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Autor: Mara del Rosario Lpez Mendoza

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO


COLEGIO DE CIENCIAS Y HUMANIDADES
PLANTEL ORIENTE
REA DE CIENCIAS EXPERIMENTALES (BIOLOGA)
Efecto del pH y la temperatura alta en la enzima catalasa

Elaborada por: Biloga Mara del Rosario Lpez Mendoza.


Objetivos:
- Demostrar que la prdida de la actividad enzimtica de la catalasa por
desnaturalizacin, a travs de cambios en temperatura y pH (variables).
- Evidenciar la asociacin de estructura en las protenas con su funcin, pues
al modificar la primera se pierde su actividad biolgica.
- Usar modelos sencillos demostrativos de eventos biolgicos de gran
importancia.
- Desarrollar habilidades de anlisis y explicativas acerca de modelos en las
ciencias qumico-biolgicas.
- Promover la valoracin de la ciencia y su capacidad explicativa.
Ubicacin en los Programas de Biologa en el Colegio:
- En la unidad I de Biologa 1 en tema Molculas presentes en las clulas:
funcin de los carbohidratos, protenas, lpidos y cidos nucleicos.
- Unidad II, Biologa 1 Procesos de Conservacin.
- Unidad I, Biologa 3 Enzimas y Rutas metablicas.
Conceptos clave:
Protena; enzima, sustrato; estructura primaria, secundaria, terciaria y
cuaternaria de las protenas y desnaturalizacin y relacin estructura-funcin
biolgica.
Marco Terico:
Las protenas son un grupo de molculas presentes en los sistemas vivos, por
lo cual frecuentemente se les denomina biomolculas. Presentan funciones muy
variadas como la catlisis (actividad enzimtica), conduccin o transporte,
contraccin, nutricin y otras. Tambin pueden conformar estructuras, como
en la membrana celular.

Autor: Mara del Rosario Lpez Mendoza

Ya que en la clula ocurren una gran cantidad de reacciones qumicas y stas


deber realizarse, generalmente, a gran velocidad, con bajo costo energtico,
sin grandes cambios de temperatura, presin o pH, se aprovecha la funcin
cataltica de varias protenas.
Las enzimas son catalizadores especficos, es decir, slo catalizan para los
mismos reactivos. Su estructura est fuertemente ligada a su funcin, luego
entonces las modificaciones en su estructura secundaria, terciaria o
cuaternaria impactarn directamente su actividad. As, la unin especfica no
slo explica la eficiencia cataltica de las enzimas, sino tambin su selectividad
por el sustrato.
Algunos factores fsicos modifican la estructura secundaria y terciaria de
las protenas, tales como cambios en el pH, la temperatura (termosensibles) y
la salinidad, entre otras.
Especficamente, la enzima catalasa se encuentra en varios animales y
plantas. Su peso molecular es de 247 500 (la del caballo); posee al grupo hemo,
es decir, contiene hierro trivalente unidos a sus cuatro ncleos porfirnicos,
por lo que se clasifica como una protena conjugada y es del grupo de las
Hidroperoxidasas. Es muy activa pues 1 mg de sta libera cerca de 3000 litros
de oxgeno por hora a 0oC.
En animales y a nivel celular se ubica dentro de organelos como peroxisomas
de hasta 0.5 micras. La funcin de la catalasa aqu es remover rpidamente el
perxido de hidrgeno, generado por la acetil coenzima A oxidasa, segn la
siguiente reaccin:
Acil CoA + O2 acil Co A ,-insaturada + H2O2
Esta ocurre en el proceso de degradacin de los cidos grasos, por ejemplo en
las clulas del hgado (los hepatocitos).
En las plantas, dentro de semillas ricas en lpidos como el ricino y la soya,
donde se conforman microcuerpos, como los glioxisomas, que se encuentran
brevemente durante el proceso de germinacin. Los cidos grasos se degradan
en succinato, usando entre otras enzimas a la catalasa. En tejidos foliares los
peroxisomas se emplean en la fotorespiracin y miden hasta 1 micra.
Tenemos entonces que el H2O2 es muy txico para los sistemas vivientes por
lo que presentamos mecanismos para eliminarlo y la reaccin para eliminar el
perxido de hidrgeno, va enzimtica es:
2 H2O2 2 H2O + O2(gas)
Material, equipo y reactivos:

Autor: Mara del Rosario Lpez Mendoza

Equipo:
-

Gradilla
Lmpara de alcohol
Pinzas para tubo
5 Tubos de ensayo
4 Pipetas 5 ml.
1 Vasos de precipitados 100 ml.
Varilla de agitacin
Tiras indicadoras de pH.
Etiquetas o cinta adhesiva
Navaja o cter
Caja petri

Reactivos:
Agua oxigenada (20 o 30 vol.)
cido ntrico
Hidrxido de Sodio
Agua

Solucin:
Solucin de Hidrxido de sodio, al 5%:
2.5 gr. de NaOH en 50 ml. de agua
(suficiente para todos los equipos)
-

Material biolgico:
Hgado fresco (de pollo o res)

Diseo prctico: Desnaturalizacin de la Catalasa por incremento en


temperatura y cambio en pH.
-

Coloca el hgado en caja petri y con cter o navaja fraccinalo en porciones


muy pequeas
Colocar en cuatro tubos de ensayo porciones de hgado fresco (trozos muy
pequeos). Ayudndote con la varilla de vidrio coloca las porciones de hgado
hasta el fondo de los tubos. Etiquetar y numerar tubos del uno al cuatro.
Coloca cada pipeta en cada reactivo o solucin y no las mezcles para no
contaminarlos.
En el tubo no. 1 (testigo) agregar 2 ml. de perxido de hidrgeno (agua
oxigenada). Observar burbujeo, indicador de desprendimiento de oxgeno
molecular.
En el tubo no. 2 (testigo) aadir 2 ml. de agua, demostrando que no hay
desprendimiento de O2. Calentar hasta ebullicin por unos segundos, sin
llegar a secar1. Agregar a ste 1 ml. de H2O2. Observar si hay burbujeo o no,
y en su caso si es tan abundante como en el tubo 1.
En el tubo no. 3 agregar 1ml. de cido ntrico, dejando actuar por 1 minuto.
Agregar ahora 1 ml. de perxido de hidrgeno y observar intensidad de
burbujeo. Con la tira de papel indicador mide el pH que tiene esta mezcla.
En el tubo no. 4 agregar 1ml. de solucin de hidrxido de sodio (al 5%).
Dejar actuar 1 minuto. Agregar 1 ml. de agua oxigenada y observar
intensidad de burbujeo. Mide el pH que tiene esta mezcla.

Calentar slo lo suficiente para mantener la ebullicin y dirigir la boca del tubo hacia los
sitios en donde no estn tus compaeros.
1

Autor: Mara del Rosario Lpez Mendoza

En vas de la proteccin ambiental:


- Separar residuos orgnicos (cascarn de huevo, sobrantes de yema y clara y
colocarlos en espacio de elaboracin de composta o en jardineras,
removiendo y enterrando)
- Neutralizar cido usado con lcali sobrante (base: NaOH) antes de verterlo
en las tarjas.
Interpretaciones frecuentes, errneas o imprecisas, de los alumnos en su
reporte para el punto de discusin de resultados:
a)
b)
c)
d)
e)

Se coci el hgado o la clara de huevo.


El hgado cambi de color.
Matamos a la sustancia viva y ya no funciona.
Se desprenden burbujas de aire de los huecos en el hgado.
El cido y la sosa matan a las clulas.

Cuestionario-gua:
1. Qu gas se desprende al agregar perxido al hgado?
2. En dnde se encuentra la enzima catalasa?
3. Por qu es importante que las clulas tengan a la enzima catalasa?

Bibliografa:
- www.arrakis.es/~rflunego/enzmas
- Conn, E.E.; Stumpf, P.K.;Bruening, G. y Doi, R.H. (1996) Bioqumica
fundamental. 5 ed. Ed. Limusa Noriega Editores, Mxico. p. 736.
- Laguna, Jos (1996) Bioqumica. Ed. La prensa mdica mexicana. p. 676.
- Lehninger, Albert (1972). Bioqumica. Las bases moleculares de la
estructura y la funcin. Ed. Omega, S.A. Barcelona, Espaa. p. 887.

Propuesta general de elementos que debes considerar para elaborar tu reporte


de prctica con V de Gowin:

Autor: Mara del Rosario Lpez Mendoza

Preguntas que
se contestarn
al efectuar esta
prctica

Principales teoras,
procesos, conceptos
y datos asociados a
esta prctica

Discutir los
resultados haciendo
uso de los
conceptos del
dominio terico y
respuesta
argumentada a
preguntas

Si tu reporte es en la forma tradicional ha de contener al menos:


-

Cartula.- institucin, titulo prctica, nombre profesor, nombre alumno o


alumnos, asignatura o materia, grupo escolar, nmero de equipo o mesa,
fecha, turno
Objetivos
Introduccin
Resultados
Discusin de Resultados
Conclusiones
Bibliografa

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