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RESUMEN
Fitzroya cupressoides (alerce) es una confera endmica de Sudamrica austral cuya madera ostenta
atributos de belleza y durabilidad. El presente estudio evalu el efecto de componentes hormonales
suplementado con medios de cultivo sobre la capacidad organognica de Fitzroya cupressoides, y se
analiz el proceso de regeneracin in vitro mediante estudios histolgicos. Se ensay el medio de cultivo
bsico Quorin y Lepoivre (QL) suplementado con diferentes concentraciones de cido indol 3-butrico
(AIB), 6-bencilaminopurina (BAP) y cido 2,4-diclorofenoxiactico (2,4-D) utilizando segmentos nodales y
hojas aciculares. Se utiliz un diseo completamente al azar con cinco repeticiones balanceado; la unidad
experimental fue un frasco de vidrio conteniendo un explante, y la induccin de callognesis correspondi
a una placa petri con cuatro explantes foliares. Hubo efectos significativos (P = 0.001) del tratamiento
sobre las variables respuesta nmero de brotes y elongacin caulinar. La prueba de rangos mltiples
de Duncan confirm que los tratamientos que observaron diferencias significativas fueron 0.1 mgL-1 de
AIB y 1.5 mgL-1 de BAP para nmero de brotes por explante y 0.1 mgL-1 AIB y 1.0 mgL-1 de BAP para
la elongacin caulinar. El anlisis histolgico demostr la proliferacin de estructuras meristemticas a
partir de tejido subepidrmico.
PALABRAS CLAVE:
2,4-diclorofenoxiactico,
callognesis, segmentos nodales,
propagacin in vitro.
ABSTRACT
Fitzroya cupressoides, commonly known as Alerce in South American Spanish, is a conifer species
native to southern South America, where its wood is highly prized for its beauty and durability. This study
evaluated the effect of hormonal components supplemented with culture media on the organogenic
process of Fitzroya cupressoides and analyzed the in vitro regeneration process by histological studies.
The Quorin-Lepoivre (QL) basic culture medium, supplemented with different concentrations of indole
3-butyric acid (IBA), 6-benzylaminopurine (BA) and 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D), was tested using
nodal segments and acicular leaves. A completely randomized design with five balanced replications was
used; the experimental unit was a glass jar containing an explant, while a petri dish containing four foliar
explants was used for inducing callogenesis. The treatment factor had significant (P = 0.001) effects on
the response variables number of shoots and caulinary elongation. Duncans multiple range test confirmed
that the treatments that had significant differences were 0.1 mg.L-1 of IBA and 1.5 mg.L-1 of BA for number
of shoots per explant and 0.1 mg.L-1 IBA and 1.0 mg.L-1 of BA for caulinary elongation. Histological studies
demonstrated the proliferation of meristematic structures from sub-epidermal tissue.
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KEY WORDS:
2,4-dichlorophenoxyacetic acid
(2,4-D), callogenesis, nodal
segments, in vitro propagation.
Potencial de la organognesis...
INTRODUCCIN
INTRODUCTION
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Revista Chapingo Serie Ciencias Forestales y del Ambiente 17(3): 423-433, 2011.
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Potencial de la organognesis...
Organognesis indirecta
AIB/BAP/2,4-D mgL-1
T1
0,1/1,0
0,0/0,0/2,0
T2
0,1/1,5
0,0/0,0/2,5
T3
0,5/2,0
0,0/0,0/3,0
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FIGURA 1.- Micropropagacin de segmentos nodales e induccin de callognesis en hojas aciculares de Fitzroya
cupressoides despus de 90 das de cultivo. A)
microtallos despus de 90 das del establecimiento.
B) Brotes escindidos del explante inicial listos para
ser transferidos a un medio de cultivo fresco. C)
Puntos de crecimiento que darn origen a brotes. D)
Hojas con protuberancias formados en la regin de
las heridas (15 das de cultivo). E) Hojas exhibiendo
callos de aspecto heterogneo. F) Hojas en medio
nutritivo QL suplementado con 2,4-D (3,0 mgL-1),
ntese las caractersticas que exhibieron apropiadas
para estudios subsecuentes.
FIGURE 1.-Microprogation of nodal segments and
callogenesis induction in acicular leaves of
Fitzroya cupressoides after 90 days of culture. A)
Microshoots at 90 days after the micropropagation
process began. B) Shoots excised from the
initial explant that presented adequate morphophysiological attributes to be transferred to a fresh
culture medium. C) Growth points that will lead
to shoots. D) Leaves with protuberances in the
wound area (15 days of culture). E) Leaves showing
callus with heterogeneous aspect. F) Leaves in QL
nutrient solution supplemented with 2,4-D (3,0 mg.L1
); note that the features exhibited are suitable for
subsequent studies.
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Potencial de la organognesis...
Modelo de
desarrollo
morfognico
Organognesis
directa
Organognesis
indirecta
Variables
Factor de
estudio
AIB/BAP/2,4-D
(mgL-1)
Media S
Nmero de
brotes
0,1/1,0
0,1/1,5
0,5/2,0
1 0,6 b
5 1,0 a
3 0,6 b
Elongacin
caulinar
(mm)
0,1/1,0
0,1/1,5
0,5/2,0
18 1,0 a
86b
6 1,0 b
Dimetro de
callo (mm)
0,0/0,0/2,0
0,0/0,0/2,5
0,0/0,0/3,0
64a
53a
97b
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CONCLUSIONES
El cultivo in vitro de tejidos vegetales a partir de
segmentos nodales escindidos de plntulas de Fitzroya
cupressoides, es factible en las fases de proliferacin y
elongacin caulinar. Asimismo, se evidenci la viabilidad
del xito en la induccin de callognesis a partir de hojas
aciculares. Consecuentemente, este estudio pionero en
implicar a esta especie demostr el potencial de esta
herramienta biotecnolgica como una alternativa viable
para el rescate, conservacin y masificacin in vitro de
Fitzroya cupressoides. No obstante, se requiere optimizar
el proceso mediante la realizacin de otros estudios.
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AGRADECIMIENTOS
Al Programa Internacional de Becas del International
Fellowships Fund (IFF) de la Fundacin Ford, por la
beca otorgada al primer autor para realizar estudios de
doctorado en la Universidad Austral de Chile. A la Escuela
de Graduados de la Facultad de Ciencias Forestales y
Recursos Naturales, por el financiamiento parcial otorgado
para la adquisicin de productos qumicos en la fase
experimental. Al personal investigador de GenFor, S. A.,
por las facilidades, comentarios y sugerencias durante el
desarrollo de la fase experimental.
LITERATURA CITADA
Alvarado, Y. (1998). Contaminacin microbiana en el cultivo in vitro de
plantas. In: Propagacin y mejora gentica de plantas
por biotecnologa. Prez, J. N. (edit.). Cuba. Instituto de
Biotecnologa de las Plantas.
Caboni, E. M., Tonelli, P., Lauri, S. D., & Damiano, C. (1999). In vitro shoot
regeneration from leaves of wild pear. Plant Cell, Tissue and
Organ Cult. 59,1-7.
Caboni, E. M., Lauri, S., Tonelli, P., Falasca, G., & Damiano, C. (1996).
Root induction by Agrobacterium rhizogenes in walnut. Plant
Sci. 208,118-203.
Cassells, A. C. (1991). Problems in tissue culture: culture contamination.
In: Micropropagation. Edited by Debergh and Zimmerman.
Netherlands. Dordrecht, The Netherland. Kluwer Academic
Publisher.
Conde, P., Loureiro, J., & Santos, C. (2004). Somatic embryogenesis and
plant regeneration from leaves of Ulmus minor Mill. Plant
Cell 22,632-639.
Currey, D. R. (1965). An ancient bristlecone pine stand in Eastern Nevada.
Ecology 46,564-566.
Donoso, C. (1981). Investigacin y desarrollo forestal. Tipos forestales
de los bosques nativos de Chile. Documento de trabajo 38.
Santiago, Chile. Corporacin Nacional Forestal.
Donoso, C., Cortes, M., & Escobar, B. (1993). Efecto del rbol semillero y
la poca de cosecha de semillas en la capacidad germinativa
en vivero de Fitzroya cupressoides. Bosque 14(1),63-71.
Donoso, C., Lara, A., Escobar, B., Premoli, A., & Souto, C. (2006).
Autoecologa de las especies conferas Chilenas. Fitzroya
cupressoides (Molina) I. M. Johnst. In: Las especies
arbreas de los bosques templados de Chile y Argentina.
Autoecologa. Ed. Donoso, C. Valdivia, Chile. Ediciones
Marisa Cuneo.
Edwald, D. (1998). Advances in tisuee culture of adult larch. In Vitro Cell.
Dev. Biol. Plant. 34(4),325-330.
Fraga, M., Canal, M., & Rodriguez, R. (2002). In vitro morphogenic
potential of differently aged Pinus radiata D. Don trees
correlates with polyamines and DNA methylation levels.
Plant Cell, Tissue and Organ Cult 70 (2),139-145.
George, E. (1993). Plant propagation by tissue culture. Exegetics.
Grosfeld, J., & Barthlemy, D. (2001). Dioecy in Fitzroya cupressoides
(Molina) I.M. Johnst. and Pilgerodendron uviferum (D.Don.)
Florin (cupressoides). Life Sciences 324,245-250.
Kitzberger, T., Prez, A., Iglesias, G., Premoli, A., & Veblen, T. T. (2000).
Distribucin y estado de conservacin de Alerce (Fitzroya
cupressoides Mol) Johnst en Argentina. Bosque 21(1),79-89.
432
Revista Chapingo Serie Ciencias Forestales y del Ambiente 17(3): 423-433, 2011.
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