeo
1

5
10
20

b) Informe el pH de la muestra.

DEMANDA DE CLORO
1.

REACTIVOS
a) Agua libre de demanda de cloro: prepare las diluciones, los testigos y las soluciones
con agua destilada de alta calidad (preferiblemente agua destilada filtrada por carbn).
b) cido actico concentrado (glacial.
c) Yoduro de potasio, KI, cristales
d) Solucin patrn de tiosulfato de sodio, 0.1N: Disuelva 25g de Na2S2O3 5H2O en 1 litro
de agua destilada hervida fresca y estandarice con biyodato de potasio o dicromato de
potasio despus de por lo menos 2 semanas de alamcenamiento. Agregue 5mL de
cloroformo (CHCl3) para minimizar la descomposicin bacterial.
e) Solucin estandar de tiosulfato de sodio, 0.025 N: Diluya 250mL de solucin patrn de
tiosulfato de sodio a 1 litro con agua destilada hervida y fresca. Normalice la solucin
diariamente con dicromato de potasio 0.025N o biyodato de potasio 0.025N. La
solucin estndar es tal que 1mL es equivalente a 886.3 g Cl como Cl2.

NORMALIZACIN:
e.1. Solucin estandar de dicromato de potasio 0.025N: disuelva 1.226 g de K 2Cr2O7,
secado a 103C durante 2 horas, en agua destilada y diluya a 1 litro.
e.1.1.Agregue 1 mL de H2SO4 concentrado, 10.00 mL de solucin estndar de dicromato
de potasio 0.025N y 1g de KI a 80 mL de agua destilada, mezclando constantemente.
Deje reposar durante 6 minutos es oscuro. Titule el yodo liberado hasta obtener un color
amarillo pajizo plido. Agregue 1mL de solucin indicadora de almidn y contine la
titulacin hasta que desaparezca el color azul.
e.2. Solucin estandar de biyodato de potasio, 0.025N: disuelva 812,4 mg de KH
(IO3) 891,8 g de KIO3 secado a 103 2C durante 1 hora, en agua destilada y diluya a 1000
mL. Almacene en botella con tapn de vidrio.
e.2.1.Agregue 1mL de H2SO4 concentrado, 10.00 mL de solucin estndar de biyodato
de potasio, 0.025N y 1 g de KI a 80 mL de agua destilada, mezclando constantemente. Titule
inmediatamente con solucin tituladora de tiosulfato de sodio 0.025N hasta obtener un color
amarillo pajizo plido. Agregue 1 mL de solucin indicadora de almidn y contine la
titulacin hasta que desaparezca el color azul.
f)
Solucin indicadora de almidn: Agregue una pequea cantidad de agua fra a 5
g de almidn y muela en un mortero hasta obtener una pasta fina. Agrguela a 1 litro de agua
destilada hirviendo, mezcle y deje sedimentar toda la noche. Use el sobrenadante claro.

Preserve con 1.25 g de cido saliclico, 4 g de cloruro de zinc, o una combinacin de 4 g de

propionato de sodio y 2 g de nitruro de sodio.
g) Solucin estndar de cloro: a partir de un hipoclorito, (Decol o Clorox contienen
aproximadamente 5% de cloro disponible, lo cual representa 50000 mg/L. Debe almacenarse
el compuesto en oscuro y en un refrigerador para mantener su concentracin qumica
indefinidamente), prepare una solucin que contenga aproximadamente 100 mg/L de cloro
diluyendo 2 mL del hipoclorito a 1000 mL con agua destilada. Almacene la solucin en una
botella oscura y en el refrigerador para mantener su concentracin por un mes. Estandarice la
solucin por el procedimiento indicado posteriormente.
h) Los reactivos descritos para la determinacin de cloro residual (ver Cloro Residual).
2.

PROCEDIMIENTO
a) Mida la temperatura y el pH de la muestra

b) Con una probeta mida 200 mL de muestra en cada uno de 5 o 10 vasos o frascos.
Proteja de la luz, todas las muestras a lo largo de todo el procedimiento.
c) Agregue las cantidades siguientes de solucin estndar de cloro a cada vaso o frasco:
mL de solucin de Cloro
0.5
1
2
3
4
5
6
8
10
12
15

Cloro, mg/L

0.5
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
3.0
4.0
5.0
6.0
7.5

Seleccione las dosis de cloro en tal forma que la primera muestra no indique residual
de cloro al final del tiempo de contacto.
d) Mezcle los contenidos de cada vaso o frasco y deje reposar por el tiempo de contacto
seleccionado (15, 30, 45 o 60 minutos).

e) Al final del tiempo de contacto determine la clase y concentracin de cloro residual

en cada vaso mediante la determinacin de Cloro Residual. Determine adems la temperatura
y el pH de cada vaso.
3. RESULTADOS
Anote las dosis de cloro agregadas, los residuales de cloro total, libre y combinado
obtenidos, el tiempo de contacto y la temperatura de la muestra durante el ensayo.
4. CLCULOS
Elabore un grfico de cloro residual contra dosis de cloro. Calcule las demandas de
cloro para cada caso y al punto de quiebre. Informe el tiempo de contacto, la temperatura y el
pH de la muestra y el mtodo anlitico.
5. NORMALIZACIN DE LA SOLUCION ESTNDAR DE CLORO
5.1 PROCEDIMIENTO
a) Coloque 2 mL de cido actico en un frasco erlenmeyer de 250 mL
b) Agregue 10 a 15 mL de agua destilada libre de demanda de cloro y mezcle.
c) Agregue 1 g de yoduro de potasio y mezcle hasta disolver el yoduro de potasio.
d) Agregue 100 mL de solucin estndar de cloro agitando el frasco.
e) Gradualmente titule con solucin tituladora de tiosulfato de sodio 0.025N, agitando
el frasco, hasta que el color de la solucin sea amarillo plido o color paja. Agregue 1 a 2 mL de
solucin indicadora de almidn y contine la titulacin hasta que desaparezca el color azul.
f) Anote el volumen de solucin tituladora de tiosulfato de sodio 0.025N gastado como
igual a A.
g) Prepare un testigo agregando cantidades idnticas de cido, de KI e indicador de
almidn, a un volumen de agua destilada igual al volumen usado de muestra para titulacin.
Usando el mismo procedimiento anterior titlelo con tiosulfato de sodio 0.025N. Anote esta
lectura como igual a B.
5.2 CLCULOS

Calcule la concentracin de la solucin estndar de cloro mediante la siguiente

relacin:
mg/L - Cl2 = (A - B) N X 354.5
Donde:
A = mL de titulador gastados para la muestra.
B = mL de titulador gastados para el testigo.
N = normalidad del Na2S2O3 (usualmente 0.025N).
Si la solucin de cloro es exactamente de una concentracin igual a 100 mg/L se
requerirn aproximadamente 11.3 mL de solucin tituladora de tiosulfato de sodio 0.025N.

CLORO RESIDUAL. MTODO DPD TITULOMTRICO (20)

1. REACTIVOS
a) Solucin tampona de fosfato: disuelva 24 g de fosfato disdico monocido,
Na2HPO4, en agua destilada. Agregue luego 46 g de fosfato dicido de potasio, KH 2PO4, y
disulvalos. Combnelos con 800 mg de sal de sodio del cido tetraactico, llamada tambin
etilenodinitrilo o etilenodiamino disdico tetraacetato dihidrato,(EDIA) disueltos en 100 mL
de agua destilada. Diluya a 1 litro con agua destilada y agregue 20 mg de HgCl 2 para
preservar y prevenir interferencias. (PRECAUCIN: el HgCl2 es txico, evite su ingestin).
b) Solucin indicadora de DPD,(N,N-dietil-p-fenilenodiamina): Agregue 8 mL de
H2SO4, 1+3 y 200 mg de sal disdica de cido tetraactico, o etilenodiamino disdico
tetraacetato dihidrato a 200 mL de agua destilada libre de cloro. Disuelva 1 g de DPD oxalato,
o 1.5 g de sulfato de DPD pentahidrato, o 1.1 g de sulfato de DPD anhidro, en dicha solucin.
Diluya a 1 litro y almacene en una botella de vidrio oscuro con tapn de vidrio. Descarte la
solucin cuando se desarrolla un color rosado al agregar el DPD, pues ello indicara
contaminacin del agua destilada o de la vidriera. La absorbancia de esta solucin a 515 nm
debe ser inferior a 0.002/cm. (PRECAUCIN: el oxalato es txico, evite su ingestin).
c) Solucin tituladora estndar de sulfato ferroso amoniacal (FAS): Disuelva
1.106 g de sal de Mohr,FAS, Fe(NH4)2(SO4)2.6H2O, en agua destilada con 1 mL de H2SO4,
1+3, y complete a 1 litro con agua destilada fresca, hervida y enfriada. Esta solucin puede
usarse durante un mes y normalizarse mediante dicromato de potasio. La concentracin de la
solucin es tal que 1 mL=0.1 mg-Cl2 o sea, para muestras de 100 mL, 1 mL de solucin
estndar gastado es equivalente a 1 mg/L de cloro residual.
d) Yoduro de potasio,KI, cristales.
e) Solucin de yoduro de potasio: disuelva 500 mg de KI y diluya a 100 mL con
agua destilada fresca, hervida y enfriada. Almacene en una botella de vidrio oscuro, en el
refrigerador. Descrtela cuando la solucin se vuelva amarilla.
Todas las soluciones anteriores deben ser incoloras y descartarse si desarrollan color.
f) Cloruro de Bario, BaCl2- 2H2O, cristales.
2. PROCEDIMIENTO PARA CLORO LIBRE Y CLORO COMBINADO O CLORO TOTAL.
El mtodo es adecuado para concentraciones de cloro menores de 5 mg/L.
Cuando la concentracin de cloro es mayor de 5 mg/L use una cantidad ms pequea de

muestra diluda a un volumen total de 100 mL. Mezcle los volmenes de solucin tampona y
de solucin indicadora de DPD con agua destilada antes de agregar la muestra. (Si la muestra
se agrega antes que la solucin tampona el mtodo no funciona).
Si existe cromato (>2mg/1) agregue 0.2g de BaCl2-2H2O a la muestra y mezcle antes de
agregar los otros reactivos. Si, adicionalmente, existen sulfatos >500 mg/1, use 0.4g BaCl22H2O por cada 100 ml de muestra.
a) CLORO LIBRE: Coloque 5 mL de solucin buffer y 5 mL de solucin de DPD en el
frasco de titulacin. Mezcle, agregue 100 mL de muestra o de muestra diluda y mezcle
nuevamente. Titule rpidamente con solucin estndar FAS hasta que desaparezca el color
rojo. (Lectura CL)
b) CLORO TOTAL: Coloque 5 mL de solucin buffer y 5 mL de solucin DPD en el
frasco de titulacin. Mezcle. Agregue 100 mL de muestra y mezcle. Agregue varios cristales
de KI, 0.5 a 1 g o 2 gotas de solucin de yoduro de potasio y, mezcle nuevamente para disolver.
Deje reposar 2 minutos y titule con la solucin FAS hasta que desaparezca el color rojo.
(Lectura CT).
c) CLORO LIBRE Y CLORO TOTAL: Coloque 5 mL de solucin buffer y 5 mL de
solucin de DPD en el frasco de titulacin. Mezcle. Agregue 100 mL de muestra o de muestra
diluda y mezcle nuevamente. Titule rpidamente con solucin estndar FAS hasta que
desaparezca el color rojo. Anote los mL gastados en la titulacin, (lectura CL). Agregue
inmediatamente 0.5 a 1 g de KI o 2 gotas de solucin de yoduro de potasio y mezcle
nuevamente. Deje reposar 2 minutos y titule con la solucin FAS hasta que desaparezca
nuevamente el color rojo. Anote los mL gastados en toda la titulacin, (lectura CT). Obtenga el
cloro combinado por la diferencia: CT-CL.
3. CLCULOS
Cl2):

Para 100 mL de muestra titulados con solucin estndar FAS (1 mL = 0.1 mg

mg Cl2/L = mL de FAS gastados.

Para otras concentraciones de la solucin tituladora FAS, la concentracin de
cloro se calcula por la relacin:
A X B X 1000
mg Cl2/L = --------------Donde:

mL de muestra

A = mL de FAS gastados en la titulacin de la muestra.

B = Concentracin de la solucin estndar FAS, en mg/mL - Cl2, determinados como se

indica en el literal 4.3, a continuacin.
4. NORMALIZACIN DE LA SOLUCIN TITULADORA ESTNDAR, FAS
4.1 REACTIVOS
a) Solucin indicadora de sulfonato de difenilamino de bario al 0.1%: disuelva
0.1 g de (C6H5NHC6H4-4-SO3)2Ba en 100 mL de agua destilada.
b) cido fosfrico, H3PO4, concentrado.
c) Solucin de dicromato de potasio disuelva 0.691 g de K2Cr2O7 anhidro en
agua destilada y diluya a 1000 mL. Almacene en botella con tapn de vidrio.
d) Solucin de H2SO4, 1+5, diluya 10 mL de H2SO4 concentrado con 50 mL de
agua destilada.

4.2 PROCEDIMIENTO
Agregue 10 mL de H2SO4, 1+5, 5 mL de H3PO4 concentrado y 2 mL de solucin
indicadora de sulfonato difenilamino de bario al 0.1 % a 100 mL de solucin de FAS. Titule
con dicromato de potasio hasta obtener un color violeta que persista por 30 segundos.
4.3 CLCULOS

siguiente:

Calcule la concentracin de la solucin estndar FAS mediante la relacin

(mg/mL)-Cl2 = A X N X 0.3545
Donde:
A= mL de dicromato de potasio gastados en la titulacin.
N= normalidad del K2Cr2O7, generalmente 0.1N.

Si la solucin tituladora de FAS es exactamente de una concentracin equivalente a 100

mg Cl2/L se requerirn aproximadamente 20 mL de solucin de dicromato de potasio.
NOTA: para inhibir el cloro al tomar una muestra, antes de esterilizar el frasco adicione 0.1
mL de una solucin de tiosulfato de sodio al 1.8% por cada 100 mL de muestra. (Inhibe 5
mg/L Cl2).

MANGANESO. METODO DEL PERSULFATO (14,18)

1. REACTIVOS
a) Reactivo especial: disuelva 75 g de sulfato de mercurio, HgSO4, en 400 mL de HNO3
concentrado y 200 mL de agua destilada. Agregue 200 mL de cido fosfrico al 85%, H 3PO4, y
35 mg de nitrato de plata, AgNO3. Diluya la solucin enfrada a 1 litro.
b) Persulfato de amonio, (NH4)2S2O8, slido.
c) Solucin estndar de manganeso: prepare una solucin 0.1N de KMnO4 disolviendo
3.2 g de KMnO4 en agua destilada y completando a 1 litro. Envase la solucin en una botella
oscura con tapn de vidrio y djela envejecer durante varias semanas bajo luz solar. Decante
cuidadosamente o extraiga el sobrenadante con pipeta sin agitar el sedimento que se haya
formado. Normalice la solucin mediante el procedimiento siguiente:
Pese 100.0, 150.0 y 200.0 mg de Na2C2O4 anhidro en vasos de 400 mL. A cada vaso
agregue 100 mL de agua destilada y agite hasta disolver. Agregue 10 mL de H 2SO4, 1+1, y
caliente rpidamente hasta 90-95oC. Titule, agitando, inmediatamente, con la solucin de
KMnO4 a normalizar, hasta obtener un color rosado suave que persista durante 1 minuto por
lo menos. Mantenga la temperatura, durante la titulacin, por encima de los 85oC. Una
muestra de 100 mg de Na2C2O4 consumir cerca de 15 mL de solucin. Titule un testigo de
agua destilada con H2SO4 y calcule la normalidad por la expresin siguiente:
g Na2C2O4
Normalidad del KMnO4 = ---------------(A-B) X 0.06701
Donde:
A= mL gastados para titular la muestra
B= mL gastados para titular el testigo
Utilice como resultado el promedio de las 3 titulaciones. Calcule el volumen necesario
de esta solucin para preparar un litro de solucin tal que 1mL=0.05 mg Mn, por la relacin:
4.55
mL KMnO4 = ---------------Normalidad KMnO4

A este volumen agregue 2 a 3 mL de cido sulfrico concentrado y solucin de bisulfito

de sodio, gota a gota 9 10 mL, con agitacin, hasta que desaparezca el color del
permanganato. Hierva hasta remover el exceso de SO2, enfre y diluya a 1 litro con agua
destilada. La solucin es tal que 1 mL = 0.05 mg Mn.
d) Perxido de Hidrgeno, H2O2, 30%
e) Acido ntrico, HNO3, concentrado.
f) Acido sulfrico concentrado, H2SO4,concentrado.
g) Solucin de bisulfito de sodio: disuelva 10 g de NaHSO3 en 100 mL de agua
destilada. Alternativamente, preprela disolviendo 19 mL de NaHSO3 al 39% con 81 mL de
agua destilada. Alternativamente preprela segn g1.
h) Oxalato de sodio, Na2C2O4.
g) Solucin de bisulfito de sodio: diluya 19 mL de NaHSO4 al 39% a 100 mL con agua
destilada.
2. PROCEDIMIENTO
2.1 MUESTRA
En muestras con materia orgnica o contenido excesivo de cloruros aplique el
pretratamiento descrito en el punto cuatro.
a) Coloque una porcin de muestra preparada que contenga 0.05 a 2 mg de Mn en un
frasco cnico de 250 mL, agregue agua destilada, si es necesario, para completar un volumen
de 50 mL.
b) Aplique 5 mL de reactivo especial diluya a 90 mL (o concentre a 90 mL por
ebullicin). Agregue 1 g de persulfato de amonio, lleve a ebullicin y hierva durante 1 minuto
sobre una resistencia, remueva el frasco de la resistencia, (no caliente en bao de agua), y deje
reposar un minuto; enfre con agua de la llave (no exceda el tiempo de ebullicin, ni prolongue
el tiempo de enfriamiento). Diluya a 100 mL con agua destilada libre de sustancias reductoras
y mezcle. Haga la lectura de absorbancia, usando un testigo de agua destilada para colocar el 0
de absorbancia.
c) Correccin por turbiedad o color interferentes:Si la muestra tiene turbiedad o color,
tan pronto como haya hecho la lectura de absorbancia con el espectrofotmetro, agregue 0.05
mL de perxido de hidrgeno directamente sobre la muestra en la celda del aparato. Mezcle y

apenas desaparezca completamente el color del permanganato y cualquier burbuja, haga

nuevamente la lectura de absorbancia. Deduzca del valor inicial el valor de la absorbancia final
y encuentre, en la curva de calibracin, el valor correspondiente en mg de Mn.
2.2 PREPARACION DE LA CURVA DE CALIBRACION
a) Prepare la serie siguiente de estndares de manganeso midiendo los volmenes
indicados de solucin estndar de manganeso en frascos volumtricos de 100 mL
mL solucin estndar manganeso
0
1
2
5
10
20
30

mg Mn

0.00
0.05
0.10
0.25
0.50
1.00
1.50

b)Aplique a cada uno de los estndares el mismo procedimiento descrito en 2.1. para la
muestra.
c) Mida la absorbancia de las soluciones con el espectrofotmetro en 525 nm. Con los
datos obtenidos construya una curva de calibracin de absorbancia contra concentracin de
manganeso en mg Mn.
3. CALCULOS
a) En muestras sin pretratamiento, calcule la concentracin de manganeso mediante la
ecuacin siguiente:
mg Mn X 1000
mg Mn/L = ------------mL muestra
b) cuando se toma una porcin de la muestra digerida (volumen final 100 mL), calcule
la concentracin de manganeso mediante la ecuacin siguiente:
1000
100
mg Mn/L = mg Mn X ---------- X ----------mL muestra mL porcin

4. PRETRATAMIENTO
4.1 REACTIVOS
a) Solucin indicadora de metil naranja.
b) Acido sulfrico, H2SO4, concentrado.
c) Acido Ntrico, HNO3, concentrado
d) Perxido de hidrgeno, H2O2, 30%
e) Agua Redestilada: agua destilada, redestilada en destilador totalmente de vidrio, o
filtrada a travs de una columna para remocin de iones.
4.2 PROCEDIMIENTO
a) Agite la muestra para obtener una suspensin homognea; transfiera con una pipeta
o con un frasco volumtrico la cantidad requerida de muestra, segn la tabla siguiente, a una
cacerola de evaporacin:
CONCENTRACION
mg/L
<1
1 - 10
10 - 100
100 - 1000

mL

VOLUMEN MUESTRA

1000
100
10
1

Acidifique a metil-naranja (color rosado) con H2SO4 concentrado, agregue luego 5 mL

de HNO3 concentrado y 2 mL de H2O2 al 30% para reducir el cromato. Evapore sobre una
placa caliente o bao de vapor hasta un volumen de 15 a 20 mL, cubriendo la cacerola con un
vidrio de reloj, cuando sea necesario, para evitar prdida del material por salpicamiento. Se
puede colocar una lmpara infrarroja sobre la muestra para acelerar la evaporacin.
b) Transfiera la solucin evaporada junto con cualquier slido remanente en la
cacerola a un frasco cnico de 125 mL. Enjuague la cacerola con 5 mL de HNO3 concentrado y
agrguelos a la muestra; adicione 10 mL de H2SO4 concentrado y unas pocas perlas de vidrio;
evapore sobre una placa caliente(dentro de una campana extractora) hasta que los humos
densos blancos de SO3 aparezcan en el frasco, sin continuar el calentamiento ms all de dicho

punto. Si la solucin no es clara, agregue 10 mL de HNO3 concentrado y repita la evaporacin

hasta la aparicin de los humos densos blancos de SO3. Asegrese que todo el HNO3 ha sido
removido, lo cual lo indica la claridad de la solucin y la ausencia de humos carmelitosos en el
frasco.
c) Enfre a temperatura ambiente y diluya con cuidado hasta 50 mL con agua
redestilada. Caliente hasta cerca del punto de ebullicin y filtre a travs de un crisol de
porcelana o de vidrio en un frasco muy limpio. Enjuague el frasco de la muestra con 2
porciones de 5 mL de agua redestilada, pasndolas a travs del crisol para lavar cualquier
residuo sobre el filtro. (Se prefiere un aparato de filtracin que descargue directamente en un
frasco volumtrico de 100 mL). Transfiera el filtrado a un frasco volumtrico de 100 mL y
enjuague el frasco de filtracin con 2 porciones de 5 mL de agua redestilada, agregando dichos
enjuagues al frasco volumtrico.
Diluya hasta la marca de 100 mL y mezcle vigorosamente. La solucin resultante
es aproximadamente 3 N en H2SO4. Tome la porcin de alcuota requerida para la
determinacin del metal.

TURBIEDAD. METODO NEFELOMETRICO (18)

1. REACTIVOS
Utilice los patrones de calibracin previstos por el fabricante del nefelmetro disponible o
preprelos a partir de la formacina como se indica en la referencia 18.
2. PROCEDIMIENTO
a)
b)
c)
d)

Calibre el aparato de acuierdo con las instrucciones del fabricante.

Agite la muestra y espere hasta que desparezcan las burbujas que se hallan formado.
Coloque la muestra en la celda del aparato.
Lea el valor de la turbiedad sobre la escala correspondiente del aparato.

3. RESULTADOS
Informe los resultados de turbiedad as:
Turbiedad
UNT

10 40

40 100

100 400

10

400 1000
> 1000

50
100

Unidades de
redondeo

0 1,0

0,05

1 10

0,1

ACIDEZ (20)
1. REACTIVOS
a) Agua libre de CO2: use para preparar los reactivos agua destilada o
desmineralizada hervida durante 15 minutos y enfriada a temperatura ambiente. El pH del
agua debe ser mayor o igual a 6.0 y su conductividad menor de 2
mhos/cm.
b) Solucin tituladora de NaOH-0.02N: diluya 200 mL de NaOH-0.1N a 1000 mL
y almacene la solucin en frascos de poliolefina debidamente protegidos contra la
introduccin de CO2 atmosfrico.
c) Solucin indicadora de pH 3.7: disuelva 100 mg de bromofenol azul, sal
sdica, en 100 mL de agua.
d) Solucin indicadora de pH 8.3: disuelva 0.5 g de sal disdica de fenolftalena
en polvo en 100 mL de agua destilada. Alternativamente disuelva 0.5 g de fenolftalena en 50
mL de alcohol etlico o isoproplico al 95% y agregue 50 mL de agua destilada. Si es necesario,
agregue NaOH-0.02N, gota a gota, hasta que aparezca un color rosado tenue. Tambin se
puede usar como solucin indicadora de pH 8.3 la solucin de 100 mg de metacresol prpura
en 100 mL de agua destilada.
e) Solucin de tiosulfato de sodio 0.1M: disuelva 25 g de Na2S2O3.5H2O y diluya
a 1 L con agua destilada.
f) Solucin estndar de biftalato de potasio 0.05N: triture 15 a 20 g de
KHC8H4O4 y squelos a 120oC, durante dos horas. Enfre en el desecador. Pese 10.0
0.5 g de KHC8H4O4 secos, transfiralos a un frasco volumtrico de 1 L y diluya hasta la
marca.
g) Solucin estndar de NaOH-0.1N: inicialmente prepare una solucin de NaOH
aproximadamente 0.1N, disolviendo 4.2 g de NaOH en agua destilada libre de CO2 y
diluyendo a 1000 mL. Normalice la solucin as:
Coloque 40.00 mL de hidrogenoftalato de potasio, KHC8H4O4-0.05N en un vaso
de precipitados. Titule con NaOH aproximadamente 0.1N hasta el punto de inflexin que debe
estar cercano a pH = 8.7. Determine los mL gastados en la titulacin y calcule la normalidad
del NaOH por la expresin:

40 0.05
mL gastados en la titulacin

Calcule el volumen de solucin de NaOH aproximadamente 0.1N requeridos para preparar 1

litro de solucin estndar 0.1N, mediante la relacin:

100
N

mL solucin NaOH =

Diluya los mL de solucin de NaOH, calculados por la expresin anterior, a 1000 mL y

almacene en botella de polietileno protegida de la introduccin de CO2 atmosfrico.
2. PROCEDIMIENTO
2.1 ACIDEZ TOTAL O ACIDEZ A FENOLFTALENA
a) Seleccione la cantidad de muestra de tal manera que el volumen de solucin
tituladora de NaOH-0.02N gastado sea de 20 a 50 mL para obtener una buena precisin y un
punto de vire claro del indicador. Coloque la muestra en un frasco erlenmeyer.
b) Si existe cloro residual y la titulacin se hace colorimtricamente, agregue 1
gota de tiosulfato de sodio 0.1M y mezcle.
c) Agregue 5 gotas de solucin indicadora de fenolftalena y titule con NaOH0.02N hasta que aparezca y persista el color rosado. Alternativamente titule hasta que el
medidor de pH indique un pH de 8.3.
d) Determine el volumen en mL de base gastados, el cual se llama,
abreviadamente, F.
2.2 ACIDEZ A METIL NARANJA O ACIDEZ A pH 3.7

a) Seleccione la cantidad de muestra de la misma manera que en 2.1. a).

b) Si existe cloro residual y la titulacin se hace colorimtricamente, agregue 1
gota de tiosulfato de sodio 0.1M y mezcle.
c) Agregue 5 gotas de solucin indicadora de pH 3.7. Si aparece coloracin
amarilla titule con NaOH-0.02N hasta obtener color azul. Alternativamente, titule hasta que el
medidor de pH indique un pH de 3.7.
d) Determine el volumen en mL de base gastados, el cual se llama
abreviadamente M.

3. CLCULOS
Calcule los valores de F, acidez a fenolftalena, y M, acidez a metil naranja, en
mg/L - CaCO3 de acuerdo a las siguientes relaciones:
F(mL de base gastados)x0.02x50000
F, mg/L - CaCO3 =---------------------------------mL de muestra
M(mL de base gastados)x0.02x50000
M, mg/L - CaCO3 =---------------------------------mL de muestra
Calcule la concentracin de CO2 libre de acuerdo con la siguiente relacin:
F x 0.02 x 44000
mg/L CO2 = ------------------ = Acidezx
muestra

44
50

mL

de

4. RESULTADOS
Informe los resultados de acidez, as:
Acidez a fenolftalena =__________ mg/L - CaCO3
Acidez a metil naranja = _________ mg/L - CaCO3
Co2 libre

mg/L CO2

ALCALINIDAD (14) (162-Ed) cul es la ms reciente con la cul coincide?

1. REACTIVOS
a) Solucin indicadora de pH 8.3 (ver acidez, 1.d)
b) Solucin indicadora de pH 4.5: disuelva 100 mg de bromocresol verde, sal
sdica, en 100 mL de agua destilada.
c) Solucin tituladora de H2SO4 - 0.02N: diluya 200 mL de H2SO4 - 0.1N a 1000
mL con agua destilada.
d) Solucin estndar de Na2CO3-0.1N: seque aproximadamente 6 g de Na2CO3,
en la estufa, a 250oC, durante 4 horas y enfre en el desecador. Pese 5.3000 g de Na 2CO3 seco
y disulvalos en agua destilada, diluya a 1 L.

e) Solucin estndar de H2SO4-0.1N: inicialmente prepare una solucin de

H2SO4 aproximadamente 0.1N, agregando con cuidado, 3 mL de H2SO4 concentrado a 1 L de
agua destilada. Normalice la solucin de H2SO4 con solucin estndar de Na2CO3-0.1N como
se indica a continuacin:
Tome 20 mL de solucin de Na2CO3-0.1N y dilyalos a 100 mL con agua
destilada. Sumerja en la solucin los electrodos de medida de pH. Descargue, con una bureta,
solucin de H2SO4 hasta que el pH sea igual a 4.5; anote los mL de cido requerido para
neutralizar los 20 mL de solucin de Na2CO3-0.1N como = A.
Prepare 1 L de solucin estndar de H2SO4-0.1N diluyendo, a un litro, una
cantidad de solucin aproximadamente 0.1N igual a 50A.
f) Solucin de tiosulfato de sodio 0.1N (ver acidez, 1.e).
2. PROCEDIMIENTO
a) Llene la bureta con solucin tituladora H2SO4 -0.02N
esperado, asi:

b) Mida el volumen apropiado de muestra para el intervalo de alcalinidad

mL de muestra
100
50
25

Alcalinidad, mg/L-CaCO3
0 - 250
251 - 500
501 - 1000

Coloque volmenes iguales de muestra en dos frascos de 250 mL, uno de los
cuales ser usado como testigo para comparacin de color.
c) Si hay cloro residual, remuvalo agregando 1 gota de solucin de tiosulfato de
sodio a cada frasco y mezclando.
d) Aada 5 gotas de solucin indicadora de fenolftalena a un frasco y mezcle. Si
la muestra se torna rosada hay alcalinidad por carbonatos o hidrxidos (pH>8.3). Aada
lentamente solucin tituladora de H2SO4 agitando constantemente la muestra hasta que el
color rosado justamente desaparezca. Use el frasco sin indicador de fenolftalena como testigo
para comparacin del color. Alternativamente, titule hasta que el medidor de pH indique un
pH igual a 8.3.
el paso f.

Si al aadir fenolftalena la muestra permanece incolora siga directamente con

e) Determine el volumen en mL de cido gastado, el cual se llama,

abreviadamente, F.
f) Aada 5 gotas de indicador de bromocresol verde a ambos frascos.
g) Titule nuevamente con H2SO4 - 0.02N hasta que el color azul cambie a
amarillo. Alternativamente, titule hasta que el medidor de pH indique un pH de 4.5.
h) Determine el volumen total de cido gastado en la titulacin restando a la
lectura final de la bureta el valor de la lectura inicial, la cual es la misma lectura inicial del
paso d. A este valor se llama abreviadamente M
3. CLCULOS
Calcule los valores de F, alcalinidad a fenolftalena, y M, alcalinidad total, en
mg/L - CaCO3 de acuerdo con las siguientes relaciones:

F (mL de cido gastado)x0.02x50000

F, mg/L-CaCO3 = ---------------------------------mL de muestra
M (mL de cido gastado)x0.02x50000
M, mg/L-CaCO3 = ---------------------------------mL de muestra
4. RESULTADOS
Informe los resultados de alcalinidad por hidrxidos, carbonatos y bicarbonatos
de acuerdo con el cuadro siguiente:

RELACIONES DE ALCALINIDAD

Resultado
de la
titulacin

F=0

Alcalinidad
Por
Hidrxidos
como CaCO3

Alcalinidad
Por
Carbonatos
como CaCO3

Alcalinidad
Por
Bicarbonatos
como CaCO3

F<

1
M
2

2F

M 2F

F=

1
M
2

2F

F>

1
M
2

2F M

2(M F)

F=M

COLIFORMES TOTALES. TCNICA DE FILTRO MEMBRANA

1. REACTIVOS
Prepare uno de los siguientes medios de cultivo:
a) Agar de Endo-LES: rehidrate 5.1 g de agar de Endo-LES en 100 mL de agua destilada
con 2 mL de etanol al 95%. Lleve a ebullicin y enfre rpidamente a 45-50oC.No esterilice en
autoclave.
b) Agar MacConkey: rehidrate 4.4 g de agar MacConkey en 100 mL de agua destilada.
Esterilice en el autoclave durante 15 minutos a 121oC. Enfre a 45-50oC.
c) Caldo M-Endo: rehidrate 4.8 g de medio M-Endo en 100 mL de agua destilada con 2
mL de etanol al 95%. Lleve a ebullicin y enfre a menos de 45oC.No esterilice en autoclave. El
medio preparado puede almacenarse en oscuro a 2-10oC durante un perodo mximo de 4
das.
d) Caldo MaConkey: rehidrate 3.5 g de caldo MacConkey en 100 mL de agua destilada.
Esterilice en el autoclave durante 15 minutos a 121oC. Enfre a menos de 45oC.
e) Caldo de lauril triptosa: prepare de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
Antes de la esterilizacin coloque 10 mL de medio nutriente en cada tubo de
fermentacin con vial invertido, o la cantidad requerida para cubrir, por lo menos
parcialmente, el vial invertido despus de esterilizado. Esterilice en el autoclave a 1210C
durante 15 minutos.
Los componentes del medio de cultivo, principalmente la lactosa, se pueden
descomponer a altas temperaturas o perodos prolongados de calentamiento. El tiempo
mximo de exposicin del medio al calor es de 45 minutos, por ello se recomienda precalentar
el autoclave.
El autoclave funciona como una olla a presin: el agua se calienta hasta producir vapor,
el vapor se purga para extraer el aire y se cierra la vlvula de purga; el calentamiento continuo
eleva la temperatura a 121 0C y la presin a 15 lb/pulg2, 1.05 Kg/cm2 o 103 kPa, se mantiene
esta temperatura y presin durante 15 minutos, se apaga el autoclave, se abre muy lentamente
la vlvula de purga hasta alcanzar presin atmosfrica (si se ventila el autoclave rpidamente
el medio hierve y rebosa los tubos), se remueve el material estril y se deja enfriar.
Cuando los tubos de fermentacin son esterilizados en autoclave, se forma un vaco en
los viales invertidos. A medida que los tubos se enfran, los viales invertidos se llenan con el

medio estril. La captura de gas en el vial invertido, producto del cultivo de las bacterias es
evidencia de fermentacin y se considera un ensayo positivo.
f) Solucin patrn buffer de fosfato: disuelva 34 g de fosfato dicido de potasio,
KH2PO4 en 500 mL de agua destilada, ajuste el pH a 7.2 + 0.5 con NaOH-1N y diluya a 1 litro
con agua destilada.
g) Solucin de cloruro de magnesio: disuelva 81.1 g de MgCl2.6H2O en un litro de agua
destilada.

2. PROCEDIMIENTO
a) Prepare cajas de cultivo de petri esterilizadas, de 6 cm, colocando 5 a 7 mL de Agar
de Endo-LES o de Agar MacConkey a 45-50oC.Si se usan cajas de cultivo de otro tamao ajuste
la cantidad para obtener una profundida equivalente de 4 a 5 mm. Alternativamente, coloque
un disco de papel absorbente estril en la caja de petri de 5 cm y satrelo con 1.8 -2 mL de
caldo M-Endo o de caldo MacConkey. Las cajas de cultivo de agar de Endo-Les no utilizadas se
pueden almacenar en oscuro a 2-10oC durante un perodo mximo de 14 das.
b) Ensamble el aparato de filtracin estril sobre el frasco de filtracin. Use unidades
de filtracin estriles al principio de cada serie de filtracin como mnima precaucin para
evitar contaminacin accidental. Se considera que una serie de filtracin se interrumpe cuando
el intervalo entre la filtracin de dos muestras consecutivas es de 30 minutos o ms. Despus
de tal interrupcin esterilice todo el aparato de filtracin antes de usarlo nuevamente. Usando
una pinza, de puntas redondeadas lisas, estril, coloque un filtro membrana estril sobre la
placa porosa del aparato, con la cuadrcula hacia arriba. Asegure cuidadosamente el embudo
de filtracin sobre la base.
c) Filtre, mediante vaco, el volumen de muestra apropiado. En aguas de consumo el
tamao de la muestra est limitado unicamente por el grado de turbiedad o por el crecimiento
de bacterias no coliformes en el medio. El volumen ideal de muestra es aquel que produce de
20 a 80 colonias coliformes y no ms de 200 colonias de todos los tipos en la superficie del
filtro membrana. Analice las aguas de consumo filtrando 100 a 1000 ml, o filtrando varias
porciones mas pequeas demuestra tales como 2 porciones de 50 ml o 4 porciones de 25 ml.
Analice otras aguas filtrando volmenes diferentes, de acuerdo con la tabla anexa,
dependiendo de la densidad bacterial esperada. La figura siguiente indica como preparar las
diluciones. Use siempre pipetas estriles y diferentes para cada transferencia. No prepare las
diluciones bajo luz directa.

Muestra
de
agua

99 ml
agua
dilucin
estril

99 ml agua
dilucin
estril

1 mL
1 mL

1 ml 0.1 ml 1 ml 0.ml

1 ml

1 ml

0.1 ml 0.01 ml 0.001 ml 0.0001 ml

Volumen
real de
muestra
Cuando filtre porciones de muestra o muestra diluida menores de 10 ml agregue
aproximadamente 10 ml de agua de dilucin estril al embudo antes de filtrar, agregue la
muestra o muestra diluida y filtre luego la dilucin completa. Este aumento en el volumen de
agua ayuda a una dispersin uniforme de la suspensin bacterial sobre toda la superficie
efectiva de filtracin.
Enjuague la superficie interior del embudo filtrando 3 porciones de 20 a 30 mL de agua estril
de dilucin. Remueva el embudo de su sitio y con las pinzas estriles remueva el filtro
membrana y colquelo sobre el papel absorbente o sobre la superficie de agar, mediante un
movimiento enrollante, para evitar el entrapamiento de aire. Incube las cajas de petri, en
posicin invertida, durante 22 a 24 horas, a 350.5oC. Incube dos controles preparados al
principio y al final de cada serie de filtracin con 20 a 30 mL de agua de dilucin estril. Si los
controles indican contaminacin descarte todos los resultados de las muestras afectadas y
repita el ensayo.
d) Para el conteo de colonias utilice un estereoscopio de bajo poder (10 a 15
magnificaciones) u otro dispositivo ptico, con una fuente de luz fluoresente blanco fro para
una visin ptima del brillo. Todas las colonias tpicas de coliformes que crecen sobre el medio
tienen un color rosado o rojo oscuro con un brillo metlico superficial cuente las colonias
coliformes tpicas y atpicas. El tamao del rea brillante puede variar desde el de la cabeza de

un alfiler hasta el recubrimiento completo de la superficie de la colonia. Las colonias

coliformes atpicas pueden ser rojo oscuro, mucoides o nucleadas sin brillo se consideran no
coliformes.
3. RESULTADOS
Calcule el nmero total de colonias de coliformes por 100 mL mediante la expresin siguiente:

Total de colonias No. de colonias de coliformes X 100

de coliformes/100mL = ----------------------------------mL de muestra filtrada
Si no se observan colonias coliformes reporte el resultado como: < 1 coliforme / 100 mL
TABLA. VOLUMENES DE MUESTRA SUGERIDOS EN LA TCNICA DE FILTROS
MEMBRANA PARA COLIFORMES TOTALES
FUENTE
ML de muestra a filtrar
Piscinas
100 50
10
1
0.1
0.01
0.001
0.0001
Pozos,manantiales
Lagos, embalses
Bocatomas aguas consumo
Playas
Agua de ro
Agua residual clorada
Agua residual cruda

COLIFORMES FECALES (20)

1. REACTIVOS
Use medio EC. Coloque una cantidad suficiente para cubrir el vial invertido de los tubos de
fermentacin. Esterilice en el autoclave a 121oC durante 15 minutos.
2. PROCEDIMIENTO
a) Rotule un tubo con medio EC, por cada tubo de
fermentacin positivo del ensayo
presuntivo de coliformes. Transfiera, con una aguja de inoculacin, de 3 mm o 3.5 mm de
dimetro, el inculo de cada uno de los tubos positivos del ensayo presuntivo a los tubos con
medio EC. Al hacer la transferencia, previamente agite o mezcle suavemente el tubo del ensayo
presuntivo.
b) Incube los tubos inoculados en un bao mara a 44.50.2oC durante 242 horas. La
profundidad del agua en el bao mara debe ser tal que cubra el nivel superior del medio en los
tubos. Coloque todos los tubos con medio EC en el bao mara antes de 30 minutos despues de
la inoculacin.
c) Registre como positivos los tubos con presencia de gas en el vial invertido. El
resultado positivo indica origen fecal.
3. CLCULOS
Calcule el NMP de coliformes fecales, en la misma forma indicada en el numeral 3 del
ensayo presuntivo de coliformes.
Ejemplo:
mL porcin
tubos positivos

10

0.1

NMP de CF = 70/100 mL