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INDICE
Espectrometra de masas.
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INTRODUCCION
En espectroscopia molecular, lo que interesa es la transferencia de energa de un fotn a una
molcula, pero la idea es la misma. Considere, por ejemplo, dos estados de energa de una
molcula designados como E1 y E2. La diferencia de energa entre ellos es E2-E1, o E. En la
espectroscopia por resonancia magntica nuclear (RMN) stos son dos estados de espn
diferentes de un ncleo atmico; en la espectroscopia de infrarrojo (IR), son dos estados de
energa vibratoria diferentes; en la espectroscopia de ultravioleta-visible (UV-VIS), son dos
estados electrnicos diferentes. A diferencia de la energa cintica, la cual es continua, lo que
significa que todos los valores de la energa cintica estn disponibles para una molcula, slo
ciertas energas son posibles para los estados electrnicos, vibratorios y de espn nuclear. Se
dice que estos estados de energa estn cuantizados. Las molculas se encuentran ms en el
estado de energa menor E1 que en el estado de energa mayor E2. La excitacin de una
molcula de un estado menor a uno mayor requiere la adicin de un incremento de energa
igual a E. Por tanto, cuando la radiacin electromagntica incide sobre una molcula, slo la
frecuencia cuya energa correspondiente es igual a E es absorbida. Todas las otras
frecuencias se transmiten.
Los espectrmetros estn diseados para medir la absorcin de radiacin electromagntica por
una muestra. Con esto como antecedente, ahora se expondrn las tcnicas espectroscpicas
de manera individual. Las espectroscopias de RMN, IR y UV-VIS proporcionan informacin
complementaria, y todas son tiles. Entre ellas, la de RMN proporciona la informacin que se
relaciona en forma ms directa con la estructura molecular, y es la que se examinar primero.
Imanes
En un sistema ideal, T2 tampoco existira. Sin embargo, en sistemas reales, existe una
transferencia de spin entre los ncleos excitados que dispersa la magnetizacin que no
se encuentra en equilibrio.
Por definicin T2, es la componente 'verdadera' de relajacin (vase T2*) hacia las
condiciones de equilibrio, perpendicular al campo magntico ambiente. Por ello, la
relajacin est dominada por interacciones entre los ncleos spinning que ya se
encuentran excitados. Por dicha razn, la relajacin T2 es llamada relajacin
"transversal" o "spin-spin".
Dado que los procesos T2 siguen un decaimiento exponencial, la cantidad T2 se define
como el tiempo requerido para que la magnetizacin transversal del vector alcance el
37% de su magnitud original despus de su excitacin inicial. A diferencia de T1, T2 es
mucho menos susceptible a variaciones en la intensidad del campo B.
5- espectros bidimensionales
Un experimento multipulso contiene etapas de preparacin, evolucin y deteccin. Los
espectros que se obtiene en estos experimentos dependen de la naturaleza de la
preparacin y de la longitud del periodo de evolucin. Lo que ocurre durante el perodo
de evolucin no es detectado directamente, pero puede estimarse realizando mltiples
experimentos con periodos de evolucin de diferente duracin. De esta forma puede
obtenerse informacin sobre dos conjuntos separados de parmetros espectrales: Aquel
que influye sobre la magnetizacin durante el periodo de evolucin y el que acta
durante la adquisicin propiamente dicha. En RMN-2D se utiliza una segunda
transfomada de Fourier para convertir la dependencia temporal durante la evolucin en
una segunda frecuencia, lo que permite disear experimentos de diversa ndole, muy
ricos en informacin.
La idea original sobre RMN-Bidimensional (RMN-2D) se debe a Jeener (1971),
aunque fue llevada a la prctica por Ernst y colaboradores en 1976. La RMN-2D
corresponde a la generacin de espectros de RMN con dos frecuencias como variables
independientes. Estos espectros RMN-2D se generan registrando FID (t2) al final de
una secuencia de pulsos con variacin sistemtica de otro parmetro, ms comnmente
el tiempo de evolucin t1
Los experimentos de ms de dos dimensiones (RMN-3D y -4D) se generan
introduciendo tiempos de evolucin adicionales y se aplican principalmente en el campo
de las biomolculas, donde la complejidad estructural y la superposicin espectral las
hacen necesarias. Entre un par de pulsos. Los FIDs sucesivos se adquieren por
incremento de los tiempos de evolucin y se almacenan como filas en una matriz de
datos, tal como se muestra en la Figura 5.121, donde se comparan las tcnicas 1D y 2D.
El espectro 2D se obtiene por una doble transformacin de Fourier (2D-TF). Esta doble
transformacin consiste en TF unidimensionales a todas las filas y columnas de la
matriz de datos. Una 2D-TF conduce al espectro 2D que muestran picos mezclas de
componentes de absorcin y dispersin que pueden muchas veces corregirse por ciclado
de fases y manipulacin de los datos, resultando en espectros con fases absortivas puras.
Dependiendo de la secuencia de pulsos, se obtienen correlaciones muy tiles entre
diferentes picos de los espectros 1D o se simplifican espectros 1D muy superpuestos por
dispersin en las nuevas dimensiones.
La tabla anterior muestra que los dobles enlaces y los anillos aromticos
producen grandes efectos desprotectores o desapantallantes en sus protones vinlicos y
aromticos respectivamente. En el caso de los derivados aromticos, el campo
magntico externo induce una corriente en el anillo aromtico que se opone a dicho
campo magntico.
Como resultado, los protones aromticos estn desapantallados y absorben a valores
bajos del campo magntico aplicado, de ah que la mayor parte de los protones
aromticos absorben en el rango de 7-8.
Por otro lado, los protones vinlicos de un alqueno estn desprotegidos o
desapantallados por los electrones del mismo modo que se desapantallan los protones
aromticos. Sin embargo, este efecto no es tan grande en el caso del alqueno, ya
que no existe el anillo tan efectivo de electrones que hay en los derivados del benceno.
Una vez ms, en los alquenos, el movimiento de los electrones genera un campo
magntico inducido que se opone al campo magntico externo en la parte media del
doble enlace. No obstante, los protones vinlicos estn en la periferia de este campo,
donde el campo inducido no se opone sino que refuerza el campo externo. Como
resultado de este efecto desapantallante, la mayor parte de los protones del vinilo
absorben entre 5-6 .
Por otra parte, los protones acetilnicos absorben entre 2.5-3 . Esto es debido a que la
densidad electrnica de un triple enlace forma un cilindro que rodea al enlace C-C, de
manera que el protn acetilnico queda situado a lo largo del eje de dicho campo
inducido quedando, pues, completamente apantallado, de ah que este protn se
encuentre a valores de desplazamiento qumico mucho menores que en el caso de un
protn vinlico.
La especie CH5+, ion metonio, ser la que reaccione ahora con las molculas de la
muestra, ionizndolas:
Al ion as originado, con una unidad de masa ms que el ion molecular, se le denomina
ion cuasimolecular. El ion cuasimolecular, se origina casi sin exceso de energa interna,
por lo que no presentar tendencia a descomponerse, y al obtener el espectro de masas,
la seal ms intensa corresponder al pico cuasimolecular.
Los dos mtodos de ionizacin que se han comentado, son con mucho los ms
utilizados; debe mencionarse, no obstante, la existencia de otros mtodos de ionizacin
que se utilizan en ocasiones especiales, tal como puede ser el de muestras de baja
volatilidad. As, pueden mencionarse mtodos como la ionizacin en superficie, en los
que la muestra se vaporiza e ioniza sobre una superficie a elevada temperatura, el
mtodo F.A.B. (FastAtomBombardment) en el que la muestra es ionizada por
bombardeo con iones de elementos ligeros y el mtodo L.A.M.M.A. en el que
vaporizacin e ionizacin se producen por medio de una fuente de radiacin laser, el
mtodo M.A.L.D.I., etc.
Analizadores de masas
A la salida de la fuente de iones, se tiene una mezcla de diversos iones que deben ser
separados para detectarlos de forma individual; para la separacin de estos iones,
existen tambin varios procedimientos posibles. Los analizadores ms utilizados, son el
de campo magntico, el analizador cuadripolar, muy utilizado en equipos combinados
con un cromatografo de gases, y el analizador de trampa de iones.
1.- Analizador Magntico. Una vez que los diversos iones abandonan la cmara de
deionizacin, llevan una cierta velocidad que les ha sido suministrada por el campo
elctrico al que han sido sometidos. La energa cintica de llevan los iones (Ec), sera:
Esta ecuacin muestra que cada especie inica caracterizada por una determinada
relacin masa/carga, seguir, para un valor dado del campo magntico, su propia
trayectoria de radio r.
El analizador de masas de sector magntico, cuyo esquema puede verse en la figura 5,
est provisto de una rendija de salida con el fin de aislar los iones cuyas trayectorias
tengan el radio de deflexin necesario que los dirigir hacia el detector.
Dado que para un potencial (V) y un campo magntico (B) fijados, slo una partcula
describir la curva adecuada para ser detectada, se deber variar bien el potencial, bien
la intensidad del campo magntico para poder detectar sucesivamente todas las masas.
Normalmente, en los aparatos comerciales, se efecta un barrido de campo magntico
para obtener de esta forma un barrido de masas. Las constantes de construccin de un
espectrmetro comercial tpico, suelen ser parecidas a las siguientes:
r = 20 cm
Potencial de aceleracin = 4.800 V
Valor de H = 0 - 15.500 Gauss
Siendo la mxima relacin carga/masa que podr medir un aparato con estas
caractersticas, calculada en base a la ecuacin de trayectoria, de 965.
Los espectrmetros de masas de sector magntico, se suelen hacer trabajar a su mximo
potencial de aceleracin para mejorar su sensibilidad y su poder de resolucin, pero si
se precisa medir relaciones masa/carga mayores de la que puede suministrar el aparato
en estas condiciones, se puede recurrir a disminuir el valor del potencial de aceleracin.
El poder de resolucin (R) de un espectrmetro,
esto es, su capacidad de separar partculas de relacin m/e muy prximas, se define
como:
R = m/m
Siendo m la mnima diferencia de masa que debe tener un ion para ser separado de
otro ion de masa m y ser detectados en el espectro de forma claramente diferenciada. Se
considera que los dos picos estarn suficientemente separados cuando el valle existente
entre ambos sea del l0% de la altura de los picos (figura 6). Los analizadores
magnticos comerciales, presentan poderes de resolucin de 1.000 a 2.000 y permiten
medir la masa nominal de un ion, es decir, su masa redondeada al nmero entero ms
prximo, lo que es suficiente para el trabajo de rutina. El analizador de sector
magntico, presenta un grave inconveniente, y es que cuando se precisa realizar barridos
Teniendo ahora en cuenta que la aceleracin en cada sentido est relacionada con la
relacin de fuerza a masa, las respectivas ecuaciones de movimiento, quedarn como:
Estas ecuaciones muestran que los movimientos de los iones dependen de la relacin
carga/masa, existiendo solamente un pequeo rango de frecuencia en el que la
trayectoria de un determinado ion es estable; fuera de ste, la trayectoria de los
restantes iones los lleva a chocar contra cualquier varilla, lo que origina que el
cuadrupolo se comporte como un autntico filtro de masas. El barrido de masas, se
realiza manteniendo fija la frecuencia del potencial alterno y variando simultneamente
los valores de los potenciales V y V0, manteniendo la relacin entre ellos constante.
Como los analizadores cuadrupolares trabajan slo con campos elctricos, los barridos
pueden ser extraordinariamente rpidos (0,01 s); por otra parte, el analizador
cuadrapolar no precisa rendijas para el enfoque del haz con lo que la sensibilidad del
equipo aumenta bastante. Otra de las ventajas que presenta el analizador cuadrupolar, es
que la escala de masas es lineal con respecto a los potenciales utilizados, de forma que
en los espectros obtenidos por este procedimiento pueden realizarse interpolaciones de
masa con facilidad.
La principal desventaja que presenta este tipo de analizador, consiste en su poder de
resolucin, relativamente pequeo, del orden de 500 a 1.000, y su limitado rango de
utilizacin, ya que slo permite la separacin de iones con relaciones m/e menores de
1.000.
3.- Analizador de trampa de iones.
El analizador de trampa de iones ha sido utilizado, hasta el momento, nicamente como
detector cromatogrfico ms que en sistemas reales de acoplamiento cromatografa de
gases/espectrometra de masas para anlisis estructural. Este tipo de analizador es una
modificacin del analizador cuadrupolar, y est basado en la utilizacin de una zona de
confinamiento electromagntica generada por medio de dos seales de radiofrecuencia.
El analizador de trampa de iones (figura 9) est formado por tres electrodos de
superficie hiperblica; de ellos, el electrodo central es anular, mientras que los
electrodos superior e inferior
Forman el cierre de los extremos del anillo. Los tres electrodos forman una cavidad en
la que se producen la ionizacin, la fragmentacin y el anlisis de masas.
Durante el proceso de anlisis de masas, se aplica entre los electrodos superior e inferior
un potencial de radiofrecuencia de 525 kHz (voltaje de modulacin axial); al mismo
tiempo, sobre el electrodo central se aplica otro voltaje de radiofrecuencia de 1,1 MHz y
de amplitud variable entre 0 y 7.500 V.
Estos dos voltajes de radiofrecuencia dan lugar a un campo electromagntico
cuadrupolar tridimensional en el que quedan confinados los iones con una trayectoria
oscilante estable (figura 10), dependiendo el movimiento exacto de cada ion de los
voltajes aplicados y de su relacin m/e. Para detectar los iones, se altera la seal de
radiofrecuencia del electrodo anular, lo que da lugar a la desestabilizacin de la
trayectoria de un ion de concreto que es eyectado de la trampa. Un cambio gradual en
la amplitud del campo de radiofrecuencia, dar lugar a que los iones sean eyectados de
la trampa en orden creciente de su relacin m/e, lo que dar lugar a un espectro de
masas.
El analizador de trampa de iones presenta la ventaja de ofrecer una sensibilidad bastante
ms elevada que las conseguidas utilizando otros analizadores; al mismo tiempo, su
velocidad de barrido es tambin muy alta, por lo que sus pretaciones como detector
cromatogrfico son francamente buenas. Por otro lado, debe tenerse en cuenta que al
existir una concentracin de iones bastante elevada en el interior de la "trampa", es
relativamente frecuente la existencia de reacciones bimoleculares entre los iones, lo que
puede dar lugar a espectros con esquemas de fragmentacin diferentes a los que se
obtienen por medio de los otros tipos de analizadores.
4.- Analizador de tiempo de vuelo.
El analizador de masas de tiempo de vuelo est basado en un concepto muy sencillo, por
lo que los primeros analizadores fueron desarrollados ya en 1948; no obstante, el escaso
conocimiento de todos los factores que influan en la resolucin junto con algunos
defectos en los diseos iniciales, hicieron que estos analizadores fuesen relegados por
los analizadores de tipo cuadrupolo. En un analizador de tiempo de vuelo, los iones
generados en la fuente son acelerados por medio de un pulso de potencial elctrico, lo
que proporciona a todos los iones del paquete una misma energa que corresponder a:
O bien :
Donde k es una constante que recoge los parmetros de diseo del analizador.
El principal problema de los analizadores de tiempo de vuelo, es que el tiempo que
tardan los iones en alcanzar el detector en un analizador tpico, se encuentra en el
entorno de unos pocos microsegundos, lo que exige unos sistemas de deteccin
extremadamente rpidos. En un analizador de tiempo de vuelo tpico (figura 11) la
muestra es vaporizada y sometida durante un periodo de aproximadamente 1 s a un
pulso de electrones que dan lugar la ionizacin; seguidamente, se aplica un potencial de
aceleracin durante un tiempo menor (100 ns) que el utilizado para la generacin de
iones, de forma que todos los iones de la muestra son acelerados de forma casi
simultnea; acto seguido, los iones alcanzan una zona libre de campo, a lo largo de la
cual se mueven a velocidad constante hasta alcanzar el detector.
Por supuesto, los iones no son generados en la fuente en un punto geomtrico, sino en
un volumen de espacio, lo que da lugar a una cierta dispersin en las velocidades que
alcanzan tras la aceleracin que perjudica, consecuentemente, la resolucin del
analizador. El efecto de dispersin de velocidades tiende a compensarse en un punto, de
nominado punto focal primario, y si el detector se sita en este punto, la anchura del
paquete de iones ser la menor posible y el analizador alcanzar su mxima resolucin;
desafortunadamente, en la mayora de los equipos, la distancia a la que se encuentra el
punto focal primario es demasiado corta (del orden de 10 cm) para proporcionar un
tiempo de vuelo suficiente, siendo sta la principal limitacin de la capacidad de
resolucin de este tipo de analizadores. Si se desea aumentar la resolucin, es necesario
utilizar dispositivos de enfoque secundario tales como reflectrones, etc. Los
espectrmetros de tiempo de vuelo ofrecen dos importantes ventajas sobre los restantes
tipos de analizadores: en primer lugar, su tiempo de anlisis es extraordinariamente
cuando es necesaria una altsima sensibilidad o una extraordinaria resolucin; las placas
sobre las que ha incidido el haz de electrones, se procesan por medio de tcnicas
normales de fotografa y su lectura se realiza por medio de un densitmetro.
Parmetros espectrales.
Anlisis cuantitativo:
Las aplicaciones de la espectrometra de masas para el anlisis cuantitativo son de dos
tipos. El primero est relacionado con la determinacin cuantitativa de especies
moleculares o tipo de especies moleculares en muestras orgnicas, biolgicas y
ocasionalmente inorgnicas. El segundo est relacionado con la determinacin de la
concentracin de elementos en muestras inorgnicas y, en menor medida, de muestras
orgnicas y biolgicas.
-
CONCLUSION.
Los protones en ambientes diferentes dentro de una molcula tienen desplazamientos
qumicos diferentes; es decir, experimentan diferentes grados de proteccin. Los
desplazamientos qumicos () se reportan en partes por milln (ppm) a partir del
tetrametilsilano (TMS). Adems del desplazamiento qumico, un espectro de RMN de
1H proporciona informacin estructural basada en: Nmero de seales, que indica
cuntas clases diferentes de protones hay. reas integradas, que indica las razones de
las varias clases de protones. Patrn de desdoblamiento, que da informacin acerca del
nmero de protones que estn a una distancia de dos o tres enlaces del que est dando la
seal. El desdoblamiento espn-espn de las seales de RMN resulta del acoplamiento
de los espines nucleares que estn separados por dos enlaces (acoplamiento geminal) o
tres enlaces (acoplamiento vecinal). En los casos ms simples, el nmero de picos en los
cuales se rompe una seal es igual a n + 1, donde n es el nmero de protones a los que
el protn en cuestin est acoplado. Los protones que tienen el mismo desplazamiento
qumico no desdoblan su seal entre s.
El 13C tiene un espn nuclear de pero slo alrededor de 1% de todos los carbonos en una
muestra son 13C. No obstante, pueden obtenerse espectros de RMN de 13C de alta
calidad por tcnicas de TF por pulsos y son un complemento til a los espectros de
RMN de 1H. Las seales de 13C estn ms separadas entre s que las seales de los
protones, y los espectros de RMN de 13C son relativamente fciles de interpretar. Los
espectros de RMN de 13C rara vez estn integrados debido a que la tcnica de TF por
pulsos distorsiona las intensidades de las seales.