MATERIALES Y REACTIVOS

Estufa de laboratorio.

- Modelo: Sigma
Centrifugadora
Tubos eppendorf
Mechero bunsen
Encendedor
Hielo
Pipeta pasteur
Encendedor

Cultivo de cepas receptoras

X-LBlue
Solucion de Mg Cl2 0.1 M
Solucion fra de Ca Cl2 0.1 M
Caldo LB liquido (atemperado
a 37o)
2 Cajas petri con gentamicina
2 Cajas petri con ampicilina
2 Cajas petri con tetraciclina

Ejercicios de aplicacin
1. De acuerdo al siguiente antibiograma. Cual seria el medio de seleccin
para receptoras y transformantes?

Bacteria
Donante
Receptor
a

R.-

Amp
S
R

A N T I B I O G R A M A
Cm
Sm
Tet
Erit
R
R
S
R
S
S
S
R

Para la receptora: Amp

Para transformantes: Amp-Sm y Amp-Cm

2. Despus de la transformacin se tienen los siguientes datos

Dilucin
Directo
10-2
10-4
10-5

Amp
incontable
incontable
73
9

Amp-Sm
1100
9
0
0

Amp-Cm
4000
33
0
0

a. Qu genes se transformaron?
R.- Se transformaron los genes Sm y Cm
b. Cul es la frecuencia de transformacin de cada gen?
R.-

Amp
7.3 x 106 UFC/ml
9 x 106 UFC/ml

Amp-Sm
1.1 x 104 UFC/ml
9 x 103 UFC/ml

Amp-Cm
4 x 104 UFC/ml
3.3 x 104 UFC/ml

Cot
S
S

c. Cul es la interpretacin de las frecuencias de

transformacin ?
R.-Mas o menos 1 bacteria recibe el gen de resistencia a Sm de cada
1000 receptoras y 4 el gen Cm.
CUESTIONARIO
1. Que se entiende por clula competente y que caractersticas
fisiolgicas tienen?
R- Una clula competente es aquella capaz de incorporar una molcula de DNA
exgeno y transformarse. Una caracterstica de esta celula es que puede
incorporar mas DNA que aquellas clulas no competentes como unas cien
veces ms, son cepas deficientes en algunas DNasas, las cuales normalmente
destruiran el DNA entrante, la permeabilidad de su membrana es diferente a
las de las clulas no competentes, adems que tiene los sistemas de
modificacin y restriccin alterados.
3. Cmo se utiliza la tcnica de transformacin en terapia gnica?
R- La transformacin tiene lugar dentro del paciente al que se le administra la
terapia. Consiste en administrarle al paciente un gen a travs de un vehculo
(por ejemplo un virus), el cual debe localizar las clulas a infectar (empleado
en inmunodeficiencias severas). Tambin se lleva a cabo a partir de una biopsia
del tejido del paciente y luego se le transplantan las clulas ya transformadas,
esta tcnica dirigida a clulas hematopoyticas ya que son clulas cultivables.
La creacin de cromosomas humanos estables es una de las posibilidades que
en la actualidad se maneja como una de las formas de introducir ADN
permanentemente en clulas somticas para el tratamiento de enfermedades
mediante el uso de la terapia gnica. Presentan una elevada estabilidad,
adems de permitir introducir grandes cantidades de informacin gentica.
5. Qu es el sistema de modificacin y restriccin?
R- Son sistemas empleados por bacterias para protegerse de ataques de DNA
exgeno (normalmente vricos) que ingresan en la bacteria.
Sistema de modificacin esta parte consiste en la introduccin de ciertos
grupos metilo en algunas bases nitrogenadas de fragmentos de ADN. El
propsito de esta parte es que las enzimas de restriccin no corten el ADN
propio.
Sistema de restriccin - este sistema le proporciona a la bacteria una
proteccin frente a la invasin por parte de ADNs externos a ella, evitando que

se produzca un intercambio gentico. Esto le brinda a la bacteria una cierta

inmunidad frente a bacterifagos que pudieran poner en peligro su vida. Esta
parte del sistema de restriccin- modificacin se lleva a cabo por medio de las
enzimas de restriccin, que son las que realizan los cortes en los ADNs
externos que irrumpen en la bacteria.
7. Cules serian los propsitos para transformar clulas vegetales?
R- El propsito seria el de la obtencin de alimentos mejorados osea
genticamente mejorados y plantas resistentes a herbicidas que disminuyan la
contaminacin de aguas y suelos.
9. Por qu cada gen se transfiere con diferente frecuencia?
R- porque no todos los genes son de la misma clase ya que algunos son
lineales y otro circulares y difieren en el tamao, estas caractersticas son muy
relevantes en la incorporacin del material gentico, adems de que los
mecanismos de adaptacin para cada gen son diferentes tras ingresar a la
clula hospedera.
BIBLIOGRAFA
Jos Luque Cabrera Biologa Molecular E Ingeniera Gentica. Edicin
Harcourt 2001
Http://Info.Med.Yale.Edu/Genetics/Ward/Tari/Guide.Html.
http://moblog.whmsoft.net/related_search.php?keyword
&language=spanish&depth=2