CORPORACIN TECNOLGICA DE BOGOT

PLANTILLA GUIA PRACTICAS DE LABORATORIO

Versin: 01

Fecha: 19/01/2012

PROGRAMA
REGENCIA EN FARMACIA

Cdigo: DO-RG-014

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NOMBRE DEL CURSO

MICROBIOLOGA

PRACTICA No

NOMBRE DE LA PRACTICA

REACCIONES BIOQUIMICAS Y ACCION

ENZIMATICA DE LAS BACTERIAS Y
FLORA NORMAL ( FARINGE, BOCA,
OIDO, OJOS Y NARIZ )

DURACIN EN
HORAS
3

1. INTRODUCCIN:
Las Enterobacterias para su desarrollo siguen diferentes rutas metablicas que
permiten obtener subproductos que logran caracterizarlos permitiendo as su
identificacin. Este tipo de procesos permiten ser aplicados en procesos
industriales para obtencin de variedad de productos y materias primas.
El conocer la variedad microbiana que existe como flora normal permite
controlarla para permitir una excelente calidad de los productos terminados en
diferentes procesos industriales.

2. FUNDAMENTACIN TERICA:
El medio de cultivo est formado por cuatro elementos : La naturaleza del
sustrato, las condiciones fsico-qumicas y fisiolgicas del medio, la naturaleza y
composicin ambiental area y las condiciones de incubacin, incluyendo
humedad y temperatura.
Existen diferentes tipos de siembra de microorganismos, las cuales dependen
muchas veces de diferentes caractersticas de los medios de cultivo de tal forma
que permitan el crecimiento ptimo de las clulas.

3. OBJETIVOS:
3.1 Generales:

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Descubrir el mundo microbiano que existe en nosotros de forma natural y poder

realizar identificacin de algunos que pueden causar efectos nocivos.
3.2 Especficos:
- Conocer las diversas reacciones bioqumicas que ms se trabajan en el
laboratorio de Microbiologa para identificar Enterobacterias
- Conocer el sistema antiguo para tal diferenciacin y conocer algunos
mtodos que la nueva tecnologa nos presenta para facilitar el trabajo de
identificacin
- Analizar diferentes reacciones que se pueden observar para determinar la
accin de diferentes enzimas de algunas bacterias.
- Demostrar la presencia de algunos microorganismos en diferentes partes del
cuerpo como flora normal.
- Analizar y comparar el tipo de microorganismos hallados en variados puntos
del cuerpo humano.
- Aprender a tomar muestras de diferentes sitios del cuerpo para anlisis
microbiolgico.

4. MATERIALES Y REACTIVOS:
Autoclave
Microscopio
Incubadora
Mechero

MATERIALES
Asas Bacteriolgicas
Bajalenguas estriles
Hisopos Escobillones estriles
Lminas o portaobjetos

REACTIVOS
Violeta de Gram
Agar Sangre en cajas de petri
Lugol de Gram
Agar Chocolate en cajas de petri
Alcohol Acetona ( 3:1 )
Caldo Tioglicolato en tubo
Fucsina de Gram
Caldo Nutritivo en tubo
Aceite de Inmersin
Agar Citrato inclinado en tubo
Agar TSI inclinado en tubo
Caldo RMVP en tubo
Agar LIA inclinado en tubo
Medio Gelatina en tubo
Medio SIM en tubo
Agar Urea inclinado en tubo
Tubos con Escherichia coli
Tubos con Staphylococcus aureus
Tubos con Klebsiella pneumoniae
Tubos con Enterobacteria
5. PRECAUCIONES:

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Se deben cumplir las normas de ingreso y trabajo en el laboratorio

Todo el material a trabajar o a incubar debe estar debidamente marcado

en el momento de realizar los procesos del laboratorio

Se debe trabajar cerca al mechero siguiendo las instrucciones

Utilizar todos los elementos de proteccin

Tener cuidado en el manejo de los microorganismos ya que pueden llegar a

causar infecciones oportunistas

6. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:

REACCIONES BIOQUMICAS
A partir del cultivo original sembrar as :
Por puncin en SIM y GELATINA
Por puncin y espiral en TSI, CITRATO, UREA
Con asa redonda en RMVP
Prueba Coagulasa
1. En Tubo: A partir del cultivo marcado con Staphylococcus aureus, sembrar con
asa redonda en plasma, e incubar por 2 horas. Observar formacin de cogulo
2. En Lmina: A una lmina limpia adicionar una gota de plasma estril, con un
asa redonda tomar un inculo de la cepa indicada, mezclar y observar formacin
de grumos.
FLORA NORMAL

Toma de Muestra de Boca, Encas y Dientes :

1. BOCA :

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Con aplicadores estriles tomar muestras de las encas, de los surcos a los lados
de los dientes. Sembrar en Agar Sangre una parte masiva para realizar
aislamiento, y en tioglicolato.
Con otro aplicador tomar la muestra del mismo lugar, realizar frotis y colorear
con Gram.

2. DIENTES :
Tomar las muestras de la caries, si hay, desinfectando previamente la zona
expuesta a la contaminacin con la saliva. Sembrar en Agar Sangre y en
tioglicolato.
Con otro hisopo o aplicador tomar nueva muestra y hacer frotis en lmina.
Colorear con Gram.
Llevar a incubar a 37 grados Centgrados por 24 horas y realizar lmina del
crecimiento obtenido.
Observar los frotis directos.

Toma de Muestra de Secreciones Amigdalina y Farngea :

Cuando hay exudados inflamatorios, se toma la muestra con un hisopo.
La muestra no debe ser superficial sino que debe procurarse obtenerla de los
tejidos infectados.
Introducir un aplicador en la cavidad bucal evitando contaminacin con saliva y
flora normal de la mucosa. Se debe realizar con buena iluminacin para no tocar
ms que la parte inflamada.
Sembrar en Agar Sangre ( por aislamiento ) e introducir en tioglicolato.
Con otro aplicador realizar frotis directo y colorear con Gram.
Incubar 24 horas a 37 grados Centgrados y observar presentia y tipo de
hemlisis.
Observar el frotis directo y anotar los microorganismos encontrados.

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Observar los cultivos, con anlisis macroscpico, y realizar frotis, para anlisis
microscpico.

Toma de muestra de Oidos, Ojos y Nariz :

Se realiza el mismo procedimiento que en los anteriores, teniendo cuidado al
introducir los aplicadores de no lastimar los conductos nasales o del oido
evitando ralladuras taponamientos. No introducir demasiado el hisopo dentro
del oido.
Realizar tambin anlisis microscpico y macroscpico.
Para muestra de ojos, bajar el prpado inferior y tomar la muestra suavemente
con hisopo estril.

7. INVESTIGUE:
1. Composicin y tipos de reacciones que se presentan en cada medio a
trabajar
2. Cual es la enzima que peptoniza la leche ?
3. Qu son exoenzimas y endoenzimas ?
4. La amilasa, la coagulasa y enzimas proteolticas son exoenzimas o
endoenzimas
5. Cual es el objetivo de determinar el tipode flora presente en un rea del
cuerpo ?
6. Porqu es tan importante dar un diagnstico rpido en caso de
sospecha de difteria?
7. Cuales son los microorganismos que se encuentran normalmente en la
faringe, oido, ojos, nariz y boca ?
8. Qu coloracin se utiliza para el frotis en caso de averiguar si hay
presencia o no del bacilo diftrico ?