You are on page 1of 9

12/03/2015

PRUEBAS BIOQUMICAS

Lic. Mara Natalia Taboada Ruiz


Estudiante VI Semestre Doctorado en Biotecnologa
Universidad Nacional de Colombia

Fundamento de PROPIEDADES BIOQUMICAS


Para demostrar si el microorganismo :
Es capaz de fermentar azcares
La presencia de enzimas
Degrada determinados compuestos
Producen compuestos coloreados

Las pruebas bioqumicas, son pruebas simples, que se han


desarrollado para demostrar en forma clara una determinada
caracterstica bioqumica y de esta forma, las bacterias
fuertemente relacionadas pueden separarse en dos especies
diferentes con base a pruebas bioqumicas

12/03/2015

FLUJOGRAMAS PARA IDENTIFICACIN


Fermenta lactosa?
NO

SI

Puede utilizar c. ctrico como


nica fuente de carbono?

NO

SI

Shigella sp. produce


lisina descarboxilasa

Puede utilizar c. ctrico como


nica fuente de carbono?

NO

Salmonella sp. en
general produce
H2S

SI

Escherichia sp.

NO
Citrobacter sp.

Produce acetona?

SI
Enterobacter sp.

Prueba de Catalasa
La catalasa es una enzima que poseen la mayora de las bacterias aerobias.
El desprendimiento de burbujas procedentes del oxgeno indica que la prueba es
positiva.

H2O2

Catalasa

H2O + O2

12/03/2015

Prueba de Oxidasa
Se basa en la produccin de la enzima oxidasa intracelular.
Esta reaccin oxidasa se debe a un sistema de citocromo oxidasa, que activa la
oxidacin del citocromo reducido por el oxgeno molecular.
El sistema citocromo oxidasa est presente en organismos aerobios, a los que les
permite utilizar el oxgeno como aceptor final de hidrgeno para reducir el oxgeno
molecular a perxido de hidrgeno en el ltimo eslabn de la cadena respiratoria.

Reactivo de oxidasa: Solucin al 1% de NNNN',


tetrametil, 1-4 fenilendiamina en agua
destilada

Prueba de Indol
Se determina si la bacteria posee una enzima (triptofanasa). La triptofanasa hidroliza
el triptfano en indol y alanina. El indol se detecta empleando un reactivo especfico
(Reactivo de Kovacs). El triptfano forma parte de las peptonas del medio

Reactivo de Kovacs
(alcohol isoamilo, pdimetilaminobenzaldehdo y cido
clorhdrico concentrado)
El HCl proporciona el pH cido que
requiere la reaccin.
El alcohol amlico es, insoluble en agua
y menos denso.
Un anillo rosa-rojizo en la superficie indica que se ha formado un complejo coloreado entre
el indol y el p-dimetilamino benzaldehdo. El alcohol amlico concentra el complejo
coloreado en la superficie.

12/03/2015

Prueba de Rojo de Metilo


Detecta la fermentacin cido-mixta. Se acumulan cidos (actico, frmico, etc.),
relativamente fuertes y bajan el pH del medio hasta 4-5. Dicho cambio de pH se
detecta aadiendo un indicador (Rojo de Metilo) al cultivo.

La fermentacin cido mixta produce cido


actico, etanol, H2 ,CO2 y proporciones
diferentes de cido lctico o propinico
(frmico) segn las especies.

Una coloracin roja, indicadora de la presencia


de cidos provenientes de la fermentacin de la
glucosa, constituye un resultado positivo.

Prueba de Voges-Proskauer
Detecta la fermentacin butanodilica.
En esta fermentacin se producen menor cantidad de cidos que en la fermentacin
cido-mixta, y una gran cantidad de butanodiol.

Mediante un reactivo, (-naftol e KOH al 40%),


se detecta la presencia de un precursor del
butanodiol (acetilmetilcarbinol o acetona)

La acetona en presencia de oxgeno se oxida a diacetilo

El diacetilo origina una coloracin roja al reaccionar con los restos guanidnicos de
algunos aminocidos de la peptona del medio (Ej. Arginina)

12/03/2015

Prueba de Consumo de Citratos-Simmons


Se determina la utilizacin del citrato como nica fuente de carbono y energa.
Negativo

Positivo

Se utiliza el medio de Simmons: utiliza un


medio slido con citrato sdico y un indicador
cido-base (Azul de Bromotimol)

En este caso se detecta la alcalinizacin del medio por el consumo del citrato (el
indicador toma color azul).

Mtodo O-F, xido-Fermentativo, Hugh-Leifson


Indica del tipo de metabolismo energtico: respiratorio (O) o fermentador (F).
Se suele utilizar glucosa como sustrato.
Va
oxidativa

Recin
inoculado

Va
Fermentativa

Se detecta la acumulacin de
cidos con un indicador cido-base
(Azul de Bromotimol).

Se incuba en condiciones de
aerobiosis (sin parafina) y de
anaerobiosis (con parafina, tubo
cerrado), simultneamente.

Si transforman la glucosa en CO2, el medio se ver amarillo (por la formacin de


cido carbnico originado al reaccionar el CO2 con el agua del medio)

12/03/2015

Fermentacin de Azcares
Se determina si la bacteria es capaz de fermentar un carbohidrato particular
(produccin de cidos acompaados o no de gases). Se aplica a bacterias con
metabolismo fermentador, ensayndose por separado diferentes carbohidratos.

La produccin de cidos se pone de


manifiesto con un indicador cido-base
(Prpura de Bromocresol) y la de gases
con una campanita Durham (tubo
cerrado por uno de sus extremos que se
coloca invertido en medio de cultivo)

Negativo

Produccin de
cidos. Gases(-)

Produccin de
cidos y gases

Viraje del indicador: indica produccin de cidos. Presencia de burbujas en la


campanita Durham, produccin de gases.

Reduccin de Nitratos y Nitritos


En esta prueba se detecta una respiracin anaerobia: la que utiliza nitrato como
aceptor final de electrones. Los nitratos se reducen a nitritos y algunas bacterias
reducen los nitritos a productos gaseosos ( N2 y N2O). Las enzimas responsables de
ambas reducciones se denominan nitrato y nitrito reductasa, respectivamente
Reactivos: (soluciones en cido actico de
-naftilamina y cido sulfanlico) y zinc.

Negativo

Positivo

12/03/2015

Mtodo de Kligler
Permite un diagnstico rpido orientativo del tipo de Enterobacteria aislado. Las
Enterobacterias ms patgenas no suelen fermentar la lactosa. Se detecta la
produccin de cidos (acompaada o no del desprendimiento de gases) de glucosa
o lactosa y produccin de SH2.
Reactivos: indicador Rojo de Fenol, el cual vira
al color amarillo en medio cido. El tiosulfato
de sodio se reduce a sulfuro de hidrgeno el
que reacciona luego con una sal de hierro
proporcionando el tpico sulfuro de hierro de
color negro.

Lac (-)
SH2(+)

Lac+)

Lac (-)

Lac (-)

TSI Agar (Agar Hierro Triple Azcar)


Mtodo Diferencial para la diferenciacin de Enterobacterias, en base a la
fermentacin de glucosa, sacarosa y produccin de SH2 (Rojo Fenol: indicador)
Base cido (amarillo): Glucosa fermentada.
Pico cido (amarillo): Lactosa y/o sacarosa
fermentada.
Base cido (amarillo): Glucosa fermentada.
Pico alcalino (rojo): Lactosa y/o sacarosa no
fermentada
Base alcalino (rojo) y pico alcalino (rojo):
Ninguno de los tres glcidos es
fermentado
Un ennegrecimiento en el medio
indica la produccin de SH2

12/03/2015

LIA Agar (Lisina Hierro Agar)


Utilizado para diferenciar microorganismos, especialmente Salmonella sp., basado
en la descarboxilacin/desaminacin de lisina, y en produccin de cido sulfhdrico
(Indicador: Prpura de bromo cresol). Ms sensible que el TSI

A: Reaccin cida. Color amarillo


K: Reaccin alcalina. Color violeta
R: Reaccin alcalina: color rojo
K/K: Descarboxilacin lisina
K/A: Fermentacin glucosa. Descarboxilacin
lisina
R/A: Desanimacin lisina. Fermentacin glucosa

Medio SIM (Sulfuro, Indol, Movilidad)


Es un medio semislido destinado a verificar la movilidad, produccin de indol y de
sulfuro de hidrgeno en un mismo tubo. (Reactivo de Kovacs)
Es til para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae.

12/03/2015

Muchas Gracias por su Atencin

You might also like