r

ZspinOBa Cerdn I:rrfa Antonicfa

Jimnez Cervmtes Ycndra
L'rsciAuez Ldpee Sonia

t.

Fecha de t r i i c i o
J
de temiinacin
J ~ a r n t a - e d e l tutor interno
puesto de dscri;:cin'

J T f t u l o d e l proyecto

B r n a d e l tutor

7592789
83325075
84343028
e1336087
23.3.002.88
I n g e n i e r a F)io:;ufi!;ice industrial
o8-p
30 &&ern
Departamento de Inceniern
de ~ o c e s o ae iiidrbuiicp. de
la M v i s i b ~de CEI U&:-I
q de enero de 1588
6 de julio de 1988/
$,I. C. Eduardo 3 , Gonzdlez Hdec.
Profesor asociado IDn Piempo
Completo
V i o s i n t e s i s de Acido C f t r i c o
&
&
Y
&
2c.ctuando
Por

c
''

EIOSINTESIS OE ACIOO CITRIC0 POR ASPERGILLUS

NIGER, ACTUANOO SOBRE GOMA O E MEZPUITE "

I N O I C E
Pg.

I
L

I . INTROOUCCION

c
L

1 .I FERMENTACION

1.2 ACIOO CITRIC0

6
6

-1.2.1 Antecedentes
1.2.2 Propiedades F s i c a s y Qumicas

1.2.3

1.2.4 Mtodos de Produccin

1.2.5 Produccin Mundial

16

1.2.6 Aplicaciones

18

Acido C t r i c o

24

1 . 3 ASPERGILLUS NIGER

32

1.3.1

34
36

2 . OBJETIVOS

45

2.1 OBJETIVO MEOIATO

49

2 . 2 OBJETIVOS INMEDIATOS

49

3. MATERIAL, REACTIVOS Y TECNICAS

3.1

r
i

50

EQUIPO

50

3.2 blATERIAL

54

3.3 MEDIOS DE CULTIVO, FORMULAS Y PREPARACION

55

3.3.1

r
r

Medios de Propagacin

55

3.3.2 Medios de C u l t i v o para Fermentacin

55

Sumergida

3.3.3 Preparacin de l o s Medios de

32

1.4 MEZPUITE

r
I

Caractersticas

1.3.2 A p l i c a c i o n e s en l a I n d u s t r i a

1 . 2 . 7 Bioqumica de l a Formacin de

r
L

Estado Natural

Cultivo

./.

57

METOOOLOGIA

4 .,I

4;2

'

59

PREPARACION DE MUESTRAS

59

METOOOS QUIMICOS OE ANALISIS

59

4.2 .I Determinacin de P r o t e n a S o l u b l e

59

4.2.2

64

4 . 2 . 3 Determinacin de Acido C t r i c o

Oeterminecin de Azcares Reductores

Medio de Fermentacin

en e l
66

4 . 3 METOOOS MICROIOLOGICO5
5 . RECULTAOOC
5.1 GOMA DE MEZPUITE

71

5.2 CEPA O A s p e r g i l l u s n i g e r

71

5.2.1

I d e n t i f i c a c i n de A s p e r g i l l u s n i g e r

5.2.2

Preadaptacin y Adaptacin de
Aspergillus niger

70
71

el Sustrato

5.'3 FERMEMACION

71
74

75

5.3.1

Carga, de inculo

78

5.3.2

Comportamiento de algunos Parmetros

78

5.3.3 Maximizacin d e l Medio de C u l t i v o

para Fermentacin Sumergida
5.3.4

79

Maximizacin d e l Proceso para

Produccin de Acido C t r i c o

84

6 . OISCUSION

95

7 . CONCLUSIONES

99

8 . RESUMEN

102

9 . BIELIOGRAFIA

104

r
i

I.

I N T R O D U C C I O N

r
I

1 . I FERMEMACION

Las fermentaciones forman parte de l a h i s t o r i a d e l horn

b r e . Les ms antiguas r e g i s t r a d a s l l e g a n a 5000 aos A . C .

en fermantaciones de leche y leguminosas por l o s antiguos

chinos y

japoneses. L a cerveza y e l vino eran y a obtenidos

por l o s griegos y los rabes en 200 A.C.

A pesar de esto l a

comprensin d e l fenmeno de l a traneformacin de l a materia

empieza a p a r t i r de los experimentos de Pasteur a mediado8

del s i g l o X I X .

Hasta 1860 e l conocimiento en e l campo se

re

duca a l a fermentacin a l c o h l i c a , a pocos procesos a e r b l

cos [vinagre) y a rudimentarias t c n i c a s ds i n o c u l a c i n ,

--

aereacin, pastsurizacin y limpieza de l a p l a n t a y equipo.

E l avance f u acelerado a p a r t i r de 1880. De 1880-1310 hubo

productos fermentados para uso en alimentos [cido l c t i c o

y levadura], materias primas pera l a i n d u s t r i a qumica [ e t s

n o l ) y t e x t i l [amilaaes]. Adam&

se avanz en algunas.t&nL

cas como aereecin de c u l t i v o s y aeepsia. Ds 1910-1920 l a

guerra o b l i g a los grupos da i n v e s t i g a c i n a dedicarse a

aspectos puramente p r & c t i c o e . Hubieron avances importantes

en medios de c u l t i v o y t c n i c a s de inculo puro, gracias e

r
L

l a demanda de acetone y butanol por fermentacin.

De 1920-1940

ya se planea claramente la a l t e r n a t i v a a

l a s Fermentaciones como una opcin econmicamente j u s t i f i c e

i

b l e . Se d e s a r r o l l a n procesos para l a obtencin de l o s ci-dos glucnico y c t r i c o , de l a sorbose [intermediario en la

s n t e s i s de vitamina C] y de l a r i b o f l a v i n e .

r
L

1940-1950.

En a s t a poca sa encuentra el avance c u a l i -

t a t i v o y c u a n t i t a t i v o de mayor importancia. En trminos de

sustancias, se d e s a r r o l l a n procesos para obtencin indua---

t r i a l de agentes terapeuticos [ p e n i c i l i n a ,

treptomicina,

tinasa]

vitamina 6-12,

etc],

y productos qumicos [&ido

b a c i t r a c i n % , es-

enzimae [ c a l u l a a a s y pez
itacnico y 2-ceto-glu-

cnico].

Se d e s a r r o l l a e l c u l t i v o sumergido y l a e a t e r i i i z ~

cin de a i r e por f i l t r a d o , adems se establecen lam prime-r a s herramientas d e l estudio de fermentaciones a n i v e l l a b 2

ratorio.

1950-1960.

Este periodo ee o a r a c t e r i z a por l a introd-

cin de proceeos que u t i l i z a n microorgarnismor para t r a n a f o ~

maciones de eeteroides (cortizona,

hidrocortizone]

como.pa-

so c r t i c o en l a s n t e s i s qumica, ae dan avances importen-

t e e en aspectos geneticos de fermentaciones [&cid0 glutimico y g l i c i n e ]

y en l a produccin de microorganismoa para a-

limento [biomass y protena u n i c e i u l a r o 80'1.

So i n i c i el

estudio del control e s t r i c t o de ferrnentacionea greciais e l

L

d e s a r r o l l o de medidores c o n f i a b l a e CpH, temperatura, oxlgeno, a n i i e i e qumico automatizado,

COZ,

etcl.

$960-i980. Aunque l a s t c n i c a s de i n g e n i e r i a no lograr o n un avance t a n notable, excepcin hecha de enzimas inmov i l i z a d a s , se ha incrementado

la productividad de 10s proco

sos g r a c i a s a nuevos avances en e l rea de la gentica y l a

bioqurnica. Los campos

m8s

desarrollados son l a produccin

de antibiticos,enzimae, aminocidos, p r o t e n a u n i c e l u l a r ,
etc.

Las nuevas direcciones de i n v e s t i g a c i n abarcan:

Produccin de protena u n i c e l u l a r para consumo humano.

Nuevos a n t i b i t i c o s para c o n t r o l de plagas y para la a l i mentacin animal.

S n t e s i s de compuesto6 t e r a p u t i c o s .
S n t e s i s de productos qumicos como respuesta a i incremt o de 10s p r e c i o s d e l p e t r l e o .

Produccin de pigmentos, saborizantes y fragancias.

Mejoramiento da l a tecnologa de l a s fermentaciones en

--

trminos de sensores de variablela ambientales y acopla--miento a computadoras para efecto de c o n t r o l .

C u l t i v o de t e j i d o s de p l a n t a s [para

ia produccin da a i c s

l o i d e s ] y de animales Calgunes sustancias terap6utioes

cz

mo s n t i c u a r p o s l .

U t i l i z a c i n de deshechos a g r c o l a s ,

i n d u s t r i a l e s y municA

pales.

Adaptacin a nuevos avancee de l a i n g e n i e r a gentica como

la produccin de i n s u l i n a por microorgsnismos.

Tipos de C u l t i v o :
Existen 2 t i p o s de c u l t i v o usados industrialmente y en
laboratorio:

s l i d o s y sumergidos. La s e l e c c i n d e l t i p o de

c u l t i v o determinar e l t i p o de fermantedor a u t i l i z a r . Las

d i f v r e n c i a s entre l o s dos t i p o s de c u l t i v o e e dan e nivel
de: e ) transferencia de masa entre medio y microorganismo

que crea d i f e r e n t e s microambientes y consecuentemente un dL

f e r e n t e comportamiento y b ] diseo, operacin y c o n t r o l .

C u l t i v o s sobre medios s l i d o s . Son l o s c u l t i v o s ms an

t i g u o s . L o s primeros procesos para produccin de p e n i c i l i n a
y de amilssas se llevaban acabo por e s t e mtodo. Be inocu-l e n s u p e r f i c i e s n u t r i t i v a s como a g a r y nutrientes, c e r e a l e s
o leguminosas, e t c , que sR encuentt-an sobre charolas o tam-

bores r o t a t o r i o s y los microorganismos crecen en l a superfi

tie. Generalmente l a t a s a de crecimiento t i e n e do6 fases:

l a primers a l i n i c i o de l a fermentacin donde l o s nutrien-tee se encuentran en la s u p e r f i c i e , siendo e l crecimiento

limitado por el microorganismo; y una segunda fase e n donde

l e l i m i t e c i n es d i f u s i o n a l . Los fermentadores son, pare a s

t e t i p o de c u l t i v o , charolas, fermentadores r o t e t o r i o e , t o y

n i l l o s s i n f i n , e t c . Las v a r i a b l e s ambienteles en l o s proceeo8 de c u l t i v o s l i d o son muy d i f c i l e s de c o n t r o l a r (por

ejemplo: pH, concentraciones de s u s t r e t o , o t c ] .

C u l t i v o s sumergidos [son l o s sistsmer ms popularer].

En este caso, l o s nutrientes se encuentren d i s u e l t o s o en

suspensin en a l medio. Los problemas d i f u s i o n e l a s son meno

1
5

res puosto que se pueden modificar [ p o r ejemplo a g i t e c i n ] ,

y el c o n t r o l da v a r i a b l e e ambientales es ms s e n c i l l o por

e x i s t i r nicamente dos f a s e s : l a b i t i c a [microorganismos]

y 1s a b i t i c a [medio acuoso ms n u t r i e n t e e l . E l fermentador
m&,comn

es a l tanque agitado en operacin intermitente,

semi-intermitente

y continue, aunque se u t i l i z a n eventual--

mente fermantsdores t u b u l a r e s operados con y s i n r a c i r c u l a cin da c l u l a s . Las concentreciones que se manajan en e s t e

t i p o d e c u l t i v o r a r a vez pasan de 50 gramos de c 8 l u l a s en

base seca por l i t r o de medio.

Las fermentaciones puedan tambin d i v i d i r s e en cuanto

a l nmero de especies que p a r t i c i p a n en el p r o c e s o , , e n :

Fermentaciones en c u i t i v o puro. P a r t i c i p a s o l o una especie d e microorganiemoo. Este m a el caso de l a mayora da

l a s fermentaciones. Esta especie a s seleccionada del ambien

t e y adaptada e l proceso.

Fermentaciones an c u l t i v o mixto. P a r t i c i p e n dos o ms

e s p e c i e s en ei c u l t i v o que inberaccionsn entra s i a t r a v b

d e l medio. E l nmero de especies y e l t i p o pueden s e r iden-

matemti
-

t i f i c a d o s o no dependiendo del t i p o de proceso. Este t i p o

de fermentaciones eon l a s ms d i f c i l e s de modelar

camente y y hasta ehore, su uso ha s i d o r e s t r i n g i d o a d e r - -

tae fermentaciones e p l i c e d a s m a l mentos y tratamientos de

deeschos. A pesar de su poco usoy e x i s t e un gran inters

--

por e l d e s a r r o l l o de sistemas mixtos de microorganiemoe dado

que s e ha demoetrado que pueden superar, en c i e r t o s c a s o s , a l

P-

comportamiento de un c u l t i v o puro.

(I)

P
i

1.2 ACID0 CITRIC0

r
L

1.2.1 ANTECEDENTES

E l a l q u i m i s t a V i c e n t i u s Bellocaceneie, h a c i a e l ao de

r
L

I:

c
c
c

ri

c
c

Ii-

r
i

1200 observ que e l jugo de limn y e l de l a l i m a contenan

una sustancia c i d a e s p e c i a l y aludi en au Speculum NBtut-5
l e , e l uso d e l jugo de limn como dieolvente c i d o . L i e b i g
l a reconoci en 1838 como un & i d o

t r i b s i c o ; en 1880 fue

preparado sintticamente por Grimoux y Adam partiendo de l a

glicerina.

E l cido c t r i c o se a i s l por primera vez en 1884 por

Bcheele en forme c r i s t a l i n a d e l jugo de limn

y ms t a r d e

Wehmar i n d i c que algunos mohos u hongo$ podan p r o d u c i r &i

do c t r i c o cuando se desarrollaban en soluciones azucaradas.

E l cido sa encuentra como constituyente n a t u r a l de l o s

f r u t o s c t r i c o s como p i s , perse, melocotones, higoa y o t r o s
frutos

y tejidos.

E l cido c t r i c o que ea obtiene de estos

productos se denomine Acido C t r i c o Natural, en r e l a c i n e l

que

obtiene por fermentacin.

Los

hongos que W r h m m r El8931 mencion como productores

de c i d o c t r i c o p o r fsrmentacin fueron:

-----cido -

Citromyces

p f e f f e r i a n u s y Citromyces g i e b e r , stos producen e l

a p a r t i r de soluciones n u t r i t i v a s de sacarosa que contienen

carbonato de c a l c i o , m8s t a r d a Wehmer encontr que tambin
'

lo producan P e n i c i l l i u m luteum y Mucor p i r i f o r m i s .

En 1917, C u r r i e d e l Departamento de A g r i c u l t u r a de l o s
Estados Unidos p u b l i c

los resultados de una importante i n -

v e s t i g a c i n sobre l a produccin de cido c t r i c o con una

va

r i e d s d da A a p e r q i l l u s n i q e r ; en 1934 Doelgar y Prascott corroboraron l o s reaultados de C u r r i e , contribuyendo con sus

aportaciones a l conocimiento de a s t a fermentacin.

(L.3)

1 . 2 . 2 PROPIEOADES FISICAS Y QUlMI CA S

Ei

c i d o c t r i c o c r i s t a l i z a de soluciones acuosas f r e s

en forma de monohidrato,

los c r i s t a l e s son i n c o l o r o s y t r a n
-s

l c i d o s , pertenecen a l sistema ortorrmbico,

su densidad ea

de 1.542 g/cm3; m l monohidrato d e l cido c f t r i c o es e s t a b l e

en e l a i r e de humedad normal, psro.en e l a i r e seco o a l va-*
c o con & i d o

eulFrico p i e r d a agua, l o s c r i s t a l e s monohi--

dratedDa se ablandan a temperatura aproximada de 70-75'C

--

con prdida de sgua; fundan completamente E n t r e 135-152'C,

si e l calentamiento
den a 100'C.

se hace rpidamente

los c r i s s a l e a fun--

E l c i d o c t r i c o c r i s t a l i z a de solucionee ecuosas con-

centradas y c a l i e n t e s , l a temperatura media de t r a n s i c i n

!0.15'C,

de monohidrato a l a forma anhidra es de 36.3

los

c r i s t a l e s anhidros son t r a n s l c i d o s e i n c o l o r o s cuya densidad es de 1.665 g/cm3.

E l c i d o c t r i c o e5 pticamente i--

n e c t i v o y no m a n i f i e s t a p i e z o e l e c t r i c i d a d ; e s un cido o r g i
n i c o f u e r t e como

lo i n d i c e la constante de d i s o c i a c i n da1

primar tomo de hidrgeno que e s de 8.2 x

a IB'C,

las

constantes de d i s o c i a c i n d e l segundo y t e r c e r tomos de h i

drgeno son de 1.77 x

y 3.9 x IO-'

respectivamente. E l

c a l o r de combustin a 20'C

es de 471.9

Kcal/mol para e l 6 c i

do c t r i c o monohidratado; l a t e n s i n s u p e r f i c i a l en contact o con e l a i r e es de 68.51 dinas/cm a 30'C;

e l coeficiente

de conductividad e l c t r i c a e 25'C es de 8.0 x

mole
-

Tambin s e l e conoce como e l c i d o 2 - h i d r o x i - 1 , 2 , 3 - p r o

p a n o t r i c a r b o x l i c o , HOOCCH2-HOCCOOH-CH$OOH,

cuyo peso

cular es de 192.12. Es bastante s o l u b l e en egus, medianame=

t e s o l u b l e en a l c o h o l y poco s o l u b l e an t e r .

q,$,&,?i

1 . 2 . 3 ESTADO NATURAL

E l c i d o c t r i c o abunda en l a n a t u r a l e z a , s e encuentra

muy extendido en e l r e i n a vegetal y en e l r e i n o animal. Oen

t r o del reino vegetal,

es c o n s t i t u y e n t e de limones, l i m e s ,

naranjas, t o r o n j a s ; por
tricoe; e l

S-BX,

lo

jugo de limn

general en todoe l o s f r u t o s o - -

lo contiene

tambin se encuentra en

los

en concentraciones de

endrinos, l o a arndanos,

l a s g r o s e l l a s y l a remolacha;
encuentra en l a s cerezas,

j u n t o con e l & c i d 0 mlico se

frambuesas y fresas;

r i c o se encuentra como cido l i b r e o como s a l ,

con e l t e r t i
en l e a semi-

l l a s y en l o s jugos de gran variedad de p l a n t e s y f l o r e s .

E l cido c t r i c o es un componente d e l vino,

se encuen-

t r a en porciones da 0.4

g/l,

de 1-4 g/1 en l a leche,

en pr=

ductos l c t e o s y en t e j i d o s y l q u i d o s animales. E l i n c i -

r
L

t r a t o e x i s t a normalmente en l a o r i n a y en l a sangra.
r o de

la leche contiene aproximadamente 25 mg/l

El

suo

y diariamen

t e se excretan en l a o r i n a de los seres humanos aproximadamente 0.5

g/i.

(3.5)

r
i
1 . 2 . 4 METOOOS DE PAOOUCCION

E l cido c t r i c o se puede obtener mediante:

Fermentaciones de soluciones azucaradas p o r hongos.

E x t r a c c i n d i r e c t a d e l jugo da f r u t a s c t r i c a s [limones,
limas,

IL

naranjas,

etc].

E x t r e c c i n d e l jugo de l o s r e s i d r o s da f r u t o s c t r i c o s en
l a s f b r i c e s de conservas.

Estas son l a s t r e s formas importantes para l a obtencin

r
i
i

r
!
L

d e l cido c t r i c o ,

l a recuperacin es esencialmente i g u a l

en l o s t r e s procedimientos.

11

Algunos investigadores afirman que e l h i e r r o y el zinc

aceleren l a Formacin d e l cido c t r i c o , o t r o s opinan que

estimulan e l crecimiento de micelio s i n aumentar l o s rendimientos, hay o t r o s autores que opinan que l a s s a l e s de z i n c
tienen e f e c t o s i n h i b i t o r i o e sobre l a produccin de cido
*

CL

t r i c o . 3L

Perlam, Oorrel y Johnson en 1964 estudiaron l o s efec-t o s de l a a d i c i n de iones metlicos a medios p u r i f i c a d o s

de cido c t r i c o por e l mtodo de c u l t i v o s u p e P f i c i a l ,

em--

pleando 55 r a z a s de A s p e r g i l l u s n i g e r y l l e g a r o n a l a con-c l u s i n de que l a concentracin ptima de cada i n metlico

pera estimular l a produccin del cido v a r a segn l a raza
da A s p e r g i l l u s n i q e r , adems de i n c l u i r iones de aluminio,
cromo, h i e r r o y manganeso qua estimulan l a produccin del

cido, por lo tanto l a susencis o presencia de i n d i c i o s m nimos de c i e r t o s elementos en e l medio, pueden tener un may
cado efecto sobre e l resultado obtenido. 181

Otro de los f a c t o r e s que influyen notablemente durante

l a fermentacin e s e l pH; se ha demoetrado que regulando el
pH y l a s s a l e s i n o r g k i c a s s e puede v a r i a r considerablemente
l a produccin de cido c t r i c o y o x l i c o . Cuando se emplean
l a s condiciones

ms Favorables para l e produccin de cido

c t r i c o s e suprime c a s i por completo l e formacin de cido

o x & l i c o , esto s e l o g r a con u n pH b a j o , adems s e reduce a l
mnimo e l p e l i g r o de conteminacin y f a c i l i t a l a e e t e r i l i z s
cin. En general,

los hongos que mejor producen cido c i t r i

c
c
c

12

c
c

co t o l e r a n

los valores de pH bajos. 191

Cuando se t r a t a de una fermentacin s l i d a

los f a c t o r e s

que i n f l u y e n son e l rea s u p e r f i c i a l y e l volumen. En l a

fsr

mentaoin c f t r i c a l a conversin de azcares as efectuado

--

p o r ' l a s enzimas i n t r a c e l u l a r e s y por tanto t i e n e n lugar de=

El

--

azcar pase a l i n t e r i o r de l a s c l u l a s por smosis y por

--

t r o da l a s c l u l a s v i v a s , que constituyen e l m i c e l i o .

consiguiente tanto este proceso de d i f u s i n como e l enzim-

t i c o son l o s que determinan l a duracin del periodo de f e r -

mentacin, de acuerdo con esto en un r e c i p i e k t e profundo de

r
L

gran capacidad l a formacin d e l cido c t r i c o ser r e l a t i v a

r
L

mente l e n t a por que l a capa de hongos ser pequea en cornpa

r a c i d n con e l volumen, en cambio cuando se usan bandejas o
r e c i p i e n t e s poco profundos

58

consigue una Bran s u p e r f i c i e

de contacto y como consecuencia ee t i e n e una gran superfi--

c i e de m i o e i i o y l a conversin de azcar en cido c t r i c o

se efecta rpidamente.

Son muchos los f a c t o r e s qua hay que tomar en cuenta

--

cuando se est efectuando este t i p o de fermentacin, algunas

se l e s debe dar mayor n f a s i s pero en general todos son de

gran importancia en r e i e c i n a 105 r i e s g o s y consecuencias

que ee exponen cuando cualquiera de stos rn es manejado h&

bilmente y de acuerdo a l a s neceaidades d e l microorganismo.

Uno de los factores ms importantes es l a temperatura, ya

que s i durante l a fermentacin no se usa l a adecuada i n f l u i

r directamente sobre e l deeerrollo d e l hongo y e i no hay

13
buen d e s a r r o l l o s e veren a f e c t a m s el tiempo de fermentacin
y l a conversin de azcar en cido c t r i c o .

La temperatura

empleada depender d e l microorganismo y de l a s condiciones

de fermentacin. ( i 0 , i i ~

E n e l caso de fermentacin sumergida Wehmer en 1912 i n

t e n t p r o d u c i r cido c t r i c o a p a r t i r de una s o l u c i n n u t r i t i
va de sacarosa con c a l y con paso de a i r e e s t r i l ,
c t r i c o lo obtena como c i t r a t o de c a l c i o ,
sin era b a j a ;

e l cido

pero l a conver--

en 1926 B l e y e r d i o a conocer un proceso en

e l c u a l se produca &,ido

c t r i c o en tanques abastecidos de

a i r e con a g i t a c i n mecnica ocasional pero Schereyer e l 1928

descubri que l a a g i t a c i n mecnica contnue y l e a i r e a c i n
aumentaban considereblemenze l a acidez t o t a l pero e l cido
que se produca en mayor c a n t i d a d era e l glucnico y e l c t r i c o se obtena en cantidadee s i m i l a r e s a l o s r e s u l t a d o s
anteriores,

es d e c i r ,

un rendimiento b a j o en r e l a c i n a l

que se obtena en fermentacin s l i d a .

--

Con respecto a l m i c o '

organismo para e s t e t i p o de fermentacin se encontr que l a s

esporas jvenes son mejores que l a s v i e j a s para p r o d u c i r e l
cido c t r i c o y que l a temperatura de almacenamiento de l a s
esporas t i e n e gran e f e c t o sobra su capacidad para p r o d u c i r
e l &ido.

i11,Ili

P e r l a m i n d i c a tambin que l a temperatura desempee un

papel en l a produccin d e l & i d o

c t r i c o y como r e g l a gene-

r a l l a mayora de l a s r a t e a producen una mayor c a n t i d a d a

una temperature de 26-30'C,

p o r lo t a n t o y de acuerdo a l o s

r e s u l t a d o s obtenidos por o t r o s i n v e s t i g a d o r e s a l usar una

14
tmnperatura que est comprendida entre este rango favorecer&
l a obtencin d e l cido en mayor cantidad. (8)

En general, segn Karow y Waksman l a fermentacin c - t r i c e es muy p a r t i c u l a r en c i e r t o s aspectos como son: l a r=

za d e l hongo empleado, e l uso de un medio especial pars e l
d e s a r r o l l o y acondicionamiento d e l hongo, l a a i r e a c i n d e l
medio con oxgeno o a i r e a p r e s i n junto con a g i t a c i n men i c e a s como e l uso de un medio adecuado para incrementar
l a produccin de cido c t r i c o ; segn l o s autores l a fermeE
t a c i n se puede d i v i d i r en dos etapas, una de crecimiento y
o t r a de fermentacin que viene siendo l a ms importsnte y a
l a vez l a ms d e l i c a d a ya que una pequea v a r i a c i n en l a s

condiciones establecidas puede causar s e r i o s problemas en

e l rendimiento d e l cido c t r i c o .

2.-

(4,io)

Extraccin Directa

E l cido c t r i c o adems de obtenerlo por Fermentscin

es obtiene por extraccin d e l jugo da, algunoa f r u t o s c t r i cos como e l limn'que contiene entre 5 y 8% de & i d o
o una variedad que se c u l t i v a en

cue l i m o n i a ,

ctrico

la India denominada C i t r i -

adems se puede obtener de l a p i a .

En l a s f b r i c a s

en l a s que l a obtencin da, cido c t r i

co es por extraccin de c t r i c o s , estos l l e g a n en camiones

o en vagones de f e r r o c a r r i l y son trasladados s s i l o s de a l

mecenamienta, de ah pasan a tanques lavadorea pare l i m p i a r

15

[:

r
L

lo5 de suciedad y de materias extraes que tengan en su euperficie,

despus ee c l a s i f i c a n sobre bandas de inspeccin

para separar l o s frutoe i n s e r v i b l e s y pasa luego a l a mqui

na mondadora. La corteze se use para obtener e l a c e i t e ese=
c i e l d e l limn. L a porcin i n t e r i o r blanca de l a corteza se

emplea pare l a obtencin de p e c t i n a que es un subproducto

valioso,

luego l a pulpa se desmenuza y ee a p l a s t a en gran--

r
L

r
L

des r o d i l l o s , en

loa cuales

es percialmente extrado e l

ju-

go, se t r a s l a d a a unos tanques medidores, l a pulpa se somete

--

genereimenta a l a s l i x i v i e c i o n e s [dos) con e l l q u i d o de

una extraccin a n t e r i o c , los jugos reunidos son muy visco-so8 ya que contienen 0.5% de p e c t i n a , se recogen en tanques

de madera o acero inoxidable,

en estos se deja e l jugo de

4-10 d a s para que s u f r a una fermentacin espontnea que es

necesaria para poder f i l t r e r

los ezcares, p e c t i n a y las p r o t e n a s . Cuando esta fermenta

ri

cin he alcanzado un punto que permita l a f i l t r a c i n , se as

de una ayuda f i l t r a n t e ,

r
i

por

lo general t i e r r a de diatomeas,

l a f i l t r a c i n se hace en c a l i e n t e y mientras se c a l i e n t a y
se empieze a f i l t r e r

[:

e l jugo ya que se h i d r o l i z a n

e l l q u i d o s e a g i t a mec&icarnenta,

pare

que les porciones que se estn F i l t r a n d o sean homogneas,

SE

usan F i l t r o s prensa.

3 . - Extraccin de Raeiduoe

En este caso as extrae e l

r
i

jugo de

los residuos de f r u -

toe c t r i c o s empleadoe para elaborer conservas, e l u t i l i z a -

16

ri

do generalmente es l a p i a .
r i o s . 14,5,71

4.2.5

II

t-

PROOUCCION MUNDIAL

Hasta 1940 l a produccin mundial s e obtena da f r u t o s

Sigue un mtodo s i m i l a r el a n t e

c t r i c o s pero en los l t i m o s aos sa han puesto el orden d e l

d a los procesos p o r fermentacin s l i d a .

MBs terda-br jess-

r r o l l a r o n los sistemas de fermentacin sumergida.

E l c i d o c t r i c o s e f a b r i c a p o r muy pocas i n d u s t r i a s y

s e mantiene en secreto l a t c n i c a da su produccin por lo

r
L

que en l a s t c n i c a s o patentes publicadas en r e v i s t a s se e=

cuantra una i n f o r m a c i n l i m i t a d a .

La produccin de 6 c i d o . c t r i c o en e l mundo es de apro-

l a mayor p e r t e de l a s cuales

ximadamente I O 0 O00 toneladas,

se produce p o r fermentacin de hongoa,

!-

tiempos s e t e n a que e x t r a e r do f r u t o s c t r i c o s con gran

c
L

r
L

c
c

r
i
r
i

m i e n t r a s que an o t r o s

--

costo y l i m i t a c i n en e l producto.

--

Antes de que se d e s e r r o l l e r e l a p r o b c c i n de cido

p o r e l metodo de fermentacin,

m&

l a i n d u s t r i e de e x t r a c c i n

i m p o r t a n t e s e encontrabe en I t a l i a ,

tambin se produca

en gren c a n t i d a d en C a l i f o r n i a y en lam A n t i l l a s .

E n l a p=

ca de produccin mxima de cido c t r i c o en I t a l i a (19271,

no solo s e empleaban los f r u t o s do desecho sino tambin
t o s maduros de buena c a l i d a d .

frs

E n C m l i f o r n i a se empleaban

--

17

los limones m a l conformados, con c i c a t r i c e s , de tamao peqse

o o que por a l g n o t r o motivo no t u v i e r a n buen aspecto

ni

f u e r a n de buena c a l i d a d .

A nivel industrial,

l a produccin de & i d o

c t r i c o por

fermentacin se considera como un gran progreso en i a m i c o

biologa industriel;

-Es

an 1922 en I t a l i a se obtuvo l a mayor

produccin mundial de c i t r a t o de c a l c i o empleado pare l a

produccin de c i d o c t r i c o ,
tadoa Unidos,

Inglaterra,

l e mayor p a r t e se export a

Francia,

s i n embargo en 1927 as

poco el c i t r a t o da c a l c i o que se importa an los Estados U n i

dos.

En los Estados Unidos l a produccin ea da 50 O00 toneladas anuales,

ms d e l 60% se d e s t i n a a bebidas y alimentos,

20% a productos farmacuticos y el r e s t o a diversos f i n e s i n

dustrialea.

S u produccin a aumentado considerablementa en

los l t i m o s aos, a pesar de eso l a produccin es inwfi--c i a n t e para e a t i a f a c e r l a demanda i n t e r i o r a s como l e s exportaciones,

p o r lo que,

conatantemente se hacen nuavos ee-

-los & t o-

t u d i o a o se d e s a r r o l l a nuevas t c n i c a s para l a obtencin

d e l c i d o p o r los mtodos da fermentacin como por
doe de e x t r a c c i n de c t r i c o s .

Anteriormente el & i d o

c t r i c o a pesar de aer una mate

r i a prima de gen importancia an l a i n d u s t r i a f a r m a c h t i c e y

a l i m e n t a r i a era un producto de i m p o r t a c i n y a que no se
cuenta con ia produccin s u f i c i e n t e

an

---

teniendo l o a r e c u r -

1 _ 1 _ ,

r-

18

sos naturales. La mayor p a r t e d e l cido c t r i c o que se pro-

r-

duce se obtiene de subproductos de l a s i n d u s t r i a s conser---

rL
r

veras y d e l jugo de Frutos c t r i c o s que abundan en los campos mexicanos. Actualmente e x i s t e n une o dos p l a n t a s que lo
estn produciendo por Fermentacin pero desefortunadamente
se desconoce

la t c n i c a que se u t i l i z a para

su obtencin

--

aunque tomando en cuenta algunos datos como l a l o c a l i z a c i n

de l e p l a n t a y l a materia prime que u t i l i z a n para su obtenc i n puede uno suponer que u t i l i z a n un medio de fermentacin
de sacarasa.

Como ejemplo est l a i n d u s t r i a llamada "MEXA-

MA" que se l o c a l i z a en l a ciudad de Cuernavaca, Morelos; en

esta i n d u s t r i a

SR

produce cido c t r i c o en r e g u l a r escala

entre otros productos por medio de dos mtodos: extraccin

de c t r i c o s y fermentacin, esto seguramente para mejorar

l a c a l i d a d d e l producto que s e obtiene por fermentacin haciendo una mezcla. (4,5,10)

1 . 2 . 6 APLICACIONES

r
i

r
i

En l a Industria A l i m s n t s r i i

e.-

Bebidas y

jarabes

r
i

1.-

E l cido c t r i c o es acidulante para bebidas tanto carbo

netsdae como de o t r o t i p o y a que eo un ciQ
t r a en forma n a t u r a l en l a s f r u t a s , por

SUE

que se encuencaractersticas:

Imparte propiedades refrescantes y de acidez a l a s bebides

duplicando a menudo l a s de los productoe naturales.

Acte como preservativo en los jarabes y en

los refrescos

ya envasados.

Acta como secuestrante de metalea que ooeaionan turbidez

y que aceleran el d e t e r i o r o d e l c o l o r y sabor.

Ayuda a obtener e l bouquet deseado a l modificer los eabore8 demasiado dulces.

r
L

b.-

En la manufactura de dulces se ha generalizado el

uso d e l cido c t r i c o para i n t e n s i f i c a r e l sabor de f r u t a s

y de o t r o s ingredientes comnmente usados en esta i n d u s t r i a ,
ademe

el

cido c t r i c o en cantidades adecuadas da e l sabor

a g r i d u l c e necesario en 105 caramelos.

r-

F a b r i c a c i n de postres

C.-

r-

En l a manufactura de g e l a t i n a s de sabor

el

c o n t r o l de

r
!

pH es muy importante para obtener e l endurecimiento adecuado de l a g e l a t i n a y que debe ser de entre 3-3.5,

e s t e cido

adems de mantenerlo comunica e l sabor a g r i d u l c e , increment a e l eabor y l a s propiedades refrescentes.

d.-

Jelees

Para obtener
en

le

y conservas

el pH apropimdo y d a r l e a i sabor daeeado-

manufactura de j e l e a s y conservas, l a cantidad de c i

20

r
L

do depende de l a coffientracin de p e c t i n a .

r
i

e.-

Empacado de pescados y mariscos

Loa pescados y mariscos d e a a r r o l l a n frecuentemente 01%

r e s desagradables a s como c i e r t e s coioraciones r o j a s ,
negras y azules producto de una oxidacin,

caf,

l o s t i n t e s ante-

r i o r e s son r e s u l t a d o de una combinacin de s a l a s de f i e r r o

r
L

o de cobre con l a s aminas de l o s crustceos o b i e n con l o s

compuestos de a z u f r e que se desprenden produciendo una gama

decolores d i v e r s o s .

Cuando l o s pescados y mariscos frescos

se sumergen a soluciones de 0.25-1.0%

da cido c t r i c o mez-

clsdo con o t r o t i p o de a n t i o x i d a n t e protegen y r a t a r d a n ' l a

formacin de o l o r e s y c o l o r e s desagradables para estos a l i mentos.

f.-

'

Preparacin de jugos y f r u t a s vegetales.

Los pH b a j o s derivados d e l u60 de cido c t r i c o e j e r c e n

e f e c t o s p r o t e c c i o n i s t a s de l o e pigmsntoa de l o s jugos de'Fyu

tas,

aumenta l a r e s i s t e n c i a a l d e t e r i o r o .

8.-

F a b r i c a c i n de v i n o s y s i d r a s

Frecuentemente e l producto envasado preeente c i e r t a t u r

r
L
r

r
I

r
L

21

b i d e z o r i g i n a d a por una d i v e r s i d a d de c a u ~ a s . E l problema

ms comn s e presenta por l a e x i s t e n c i a de i o n e s f r r i c o e

en eolucin,

que se combinan con t a n i n o s y f o s f a t o s que se

encuentran en e l aena d e l l q u i d o ,
l u b l e s que provocan l a t u r b i d e z ,

formando complejos inso-

l a s s a l e s complejas antes

aealadas s e pueden e l i m i n a r s i se t i e n e l a precaucin de

agregar cido c t r i c o en pequeas cantidades.

h.-

F r u t a s congeledas

E l cido c t r i c o se usa durante e l proceso de empacado

de f r u t a s congeledas por dos c i r c u n s t a n c i a s :

Generalmente s e efecta una operacin

f r u t a usando soluciones custicas,

de mondeje de l a

se l a v a perfectamente

con egua y despus se sumerge en una solucin 1-2% d e

ci

de -

do c i t r i c 0 para l l e v a r acabo una n e u t r a l i z a c i n de l o s r e

siduos a l c e l i n o s ,

t
P

a i esto no se r e a l i z a r a

solucin a l c a l i n a d e s t r u i r i e n
l a a c c i n de pH bajo,

lec t r a z a s

el c i d o aecrbico, mediante

detiene l a a c c i n o x i d a n t s de l s s

enzimas presentes.

- El

c i d o c t r i c o e l i m i n a l a a c c i n de c i e r t o s metales pe-

sador que pueden a c t i v a r una oxidacin,

protegiendo l a

--

d e s t r u c c i n l a s vitaminas de l a f r u t a .

r
22

r
i

i.Grasas y a c e i t e s

r
i

E l cido c t r i c o acta como secuestrante de l o s iones

r
!

m e t l i c o s y r e t a r d a a l o s s c e i t e s y s l a s grasas d e l e f e c t o

r
i

de l a rancidez evitando a s los malos o l o r e s c a r a c t e r s t i c o s

de sta.

ri
2.-

En l a I n d u s t r i e Fermacutica

r
s.- Preparacin de eferveecsntee

El

c i d o c t r i c o en combinacin con bicarbonato de so-

c
c
c
c
c
c
c
P
i

d i o y o t r a s sales,

cuando s e agregan a l agua producen una

bebida r e f r e s c a n t e s a l i n a y carbonatada,

este combinacin

c a r a c t e r s-t i

es parcialmente e f e c t i v a en a q u e l l o s productos en que s e r e

q u i e r e un c o r t o tiempo de d i s o l u c i n y un sabor
co,

adems de s e r s g r a d r b l e a l a v i s t a .

b.-

Sales de cido c t r i c o

E l c i t r a t o de =dio

y e l c i t r a t o de p o t e s i o s e preparan

mediante 1s a c c i n se &,ido

c t r i c o sobre l o s carbonatos o

bicarbonmtos de l o s metalea a i c a i i n o s correspondientes,

las

s a l a s entes menciorieda~se usen como d i u r t i c o s y expectoran

tea.

E l cida c t r i c o se usa temibn

pera l a preparacin de

23

!
I

P-

c i t r a t o cprico con c a r a c t e r s t i c e s astringentes y antispt i c a s , as como e l i x i r antienmico y por l t i m o soluciones

de o i t r e t o de magnesio son usadas como purgantes.

c.- E l x i r e s y drogas

El &ido

c t r i c o se emplea en l a preparacin de jerabee

r
L

r
!
L

de eulfato

da e f e d r i n a , e i i x i r a s compuestos de g l i c e r o f o a f e

t o s , soluciones de fosfato
c i t r a t o da c a f e n a ,

de sodio y en l a preparacin de

adems e l cido c t r i c o o una de sus

8%

l e s se emplea an l a preparacin de sangre humana para t r e n 2

L

fusiones,

tambin para preparar s u l f a t o f e r r o s o .

r
i

d.-

oxgeno

r
i

r
I

r
i
r

Proteccin de vitaminas y compuestos s e n s i t i v o s a l

El

&ido

ascrbico es un compuesto muy s e n s i b l e a l a

o x i d s c i n qus provoca su destruccin l a cual se i n t e n s i f i c e

con l a presencie de residuos met8licos de f i e r r o y cobre;
l a presencia de cido c t r i c o en e l & i d o

a s c r b i w l o pro-

tege de l a a c c i n axidante.

?-

3.- Diversos Usos

r
L

r
L

e.-

Comticoe

Para a j u s t a r pH, como aieteme antioxidante o quelante

24

de iones metlicos. Para n e u t r a l i z a r eoluciones para c a b e l l o

junto con c i t r a t o de sodio acta como b u f f e r .

b.-

Fotografa

Para a j u s t a r soluciones para papel, como un componente

de emulsiones para imprimir o r e v e l a r , para formar comple-joe met&icos,

como f i j a d o r y e s t s b i l i z s d o r .

lq,s,#i

1.2.7 BIOPUIMICA DE LA FORMACION DEL ACID0 CITRIC0

Oado que el cido c t r i c o es un intermediario de l a

rs

t e metablica a dixido de carbono y agua, no es sorprenda=

t e encontraraque a i cido normairnente no se acumula en cansi
dadee apreciables en l a c l u l a v i v a .
neralizacin

Excepciones a esta ge-

se encuentren entre l o s f r u t o s c t r i c o s y en

pifia= y l i m a s , l a s cuales contienen grandes cantidades de

cido c f t r i c o y que son usadas como fuente comercial da1 cido.

Se han hecho v a r i o s sstudioa para e x p l i c a r l a forma---

cin da este cido por fermentacin, aspeoialmente

en As--

per~illus
n i g e r . En general, l a e h i p t e s i s e s han centrado

25

en do5 puntos,

e l primero envuelve una s e r i e de reacciones

en l e e cuales l a cadena de glucosa no as r o t a a unidades

--

m&

ma

s i n o que l l e g a e ear transformada de alguna

simples,

nera a c i d o c t r i c o con r a m i f i o a c i n de l a cadena,

gun&

envuelve l a r u p t u r e de l a molcula de azcar a corn---

puestos ms simples,
co,

l a es--

t a l e s como acetaldehdo o cido e o t i -

loa cuales son usados entonces para s i n t e t i z a r cido c i

t r i o o . (I*)

Franzen,

Challenger,

et.

qua apoyan el p r i m e r punto.

cin

de & i d o

el;

han presentado evidencias

E l l o s s u g i r i e r o n qua l a produc-

c t r i c o a p a r t i r de azcar,

presumiblemente tambin p o r algunos hongos,

l o s cidos glucnico y s a c r i c o .

El

por plantas y

--

pese atravs de

cido s a d r i c o pierde

entonoes dos molculas de agua para dar el d i a n o l d e l cida

[:

r
i
r

cetoedfpico.

CHO
I

CHOH
I
CHOH
I

CHOH

COOH
I

COOH
I

COOH

COOH

CHOH

CHOH
I

CH

CH2

CHOH

COH

- I

CHOH
I
CHOH

II

-1

COH

CHOH
I

CHOH

CHOH

CHOH

CH

I
C-OH

ciucOm

CIQOH

COOH

AC G ~ U C ~ A c .
nico

Sac&
rico

.--

II

co
I
co

'

I
CH2

COOH

COOH

Ac.

8-t-

ceto

adfpico

26

r
k

ni-

Eatea reacciones i n i c i a l e s son apoyadas por e l hecho

de que l a produccin de c i d o g l u c n i c o por A s p e r g i l l u s

~ e yr o t r o s

hongos ha s i d o repetidamente demostradas, y se

F
b

ha observado l a formacin d e . c i d o c t r i c o d e l cido glucn i c o . Adems, a l & i d o

s a c & r i c o ha s i d o a i s l e d o de c u l t i v o s

rL

de A s p e r g i l l u s n i g e r sobre g l u c o s a ; e l & i d o

ha s i d o obtenido c u l t i v a n d o e l mismo hongo en sacarato de

p o t a e i o y s e han obtenido sacareto de c a l c i o y c i t r a t o de

c t r i c o tambin

c
i
-

calcio,

cuando

el hongo

es c r e c i d o en

gluconato de c a l c i o .

Por o t r o l a d o todos l o s i n t e n t o s p a r a d e t e c t a r cido d i c e t o

a d p i c o en c u l t i v o s de hongos en glucosa o sacarato de pote

s i 0 han fracasado,

c
c
c
c
c
c

[:
ri

r
i

y cuando

el

c i d o d i c a t o a d p i c o es a d i c i c

nado a l medio, no ss fermentado e c i d o c t r i c o . Adems, l a

e v i d e n c i a en f a v o r de l a h i p t e s i s ha s i d o proporcionada,
s i n embargo, por l a formaci'n de c i d o c i t r i c o cuando

Asper.

s i l l u s n i g e r c r e c i sobre s o l u c i o n e s de s a l a s de los acidos

a d p i c o y mucnico. Presumiblemente

l a produccin de cido

c t r i c o de cido a d p i c o procede p o r medio de un doble &ido p f - d i c e t o a d p i c o :

Acido a d p i c o

HOOC-CH~-CO-CO-CHZ-COO~
Acido b - r - d i c e t o a d p i c o

l a produccin -

E l correspondiente cido /-f-dihidroxiedfpico

blemente e l primer producto de o x i d e c i n , y

es proba

de c i d o c t r i c o e p a r t i r de c i d o mucnico es aparentemente
dependiente de estecido como un i n t e r m e d i a r i o .

P
i

P
L

HOOC-CniGH-CWCH-C00H
Acido mucnico

27

HOOC-CH~-CHOH-CHOH-CH~-COOH

Acido B - t - d i h i d r o a d i p i c o

rL
r

Se asume que e l cido c t r i c o proviene d e l cido

#-a--

r
L

d i c e t o a d i p i c o por una transformacin cido b e n c l i c o , un

--

proceso que ocurre i n v i t r o en presencia de l c a l i :

t-

r
i

HOOC-CH2-CO-CO-CH2-COOH
Acido

HOH

-dicetoadpico

HOOC-CH2-CCCOH]CCOOH]-CH~-COOH

Acido

ctrico

[:

[:

[:

f
f

c
c

Varios investigadores han sugerido que l o s cidos glucnico y s a c r i c o a i s l a d o s de l o s c u l t i v o s de hongos no s o n

compuestos intermediarios en

la formacin de cido c t r i c o

s i n o que son producidos por reacciones l a t e r a l e s . Los estud i o s de estos investigadores parecen apoyar e l segundo punto
mencionado, esto e s , l a ruptura d e l azcar a compuestos ms
simples para l a s i n t e a i s de cido c t r i c o . E s t o s c i e n t f i c o s
asumen que i a glucosa se rompe a compuestos que t i e n e n 3

tomos de carbono, como en l a fermentacin a l c o h l i c i por 10

vaduras,

l a s cuales se unen para formar cido c t r i c o . L a s

3 reacciones s i n t t i c a s ms importantes envuelven scetalde-

hido o c i d o a c t i c o y se cree qus son como sigue:

1.-

L a condensacin de 3 molculas de acetsldehfdo se-

guidas p o r una oxidacin a cido c t r i c o :

P
L

C&-CHO
i
'
L

:O
I

CH-CH3

HC-CHJ

'

!-

I.--.*

'

CH2-COOH

I
HOC-COOH

C&-CHO

CH2-CHO

CH2-COOH

Acetaldrrhdo

2.-

I
Acido.

C r tri co

La unin de l o s & i d o s

a c t i c o y succnico para f o r

mar un cido t r i c e r b o x l i c o , e l cual e s oxidado a cido e c o

n t i c o . E l cido c t r i c o es entonces formado por l a h i d r a t a

cin d e i cido a c o n t i c o :

CH~-COOH

HCH,-GOOH

CH-COOH

HC-COOH

Ac. a c t i
co

C-COOH

____.I

CHz-COOH

Ac. t r i c a r
ballico

CH2-COOH

Ac. aconi
tic0

CH2-COOH

HOC-COOH

Ck-COOH

Acido C t r i c o
CH2

II
C-COOH

CH2-COOH

CH2-COOH

CH2 -GOOH

Acido itacnico

Ac. succg
ni co
I

ir
I 'L
i

jc

1 . -2H
2.

'i

3.

- coz

H2O

3.mar &ido

La unin de doe m o l & u l a i de cido actico pera f o r

succnico,

e l cual

b~

entonces oxidado a &ida

fE

29

m i r i c o . E l c i d o fumrico es hidratado perm producir i c i d o

m i l i c o , e l c u a l se combina con alguna o t r a molcula de c i -

do a c t i c o para Formar cido c t r i c o :

2 CH3-COOH

Ac. a c t i c o

HOQC-CH2-C&-COQH
Ac.

__f

HOOC-CHmCH-COOH

succnico

CH2-COOH

Ac. fumrico
H20

CHOH-COOH

CH3-CQOH

HOC-COQH

Ac.

I
CL,-COOH

actico

Ac.

mlico

CHz-COW
Acido C i t r i c 0

Para que este t e r c e r mecanismo sea c o r r e c t o , de acuerdo

a Wells, M o y e r y May C19361, deben e x i s t i r c i e r t a s r e l a c i o nes c u a n t i t a t i v a s :

.-

La proporcin en peso & i d o

exceder 1.45:1.Q,
2.-

c t r i c o : C02 no deber

La proporcin en peso de & i d o

c t r i c o no deer

ser mayor de 71.1%

Pera probar estos puntos, Wellr y esociadoe l l e v a r o n

cabo experimentos de balance de carbono, con A s p e r g i l l u s n i

E creciendo

en eolucionee que contimnen glucoem como ni-

ca fuente de carbono. Sue resultados muestran qum l a r e l a - cin t d r i c a de cido c t r i c o : C02 es excedi en mucho, de
hedio l o e valores pera experimentor

de 5 a 12 dfaa c o n r i r t e-n

temente variaron de 3.4 a 4 . E l peso de cido c f t r i c o obte-

--

n i d a f u tambin mucho ms granda qua los v a l o r e s mximos

tericos,

siendo de 85 a 90% pera experimentos de 5 a 12

d a s aproximadamente el 98% d e l carbono f u e considerado en

sus e s t u d i o s .
tanto,

Sobre l a s bases de e s t o s resultados,

por lo

ee observa que d i f c i l m e n t e una farmentacin de t i p o

a l c o h l i c a con & i d o

a c t i c o como r u t a i n t e r m e d i a o c u r r e a n

t e s de que el c i d o c t r i c o mea formado.

No obstante todos l o s t r a b a j o s que han s i d o hechos sob r a a s t a problema,

e l mecanismo para l a produccin micol6gL

y no se ha propuesto

--

una t e r a qua considere todas l o s f a c t o r e s que han s i d o

oh

ca de c i d o c t r i c o es en obscura,

rc
r
L

c
c

1
L

c
c
c

r
i

servados.. ii5,ia,iw)

r
i

1 . 3 ASPERGILLUS N I G E R

E l gnero A s p e r g i l l u s es uno de l o s ms importantes don

t r o de l a Y i c o l o g a desde e l punto de v i s t a i n d u s t r i a l , su

nombre proviene de l a forma de s u s rgsnos asexuados de re-

produccin, que son parecidos a u n "Aspersorio"

gillus

[ l a t n aspor

aspersorio o h i s o p o ] . Cmo sinnimo de e s t e gnero

debemos c i t a r e l de "Sterigmatocystis",

usado todavs por

el

gunos autores.

1 .3.1 CARACTERICTICAS

Las cabezas c o n i d i a l e s son algunas veces obscuras o n z

g r a s , verde obscuro, pardas, negro prpura o c o l o r carbn;

,
i

globosas radiadas o d i v i d i d a s en pocas o muchas formas irre

F-

g u l r e s o columnas b i e n d e f i n i d a s de cadenas c o n i d i a l e s .

i
I

Conidiforos transparentas a c a f s , tpicamente l i s o s

pero en algunas especies ligeremsnte granulares o punteados,

usualmente de paredes pesadas, quebradizas, partindose l o n

gitudinalmente cuando s e oprimen.

Vesculas globosas obscuras o coloreadas en l a l u z y Ea

f obscuras en l a obscuridad.

sterigmas e n u n a o dos smrire dependiendo de l a s es-p e c i e s , a menudo muy coloreadar o an l l e n a s con pigmento.

33

r-

r
i

Conidias globosas,
mente eplanedas;

elpticas u horizontal

subglobosas,

l i s a s o casi lisas,

equinuladaa,

o con es-

t r i a c i o n a s conspicuas l o n g i t u d i n a l e s .

Eaclertida globosa a subglobosa,

de c o l o r crema cuan-

do a5 joven,

rosado grisceo o caf.

r
L.

c
c

r
L

r
I

c
c
c
>-

r
L

c
c
c

Debido a l a c a r a c t e r s t i c a de pigmentacin de l a s cabe

zas c o n i d i a l e s ,

los miembros de este grupo son comnmente

llamados " A s p e r g i l l u s n i g e r " s i n considerar l a morfologia u

otros c r i t e r i o s .

Esto no es s i n alguna j u s t i f i c a c i n ,

es p o r mucho e l miembro

ms

ya que

abundante d e l grupo A s p e r g i l l u s ,

y a l grado de v a r i a c i n dentro d e l grupo es t a l que l a s i--

d e n t i f i c a c i o n e s e s p e c f i c a s a menudo l l e g a n a ser m u y d i f c i l e s . Aeperqillus

niger se

c a r a c t e r i z a por e l esterigma b i

sariado y c o n i d i a s relativamente pequeas. Estas v a r i e n en

l a forma de l a pigmentacin negra de

sus cabezas c o n i d i a l e s

y en l e s dimensiones de conidioeporss,vesiculaa

mas.

El

y setsrig--

esterigma p r i m a r i o muy frecuentements continua e l o ~

gndoss despus da que l a asporulacin a comenzado,

y las

c o n i d i a s ms jvenes an una cadena a menudo muestran dimensiones iigeramenta ms l a r g a s y manos conspicuas y menos
marcas d i a g n s t i c a s que l a s c o n i d i a s

m8s

viajas.

--

La pigman-

t e c i n de las cabezas c o n i d i a l e s v a r a no solo an d i f e r e n t e s

especies,

s i n o algunas veces dentro d e l mismo a i s l a d o ,

disndo d e l s u s t r a t o y ds la adad d e l c u l t i v o ;

dep-n

por lo t a n t o ,

l a s d s t e r m i m c i o n e s d e l c o l o r debsrn e s t e r baaadas en l a 5
contfnuae observaciones atrav8e del perodo de crecimiento y

34

esporuiacin.

E l A s p e r g i l l u s negro e s probablemente ms comn que a l

gn o t r o grupo dentro d e l gnero. E s t n d i s t r i b u i d o s amplia
mente e n e l mundo y ee encuentran en l a ms grande variedad
de s u s t r a t o s , incluyendo granos, productos de f o r r a j e , vege
t a l e s y f r u t o s descompuestoelel algodn expuesto en t e x t i l e s
y f b r i c a s , p i e l e s , productos de l a lecbe y o t r o s s u s t r a t o s
r i c o s en protena y en l e vegetacin en putrefaccin d e l cem
P O . Son abundantes en todos los suelos examinados y parecen

s e r particularmente abundantes en s u e l o s de r e a s t r o p i c a l e s
y subtropicales.
t

Debido'a s u d i s t r i b u c i n cosmopolite y a su papel en e l

proceso natural de descomposicin, debido a su uso extensivo
en estudios f i s i o l g i c o s y . n u t r i c i o n a l e s de los hongos y
an

--

ms debido a sus importantes a p l i c a c i o n e s en l a indus-

t r i a , desde 1945 se han publiaado numerosos a r t c u l o e r e l a cionendo a l A s p e r g i l l u s negro.

1.3.2

APLICACIONES EN LA I N D U S T R I A

A s p e r g i l l u s n i g s r ha s i d o usado efectivamente en un gran

d m s r o de conversionee b i o l g i c a s y produccin de metabolitos
t

t a l s s como: cido g l i c o , cido c t r i c o , cido glucnico, oi

do Fum6rico y cido o x 6 l i c o ; enzimes a m i l o l t i c a s , p r o t e o l tices, pectinoiticas,

i i p o i t i c a e , enzimss q u i t i n o i f t i c a s ,

7i

c
L

35

c
L

e n t i b i t i c o s , vitaminas, pigrnentos y s n t e s i s da e s t e r o l e s .

1 . 4 MEZPUITE

Desde e l punto de v i s t e botnico a l mezquits es l e con

s i d e r a d e l orden legumimseas, de l a f a m i l i a do l e s mimosaceee; de l a t r i b u andenantreas; dol gnero Prosopis, e x i s tiendo v a r i a s especies s n t r e l a s cueles encontremos

P . ju-

l i f l o r a , P. c h i l e n s i s , P . a r t i c u l a t a , P . glandulosa, P . l e e
vigata,

r
L

r a tiene
yana .

P . pubascan8 y P . cinarecscens. E l Prosopis j u l i f l o

3 variedades que son: velutina, glandulosa y t o r r e

ri
r

E l mezquite ocupa zonas muy extensas que presentan car a c t e r s t i c a s geoigicas y ciimatoigicas, por io que, s e

presenta en muy variados aspectos: en tamao, forma o f i s o noma d e l r b o l en s o de sus ramas, hojas, f l o r e s y fru-tos,

de ah que s e ha c l a s i f i c a d o con d i f e r e n t e s nombres,

pero que en r e a l i d a d son sinnimos del Prosopis j u l i f l o r a

segn e l botnico i n g l s U r . George Bentham y que son impor

tantee de e e t e b l s c e r para poder hacer en un momento una aso

ciacin.

---salinarurn, ---

Podemos mencionar algunos como: Mimosa j u l i f l o r a ,

Swartz; Acacia j u l i f l o r e ,

W i l l d ; Desamanthus

S t w d ; Mimosa salinarium,

Vahl; Acacia p a l l i d a , W i l l d ; Pro-

eopie e f f i n i e , Sprsng; y o t r o s ms pero de menor importan--

r
L

37

b-

I:

sn d i s t i n t o s paises,

t:
r
L

c
c

rt
r

mezquita se conoce con d i f e r e n t e s nombres comunes

El

na y Uruguay;
quite"

"Algarrobo"

"Mezquite"

en Per;

en Mexico;

da" en H a i t ; "Carbn"

en

"Acacia de c e t a r i n a "

"Casheu"

en Jamaica;

"Algarroba"

"Beya hon

en Colima;

o "Chucata"

r
L

tarasca.

"Mizquitl"

en M i

podemos mencionar l a v a r i a -

c i n de nombres p o r e f e c t o s de l a s lenguas o d i a i c t o s ,

h i " en otomi;

en N i -

dependiendo de cada estado,

como nombres vulgares se t i e n e "Chachaca"

choacn;

" C u j i yaque" en

El Salvador; como tambin l o s nom

b r e s en l a Repblca Mexicana,

en Colombia y Panam; "Mes

en Estados Unidos de Norteamrice;

Venezuela;
ragua;

"El agarrobe" en Argenti-

por ejemplo:

"Manca de c a b a l l o "

en nhuatl;

"Czistzecua"

"Ta

en lengua

F6cilmante podemos percatarnos con estos nombres que

desde hace mucho tiempo se t e n i a conocimiento de e s t e r b o l

f
r

por algunas da

EUS

caractersticas,

en donde se d e s a r r o l l a .

como por l a basta zona

114)

r
i

c
c
c

r
L

Este p l a n t a es de aspecto muy v a r i a b l e ,

cionedo anteriormente,

p o r lo que

88

como se ha men

puede observar,

de una

a l t u r e de u r n s cuantos c e n t i m s t r o s hasta I 2 15 metros en

forma de un & b o l

robusto.

Se toma como un promedio a p r o x i -

mado en un r b o l de r e g u l a r tamao de a l t u r a de 2 a 3 metros

y con un t r o n c o leoso de 50 cm de dimetro,
tante resistente,

e6 un r b o l bas

con copa redonda y s i m s t r i c a pero con r a -

mea muy i r r e g u l a r e s y como coneecuencia m producen una s o ~

38

7i

bre s a t i s f a c t o r i a .

Presenta unas r a c e s profundas que se e2

tienden lateralmente por una amplia zone d e l suelo alcanzac

do hasta d i e z o ms metros de profundidad; bsicamente son
p r i m a r i a s , de aspecto grueso.

r
L

La

c o r t e z a d e l tronco es gruesa, de c o l o r r o j i z o obsc;

r o , l a s ramas son delgadas y pubescentes que en l o s prime--

ri

r o s aos son de c o l o r a m a r i l l o verdoso tornndose obscures

con e l trsnscurso d e l tiempo.

Las

hojas son bipinadas y fa=

c i c u l e d o s , v a r a n de 3 a 5 cm. de l a r g o y de 3 s 6 mm.

de

c
c

ancho presentando nervaduras s a l i e n t e s .

E l mezquite presenta espinas de gran tamao separadas

una da o t r a , formando junto con e l t a l l o , a x i l a s que son en
donde se d e s a r r o l l e n

les ramas, i n f l o r e s c e n c i a s y f r u t o s .

Les

r1

mm.

da

F l o r e s son muy pequeas, de aproximadamente 2 a 3

l o n g i t u d , da c o l o r verde c l a r o y blanco, y son muy

eromtioas,

se encuentran agrupadas en racimos o eepigss

densas en forma c i l n d r i c a y angosta.

Las

espigas t i e n e n un

tamao que f l u c t a entre 4 y I O cm. de l a r g o .

r
i

r
L

Generalmente, aunque tambin depende d e l c l i m a , l a s

f l o r e s aparecen en a l mes de mayo y continan producindose

hasta e l mes de j u l i o .

r
L

Los

f r u t o s se presenten en forma de vainas alargadas de

r
i

r
i

r
L

r
I

c
c
c
c
c
c
c
c
c

c
c

'I:
i

c
c
c
c

i
i

r
i

41

10 e 24 cm.

de l a r g o ,

son planas en un p r i n c i p i o y que a l i r

madurando se van haciendo c i l n d r i c a s de c o l o r a m a r i l l o p e j a

que e s t n matizados con tonos r o j o s o guinde~s, dando une gama muy amplia de tonos y combinaciones;
cimos b a s t a n t e t u p i d o s .

delgada,

l a s remas forman r a -

La c u b i e r t a e x t e r i o r o p e r i c a r p i o es

cubre a l mesocarpio c o n s t i t u d o por una capa gruaea

esponjosa de pulpa dulce,

que estn colocadas o b l i c u a y separademente,

aplastadas,

que e su vez cubre l a s aamillas,

y son oblongas,

l i s a s y obscuras. (20,zll

Para abordar l a . f o r m a y l u g a r e s de crecimiento de esta

p l a n t a ae hace una d e f i n i c i n y determinacin de
t e r r i t o r i o n a c i o n a l para u b i c a r

ZOMS

en a l

ms dentro de l a s necesidar-

des y c a r a c t e r s t i c e s d e l mezquite.

E l mezquite es un r b o l o arbusto muy r e s i s t e n t e a l a

sequa,

se adapta f & c i l m e n t e a auelos l i g e r o s y a l a s r e g i o -

nes & i d e s

de c l i m a % c a l i e n t e s .

E l mezquite vegeta en forma ms abundante en t e r r e m e

cercanos a l o s r o s ,

y generalmente en l a s hondonadas, en

--

donde se protege de los v i e n t o s y d i s f r u t e de l a humedad, p e

r o tambin vegeta e n l u g a r e s a l t o s ,

en l l a n u r a s o s a l i n a s y dunas;
SE

desarrolle,

hmedos,

es

su fisonoma,

r i d o s y arenosos,

y an

dependiendo d e l l u g a r donde

p o r ejemplo s i es en lugares

su f o l l a j e es basto, en t e r r e n o s r i d o s l e r a z Be

d e s a r r o l l a mucho y la p a r t e f o l i c e e es escasa.

."

42

r
L

Crece en climas eeco-des&rticos, que presenta l a agudi

zacin d e l clima seco con una p r e c i p i t a c i n media anual de
menos de 450 m m . ,

puede s e r c e l i e n t e o f r o donde hay mani-

festaciones f o r e s t a l e s escasas, donde s e l l e g a a l extremo de

f a l t a de vegetacin observndose generalmente en zonas me--

r
L

c
c
c

f
r

!-

c
c

r
r
-

nos f r a s de climas denominados como 8s de l a s d z o n a sur

de l e e l t i p l a n i c i e , cubriendo grandes extensiones de S u d 0 5

a l u v i a i e s profundos

ms

o menos planos en e l fondo

de l a s

cuencas o l a s r i v e r a s de l o s r i o s .

E s t a p l a n t a se define como un recurso para los paises

pobres en donde l a t e c n o l o g a a g r c o l a no se ha desarrollado
en forma s u f i c i e n t e para l a s zonas en donde no s e pueden

lo-

grar c u l t i v o s productivos para pocas de aequIas temporada

en l a que se puede comercializar c o n . s t e , an sus d i f e r e n t e
productos y subproductos, que de
definitiva,

Le

se pueden obtener y en

si e l recurso e x i s t e se debe aprovechar.

exploracin puede r e a l i z a r s e en un I O O X , desde sus

vainas, au F o l l a j e , l a madera, e t c .

La naturaleza u t i l i z a espaciee como e l mezquite para

restituir

el e q u i l i b r i o que el hombre destruye muchas veces

inconcientemente, o en e l causado por Fenmenos de erosion.

r
i

Siguiendo e l ejemplo de l a naturaleza se puede emplear e l

mezquite en forma provocada como un agente restablecedor y

43

e s t a b i l i z a d o r d e l suelo ya sea con s u s o i a presencia, por

l a propiedad de l a s leguminosas de f i j a r el nitrgeno e n e l

suelo, o como abono verde denominado p d o , para l a produc-2
cin de de t i e r r a s f r t i l e s . (181

E l r b o l t i e n e una madera bastante f u e r t e y r e s i s t e n t e

por l o que s e ha l l e g a d o a llamar madera de h i e r r o , e s pese
da, compacta, presentando u n excelente producto para explotacin r u r a l por los m l t i p l e s usos.

La madera a l i g u a l que l a corteza t i e n e un gran contenido de cido t n i c o a l que s e u t i l i z a para c u r t i r p i e l e s y

con esto e x i s t e l a p o s i b i l i d a d de c r e a r o f i c i o s y nuevas

--

fuentes de t r a b a j o en l a s l o c a l i d a d e s .

es

varas secas a i i g u a l que l a s r a i c e s y j u n t o con 10

oe se l e s a t r i b u y e un poder c a l o r f i c o superior a l d e l encino ya sea en forma de lea o carbn.

En Len Guanajuato se u t i l i z e pera tacones de zapatos,

por l e r e s i s t e n c i a de la'madera y una gran cantidad de d i v e r
sos productos, como l o s que se mencionan a continuacin: c e

j a s de empaque, durmientes, p a l o s de e s c o b a , t a b l a s y tablones, t i r e s y F a j i l l a s , v i g a s , o t r a s maderas aserradas, r e s i

duos aeerredos, a s t i l l a s para c e l u l o s a , hormas, brazuelo,

lea en r e j a , p a r a papel y combustible, postes pare l i n e a e

de l u z o t e l f o n o , f a b r i c a c i n de instrumentos de t r e b e j o

44

r
*

como c h a s i s en motores pesados, en implementos de labranza,

esta madera e s agradable a i a p l i c a r un f i n o p u l i m i e n t o que

junto con su r e s i s t e n c i a

cacin de muebles.

la

hecs inmsjorable pare

la

fabri-

c
c

''

r
i

En plano mundial, lo encontramos desde M r t e a m r i c a ,

por todo Centroamrica y Sudsmrica, hesta C h i l e , Indonesia

S u d f r i c a , A u s t r a l i a y en l a s t i e r r a s bajas y secas de
Hawai, como se podr observer e l mezquite en todas sus va
riedades se d i s t r i b u y e en gran parte d e l t e r r i t o r i o nacio
nal

' I

r
L

El

mezquite lo encontramos asociado con e l huamichil

[Pithecolabiurn dulce] comunmsnte esta aeociacin nos esta

blece

los

permetros de l a s zones r i d a s o semisecas con

t i e r r a s ms favorables;

tambin l o encontramos en l a denom'

nada s e l v a b a j a espinosa, junto con a l palo verde [ C e r c i

c
c

dium macrum], e l Anacahuita [Cordia b o i e s i e r i i ] y a veces

son producidas en abundancia. Un r b o l de diez aos produce

90 kg de vainas anualmente, de lam cuales l a meyora de sus

c
c

s e m i l l a s son f r t i l s e ; se d s s e r r o l l a e l rbol fcilmente y

con a l bano [Cordia Phitecolobum F l s x i c a u l e ] y an forma

se

gura junto con gramnsas.

E l Rrosopis j u l i f l o r a se m u l t i p l i c a por semillaa que

s i n ningn cuidado r e s i s t s condiciones adverses en forme

muy e s p e c i a l .

45

Se van observando apariciones contnuaa o extensin de

l a s reaa y a e x i s t e n t e s en donde vegeta e l mezquite, debido

a l sobrepastoreo,

que es bsicamente l e forma como se d i f u E

-eliminada estar
-

de; y ae debe a que l o s animales comen de e s t a v a i n a s i n

presentar ninguna d i g e s t i n por e l eatomago, es

p o r su organsmo y cae encondiciones favorables a l

en oontecto con e l abono n a t u r a l , que adam&

l e proporciona

l a humedad requerida para su germinacin; F a c t o r e s necsae-r i o a para su crecimiento i n i c i a l . ( I \

Cuando e l r b o l de mezquite es herido con agentes

c o s , h e r b i c i d a s [2,4,5-T]

fai

produce un exudado llamado goma

de sabor d u l c e , c o n s t i t u d a por una mezcla de carbohidratos

antre l o s que predominan l a s a l neutra de un p o l i a a c e r i d o

c i d o , o t r o s componentes son O-galactosa y L-arabinose.

En loa ejemplares jvenes l a goma es ms b l a n c a y m8a

pure, aunque estos risra vez l a producen. Por medio de eatud i o s s o f i s t i c a d o s se ha v i s t o que l a goma da mezquita t i e n e
c i e r t a s i m i l i t u d con l a goma arbiga y con o t r o s compueetos.

46
Son dos los t i p o s de goma exudadoa por e l mezquite. Un
t i p o es blanca o de c o l o r ambarino [semejante a
biga) t i e n e uso medicinal en Hxico.

El

la goma a r i

segundo t i p o es de

c o l o r negro obscuro, quebradiza y de sabor a s t r i n g e n t e , est a cqntiene un 20% de taninos.

Esto l l e v a a l a p o s i b i l i d a d

de Gear l a goma de mezquite en l u g a r de l a s gomas de importacin.

S i n embargo, esta es producida bajo condiciones a--

normales, por e l l o deben d e s a r r o l l a r s e mtodos para estimular

la produccin y r e c o l e c c i n de l a goma.

A l mezquite se le considera como l a especie productora

de goma ms importante de Norteamrica. (t;)

Hoy en d a l a gente d e l campo est muy l i g a d a a l em--pleo de esta p l a n t a con f i n e s c u r a t i v o s ; l a goma en agua 5e
usa para grgaras y contra l a d i s e n t e r i a ,
con

l a mdula junto

el pasto se i n g i e r e como purgante, l a s hojas t i e r n a s

c i d a s , en forma de c o l i r i o cura l a inflamacin de

cz

los ojos

llamado blsamo de mezquite, l a corteza tambin en forma de

cocimiento l a usan contra hemorragias u t e r i n a s .

Todos estos remedios r s t i c o s abren cemino en l e a in-vestigaciones farmacolgicas en busa de p r i n c i p i o s a c t i v o s

que puedan ser a i s l a d o s y estudiedos, u t i l i z n d o l o s en cont r a de

los padecimientos mencionados con a n t e r i o r i d a d .

Se consume l a vaina como alimento, en forma d i r e c t a

--

. ,i

47

Li

r
i

como f r u t a o g o l o s i n a porque l a pulpa dulce es agradable a l

paladar,

y es en si l a nica p a r t e de l a p l a n t a comestible

por l a gente,

presentada en d i f e r e n t e s y muy variados produg

tos.

En l a a c t u a l i d a d y s i n t e n e r conocimiento d e l v a l o r ng

l o s h a b i t a n t e s de l a s regiones pobladas d e l mszqu'

tritivo,

te,

s i d e r a n como un

i n g i e r e n l a s vainas en gran cantidad,

alimento base,

aunque no l a con-

como lo s e r i a e l f r i j o l ,

el

I:

maz,

ei a r r o z , e t c .

En resumen,

l a vaina es u t i l i z a d a en l a preparacin de

bebidas y alimentos,

debido a su dulce y agradable sabor,

porque s u s t i t u y e e n forma adecuada l a carencia de algunos

L
productos que no alcanzan a ser d i s t r i b u i d o s en esas r e g i o c

nes,

o simplemente a l s e r muy barato,

f a b r i c a n con e l l a sus

L.

r
L

r
L.

r
i

c
c

rL

elementos comunes de su d i e t a ,

evitando con esto e l pagar

p r e c i o s elevados de l o s productos procesados.

u t i l i z a d o como consumo humano,

Adems a l s e r

s i r v e de alimentacin bsica

a muchos animales d e l campo como conejos,

a r d i l l a de t i e r r a ,

r a t a s canguro,

l a paloma de a l a s blancas, es l a d i e t a

p r i n c i p a l d e l mapache,

la

a o t r o s animales unicamente en tiem-

PO de sequia l e s f a l t a comida,

toman como recurso sus h o j a s

y frutos.

Tiene una gran demande como f o r r a j e ,

a l ver que sa muy

48

gustado por

el ganado, como el f o l l a j e t i e r n o , las vainas y

l a m e s m i l l e s por todos l o a animalea de granja.

Lo

i
r

recomiendan pare l a alimentacin de bovinos lecheros

para ganado en generol, como para formar p a r t e tambin de

concentrados para engorda de ganad0 menor y aves de c o r r a l ,

tanto por el aprovechamiento observado como por l a f a c i l i d a d
de a d q u i s i c i n en nuestras zonas r i d a s .

r
L

Es
ms

necesario r e a l i z a r estudios que nos permitan conocer

ampliamente nueatroe recursos para poderlos explotar en

una forma ms adecuada.

(211

r-

49

2 . O B J E T I V O S.

r
i

2.1 O B J E T I V O MEDIATO

P r o d u c i r cido c t r i c o por Fermentacin sumsrgide e~

pleando como sustrato l a goma de mazquite con un

nculo ds A s p e r g i l l u s n i g e r .

I:

r
i
r
L

i-

2 . 2 O B J E T I V O S INMEDIATOS

Oeterminar l a s c a r e c t e r s t i c a s bromatolgioaa de l a
goma de mezquite.

I d e n t i f i c a r y propagar e l d e s a r r o l l o da l a s esporas
de A s p e r g i l l u s

niger probando

an medios s l i d o s con

v a r i a c i n en l a concentracin de l a goma de mezquite

Oisear

la composicin y condiciones adecuedee pera

e l medio de c u l t i v o , para e l hongo'y pera e l proceso

a n i v e l l a b o r a t o r i o en

la fermentacin sumergida.

i
c

Cuantificar

e l cido c t r i c o producido en e l caldo

de Fermentacin.

r
L

B . H A T E R I A L , R E A C T I V O S

Y T E C N I C A S.

r
L

3.1 EPUIPO

r
i

a] Autoclave

b) Regrigerador
c ) Potsncimatro
d] Espectrofotmetro
P
L

e] Centrfuga

f] E s t u f a

g] termobalanza
h] Balenza d i g i t a l

i ] Bao de a g i t a c i n

j] Bomba da vaco
k) Rotavepor

13
P

Vortex

m] P a r r i l l a

n]

Microecpio

r-

o]

Oimtribuidor

de a i r e

a] Autoclave

Marca: COLE/PARMER
Fi

Modelo: 1510-21

Ss us pare e s t e r i l i z a r los medios de c u l t i v o .

r
L

t e r i l i z a $ 5 ib/i:nZ.

Se em

P-

51

b]

Refrigerador
Marca: Mabe Space L i n e

L
Se u t i l i z para l a consarvecin de

los medios

de c u l t i v o as como para nueetrae cepas.

r
L

r
L

c] Potenciometro

Marca : CONDUCTRONIC
Modelo: pH 2 0 , 127 V
S e u t i l i z para a j u s t a r e l pH f i n a l de

rL

los me

d i o s de c u l t i v o , a d como para medir el pH f i

n a l de l e fermentacin.

d] Espectrofotmetro
Marca: SPECTRONIC 20 [ Bauech y Lomb

Se u t i l i z para medir l a s l e c t u r a s para

la de
-

terminacin de ezcarss reductores, protena

s o l u b l e y cido c t r i c o .

a] Centrfuga

Marca: INTERNETINAL EQUIPMENT C.O.

NEEHDAN

HTC. MASS U.S.A.

Modelo: HN

Se u t i l i z pera separar l e biomesa d e l medio

ri

de c u l t i v o .

r
L

P-

f] Estufa
Harca: R i o a Rocha S.A.

Modelo: HS
Se u t i l i z para incubar l e e capas,

adem&

de

a c e l e r a r l a p s r d i d a de agua de l a biomasa pe
r e poner a peso constante.

g] Termobalanza
Marca: METTLER

P E

3600, METTLER L P 15

Se u t i l i z para poner a peso constante l a

biomasa.

h] Balanza D i g i t a l
Marca: BRAINWIEGTH
Modelo: B 1500 0
Se u t i l i z para c u a n t i f i c a r

e l peso da1 hongo

p o r medio d e l peso d e l m i c e l i o ,

a s como p a r e

pesar nuestros r e a c t i v o s para l a preparacin

de l o s medios de c u l t i v o .

i)
Bao de A g i t a c i n
Marca: GIAATORY WATER BATH SHAKER
Modelo: 676 N e w Brusnwick s o i e n t i F i c Edieon N.J.
U.S.A.

Se u t i l i z durante l a Fermentacin para man

t e n e r l o s medios da c u l t i v o en incubacin,
en a g i t a c i n y a l a temperatura adecuada.

jl

Bomba de Vaco

53

Marca: WELCH, DUO-SEAO,

Modelo: No. 1400

r
L

Se utiliz para filtrar la biomasa del medio

r-

de cultivo.

r
L

VACUUM PUMP

"k]

Vrtex

rL
r
L

Marca:

SUPER MIXER CAT.

Modelo:

No 1290, 115 volts.

Se utiliz para agitar las muestras en l a determinacin de protena, cido ctrico y azcares reductores.

r
L

r
L

11 Parrilla
Marca: CORNING;

HOT PLATE

Modelo: ?e 100
Se utiliz para

c
c
r
i

la preparacin de los medios

de propagacin de

le cepa, para bao mara en

l a determinacin da azcares reductores

y c&

do ctrico.

m ] Microecpio

L.

r
L

c
c

Marca: ROSSBACH

SN

KYOWA [LSC-EHL]

Se utiliz para conteo de esporas y para observaciones de identificacin del hongo con
tincin.

n] Distribucin de aire.
Se utiliz para l a aereacin de las fermentaciones.

54

!i

I-

3 . 2 MATERIAL

i:

c
c

r
!
L

Matraces Erlenmeyer
Matraces Kitasatoe
Vasos da Precipitados
Cristalizadores
Pipetas
Mortero
Agitadores de vidrio
Agitadoras magnticos
Embudo uchner
Tamiz maiia 100

Filtro Millipore

Asa de siembra

i
Termmetro

Cmara de Neubauer

Mechero Fischar
Porta y Cubreobjetos
Matraces aforadoa
Matraces ds bole
Gradilla
Tubos de ensaya
Probeta
Esptula
Cejas de Petri

r
L

r
L

Tubos perforados pare mereacin

Desecador
Jeringa gradueds pera inocular

55
c

3.3 MEOIOS

OE

CULTIVO, FORMULAS Y PREPARACION

r
L

3.3.1

Medio

de

Propagacin

POA

50%

Goma

50%

r
L

4%

r
L

Agua deet.

PH

96%

Y a que l a composicin d e l medio permanece constante pe

r a l a propagacin d e l hongo,

s l o v a r a l a concentrecin

de goma de manara que siempre se conserver e s t e porcentaje

P
I

de s l i d o s [ 4 % ] .

Preparacin:

D i s o l v a r l a goma de mazquite en egua d e a t i l a d a

r
i

A j u s t a r e l pH a 5 con c i d o 18ictico
Agregar e l PDA y e g i t a r
D i s o l v e r poniendo a e b u l l i c i n durante 1 m i n .

E s t e r il i z a r

I nocul tar
Incubar e 30-33OC
L

r
L

3.3.2.

Medios de C u l t i v o para Fermentacin Sumergida.

Medio I [Para preparar 300 m i ]

3 g de Ooma de mezquite
3 g de E x t r a c t o de Malta

r
L

(22)

56

Medio

I1

g Goma de mezquita

0.2 mg C l o r h i d r a t o de Tiamina
0.42

CNH412 SO4

0.6

KH2P04

0.09

g de Urea

0.15 g K2HP04

0.09

MgS04 7H20

0.12 g CaC12
1 . 5 mg Fe2SQ4 7H20

0 . 6 mg MnSQ4 4H20
1.2 mg CoC12 6H20
1.2 mg ZnSQ4 7H20

r
57

Medio I11

Serie

Serie A

Reactivo

5.0

10.0

Goma de mezquite

0.9

1.8

CNH4~,Soq

0.5

1 .O

Urea

0.25

0.25

KH2P04

0.06

0.06

K2W04

0.03

0.03

ngso4

0.04

0.04

CaCl

0.5

mg

0.5

0.26

mg

0.26 mg

MnSCi4

0.4

mg

0.4

mg

CoC1,

0.4

mg

0.4

mg

ZnS04 7H20

0 .5

1.0

5.0

mg

5.0

mg

Clorhidrato de Tiamina

100

ml

100

ml

Agua d e s t i l e d a

3.3.3.

mg

7u20

F e p J 4 7H20

6H20

Dextrosa

Preparacin de l o s medios de c u l t i v o .
Ya que en r e a l i d a d todos los medios u t i l i z a d o s -

r
i

son muy s i m i l a r e s en su composicin,

se prepararon de-

l a s i g u i e n t e manera:

a ] Se pesan io5 r e a c t i v o s para preparar el medio dm

r
i

b] Se d i s u e l v e en agua d e s t i l a d a omitiendo e l CeC12,

r
..

cultivo

.
-

Urea y Clorhidrato de Tiamina, ya qua se deeneturali

zan a a l t a s temperaturas.

Se preparan matraces con agua d e s t i l a d a que se e s t o

e s t o pera d i s o l v e r los

r i l i z a n j u n t o con el medio,

r e a c t i v o s mencionados anteriormente,

a s como agua

pera l a suspensin de esporas para e l i n c u l o .

Se a j u s t a n l a s soluciones,

e l medio y el agua a pH 3

con cido l c t i c o y NaOH 0.1

N.

Se e s t e r i l i z a e s t e m a t e r i a l a 15 l b / p l g 2 manomtricaa
durante 15 m i n .
Se e n f r a y se agregan al medio los oligoelementoa
que s e t r a t a r o n por separado.
g ] Se i n o c u l e con l a suspensin de esporas [ I O m l de
suspensin/100 m l de medio].

59
P

4 . M E T O O O L O G IA

4.1 PREPAAACION OE MUESTAAS

rL
r

a.

Sa dasmonta l a fermentacin

b.

Sa f i l t r a y l a v a l a biomasa obtenida o se separa

por medio de c e n t r i f u g e c i n

c. A l a biomaaa se l e determina paso hmedo

d.

Se pone a peso constante

e . Se le determina peso seco y p r o t e i -

soluble

f. A l f i l t r a d o o sobrenadante se l a l l e v a r n acabo los

a n l i a i a correspondientes (azcares raductores,

-i

do c t r i c o ] .

c
P

4 . 2 METOOOS PUIMICOS DE ANALICIS

4.2.1

Oeterminacin de p r o t e n a s o l u b l e

L
Mtodo da i o w r y .
P

Fundamento :
Las p r o t e n a s reaccionan con e l r e a c t i v o de F o l i n - C i o
c a l t e u para dar un complejo c o l o r azul,

r
It

I
i

rL

cin d e l cobre a l c a l i n o con l e p r o t e n a ;

dabido a l a reac-l a intensidad del

c o l o r depende d e l nmero de aminocidos aromticos present e a y de l o s enlacas p e p t d i c o e ;

protena.

cambiar segn l e c l a s e de

Interferencias,

v e n t a j a s y desventajas:

Las v a r i e c i o n e s en e s t e mtodo pueden deberse a l pH,tiempo de r e a c c i n ,

farencia

concentracin de l o s r e a c t i v o s ,

de azcares y productos c e l u l s i c o s .

inter-

E n e s t e mito

d o , e l c o l o r no es e x t r i c t a m e n t a proporcione1 a l a s concent r a c i o n e s ms a l t a s de p r o t e n a s .

Las v e n t a j a s de e s t e mtodo son:

a]

Se puede medir e l contenido de p r o t e i n a en f r a c c i g

nes enzimticas.
b] Mediciones en muestras de t e j i d o s con p r o t e i n a s .

c ] Mediciones de cantidades muy pequeas de p r o t e n a s

o soluciones muy d i l u i d a s .

Las desventajas p o r las que no se recomienda e s t e

m-

todo son:
a]

No se puede a p l i c a r a muestras con a l t o contenido

de m a t e r i a l e s l i g n o c e l u i s i c o s .
b]

NO se puede a p l i c a r a muestras que contengan feno-

les.
c ] E l rango de l i n e a r i d a d es de 300 mg/l.

React ivos :

S o l . A : 209 de

Nazcoj

en un l i t r o de *OH

IN.

S o l . 8 : l g da CuSOq en 100 m l da agua d e s t i l a d a

Sol.

C:

2g de T a r t r a t o de Sodio y Potasio en 100 m l de

agua d e s t i l a d a .

61

Reactivo de F o i i n - C i o c a l t e u :

r e l a c i n 1 :1

con con

agua d e s t i l a d a a l momento de usarse.

S o l u c i n Patrn de Seroalbrnina bovina [300mg/l)

Procedimiento :

I . O . 5 g de muestra
2 . a d i c i o n a r 10 m l de agua, homogenizer an u l t r a t o - r r a x , 30 seg y macerar en P o t t e r .

3 . Tomar 2 m l y a f o r a r a 50 m l [conc = 2000mg/l]

4 , Tomar 1 m l de muestra [conc

50-300mg/1); a d i c i o -

nar 1 m l .

de NaOH 1N. c a l e n t a r 5 m i n e e b u l l i c i n

y enfriar

los tubos en bao da h i e l o .

5 . Mezcla de soluciones
A

= 50

m l [primero)

= 1

m l

C = 1

r
L

f
[:

c
t

[tercero)

m l [segundo]

Adicionar 5 m l d e l r e a c t i v o o s o l u c i n a cada una de

l a s muestras, a g i t a r e incubar an l a obscuridad dur a n t e 30 m i n .

6 . Adicionar 1 m l d e l r e a c t i v o de F o l i n - C i o c a l t e u ,

agi

t a r e incubar en l a obscuridad durante 30 m i n .

7 . Medir absorbancia a 750nm, comparando contra un estndar de seroalbmina bovina [ u t i l i z a r f i l t r o r o j o ]

(23)

62

r
i

r
i

r
r

CURVA

# Tubo

s o l .STO

Cmil

H 0 Cm13
2

o .o

o .o

1o
.

0.1

0.9

30 .O

O .2

o .0

60 .O

O .4

O .6

120.0

O .6

O .4

100.0

0.0

O .2

240 .O

1o
.

oo
.

300 .O

PATRON:

r
L

c
r

>r mg/ml 0 . 0 0

0.030

0.060

0.120

0.180

0.240

0.300

0.068

0.136

0.272

0.408

0.544

0.681

L.

O.Oaj

0.00

c
t

ri
i

* Esta

curva patrn f u l a empleada para determinar l a con-

centracin de p r o t e n a de l a s muestras.
[ a j ] : Puntos ajustados.

E l a j u s t e a e s t o s y u n t a s se representa en l a f i g u r a

4.2.1-1.

AaS

O.?

o. O

0.b

e.4

o. 1

O*

o. I

t
r
r
L

64

4.2.2

Oeterminacin de azcares reductores

Mtodo de Miller.

Fundamento :
En presencia de calor e l cido 3,5-dinitrosalicilico
se reduce a cido 3-amino-5-nitrosaiiclico por l o s azcares reductores presentes, dasarrollndose un color amarilla
a caf. La lectura de absorbancia es a 575nm.

Intsrferencias, ventajas y desventajas:

Altas concentraciones de protenas interfieren en l a

determinacin de los azcares reductores; el costo de l o s

r
L

reectivos, principalmente del cido 3,5-dinitrosaliclico

es alto, al igual el Fenol. El color final desarrollado es

estable hasta 24 hrs, adems de que, es un mtodo sencillo

y rpido.
c

rt

Reaotivcs:
A . Pesar 5g de NaOH, 5g de cido 3,5-dinitrosalic~lico
CONS], 0.259

de NazS04, l g de fen01 y disolver en 500ml de

agua destilada.

8.

Solucin stndard de glucosa o dextrosa: l g de

gls

cosa o dextrosa se disuelve an 1OOOml de agua destilada.

Procedi
mi
ento :

c
/-

1.

Pesar 0.59

de muestra seca y molida

2. Adicionar 1 0 m l de agua destilada

3 . Homogenizar en ultratorrax 3 seg y macerar en pot-

65

ter

r
i

4 . Tomar 2 m l de l a muestra y a f o r a r a 50ml

5 . Tomar I m l de l a muestra

6 . Adicioner I m l de ONS, c a l e n t a r a e b u l l i c i n , enfrA

a r l o s tubos en bao de h i e l o

7 . O i l u i r con 6 m l de agua d e s t i l a d a

6 . Medir absorbancia a 575nm, comparando contra un

c
c
c
c
c

stndard de glucosa o dextrosa. ( 2 % )

CURVA PATRON:

# Tubo

r
i

c
c

H20 C m 1 3

Sol.ST0 [ m i ]

CONC.

C 9/11

0.0

I, .O

0 .o

0.1

0.9

0.1

0.2

0 .6

0 .2

0 .4

0.6

0 .4

0 .6

0 .4

0 .6

0 .6

0 .2

0-6

1 .o

0 .U

1 .o

c
c

--

g/l

0.0 aj

0.00

0.10

0.20

0.40

0.60

0.60

1.00

0.00

0.09

0.f5

0.27

0.39

0.51

0.63

* Por medio

de e s t a curva patrn se determin l a concentr-

cin de azcares reductores en l a s muestras.

66

[ej]:

puntos ejustados.

E l a j u s t e de l a curva patrn se represente en l e g r f i c a

4.2.2-1.

4 . 2 . 3 Determinacin de &cid0 c t r i c o en el medio de

fermentacin.
Mgtodo de S a f f r a n y Oenstedt

Reactivos :
A.

Anhidrido actico

0 . Piridina

C . Solucin de cido t r i c l o r o a c t i c o [ T C A ]

a l 15%

O . Solucin stndard de cido c t r i c o : d i s o l v e r 49 de

cido c t r i c o en 1 0 0 m l de TCA a l 15% [4mg/m1].

Procedimiento :

1 . Tomar Iml de l a muestra problema

2 . Agregar em1 de anhdrido ac6tico

3 . Cerrar los tubos con tapones de hule y c o l o c a r l o e

e n bao mara a 60

1 ' C durante I O minutos

4 . Agregar Iml de p i r i d i n a a ceda tubo tapndolos n us

vamente

5 . Colocerlos en e l bao mere

a le

misma temperature

durante 40 minutos
6 . E n f r i a r en bao de h i e l o por 5 minutos
7 . Leer 0 . 0 . a una longitud de onda de 400-420nm.

E l blanco se prepare con i m l de cido tricloromotioo

y s e l e r e a l i z a a l mismo tratamiento que l o s tubos proble-

Crdfica

4.2.2-1

Curva h t r k dr Adcarrr Rodrictorrr

DNS

AEts
I

,,

0.t

/
/

,
I

0.b

o.a

O. 4

0.3

0.l

o.

0.1

o*

o.s

0.4

QI

o..

0.7

0.0

a*

LO

q/It

60

c
L

me. L e curve etgnderd se construye con porciones de l m l de

une eolucin de & i d o

c t r i o o conteniendo 0.04-0.4

mg.ml.;U)

CURVA PATRON:

Sol.STD C m i ]

# Tubo

ATE 15%[ m i )

CONC. ( mg/mll

r
L

r
L

0.0

1 .o

0 .o

0.1

0 .9

0.04

0.2

0.8

o .O8

0 .4

0.6

0.16

0 .S

0 .4

0.24

0 .a

0 .2

0.32

1 .o

0 .o

0 .40

i:
* mgml

0.0 e j

0.00

0.10

0.20

0.40

0.60

0.80

1.00

0.00 -0.02

0.02

0.10

0.18

0.26

0.34

!i

r
L

El

a j u s t e a n t e r i o r fue empleada pare i n t e r p o l a r

el 0.0 de

l e a muestres y a s determinar le concentracin de &ido

c t r i c o producido en 106 medios de fermentacin. En l a g r g

ce 4.2.3-1

se encuentra eete ajuste.

69

F-

Gdtico 4.23-1

Curva Pot& dr Acid0 Citrico

SAFFRAN Y DENSTEDT

r
L

*
i

ABS

!-

rL

Q8

r
t

f1

L
e-

01

r
i

r
i

0.1

f
r

/.

r
i

i
f
r
L

o1

os

0.4

od

01

0.7

o*

o,

1.0

mq/ml

70

4.3 METOOOS MICROBIOLOOICOS

Conservacin de l a Cepa

En nuestro caso e l mtodo de conservacin

Pub el da

sembrar peridicamenta [cada 8 d i e s ) , aste c u l t i v o

moe en

lo h i c i

e l medio seleccionado pare la edep2ecin d e l hongo,

dejamos c r e c e r e A s p e r g i l l u s n i g e r 8 d a s y dursnte este

tiempo se formaba une cape aapesa en toda l a s u p e r f i c i e

--

d e l medio, una vez teniendo este d e s a r r o l l o l o mantenamos

en r a f r i g e r e c i n

a una temperatura aproximada de 4 e 6 ' C ,

para e v i t a r que p r o s i g u i e r a un d e s e r r o l l o s i n c o n t r o l ;

---

cuando se tratabe de i n o c u l a r el medio de Fermentecin p r z

perabemoa l e suspensin de esporas an e l matraz de resiembra

m&

r e c i e n t e y de esta manera tenamos nuestro inculo

preparado momentoa antes de i n o c u l a r nuestro medio de f e r mentacin.

Independientemente de l a s reeiembras qua hacamos, men

tuvimos duranta todo

el

tiempo nuestra cepa o r i g i n a l o

Me8

t e r en unos tubos i n c l i n a d o s con medio de PDA, estos tubos

r
L

c
c
r-

s e mantuvieron perFeotamente tapados con algodn, gasa y

pa

p e l aluminio con objeto da mantener por mucho tiempo en con

diaiones

normales de humedad.

71

5 . R E S U L T A i J O S

i:

5.1 QOMA DE MEZQUITE

r
i

La e e p w i e de Mezquite de l a cual se obtuvo l a goma

pare l e r a e l i z a o i n da e s t a proyecto f u 8 P m w p i e j u l i f l o -

ra cuya procedencia ea San Luis P o t o s i .

Une vez que tuvimos almacenede l a goma se procedi e

r
L

molsr l a s p e r l a s en un mortero haata a d q u i r i r un tamao de

p a r t c u l a tan pequeo que pasara a t r a v s de un tamiz me--

l l a 100. Esto se debe a que este tamao de p a r t f c u l a f a c i -

l i t e l e disolucin de l a goma en agua.

Despu6e de que l a gome de mezquite f u molida y temizada se l e hizo un a n l i s i s bromatolgico con el f i n de ce

f-i

c
c

r:

r e c t e r i z a r sus d i s t i n t o s constituyentes y

r
i

composicin

pare a s disear e l medio de, c u l t i v o para l a fermentecin.

Los r e s u l t a d o s de e s t e a n l i s i s se muestran en l a t a b l a

--

5.1-1.

5 . 2 CEPA DE A s p e r g i l l u s n i g e r

5.2.1

E
I
I

I d e n t i f i c a c i n de A s p e r g i l l u s

A p a r t i r de una cepa de A s p e r g i l l u s n i g e r [cepa Master

1L

r
L

c
c
c
c
c

r
L

c
c

LL.

y.krhwww

Elonontor iibror N,%

w. (U

22
I

ED. KmIrKg (opox)

10.00

loa.00

m.85

ee.04

Se5.84

m.60

so2i.n

I
I

r
L

c l a v e ATCC-11414j

se r e a l i z a r o n v a r i a s resismbraa para pro

pagarla heciendo observaciones pera i d e n t i f i c a r cada etapa

ri

de

eu crecimiento, morfologfa y e l tiempo que tarde en es-

p o r u i a r , todo esto por medio de observacin d i r e c t a y c

al

mioroecpio i c o n t i n c i o n e s ] .

r
L.

Esto se l l e v acebo da l a s i g u i e n t s manea:

Nos entregaron l e cepe de A s p s r e i l l u e n i g e r . Se pu-

so a incubar a 30-33'C.

i
F

cajas

Se prepararon y e s t e r i l i z a r o n 3 tubos de ensaye, 2

p e t r i y un matraz erlenmeyer con PDA.

ea dej en prueba

r
L
I

de

Este materiel

e s t e r i l i d a d durante 24 h r s , l e cual

result positiva.

Se inocularon l o s tubos de ensaye y l e a

oajaa

petri

por e s t r i a ,

r
I

ron hechar a p a r t i r de l e cepa Maeter y ee incub a 30-33'C

e l matraz por piquete.

Las

inoculsciones Fue--

c
c

r
i
L

Despus de 72 hre de incubecin s e h i o i e r o n

guientes obeervaoiones:

E l matrez y l e s cajas p e t r i preaentebsn i n i o i o s de

eeporuiaoin

Uno de los tubos de ensaye preeentebo esporuleoibn

- Los

tubos restantes presentaban l a e s t r i s blanca, l o

que i n d i c a l a presencia de c l u l e s jvenes

E l matraz que contiene la cepa Master empezaba a

mostrar m i c e l i o [ f i g s . 5.2.1-1

las ei-

a,b,o,d).

--

rL

o)

r
L

!-

ti

r
i

r
L

t
r
~

d)

r
i

f
i:
r
I

c
c
c

FiQ.

3.z.1-1
a i aotror y co)or petri.
b) tubo eon w)orokoia.

e 1 tubor eo1 cikkr jo*.m..

d 1 cap. ort tar con mlwiio.

74

Se h i z o une resiembre para obtener l o que eerlei l a

segunda generacin

dn

Aspergillue n i g e r , siguiendo e l mismo

procedimiento empleado pare l a l a . generacin e inoculando

con esporas de s t a . Se incub a 30-33'C

durante 0 d a s , ea

r a de este manera asegurar l a complete formecin de l a s

eE

porae.

Se sec de l e incubadora e l meteriel correapondiente

e l e l e . generacin y ' e a dej a temperatura ambiente.

L
5.2.2 Preadaptacin y adaptacin de Aspergillus n i g e r
e l euetrato [Goma de Mezquite)

Una vez obtenida l a 2 s . generacin de l a cepe Mester

L

de A s p e r g i l l u s n i g e r se procedi e hacer l a preadaptecin

a l sustrato que en este caso as Goma de Mezquita.

Ya 4)ie l a e p e r l a s de goma de mezquite ee hen molido

y tamizado en malla 100, se prepare e l medis de c u l t i v o con

l a s i g u i e n t e compoeicin pare obtener l e l a . generacin de
A s p e r g i l l u s n i g e r preadeptede e l a gama:

Goma

3.0

POA

1.0

H20

100

ml

PH

Inocular e incubar a 30-33'C

Nuevamente se h i z o resiembra pare obtener l a 2a.

g-

75

c
c

neracin que junto con l a primera

ow observaron e l micros=
e,

p i o , previa t i n c i n con azul de lactoferml [ F i g . 5.2.2-1

bl.

Cmo se observ que Aepargillus niger se adapt muy

b i e n a l sustrato ee prob con d i s t i n t a s concentraciones de

goma para l o g r a r una mejor adaptacin de mte a p a r t i r de
l a 2a. generacin preedaptada. Para e s t e propsito se man2

jaron las conosntracionee de l a t a b l a 5.2.2-1.

- Obeervaciones

en los medios con d i f e r e n t e s cotmen--

t r e c i o n e s d e Cioma de Mezquite:

En e l medio en el que hubo mayor crecimiento [mayor -e

porulecin] f u 6 en e l de composicin 50% Goma-50% POA,

dig

minuyendo de manera proporcional a l a concentracin de gome,

.-

de esta manera, a l 25% goma s e present menor esporulacin

[ l a s oomparaoiones se r e a l i z a r o n a l mismo tiempo da incube

cien-67 h r s ] .

r-

s e tom como cepa Master para l a s eiguisntee siembres

a l a cepa cuya moncentracin de goma f u de 50% y a que p r z
sent mayor creoimeinto,

l o que demostr que e l hongo est

eeimilando muy b i e n los carbohidrato8 contenidos en l e Goma

de Mezquite.

5.3 FERMEHTACION

Ya que el hongo [ A s p e r g i l l u s

r
i

niger]se ha adaptado e

PDA

Tiwnpo incubotibn

GOMA

o) I6 hrs.

79 hi8.

0-

ar

I to k 8 .

b) I8 hir.

72 hrr.

8 0

SO4
b,

5.Z.P.-

:.

.......

:..

, , , ,

77

r
i

r
L

r
L

inriI

too

I:

2.0

NOTA.

rL

60

2 .o

50

Lor poroonto)rrdo orto tabla oston dador tomando COWIO0 % a

40r, lor OW108 o ru vu ron un% d81 veltlmon toto1 do agw.

78

c
L

l a goma de mezquite y que &te

est d i s p o n i b l e p a r s empleac

l a como suetrato, procedimos a r e e l i z a r d i s t i n t a s fermenteciones con el propsito de producir cido c t r i c o , pera l o

oual se tuvo e l s i g u i e n t e d e e a r r o l l o :

5.3.4 Carga de inculo

Oucante e l prooeso de preadaptacin y adaptacin d e l

hongo se v i que l o a tiernpoe de eeporulecin se acortaban

r
L

considerablemente ouando l a cepa y e se encontrabe adaptada

(comper8ndola con l a cepe Master o r i g i n a l en PDA],
de que,

e l &maro

edemis

de esporas a r a mayor.

Le suspensin de e y M r a e para e l i d c u l o s e hizo de l e

oepm adaptada y mediante contm se determi&
8

1 x 10

un promedio de

eep/ml. Eata nmero ea aproximadamente l a cantidad

de eeporae iMculad!3S en ceda fermentacin.

5.3.2 Comportamiento de algunos pmrmaiatros

Se midi l a variacin de d i s t i n t o s pa6metroa con r e s -

pecto a l tiempo y crecimiento de A s p e r e i l l u s nieer en un me

d i o ya e s t a b l e c i d o para Fermentecin sumergida [Medio I ]

--

que incluye a l a goma como s u s t r a t o .

r
i

Loa parmetros a monitorear en e s t a Fermentacin fueron:

F
L

al PW

b ) Temperatura

r
L

..

r
i
.

l_-_

79

f-

c l Humedad r e l a t i v a [HR)

rL

vvm

2.5

En 105 resultadoe de este fermentacin [Table y g r f i c e

r
L

5.3.2-11

se observ que haba un precipitado en

e l medio y

e l crecimiento e r a muy pobre e i r r e g u l a r , por l o que, se pcb

b un nuevo medio de c u l t i v o que incluy a l clorhidrato de

Tiemina [Medio 113.

i:

cionedo, obtenindose l o s resultados de l e t a b l e y g r f i c a

c
c
c
c

t
r
I

Se mont una nueve fermentacin con e l medio entes

me2

5.3.2-2.

5.3.3 Maximizecin dol medio de c u l t i v o pore fermentecin sumergida

Pera obtener l e concentracin de goma d e mezquite a l e

cual se tendra una mayor produccin de tiiomese me r e a l i z
una fermentacin en l a cual se probaron d i f e r e n t e s concentfa
ciones de goma, de manera que, l o s resultados [Tabla 5.3.3-1)
variaron de acuerdo a e s t o y a l e e r e l e c i o n e e C/N,

C/P. La

duracin de e s t a fermentacin f u b de 4 d a s .

r
I

Li

[:
r

De l o s resultados obtenidos en l e s n t e r i o r corrida ee

l l e g a l a conclusin de que l a concentracin de goma de

--

mezquits a l a que se t e n e un mayor rendimiento en l a forqin de biomsse e r a a un 5%.

ao

rL

T a b l a 5.3.2-1

V a r i a c i n e d i t e r e n t e s p a r 6 w t r o s con

r e s p e c t o al liempo de Cermentaci bn.

r
r
i
c

P
L

r
i
P

w
I
i

It

SO

eo

te

I
78

70

"t

*i

r
L

t6

82

r
L

I:
F

I
ILi

r
i
r

i
L

r
I

r
5

r
t

r
L

24

ao. 8

a.5

rL

0 2'
Grafica 5.3.2.-2 Varkcion

r
i

f
rL

[:

de humodod Roktiva y Tompwotura poro m d b H

83

..

30.0

21.0

90.0

0.012

g. b i g s - #ramos blames. poso HCO por winos ck suriroto

L a compoeicin de 106 medics anterioree estebe beesda

en l e oupoeicin de que l e
de cerbohidratoe t o t a l e s .

L.

goma contene alrededor de 70%

brometolgico me de-

Oel a & l i e i e

t e r m i d que l a concentracin de rstoe es de eproximedemente

BO%, por l o que es hizo un'nuevo balance para el medic de

c u l t i v o [Table 5.3.3-21

r
L

ouya r e l e c i n C/N es de 5 .

5.3.4 Maximizecidn d e l proceeo para produccin de

Acidc C f t r i o o .

Y e que se maximiz el proceso pare produccin de biomg

r
I

se

nos enPocemoe

e l a produocin d e l cido c f t r i c o probando

-61

con d i s t i n t a s concantraoiones da game pare ver en cul de

t a s hay una mayor produccin d e l aido.

E l c r i t e r i o pera e l e g i r lee concentrecionea de goma

fu6 rwcomer los re-1

que ea probaron para sete fermentecin

tadoe de I s fermentacin de meximizacin de produccin de

r
L

c
c
c

biomesa, da menere que, se experiment con l e e c o n c i n t r e c i o

nes de goma qua dieron mejores rendimiento6 [5%, 10%y 20%).

P e . e s t e fermentacin cuys Qraain

Ouentific e l & i d o

r e e reductores) y biome-

el

consumo de suetreto

[protena),

--

[ez&e-

a s como 01 pH, obte-

nindose loa resultedos de l a t a b l a 5.3.4-1

reduotoree,

c:

ctrico,

fu de 7 dfee se

pera a z i c a r e s

pera p r o t e n a [Tabla 5.3.4-23 y de & c i d 0 c t r i -

co CTeble 5.3.4-3).

Estos oon

le nueva composicin de medio

de c u l t i v o pare fermentacin sumergida [Tabla 5.3.3-2)

ri.
~

pe-

85

f
L

c
i
r

. Una
KHZPO,

c
c
f

[:

0.25

0.06 Q

f
t

0.5

. K2-4
,m a 4

0.03

0.04 g

.CoCl

f e2S0,

0.5

MSO$

0.Z6 mg

COCl*

0.4

raso

0.4 a q

Dutrolo

0.5

Tianino

HZO

nig

ml

100 ml

86

i
rL

r
I

c
c
c

c
c
c
c

r
i

r
I

i
-

r
L

r
i
r
L
?-

,L

r
i
r

89

TI EM W

c
c

rL
r
L

90

re el caso d e l pH l o s resultados obtenidos se reporten en l a

t a b l a 5.3.4-4.

Para poder a p r e c i s r l e tendencia que aiguen l o s resultados anteriomente tabulados fueron llevados a una Q r f i c e .

Orfice 5.3.4-1

para azcares reductores, g r f i c a 5.3.4-2

para protena s o l u b l e , grifioe 5.3.4-3

g r f i c a 5.3.4-4

para cido c t r i c o y

pera P H .

Por medio de e s t a fermentacin y con l e composicin de

nutrientes establecida en l e maximizacin sa obtuvieron l o 8

resultados a n t e r i o r e S , . d e l o s que s e puede d e c i r que ee t i e

ne un mayor rendimiento de &ido

o f t r i c o y biomaee con una

concentracin de Goma de Mezquita d e l 10%.

i
P

r
i

!-

91

IL

Grfica 5.3.4.1 Consumo

do rusiroto para diferentes conconthcioriOr

Goma do Mozqoito

r
L

()/It

O. 4

0.t

r
i

r
I

e. I

rflca 5.3.4- L Produccidn do Bkmasa eon rrrprcto a laconantre&

mgtml
O.?

tos

0.6

as

ion

0.4

an

OS

O.

0.1

de

F
i

Grdfico 5.3.1-3 Roduccldn de Acfdo Glttfco con rrrpmto a la

concontrocdn do Goma do Mozquitr

r
L,

r
I

mgml
O.

ion

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L

c
c

Lon
0.8

!L

c
c

a4

0.8

c
c
c
c

o. I

Grbflca 5.3.4.-4 Vorlocih de pH paro diferentes concmtmcionrr

da

Gomade Muqulto
h

PH

2.98
2.97
2.96
2.96
2.94
2.93
2.92
2.91
2.90

2 .o9
2.88
2.87
2.86
2.85
2.84
2.83
2.82

\"

2.81
2.80
2.79

10%

9&

I20

144

i68

tknipo hn.

Durante e l d e s e r r o l l o d e l a n 6 l i s i s bromatolgico para

l a gome ee tuviaron problemas con respecto a l dontenido de
carbohidrato6 t o t a l e a ya qua esta variaba en un rango de 65i

80% en ceda ocasin que ee l e h i z o , de e h i que l o s balancee

pare, l o s medioa de c u l t i v o empleeidos inicialmente

se

hicieran

tomando un contenido da 67% [medios I , 11). Une vez que s a

tuvo un valor d e f i n i t i v o pare este contenido de carbohidrai

t o s t o t a l e a que ee da BOX,

sa h i z o un nuevo balance para e l

medio Cmedio 1113, por l o c u a l , hubo c i e r t a s variaciones en

l a osntided de-biomaea producida ya que inicialmente [67%]

l a concentracin

tados fu6 de 5%y deepua fu de 10% [ya considerando 8 0 % ) ~

de mezquite que di mejores r e s u l -

Para asegurar que nuestra cepa estuviera en mejores cgn

de goma

dioiones pera a s i m i l a r l a goma,se l e h i z o una preadaptacin

que nos l l e v a un buen crecimiento d e l hongo como r e s u l t e -

do de

sta. Habiendo manejado diferentes concentraciones de

gome y POA se estableci que l a concentracin

ptima en l a

P
L

r
r

composicin de este medio s l i d o fu de 50% de goma de mezq u i t e , ye que s i aumentabsmos l a concentracin de & t e ,

al

medio presentaba d i f i c u l t a d e s para g a l i F i c a r debido a l a a l

t e viscosidad produaida por l a goma.

r
i
r-

Con reapecto a 105 parmetros fisicoqumicoa controlados

96

durante l e fermantacin,

pudimos obrerver que no hubo cambios

considerables en doe d a s qua provocaran altaracionesi a i g n i f i

6
L

oetivae, por l o que dwidimoa que

e r a necesario controler

e l pH ya que bast con a j u s t a r a l i n i o i c de l e fermantaoin

i.

c
c
c
c

a pH 3 para que e l hongo presentara buen d e s a r r o l l o . Le tendenofa del pH es a disminuir, l o que indica que e l hongo e d

t asimilando l o s nutrientea del medio.

La temperatura sa mantuvo ccnetente por medio de un bao

de a g i t a c i n . La temperatura repcrteda en le t a b l e 5.3.2-1

es l a que r e g i s t r e l a i r e de eelida [que a i cambi con e l

tiempo),pero e l medic se mantuvo e temperature constante de

33.c

que Favoreci e l creoimientc de

A. nicer

r
L

c
c
c
c
c

rL
c

r
L

Se llevaron acabo v a r i e s fermentaciones ocn f l u j o d i r e c

t o de a i r e ya que a l propsito i n i c i a l da nuestrc proyecto

fu producir cido a t r i c o en un c u l t i v o aireado, mismo que

no se pudo r e a l i z e r debido a l o s problamse que se presenteron entre l o s cueles se encuentra l a excesiva formacin de
espuma que no se pudo controier n i an usando d i f e r e n t a s antiespurnantas.

Por o t r o lado, e l a i r e que p r o v e n h de l a tuberfa estaba tan saco que evaporabe rpidamente e l medio de c u l t i v o ,
10 que t r a f e comc consecuencia una gran pbrdida en volumen

de & t e .

97

Por i o a n t e r i o r se tom l a d e s i c i n de l l e v a r acabo l a s

s i g u i e n t e s frrmenteciones s i n F l u j o d i r e c t o de mire,
s i n embargo,

stas,

no fueron anaerobioeo ya que el volumen que 005

pabe e l medio de c u l t i v o en e l matraz era de aproximedamente

e l 20% de su capacidad,

de manera que bast8 con e l a i r e con-

t e n i d o en el volumen r e o t a n t e de ste,

e d d e de que se eu--

mentaba e l rea de oontecto e n t r e a i r e y medio de c u l t i v o

--

por medio de a g i t a c i n mecnioa pera a d p e r m i t i r l e forma-c i n de biomaea en condioionea eerobiaa que son indispones--

b l e s para e l buen d e s e r r o l l o de A .

nigsr.

Pera meximizar e l medio de c u l t i v o que h i z o p o o i b l e l e

produccin de biome-

y cido c t r i c o se t r a b a j o con d i e t i n -

t a s compoeioiones en i a e que v a r i is concentracin

da goma

de mezquite y por conoiiguiente hubo d i f e r e n t e s r e l a c i o n e s

oarbono/nitrgeno IC/N],

esto nos l l e v a determiner una con

o e n t r a c i n de goma e l a c u a l ae t e n a un buen rendimiento

r e biomaea,

l e cual

-po

fu de 5% en el medio 1 1 , pero ye tenier,

do b i e n o a r s c t e r i z a d a l a goma se IleVrMn acebo nuevos balar,

cee y pruebas de crecimiento que nos condujeron e determinar
para e s t e nuevo medio CZII) que d a concentracin que favor@-c e e l d e e a r r o l l o d e l hongo y l a produccin de &ido

ctrico

de una mejor manera fu de 10%.

Como e l rendimiento obtenido con goma de mezquite como

s u s t r a t o fu8 b a j o Caproximadamente 2 % ) , oreamos que p o r i o
menos a n i v e l l a b o r a t o r i o no es r e n t a b l e prockicir dicho c i do de esta manera,

quiz u t i l i z a n d o cepas seleccionedas y

es

98
I

.per productoras de A s p e r g i l l u s niger e l rendimiento aumente

y se obtengan mejores resultados.

Por otro lado, t a l vez

EEE

necmcario m t u d i a r d a m

--

Fondo a l a goma o a l prooeeo metablico da t r a n e f o r o c i n de

arebimsa a & i d o

c t r i c o pare manipularla ds tal manera quo

e l rendirniento,eumente.

Em muy p o s i b l e que si se u t i l i z a une b u m aireacin

durante ' l a fermentacin los rendimientos

c
h

r
L

P
L

c
L

ssciln

mejores.

99
i
r

7. C O N C L U S I O N E S

1 . - ioe f e c t o r e e ms inportantee en esta fermentmcin

s o m : l e clase de microorganiano empleedo,

l a composicin

--

d e l medio de c u l t i v o , el abeetecimiento d
w oxfgeno, e l pH y

le temperatura.

2.- Loe elementos nutrientee deben preeenteree en te--

l e a oantidadee que eean s u f i c i e n t e s tanto en cantided de n i

L
c

r
I

trgeno ccmc de minerales para el buen d e s a r r o l l o del hongo,

el abastecimiento de nitrgeno y f o s f a t o parece e s t a r forms

do por una concentracin beetente d e f i n i d . y a que en centi-

dadee menores o mayores de las adecuedee. el hongo s u f r e

r i o s tranatornos en cuanto e su d e s a r r o l l o ,

ri ,
r
L-

vs

por l o que, w s -

t a e 5elOa se deben usar en cantidades l i m i t a & s .

En cuanto

e lee eelee de zinc y magneeio, son igualmcmte neceoericra

para l e produccin de cido c t r i c o pero eu u00 no es ten

e s t r i c t o oomo l o son l e e anteriores.

3.- Del a n l i e i s bromatolgico s e detsmin el ccnteni

do ds cerbohidratos t o t a l e s de la goma de mezquite que fu
de aproximadamente S O X , de l o s cueles e l 50%ee arabinose.

4.-

La goma de mezquite

ee

una materia prima que por

su composicin r e s u l t a s e r propicia para l l e v a r acabo l e

r
L

fermentacin c t r i c a .

--

1O0

5.-

A s p e r g i l l u s niger mostr s e r capaz de a s i m i l a r l o a

componentes de l a goma de mezquite, l o que e e r e f l e j a en l e

produocin de biomasa.

6.&llua

E l proceso de preadaptaoin y adaptacin de

e-

niger a l e goma favoreci enormemente l a produccin

de biomaaa y l a de oido c t r i c o .

7.-

E l porcentaje m6e adecuado para el crecimiento del

hongo f u del 10% de goma de mezquite y l a de mayor produc-

oin de soido c t r i c o , cuya r e l e c i n C/N e5 de 5 .

0.-

Ya que l a relacin C/N de 5 reault favorecer ten-

t o l a produccin de biomase como l a de cido c f t r i c o , se

--

coneerv est r e i e c i n durante i a e itimae fermenteoionee.

9.-

No f u neoeserio hacerle un pretratamiento a l a go

ma ya que l a e s t e r i l i z a c i n y e l pH cido Fueron e u f i c i e n t e s

para hacerla

10.-

ms

Fcilmente a s i m i l a b l e por e l hongo.

La produccin de cido c i t r i c 0 e5 un proceso f e r -

mentativo altamente eerobio y para que se efecte da una mg

nera edecuade ae requiere de un abastecimiento adecusdo y
s u f i c i e n t e de oxgeno,

en nuestro cae0 tomernoe en cuenta

eg

t e Factor y llegarnos a l a Conclusin de que durante l e a fei=

mentaciones s i n f l u j o d i r e c t o de a i r e , la agitecin de 106
matraces y e l oxgeno que sa encontraba presente en e l ma--

101

L
F

t r a z a s Doma o i e r t a oantidad que ee F i l t r a del e x t e r i o r

por e1 te&

--

d e l matraz,' era suFiciente para rueetra farnee

taoin.

11.-

An cuando el hongo log&

a s i m i l a r bien l a goma

de mezquita, 106 rendimientos de pmduocin de &cid0 d t r i '

L

[
rL

r
f
L

r
L

r
L

r
i

r
1

r
~

co son bajos, comparados con l o s mencionados en l a litermt;

ra

102

Se r e a l i z a r o n diferentes fermenteciones para le produc

cin de cido c t r i c o , desde la molienda y tamizado d e l sus

i
t r a t o haste

le

c u e n t i f i c e c i n de dicho &cid0 en

el

caldo de

fermentacin,

paeendo por preat3apteci.n-edmptaain de Aeper

p i l l u s niger

el

pcira producoin d e l & i d o

r
L

r
L.

El

sustreto y maximizacin d e l proceso tanto

Como para biomasa.

presente t r a b a j o se d e s a r r o l l u t i l i z a n d o metrcloee

oomo fermentadoree, donde se hizo un estudio previo d e l corn

portemiento de diversos frictorea f i e i c o q u m i c o s , a f i n de

observar de que manera i n f l u y e n en
mentacin, obaerv6ndose que

el

degerrollo de

la

fer-

le v a r i a c i n en mnima, por lo

que, no afeotan en gran medida

el

transcurso de sta.

r
L

La

7L

marimizscin d e l procerso para l e p r o b c c i n de

do o t r i c o p o n e i s t i baicamenta en modificeoiones al medio

de c u l t i v o , veriendo

le

la

ooncentracin de goma de mezquita y

de algunoa o t r o s n u t r i e n t e s , de manera que, se

une aonoentracin de goma [ I O % ) y composicin del medio

d i o I11

e e r i e E) con l a s cuales

--

s e r i e E se obtuvo un rendirni-

probadas. Con

t o de aproximadamente 2 X , por

[mE

la produccin de cido c&

t r i c o era mayor con respecto a las demes concentraciones

el medio I11

lleg a

lo que llegemos

la c o n c h - -

103

?-

ein de que ste e r e muy b a j o , de menere que r e s u l t s s e r un

c
r

Li

r
L

r
L

i
i

proceso no r e n t a b l e , e menos de que s e mejoren l e e condicio

nes de proceso o l a cepe de A e p e r g i l l u s niamr.

104

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