SEPARACIN

Michael Tswett, fue quien dio origen a la cromatografa, los compuestos que
separo eran de colores, y pudo detectar las bandas o zonas de los diferentes
materiales debido a sus colores.
La cromatografa es la ciencia y arte de separar los componentes de los
materiales. Este tipo de separacin se logra mediante diferentes tcnicas, por
ejemplo, por sus diferencias de carga, tamao molecular, masa molecular,
polaridad de enlace potencial redox, constantes de ionizacin y arreglo de los
enlaces tales como estructura de los ismeros o quiralidad.
En la cromatografa la muestra se introduce con rapidez a una fase fluida que
se desplaza (en un lquido o gas) y que se conoce como fase mvil, la fase
mvil tambin puede ser un fluido que no pueda clasificarse como gas o
liquido; un fluido supercrtico. En el curso de todas las separaciones, los
componentes de la muestra son transportados por la fase mvil a travs de un
volumen o capa de partculas de material slido, que tiene diversos nombres
comunes; entre ellos, soporte slido, adsorbente, fase esttica y material de
empaque. Probablemente el trmino ms empleado es fase estacionaria.

CROMATOGRAMA
Un cromatograma es una representacin grfica de la respuesta del detector
en funcin del tiempo de eludicin, y transcurre desde el momento de la
inyeccin de una sustancia hasta que ese componente llega al detector.

PARAMETROS DE UN CRONOGRAMA
Un parmetro es una cantidad que toma diferentes valores y caracteriza a un
proceso, operacin o resultado.
Parmetro
Volumen de
retencin

Ancho de pico
o ancho de
banda

Volumen neto
de retencin
Factor de
capacidad

Tiempo de

Caracterstica
Es el volumen que se eluye de la columna desde la inyeccin de
la muestra hasta que se produce el pico del primer pico eluido.
Este volumen es una combinacin de: el lquido entre las
partculas de la fase estacionaria, llamado volumen de vaco y
el volumen de la tubera, el inyector y el detector.
Un parmetro es el ancho total a la mitad del pico que se
abrevia w 1/2 , es el volumen eluido entre los extremos de la
banda a una posicin que corresponda a la mitad de la altura
total. El ancho del pico en la base, se obtiene dibujando las
lneas tangentes a los puntos de inflexin a ambos lados del
contorno de la banda y las prolonga hasta la lnea de la base
Es la diferencia entre el volumen de eluyente de un pico y el
volumen de retencin:

volumen neto de retencin=VrVm

Se define para cada banda como:

Ki=

VrVm
Vm

Este es de gran utilidad ya que es independiente de la

geometra del sistema a diferencia de los tiempos de retencin.
Es el tiempo en que la sustancia permanece en la columna

retencin
Numero de
platos tericos
(eficiencia)

La separacin de los componentes depende de los anchos de

los picos y del espaciamiento de tiempo entre picos. Como
consecuencia se puede tener una separacin eficaz. Cuando las
bandas son angostas la separacin tarda menos. Cuando se
cuantifica este parmetro se llama eficiencia cromatografca
(N). La ecuacin de definicin es:

N=16

( trw )

N=5.54

Resolucin

( w tr1/2 )

Esta es una cantidad adimensional

Es una medida cuantitativa del grado de mezclado de los
materiales entre las dos bandas adyacentes, determina hasta
qu grado se separan los componentes. Cuando Rs = 0.5, las
bandas estn bastante mezcladas. Para Rs =1, los puntos
apenas se tocan en el sitio en que se ocupan en la lnea base.
Para Rs =1.5, el empalme entre los picos es cercano al 0.1 %.
La ecuacin matemtica que describe la resolucin es la
siguiente:

w 2w 1

1/2
Vr 2Vr 2
Rs=

Altura

Es la longitud de la columna

CROMATORAFA LQUIDA
En la cromatografa de lquidos se emplea una fase mvil lquida
TIPOS DE CROMATOGRAFA LQUIDA
Cromatograf
a

Caractersticas

Ilustracin

Cromatograf
a en fase
normal

Cromatograf
a en fase
inversa

Cromatograf
a de
intercambio
inico

Cromatograf
a por
filtracin de
gel

Fases
estacionarias
planas

La fase slida es ms polar que la fase mvil. Las

fases
estacionarias
suelen
ser
polmeros
inorgnicos que tienen gran nmero de poros, los
materiales ms comunes son oxido de silicio
hidratado (slica gel) o polmeros de hidrxido de
aluminio hidratado
(almina). La polaridad del
disolvente es el principal factor que determina los
volmenes de elucin. Cuando los disolventes son
ms polares, los solutos se desplazan con ms
rapidez y eluyen ms pronto.
La fase estacionaria es menos polar que la fase
mvil. Se emplean dos tipos de fases estacionarias
las ms comunes son grupos no polares
estacionados con slica, se emplean ms a menudo
los grupos orgnicos, donde el ms empleado es la
cadena de 18 tomos de carbono. Los disolventes
menos polares son eluyentes ms poderosos.
Se basa en la atraccin de cargas contrarias, se
emplean para separar las especies que se eluyen
segn sus diferencias de carga promedio. Los
materiales de las fases estacionarias que tienen
cargas enlazadas se llaman resinas de intercambio
inico, ya que tienen un nmero igual de cargas
negativas y positivas, es decir, son elctricamente
neutras. Este tipo de cromatografa depende del
pH, por lo que la fase mvil siempre se amortigua a
un pH fijo.
La separacin se basa en el tamao de las
molculas. La fase estacionaria que se emplea es
un slido con poros de corte transversal controlado.
La permeacin se produce a travs de los poros de
las partculas empacadas en la columna, la
separacin se produce porque solo las partculas
ms pequeas penetran en los poros y son
removidas de la fase mvil que fluye, por lo que
las partculas ms grandes siguen fluyendo con el
eluyente y se eluyen en primer lugar, seguidas de
las molculas ms pequeas.
La fase estacionaria es una capa de mnimo
espesor, formada por partculas unidas a una placa
slida de soporte, que puede ser de aluminio,
pastico o vidrio, este tipo de separaciones se llama
cromatografa de capa fina. Tiene la ventaja de que
permite analizar diversas muestras y estndares de
manera simultnea. El anlisis cualitativo se
caracteriza por la distancia en la que viajan

respecto a la distancia que recorre, el parmetro se

llama factor de retencin y se abrevia Rf. Rf=
distancia del origen de la mancha/distancia del
origen al frente del disolvente.

CROMATOGRAFA DE GASES
La fase mvil es un gas, los parmetros que se obtienen en cromatografa de
lquidos y gases son los mismos. El equipo en cromatografa de gases difiere
del de HPLC, la cromatografa de gases se requiere un control preciso del flujo
de gases, en vez de lquidos, y las columnas suelen ser ms largas y angostas,
las fases estacionarias difieren y el como el gas de arrastre no acta como
disolvente, el intervalo de temperatura de la columna es una variable crtica
para optimizar las separaciones.

CARACTERSTICAS DE CROMATOGRAFA DE GASES

Parmetro
Anlisis de la
muestra

Muestras e
introduccin de
muestras
Columnas
Temperatura

Caracterstica
Compuestos orgnicos con un punto de ebullicin inferior a 250
C y los gases fijos. Pueden enfriarse para efectuar separaciones
de materiales con bajo punto de ebullicin como metano o H 2.
Algunos compuestos como azcares, cidos grasos y
aminocidos.
Pueden ser gases, lquidos o slidos, los dos ltimos deben
vaporizarse. Las muestras deben inyectarse en menor tiempo
posible. La temperatura ptima es generalmente igual o ms alta
que la temperatura mxima durante la separacin.
La eleccin de la fase estacionaria se realiza en base de la
informacin especfica de cada fase.
La temperatura ptima se determina teniendo en cuenta la
resolucin necesaria y el deceso de reducir el tiempo de
separacin, se verifica a temperatura constante.

Gasto de la dase
mvil

En las columnas empacadas se operan con gastos de decimas de

milmetros por minuto (200 mL/min), en las columnas capilares
normalmente operan con gastos de menos de 1 mL/min.

Columna
empacada

Cromatografa gassolido

Cromatogra
fa de
gases

Cromatografa gaslquido

Columnas de

La fase estacionaria consta de partculas

empacadas dentro de una columna de acero
inoxidable o de vidrio que tiene un DI de 2 a 4
mm, puede estar formada por diversos
materiales porosos.

El retraso de los analitos se debe a un

equilibrio que incluye adsorcin sobre la
superficie y desorcin de la misma.

Las partculas de la fase estacionaria estn

recubiertas de diversos lquidos de alto punto
de ebullicin, la separacin de los analito
depende de distintas fracciones de tiempo que
pasen disueltos en la fase lquida estacionaria

Tiene dimetros internos de 1 mm y las

paredes internas estn recubiertas de una
pelcula de fase estacionaria, tiene una
eficiencia de hasta 200,000 platos tericos

BIBLIOGRAFA
Rubinson J.F., Kenneth A. R. (2000). Qumica analtica contempornea. Ed.
Pretince Hall. Mxico. P. 405-440.