CIDO RICO Liquiform

Ref.: 140

Instrues de Uso

MS 10009010071

por reao de ponto final em amostras de sangue, urina e lquidos

(amnitico e sinovial).

O mtodo proposto facilmente aplicvel maioria dos analisadores

automticos e semi-automticos capazes de medir uma reao de ponto
final entre 490 e 540 nm.

[Somente para diagnstico in vitro]

Metodologia . Enzimtico - Trinder

Princpio . O cido rico determinado de acordo com as seguintes

Reagentes

Finalidade . Sistema enzimtico para determinao do cido rico

reaes:

1.
Uricase
cido rico + O2 + H2O

Alantona + CO2 + H2O2

Peroxidase
2H2O2 + DHBS + 4-aminoantipirina
Antipirilquinonimina + 4 H2O
O cido rico oxidado pela uricase a alantoina e perxido de hidrognio.
O perxido de hidrognio, na presena da peroxidase, reage com o DHBS
e a 4-aminoantipirina, formando o cromognio antipirilquinonimina. A
intensidade da cor vermelha formada diretamente proporcional
concentrao do cido rico na amostra.

Caractersticas do sistema .

A dosagem de cido rico

utilizando a reao de Trinder caracteriza-se por ser um mtodo direto, de
fcil aplicao em sistemas automticos, que tem a especificidade da
uricase. Muitos produtos utilizam o fenol como reagente de acoplamento.
Entretanto, a baixa sensibilidade do fenol e a incompatibilidade de pH
timo entre a uricase de origem animal e a peroxidase criam srios
obstculos confiabilidade do mtodo.
A Labtest, com o sistema cido rico Liquiform, supera estas
dificuldades substituindo o fenol pelo cido 3,5-dicloro-2-hidroxibenzeno
sulfonato (DHBS), que 4 vezes mais sensvel, permitindo uma relao
adequada entre amostras e reagentes, possibilitando obter uma
sensibilidade tima em relao a baixa concentrao do analito.
O reagente disponibilizado sob a forma lquida e distribudo em dois
reagentes permitindo a sua utilizao em sistemas automticos,
facilitando a eliminao da ao de interferentes.
A metodologia monorreagente pode ser aplicada utilizando um Reagente
de Trabalho que estvel at a data de expirao dos reagentes que o
compe, quando mantido entre 2 e 8 C. O Reagente de Trabalho obtm
desempenho adequado mesmo em situaes de baixas demandas do
teste. O sistema permite ainda preparar o volume de Reagente de
Trabalho necessrio para uma medio da concentrao do cido rico.
A linearidade do mtodo de 20 mg/dL, o que diminui a necessidade de
efetuar diluies em um nmero significativo de amostras.
O reagente foi desenvolvido com um conjunto especial de surfactantes
que promovem a clarificao de turbidez ocasionada por lpides, o que
reduz significativamente a interferncia causada por hiperlipmia na
determinao da concentrao de cido rico.

01 Portugus - Ref.: 140

1 - Reagente 1 - Armazenar entre 2 - 8 C

Contm tampo 155 mM, 4-aminoantipirina 0,1 mM, peroxidase
1000 U/L, azida sdica 0,02% e surfactantes.

2.

2 - Reagente 2 - Armazenar entre 2 - 8 C

Contm tampo 155 mM, DHBS 2,5 mM, uricase 300 U/L, azida
sdica 0,02% e surfactantes.

3.

- Padro - Armazenar entre 2 - 8 C

Contm cido rico 6,0 mg/dL. Armazenar bem vedado para evitar
evaporao.
Os reagentes no abertos, quando armazenados nas condies
indicadas, so estveis at a data de expirao impressa no rtulo.
Durante o manuseio, os reagentes esto sujeitos contaminao de
natureza qumica e microbiana que podem provocar reduo da
estabilidade.

Preparo do reagente de trabalho . O conjunto de um frasco de

Reagente 1 e um frasco de Reagente 2 permite preparar o Reagente de
Trabalho. Transferir o contedo de um frasco de Reagente 2 para um
frasco de Reagente 1 e homogeneizar suavemente. Identificar o frasco do
Reagente de Trabalho e anotar a data de expirao.
Estudos demonstram que o reagente de trabalho apresenta elevada
estabilidade. Aps o preparo, deve-se considerar que a data de expirao
do reagente de trabalho a mesma dos reagentes que o compe, desde
que mantido entre 2 e 8 C, em recipiente fechado e quando no houver
contaminao qumica ou microbiana. O desenvolvimento de colorao
levemente rsea no Reagente de Trabalho normal e no afeta o seu
desempenho.
Opcionalmente, pode-se preparar menor volume do Reagente de
Trabalho utilizando a proporo 4 volumes do Reagente 1 e 1 volume do
Reagente 2. Para preparar o volume de reagente necessrio para realizar
um teste, misturar 0,8 mL do Reagente 1 e 0,2 mL do Reagente 2.
Para preservar seu desempenho, o reagente deve permanecer fora da
geladeira somente o tempo necessrio para se obter o volume a ser
utilizado. Evitar exposio luz solar direta.

Precaues e cuidados especiais

No utilizar o Reagente quando sua absorbncia medida contra gua em
505 nm for igual ou maior que 0,300 ou quando se mostrar turvo e com
sinais de contaminao.
Os cuidados habituais de segurana devem ser aplicados na
manipulao do reagente. Os reagentes contem azida sdica que txica.
No ingerir e, no caso de contato com os olhos deve-se lavar
imediatamente com grande quantidade de gua e procurar auxlio
mdico. A azida pode formar compostos altamente explosivos com
tubulaes de chumbo ou cobre. Portanto, utilizar grande volume de gua
para descartar os reagentes.
Cuidados com o tempo de reao, temperatura de trabalho e pipetagens
so extremamente importantes para obteno de resultados corretos.
Os reagentes devem ser manuseados seguindo as boas prticas de
laboratrio que incluem evitar ingesto e contato com pele, mucosas e
olhos.

Material necessrio no fornecido

1. Banho-maria ou incubador mantido temperatura constante (37 C).
2. Fotmetro capaz de medir com exatido a absorbncia entre
490 e 540 nm.
3. Pipetas para medir amostras e reagentes.

4. Cronmetro.

Para descartar os reagentes e o material biolgico sugerimos aplicar as

normas locais, estaduais ou federais de proteo ambiental.

Interferncias
A utilizao de plasma fluoretado leva a obteno de resultados
falsamente diminudos. Fluoreto atua como inibidor da uricase.
Metodologia birreagente considerar os seguintes valores para
interferentes:
Valores de bilirrubina at 5 mg/dL e hemoglobina at 200 mg/dL e
amostras com triglicrides at 1200 mg/dL no produzem interferncias
significativas.
Metodologia monorreagente considerar os seguintes valores para
interferentes:
Valores de bilirrubina at 5 mg/dL e hemoglobina at 50 mg/dL e
amostras com triglicrides at 1200 mg/dL no produzem interferncias
significativas.
Para avaliar a concentrao aproximada da hemoglobina em uma
amostra hemolisada pode-se proceder do seguinte modo: diluir 0,04 mL
da amostra em 2,0 mL de NaCl 150 mmol/L (0,85 %) e medir a
absorbncia entre 405 ou 415 nm acertando o zero com gua deionizada
ou destilada.
Hemoglobina (mg/dL) Absorbncia405 x 601
Hemoglobina (mg/dL) Absorbncia415 x 467

Procedimento

Influncias pr-analticas . O cido rico est aumentado nas 24

horas que sucedem a ingesto de lcool.

Amostras: Soro, plasma (EDTA, Heparina), urina e lquidos (amnitico e

sinovial).

As concentraes sricas de cido rico apresentam grandes variaes

no dia-a-dia e sazonais num mesmo indivduo. O cido rico se eleva com
o stress, estados de jejum prolongado e aumento de peso corporal.

Urina . Homogeneizar a urina, separar 10 mL, acertar o pH entre 7,0 e 9,0

com NaOH 5% e aquecer 10 minutos a 56 C para dissolver os cristais de
urato e cido rico. Diluir a urina 1:10 (0,1 mL de urina + 0,9 mL de gua
destilada). Multiplicar o resultado obtido por 10.

O cido ascrbico (vitamina C), por ser uma substncia redutora,

consome o perxido de hidrognio, levando a obteno de resultados
falsamente diminudos. O paciente deve ser orientado a no ingerir
alimentos ou utilizar medicamentos contendo cido ascrbico at 48
12
horas antes da realizao do exame .

Amostra
Usar soro, plasma (EDTA, Heparina), urina e lquidos (amnitico e
sinovial). O analito estvel 3 dias entre 2 a 8 C e 6 meses a 10 C
negativos.
Deve ser criado um Procedimento Operacional Padro (POP) para
colheita, preparao e armazenamento da amostra. Enfatizamos que os
erros devidos amostra podem ser muitos maiores que erros ocorridos
durante o procedimento analtico.
Como nenhum teste conhecido pode assegurar que amostras de sangue
no transmitem infeces, todas elas devem ser consideradas como
potencialmente infectantes. Portanto, ao manuse-las, deve-se seguir as
normas estabelecidas para biossegurana.

02 Portugus - Ref.: 140

Procedimentos para realizao do ensaio

Tomar 3 tubos de ensaio e proceder como a seguir:

Amostra
Padro (N 3)
Reagente de Trabalho

Branco

Teste
0,02 mL

1,0 mL

1,0 mL

Padro
0,02 mL
1,0 mL

Misturar e incubar em banho-maria a 37 C durante 5 minutos. O nvel

gua no banho deve ser superior ao nvel do reagente nos tubos de
ensaio. Determinar as absorbncias do teste e padro em 505 nm ou filtro
verde (490-540 nm) acertando o zero com o branco. A cor estvel por
30 min.
O procedimento sugerido para a medio adequado para fotmetros
cujo volume mnimo de soluo para leitura igual ou menor que 1,0 mL.
Deve ser feita uma verificao da necessidade de ajuste do volume para o
fotmetro utilizado. Os volumes de amostra e reagente podem ser
modificados proporcionalmente sem prejuzo para o desempenho do
teste e o procedimento de clculo se mantm inalterado.

Em caso de reduo de volumes fundamental que se observe o volume

mnimo necessrio para leitura fotomtrica. Volumes da amostra
menores que 0,01 mL so crticos em aplicaes manuais e devem ser
usados com cautela porque aumentam a impreciso da medio.

Clculos
Absorbncia do Teste
cido rico (mg/dL) =

x6
Absorbncia do Padro

Exemplo

Linearidade
O resultado da medio linear at 20 mg/dL. Quando for obtido um valor
igual ou maior que 20 mg/dL, diluir a amostra com NaCl 150 mmol/L
(0,85%), realizar nova medio e multiplicar o resultado pelo fator de
diluio.
Urina . Diluir a amostra (com pH entre 7,0 e 9,0 e aquecida 10 minutos a
56 C) 1:20 ou 1:40 com gua destilada ou deionizada e repetir a
medio. Multiplicar o resultado obtido por 20 (vinte) ou 40 (quarenta),
conforme diluio previamente utilizada.

Controle interno da qualidade . O laboratrio deve manter um

Absorbncia do Teste = 0,214

Absorbncia do Padro = 0,163
0,214
cido rico (mg/dL) =

x 6 = 7,9
0,163

O resultado tambm pode ser obtido utilizando o fator de calibrao.

6
Fator de Calibrao =
Absorbncia do Padro
Exemplo

programa de controle interno da qualidade que defina claramente os

regulamentos aplicveis, objetivos, procedimentos, critrios para
especificaes da qualidade e limites de tolerncia, aes corretivas e
registro das atividades. Materiais de controle devem ser utilizados para
avaliar a impreciso e desvios de calibrao.
Sugere-se que as especificaes para o coeficiente de variao e o erro
9,10
total sejam baseadas nos componentes da variao biolgica (VB) .
Sugere-se utilizar as preparaes estabilizadas da linha Qualitrol H Labtest para controle interno da qualidade em ensaios de qumica clnica.

Intervalo de referncia . Os intervalos devem ser usados apenas

6

Fator de Calibrao =

= 36,8
0,163

cido rico (mg/dL) = 0,214 x 36,8 = 7,9

mg/dL x volume urinrio (mL)
Urina (mg/24 horas) =
100

Calibrao
Rastreabilidade do sistema
O padro rastrevel ao Standard Reference Material (SRM) 913 do
National Institute of Standards and Technology (NIST).
Calibraes manuais
Obter o fator de calibrao ao usar novo lote de reagentes ou quando o
controle interno da qualidade indicar.
Sistemas automticos
Branco de reagente: gua deionizada ou soluo de cloreto de sdio
150 mmol/L (0,85%);
Calibrador: usar calibrador protico. A concentrao de cido rico no
calibrador Calibra H - Labtest rastrevel ao SRM 913 do NIST.
Intervalo de Calibraes
Quando o controle interno da qualidade indicar;
Quando utilizar o lote de um novo reagente;
Quando utilizar novo frasco de reagente de um mesmo lote, caso um nova
calibrao tenha sido realizada durante a utilizao do frasco anterior.

03 Portugus - Ref.: 140

como orientao. Recomenda-se que cada laboratrio estabelea seus

prprios intervalos de referncia na populao atendida.
Soro (mg/dL)
Crianas11
Adultos

Homem
Mulher
Homem
Mulher

1,5 a 6,0
0,5 a 5,0
2,5 a 7,0
1,5 a 6,0

Urina . 250 a 750 mg/24 horas

Converso . Unidades convencionais (mg/dL) x 59,5 = Unidades SI
(mol/L)

Caractersticas de desempenho13
Estudo de recuperao . Em duas amostras com concentrao
de cido rico iguais a 5,9 e 6,3 mg/dL foram adicionadas quantidades
diferentes do analito obtendo-se recuperaes entre 99,6 e 100,2%.
O erro sistemtico total mdio obtido em uma amostra com valor de cido
rico de 8,0 mg/dL foi igual 0,01 mg/dL ou 0,15%. O erro sistemtico total
obtido menor que o erro sistemtico total da especificao desejvel
baseada nos componentes da Variao Biolgica que 4,9%.

Estudo de comparao de mtodos . O mtodo proposto foi

comparado com outro produto de metodologia similar, sendo obtidos os
seguintes resultados:

Mtodo
Comparativo
Nmero de amostras
Intervalo de concentraes
(mg/dL)
Equao da regresso
Coeficiente de correlao

40

Mtodo
Labtest
40

1,92 - 15,79

1,99 - 16,27

Mtodo Labtest (mg/dL) = 1,0322 x

Comparativo - 0,0844
0,9995

O erro sistemtico total verificado nos nveis de deciso 2,0; 8,0 e

10,7 mg/dL foram iguais a 0,02; 0,17 e 0,26 ou 1,00; 2,17 e 2,43%,
respectivamente.
O erro sistemtico total obtido menor que o erro sistemtico total da
especificao desejvel baseada nos componentes da Variao
Biolgica que 4,9%.

Estudos de preciso . Os estudos de preciso foram realizados

utilizando 40 amostras com concentraes mdias iguais a 2,1; 8,6 e
11,7 mg/dL.

Repetitividade - impreciso intra-ensaio

Amostra 1
Amostra 2
Amostra 3

N
40
40
40

Mdia
2,3
9,5
11,1

DP
0,02
0,07
0,09

CV (%)
0,97
0,85
0,82

Reprodutibilidade - impreciso total

Amostra 1
Amostra 2
Amostra 3

N
40
40
40

Mdia
2,3
9,5
11,1

DP
0,03
0,09
0,09

CV (%)
1,48
1,14
1,14

O erro total (erro aleatrio + erro sistemtico) estimado em

concentraes iguais a 2,0; 8,0 e 10,7 mg/dL so iguais a 3,45%, 4,04%
e 4,32%, respectivamente.
Os resultados indicam que o mtodo atende a especificao desejvel
para o erro total ( 12,4%) baseada nos componentes desejvel da
Variao Biolgica.

Sensibilidade metodolgica . Uma amostra no contendo cido

rico foi utilizada para calcular o limite de deteco do ensaio tendo sido
encontrado um valor igual a 0,02 mg/dL, equivalente a mdia de 10
ensaios mais trs desvios padro.

Significado clnico . Numerosas doenas, condies fisiolgicas,

alteraes bioqumicas, fatores sociais e ambientais esto associados a
elevaes na concentrao do urato plasmtico. Entre as etiologias da
hiperuricemia esto: insuficincia renal, cetoacidose, excesso de lactato,
uso de diurticos e em todas as patologias em que a destruio de
nucleoprotenas est aumentada. O aumento de urato est positivamente
relacionado a hiperlipidemia, obesidade, arterosclerose, diabetes
mellitus e hipertenso, embora os mecanismos destas alteraes ainda
no sejam bem compreendidas.
A gota, manifestao clnica da hiperuricemia, classificada como
primria, secundria ou idioptica. A gota secundria uma complicao
pouco comum quando relacionada frequncia de hiperuricemia.
importante mencionar que a colchicina, utilizadas no caso da gota
aguda, no modifica valores de cido rico.
So pouco frequentes as causas da hipouricemia ocorrendo na sndrome
de Fanconi, doena de Wilson, acromegalia, anemia perniciosa e
doenas malignas como linfoma de Hodgkin e carcinoma broncognico.

Observaes
1. A limpeza e secagem adequadas do material utilizado so fatores
fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados
corretos.
2. O laboratrio clnico tem como objetivo fornecer resultados exatos e
precisos. A utilizao de gua de qualidade inadequada uma causa
potencial de erros analticos. A gua utilizada no laboratrio deve ter a
qualidade adequada a cada aplicao. Assim, para preparar reagentes,
usar nas medies e para uso no enxgue final da vidraria, a gua deve ter
resistividade 1 megaohm.cm ou condutividade 1 microsiemens/cm e
concentrao de silicatos <0,1 mg/L. Quando a coluna deionizadora est
com sua capacidade saturada ocorre liberao de vrios ons, silicatos e
substncias com grande poder de oxidao ou reduo que deterioram
os reagentes em poucos dias ou mesmo horas, alterando os resultados
de modo imprevisvel. Assim, fundamental estabelecer um programa de
controle da qualidade da gua.
Referncias
1. Duncan PH, Gochman N, CooperT, Smith E, sayze D. Clin Chem
1982;28:284-290.
2. Elin RJ, Jonhson E, Chesler R. Clin Chem 1982;28:2089.
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para Avaliao, Qualitymark ed.,Rio de Janeiro, 1997.
4. Kabasakalian P, Kalliney S, Westcott A. Clin Chem 1973;19:522.

Efeitos de diluio da matriz . Duas amostras com valores igual

a 24,9 e 23,2 mg/dL foram utilizadas para avaliar a resposta do sistema
nas diluies da matriz com NaCl 150 mmol/L (0,85%). Usando fatores
de diluio que variaram de 2 a 16 foram encontradas recuperaes
mdias de 101%. O erro sistemtico total obtido menor que o erro
sistemtico total da especificao desejvel baseada nos componentes
da Variao Biolgica que 4,9%.

04 Portugus - Ref.: 140

5. Kageyama N. Clin Chem Acta 1971;31:421.

6. Tonks DB. Quality Control in Clinical Laboratories, Wanner-Chilcott
Laboratories, Diagnostic Reagents Division, Scarborough, Canada,
1972.
7. Trivedi RC, Rebar L, Berta E, Stong L, Clin Chem 1978;241908.

8. Westgard JO, Barry PL, Hunt MR, Groth T. Clin Chem 1981,27:493501.

O nmero de testes em aplicaes automticas depende dos

parmetros de programao.

9. Ricos C, Desirable Specifications for Total Error, Imprecision, and Bias,

derived from intra- and inter-individual biologic variation. Disponvel
em: http://westgard.com/biodatabase1.htm (acesso em 10/08/2012).

Esto disponveis as aplicaes para sistemas automticos.

10. Basques JC. Especificaes da Qualidade Analtica. Labtest

Diagnstica 2005.

[Termos e Condies de Garantia]

11. Ferraz MHC, Delgado RB. Valores de Referncia para Exames

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Pediatria Ambulatorial. 3a. edio Belo Horizonte: Coopmed, 1988:
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12. Martinello F, Silva E.L. Interferncia do cido ascrbico nas
determinaes de parmetros bioqumicos sricos: estudos in vivo e
in vitro. Jorn. Bras. Pat. Med. Lab, 2003;39:323-334.
13. Labtest: Dados de arquivo.

Informaes ao consumidor

A Labtest Diagnstica garante o desempenho deste produto dentro das

especificaes at a data de expirao indicada nos rtulos, desde que os
cuidados de utilizao e armazenamento indicados nos rtulos e nestas
instrues sejam seguidos corretamente.

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Apresentao
Produto

Referncia

Contedo
1

140-1/100
cido rico
Liquiform

140-1/250

05 Portugus - Ref.: 140

1 x 80 mL
1 x 20 mL
1 x 5 mL
1 x 200 mL
1 x 50 mL
1 x 5 mL

Edio: Abril, 2013

Ref.: 280113

Copyright by Labtest Diagnstica S.A.

Reproduo sob prvia autorizao

Smbolos utilizados com produtos diagnsticos in vitro

Smbolos usados con productos diagnsticos in vitro
Symbols used with ivd devices

Contedo suficiente para < n > testes

Contenido suficiente para < n > tests
Contains sufficient for < n > tests

Risco biolgico
Riesgo biolgico
Biological risk

Data limite de utilizao (aaaa-mm-dd ou mm/aaaa)

Estable hasta (aaaa-mm-dd o mm/aaaa)
Use by (yyyy-mm-dd or mm/yyyy)

Marca CE
Marcado CE
CE Mark

Material Calibrador
Material Calibrador
Calibrator Material

Txico
Txico
Poison

Material Calibrador
Material Calibrador
Calibrator Material

Reagente
Reactivo
Reagent

Limite de temperatura (conservar a)

Temperatura limite (conservar a)
Temperature limitation (store at)

Fabricado por
Elaborado por
Manufactured by

Representante Autorizado na Comunidade Europeia

Representante autorizado en la Comunidad Europea
Authorized Representative in the European Community

Nmero do lote
Denominacin de lote
Batch code

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Consultar instrucciones de uso
Consult instructions for use

Controle
Control
Control

Nmero do catlogo
Nmero de catlogo
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Controle negativo
Control negativo
Negative control

Adies ou alteraes significativas

Cambios o suplementos significativos
Significant additions or changes

Controle positivo
Control positivo
Positive control

Produto diagnstico in vitro

Dispositivo de diagnstico in vitro
In vitro diagnostic device

Controle
Control
Control

Liofilizado
Liofilizado
Lyophilized

Corrosivo
Corrosivo
Corrosive

Perodo aps abertura

Perodo post-abertura
Period after-opening

06 Portugus - Ref.: 140

Ref.: 201112