HDLc -D

HDL Cholestrol D
Directe. Enzymatique colorimtrique
Dtermination quantitative de cholestrol HDL

IVD

2.
3.

Conserver 2-8C

PRINCIPE DE LA METHODE
Dtermination directe de HDL (cholestrol de lipoprotines de haute densit)
sans besoin de prtraitement ou centrifugation de lchantillon.
La dtermination est ralise en deux tapes :
1 Elimination de lipoprotines non-HDL
CHE
Esters cholestrol
Cholestrol + Acides gras

4.
5.
6.

CHOD
Cholestrol + O 4-Cholestnone + H O
2
2 2
2H O
2

2 Mesure de HDL

Catalasa

2H2O + O2

7.
8.
9.

CHE
Esters cholestrol
Cholestrol + cides gras

CALCULS

CHOD
Cholestrol + O 4-Cholestnone + H O
2
2 2

( A)Echantillo n

POD
2 H2O2 + HDAOS + 4-AA
Quinonimine + 4H2O
Lintensit de la couleur forme est proportionnelle la concentration de HDL
prsente dans lchantillon test.

SIGNIFICATION CLINIQUE
Les particules de HDL sont des lipoprotines qui transportent le cholestrol vers
les cellules. Le cholestrol transport par les lipoprotines forte densit est
appel bon cholestrol, tant donn que des niveaux levs sont associs
un risque cardiovasculaire faible. Un niveau faible de cholestrol HDL est
considr comme lun des principaux facteurs de risque cardiovasculaire et y
de maladies des artres coronaires 1, 5,6.
La diagnostic clinique doit tenir compte des donnes cliniques et de laboratoire.

REACTIF
N,N-bis (2-hydroxythyl)-2Acide Aminothanesulfonique pH 6.6
N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3,5dimethoxyaniline (HDAOS)
Cholestrol estrase
Cholestrol oxydase
Catalase
Ascorbique oxydase

0.7 mM
800 U/L
500U/L
300 U/L
3000 U/L

R2

N,N-bis (2-hydroxythyl)-2Acide Aminothanesulfonique pH 7,0

4 Aminoantipyrine
Proxydase

100 mM
4 mM
3500 U/L

HDLc/ LDLc CAL

Calibrateur. Srum humain lyophilis.

R1

100 mM

PRECAUTIONS
HDLc/ LDLc CAL
Les composants dorigine humaine se sont rvls ngatifs pour lantigne HBs,
HCV et pour lanti-HIV (1/2). Toutefois, ils doivent tre considrs avec
prcaution car ils sont trs infectieux.
TRAABILIT: les valeurs sont attribues conformment aux conditions du
Protocole de la Mthode dvaluation US National Reference System CRMLN.
- R 1 et R 2: Prts lemploi.
- HDLc/ LDLc CAL: Reconstituer le contenu dune capsule avec 1 mL deau
distille. Fermer et mlanger doucement jusqu ce que le contenu soit
dissout.

CONSERVATION ET STABILITE
Tous les composants du kit sont stables jusqu la date de premption indique
sur ltiquette de la capsule, et si les capsules sont maintenus hermtiquement
ferms 2-8C, labri de la lumire et des sources de contamination. Ne pas
congeler les ractifs.
- R 1 et R 2: Une fois ouverts, restent stables 8 semaines 2-8C.
- HDLc/ LDLc CAL: Une fois reconstitu, stable 2 semaines 2-8C ou 3 mois
20C.
-Ne pas utiliser les ractifs en dehors de la date indique.
Indices de dtrioration des ractifs:
- Prsence de particules et turbidit.

MATERIEL SUPPLEMENTAIRE
Spectrophotomtre ou analyseur pour lectures 600 nm.
Cuvettes de 1,0 cm dclairage.
Equipement classique de laboratoire

ECHANTILLONS
1

Srum ou plasma: Ne pas utiliser de coagulants contenant du citrate.

Ne pas utiliser dchantillons hmolyss. Sparer le srum des hmaties le plus
tt possible. Stabilit de lchantillon: 7 jours 2-8C.

PROCEDURE
1.

x Calibreur conc. = mg/dL de HDL cholestrol dans lchantillon

( A) Calibreur
Facteur de conversion: mg/dL x 0,0259 = mmol/L.

CONTROLE DE QUALITE
Il est conseill danalyser conjointement les chantillons de srum dont les valeurs ont
t contrles:SPINTROL H Normal et pathologique (Rf. 1002120 et 1002210).
Si les valeurs se trouvent en dehors des valeurs tolres, analyser linstrument, les
ractifs et le calibreur.
Chaque laboratoire doit disposer de son propre contrle de qualit et dterminer les
mesures correctives mettre en place dans le cas o les vrifications ne
correspondraient pas aux attentes.

VALEURS DE REFERENCE2
Hommes
Femmes
Risque mineur
> 50 mg/dL
> 60 mg/dL
Risque normal
35 50 mg/dL
45 60 mg/dL
Risque lev
< 35 mg/dL
< 45 mg/dL
Ces valeurs sont donnes titre dinformation. Il est conseill chaque laboratoire de
dfinir ses propres valeurs de rfrence.

CARACTERISTIQUES DE LA METHODE
Gamme de mesures: Depuis la limite de dtection 3 mg/dL jusqu la limite de
linarit 150 mg/dL.
Si la concentration de lchantillon est suprieure la limite de linarit, diluer 1/2
avec du ClNa 9 g/L et multiplier le rsultat final par 2.
Prcision:
Intra-srie (n= 30)
Inter-srie (n= 30)
Moyenne (mg/dL)
37,07
57,93
37,7
58,1
SD
0,45
0,88
0,35
0,51
CV (%)
1,20
1,53
0,93
0,88
Exactitude: Les ractifs SPINREACT (y) ne montrent pas de diffrences
systmatiques significatives lorsquon les compare dautres ractifs commerciaux (x).
Les rsultats obtenus avec 50 chantillons ont t les suivants:
Coefficient de corrlation (r): 0,994.
Equation de la Coubre de rgression: y=0,93x + 0,033
Les caractristiques de la mthode peuvent varier suivant lanalyseur employ.

INTERFERENCES

PREPARATION

Cuvette:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 cm dclairage
Temprature . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37C
Rgler le spectrophotomtre sur zro en fonction de leau distille
Pipetter dans une cuvette:
Blanc
Calibreur
Echantillon
300
300
300
R 1 (L)
-3
-Calibreur (L)
--3
Echantillon (L)
Mlanger, laisser incuber 5 minutes 37C
Lire labsorption (A1) du calibreur et lchantillon.
Ajouter:
Blanc
Calibreur
Echantillon
100
100
100
R 2 (L)
Mlanger et incuber 5 minutes 37C.
Lire labsorbation (A2) en fonction du blanc du ractif.
Calculer: A= A2 A1.

Aucune interfrence avec Bilirubine na t observe jusqu 30 mg/dL, hmoglobine

jusqu 500 mg/dL facteurs rhumatodes jusqu 1000 UI/mL ou lipmie jusqu 1200
mg/dL.
Les chantillons lipmiques avec concentration de triglycrides suprieure 1200
mg/dL, doivent tre dilus 1/10 avec ClNa 9 g/L et il faut multiplier le rsultat final par
10.

REMARQUES
Le ractif 2 prsente une coloration jaune due la peroxydase quil contient, ce
qui naffecte pas dans labsolu la fonctionnalit du ractif.
SPINREACT dispose de consignes dtailles pour lapplication de ce ractif dans
diffrents analyseurs.

BIBLIOGRAPHIE
1.
2.
3.
4.
5.
6.

Naito H K HDL Cholesterol. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto.
Princeton 1984; 1207-1213 and 437.
US National Cholesterol Education Program of the National Institutesof Health.
Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.PCT/JP97/04442

PRESENTATION
Rf:1001096
Rf:1001097
Rf:1001098
Rf:1001099

Cont.
.

R1 :1 x 60 mL, R2:1 x 20 mL, CAL: 1 x 1 mL

R1:1 x 30 mL, R2:1 x 10 mL, CAL: 1 x 1 mL
R1:1 x 240 mL, R2:1 x 80 mL, CAL: 1 x 1 mL
R1:3 x 240 mL, R2:1 x 240 mL, CAL : 4 x 1 mL

Conditions de test:
Longueur dondes: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 600-700 nm

BSIS37-F

07/11/13

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