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DOCENTE
:
MSc. GARCA LPEZ Jhon.
TEMA
:
BANCOS DE GERMOPLASMA
INTEGRANTES :
FLORES SANTOS ALDEMIR
HERRERA CADENILLA JUANCARLOS
RAMOS SONO, Daniel.
SANTAMARIA VELIZ, Olivia.
CICLO
:
2014 - II
LAMBAYEQUE, FEBRERO DEL 2015
BANCOS DE GERMOPLASMA
I
INTRODUCCION
Desde sus inicios, el hombre ha dependido bsicamente de los vegetales como fuente de energa.
Al aumentar rpidamente la poblacin, se ha hecho necesario implantar tcnicas de explotacin,
en particular agropecuarias, que han contribuido a la destruccin de las poblaciones pioneras
vegetales que fueron producto de siglos de evolucin. Por otro lado, las tcnicas modernas de
produccin de variedades mejoradas altamente homogneas han provocado la reduccin de la
variabilidad gentica de las especies cultivadas, ocasionando una erosin gentica. En este
contexto es cuando se recurre a las fuentes genticas originales de la variabilidad, las que se deben
preservar adecuadamente.
Cuando se habla de preservacin de germoplasma hay que subrayar que el objetivo es conservar,
con la mayor integridad posible, la variabilidad gentica de las poblaciones seleccionadas.
Los recursos fitogenticos son la base de la seguridad alimentaria mundial. Por ello es de suma
importancia mantener la diversidad gentica de las variedades tradicionales y regionales, de los
cultivares mejorados y de plantas silvestres.
La diversidad gentica provee a los agricultores y mejoradores genticos con opciones para
desarrollar nuevos cultivares o hbridos, los cuales pueden ser ms productivos, tener mejores
caractersticas de fruto, flor o estructura de planta, resistencia o tolerancia a patgenos y/o
tolerancia a condiciones ambientales desfavorables.
Anualmente se pierden ms de 15 millones de hectreas de bosque tropical por deforestacin
causada por diversas actividades de desarrollo, como proyectos hidroelctricos, caminos,
urbanizaciones y ciertas prcticas agrcolas (como extensas reas de monocultivos). En estos
bosques se pueden encontrar la diversidad gentica necesaria para el mejoramiento gentico de
muchos cultivos tropicales. El papel de los bancos de germoplasma para reducir esta prdida y
poder conservar muchas especies silvestres, cultivares locales tradicionales, as como variedades
mejoradas, puede ser fundamental .
El concepto de conservacin de los recursos fitogenticos en bancos de germoplasma incluye la
utilizacin de mtodos que capten la mxima diversidad de genotipos, as como el uso de tcnicas
de conservacin y posterior regeneracin que mitiguen sus prdidas a travs del tiempo.
La conservacin de germoplasma de cultivos tropicales se ha tratado de realizar ex situ e in situ.
La va ex situ se realiza en repositorios especiales (en sitios fuera del centro de origen de la
especie) que proveen las condiciones adecuadas para la conservacin de material propagativo por
largo tiempo . Los mtodos de conservacin ex situ incluyen el almacenamiento de semillas,
bancos de genes en campo, colecciones in vitro y jardines botnicos.
El mtodo ms utilizado en la va ex situ son los bancos de semillas. Estos presentan la ventaja
de que se pueden almacenar muchos genotipos en espacios reducidos y es apto para la
conservacin de especies con semillas ortodoxas (semillas que pueden deshidratarse y
almacenarse entre 0 y -20 C por largo tiempo) .
Sin embargo, este mtodo es poco adecuado para la conservacin de especies con semillas
recalcitrantes (semillas que no soportan la deshidratacin, por lo que deben ser almacenadas en
ambientes hmedos y conservan su capacidad germinativa nicamente por corto tiempo).
Esto es crtico porque muchos de los cultivos tropicales de importancia econmica, como palma
aceitera (Elaeis guineensis), cacao (Theobroma cacao), coco (Cocos nucifera), aguacate (Persea
americana), mango (Mangifera indica) y caf (Coffea spp.), poseen este tipo de semilla.
Otra desventaja del uso de semillas en programas de conservacin por medio de bancos de
germoplasma es la dificultad para obtener este tipo de estructuras en algunas especies que tienen
un largo periodo juvenil, como el prsimon (Dyospiros kaki) . Por otro lado, existen plantas que
se propagan principalmente de forma vegetativa, como yuca (Manihot spp.), papa (Solanum spp.),
ame (Colocasia esculenta), cebolla y ajo (Allium spp.), y banano y pltano (Musa spp.), en las
cuales no es tan fcil la obtencin de semillas sexuales.
La va de conservacin in situ involucra el mantenimiento de los recursos genticos en el centro
de origen (sitios donde se dio la especiacin y generalmente se encuentra la mayor diversidad
gentica) o cultivo en campos de productores agrcolas en sistemas de agricultura tradicional. Sus
requerimientos, en cuanto a espacio y mantenimiento, son similares a los indicados para los
bancos de genes en campo.
Para solucionar los inconvenientes de las vas mencionadas anteriormente se puede recurrir a la
conservacin de especies tropicales en condiciones in vitro.
En esta revisin bibliogrfica se presentan las tcnicas para la conservacin in vitro de
germoplasma en el corto y el largo plazo, que permiten el establecimiento de bancos de
germoplasma en cultivos tropicales y se hace un listado de ejemplos de estos ltimos.
La conservacin de la biodiversidad es un tema que ha venido ganando relevancia de forma
progresiva en nuestra sociedad. La conservacin de la flora silvestre constituye una pieza clave
dentro de este enmarque. No slo se trata de la obligacin tica de preservar este legado que se
nos ha dado para las generaciones venideras o del puro inters cientfico que puede aportar. La
sociedad es cada vez ms consciente de la importancia de la flora silvestre como fuente de
alimentos, aceites y lubricantes, gomas, resinas, ceras, colorantes, fibra, energa, sustancias
aromticas y principios medicinales, por su valor ornamental y por su valor ecolgico como
indicador y elemento restaurador de situaciones ambientales degradadas .
Sin embargo, a pesar del creciente inters suscitado por la diversidad de la flora silvestre, la
actividad humana est ocasionando un progresivo deterioro de la misma. Segn datos del
, el 12,5 % del total aproximado de 250.000 especies vegetales conocidas en nuestro planeta se
encuentra en peligro de extincin.
En consecuencia, gran cantidad de especies vegetales estn desapareciendo antes de ser
identificadas o de que sus propiedades sean mnimamente evaluadas. Hasta el momento slo el
10 % de las especies vegetales han sido evaluadas por su potencial agronmico o medicinal, por
lo que existen un gran nmero de cultivos y principios medicinales por descubrir. En Espaa, la
situacin es similar a la existente en otros pases. Segn datos del Ministerio de Medio Ambiente
(1999), el 12 % de 9.799 taxones de plantas vasculares presentes en Espaa se encuentra en
peligro de extincin. Ante estos datos, se impone la necesidad de tomar medidas conducentes a
la conservacin de la biodiversidad vegetal.
La conservacin toma especial relevancia en nuestros das dado el acelerado proceso de
degradacin ambiental en el que vivimos. Sin embargo, la preocupacin por la conservacin de
los recursos vegetales es tan antigua como la propia civilizacin humana. En el Neoltico, con el
comienzo de la agricultura y el asentamiento de las poblaciones, el crecimiento y la presin de la
poblacin llev al reconocimiento de la necesidad de conservar los recursos biolgicos con objeto
de asegurar un abastecimiento sostenible de alimento para la comunidad.
En cualquier caso, la percepcin de la erosin gentica como un problema a escala planetaria no
tuvo lugar hasta bien entrado el siglo XX. Las seales de alarma comenzaron a tomarse en serio
a mediados de los aos sesenta, al descubrirse que el alto ritmo de desplazamiento de variedades
primitivas cultivadas por la introduccin de nuevos cultivares estaba llevando a un rpido
estrechamiento de la base gentica de las especies cultivadas. La toma de conciencia de esta
situacin determin la puesta en marcha de medidas para la conservacin de los recursos
fitogenticos.
Hoy en da, la conservacin de recursos genticos es aceptada de forma generalizada como una
responsabilidad social, dentro del contexto mucho ms amplio de preservacin de la
biodiversidad. En este escenario, a la prdida de recursos genticos ocurrida por la sustitucin de
variedades tradicionales por cultivares modernos, hay que aadir la ocasionada en especies
vegetales silvestres a consecuencia del deterioro de los ecosistemas naturales por la creciente
actividad humana. La preocupacin por la prdida de la biodiversidad vegetal y la necesidad de
tomar medidas para frenarla qued especialmente patente en la firma del Convenio sobre
Diversidad Biolgica con ocasin de la Conferencia de las Naciones Unidas sobre el Medio
Ambiente y Desarrollo celebrada en Ro de Janeiro
.
II BANCO DE GERMOPLASMA
1. Definicin
Los bancos de germoplasma constituyen una de las estrategias ms comunes para preservar la
diversidad biolgica vegetal, porque permiten conservar por mucho tiempo y en un espacio
reducido muestras representativas de diversidad gentica de una gran cantidad de especies de
plantas2. Son colecciones de todo el patrimonio gentico de una especie, mantenido con la
finalidad de preservar su variabilidad. La finalidad de los bancos es proteger especies de inters
que satisfacen una demanda actual, as como aquellas que an no presentan caractersticas de uso
inmediato y podran ser consideradas valiosas en el futuro. Adems, representa la salvaguardia de
especies en peligro de extincin de aquellas zonas que por diversos motivos sufren cambios
dramticos en su ecosistema.
2. Modalidades de conservacin
La conservacin de la biodiversidad puede, en teora, aplicarse a tres niveles de organizacin:
gnica, organsmica y ecolgica. Con los avances de la ingeniera gentica en el aislamiento,
secuenciacin y transferencia de genes, se acerca el momento en el que se establezcan grandes
bancos de genes para su conservacin. Sin embargo, por el momento, en la mayora de los casos,
los genes no se conservan individualmente, sino formando parte de organismos, poblaciones o
ecosistemas. Al igual que los genes de un organismo se asocian entre ellos a travs de mltiples
interacciones, los individuos de una especie o de diferentes especies interaccionan dentro de un
ecosistema. Por ello, cuando se acomete la conservacin con el mximo nivel de informacin el
ecosistema, no slo se conservan cada uno de sus componentes, sino tambin todas sus relaciones
recprocas. Consecuentemente, se considera que la forma ms lgica y el mtodo ms econmico
de conservar una entidad biolgica es dentro del ecosistema del que forma parte. Idealmente, por
tanto, la conservacin de los ecosistemas, y refirindonos al nivel de organismos, la conservacin
de especies amenazadas en sus hbitats naturales, o conservacin in situ, constituye la manera
ms apropiada de enfocar la problemtica de conservacin.
2.1. Conservacin in situ
La conservacin in situ de especies amenazadas implica una adecuada proteccin y gestin de sus
ecosistemas. Existe un gran nmero de figuras de proteccin de espacios naturales en donde la
actividad humana queda condicionada o restringida en mayor o menor medida. No obstante,
frecuentemente la simple restriccin de la actividad humana en el entorno no resulta suficiente
para asegurar la supervivencia de las especies a conservar.
La gestin activa de un ecosistema para conservar una determinada especie puede requerir
medidas de intervencin, como la preservacin del medio fsico en el que se desarrolla la especie
amenazada, la potenciacin de interacciones con otros organismos que lleven implcito un
beneficio para la especie amenazada, y el establecimiento de programas de reforzamiento de
poblaciones existentes, reintroduccin en localidades donde la poblacin ya se haya extinguido
o, incluso, la introduccin de nuevas poblaciones.
Para poder acometer de forma apropiada este tipo de acciones resulta necesario recabar
previamente una gran cantidad de informacin sobre la especie a proteger y su ecosistema.
Por ello, el proceso de conservacin in situ se inicia con el estudio y seguimiento en el tiempo de
las poblaciones, recabando datos demogrficos, genticos y autoecolgicos. La utilizacin de
tcnicas de anlisis de viabilidad de poblaciones constituye otra herramienta de gran valor por su
capacidad diagnstica
y su poder de evaluacin al considerar diferentes alternativas de gestin.
A menudo, las actividades de conservacin in situ se encuentran con problemas de aplicacin
derivados de la necesidad de establecer marcos legales de proteccin de las reas y hbitats
pertinentes, de conflictos de inters con otras actividades humanas, y de falta de una asignacin
continuada y a largo plazo de recursos econmicos a las instituciones encargadas de las tareas de
conservacin. A esto cabe aadir, en numerosas ocasiones, la falta de una informacin bsica
sobre la biologa de las especies a conservar. Este tipo de limitaciones conlleva la necesidad de
desarrollar mtodos de conservacin ex situ, o conservacin fuera del hbitat natural, que sirvan
para complementar las acciones tomadas en los hbitats naturales.
mexicana (C. aurantifolia), toronja (C. paradisi) y limn Eureka (C. limon) durante un ao
mediante esta tcnica.
Como parte de las estrategias empleadas para disminuir el crecimiento de los explantes y
aumentar los intervalos entre subcultivos, est el reducir la temperatura de los cuartos de
crecimiento, modificar los medios de cultivo y otros factores ambientales que se deben tomar en
cuenta para optimizar el almacenamiento.
Factores que se deben tomar en consideracin para el almacenamiento por corto plazo.
a. Temperatura
Se produce una reduccin en la actividad metablica y, en consecuencia, en el crecimiento de los
explantes, al disminuir la temperatura de cultivo (esta temperatura depende de los requerimientos
de cada especie) . Generalmente se utilizan temperaturas alrededor de los 4 C para cultivos de
clima templado y entre 10 y 15 C para el germoplasma tropical. El control de la temperatura se
combina usualmente con otros factores para lograr un crecimiento reducido. En banano,
temperaturas reducidas se han combinado con reduccin en la intensidad lumnica o la completa
supresin de luz. La propagacin vegetativa de los tallos de banano normalmente se realiza a 22
C con una intensidad lumnica de 3000 lux. Si n embargo, para su almacenamiento por corto
plazo, se colocan a 15 C bajo una intensidad lumnica de 1000 lux.
Si se mantienen los explantes a temperaturas bajas (inferiores a 4 C) por perodos prolongados,
pueden presentarse daos fisiolgicos, causados por el fro, que inciden en cambios en el
metabolismo, en el contenido de protenas, y en la composicin y funcionamiento de las
membranas . Estos problemas pueden ser reversibles cuando no hay exposicin prolongada a esta
condicin. Generalmente, las plantas tropicales son sensibles a daos por fro y la temperatura de
almacenamiento depende de la sensibilidad particular de cada especie. Por ejemplo,
Gangopadhyay et al. (2005) determinaron que la temperatura de almacenamiento ptima para
microtallos encapsulados de pia (Ananas comosus L.) era de 8 oC para un periodo de 45 a 60
das.
En las especies no tropicales, la reduccin de temperatura acta, muchas veces, como seal para
romper el estado de reposo de los explantes e inducir la activacin de su crecimiento. Por ejemplo,
el almacenamiento de lirio (Lilium longiflorum L.) a bajas temperaturas (0-10 C) indujo la
ruptura del estado de reposo que llev, consecuentemente, a su germinacin y floracin. Por lo
tanto, su almacenamiento in vitro debi ser realizado a 25 C, en medio de cultivo con todas las
sales minerales (a un cuarto de su concentracin) y vitaminas del medio Murashige y Skoog
(1962) (MS) y una concentracin alta de sacarosa (9%) por 28 meses. Esta medida permiti
mantener una viabilidad superior al 84% . Adems, en ese trabajo, el manejo de la temperatura se
combin con una reduccin de los nutrientes disponibles en el medio de cultivo, aspecto que
tambin es de gran importancia, como se discutir a continuacin. Ambas medidas permitieron
retardar el proceso de crecimiento y prolongar el almacenamiento.
b. Medio de cultivo
La reduccin en la concentracin de elementos minerales y/o carbohidratos metabolizables (por
ejemplo, sacarosa) en el medio de cultivo puede ser una estrategia importante para la reduccin
del crecimiento del explante. Otras medidas pueden ser el aumentar el potencial osmtico del
medio (especialmente mediante el uso de carbohidratos no metabolizables, como el manitol), el
uso de concentraciones mayores de gelificantes, la adicin de ciertos reguladores de crecimiento
(como el cido abscsico [ABA]), o de otras sustancias (como el cloruro de magnesio) para reducir
daos en el explante. Como consecuencia de las medidas anteriores, el explante absorbe los
nutrientes ms lentamente y ocurre una reduccin en el crecimiento . Por ejemplo, para disminuir
El nitrgeno lquido se utiliza porque detiene todas las actividades metablicas, inmediatamente
al hacer contacto con el explante y, a la vez, permite que los tejidos conserven la viabilidad sin
que ocurran alteraciones fisiolgicas.
El proceso de crioconservacin se inicia con el acondicionamiento criognico, que incluye el
enfriamiento (como se describi anteriormente con el uso de temperaturas bajas durante el
almacenamiento por corto plazo) y la aplicacin de sustancias crioprotectantes, luego el
almacenamiento a -80 C y por ltimo el proceso de recuperacin.
El tratamiento con sustancias crioconservantes o crioprotectantes previene el dao por fro en los
tejidos al desplazar el agua que se encuentra intra e intercelularmente. Esta remocin de agua
evita la ruptura de las membranas en las clulas. Estas sustancias crioprotectantes contienen
concentraciones altas de sacarosa (0,4 M), glicerol (15%), dimetil sulfxido (DMSO ) (15%),
etilenglicol y/o polivinil alcohol. Sin embargo, la plasmlisis excesiva y el choque osmtico
tambin pueden tener efectos negativos sobre el tejido, provocando daos despus de la
descongelacin y durante la regeneracin.
Tcnicas de crioconservacin
La crioconservacin clsica incluye la deshidratacin inducida en condiciones estriles en una
cmara de flujo laminar, el pre-enfriamiento paulatino de los materiales (se utilizan diferentes
gradientes de temperatura, por ejemplo: 10, 8, 4, -20 y -40 C, as como diferentes tiempos de
permanencia en esas temperaturas), la inmersin en NL sin crioprotectantes y, posteriormente, el
almacenamiento a 80 C. Sin embargo, nuevas tcnicas basadas en la eliminacin parcial de
agua en los tejidos y el congelamiento inmediato de los explantes han desplazado parcialmente a
la tcnica clsica. Estas nuevas tcnicas son: (1) vitrificacin, (2) encapsulacin deshidratacin,
(3) encapsulacin vitrificacin, (4) precrecimiento, (5) precrecimiento deshidratacin, (6)
desecacin y (7) enfriamiento de gotas.
1) Vitrificacin
La vitrificacin es un proceso que promueve la deshidratacin celular y "solidificacin" de
lquidos en ausencia de cristalizacin (se evita la formacin de cristales de hielo intracelulares
que daan los tejidos). Con la "solidificacin" se induce un estado con una estructura molecular
aleatoria pero que posee propiedades fsicas y mecnicas similares a un slido. Esta transicin del
agua lquida a una fase amorfa cambia la conformacin estructural celular hacia una apariencia
vidriosa. La vitrificacin es realizada previa al congelamiento por medio de una sustancia
crioprotectante.
Esta tcnica se recomienda para rganos complejos, como pices de tallos, tejidos embriognicos
y cultivos de clulas. Adems de los compuestos usuales, mencionados anteriormente, en la
solucin crioprotectante se han adicionado tambin otras sustancias. Por ejemplo, protenas
anticongelantes como albmina de suero bovino (BSA), epinefrina o el aminocido prolina (PRO)
para incrementar la sobrevivencia, una vez terminada la fase de crioconservacin, en meristemas
apicales de papa. Wang y colaboradores (2005) desarrollaron un protocolo donde se utiliz PRO
en la solucin crioprotectante y se obtuvo una sobrevivencia de alrededor de 80% para explantes
de los cultivares taiwaneses de papaya "Tai-nung, Red Lady y Florida". Otro agente
crioprotectante es el Supercool X1000 , que es un polmero de alcohol de polivinilo, el cual tiene
una funcinsimilar a las protenas anticongelantes al inhibir la formacin de hielo durante la
crioconservacin .
Se ha encontrado que soluciones crioprotectantes, con productos como DMSO, pueden ser txicas
para algunas especies tropicales. Por lo tanto, la mezcla de la solucin crioprotectante y el
producto debe ser cuidadosamente seleccionada . Una vez aplicada la solucin lquida
crioprotectante e inducida la vitrificacin, los tejidos se congelan con NL. Posterior al tratamiento
con la solucin crioprotectante y el NL, los explantes son almacenados a -80 C .
Pennycooke y Towill (2000) utilizaron una mezcla crioprotectante de DMSO, sacarosa y glicerol
durante 26 minutos a 22 C para conservar pices de tallo de camote (Ipomoea batatas) y lograron
la regeneracin, ocho semanas despus del descongelamiento, con una sobrevivencia mayor al
80%.
Durante el descongelamiento, los explantes generalmente se colocan en un bao de Mara a 40
C por uno a dos minutos y luego son lavados con medio de cultivo suplementado con sacarosa
(0,41,2 M). Posteriormente, los explantes se colocan en el mismo medio de cultivo para su
recuperacin y regeneracin en condiciones de adecuadas luz .
La vitrificacin en este contexto no debe ser confundida con el fenmeno de hiperhidricidad
descrito anteriormente, ya que en artculos anteriores a 1992 se usaba el mismo trmino.
Debergh et al. (1992) sugirieron el uso de la palabra hiperhidricidad en el segundo caso para evitar
confusiones.
2) Encapsulacin deshidratacin
La encapsulacin - deshidratacin se ha utilizado con pices de tallo y tejidos embriognicos. Los
explantes se precultivan en una solucin con concentracin alta de sacarosa (0,5-0,75 M) y luego
son encapsulados en alginato de calcio o en polioxietilen glicol (PEG); despus se les aplica una
deshidratacin en la cmara de flujo laminar (cuatro a cinco horas), se congelan con NL y se
mantienen a -80 C por el perodo de almacenamiento. El descongelamiento se realiza en bao de
Mara a 40 C por uno a dos minutos y se cultivan en medio para la recuperacin del crecimiento
y regeneracin .
(3) Encapsulacin vitrificacin
La encapsulacin - vitrificacin es similar al anterior en cuanto al uso de alginato de calcio para
la encapsulacin. Se diferencia del mismo por no utilizar el precultivo de los explantes en una
solucin con alta concentracin de sacarosa, sino ms bien por el uso de una solucin
crioprotectante (como se menciona en la primera tcnica) a 0 C por unas horas, en su lugar, y
por haber sido usado especficamente para meristemas. Los meristemas son encapsulados en
medios que contienen altas concentraciones de azcares (glicerol 2 M y/o sacarosa 0,4 M). Se
congelan inmediatamente con NL y se mantie nen a -80 C. El proceso de descongelamie nto es
similar al utilizado en la tcnica de encapsulacin deshidratacin.
(4) Precrecimiento
El precrecimiento se ha utilizado especficamente para embriones cigticos y somticos. La
tcnica involucra el cultivo in vitro previo de los embriones en presencia de crioprotectantes por
varios das. Posteriormente, los embriones se congelan directamente en NL, para luego
almacenarlos a -80 oC. El proceso de descongelamiento es similar a la tcnica de encapsulacin
deshidratacin .
(5) Precrecimiento deshidratacin
En el precrecimiento - deshidratacin se utilizan segmentos de tallo previamente cultivados en un
medio alto en sacarosa, ABA o PRO. Posteriormente estos se desecan en flujo de aire y se
congelan directamente en NL. El proceso de descongelamiento es similar a la tcnica mencionada
para la vitrificacin . Esta tcnica tambin ha sido utilizada con callos embriognicos de yuca
(Manihot esculenta) provenientes del Centro Internacional de Agricultura Tropical (CIAT) en
entre todos los mtodos de conservacin, los bancos de semillas son los ms utilizados al ser
simultneamente prcticos y econmicos.
En general, se utiliza el trmino coleccin base para las colecciones almacenadas a largo plazo,
mientras que el trmino coleccin activa es aplicado a colecciones almacenadas a medio plazo
y se utiliza el trmino colecciones de trabajo para referirse a colecciones de mejoradores
almacenadas con objetivos a corto plazo. Por motivos de seguridad, a menudo se guardan
duplicados de las colecciones base en otros bancos de semillas.
Aunque el almacenamiento en bancos de germoplasma est universalmente aceptado como parte
integral de los programas de conservacin de plantas silvestres, las muestras de semillas de plantas
silvestres almacenadas en bancos de germoplasma suponen menos del 2 % del total de
germoplasma almacenado, destinado esencialmente a plantas cultivadas.
a. Semillas ortodoxas y semillas recalcitrantes
Las semillas se clasifican como ortodoxas o tolerantes a la desecacin cuando son capaces de
mantener su viabilidad tras ser desecadas a menos de 5-10 % de contenido en humedad. Por el
contrario, las semillas recalcitrantes o sensibles a la desecacin pierden viabilidad cuando se
desecan por debajo de un lmite crtico, habitualmente entre 12-30 % de contenido en humedad.
Existe una tercera categora en la que las semillas tienen caractersticas de almacenamiento
intermedias entre las ortodoxas y las recalcitrantes. Las semillas intermedias pueden ser desecadas
a contenidos de humedad similares a los de las semillas ortodoxas. Sin embargo, las semillas, una
vez desecadas, se daan al someterlas a bajas temperaturas y su viabilidad desciende rpidamente
durante el almacenamiento. Por ello, la determinacin del comportamiento de las semillas de una
especie constituye un tema trascendental de cara a su conservacin a largo plazo. Las semillas de
especies con semillas ortodoxas pueden ser conservadas en bancos de semillas convencionales
bajo condiciones de baja temperatura y humedad. Por el contrario, las especies con semillas
intermedias o recalcitrantes no pueden mantenerse de esta manera.
Afortunadamente, la mayora de las especies silvestres de las zonas templadas del planeta forman
semillas ortodoxas. Las semillas recalcitrantes se encuentran en especies acuticas, especies con
semillas de gran tamao, especies procedentes de zonas tropicales y algunas especies arbreas de
clima templado como Quercus, Acer y Aesculus .
.
b. Principios de conservacin de semillas
El principio bsico para la conservacin de semillas es la limitacin de los cambios qumicos que
son originados por el metabolismo o los procesos de envejecimiento. Se sabe desde hace tiempo
que unas condiciones de baja temperatura y bajo contenido en humedad prolongan la longevidad
de las semillas. De acuerdo a las reglas de Harrington, existe una relacin exponencial entre la
longevidad de las semillas, la temperatura y el contenido de humedad de almacenamiento, de
manera que la longevidad de una semilla se duplica por cada reduccin de 5 C en la temperatura
y por cada reduccin de un 1 % en el contenido de humedad. De acuerdo con este modelo, las
semillas conservadas a muy bajas temperaturas y con muy bajos contenidos de humedad deberan
mantenerse viables durante milenios. Sin embargo, Vertucci y Roos (1990) y Ellis et al.
(1990) han mostrado que existen lmites a los efectos beneficiosos de la desecacin sobre la
longevidad y que estos lmites dependen de la composicin qumica de la semilla.
Tambin se ha comprobado que, en contra de lo establecido por las reglas de Harrington, los
efectos de la temperatura y el contenido de humedad no son independientes. De todas formas, el
uso apropiado de estos dos factores proporciona una va aceptable para la conservacin a largo
plazo de muestras de semillas en bancos de germoplasma.
c. Conservacin de semillas ortodoxas en bancos de semillas convencionales
Los mtodos para la manipulacin de las semillas, el envasado, los ensayos de germinacin y el
envo de muestras de semillas han sido evaluados en profundidad y se encuentran estandarizados
para el caso de especies cultivadas y, en principio, son igualmente aplicables a las especies
silvestres.
Una vez que las semillas llegan al banco, stas se desecan hasta un contenido de humedad de 3-7
%. A continuacin se limpian, se cuentan y se ensayasu viabilidad antes de colocarlas en
recipientes. Los recipientes utilizados para el almacenamiento suelen ser tarros de vidrio, tubos
de ensayo, latas metlicas hermticas y bolsas de aluminio laminado.
normales (crecimiento continuo), los repicados debern hacerse en intervalos que oscilarn de
varios das a varios meses, dependiendo del tipo de cultivo y de las especies.
Adems, en estas circunstancias, los subcultivos estn expuestos a un continuo riesgo de prdidas
por accidente o contaminacin, a lo que hay aadir el riesgo de alteraciones genticas (variacin
somaclonal) .
El perodo comprendido entre repicados puede extenderse induciendo un crecimiento limitado del
cultivo mediante reduccin de la temperatura y/o iluminacin, estrs osmtico, reduccin de la
presin parcial de oxgeno, desecacin del material vegetal, o alteracin de los medios de cultivo,
eliminando componentes nutritivos o incorporando retardantes de crecimiento. Entre estas
alternativas, la utilizacin de bajas temperaturas y la manipulacin de los componentes del medio
de cultivo son las ms aconsejables desde un punto de vista prctico, por su eficacia y simplicidad.
Si bien las tcnicas de almacenamiento in vitro se han aplicado de forma extensiva en la
conservacin de recursos fitogenticos de plantas cultivadas , existen muy pocos precedentes de
aplicacin en especies amenazadas .
En Espaa se han utilizado las tcnicas de almacenamiento in vitro mediante crecimiento limitado
con Centaurium rigualii, Coronopus navasii, Lavatera oblongifolia, Limonium calaminare,
Limonium catalaunicum, Limonium dufourii, Limonium estevei y Limonium gibertii (Iriondo y
Prez, 1991; Martn, 1993). Las mejores condiciones de almacenamiento
C
en medio MS slo o suplementado con 4,44 M benciladenina (BAP) + 0,54 M cido
naftalenactico (NAA).
La conservacin in vitro a largo plazo pasa por el almacenamiento del material cultivado bajo
condiciones de crioconservacin. Al igual que con la crioconservacin de las semillas, a estas
bajas temperaturas el metabolismo queda totalmente paralizado, con lo que se garantiza la
conservacin del material durante un perodo indefinido de tiempo. La crioconservacin del
material cultivado in vitro plantea mayores dificultades que la crioconservacin de semillas,
debido al mayor contenido en humedad presente en los tejidos. Para superar este problema se
llevan a cabo tratamientos previos con sustancias crioprotectoras y se desarrollan protocolos
especficos de congelacin y descongelacin.
La aplicacin de estas tcnicas al almacenamiento de especies amenazadas ha sido hasta el
momento muy escasa. En Espaa se ha experimentado con las tcnicas de crioconservacin de
vitrificacin y encapsulacin-deshidratacin en Centaurium rigualii y en Antirrhinum
microphyllum.
g. Bancos de ADN
Con el avance de las tcnicas de ingeniera gentica que posibilitan la transferencia de genes entre
especies totalmente distintas, una nueva alternativa que comienza ahora a perfilarse es la
instalacin de bancos de ADN. Entre sus ventajas estn la pequea cantidad de material vegetal
necesaria para su almacenamiento y la posibilidad de transferir genes a genotipos o especies
relacionadas. Esta tcnica puede ser utilizada con especies amenazadas o incluso extintas tomando
muestras del material en vivo o a partir de especmenes de herbario. En los bancos de ADN, el
ADN extrado de individuos de una determinada poblacin se almacena a bajas temperaturas
(congeladores a 80 C o tanques de nitrgeno lquido). En la actualidad, esta alternativa slo
presenta utilidad en el caso de especies o gneros cuyo genoma ha sido profundamente estudiado
y donde se conocen las secuencias de numerosos o importantes genes. Sin embargo, es posible
que en un futuro este tipo de bancos vaya extendindose a medida que se vayan implantando las
tcnicas de ingeniera gentica en los procesos de mejora y obtencin de nuevos cultivares.
h. Otros bancos de germoplasma
Los bancos de polen y los bancos de yemas vegetativas son otras dos opciones de conservacin
que en principio podran ser aplicables a la conservacin de especies raras o amenazadas. En
ambos casos, el almacenamiento se realiza a bajas temperaturas, siendo aplicables las tcnicas de
crioconservacin. Los bancos de polen tienen la ventaja de que requieren un mnimo espacio y
resultan aplicables tanto a especies con semillas ortodoxas como a especies con semillas
recalcitrantes. Sin embargo, slo conservan la mitad del genoma, el polen tricelular resulta muy
difcil de almacenar, necesita de una coleccin de campo que proporcione flores femeninas para
llevar a cabo una propagacin convencional y los propgulos no estn directamente disponibles.
Los bancos de yemas vegetativas se utilizan en la actualidad en la conservacin de clones de
especies frutales y requieren la puesta a punto de la tcnica de injerto sobre planta patrn. Esta
tcnica podra ser aplicable a determinados casos de especies arbustivas o arbreas en peligro de
extincin.
V CONCLUSIONES
VI REFERENCIAS BILIOGRAFICAS
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Mesoam [online]. 2010, vol.21, n.1 [cited
VII ANEXOS