Contenido:

TEMA: .................................................................................................................................................. 3
OBJETIVOS: .......................................................................................................................................... 3
GENERAL:......................................................................................................................................... 3
ESPECÍFICOS: ................................................................................................................................... 3
INTRODUCCIÓN ................................................................................................................................... 3
ALCANCE:............................................................................................................................................. 4
MARCO TEÓRICO:................................................................................................................................ 4
Los metales pesados: ...................................................................................................................... 5
Bioadsorción:................................................................................................................................... 5
MARCO METODOLÓGICO.................................................................................................................... 5
RESULTADOS: ...................................................................................................................................... 8
DISCUSIONES: .................................................................................................................................... 10
RECOMENDACIONES ......................................................................................................................... 10
CONCLUSIONES: ................................................................................................................................ 10
Bibliografía ........................................................................................................................................ 12
ANEXOS: ............................................................................................................................................ 14
Anexo 1: Ordenanza municipal sobre metales pesados en aguas ................................................ 14
Anexo 2: Diagrama de elaboración de cerveza ............................................................................. 15
Anexo 3: Metodología de aislamiento .......................................................................................... 16
Anexo 4: Metodología de crio preservación: ................................................................................ 16
Anexo 5: Método de determinación de UFC................................................................................. 17
Contaje de células viables (Cápsula de Neubauer) ................................................................... 17
Anexo 6: Datos obtenidos de bioadsorción de la levadura con estándares. ................................ 18
Anexo 7: Cinética de crecimiento ................................................................................................. 21
Anexo 8: Medio de cultivo a partir de melaza .............................................................................. 21

2
 UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA DE ALIMENTOS

TEMA:

Bioadsorción de metales pesados mediante biomasa de Saccharomyce sp. extraída de aguas

residuales.

OBJETIVOS:

GENERAL:

Aislar una cepa capaz de adsorber metales pesados a base de aguas residuales a partir de
una industria cervecera.

ESPECÍFICOS:

Determinar medios de cultivo selectivos y condiciones óptimas de crecimiento para aislar

levaduras Saccharomyces.
Preservar una cepa de levadura capaz de adsorber metales pesados mediante crio
preservación.
Determinar las cantidades de biomasa necesarias para reducir los niveles de metales
pesados en función del tiempo mediante curvas de calibración.

INTRODUCCIÓN

La contaminación por metales pesados se ha convertido en uno de los problemas ambientales más
graves hoy en día. La bioadsorción, con microorganismos, tales como bacterias, hongos, levaduras
y algas, es considerada como un costo-eficaz de la biotecnología en el tratamiento de aguas
residuales. Entre los bioadsorbentes prometedores para la eliminación de metales pesados,
investigados en las últimas décadas, Saccharomyces sp.; ha recibido una creciente atención debido
a la naturaleza única, a pesar de su capacidad mediocre para la captación de metales en
comparación con otros hongos. S. uvarum es ampliamente utilizado en la producción de cerveza,
es fácil cultivar con baja economía. Es un producto que origina grandes cantidades de desechos en

3
la industria de la fermentación. La técnica en el ámbito de la bioadsorción de metales pesados por
Saccharomyces, está basada en un número considerable de referencias bibliográficas existentes.

Existen varios investigaciones (Amaya, 08) (Lezcano, 08) (SCIELO, 2005) las cuales hablan sobre la
bioadsorción de metales en varios tipos de microorganismos; siendo la mayoría de ellos estudios
con hongos y algas; y muy pocos con bacterias o levaduras.

ALCANCE:

Como se ha mencionado anteriormente, el presente proyecto pretende ser la continuidad de un

proyecto más amplio, cuyo objetivo es el diseño de un sistema de monitorización medioambiental
apto para el seguimiento en continuo de la eliminación de metales pesados como niquel, cobre,
cromo y zinc.

El método analítico utilizado se basa en la espectrofotometría de absorción atómica lo que hace

necesario conseguir un buen calibrado del sistema de análisis para obtener medidas fiables. Es por
ello que este proyecto se ha centrado, por un lado, en desarrollar el montaje correspondiente a la
parte de calibrado.

Por otro lado, se han definido los parámetros operacionales necesarios para conseguir que el
sistema de monitorización proporcione unos resultados fiables y en el menor tiempo posible.

MARCO TEÓRICO:

El problema de la contaminación de las aguas es, sin duda, uno de los aspectos más preocupantes
de la degradación de los medios naturales por parte de la civilización contemporánea. En este
sentido, es especialmente importante la contaminación producida por metales pesados, debido a
su elevada toxicidad y a su alta capacidad de permanencia en los medios y de acumulación en
organismos vivos. A causa al crecimiento exponencial de la población mundial, la necesidad de
controlar las emisiones de estos metales al medio ambiente es cada vez más importante.

Los metales pesados, no se eliminan de los ecosistemas acuáticos por procesos naturales debido a
que no son biodegradables por lo cual permanecen de manera indefinida por cientos de años. Son
muy tóxicos y contaminantes y sufren un ciclo eco-biológico, donde las aguas naturales son el
principal camino. Hoy en día los metales pesados tienen un gran significado como indicadores de
la calidad ecológica de todo flujo de agua debido a su toxicidad y muy especialmente al
comportamiento bio-acumulativo. (Moalla, 2006).

La búsqueda de métodos de eliminación de metales que sean económicos y efectivos, ha llevado

al desarrollo de nuevas tecnologías de separación basadas en la reutilización de compuestos

4
orgánicos: éste es el caso de la bioadsorción. Con esta motivación, se realiza el presente proyecto
cuyo fin es facilitar la monitorización y el estudio del proceso, y así ayudar en el avance de las
investigaciones en este campo.

Los metales pesados:

Los metales pesados son sustancias tóxicas capaces de causar graves daños en los organismos
vivos. Una de sus principales propiedades es que no son biodegradables y permanecen durante
mucho tiempo en el entorno, circulando y acumulándose en el medio y en los seres vivos, por lo
que es necesario evitar su incorporación al entorno a través de vertidos contaminados.

Además, los metales pesados se acumulan en los tejidos a través de la cadena alimenticia, la cual
tiene a los seres humanos como último destino. El peligro se multiplica y las personas tienden a
sufrir sus efectos pudiendo padecer problemas de salud (SCIELO, 2004). De entre los distintos
metales tóxicos, se pueden diferenciar siendo especialmente importantes: As, Cd, Cu, Sb, Se, Zn,
Cr, Hg, Ni y Pb, los cuales tienen gran significado como indicadores de la calidad ecológica de
cualquier flujo de agua

La necesidad de métodos de eliminación de metales que sean económicos y efectivos, ha llevado

al desarrollo de nuevas tecnologías de separación. Los métodos tradicionales son utilizados de
forma habitual en el tratamiento de efluentes industriales, pero su aplicación suele estar
restringida por razones técnicas o económicas (Amaya, 08). Este estudio de nuevas tecnologías ha
dirigido su atención hacia la bioadsorción.

Bioadsorción:

El proceso de bioadsorción puede ser definido como la captación de contaminantes presentes en

una solución acuosa por un material biológico, a través de mecanismos fisicoquímicos o
metabólicos. Esto es debido a que, como los metales pesados pueden llegar a tener efectos letales
en la biomasa viva, ésta tiene la capacidad de poner en funcionamiento ciertos mecanismos para
contrarrestarlos. Los dos mecanismos diferenciados para la captación de los metales pesados por
parte de la biomasa son: (Moalla, 2006)

MARCO METODOLÓGICO

MEDIO DE CULTIVO:

De acuerdo a la investigación realizada se determinó que las variables de mayor importancia en el

proceso de bioadsorción son: el pH, las concentraciones iniciales de metales como variables
independientes y el estado de la biomasa como variable dependiente (Rodriguez, 08).

5
Se debe considerar que los parámetros óptimos de cultivo para la levadura son: ph: 4.5, 6.5; aw:
0.90-0.95; T: 18 - 35 °C siendo más favorable el crecimiento a temperaturas bajas, Velocidad de
crecimiento: 0.55 h-1. Conocidos estos datos se podrá delimitar la línea base; de la cual partimos,
se procedió a utilizar un medio de cultivo económico fabricado a partir de melaza, debido a que la
melaza proporciona fuente de Carbono, nitrógeno, vitaminas y minerales (Sosa, et al., 2009) pero
adicionando metales pesados en diversas concentraciones Anexo

MARCO METODOLÓGICO:

1. PREPARACIÓN DE MUESTRAS:

Las muestras serán tomadas de las aguas residuales en frascos esterilizados; se comenzará con los
análisis lo más pronto posible.

Las muestras serán tomadas del punto de descarga de las aguas hacia el alcantarillado durante el
mayor caudal de descarga para tener una mayor probabilidad de la obtención de muestra
homogénea, se procederá a recolectar las muestras en frascos estériles y se transportara hacia el
laboratorio en cooler con pilas de enfriamiento.

2. AISLAMIENTO DE LEVADURAS (medios pre fabricados):

Se tomará de las muestras homogenizadas un mililitro y se procederá a realizar siembras en 3

medios (MEA: Agar extracto de malta, YGC: Agar glucosa extracto de levadura cloranfenicol y ASG:
Agar saborou glucosa 4%) los cuales deberán ser incubados por 3 días a 25°C (25±2°C). Finalizado
este período se procederá a examinar macro y microscópicamente las colonias desarrolladas.
Después se realizara el aislamiento de colonias representativas hasta poder obtener cepas puras.

El fundamento de este método consiste en la aplicación de factores ecológicos como lo son pH,
Temperatura, degradación favorable de un determinado sustrato, acción de antibióticos, etc., los
cuales ayudan a que los medios de cultivo se vuelvan específicos y nos permitan de esta forma
aislar, conservar y preservar una cepa de levadura la cual será de beneficio para el proyecto.

3. CARACTERIZACIÓN DE LEVADURAS:

Para la caracterización de las levaduras se procederá a distinguirla mediante los siguientes

métodos:

1. Microscópicamente: determinación de la morfología de la levadura.

2. Macroscópicamente:
2.1. Poder fermentativo: Mediante el método de la campana de Durham.
2.2. Crecimiento en agar glucosa nitrato: después de 3 días a 25°C se podrá determinar la
habilidad de utilizar nitrato como única fuente de nitrógeno.
2.3. Crecimiento en agar MEC: de 3 días a 25°C se observar la macro y micro morfología de las
levaduras.
2.4. Tinción gran: comprobación de cepas puras.

6
 4. CONSERVACIÓN DE CEPAS:

Una vez seleccionadas y aisladas las cepas elegidas se las debe sembrar en agar ASG (debido a que
la glucosa es una sola fuente de carbohidratos; con lo que se reduce el riesgo de posibles
mutaciones) de donde se tomarán pequeñas perlas de agar para poder colocarlas en crio viales
inmersas en aceite mineral estéril conservadas con una temperatura de 4°C; con lo que la cepa se
mantendrá por un período de 15 años. (Mossel, 2003) Anexo

5. PRODUCCIÓN DE BIOMASA: (Crecimiento en Cultivo Cerrado con Agitación Orbital)

En matraces de 250 ml de capacidad, se deberán llenar con 150 ml del medio de cultivo, el medio
debe ser esterilizado; las condiciones del Shaker deben ser 180 r.p.m a 30°C para tener un buen
desarrollo del microorganismo.

METODOLOGÍA PARA LA DETERMINACIÓN DE BIOMASA:

METODOLOGÍA DE BIOADSORCIÓN (REDALYC, 2006):

Materiales:

Para este estudio se utilizará Saccharomyces sp, levadura residual de una empresa local,
subproducto del proceso de fermentación de cerveza.

Preparación de la Biomasa

Se prepararán suspensiones de biomasa. Estas suspensiones de biomasa se agregaran a las

diferentes soluciones de metales pesados a diferentes concentraciones con las que comprobará en
la cantidad y cuál de los metales es de mayor adsorción, y las cantidades de biomasa (#
levaduras/L) requeridas. Una vez determinado las cantidades de adsorción se realizará en aguas
residuales las cuales se conozcan que excedan los niveles de metales permitidos.

Preparación de las Soluciones de Metales

Las soluciones de metales se prepararon a partir de patrones, cada uno para generar soluciones
stock, con metales como Cu, Hg, Cr, Zn, Ni; Anexo. Se ajustó el pH de las soluciones a pH 3, 5 y 7 y
se vario su temperatura. Partiendo de estas variables se precedió a delimitar una línea base para el
trabajo.

Diseño de Experimentos

De acuerdo a la literatura analizada (Lezcano, 08) y a la comprobación de estos parámetros en el

laboratorio se determinó que las variables de mayor importancia en el proceso de bioadsorción
son: el pH, las concentraciones iniciales de metales y de biomasa. Anexo

7
Por lo que utilizará un pH de 3 y 5 debido a que en este rango se mantiene el punto isoeléctrico de
los metales; la concentración de las soluciones para cada metal para los niveles bajos y altos
respectivamente. Anexo

Experimentos de Bioadsorción

Las pruebas de biadsorción serán efectuadas colocando 150mL de la mezcla de soluciones (de
acuerdo al diseño de experimentos) en matraces Erlenmeyer de 250mL y agitando en un shaker
orbital a 180rpm a una temperatura constante de 24°C por 24h con lo que se medirá el contenido
de metales cada dos horas para poder comprobar que disminuye su contenido.

Después de ese tiempo se tomaron muestras de 2mL de las suspensiones y se separará la biomasa
por centrifugación a filtración al vacío. Después de la filtración se toma 1mL del filtrado el cual se
diluye con agua destilada, la muestra es acidificada con ácido nítrico concentrado para descartar el
efecto de la precipitación y así asegurar que la lectura corresponda a la bioadsorción por la
levadura con lo que se determinará por Espectroscopia de absorción atómica.

RESULTADOS:

Levadura:

Mediante las pruebas a las que fue sometida la levadura y el precedente de la levadura que es
usada en la fabricación se determino que esta fue:

Saccharomyces uvarum
Clasificación científica
Reino: Fungi
Filo: Ascomycota
Clase: Hemiascomycetes
Orden: Saccharomycetales
Familia: Saccharomycetaceae
Género: Saccharomyces
Especie: S. uvarum
Nombre binomial
Saccharomyces uvarum
Nguyen & Gaillardin ex. Beijerinck
Sinonimia
Saccharomyces carlsbergensis

3. Microscópicamente: forma esférica.

4. Macroscópicamente:
4.1. Poder fermentativo: alto.

8
 4.2. Crecimiento en agar glucosa nitrato: Consumo de nitrato.
4.3. Crecimiento en agar MEC: buen crecimiento en este asar se pudo observar colonias de
color crema de forma esférica.
4.4. Tinción gran: comprobación de cepas puras (G +)

Determinación de la capacidad de bioadsorción:

Capacidad de biadosorción de la Levadura

Para poder determinar la capacidad de adsorción de metales pesados de la levadura se procedió a

realizar varios experimentos con patrones para determinar una línea base (los parámetros
adecuados en los que se obtiene una mayor bioadsorción)

Se puedo determinar que los parámetros que ayudan a la cepa a una mayor bioadsorción son: pH
5 (pH óptimo para el crecimiento); Temperatura: ambiente (Esta cepa la capacidad de actuar a
diversas temperaturas siendo la más idónea la ambiente por no requerir ningún sistema
especializado); Biomasa (5*106, se comprobó que a mayor cantidad de biomasa hay una capacidad
de bioadsorción); y tiempo de contacto (dos días)

Cálculo de la eficiencia de la bioadsorción

𝑴𝒆𝒕𝒂𝒍 𝒙𝒐 𝑴𝒆𝒕𝒂𝒍 𝒙𝒇
𝑬𝑩𝑨 = ∗ 𝟏𝟎𝟎
𝑴𝒆𝒕𝒂𝒍 𝒙𝒐

Metal Concentración inicial (ppm) Concentración final (ppm) EBA (%)

A O.25 0.14 44,00
B 0.5 0.31 38,00
Zinc
C 0.75 0.4 46,67
D 1.0 0.9 10,00
A 0.5 0.1 80,00
B 1.0 0.2 80,00
Níquel
C 1.5 0.5 66,67
D 2.0 0.6 55,00
A 1.0 0.5 50,00
B 2.0 0.9 55,00
Cromo
C 3.0 1.7 36,67
D 4.0 2.4 32,50
A 1.0 0.5 70,00
B 2.0 0.8 60,00
Cobre
C 3.0 1.8 46,67
D 4.0 2.2 45,00

9
DISCUSIONES:

1. La producción de biomasa fue algo lento y limitante debido a que el medio que se utilizo
para este fin fue el Caldo extracto de malta el mismo que solo contenía pequeñas
cantidades de azucares, Maltosa 1.8 g / l y dextrosa 6.0 g/l lo mismo que produjo que las
levaduras consumieran toda el azúcar en poco tiempo y de esta manera limitándose un
crecimiento celular obteniendo un máximo de 360000 levaduras / µL, por este motivo se
utilizo un medio de cultivo diseñado a base de melaza el cual nos permitía una cantidad
suficiente de azúcares.
2. Debido a la disponibilidad de energía eléctrica en la realización del proceso no se pudo
realizar el estudio con más variables.
3. Debido a un incidente en le laboratorio al romperse la cámara de Neubauer no se pudo
tomar más datos para la determinación de la cinética de crecimiento.

RECOMENDACIONES

1. Para el diseño del medio de cultivo se debe tomar muy cuenta que se necesita biomasa y
no producción de productos, en este caso con la levadura hay que tomar en cuenta la
producción de alcohol.
2. Se debe ser programar un cronograma en la utilización de shaker orbital debido a que las
condiciones a las que se someten los microorganismos no son las adecuadas para todos y
al alterar uno de los factores con los que se trabajo se altera la velocidad de crecimiento
de los mismos.

CONCLUSIONES:

1. El diseño del medio tiene como finalidad la elección de componentes necesarios para
lograr el crecimiento de Levadura Saccharomyces sp.
2. Las mejores condiciones que se determinaron para la adsorción de metales por Levaduras
Saccharomyces fue de pH= 5 , Tº = ambiente , tiempo = 2 días , y biomasa= 5*106 se
pudo comprobar a que mayor cantidad de biomasa existía una mayor bioadsorción.
3. En reactivo limitante en el medio de cultivo es la melaza esto se debe para evitar la
producción de alcohol y maximizar la producción de CO2
4. Se escogió como medio de conservación el medio ASG para ciopreservación debido a que
este una solo fuente de carbono lo que ayuda para bajar el nivel de mutaciones y este es
específico para levaduras y con relación al costos es un medio económico
5. La adsorción de metales tiene relación directa con la biomasa de levadura saccharomyces
sp.
6. La propuesta de bioremediación en aguas con alto contenido de metales por acción de
poder de adsorción de levaduras es por bioaumentación.

10
7. El poder de adsorción de la levadura en los metales es de Cu = 65%, Cr= 50%, Ni=80%,
Zn=43%.
8. Los resultados de este proyecto de investigación sugieren que la metodología detallada es
una alternativa a ser utilizada a la bioremediación de contaminación por metales pesados.

11
Bibliografía
1. Acosta, M. Scielo. [En línea] [Citado el: 09 de 11 de 09.]
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2. Amaya, M. 08. Universidad de Sonora. [En línea] 05 de 08. [Citado el: 09 de 11 de 09.]
http://www.uaemex.mx/Red_Ambientales/docs/congresos/TLAXCALA%202009/REVISTA/
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3. Bernard, A. 1991. Biochemical engineering and biotecnology handbook. s.l. : Stockton
press, 1991. Vol. segunda edición.
4. EPA. Enviromental Protection AgencY. [En línea] [Citado el: 16 de 01 de 2009.]
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DE Saccharomyces. [En línea] 28 de 10 de 2007. [Citado el: 20 de 11 de 2009.]
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6. Flores, V. 2001. Scielo Perú. [En línea] 2001. [Citado el: 10 de 11 de 2009.]
http://www.scielo.org.pe/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1561-08882001000100007.
7. Lezcano, J. 08. Universidad Complutense de Madrid. Efecto del pretramiento de la
biomasa en la bioadsorción de metales pesados. [En línea] 04 de 08. [Citado el: 06 de 11
de 09.] http://eprints.ucm.es/8620/1/T30768.pdf.
8. Merck. Registro de propiedad Industrial España. [En línea] [Citado el: 23 de 10 de 2009.]
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9. Moalla, N. 2006. springerlink. [En línea] 07 de 2006. [Citado el: 17 de 01 de 2010.]
http://www.springerlink.com/content/p1674034k5h557k8/.
10. Mossel, D A. 2003. Microbiología de los alimentos. segunda edición. Saragoza : Acribia
S.A., 2003. pág. 703.
11. Norma Técnica que regula los contaminates asociados a descargas líquidas industriales,
comerciales, y de servicios. Quito, Municipio Metropolitano. 2009. Quito : s.n., 2009.
Resolución 003.
12. REDALYC. 2006. REDALYC. Red de Revistas Científicas de América Latina y el Caribe,
España y Portugal. [En línea] 12 de 2006. [Citado el: 7 de 10 de 2009.]
http://redalyc.uaemex.mx/redalyc/src/inicio/ArtPdfRed.jsp?iCve=49911205#.
13. Rodriguez, M. 08. Scielo. Efectos de las Condiciones de Operación Sobre la biosorción . [En
línea] 08. [Citado el: 11 de 11 de 09.]
http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0718-
07642008000600006&lang=pt.
14. Sanchez, E. 2008. Universidad Autónoma de nuevo León. [En línea] 2008. [Citado el: 10 de
11 de 09.] http://redalyc.uaemex.mx/redalyc/pdf/402/40211208.pdf.
15. SCIELO. 2004. Electronic Journal of Biotechnology ISSN: 0717-3458. Biosorción de metales
pesados en aguas residuales mediante Pseudomonas sp. [En línea] 15 de 04 de 2004.
[Citado el: 16 de 11 de 2009.] http://www.scielo.cl/scielo.php?pid=S0717-
34582004000100006&script=sci_arttext.

12
16. —. 2005. Revista de la Sociedad Venezolana de Microbiología. [En línea] 01 de 2005.
[Citado el: 09 de 10 de 2009.] http://www.scielo.org.ve/scielo.php?pid=S1315-
25562005000100007&script=sci_arttext.
17. Sosa, Paola, y otros. 2009. Diseño y comprobación de un medio de cultivo para
microorganimos probióticos y su conservación. Quito : s.n., 2009.
18. Villegas, J. 1995. PatentesOnline.com.mx. PROCESO DE PRODUCCION DE
SACCHAROMYCES CEREVISIAE BAJO CONDICIONES DE CULTIVO BIEN CARACTERIZADO. [En
línea] 26 de 04 de 1995. [Citado el: 21 de 11` de 2009.]
http://www.patentesonline.com.mx/proceso-de-produccion-de-candida-utilis-y-
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19. Vullo, D. 03. Universidad de Buenos Aires. Revista Qímica viva. [En línea] 12 de 11 de 03.
[Citado el: 09 de 11 de 09.] http://redalyc.uaemex.mx/redalyc/pdf/863/86320303.pdf.

13
ANEXOS:

Anexo 1: Ordenanza municipal sobre metales pesados en aguas

Dentro del distrito metropolitano de Quito la ordenanza municipal de medio ambiente 003 expone
los siguientes límites como parámetros para el funcionamiento de cualquier empresa.

Límites máximos por cuerpo receptor (Norma Técnica que regula los contaminates asociados a
descargas líquidas industriales, comerciales, y de servicios, 2009)

Parámetros Expresado como Unidad Límite máximo permisible

Alcantarillado Cauce de agua
Aluminio Al mg/l 5,0 5,0
Arsénico total As mg/l 0,1 0,1
Cadmio Cd mg/l 0,02 0,02
Cobre Cu mg/l 1,0 1,0
Cromo Hexavalente Cr+6 mg/l 0,5 0,5
Manganeso Mn mg/l 10,0 2,0
Mercurio (total) Hg mg/l 0,01 0,005
Níquel Ni mg/l 2,0 2,0
Plomo Pb mg/l 0,5 0,2
Zinc Zn mg/l 2,0 2,0

Debido a lo expuesto, se aplicará este proyecto como medida de bio-rremediación especialmente

en aguas residuales que excedan los límites citados como florícolas, textileras, basándonos en los
metales que exigen la ordenanza.

14
Anexo 2: Diagrama de elaboración de cerveza

15
 Anexo 3: Metodología de aislamiento

Muestra de agua residual

Anexo 4: Metodología de crio preservación:

De la cepa aislada se procede a tomar La muestra de agar colocarla en un tubo

una muestra con aceite estéril par su crio preservación

16
Anexo 5: Método de determinación de UFC.

Área Volumen Factor

Tipo de cuadro
[cm2] [ml] [1/Volumen]
Cuadrado total 1.00 x 10-2 2.00 x 10-5 5.00 x 104

Cuadrado grande 4.00 x 10-4 8.00 x 10-7 1.25 x 106

Cuadrado pequeño 2.50 x 10-5 5.00 x 10-8 2.00 x 107

Contaje de células viables (Cápsula de Neubauer)

𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑎𝑑𝑎𝑠

=
𝜇𝐿 𝑠𝑢𝑝𝑒𝑟𝑓𝑖𝑐𝑒 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑎𝑑𝑎 ∗ 𝑃𝑟𝑜𝑓𝑢𝑛𝑑𝑖𝑑𝑎𝑑

Superficie Contada: 0.0025 mm2

Profundidad: 0.100 mm

17
Anexo 6: Datos obtenidos de bioadsorción de la levadura con estándares.

Concentraciones (ppm)
Metales
A B C D
Cu 1.0 2.0 3.0 4.0
Cr 1.0 2.0 3.0 4.0
Ni 0.5 1.0 1.5 2.0
Zn 0.25 0.5 0.75 1.0
Hg 0.5 1.0 1.5 2.0

Biomasa (g/mL) Temperatura (°C) pH Tiempo (Días)

B T P t
2 * 106 5 3 1
5 * 106 18 5 2

18
 Día 11-01-10 12-01-10 13-01-10 11-01-10
Metales Ni Cu Cr Zn Ni Cu Cr Zn Ni Cu Cr Zn Ni Cu Cr Zn
A B1 P1 0,450 0,964 0,859 0,247 0,438 0,951 0,841 0,229 0,429 0,942 0,832 0,220 0,421 0,934 0,825 0,213
A B2 P1 0,523 1,006 0,844 0,238 0,511 0,993 0,826 0,221 0,502 0,984 0,817 0,212 0,494 0,976 0,810 0,205
A B2 P2 0,474 0,843 0,763 0,221 0,462 0,830 0,745 0,204 0,453 0,821 0,736 0,195 0,445 0,813 0,729 0,188
A B1 P2 0,469 0,961 0,823 0,241 0,457 0,948 0,805 0,224 0,448 0,939 0,796 0,215 0,440 0,931 0,789 0,208
B B1 P1 0,957 1,967 1,960 0,486 0,945 1,954 1,942 0,469 0,936 1,945 1,933 0,460 0,928 1,937 1,926 0,453
B B2 P1 0,769 1,904 1,896 0,464 0,757 1,891 1,878 0,447 0,748 1,882 1,808 0,438 0,740 1,874 1,801 0,431
B B2 P2 0,574 1,783 1,753 0,397 0,454 1,593 1,573 0,227 0,364 1,503 1,503 0,137 0,284 1,423 1,433 0,067
B B1 P2 0,835 1,913 1,963 0,487 0,823 1,900 1,945 0,470 0,814 1,891 1,936 0,461 0,806 1,883 1,929 0,454
C B1 P1 1,472 2,934 2,958 0,726 1,459 2,844 2,878 0,656 1,369 2,754 2,798 0,586 1,279 2,714 2,748 0,567
C B2 P1 1,417 2,850 2,937 0,736 1,337 2,680 2,817 0,616 1,247 2,590 2,737 0,546 1,167 2,540 2,677 0,527
C B2 P2 1,402 2,842 2,864 0,703 1,322 2,672 2,744 0,583 1,232 2,582 2,664 0,513 1,162 2,502 2,604 0,494
C B1 P2 1,363 2,952 2,937 0,742 1,346 2,892 2,837 0,672 1,256 2,802 2,757 0,602 1,186 2,722 2,697 0,583
D B1 P1 1,964 3,957 3,950 0,993 1,950 3,867 3,860 0,893 1,860 3,777 3,780 0,823 1,810 3,717 3,740 0,804
D B2 P1 1,948 3,849 3,974 0,986 1,868 3,679 3,854 0,866 1,778 3,589 3,774 0,796 1,708 3,549 3,714 0,777
D B2 P2 1,847 3,753 3,864 0,902 1,767 3,583 3,744 0,782 1,677 3,493 3,664 0,712 1,607 3,413 3,604 0,693
D B1 P2 1,903 3,864 3,947 0,974 1,892 3,764 3,887 0,884 1,802 3,674 3,807 0,814 1,722 3,594 3,767 0,795

Parámetros más idóneos

Día 12-01-10 12-01-10 Parámetros no favorables
Metales Ni Cu Cr Zn C B1 P1 Ni Cu Cr Zn
A B1 P1 0,415 0,929 0,820 0,210 C B2 P1 1,266 2,674 2,718 0,552
A B2 P1 0,488 0,971 0,805 0,202 C B2 P2 1,154 2,500 2,647 0,512
A B2 P2 0,439 0,808 0,724 0,185 C B1 P2 1,149 2,462 2,574 0,479
A B1 P2 0,434 0,926 0,784 0,205 D B1 P1 1,173 2,682 2,667 0,568
B B1 P1 0,922 1,932 1,921 0,450 D B2 P1 1,797 3,677 3,710 0,789
B B2 P1 0,734 1,869 1,796 0,428 D B2 P2 1,695 3,509 3,684 0,762
B B2 P2 0,224 1,418 1,428 0,064 D B1 P2 1,594 3,373 3,574 0,678
B B1 P2 0,800 1,878 1,924 0,451 C B1 P1 1,709 3,554 3,737 0,780
 Bioadosorción Ni Bioadsorción Cu
2,500 4,500
4,000

Concentración
2,000 3,500
Concentración

3,000
1,500 Ni 11/01/10 2,500 Cu 11/01/10
2,000
1,000 Ni 12/01/10 1,500 Cu 12/01/10
1,000
0,500 Ni 13/01/10 0,500 Cu 13/01/10
0,000
0,000 Ni 14/01/10 Cu 14/01/10
A A A A B B B B C C C C D D D D
A B1 A B2 B B1 B B2 C B1 C B2 D B1 D B2 Ni 15/01/10 B1 B2 B2 B1 B1 B2 B2 B1 B1 B2 B2 B1 B1 B2 B2 B1 Cu 15/01/10
P1 P2 P1 P2 P1 P2 P1 P2 P1 P1 P2 P2 P1 P1 P2 P2 P1 P1 P2 P2 P1 P1 P2 P2
Parámetros Parámetros

Bioadosorción Cr Bioadosorción Zn
4,500 1,200
4,000 1,000
3,500

Concentración
Concentración

3,000 0,800
2,500 Cr 11/01/10 0,600 Zn 11/01/10
2,000 Cr 12/01/10 0,400 Zn 12/01/10
1,500
1,000 Cr 13/01/10 0,200 Zn 14/01/10
0,500 Cr 14/01/10 0,000 Zn 13/01/10
0,000 A A A A B B B B C C C C D D D D
Cr 15/01/10 Zn 15/01/10
A B1 A B2 B B1 B B2 C B1 C B2 D B1 D B2 B1 B2 B2 B1 B1 B2 B2 B1 B1 B2 B2 B1 B1 B2 B2 B1
P1 P2 P1 P2 P1 P2 P1 P2 P1 P1 P2 P2 P1 P1 P2 P2 P1 P1 P2 P2 P1 P1 P2 P2
Parámetros Parámetros
Anexo 7: Cinética de crecimiento

tiempo células / 250 mL

0 0
2 88000,0
4 248000,0
6 24448000,0
8 37312000,0
20 50496000,0

Anexo 8: Medio de cultivo a partir de melaza

Elemento Cantidad (g/L agua destilada) Composición %

Melaza de Caña 29,25 69,9
Extracto de Levadura 4,1 9,8
Peptona de caseína 5,0 11,9
Fosfato de potasio 0,5
Medio mínimo

Cloruro de Amonio 1,0

Sulfato de sodio 2,0
de sales

Cloruro de calcio hexahidratado 0,001 3,5 8,4

Sulfato de hierro 0,0003
Cloruro de magnesio 5 ppm
Total 41,85 100,0
 Concentraciones (ppm)
Metales
A B C D
Cu 1.0 2.0 3.0 4.0
Cr 1.0 2.0 3.0 4.0
Ni 0.5 1.0 1.5 2.0
Zn 0.25 0.5 0.75 1.0
Hg 0.5 1.0 1.5 2.0

Composición de la Melaza de Caña:

Cada 100g contienen:

Calorías 215 Kcal

Carbohidratos 55 g
Vitamina 1 0,1 mcg
Composición de Vitaminas Vitamina B2 0.23 mcg
Vitamina B6 0,27 mcg
Biotina 9 mcg
Ácido Fólico 0,01 mg
Niacina 2 mg
Ácido Pantotenico 0,5 mg
Composición de Minerales Fosforo 85 mg
Calcio 685 mg
Hierro 16 mg

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