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DE
MXICO
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA
QUMICA FARMACUTICO BIOLGICA
Laboratorio de Microbiologa General I
R E P O RTE E X P E R I M E N TAL P R C T I C A S : 8 .
A I S L A M I E N TO Y C U A N T I F I C A C I N D E
M I C R O O R G A N I S M O S Y 9 . PATOG E N I C I D A D Y V I R U L E N C I A .
Resumen.
Se llev a cabo la siembra de una muestra
con agua de betabel para realizar la cuantificacin
de los microorganismos presentes mediante las
tcnicas de dilucin y vaciado en placa con asa
calibrada. Para ello, se utiliz agar EMB (para
enterobacterias y/o gram negativas), AN y ASC al
5%. Posteriormente, se realizaron las pruebas de
patogenicidad, de Coagulasa (libre y ligada) con
Sthapylococcus
aureus,
Hemolisina
con
Streptococcus pyogenes y Staphylococcus
aureus, Catalasa con todas las bacterias del
cepario (Pseudomona aeruginosa, Salmonella
thypi, Klebsiella pneumoniae, Proteus vulgaris,
Micrococcus
lysodeikticus,
Staphylococcus
aureus, Bacillus subtilis, Corynobacterium equi y
Eschericia coli); asimismo, se analiz en la mesa
redonda la presencia de cpsulas como factor de
virulencia y, que la manera ms adecuada de
llevar a cabo la presencia de esta con las bacterias
es mediante una tincin de capsula (desarrollada
la clase pasada) con rojo Congo o tinta china.
Introduccin.
Para trabajar con un microorganismo
especfico, se necesita aislar de una muestra, ya
sea de algn fluido corporal, alimento o materia
orgnica. El aislamiento implica la obtencin de un
cultivo puro (axnico), donde slo existe un tipo de
microorganismo.
La
separacin
de
microorganismos presentes en una poblacin
mixta puede lograrse de varias maneras:
separando a los microorganismos fsicamente
mediante diluciones seriadas y vaciado en placa,
por agotamiento de un pequeo inculo en un
medio de cultivo slido o utilizando medios de
cultivo selectivos para inhibir a los microrganismos
no deseados.
Existen
mtodos
para
cuantificar
microorganismos de una determinada muestra.
Estos mtodos pueden cuantificar masa total de la
poblacin y otros el nmero de UFC. Su
clasificacin de acuerdo a la manera de cuantificar
puede ser directa o indirecta y segn los
microorganismos que consideren pueden se
clasifican en mtodos viables y mtodos totales. El
vaciado y cuantificacin en placa es un mtodo
indirecto que cuantifica clulas viables, al igual que
el mtodo de asa calibrada.
Microorganismos
(bacterias de cepario)
-Pseudomona aeruginosa
- Salmonella thypi
- Klebsiella pneumoniae
- Proteus vulgaris
- Micrococcus lysodeikticus,
- Staphylococcus aureus
- Bacillus subtilis
- Corynobacterium equi
- Escherichia coli
- Streptococcus pyogenes
Muestra agua de betabel
Reactivos
Prctica
Prctica 9
9 Patogenicidad
Patogenicidad y
y virulencia
virulencia
H2 O 2
Prueba de coagulasa
-Se
una muestra
muestra de
-Se tom
tom una
de Salmonella
Salmonella aureus,
aureus,
inoculandose
inoculandose en
en un
un tubo
tubo con
con plasma
plasma (de
(de conejo)
conejo) yy se
se
incubo
incubo a
a 37C
37C por
por 4
4 horas.
horas.
Prueba
Prueba de
de Hemolisinas
Hemolisinas
Se
incubo a
Se inoculo
inoculo e
e incubo
a 37
37 C
C por
por 24
24 o
o 48
48 hrs.
hrs.
Staphylococcus
Staphylococcus aureus
aureus yy Steptococcus
Steptococcus pyogenes
pyogenes en
en
un
un medio
medio de
de agar
agar sangre,
sangre, este
este ltimo
ltimo sellandose
sellandose con
con
masking.
masking.
Resultados.
Tabla I. Aislamiento y cuantificacin.
Mtodo
Imagen
Resultad
o
Mtodo
Imagen
Agar Nutritivo
Resultado
EMB
Pseudomona auriginosa
Salmonella typhi
Streptococcus pyogenes
Klebsiella pneumoniae
++
Proteus vulgaris
+++
Micrococcus lysodeikticus
+++
Staphylococcus aureus
++
Bacillus subtilis
++
Corynebacterium equi
Escherichia coli.
Imagen
Staphylococcu
s
Resultado
aureus
Negativo
Negativo