TP : CINETIQUE DE LHYDROLYSE DE LAPNP.

LAPNP est lActate de ParaNitroPhnyle. Cette molcule a pour formule semi-dveloppe :

CH3-COO-C6H4-NO2.
Elle drive de la formule de lacide thanoque. Il nest donc pas surprenant quon sintresse
son hydrolyse qui se produit selon la raction situe ci-dessous.

Cette raction est dordre 1 par rapport lAPNP, elle est catalyse par une molcule cyclique
renfermant deux atomes dazote : limidazole quon notera par la suite Im.
Lavancement de cette raction sera suivi par spectrophotomtrie 400nm, car cette longueur donde seul lion paranitrophnate NO2-C6H4-O- absorbe.
Lobjectif du TP est de vrifier que la vitesse de la raction scrira :

v = k OBS [ APNP ] o

k OBS est la constante de vitesse observe lors de lexprience, mais aussi de montrer que cette constante de vitesse dpend de la concentration du catalyseur. On essaiera de vrifier que
k OBS = k 0 + k CAT [Im ] .
Il est ncessaire lors de ce TP de manipuler les solutions avec des gants.

1. PREPARATION DES EXPERIENCES

LAPNP est dj prt en solution 8.10 mol.L dans de lactonitrile CH3CN. En effet, il ne
shydrolyse pas dans ce solvant au contraire de ce quil ferait dans leau (mme si la raction sans
catalyseur est trs lente).
-4

-1

Prparer 100mL dune solution tampon phosphate de concentration 0,1mol.L et de pH=7,0.

Pour ce faire vous disposez des deux solutions suivantes :
-1
-1
NaH2PO4 : 0,2mol.L et Na2HPO4 : 0,2mol.L
2Le pKA du couple H2PO4 / HPO4 est de 7,2. Un rapide calcul permettra de connatre les volumes
mlanger.
-1

Chaque groupe prparera une ou plusieurs solutions Si dimidazole dans 100ml du tampon
-1
phosphate, de telle sorte que 6 solutions de concentration en imidazole 0,03 ; 0,04 ; ... 0.08mol.L
soient utilises lors des expriences. Mettez-vous daccord !

2. EXPERIENCES
Elles sont simples raliser. Il sagit dintroduire 1mL (mesur la pipette) de la solution
dAPNP dans 10mL dune des solutions Si dimidazole dans le tampon phosphate. Aprs avoir rapidement (1 2s) mlang les ractifs, remplir une cuve du spectrophotomtre et enregistrer lvolution de
labsorbance A de la solution 400nm en fonction du temps. On pourra si lasymptote nest pas atteinte soit relancer une srie de mesures soit conserver la cuve et mesurer un peu plus tard, avec le
mme spectrophotomtre, labsorbance quon assimilera labsorbance A pour t .

SEIGNE JEAN-ROBERT

FAURIEL

SAINT-ETIENNE

TP : CINETIQUE DE LHYDROLYSE DE LAPNP

Pour lenregistrement de la cintique, On utilisera le logiciel Synchronie et son module Synchrochim. Il faut commencer par sassurer que lordinateur reconnat bien le spectrophotomtre Scomam 250. Ensuite dans plage de mesures, dcliquer la mesure de la transmittance car on travaillera
en absorbance. Dfinir la longueur donde, le temps total de lexprience (on prendra 900s) et
lintervalle de temps entre deux mesures (15s). Pour faire le zro, cest--dire ltalonnage du spectrophotomtre, il faut cliquer sur Acquisition. Ce nest qu ce moment-l que le logiciel propose de faire
ltalonnage.
Etalonnage : prendre une cuve propre et sche et identifier les deux faces qui vont tre traverse par
le faisceau lumineux. La remplir de la solution Si. Le logiciel va piloter le spectrophotomtre et vous
indiquera quand il aura termin. A ce moment-l on peut vider la cuve et surtout lorsquon la rutilisera
pour les mesures, il faudra que les mmes faces soient traverses par la lumire.
Attention : aprs ltalonnage, lenregistrement des valeurs dbute aussitt que vous cliquez sur Introduire la solution pour suivre la cintique. OK.
Exprience : Introduire 1mL (mesur la pipette) de la solution dAPNP dans 10mL dune des solutions Si dimidazole dans le tampon phosphate. Aprs avoir rapidement (1 2s) mlang les ractifs,
remplir une cuve du spectrophotomtre et enregistrer lvolution de labsorbance A en cliquant sur OK.

3. EXPLOITATION
Selon la loi de Beer-Lambert, labsorbance de la solution est donne par : A = cl o est le
coefficient dabsorption constant et caractristique de lion paranitrophnate, c est la concentration de
lespce qui absorbe et l la longueur sur laquelle le faisceau lumineux traverse la solution. On rappelle la dfinition de labsorbance :

A = log

I0
o I 0 est lintensit du faisceau aprs la traverse de
I

la solution rfrence et I lintensit aprs la traverse de la solution.

Construire un tableau sous la raction tudie ici ; on appellera x la concentration en lion paranitrophnate une date quelconque.
Etablir lexpression de x en fonction du temps. En dduire lexpression de labsorbance A en
fonction de A , k OBS et t.
Vous avez toute libert pour utiliser toutes les capacits du logiciel Synchronie afin den dduire la valeur de k OBS .

En enregistrant plusieurs cintiques des concentrations en imidazole diffrentes et en

profitant des rsultats exprimentaux des autres groupes, vrifier la loi propose pour
k OBS .

4. PRINCIPE DE FONCTIONNEMENT DUN SPECTROPHOTOMETRE

Identifier sur le spectrophotomtre qui a t ouvert les diffrents lments essentiels de son
fonctionnement. En utilisant le document rponse remis avec ce TP, situer les principaux lments et
donner les principes physiques qui les gouvernent.

SEIGNE JEAN-ROBERT

FAURIEL

SAINT-ETIENNE