UNIVERSIDADE DE SO PAULO

ESCOLA DE ENGENHARIA DE SO CARLOS

DEPARTAMENTO DE HIDRULICA E SANEAMENTO
CENTRO DE RECURSOS HDRICO E ECOLOGIA APLICADA
PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM CINCIAS DA ENGENHARIA AMBIENTAL

GUILHERME CASONI DA ROCHA

AVALIAO DA ATIVIDADE ESTROGNICA DAS GUAS DO RIO PARABA DO SUL

So Carlos
2012

GUILHERME CASONI DA ROCHA

AVALIAO DA ATIVIDADE ESTROGNICA DAS GUAS DO RIO PARABA DO SUL

Tese

apresentada

Engenharia

de

Escola

de

So

Carlos,

da

Universidade de So Paulo para

obteno do ttulo de Doutor em
Cincias da Engenharia Ambiental
Orientadora: Profa. Dra. Eny Maria
Vieira

So Carlos
2012

Autorizo a reproduo total ou parcial deste trabalho, por qualquer meio

convencional ou eletrnico, para fins de estudo e pesquisa, desde que
citada a fonte.

ROCHA, G. C. AVALIAO DA ATIVIDADE ESTROGNICA DAS GUAS DO RIO

PARABA

DO

SUL. Tese apresentada Escola de Engenharia de So

Carlos, da Universidade de So Paulo para obteno do ttulo de Doutor

em Cincias da Engenharia Ambiental

Dedico aos meus pais, Ivete e Jos por tudo o

que fizeram por mim at hoje e por serem
responsveis pela minha formao, aos meus
irmos Gustavo e Mariana, minha av
Maria, ao meu av Elvino (in memoriam), aos
meus avs Joo e Ana Auta, minha grande
namorada Paulinha por todo o apoio,
pacincia, companheirismo e carinho e ao
amigo Ozzy.

AGRADECIMENTOS
Dra. Eny Maria Vieira, pela oportunidade, orientao, pacincia e dedicao.
amiga Daniela Cordeiro por toda a ajuda com as anlises de gua.
amiga Luciana Teresa Dias Cappelini pelas analises cromatogrficas.
Ao amigo Egberto da Fonseca Casazza pela ajuda no desenvolvimento dos mapas.
Renata Pereira pela amizade e horas e horas de laboratrio.
Ao amigo Raphael Teixeira Verbinnen pela ajuda no laboratrio.
Ao amigo Dr. Ricardo Luvizotto Santos pela grande colaborao.
Dra. Adriana S. Marcantonio pelo auxlio na conduo do experimento no
Laboratrio Experimental do Setor de Aquicultura do Polo Regional do Vale do
Paraba.
Dra. Katia Cristina Barbaro e Dra. Claudia Maris Ferreira Mostrio, por todo o
ensinamento, desde a iniciao cientfica.
Aos amigos da Rep. Morada do Escorpio: Ubarana, Maranho, Claudinei, Marcio,
Kenji, Yuri, Ricardo, Mateus...
A todos aqueles que de alguma forma colaboraram para a realizao deste trabalho.
Ao Instituto de Qumica de So Carlos da Universidade de So Paulo pelo auxlio e
colaborao.
Ao Polo Regional do Vale do Paraba pelo auxlio e colaborao.
Ao Programa de Ps-Graduao em Cincias da Engenharia Ambiental pela
oportunidade.
Fundao de Amparo Pesquisa (FAPESP) pela concesso da bolsa de
doutorado e pelo auxilio financeiro.
Ao CNPq pela concesso da bolsa de doutorado.

RESUMO

ROCHA, G. C. Avaliao da Atividade Estrognica das guas do Rio Paraba do

Sul. 2012. 173f. Tese (Doutorado em Cincias da Engenharia Ambiental) Escola
de Engenharia de So Carlos, Universidade de So Paulo, So Carlos, 2012.

A poluio da gua doce no estado de So Paulo ocorre por diversas causas. Entre
elas est a ineficincia do servio de tratamento de esgoto sanitrio. Alguns
componentes do esgoto sanitrio so desreguladores endcrinos, entre eles esto
os hormnios naturais e sintticos excretados pelos seres humanos. Estas
substncias causam modificaes no sistema reprodutivo como, por exemplo,
cncer, feminizao, alteraes na transcrio gentica, alterao nas gnadas,
induo sntese de vitelogenina, entre outros. O objetivo desse trabalho foi testar a
atividade endcrina das guas do rio Paraba do Sul, em Pindamonhangaba, SP.
Para tanto, amostras de gua do rio foram utilizadas para a quantificao dos
hormnios, 17-etinilestradiol, 17-estradiol e levonorgestrel por meio da tcnica de
cromatografia lquida de alta eficincia (HPLC). Alm disso, foram realizados testes
crnicos com peixes (Danio rerio) no interior do rio e em laboratrio, e uma posterior
quantificao de vitelogenina. Os resultados no indicaram concentraes
detectveis dos hormnios pelo mtodo empregado. Entretanto, foi detectada a
induo de vitelogenina nos machos de Danio rerio. Esse fato indica a atividade
estrognica da gua utilizada. So necessrios outros estudos para a avaliao de
quais substncias presentes na gua, esto causando as alteraes endcrinas nos
peixes, entre eles a utilizao de ndices para priorizar o local inicial dessas
pesquisas. Esses estudos so importantes para a conservao da biodiversidade
aqutica do rio Paraba do Sul.
Palavras-chave: Danio rerio. 17-etinilestradiol. 17-estradiol. Levonorgestrel.
Vitelogenina.

ABSTRACT

ROCHA, G. C. Evaluation of estrogenic activity in water samples from Paraiba

do Sul River. 2012. 173f. Tese (Doutorado em Cincias da Engenharia Ambiental)
Escola de Engenharia de So Carlos, Universidade de So Paulo, So Carlos, 2012.

Freshwater pollution in So Paulo state, Brazil, occurs due a several reasons.

Among them there is the inefficiency of the sewage treatment service. Some sewage
components are endocrine disrupters, including natural and synthetic hormones
excreted by humans. These substances cause modification on reproductive system
such as cancer, feminization, gene transcription and gonad alterations, vitellogenin
synthesis induction, among others. The aim of this work was to evaluate the
endocrine activity of the river Paraba do Sul, at Pindamonhangaba city, Brazil. For
this, river water samples were collected for the quantification of the hormones, 17etinylestradiol, 17-estradiol and levonorgestrel by high performance liquid
chromatography (HPLC). Furthermore, chronic assays were performed with fish
(Danio rerio) into the river and in the laboratory, following quantification of biomarker
vitellogenin. The studied hormones were not detected by employed methods.
However, induction of vitellogenin in male of Danio rerio was detected indicating
estrogenic activity of water. Further studies are necessary for the assessment of
which substances into the water are causing the endocrine disruption in fish. These
studies are important for the preservation of aquatic biodiversity of the Paraiba do Sul
River.

Keywords:

Danio

rerio.

Hormone,

17-ethinylestradiol.

17-estradiol.

Levonorgestrel. Vitellogenin.

SUMRIO
1

INTRODUO................................................................................... 1

OBJETIVOS....................................................................................... 2

REVISO DA LITERATURA.............................................................

3.1

Poluio.............................................................................................

3.2

Contaminantes emergentes............................................................... 9

3.2.1

Desreguladores endcrinos............................................................... 10

3.3

Estudos com desreguladores endcrinos em ambientes aquticos.. 13

3.4

Hormnios sintticos e naturais e sua ocorrncia em ambientes

aquticos...........................................................................................

3.4.1

14

Origem dos principais hormnios e naturais sintticos que ocorrem

em ambientes aquticos.................................................................... 15

3.5

Organismos teste e biomarcadores de desreguladores endcrinos.

19

3.5.1

Vitelogenina.......................................................................................

20

3.6

Efeitos dos desreguladores endcrinos nos organismos vivos.........

21

3.7

Conservao da biodiversidade em guas continentais...................

26

3.8

reas crticas.....................................................................................

28

3.8.1

Mapeamento...................................................................................... 28

3.8.2

reas potencialmente crticas no Brasil............................................. 29

MATERIAIS E MTODOS................................................................. 35

4.1

Validao de mtodo para a quantificao dos hormnios

sintticos 17-etinilestradiol e levonorgestrel e do hormnio natural
17-estradiol utilizando-se cromatografia liquida de alta eficincia
(HPLC)............................................................................................... 35

4.1.1

Condies cromatogrficas para a determinao dos hormnios

em estudo.........................................................................................

35

4.1.2.

Validao do mtodo para determinao dos hormnios em estudo 36

4.2

Identificao e quantificao dos hormnios sintticos 17etinilestradiol e levonorgestrel e do hormnio natural 17-estradiol
e de amostras do rio Paraba do Sul.................................................

38

4.3

Coleta das amostras de gua no rio Paraba do Sul.........................

40

4.4

Testes com Danio rerio...................................................................... 45

4.4.1

Aclimatao dos exemplares de Danio rerio utilizados nos testes

com gua do rio Paraba do Sul........................................................

4.4.2

45

Teste crnico in situ com Danio rerio em tanques rede mantidos no

rio Paraba do Sul..............................................................................

45

4.4.3

Teste crnico ex situ com Danio rerio...............................................

46

4.5

Determinao da concentrao de vitelogenina em peixes..............

49

4.6

Estudo de dados referentes potencial contaminao de gua

com desreguladores endcrinos de 12 municpios localizados na
bacia do rio Paraba do Sul...............................................................

52

4.6.1

ndice de Prioridade dos Municpios IPM.......................................

56

RESULTADOS E DISCUSSO......................................................... 60

5.1

Validao de mtodo analtico para a quantificao dos hormnios

sintticos 17-etinilestradiol e levonorgestrel e do hormnio natural
17-estradiol utilizando-se cromatografia liquida de alta eficincia
(HPLC)............................................................................................... 60

5.2

Identificao e quantificao dos hormnios sintticos 17etinilestradiol e levonorgestrel e do hormnio natural 17-estradiol
e de amostras do rio Paraba do Sul atravs de anlise
cromatogrfica...................................................................................

72

5.2.1

Levonorgestrel...................................................................................

72

5.2.2

17-estradiol......................................................................................

78

5.2.3

17-etinilestradiol............................................................................... 82

5.3

Testes com Danio rerio...................................................................... 88

5.3.1

Aclimatao dos exemplares de Danio rerio utilizados nos testes

com gua do rio Paraba do Sul........................................................

88

5.3.2

Teste crnico ex situ com espcie de peixe Danio rerio...................

89

5.3.3

Teste crnico in situ com Danio rerio em tanques rede mantidos no

rio Paraba do Sul..............................................................................

5.3.4

94

Determinao da concentrao da vitelogenina em Danio rerio

utilizados nos testes crnicos ex situ e in situ...................................

96

5.3.5

Comparao dos testes in situ e testes ex situ.................................

125

5.4

Estudo de dados referentes potencial contaminao de gua

com desreguladores endcrinos de 12 municpios localizados na
bacia do rio Paraba do Sul...............................................................

127
10

5.4.1

Qualidade de gua............................................................................

5.4.2

Populao total, Razo de Sexos e Taxa Geomtrica de

128

Crescimento Anual da Populao.....................................................

135

5.4.3

Produo Pecuria (bovinos, sunos e ovinos)................................

137

5.5

ndice de Prioridade dos Municpios IPM......................................

145

CONCLUSES.................................................................................. 149
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS 151

11

1 INTRODUO

Os seres humanos so expostos a milhares de produtos qumicos ao

longo de sua vida. Esse contato se d em geral atravs do ar, gua e alimentos.
Muitos desses compostos podem ser txicos e ter como efeito a alterao do
sistema endcrino (SCHUG et al., 2011).
Destaca-se a importncia da obteno do conhecimento com relao aos
efeitos causados por substncias que possuem atividade estrognica e so
constantemente utilizadas e lanadas ao ambiente atravs do esgotamento dos
efluentes de atividades antrpicas, como o caso dos hormnios naturais e
sintticos. Com isso pretende-se indicar efeitos provocados por substncias
desreguladoras endcrinas na fauna aqutica e assim, contribuir com
informaes que permitam identificar o problema.
De acordo com a prpria legislao brasileira, Resoluo CONAMA 357,
em seu captulo IV inciso 1: O efluente no dever causar ou possuir potencial
para causar efeitos txicos aos organismos aquticos no corpo receptor, de
acordo com os critrios de toxicidade estabelecidos pelo rgo ambiental
competente (BRASIL, 2005). Alm dos possveis riscos sade da populao,
outros problemas podem ser detectados em relao aos estoques naturais de
peixes, devido ao processo de feminizao, que pode existir em locais
contaminados.
O Brasil tem a obrigao de cumprir as metas propostas pela Conveno
sobre Diversidade Biolgica (UICN; WWF-BRASIL; IP, 2011). Portanto aes
para que a Meta 08 (controle de poluio das guas) se concretize devem ser
tomadas, dentre as quais o monitoramento dos cursos dgua.
O desenvolvimento econmico do Brasil proporciona uma condio
semelhante encontrada em pases ricos, a grande gerao de efluentes
oriundos de aes antrpicas. Entretanto, h uma diferena importantssima
entre as duas situaes, enquanto em pases desenvolvidos esse efluente
devidamente tratado, no Brasil no ocorre o mesmo (LEUSCH et al., 2006). Por
este motivo h uma grande contaminao de nossos corpos dgua com

1 1

poluentes, muitos deles possuidores de ao endcrina mesmo que em

pequenas quantidades.
Quando se analisa essa situao, e se avaliam regies com grande
concentrao

populacional,

conseqentemente

tem-se

presena

de

hormnios, como o potente e mais abundante estrognio de ocorrncia natural

nos seres humanos, o17-estradiol. Da mesma forma, devido aos mtodos
anticoncepcionais utilizados em larga escala pela populao feminina, h a
contaminao dos efluentes sanitrios pelos estrognios sintticos como, por
exemplo, um dos mais consumidos, o 17-etinilestradiol (em muitos casos
associado ao levonorgestrel), que produzido a partir do 17-estradiol, este
hormnio tambm utilizado em terapias de reposio hormonal (KHANAL et
al., 2006).
Devido a essa contaminao contnua dos efluentes sanitrios por
hormnios sintticos e naturais, associado aos baixos ndices de tratamento,
necessrio que existam estudos referentes situao (qualidade) das guas dos
rios onde esses contaminantes so despejados, como o caso do rio Paraba
do Sul. At mesmo porque, a exposio da populao humana a essas
substncias pode estar relacionada ao aumento dos casos de diversos
problemas de sade publica tais como, sndrome de disfuno testicular, cncer
nos testculos, criptorquidia, hipospadia, entre outros (SHARPE; IRVINE, 2004;
SAFE,

2004,

SLOWIKOWSKA-HILCZER,

2006).

municpio

de

Pindamonhangaba localiza-se jusante de 3 municpios com populaes

expressivas (comparadas aos outros municpios do Vale do Paraba), Jacare,
Taubat e principalmente So Jos dos Campos, sendo um local estratgico
para se avaliar os efeitos causados pela poluio montante, gerada pelo
efluente sanitrio lanado no rio Paraba do Sul e seus afluentes.

2. OBJETIVOS

2.1 Objetivo Geral

O presente estudo tem como objetivo avaliar a atividade estrognica das

guas do rio Paraba do Sul em dois trechos localizados no municpio de
Pindamonhangaba, Estado de So Paulo.

2.2 Objetivos especficos

Validar mtodo para a quantificao dos hormnios sintticos 17-etinilestradiol

e levonorgestrel e do hormnio natural 17-estradiol;

Identificar

quantificar

os

hormnios

sintticos

17-etinilestradiol

levonorgestrel e o hormnio natural 17-estradiol em amostras de gua do rio

Paraba do Sul;

Realizar teste crnico com Danio rerio em tanques rede mantidos no rio Paraba
do Sul;

Realizar teste crnico com peixe Danio rerio, em laboratrio com a utilizao de
amostras de gua do rio Paraba do Sul;

Quantificao da protena vitelogenina (VTG) nos peixes da espcie Danio rerio;

Estudo de dados referentes potencial contaminao de gua com

desreguladores endcrinos de 12 municpios localizados na bacia do rio Paraba
do Sul

3
3

3 REVISO DA LITERATURA

3.1 Poluio

A urbanizao em grande escala, em conjunto com o grande nmero de

cidades, principalmente em pases em desenvolvimento econmico, traz em
muitos casos, um desenvolvimento no ordenado dessas comunidades e
conseqentemente, a elevao do risco sade de seus habitantes (GRAHAM
et al., 2004). O crescimento no ordenado das cidades causa a elas grandes
problemas decorrentes da falta de planejamento, essas dificuldades so de
ordem administrativa e financeira. A adequao de servios essenciais como,
por exemplo, saneamento bsico, distribuio de gua, coleta e destinao do
lixo, sade, moradia, entre outros, feita de maneira pontual, o que eleva os
riscos de problemas populao e ao meio ambiente (GOUVEIA, 1999).
Entre as conseqncias da falta ou ineficincia dos servios bsicos
anteriormente citados, destaca-se a poluio dos diversos ambientes, aqutico,
terrestre e areo.
De acordo com o regulamento da Lei Estadual 997, de 31 de maio de
1976 (SO PAULO, 1976), que dispe sobre a preveno e o controle da
poluio do meio ambiente no Estado de So Paulo, considera-se poluente toda
e qualquer forma de matria ou energia lanada ou liberada nas guas, no ar e
no solo:
I - com intensidade, em quantidade e concentrao, em desacordo com os
padres de emisso estabelecidos neste Regulamento e normas dele
decorrentes;
II - com caractersticas e condies de lanamento ou liberao, em desacordo
com os padres de condicionamento e projeto estabelecidos nas mesmas
prescries;

III - por fontes de poluio com caractersticas de localizao e utilizao em

desacordo com os referidos padres de condicionamento e projeto;
IV - com intensidade, em quantidade e de concentrao ou com caractersticas
que, direta ou indiretamente tornem ou possam tornar ultrapassveis os padres
de qualidade do Meio Ambiente estabelecidos neste Regulamento e normas dele
decorrentes;
V - que, independente de estarem enquadrados nos incisos anteriores, tornem
ou possam tornar as guas, o ar ou o solo imprprios, nocivos ou ofensivos
sade, inconvenientes ao bem-estar pblico; danosos aos materiais, fauna e
flora; prejudiciais segurana, ao uso e gozo da propriedade, bem como s
atividades normais da comunidade (CETESB, 2000).

Poluio do ar

Segundo Sewell (1978), a poluio do ar pode ser definida como a

presena de diversos materiais estranhos no ar atmosfrico. O ar considerado
normal tem que possuir, em sua composio, mais de 99,99% de nitrognio
(aprox. 78,09%), oxignio (aprox. 20,94%), argnio (aprox. 0,95%) e dixido de
carbono (aprox. 0,03%), alm de outros diversos componentes que se
encontram em quantidades baixssimas, excetuando-se esses componentes, a
presena de outros compostos considerada poluio. Entretanto, o ar
normalmente encontrado em centros urbanos contaminado por outros
elementos, por exemplo, monxido de carbono, dixido de enxofre e metano,
muitas vezes em quantidades excessivas. As principais fontes de poluio do ar
so as indstrias e os automveis, essa contribuio vem com a volatilizao de
alguns metais pesados dos combustveis (FULGNCIO, 2007)
A via de absoro dos poluentes presentes no ar a que leva o poluente
mais rpido corrente sangunea dos humanos. De acordo com Wang et al.
(2003a), a queima de combustveis fsseis, como j comprovado, libera no ar

5 5

substncias que possuem atividade estrognica (fenis), alm disso, podem agir
negativamente sobre a atividade da progesterona (WANG et al., 2005a). Os
contaminantes presentes no ar podem chegar, por deriva, ao solo e aos recursos
hdricos.
A poluio do solo
De acordo com Snchez (1998), existem vrios termos utilizados como
sinnimo de rea contaminada como, por exemplo, terreno contaminado, solo
contaminado ou mesmo solo poludo. A definio de rea contaminada segundo
Van Dyck (1995) a de um local onde, como resultado de atividades antrpicas,
encontram-se resduos ou onde a poluio do solo ocorre ou ir ocorrer.
A contaminao do solo pode ter como origem a poluio difusa ou por
deposio atmosfrica (HANN, 2007; GIROTTO et al., 2007). A forma mais
comum de contaminao ao homem a ingesto de alimento contaminado
(REYS, 2001; AMARAL MENDES, 2002).
A contaminao pode ser atribuda bioacumulao nos animais criados
com a finalidade de alimentao. Esses animais recebem hormnios sintticos
para estimular o crescimento que podem ficar acumulados e atingir o homem,
alm disso, so eliminados no solo contaminando o mesmo (SHARPE, 2003). A
presena de hormnios provenientes de sunos e de bovinos descrita por
Lange et al. (2002), e a concentrao de hormnios da ordem de 2300 g/dia
e 540 g/dia, respectivamente. Ainda destaca-se o fato de que muitas vezes
esses dejetos com a presena de hormnios e outras substncias serem
utilizados como adubo na agricultura.
So muitos os problemas causados por reas contaminadas e Snchez
(1998) indica quatro principais: risco segurana da populao ou das
propriedades; riscos sade pblica e dos ecossistemas; impedimento do
desenvolvimento urbano e a reduo do valor imobilirio de propriedades.
Sabe-se que uma vez o poluente estando presente no solo o destino final
poder ser os recursos hdricos e os organismos aquticos.

Poluio da gua

Geralmente a poluio da gua ocorre por meio da incluso de

substncias ou formas de energia que alteram as caractersticas fsico-qumicas
do corpo dgua de modo a limitar o seu uso. A poluio que ocorre em corpos
dgua pode ter origem em diversos tipos de fontes: atmosfricas, pontuais,
difusas e mistas (TUCCI, 1998).
As fontes pontuais, identificveis no espao e no tempo, de poluio so
caracterizadas pela forma concentrada que os contaminantes atingem o corpo
dgua, enquanto a difusa indica a chegada da poluio ao longo da extenso do
corpo dgua (VON SPERLING, 2005 e MAURCIO, 2008).
Segundo Tucci (1998), os diversos poluentes apresentam caractersticas
distintas, com diferentes graus de poluio, conforme destacado na Tabela 1.
Tabela 1 - Caractersticas das fontes de poluio
Fontes

Atmosfera
Fontes Pontuais
Esgoto domstico
Esgoto industrial
Fontes Difusas
Agrcolas

Dragagem
Navegao e Portos
Fontes Mistas
Escoamento Urbano e
depsitos de lixo
Depsitos de cargas
industriais

Nutrientes

Pesticidas
/Herbicidas

3-G

3
1

2
1

3
1
1

3-G
2

2
1

Bactria

MIcropoluentes
Orgnicos
Industriais

leos/
Graxas

3-G
3
3-G

3
1

1
3

(1) Fonte de significncia local; (2) de moderada significncia local/regional; (3) de significncia
regional; (G) de significncia global. Fonte: Tucci (1998)

Outra definio utilizada a de que a poluio das guas acontecer

quando atingirem a elas, substncias que de algum modo possam causar algum
tipo de risco, segundo Fiorillo (2007), a poluio da gua depende do
lanamento, descarga ou emisso de substncias em qualquer estado qumico,

7 7

de forma a comprometer, direta ou indiretamente, as propriedades naturais da

gua.
Quando a matriz poluda gua superficial, Dersio (2007) as classifica
em cinco tipos:
Poluio natural: no causada por atividades humanas, e sim por chuvas,
salinizao, decomposio de matria orgnica.
Poluio industrial: resultante dos processos industriais podem ser lquido,
gases ou slidos.
Poluio urbana: advinda do esgoto sanitrio
Poluio agropastoril: tem origem na aplicao de defensivos agrcolas e
fertilizantes, excrementos animais e eroso.
Poluio acidental: decorrentes de derramamentos acidentais de substncias
qumicas.
Ocorre tambm, a classificao da poluio da gua como sendo poluio
difusa, as do tipo natural e agropastoril, e como poluio concentrada a
industrial, urbana e acidental. A poluio urbana pode ser considerada tambm
como difusa por considerar os poluentes carreados pela gua de drenagem
(PMSP, 1999).
O lanamento de esgoto sanitrio sem tratamento prvio em cursos
dgua implica na contaminao dessas guas por diversas substncias. Esses
contaminantes so definidos como xenobiticos e podem ter origem natural ou
antropognica (LIVINGSTONE, 1993; 1998). Substncias sintticas com ao
estrognica podem ser chamadas de xenoestrgenos por alguns autores (CIRJA
et al., 2008; JANEX-HABIBI et al., 2009; LIU; KANJO; MIZUTANI, 2009;
RODGERS-GRAY et al., 2000; WISE; OBRIEN; WOODRUFF, 2011).
Os xenobiticos fazem parte de um grupo de substncias que, em alguns
casos, causam estresse aos organismos presentes no corpo dgua por eles
8

contaminado. O estresse pode ser definido como uma condio na qual o

equilbrio dinmico do organismo (homeostase) quebrado, como resultado de
aes de um estmulo intrnseco e/ou extrnseco, chamado estressor
(PICKERING, 1981). Indivduos submetidos a condies estressantes passam
por mecanismos compensatrios quebra da homeostase, ou seja, do equilbrio
dinmico do organismo do animal, segundo Adams (1990).

3.2 Contaminantes emergentes

Um dos recursos fundamentais para a sobrevivncia do homem a gua.

Mais de 20% da gua doce acessvel tem o uso domstico, agrcola e industrial
como destino. Entretanto, essas modalidades de uso, na maioria dos casos,
trazem gua uma serie de contaminantes e por esse motivo a poluio est se
tornando um dos principais focos do olhar do poder pblico em todo o mundo
(SCHWARZENBACH et al., 2006).
Um grupo de substncias encontradas em baixas quantidades no meio
aqutico, chamadas de contaminantes emergentes, tem despertado cada vez
mais interesse, uma vez que, em sua maioria, no so regulamentadas.
Entretanto, com a ocorrncia de novos estudos, esses compostos tendem ter
uma regulao dependendo de suas caractersticas de atuao junto ao
ambiente nos quais so descartados (OLLER; MALATO; SNCHEZ-PREZ,
2011).
Os contaminantes emergentes abrangem produtos farmacuticos e de
higiene pessoal, subprodutos industriais, hormnios naturais e drogas ilcitas,
produtos da indstria qumica. Devido ao fato de serem detectados em
pequenas quantidades (na ordem de ng L-1 e g L-1), so denominados micro
poluentes, entretanto os mesmos podem se acumular, no solo, sedimento, gua
e seres vivos. Esses contaminantes podem ser substncias potencialmente
txicas, tanto para o ambiente, quanto para humanos; novos compostos

9 9

desenvolvidos ou mesmo contaminantes recentemente classificados (JOBLING

et al., 1998; KUMMERER, 2011).
Esses contaminantes apresentam, em diversas escalas, risco ao equilbrio
dos ecossistemas, esses riscos esto sendo conhecidos conforme estudos so
desenvolvidos, mas ainda h uma grande lacuna relacionada a esse assunto. A
falta de conhecimento devida entre outras causas complexidade dessas
substncias, sua distribuio, seus nveis txicos, efeitos no ambiente. Os
estudos realizados at a dcada passada consideravam os produtos
convencionais

(DAUGHTON;

TERNES,

1999),

mas

agora

os

novos

contaminantes (emergentes) esto comeando a receber a devida ateno.

3.2.1 Desreguladores endcrinos

Termo utilizado pela primeira vez por Theo Colborn e seus colaboradores
em 1991, sendo que a primeira publicao que citou o termo data de 1992
(MATTHIESSEN, 2003; GEROLIN, 2008).
Algumas das substncias encontradas em ambientes naturais e que
podem causar estresse aos animais, so conhecidas como desreguladores
endcrinos (DE). Existem diversas definies para desreguladores endcrinos,
uma delas, adotada pelo Programa Internacional de Segurana Qumica (IPCS),
em conjunto com o Japo, os EUA, o Canad, a OECD e a Unio Europia,
define da seguinte maneira: Um desregulador endcrino uma substncia ou
um composto exgeno que altera uma ou vrias funes do sistema endcrino e
tm, conseqentemente, efeitos adversos sobre a sade de um organismo
intacto, sua descendncia, ou subpopulaes (CEC, 1999).
De acordo com outra definio, desta vez com coautoria de Ribeiro et al.
(2006), substncias de origem natural ou qumica com a capacidade de causar
interferncia no sistema endcrino de organismos alterando sua sade,
reproduo e crescimento so denominados desreguladores endcrinos, ou inda
podem ser chamados de perturbadores ou interferentes endcrinos. As
alteraes causadas por estas substncias ocorrem nos stios receptores das
clulas, modificando os nveis de produo referentes a essa clula. Essa
10

10

modificao pode aumentar ou diminuir a produo hormonal, o que leva a uma

modificao na homeostase do organismo atingido. As modificaes ocorridas
poder ser observada imediatamente no organismo, ou ao longo do tempo e at
mesmo em suas futuras geraes (LIU; KANJO; MIZUTANI, 2009; DINIZ et al.,
2010).
Segundo

Damstra

(2002),

desreguladores

endcrinos

possuem

caractersticas de serem substncias que causam alteraes nas funes do

sistema endcrino e que por conseqncia traz danos a um organismo sadio e
em seus descendentes
A ao dos desreguladores endcrinos d-se pelo bloqueio, mimetizao,
estimulao, ou inibio da produo dos hormnios naturais (NIEHS, 2010,
E.HORMONE, 2012). Os desreguladores endcrinos apresentam muitos
mecanismos que facilitam a sua disperso e difuso no ambiente, alm de
impedir ou ao menos dificultar sua eliminao dos organismos vivos. (WHALEY;
KEYES; KHORRAMIL, 2001; RITTLER; CASTILLA, 2002; MAXIMIANO et al.,
2005, AURIOL et al., 2008; DUARTE, 2008; LIU; KANJO; MIZUTANI, 2009;
WISE; OBRIEN; WOODRUFF, 2011). Esses mecanismos podem ser descritos
como:

Bioacumulao/lipoflicos muitos desreguladores endcrinos apresentam a

capacidade de se depositarem nos organismos, atingindo altos nveis de
concentrao

que

podem

ser

prejudiciais

esses

organismos.

bioacumulao ocorre principalmente nos tecidos adiposos, leite e na gema do

ovo, algumas substncias permanecem por um longo perodo de tempo nesses
tecidos podendo ocorrer sua transferncia para outros indivduos atravs da
cadeia alimentar, inclusive atingindo ao homem;
Persistncia alguns desreguladores endcrinos demoram vrios anos para
serem biodegradados;
Sinergia habilidade de diversos compostos de interagirem, e em alguns casos,
gerando efeitos maiores;

11
11

Conjugao ligao entre desreguladores endcrinos e o organismo, o que

impede a sua eliminao e conservando a sua concentrao por longo perodo
de tempo.

Existem alguns grupos de substncias com potencial ao desreguladora

do sistema endcrino (STUART; LAPWORTH, 2012) como, por exemplo:

Agrotxicos (componente principal, metabolitos)

Produtos farmacuticos (de uso humano, veterinrio, ilcito)

Compostos relacionados a hbitos da populao (ex. nicotina, cafena)

Produtos de higiene pessoal (ex. filtros de raios ultravioleta, almscar, DEET

utilizado em repelentes de insetos, triclosan componente de cremes dentais,
detergentes e sabonetes)

Aditivos

industriais

subprodutos

(ex.

conservante

dioxina,

bisfenois,

combustveis contendo MTBE)

Aditivos de itens alimentares (antioxidantes BHA BHT)

Subprodutos do tratamento de gua (THM, NDMA)

Anti chamas, anti fogo (fosfato de quila, PBDE)

Surfactantes (PFOS e PFOA, alquilfenis utilizados em veculos, mobilirio,

tecidos, carpetes)

Hormnios e esteris

Lquidos inicos
Estudos demonstram uma grande diversidade destas substncias
encontradas em ambientes naturais, tais como: esterides naturais, produtos
farmacuticos, produtos qumicos industriais, substncias tensoativas, polmeros
de baixa massa molecular, alquifenois, hidrocarbonetos poli-aromticos (HPAs),
nonilfenol, octilfenol, pesticidas, bisfenol A, surfactantes, ftalato, estireno, entre
outras (GRAY et al., 2000; BIRKETT; LASTER, 2003; LINTELMANN et al., 2003;
UNEP, 2003; HEINSTERKAMP; GANRASS; RUCK, 2004; SUZUKI et al., 2004;
BARRA et al., 2005; MOZAZ; LOPEZ DE ALDA; BARCEL, 2005; PETROVIC et
al, 2005; CHAPMAN, 2006, MCGOVERN; MCDONALD, 2003; GROSS et al.,
12

12

2003; FENT; WESTON; CAMINADA, 2006; SERVOS; SERVOS, 2006;

KHETAN; COLLINS, 2007, FALCONER et al., 2006; DINIZ et al., 2010).

3.3. Estudos com desreguladores endcrinos em ambientes aquticos

Durante anos os estudos tendo como objeto a gua, na maioria dos casos
levavam em conta apenas a concentrao de oxignio, nitratos, fosfatos e
slidos em suspenso presentes, para determinar a sua qualidade. Esse quadro
vem mudando gradualmente e atualmente outras substncias como, por
exemplo, os desreguladores endcrinos, tm sido estudadas (CIRJA et al.,
2008). Contudo, ainda no so suficientemente estudadas as caractersticas de
cada um desses compostos (BRAGA et al., 2005). Muitas dessas substncias
que esto presentes nos recursos hdricos, contaminando-os, ainda no tm
seus efeitos em longo prazo bem definidos (WISE; OBRIEN; WOODRUFF,
2011).
H aproximadamente duas dcadas os estudos que tem como alvo
substncias com potencial de causar alteraes endcrinas tem aumentado
gradativamente. Esses contaminantes so capazes de, mesmo em pequenas
quantidades (na ordem de ng L-1 e g L-1), interagir e trazer danos a organismos
que habitam o subsolo, sedimentos, mares, rios e lagos (WANG et al., 2003b;
LAMBROPOULOU; ALBANIS, 2004).
Entretanto, a ocorrncia da desregulao endcrina no novidade, pois
nas dcadas de 1970 e 1980 foi comprovado que o dietilestilbestrol (DES),
criado inicialmente para servir como medicamento antiabortivo causou
problemas

nos

sistemas

reprodutivos

femininos

masculinos

(SOTO;

SONNENSCHEIN, 2002). Tambm na dcada de 80 pescadores britnicos

observaram peixes da espcie Rutilus rutilus com alteraes sexuais,
apresentando intersexo. Esses animais ocupavam uma lagoa que recebia a
descarga de uma estao de tratamento de esgoto (SWEETING, 1981, apud
TYLER; ROUTLEDGE, 1998).

13
13

A exposio de animais e humanos a essas substncias tem

demonstrado

indcios

de

alteraes

hormonais.

Existem

estudos

que

apresentam dados sobre a relao da contaminao com esses interferentes e a

possibilidade de alterao no sistema reprodutivo de indivduos a eles expostos
(MEYER;

SARCINELLI;

MOREIRA,

1999;

RITTLER;

CASTILLA,

2002;

MAXIMIANO et al., 2005).

Segundo Bila e Dezotti (2003), a presena de frmacos residuais na gua,
como antibiticos e estrognios, pode causar efeitos adversos na sade
humana, e de organismos presentes nas guas como, por exemplo, os peixes,
por isso so motivo de grande preocupao por parte de estudiosos em todo o
mundo (CIRJA et al., 2008; LEE et al., 2008).
A seguir so citados hormnios naturais e sintticos, alguns dos
principais desreguladores endcrinos que contaminam recursos hdricos,
especialmente em locais onde a urbanizao intensa (RAIMUNDO, 2007).

3.4 Hormnios sintticos e naturais e sua ocorrncia em ambientes

aquticos

Grandes centros urbanos e regies de intensa atividade agropecuria

apresentam contaminao de seus corpos dgua com substncias qumicas
componentes do grupo de desreguladores endcrinos (KOLPIN, et al, 2002).
Sole et al. (2003) e Van den Belt et al. (2004) corroboram com a
constatao de que a principal fonte de contaminao de guas superficiais por
desreguladores endcrinos o lanamento de esgoto sanitrio e industrial
tratado ou in natura. Essa uma importante fonte de poluio, pois, no h a
remoo completa dessas substncias nas estaes de tratamento de esgoto.
Os corpos dgua suportam o recebimento de determinadas carga de resduos,
mas essa capacidade varia de acordo com o seu volume para ser eficiente em
dilu-las. A Tabela 2 apresenta algumas das principais fontes pontuais e fontes
difusas. (WANG et al., 2005b; ALUM et al., 2004; RUDDER et al., 2004;
JEANNOT et al., 2002).
14

14

Tabela 2 - Principais fontes de desreguladores endcrinos em guas superficiais

Fontes

Tipos de Fontes

Desreguladores Endcrinos Encontrados

Hormnios naturais e sintticos, alquilfenis,
ftalatos, bisfenol A, frmacos, cafena,

Efluente Industrial

Pontual

pesticidas, bifenilas policloradas (PCB),

hidrocarbonetos policclicos aromticos
(HPA), retardantes de chama, dioxinas

Efluente Sanitrio

Pontual

Deflvio Pecurio

Difusa

Natural

Difusa

Hormnios naturais e sintticos, alquilfenis,

ftalatos, bisfenol A, frmacos, cafena
Hormnios naturais e sintticos, antibiticos,
frmacos veterinrios
HPA, estrognios naturais e fitoestrognios

Fonte: Adaptado de Raimundo, 2007.

A contaminao de corpos dgua por hormnios sexuais femininos

ocorre principalmente pelo lanamento de esgoto sanitrio sem tratamento, ou
quando seu tratamento ineficiente. Essa fonte de desreguladores endcrinos
se deve pela excreo vinda da populao de maneira natural ou somada ao
uso de anticoncepcionais orais ou injetveis (PONEZI; DUARTE; CLAUDINO,
2006). Dados citados por Fernandes (2007) indicam que em 2000, no Brasil, o
uso de anticoncepcionais era feito por 8 milhes de mulheres sendo que esse
nmero poder chegar a 45 milhes em 20 anos.

3.4.1 Origem dos principais hormnios naturais e sintticos que ocorrem

em ambientes aquticos

Guyton e Hall (2005) definem os hormnios como substncias qumicas

que so produzidas por glndulas especficas e que interferem na funo de
outras clulas em todo o corpo. O transporte dos hormnios endcrinos feito

15
15

atravs do sistema circulatrio, e sua funo realizada quando os mesmos

atingem seus respectivos receptores desencadeando uma srie de reaes.
Dos hormnios naturais, o que apresenta maior potencial estrognico, o
17-estradiol. Esse o principal hormnio secretado durante o perodo de
atividade dos ovrios, e tem como metablitos a estrona, o estriol e seus
conjugados. O 17-estradiol possui atividade biolgica 12 vezes maior do que a
estrona e 80 vezes mais elevada do que o estriol (GENNARO, 2000, COLUCCI;
BORK; TOPP, 2001; KASSAB, 2001; GILMAM; HARDMAN; LIMBIRD, 2003).
Quando se trata de hormnios sintticos que so utilizados como
contraceptivos e para a realizao de tratamento de reposio hormonal,
destacam-se as suas estruturas moleculares que os torna mais potentes quando
comparados aos hormnios naturais, possuindo a capacidade de alterar o
sistema endcrino mesmo em baixas concentraes. O hormnio sinttico mais
utilizado o 17-etinilestradiol, que tem sua estrutura semelhante do hormnio
natural 17-estradiol, entretanto, possuindo uma atividade estrognica duas
vezes superior. Para poder ser aproveitado pelo organismo humano o 17etinilestradiol possui um agrupamento etinila que o protege da inativao pelo
fgado (KHANAL et al., 2006, KASSAB, 2001). A Figura 1 ilustra a representao
esquemtica da principal entrada dos desreguladores endcrinos no sistema
aqutico (LINTELMANN et al., 2003).

16

16

Figura 1 - Representao esquemtica da principal via de entrada de

desreguladores endcrinos hormonais de origem humana (natural

ou sinttico) em sistemas aquticos (LINTELMANN et al., 2003)

O hormnio 17-etinilestradiol aps ser ingerido rapidamente absorvido

pelo trato intestinal, e apresenta uma meia vida biolgica que varia de 13 a 27
horas, sendo excretado atravs da urina e das fezes e permanecendo no
ambiente aqutico de gua doce por um perodo que varia de 20 a 40 dias.
Associado ao 17-etinilestradiol, o hormnio igualmente sinttico, levonorgestrel,
utilizado para a obteno de melhores resultados. Assim como o 17etinilestradiol, o levonorgestrel apresenta uma rpida absoro pelo organismo,
permanecendo no organismo por mais tempo do que um hormnio natural e sua
meia vida biolgica varia de 10 a 24 horas, sendo excretado principalmente pela
urina e em menor parte pelas fezes (GENNARO, 2000 e GILMAN; HARDMAN;
LIMBIRD, 2003; ENSP, 2002, FERREIRA, 2008; RUDDER et al., 2004; WISE;
OBRIEN; WOODRUFF, 2011).

17
17

Aps serem excretados os hormnios sintticos 17-etinilestradiol e

levonorgestrel ainda se encontram na forma ativa em corpos dgua devido a
ao de bactrias, especialmente a Escherichia colli, presente em grandes
quantidades nas fezes (SOLE, et al., 2001).
As caractersticas femininas, o controle do ciclo reprodutivo, gravidez,
sistema cardiovascular, sistema imunolgico, entre outros so diretamente
influenciados por estrgenos, dentre os quais se destaca o estradiol. Johnson e
Sumpter (2001) indicam a necessidade da melhora das metodologias utilizadas
em pesquisas relativas ao tema, principalmente na reduo dos nveis de
deteco e aumento da preciso das anlises como aes prioritrias.
De acordo com Ghiselli e Jardim, (2007), mulheres grvidas dependendo
do estagio da gravidez podem excretar at 1000 vezes mais hormnios do que
uma mulher em atividade normal (da ordem de 2 a 20 g estrona/dia, 3 a 65 g
estriol/dia, e 0,3 a 5 g estradiol/dia).
Em relao ao hormnio sinttico 17-etinilestradiol, o mais utilizado na
composio de plulas contraceptivas em uma quantidade que varia de 25 a 50
g por plula (ingerida diariamente), sabe-se que desse total, aproximadamente
80% no aproveitado. A frao no utilizada liberada principalmente pela
urina. (HENRIQUES, 2008; CAMPANI et al., 2010; GABET-GIRAUD et al., 2010;
FERNANDES, 2007).
A Tabela 3 apresenta a quantidade de hormnios excretados diariamente
por humanos, por ambos os sexos e nas diferentes fases da vida (YING; BRIAN;
KOOKANA, 2002).

18

18

Tabela 3 - Excreo de estrognios pelos seres humanos (g/dia).

Categoria

17estradiol

Estrona Estriol

17etinilestradiol

Homens

1,6

3,9

1,5

--

Mulheres frteis

3,5

4,8

--

2,3

--

259

600

6000

--

--

--

--

35

Mulheres na
menopausa
Mulheres grvidas
Mulheres

Fonte: YING; BRIAN; KOOKANA, 2002

Os hormnios que contaminam os corpos dgua tambm podem ter

como origem, o escoamento de excretas de animais, principalmente quando
criados em grande densidade. Isso ocorre, por exemplo, no caso dos bovinos e
sunos utilizados com finalidade de alimentao humana (Tabela 4). J
constatado nos EUA a contaminao de lagos por 17-Estradiol, sendo que a
quantificao do hormnio na gua foi na ordem de 0,05 a 7,4 ng/l e foram
suficientes para causar distrbios s tartarugas que habitam esses locais que
recebiam dejetos bovinos (FURUICHI et al., 2006).

19
19

Tabela 4 - Excreo diria de estrognio total estimada por diferentes

espcies de animais (g/dia), (adaptado de WISE; OBRIEN;
WOODRUFF, 2011)
Total de estrognio
Espcie

excretado pela
urina (g/dia)

Bovino

Suno

Ovino

Total de
estrognio

Total de estrognio

excretado pelas

excretado (g/dia)

fezes (g/dia)

Bezerros

15

30

45

Vacas

99

200

299

Prenhes

320 104320

256 7300

576 111620

Porcos

82

21

103

Prenhes

700 17000

61

Ovelhas

20

23

Carneiros

22

25

3.5 Organismos teste e biomarcadores de desreguladores endcrinos

Os estudos anteriormente descritos sobre a avaliao de efeitos

fisiolgicos causados pelos desreguladores endcrinos presentes na gua de
rios, foram possveis devido ao uso de biomarcadores e organismos teste, uma
metodologia adotada recentemente.
Os mtodos tradicionais de avaliao de qualidade da gua, baseadas em
anlises

fsicas,

qumicas

bacteriolgicas,

no

conseguem

fornecer

informaes de como uma determinada substncia ir agir em um organismo

sob o ponto de vista fisiolgico (CAIRNS; PRATT, 1993). Para uma anlise
eficiente

deve-se

utilizar

os

mtodos

analticos

juntamente

com

os

biomarcadores, que podem ser definidos como ferramentas utilizadas na anlise

20

20

da organizao biolgica de um organismo (organismo teste) (ARIAS et al.,

2007).
Em outra definio os biomarcadores so vistos como qualquer resposta
a um contaminante ambiental, medidos no organismo ou matriz biolgica,
indicando um desvio do status normal que no pode ser detectado no organismo
intacto. Diversos parmetros podem ser utilizados como biomarcadores como,
por exemplo, medidas de fluidos corporais, clulas, tecidos ou medidas
realizadas sobre o organismo completo que indicam, em termos bioqumicos,
celulares, fisiolgicos, comportamentais ou energticos, a presena de
substncias contaminantes ou a magnitude da resposta do organismo alvo
(LIVINGSTONE, 1993, LARCHER, 2000).
A definio de qual ser o organismo teste deve incluir uma gama de
critrios, dentre eles a disponibilidade, manuteno e conservao da espcie
em questo, a possibilidade do uso de determinada espcie para a obteno de
resultados especficos condizentes ao objetivo do trabalho (BOHRER, 1995).
Muitos organismos tm sido utilizados com esse fim, destacam-se espcies de
moluscos, peixes e crustceos (COTELLE; FERARD, 1999), alm de algumas
espcies vegetais. Entre as espcies mais utilizadas em todo o mundo como
organismo teste esto: Artemia sp (SVENSSON et al., 2005), Daphnia magna,
Vibrio fischeri, Danio rerio (KNIE; LOPES, 2004) e Allium cepa L. (ARAMBASIC;
BJELIC; SUBAKOV, 1995).
Alm da sobrevivncia dos organismos teste (crustceos, peixes, etc.)
outros fatores esto sendo observados e indicam alteraes na homeostase dos
organismos (alteraes bioqumicas, fisiolgicas e morfolgicas). Estes fatores
podem

ser

denominados

como

biomarcadores

(GRINEVICIUS,

2006).

Biomarcadores so sistemas indicadores que fazem parte de um organismo e

so

utilizados

para

deteco

de

modificaes

especificas

(SILVA;

ERDTMANN; HENRIQUES, 2003).

Um biomarcador ideal deve demonstrar grande susceptibilidade, boa
sensibilidade, relativa especificidade e ter baixo custo em suas anlises
(STEGEMAN et al., 1992; BAINY, 1993).
Quando o intuito da pesquisa verificar atividades estrognicas de
desreguladores endcrinos biomarcadores so utilizados com freqncia, e

21
21

quando se tratam de estudos relacionados contaminao de ambientes

aquticos, a vitelogenina (VTG) demonstra bons resultados (ARUKWE;
GOKSYR, 2003; GORDON et al., 2006; HINCK et al., 2006; REMPEL et al.,
2006, ANDERSSON et al., 2007).

3.5.1 Vitelogenina

A vitelogenina produzida por animais ovparos, para compor o vitelo

presente nos ovcitos. Esta fosfolipoglicoprotena produzida no fgado por
meio do estmulo causado pelo estradiol ovariano e transportada atravs do
sangue at as gnadas onde ir tornar-se parte do vitelo dos ovcitos em
desenvolvimento, para futura fonte nutricional para o embrio. A VTG
encontrada durante a maturao sexual de fmeas (ARUKWE; GOKSYR,
2003; LANGSTON et al., 2005).
A sntese da VTG depende da presena de hormnios estrognicos, que
so sintetizados pelas fmeas durante seu ciclo reprodutivo, embora os peixes
machos e os juvenis tambm apresentam receptores estrognicos hepticos.
Entretanto, a codificao do gene para estas protenas no existe ou
fracamente expressada em machos e juvenis, no sendo normal a produo de
protenas ligadas ovognese (vitelognese e zonagnese). A produo de
VTG por machos ou juvenis sinal de desequilbrio endcrino e indicador de
efeito por exposio a estrgenos ambientais; tendo em vista que sua presena
em machos, s possvel mediante induo externa, j que a sua produo
desencadeada pela atividade de hormnios femininos (ARUKWE; KNUDSEN;
GOKSYR, 1997; LINTELMANN et al., 2003; HORNUNG et al., 2004; HINCK et
al., 2006; REMPEL et al., 2006; MENDES; OLIVEIRA, 2004).
Com base nessas informaes, a vitelogenina mostra ser um bom
biomarcador para a exposio de vertebrados vivparos a xenoestrgenos. Os
peixes so importantes nos estudos relativos aos efeitos de substncias
estrognicas fisiologia reprodutiva, pois seu sistema reprodutivo regulado por

22

22

hormnios similares aos dos mamferos, portanto espera-se que os efeitos

tambm ocorram (MILLS; CHICHESTER, 2005).
3.6 Efeitos dos desreguladores endcrinos nos organismos vivos

A fase de desenvolvimento o perodo em que os organismos esto mais

propcios a alteraes que levam a disfunes hormonais ou endcrinas devido
exposio desreguladores endcrinos. Essas modificaes trazem a perda
da homeostase dos organismos. Esta constatao decorrente de resultados de
diversos estudos que envolvem poluio ambiental de corpos dgua com
problemas relacionados ao sistema reprodutor de espcies de diversas classes
de animais como mamferos, aves, rpteis, anfbios e peixes, entre outros
(DAMSTRA et al., 2002).
O sistema endcrino no abrange apenas a excreo de hormnios na
corrente sangunea, h tambm a atuao no sistema nervoso, atravs dos
neurohormnios (DAMSTRA et al., 2002). Do sistema endcrino destacam-se
trs eixos principais:
Eixo hipotlamo-pituitrio-adrenal, ligado ao metabolismo de carboidratos,
protenas e gorduras, efeito antiinflamatrio e modulao de respostas ao
estresse;
Eixo hipotlamo-pituitrio-gonadal, ligado ao sistema reprodutivo;
Eixo hipotlamo-pituitrio-tiroidal, ligado a atividade metablica como um todo
Como principal funo do sistema endcrino, se destaca a manuteno
da homeostase, evitando problemas decorrentes do efeito gangorra, Figura 2
(PADUA, 2009).

23
23

Figura 2 - Representao do funcionamento do sistema endcrino com base no

principio da gangorra (PADUA, 2009)

Existem algumas questes observadas quando so analisados impactos

dos desreguladores endcrinos nas funes exercidas pelo organismo
(DAMSTRA et al., 2002):

O individuo exposto na fase adulta pode ter os efeitos dos desreguladores

endcrinos minimizados pela ao de mecanismos de homeostase, desse modo
a exposio pode no apresentar nenhuma modificao;

A exposio na fase de desenvolvimento dos organismos pode resultar em

algumas mudanas permanentes de diversas funes;

Quando a exposio ao desregulador endcrino ocorrer em diferentes estgios

desse desenvolvimento, as consequncias podem ser distintas;
24

24

Devido complexidade dos sistemas endcrinos os efeitos da exposio podem

ocorrer, em alguns casos, de maneira e local imprevisveis;

Considerando o anteriormente exposto, deve-se ter cuidado na transposio dos

resultados obtidos in vitro para condies in vivo

Problemas causados por desreguladores endcrinos em humanos

Os efeitos dos desreguladores endcrinos atingem tambm os seres

humanos e uma das principais vias de entrada destes desreguladores em
organismos humanos a ingesto de alimentos e gua que os contenham
(REYS, 2001).
Amaral Mendes (2002) descreve os desreguladores endcrinos como
sendo o principal desafio mdico, e que a atuao de diversas substncias sobre
o sistema endcrino e reprodutivo causada pela habilidade dessas substncias
em:
A) mimetizar e antagonizar os efeitos de hormnios endgenos
B) desregular a sntese e metabolismo de hormnios endgenos e de seus
receptores
Em seres humanos os desreguladores endcrinos podem causar uma
srie de problemas decorrentes de compostos naturais ou sintticos presentes
no meio ambiente. Os autores destacam distrbios na sade reprodutiva,
disfunes de fertilidade, formao de cnceres de testculos, prstata e mama,
diminuio na contagem de espermatozides, endometriose, entre outros
(HARRISON; HOLMES; HUMFREY, 1997; LARSSON et al., 1999; SHARPE;
IRVINE, 2004; SLOWIKOWSKA-HILCZER, 2006, BILA; DEZOTTI, 2007;
GHISELLI; JARDIM, 2007, CHEN; HU, 2009).
Durante os anos 40 foi observada uma diminuio na contagem de
espermatozides em trabalhadores que lidavam com aplicao do pesticida DDT

25
25

(AMARAL MENDES, 2002). Estudos comprovaram os efeitos do desregulador

endcrino, dietilestilbestrol (DES), que no perodo entre 1948 e 1971 era
utilizado com o intuito de precaver abortos e auxiliar no desenvolvimento do feto.
Aps o uso do composto, pelas mes, muitas das suas filhas nasceram estreis,
houve o desenvolvimento de um tipo raro de cncer vaginal, m formao do
tero e ovrios, alm de supresso da imunidade (DAMSTRA et al., 2002;
REYS, 2001; JANSSEN; FUJIMOTO; GIUDICE, 2007). Em homens adultos que
foram

expostos

estradiol,

foi

detectada

uma

maior

ocorrncia

de

anormalidades nos rgo sexuais, uma baixa contagem de espermatozides,

alm de um alto ndice de cncer nos testculos (COLUCCI; BORK; TOPP, 2001;
GUILLETTE et al., 1996; LEGLER et al., 2002; JANEX-HABIBI et al., 2009).
Alm de efeitos diretos causados nos indivduos que mantm contato com
os

desreguladores

endcrinos,

fetos

podem

ter

seu

desenvolvimento

comprometido, quando ocorrem alteraes endcrinas em suas mes. Os

efeitos teratognicos descritos so casos de m formao dos rgos sexuais e
anomalias reprodutivas, tanto em fetos do sexo masculino, quanto do sexo
feminino (COWIN; FOSTER; RISBRIDGER, 2007; SAFE, 2004; JANSSEN;
FUJIMOTO, 2007; FORSTMEIER, 2005).

Problemas causados por desreguladores endcrinos em animais

Em relao a mamferos, destacam-se anomalias no sistema reprodutor

de ratos causada por bisfenol A (MARKEY et al., 2002). Bay et al.(2006)
descrevem a infertilidade e anomalias testiculares como resultado da exposio
de fetos de ratos ftalatos. Em ambiente aqutico foi observada alta mortalidade
de golfinhos por ocorrncia de PCB (AGUILAR; BARRELL, 1994). Guerra et al.,
(1999) e Souza et al. (2000), utilizando ratos como modelo, demonstraram que o
hormnio sinttico levonorgestrel quando ministrado em doses de 15 ou 30 mg 3
vezes ao dia, levaram distrbios no crescimento e peso de rgos dos
animais.

26

26

Alteraes causadas pelo DDT e DDE foram observadas em aves por Fry
e Toone (1981), e foram causadoras da feminizao de gaivotas machos,
diminuio da espessura da casca dos ovos (com conseqente quebra da
mesma) e anomalias do sistema reprodutor. Tambm foram observadas
alteraes detectadas atravs da alterao na produo de VTG em falces
peregrino (JIMENEZ et. al, 2007)
Em rpteis os efeitos do DDT e DDE elevaram a concentrao de
hormnios sexuais no plasma alm de trazer anomalias morfolgicas s
gnadas de crocodilos, alterao da produo de esterides e variao na
concentrao de hormnios sexuais em fmeas e machos (GUILLETTE et al.,
1999; MILNES et al., 2002; WHALEY; KEYES; KHORRAMIL, 2001), mesmo no
havendo deteco de pesticidas, a substncia foi encontrada nos animais e seus
ovos (NRDC, 2007). A exposio ao estradiol tambm levou a induo da
sntese de VTG e a alteraes na produo de ovos de tartarugas (IRWIN;
GRAY; OBERDORSTER, 2001). No caso de anfbios, foi observado por Bogi et
al.(2003) que o efluente de uma estao de tratamento de esgoto causou a
induo da sntese de VTG e hermafroditismo em rs.
Como descritos em diversos estudos os peixes sofrem as aes da
presena dos desreguladores endcrinos sintticos 17-etinilestradiol e
levonorgestrel e do hormnio natural 17-estradiol. A presena dos mesmos,
ainda que em baixas concentraes, provocou distrbios como a feminizao
(RODGER-GRAY et al., 2001; KNORR; BRAUNBECK, 2002; BOMBARDELLI;
HAYASHI, 2005; EDWARDS; MOORE; GUILLETTE, 2006), alteraes na
transcrio gentica (ZUCCHI; CASTIGLIONI; FENT, 2012), alterao nas
gnadas (PANTER; THOMPSON; SUMPTER, 2000; LABADIE; BUDZINSKI,
2006), hermafroditismo (KOGER et al., 2000), incidncia de testculos-vulos
nas gnadas (KANG et al., 2002) e induo sntese de vitelogenina (PANTER;
THOMPSON; SUMPTER, 2000; ROSE et al., 2002; MONCAUT; NOSTRO;
MAGGESE, 2003; GORDON et al.; 2006; HINCK et al., 2006; REMPEL et al.,
2006; ANDERSSON et al., 2007).
Como

determinado

por

diversos

estudos,

so

extremamente

preocupantes as conseqncias a toda a biodiversidade, promovidas pela

presena

de

desreguladores

endcrinos

no

ambiente.

ameaa

27
27

biodiversidade um assunto tratado em todo o mundo, inclusive tendo desde

1992 na Organizao das Naes Unidas (ONU) um importante instrumento, a
Conveno sobre Diversidade Biolgica (BRASIL, 2012).

3.7 Conservao da biodiversidade em guas continentais

A Conveno sobre Diversidade Biolgica (CDB) instituda durante a

Conferncia das Naes Unidas para o Meio Ambiente e o Desenvolvimento CNUMAD (Rio 92) define diversidade biolgica como sendo a variabilidade de
organismos vivos de todas as origens, compreendendo, dentre outros, os
ecossistemas terrestres, marinhos e outros ecossistemas aquticos e os
complexos ecolgicos de que fazem parte; compreendendo ainda a diversidade
dentro de espcies, entre espcies e de ecossistemas (MMA, 2000).
A CDB tem como objetivos a serem cumpridos, de acordo com as
disposies pertinentes, a conservao da diversidade biolgica, a utilizao
sustentvel de seus componentes e a repartio justa e equitativa dos benefcios
derivados da utilizao dos recursos genticos, mediante, inclusive, o acesso
adequado aos recursos genticos e a transferncia adequada de tecnologias
pertinentes, levando em conta todos os direitos sobre tais recursos e
tecnologias, e mediante financiamento adequado (MMA, 2000).
A gesto da CDB feita pela Conveno das Partes atravs de reunies
peridicas. Atravs dessas reunies so definidas metas, as quais os pases
signatrios assumem o compromisso de seguir. Aps a ltima reunio realizada
em Nagoya no Japo (COP 10) foram definidos o Plano Estratgico 2011-2020 e
as metas de Aichi. O Plano Estratgico 2020 da CDB (UICN; WWF-BRASIL;
IP, 2011) est organizado em cinco objetivos:
A. Tratar das causas fundamentais de perda de biodiversidade fazendo com que
preocupaes com biodiversidade permeiem governo e sociedade.

28

28

B. Reduzir as presses diretas sobre biodiversidade e promover o uso

sustentvel.
C. Melhorar a situao de biodiversidade protegendo ecossistemas, espcies e
diversidade gentica.
D. Aumentar os benefcios de biodiversidade e servios ecossistmicos para
todos.
E. Aumentar a implementao por meio de planejamento participativo, gesto de
conhecimento e capacitao.
Os cinco objetivos so compostos por 20 metas (Metas de Aichi), dentre
as quais destacamos a META 8 Controle da Poluio das guas, onde h a
indicao de que at 2020, a poluio dever ser reduzida a nveis no
prejudiciais ao funcionamento de ecossistemas e da biodiversidade (UICN;
WWF-BRASIL; IP, 2011).
No Brasil, o incio da gesto de guas iniciou-se na dcada de 30, com a
criao do Decreto 24.643/34 - Cdigo de guas (BRASIL, 1934) e tem como
marco legal a Constituio Federal de 1988 (BRASIL, 1988), a Lei 9.433/97 que
instituiu a Poltica Nacional de Recursos Hdricos e criou o Sistema Nacional de
Gerenciamento de Recursos Hdricos (BRASIL, 1997) e a Lei 9.984/00 que criou
a Agncia Nacional de guas (ANA), (BRASIL, 2000). O foco principal dos
instrumentos legais de proteo dos recursos hdricos manuteno dos
mesmos para a sustentao das atividades humanas (abastecimento urbano,
agricultura, gerao de energia, pesca, aquicultura, assimilao de esgoto, etc.).
O Brasil, como signatrio da Conveno sobre Diversidade Biolgica, tem
por obrigao cumprir as metas estipuladas em suas reunies. Para atingir o
objetivo proposto na Meta 08 definida na COP 10 (controle de poluio das
guas), uma das aes necessrias a implementao de um sistema de
monitoramento dos poluentes que atingem os corpos dgua. Para que esse
sistema de monitoramento seja eficiente so necessrios subsdios para a
definio dos locais onde sero alocados.

29
29

3.8 reas crticas

3.8.1 Mapeamento

De acordo com o desenvolvimento, a utilizao dos recursos hdricos

mais intensa, assim como o risco de degradao ambiental devido interveno
humana. O corpo dgua, receptor final da gua da bacia hidrogrfica, pode ser
utilizado como indicador de alteraes ocorridas no territrio ao seu redor. Para
que o planejamento e administrao hdrica de uma regio existam, necessrio
que haja informaes organizadas desse local, para que as aes a serem
tomadas possam apresentar uma maior efetividade (MENDES; CIRILO, 2001).
Varnes (1974) define o mapeamento como a delimitao de reas
homogneas, sendo que suas heterogeneidades so consideradas para a sua
construo. A composio do mapa de um plano bidimensional onde h os
contornos das reas delimitadas e uma legenda que define os atributos que
foram utilizados. Os principais tipos de mapas utilizados nos sistemas de
informao geogrfica (SIG) so definidos por Mendona (2002):
Mapa temtico: demonstra de forma qualitativa a distribuio espacial de
uma grandeza geogrfica;
Mapa cadastral: cada componente considerado como um objeto
geogrfico

que

possui

atributos,

podendo

estar

associado

vrias

representaes grficas;
Produto de sensoriamento remoto: imagens obtidas por satlites e
fotografias areas;
Modelo numrico do terreno: reproduz uma superfcie real a partir de
algoritmos e de um conjunto de pontos, em um referencial qualquer, que
descrevem a variao contnua da superfcie.

30

30

O desenvolvimento de um mapa com dados especficos, no a

sobreposio de diversos mapas, mas sim a soma de valores de diversos
atributos que se encontram em cada ponto, esses pontos so identificados por
coordenadas (CEOTMA, 1983).

3.8.2 reas potencialmente crticas no Brasil

Estudo publicado em 2005 pelo Instituto Brasileiro de Geografia e

Estatstica (IBGE, 2005) indica a poluio por esgoto sanitrio como a principal
fonte de contaminao de mananciais, alm disso, a existncia de atividades
agropecurias e descarte de resduos slidos tambm causam contaminao. A
Figura 3 ilustra a contaminao e a sua causa nas cinco regies do Brasil.

Figura 3 - Proporo de municpios com ocorrncia de poluio do recurso gua, por

tipo de causas mais apontadas. Fonte: IBGE, Diretoria de Pesquisas,
Coordenao de Populao e Indicadores Sociais, Pesquisas de Informaes
Bsicas Municipais 2002 (IBGE, 2005)

31
31

O Brasil apresenta algumas reas crticas, quando a qualidade da gua

considerada. Estudos demonstram que essas regies localizam-se prximas aos
principais centros metropolitanos (MMA, 2006):
Regio Hidrogrfica do Paran: bacias do Alto Iguau, alto Tiete, Piracicaba,
Meia Ponte, Rio Preto;
Regio Hidrogrfica do So Francisco: bacia do rio das Velhas, Para e
Paraopeba;
Regio Hidrogrfica Atlntico Leste: bacia dos rios Joanes e Ipitanga;
Regio Hidrogrfica Atlntico Sul: bacia dos rios dos Sinos e Gravata;
Regio Hidrogrfica Atlntico Sudeste: bacia do rio Paraba do Sul, bacia do rio
Jucu;
Regio Hidrogrfica do Paraguai: bacia do rio Miranda.
Mesmo com o risco por conta do potencial de presena de
desreguladores endcrinos nessas regies, o monitoramento no uma prtica
aplicada no Brasil, entretanto, os riscos provavelmente existem, pois a ocupao
desses locais leva ao lanamento dessas substncias ao meio. Pases
considerados desenvolvidos apresentam programas de monitoramento da
contaminao

das

guas

contaminantes

emergentes

considerando
(STAVRAKAKIS

contaminao
et

al.,

2008;

atravs

de

PICKERING;

STUMPTER, 2003; CEC, 2004) fato que deveria ocorrer tambm no Brasil.
De acordo com Who (2006), quando se considera a sade pblica como
questo a ser tratada, a presena de contaminantes deve ter trs questes
primordiais:

Probabilidade de exposio

Concentrao que pode resultar em efeitos adversos sade

32

32

Evidncia de efeitos adversos sade em decorrncia da exposio pelo

consumo de gua
Para que seja possvel identificar s quais potenciais desreguladores
endcrinos a populao exposta e corre risco, uma importante ferramenta a
ser utilizada a avaliao de risco ambiental (WHO, 2006) e o monitoramento
faz parte desse tipo de avaliao. O monitoramento deveria ser efetivado
principalmente nas reas potencialmente crticas (como j definido pelo IBGE),
que na Regio Hidrogrfica Atlntico Sudeste inclui a bacia do rio Paraba do
Sul.

3.8.3 Rio Paraba do Sul

A importncia do rio Paraba do Sul em seu trecho paulista destacada por

Muller (1969), quando cita que o rio Paraba do Sul serviu de corredor,
facilitando o deslocamento e a fixao do homem, tornando-se o eixo bsico de
toda a vida regional, e em suas proximidades foram surgindo e evoluindo os
principais ncleos populacionais atualmente existentes na regio. Como toda
regio para se desenvolver necessita obrigatoriamente de recursos hdricos,
problemas no rio Paraba do Sul certamente trariam srias complicaes para
um maior desenvolvimento de todo o Vale do Paraba, tendo em vista que a
Unidade de Gerenciamento de Recursos Hdricos (UGRHI) 2 - Paraba do Sul
engloba 34 municpios e 1.944.638 habitantes, representando 5% da populao
do Estado de So Paulo (CETESB, 2007).
A rea de drenagem da bacia do rio Paraba do Sul tem cerca de 55.500
2

km compreendida entre os paralelos 2026 e 2300 sul e os meridianos

4100e 4630 oeste de Greenwich e est localizada na Regio Sudeste entre
os estados de So Paulo com cerca de 13.900 km2, Minas Gerais 20.700 km2 e
Rio de Janeiro com aproximadamente 20.900 km2 (ANA, 2001).

33
33

O rio Paraba do Sul tem sua nascente localizada na Serra da Bocaina, no

Estado de So Paulo, a 1.800 m de altitude, e sua foz no norte fluminense, mais
precisamente

no

municpio

de

So

Joo

da

Barra,

percorrendo

aproximadamente 1.150 km. Sua bacia distribui-se na direo leste oeste entre
as serras do Mar e da Mantiqueira, chegando a mais de 2.000 m de latitude nos
pontos mais elevados (ANA, 2001).
Por apresentar diferentes caractersticas fsicas, o rio Paraba do Sul pode
ser dividido em quatro partes:
a) Curso Superior inicia-se desde a nascente at a cidade de Guararema, em
So Paulo, caracteriza-se por apresentar declives acentuados e regime
torrencial, tem extenso de 317 km.
b) Curso Mdio Superior possui 208 km de extenso e vai de Guararema (SP)
at Cachoeira Paulista (SP), nesse percurso o rio sinuoso e meandrado.
c) Curso Mdio Inferior est localizado entre os municpios de Cachoeira
Paulista (SP) e So Fidlis (RJ), tem uma extenso de 480 km, apresentando-se
com reas de cachoeiras.
d) Curso Inferior o trecho terminal do rio, indo de So Fidlis (RJ) sua foz,
em So Joo da Barra e possui 95 km.
O rio Paraba do Sul tem como seus principais afluentes, em sua margem
direita, os rios Bananal, Pira, Piabanha e Dois Rios, em sua margem esquerda,
os rios Jaguar, Paraibuna, Pirapetinga, Pomba e Muria (ANA, 2001). A bacia
do rio Paraba do Sul abrange 180 municpios e seu sistema hidrulico
composto por cinco reservatrios, Paraibuna, Jaguari, Santa Branca, Funil e
Santa Ceclia. A parte paulista da bacia est localizada entre as coordenadas
22o24 e 23o39 de latitude Sul e 44o10 e 46o26 de longitude Oeste (AGEVAP,
2010).

34

34

Urbanizao, uso e ocupao do solo do Vale do rio Paraba do Sul

De acordo com Santos e colaboradores (2006), as atividades antrpicas,

juntamente com o desenvolvimento, a urbanizao e a industrializao trazem
grandes impactos no ambiente, sobretudo aos importantes recursos hdricos.
A Tabela 5 demonstra quais as principais atividades que utiliza gua na
Bacia do rio Paraba do Sul.

Tabela 5 - Principais usos das guas da Bacia do rio Paraba do Sul

Usos da gua

Captao (m3s-1)

Consumo (m3s-1)

Abastecimento pblico

16,84

3,37

Uso industrial

13,65

6,19

Irrigao

49,73

30,28

Pecuria

3,45

1,73

Total

83,67

41,57

Fonte: Laboratrio de Hidrologia e Estudos do Meio Ambiente/COPPE/UFRJ (2002)

De acordo com dados da CETESB (2007), o ndice de coleta do esgoto

sanitrio das cidades da regio da Bacia do rio Paraba do Sul, em seu trecho
paulista, de 89%, mas apenas 37% desse efluente recebem tratamento. As
principais atividades de uso das guas desta bacia envolvem o abastecimento
pblico e industrial, a gerao de energia eltrica, o afastamento de esgoto
sanitrio e industrial e a irrigao de plantaes O lanamento de esgoto
sanitrio sem tratamento prvio em cursos dgua implica na contaminao
dessas guas por diversas substncias, inclusive desreguladores endcrinos.

35
35

4 MATERIAIS E MTODOS

4.1 Validao de mtodo para a quantificao dos hormnios sintticos

17-etinilestradiol e levonorgestrel e do hormnio natural 17-estradiol
utilizando-se cromatografia liquida de alta eficincia (HPLC)

4.1.1 Condies cromatogrficas para a determinao dos hormnios em

estudo

17-etinilestradiol - fase mvel: acetonitrila e gua ultrapura (50:50), 10

min, C-18 (Zorbax SB 4,6 x 250 mm, 5 m, Agilent Technologies) FLU
excitao: 230 nm; emisso: 306 nm, tempo de reteno: 8 min
Levonorgestrel - fase mvel: acetonitrila e gua ultrapura (50:50), 25
minutos, C-18 (Zorbax SB 4,6 x 250 mm, 5 m, Agilent Technologies) DAD
240 nm, tempo de reteno: 17,5 min
17estradiol - fase mvel: acetonitrila e gua ultrapura (60:40), 10 min,
coluna PAH (LiChrospher PAH, 250 x 4,6 mm, 5 m, Agilent Technologies), no
apresentou reprodutibilidade com a coluna C-18 (Zorbax SB 4,6 x 250 mm, 5
m, Agilent Technologies). FLU excitao: 230 nm; emisso: 306 nm, tempo
de reteno: 4,5 min
Condicionamento da coluna SPE utilizando bomba vcuo, o
condicionamento da coluna se d com 6 mL de hexano, seguido de 2 mL de
acetona, 6 mL de metanol e 10 mL de gua ultrapura pH 3.

36

36

4.1.2. Validao do mtodo para determinao dos hormnios em estudo

A validao do mtodo seguiu as recomendaes descritas na Resoluo

- RE 899 da AGNCIA NACIONAL DE VIGILNCIA SANITRIA (ANVISA)
(ANVISA, 2003). Nesta etapa todas as amostras foram preparadas com gua de
nascente e adio do analito em questo, ou seja, o padro dos hormnios foi
adicionado gua de nascente filtrada completando o volume de 200 mL. Aps
isso, a amostra sempre era extrada por SPE e analisada por HPLC/FLU/DAD.
A gua de nascente foi considerada como a matriz isenta dos hormnios
17-estradiol, 17-etinilestradiol e levonorgestrel. As etapas foram procedidas da
seguinte maneira:
Seletividade: A matriz utilizada pode conter interferentes, a seletividade
avalia o grau dessa interferncia, que pode ser oriunda de outra substncia,
produtos de degradao, compostos similares, etc. (ARAUJO, 2006). Nessa
etapa foi analisada uma amostra do branco, ou seja, a matriz sem o analito e
uma amostra com o analito, ou seja, gua ultrapura com o analito, ambos nas
mesmas condies cromatogrficas.
Limite de deteco (LD) e quantificao (LQ): O limite de deteco a
indicao da quantidade mnima que pode ser detectada, entretanto esse valor
no necessariamente exato. O limite de quantificao o mnimo possvel de
ser quantificado, tendo como resultado um valor exato (LANAS, 2004). Nessa
etapa foram preparadas diferentes concentraes do analito adicionado a gua
de nascente. O limite de deteco deve ser de duas a trs vezes maior do que o
rudo, j o limite de quantificao tem que ser no mnimo cinco vezes maior que
o rudo.
Limite Inferior de quantificao (LIQ): Sabendo-se a concentrao do
limite de quantificao (LQ) prepararam-se cinco amostras diferentes da mesma.
Havendo preciso e exatido dentro dos limites aceitveis, ou seja, preciso de
at 20% e exatido de 80 a 120%, admite-se esse valor como limite inferior de

37
37

quantificao (LIQ). Se no houver preciso e exatido aceitveis deve-se

aumentar a concentrao at obter os resultados considerados aceitveis.
Linearidade: A linearidade corresponde competncia do mtodo em dar
resultados diretamente proporcionais concentrao da substncia em exame,
dentro de uma determinada faixa de aplicao. O intervalo de trabalho expressa
a faixa entre a menor a maior concentrao dos padres usados na construo
do grfico de calibrao (BRITO et al., 2001).
A curva de calibrao foi determinada utilizando-se seis concentraes
diferentes, sendo que para cada concentrao foram feitas trs amostras. Para
que a curva fosse aceita o LIQ deve ter desvio de at 20% comparado com a
concentrao nominal e para as outras concentraes desvio de at 15%; e
coeficiente de correlao linear deve igual ou superior a 0,98.
Preciso e exatido: A preciso de um mtodo demonstrada quando
uma mesma amostra analisada varias vezes e os resultados so prximos
entre si; e a exatido de um mtodo demonstra a sua competncia de obter
resultados prximos ao valor real (BRITO et al., 2001). Foram feitas cinco
concentraes diferentes abrangendo as concentraes baixa, mdia e alta.
Para cada concentrao foram preparadas cinco amostras, as quais foram
extradas e analisadas. Essa etapa foi repetida duas vezes em dias diferentes
para determinar a preciso e exatido intra-corrida e inter-corridas, sendo que o
desvio ou coeficiente de variao deve ser de at 15% para todas as
concentraes, menos para o LIQ que admitido at 20%, e a exatido deve
estar entre 80 a 120%.
Recuperao: Esta etapa indica a eficincia da extrao dos hormnios
estudados atravs da tcnica de extrao por fase solida (SPE) (BRITO et al.,
2001). Nesta etapa prepararam-se cinco solues de concentrao diferentes
abrangendo novamente, concentrao baixa, mdia e alta, e para cada
concentrao fez-se trs amostras, que posteriormente foram extradas e
analisadas. Foram feitas tambm cinco solues de concentrao diferentes, e
para cada concentrao fez-se trs amostras, que no foram extradas por SPE,
38

38

ou seja, foram injetadas diretamente no HPLC/FLU/DAD. Os resultados obtidos

das amostras, que devem ser precisos e exatos, com extrao e sem extrao
por SPE foram comparados.

4.2

Identificao

quantificao

dos

hormnios

sintticos

17-

etinilestradiol e levonorgestrel e do hormnio natural 17-estradiol e de

amostras de gua do rio Paraba do Sul

quantificao

dos

hormnios

sintticos

17-etinilestradiol

levonorgestrel, e do hormnio natural 17-estradiol foi feita de acordo com as

normas da Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (ANVISA, 2003) Resoluo RE n 899, de 29 de maio de 2003, modificando-a para uma anlise utilizando-se
gua e esgoto como matriz.
Aps a coleta e devido armazenamento da gua do rio Paraba do Sul,
municpio de Pindamonhangaba, nos pontos 1 e 2 as amostras congeladas
foram transportadas em caixas termicamente isoladas ao municpio de So
Carlos. A continuao dos procedimentos ocorreu no Laboratrio de Qumica
Analtica Aplicada a Medicamentos e a Ecossistemas Aquticos e Terrestres, do
Instituto de Qumica de So Carlos, na Universidade de So Paulo, em So
Carlos.
O procedimento adotado para a utilizao das amostras foi o
descongelamento das mesmas, seguido por um processo de filtrao com
membrana de acetato celulose (0.45 m) e auxlio de uma bomba de vcuo,
para a remoo de partculas solidas em suspenso.
Aps a filtragem, o mtodo analtico utilizado para a extrao,
concentrao e quantificao dos hormnios nas amostras foi a extrao em
fase slida (SPE) e cromatografia lquida de alta eficincia (HPLC), A extrao e
concentrao dos hormnios estudados ocorreram atravs de uma fase slida
(SPE), com cartuchos C18 (Accu BondR II cartridge Agilent Technologies, West
Lothan, UK), como representado na Figura 4.

39
39

De acordo com a ANVISA, a validao deve garantir, por meio de estudos

experimentais, que o mtodo atenda s exigncias das aplicaes analticas,
assegurando a confiabilidade dos resultados. Para tanto, deve apresentar
preciso, exatido, linearidade, limite de deteco e limite de quantificao,
especificidade, reprodutibilidade, estabilidade e recuperao adequadas
anlise. Todos estes requisitos foram realizados para a validao da
metodologia modificada.

Figura 4 - Cartucho empregado na extrao em

fase solida (SPE) (Fonte: FALONE,
2007)

40

40

4.3 Coletas das amostras de gua no rio Paraba do Sul

As coletas no rio Paraba do Sul foram feitas em dois pontos localizados

na rea urbana do municpio de Pindamonhangaba / SP. O ponto1 localiza-se
prximo rea de captao de gua para abastecimento pblico do municpio
(Figura 5 a 8), (coordenadas UTM 45 16 60.94 m E, 74 66 11 1.14 m S).
O ponto 2 encontra-se aproximadamente 2,5 km jusante em relao ao
ponto 1 e coincide com o local de descarte da estao de tratamento de esgoto
do municpio de Pindamonhangaba (coordenadas UTM 45 25 07.00 m E; 74 66
12 9.00 m S) (Figura 9 a 11).

Figura 5 - Pontos de coleta de gua no rio Paraba do Sul para realizao de teste crnico
com espcie de peixe padronizada (Danio rerio) mantido em laboratrio e coleta
de amostras de gua.
Ponto 1- estao de captao para abastecimento pblico (Sabesp)
Ponto 2- local de despejo de efluente da estao de tratamento de esgoto

41
41

Figura 6 - Imagem do ponto de coleta de gua no rio Paraba do Sul para realizao
de teste crnico com espcie de peixe padronizada (Danio rerio) mantido
em laboratrio e coleta de amostras de gua. Ponto 1- estao de
captao para abastecimento pblico (Sabesp)

Figura 7 - Ponto de coleta de gua no rio Paraba do Sul para realizao de teste
crnico com espcie de peixe padronizada (Danio rerio) mantido em
laboratrio e coleta de amostras de gua. Ponto 1- estao de captao
para abastecimento pblico (Sabesp). Foto: Guilherme Casoni da Rocha.

42

42

Figura 8 - Ponto de coleta de gua no rio Paraba do Sul para realizao de teste
crnico com espcie de peixe padronizada (Danio rerio) mantido em
laboratrio e coleta de amostras de gua. Ponto 1- estao de captao para
abastecimento pblico (Sabesp). Foto: Guilherme Casoni da Rocha.

Figura 9 - Foto area aproximada do ponto de coleta de gua no rio Paraba do Sul
para realizao de teste crnico com espcie de peixe padronizada (Danio
rerio) mantido em laboratrio e coleta de amostras de gua. Ponto 2- local
de despejo de efluente da estao de tratamento de esgoto.

43
43

Figura 10 - Pontos de coleta de gua no rio Paraba do Sul para realizao de teste
crnico com espcie de peixe padronizada (Danio rerio) mantido em
laboratrio e coleta de amostras de gua. Ponto 2- local de despejo de
efluente da estao de tratamento de esgoto. Foto: Guilherme Casoni da
Rocha.

Figura 11 - Pontos de coleta de gua no rio Paraba do Sul para realizao de teste
crnico com espcie de peixe padronizada (Danio rerio) mantido em
laboratrio e coleta de amostras de gua. Ponto 2- local de despejo de
efluente da estao de tratamento de esgoto. Foto: Guilherme Casoni da
Rocha.

44

44

As coletas foram feitas com o auxilio de baldes amarrados com cordas, e

em todos os dias de coleta, a mesma, ocorreu no perodo da manh (8 - 9 horas)
(Figura 12 e 13). Logo em seguida coleta com baldes, a gua foi armazenada
em gales e encaminhada imediatamente ao laboratrio, onde as amostras
foram filtradas. Parte dessa gua foi prontamente utilizada para a realizao dos
testes toxicolgicos em aqurios com exemplares de Danio rerio, e parte foi
congelada e armazenada para ser posteriormente analisada quanto s
concentraes de hormnios.

Figura 12 - Coleta de gua dos pontos 1 e 2, com auxilio de balde e armazenamento em

gales. Foto: Guilherme Casoni da Rocha.

Figura 13 Material utilizado para a coleta de gua dos pontos 1 e 2 ocorreu

com auxilio de balde e armazenamento em gales. Foto:
Guilherme Casoni da Rocha.

45
45

4.4 Testes com Danio rerio

4.4.1 Aclimatao dos exemplares de Danio rerio utilizados nos testes com
gua do rio Paraba do Sul

Foram utilizados tanto nos ensaios in situ, quanto nos ex situ exemplares
de Danio rerio adquiridos junto a um produtor comercial de peixes ornamentais.
Os 300 animais (aprox.) adquiridos para cada um dos trs perodos de teses
eram do mesmo lote e ficaram em aclimatao por um perodo de 15 dias
antes de serem utilizados nos experimentos. Os animais foram mantidos em um
tanque contendo gua desclorada e recebendo rao comercial Tetra duas
vezes ao dia (manh e tarde).

4.4.2 Teste crnico in situ com Danio rerio em tanques rede mantidos no
rio Paraba do Sul

Foram feitos testes crnicos utilizando-se exemplares de Danio rerio

introduzidos nos Ponto 1 e 2 do rio Paraba do Sul, atravs da utilizao de
tanques-rede (Figura 14). Os testes foram feitos em 3 perodos, Teste 1 durante
o ms de dezembro, Teste 2 em abril e Teste 3 durante julho. Em cada um dos
experimentos foram utilizados 30 exemplares da D. rerio, sendo 15 machos e 15
fmeas. Os animais foram mantidos durante 21 dias nestes tanques rede,
consumindo alimento natural vindo da gua. Ao final deste prazo os peixes
foram anestesiados (banho em benzocana 4%), medidos e pesados, e
imediatamente congelados (COBEA, 1991). Para as anlises de VTG, foram
feitos extratos dos peixes, como descrito por Rose et al. (2002). Os peixes foram
macerados individualmente em soluo tampo sob refrigerao (50mM TrisHCl; pH 8,0; 0,02% Aprotinina, 0,1 mM PMSF) e em seguida centrifugados
5000xg por 60 min a 4oC. O sobrenadante foi armazenado a -70oC at o
momento das anlises.
46

46

Figura 14 - Tanque rede utilizado no teste crnico in situ com Danio rerio mantidos no
rio Paraba do Sul, municpio de Pindamonhangaba (Ponto 1). Foto:
Guilherme Casoni da Rocha.

4.4.3 Teste crnico ex situ com espcie de peixe padronizada (Danio rerio)

O local que em que ocorreu o teste crnico ex situ utilizando-se a espcie

Danio rerio como modelo foi o laboratrio do Setor de Aquicultura do Polo
Regional Vale do Paraba (Agencia Paulista de Tecnologia dos Agronegcios,
Secretaria de Agricultura e Abastecimento). Os testes foram realizados
concomitantemente ao teste crnico com tanques rede (Teste 1- dezembro;
Teste 2- abril e Teste 3- julho.
Para a realizao dos testes foram utilizados aqurios de vidro com
capacidade de 10 litros. Foram testadas 5 diferentes condies (tratamentos) de
gua nos aqurios, sendo os seguintes grupos:

47
47

1- grupo controle: gua desclorada (controle)

2- captao para abastecimento 100%: 100% gua do rio ponto 1(ETA 100%)
3- captao para abastecimento 50%: 50% gua do rio ponto 1 e 50% gua
desclorada (ETA 50%)
4- efluente da estao de tratamento de esgoto 100% - 100% gua do rio ponto
2 (ETE 100%)
5- efluente da estao de tratamento de esgoto 50% - 50% gua do rio ponto 2 e
50% gua desclorada (ETE 50%).

O delineamento do teste foi o seguinte:

Foram feitas quadruplicatas de cada um dos 5 tratamentos propostos
(controle, ETA 100%, ETA 50%, ETE100% e ETE 50%) totalizando 20 aqurios.
Diariamente, no perodo da manh (entre 8 e 9 horas), foi coletada gua do rio
Paraba do Sul, nos dois pontos estudados, estao de captao para
abastecimento publico (Ponto 1) e local de despejo de efluente da estao de
tratamento de esgoto (Ponto 2) (Figuras 13 e 14). Os testes crnicos seguiram a
uma adaptao da metodologia proposta pela Organisation for Economic CoOperation and Development (OECD) (OECD, 1996 e 2006).
Os aqurios foram mantidos sob fotoperodo natural e em sistema semiesttico com aerao, havendo, diariamente a substituio de 50% de seu
volume. Foram mantidos 10 indivduos de Danio rerio em cada um dos aqurios,
sendo que 5 animais eram machos e 5 fmeas. A alimentao fornecida aos
peixes deu-se atravs da distribuio de rao comercial especfica para peixes
Tetra o arraoamento era repetido duas vezes ao dia, sempre no perodo
manh e da tarde (Figuras 15, 16 e 17). Os testes crnicos tiveram a durao de
21 dias.
Foram determinados parmetros fsico-qumicos de qualidade da gua
dos aqurios durante os 21 dias de testes. Os parmetros verificados com o
48

48

equipamento de determinao multiparmetros da marca Horiba foram o

potencial hidrogeninico (pH), a condutividade eltrica (S/cm), o oxignio
dissolvido (mg/L) e temperatura (C). Os resultados foram comparados com a
utilizao de testes estatsticos (Teste de Tukey).

Figura 15 - Aqurios de vidro utilizados no teste crnico com espcie de peixe

padronizada (Danio rerio) em laboratrio. Foto: Guilherme Casoni
da Rocha.

49
49

Figura 16 - Aqurios de vidro utilizados no teste crnico com espcie de peixe

padronizada (Danio rerio) em laboratrio. Foto: Guilherme Casoni
da Rocha.

Figura 17 - Aqurios de vidro utilizados no teste crnico (grupo controle) com

espcie de peixe padronizada (Danio rerio) em laboratrio. Foto:
Guilherme Casoni da Rocha.

50

50

4.5 Determinao da concentrao de vitelogenina em peixes

Aps a realizao dos testes crnicos com a utilizao de exemplares de

Danio rerio mantidos em tanques rede nas guas do no rio Paraba do Sul e em
laboratrio por 21 dias, os peixes foram devidamente conservados congelados.
A quantificao de vitelogenina foi feita no Laboratrio do Setor de Aquicultura
do Polo Regional Vale do Paraba.
Para que as analises de quantificao de vitelogenina fossem feitas, os
animais foram descongelados e macerados individualmente em soluo tampo
sob refrigerao (50mM Tris-HCl; pH 8,0; 0,02% Aprotinina, 0,1 mM PMSF) e em
seguida centrifugados 5000xg por 60 min a 4oC. O sobrenadante foi separado e
armazenado a -70oC at o momento da quantificao de VTG (ROSE et al.,
2002).
As

anlises

da

vitelogenina

foram

feitas

atravs

de

ensaios

imunoenzimticos pelo mtodo ELISA indireto (Enzyme-linked immunosorbent

assay), tcnica que utiliza o principio da interao antgeno-anticorpo com
marcadores enzimticos, conforme descrito por Goksoyr (1991).

Para a

quantificao de vitelogenina utilizou-se um kit de ELISA especifico para a

quantificao de vitelogenina de Danio rerio. O teste de ELISA escolhido
composto por cinco fases, de acordo com as instrues elaboradas pela
empresa Biosense Laboratories fabricante do Kit.
1 - Fase - Preparo das diluies do padro e das amostras
Iniciou-se o teste com o preparo dos padres, reagentes e tampes
necessrios.
O padro de VTG de Danio rerio foi diludo em concentraes que
variaram de 125 a 0,12 ng mL-1. As amostras de peixes foram diludas em 1:500
e 1: 1 800.000. Ambas as diluies foram feitas utilizando-se o tampo de
diluio.

51
51

2 - Fase Incubao com padres e amostras diludas

Aps as diluies estarem feitas, pipetou-se 100 l de tampo de diluio,
100 l do padro em suas diversas concentraes e 100 l das amostras de
peixes (previamente diludas). As placas cobertas ficaram em incubao por um
perodo de 1 hora temperatura ambiente.
3 - Fase Incubao com anticorpo de deteco
Aps a incubao da fase anterior lavou-se as placas por trs vezes cada,
com o tampo de lavagem. Em seguida foram adicionados 100 l/poo de
anticorpo de incubao, em todas as placas. As mesmas foram cobertas e
permaneceram em incubao por 1 hora temperatura ambiente.
4 - Fase Incubao com anticorpo secundrio
Esta fase consiste em lavar as placas trs vezes com tampo de lavagem
e posteriormente adicionar 100 l/poo de anticorpo secundrio, cobrir as placas
e incubar por 1 hora em temperatura ambiente.
5 Fase Revelao
A ltima fase do teste incluiu a lavagem das placas por trs vezes cada, a
adio de 100 l/poo de soluo substrato e incubao por 30 minutos das
placas cobertas com papel alumnio. Por final, adicionou-se 50 L de H2SO4 2M
a cada poo, e realizou-se a leitura de absorbncia utilizando-se um leitor de
microplacas ajustado para 492nm.
Aps os clculos dos resultados, os dados obtidos foram submetidos
testes estatsticos, para comparao dos tratamentos entre si, e comparao
com o grupo controle por meio do Teste de Kruskal-Wallis e Teste de Dunnett.

52

52

4.6. Estudo de dados referentes potencial contaminao de gua com

desreguladores endcrinos nos de municpios da UGRHI 2 Paraba do Sul

Foi feito um levantamento de dados, obtidos atravs de estudos de

rgos estatais que abrangeram os seguintes municpios pertencentes UGRHI
2 Paraba do Sul (Figura 18):
Aparecida,

Caapava,

Guaratinguet,

Jacare,

Lorena,

Paraibuna,

Pindamonhangaba, Queluz, Santa Branca, So Jos dos Campos, Taubat e

Trememb.

Figura 18 - Mapa da regio do Vale do Paraba. Fonte: CETESB, 2011

53
53

Aps o levantamento e anlise desses estudos, foram selecionados as

seguintes variveis para serem utilizadas:

Qualidade de gua
Coliformes termotolerantes
Uma alta concentrao de coliformes termotolerantes um dos mais
importantes e precisos indicadores da presena de esgoto sanitrio em corpos
dgua. A metodologia utilizada pela CETESB a tcnica de membrana filtrante,
Norma Tcnica CETESB L5.221, (CETESB, 2012).

ndice de Coleta e Tratabilidade de Esgoto da Populao Urbana de

Municpio ICTEM
ndice criado para avaliar a remoo da carga orgnica que a populao
produz anteriormente ao seu lanamento nos corpos dgua. Esse ndice
usado para comparar a eficincia obtida pelo servio pblico de tratamento de
esgoto dos diversos municpios. A criao do ndice considerou as seguintes
variveis (CETESB, 2012):
a) Coleta;
b) Existncia e eficincia do sistema de tratamento do esgoto coletado;
c) A efetiva remoo da carga orgnica em relao carga potencial;
d) A destinao adequada de lodos e resduos gerados no tratamento;
e) O no desenquadramento da classe do corpo receptor pelo efluente tratado e o
lanamento direto e indireto de esgotos no tratados.

ndice de Qualidade das guas - IQA

Indicador criado com o intuito de indicar a descarga de efluentes
sanitrios em corpos dgua, entretanto pode indicar algum tipo de
contaminao de ordem industrial, desde que a sua origem seja composta por
54

54

orgnicos biodegradveis. O IQA uma adaptao feita pela CETESB do

resultado de um estudo norte americanos de 1970 e composto por 9
parmetros referentes qualidade de gua (CETESB, 2012).

ndice de Qualidade das guas Brutas para Fins de Abastecimento Pblico

- IAP
ndice que rene informaes do IQA e o ndice de Substncias Txicas e
Organolpticas. O IAP somente aplicado aos pontos que so localizados nos
locais de captao de gua para abastecimento publico. Com o objetivo de
trazer informaes referentes gua que ir ser fornecida populao atravs
dos sistemas pblicos de abastecimento (CETESB, 2012).

ndice de qualidade de gua para proteo da Vida Aqutica

IVA

Indica a qualidade dos corpos dgua, levando em considerao os

parmetros essenciais vida da biota aqutica. Para que isso seja possvel so
utilizadas variveis fsico-qumicas e toxicologias (CETESB, 2012).

ndice de Estado Trfico IET

Indica o grau de trofia de determinado corpo dgua, determinado pelo
enriquecimento por nutrientes que pode levar ao crescimento exacerbado de
algas e cianobactrias. So utilizados para a determinao desse ndice a
varivel fsforo total e clorofila a (CETESB, 2012).

Dinmica Populacional

Dados socioeconmicos referentes aos municpios estudados foram obtidos

de trabalhos de estudos do IBGE e Fundao SEADE (SEADE, 2012), Foram
selecionados as seguintes variveis para serem utilizadas:

55
55

 Populao

Instituto

Brasileiro

de

Geografia

Estatstica

IBGE.

Fundao SEADE.
As populaes aqui apresentadas resultam de projees elaboradas pelo
mtodo dos componentes demogrficos. Este mtodo considera as tendncias
de fecundidade, mortalidade e migrao, a partir das estatsticas vitais
processadas na Fundao SEADE, e a formulao de hipteses de
comportamento futuro para estes componentes. A populao de base, por idade
e sexo, considera os resultados correspondentes aos diversos Censos
Demogrficos realizados pelo IBGE. As populaes projetadas referem-se a 1
de julho de cada ano.
Razo de sexos - Fundao SEADE
Nmero de homens para cada 100 mulheres na populao residente em
determinada rea, no ano considerado.
Taxa Geomtrica de Crescimento Anual da Populao 2000/2010 (% a.a.) Instituto Brasileiro de Geografia e Estatstica IBGE e Fundao SEADE
Expressa, em termos percentuais, o crescimento mdio da populao em
determinado perodo de tempo, no caso 2000 - 2011. Geralmente, considera-se
que a populao experimenta um crescimento exponencial ou geomtrico.

Produo Pecuria (bovinos, sunos e ovinos)

Bovinos Rebanho (em cabeas) - Instituto Brasileiro de Geografia e
Estatstica IBGE. Produo da Pecuria Municipal PPM.
Sunos Rebanho (em cabeas) - Instituto Brasileiro de Geografia e Estatstica
IBGE. Produo da Pecuria Municipal PPM.

56

56

 Ovinos Rebanho (em cabeas) - Instituto Brasileiro de Geografia e Estatstica

IBGE. Produo da Pecuria Municipal PPM.
Efetivo dos rebanhos existentes em 31 de dezembro de cada ano, em
estabelecimentos agropecurios, militares, coudelarias particulares ou jqueisclubes e quaisquer criaes particulares mantidas por pessoa fsica ou jurdica
em imveis das zonas urbana, suburbana ou rural.
Produo Pecuria = n de cabeas de bovinos + (n de cabeas de sunos x
0,5988*) + (n de cabeas de ovinos x 0,1395*)
* Para obter a equivalncia entre as diferentes atividades agropecurias
utilizadas como variveis no IPM, criou-se fatores de multiplicao (sunos=
0,5988 e ovinos= 0,1395) que se referem quantidade de hormnios excretados
pelas diferentes atividades desenvolvidas (Tabela 6).

Tabela 6 - Fator de equivalncia entre as diferentes atividades desenvolvidas.

Hormnios excretados

Fator de multiplicao do

(mdia em g/dia/animal)

IPM

Bovinocultura

172

Suinocultura

103

0,5988

Ovinocultura

24

0,1395

Atividade

4.6.1 ndice de Prioridade dos Municpios IPM

Considerando os dados de qualidade de gua, dinmica populacional e

produo pecuria, anteriormente citados, foi criada uma classificao capaz de
indicar os municpios com maior potencial de lanamento de desreguladores
endcrinos e, portanto, prioritrios para serem monitorados, de acordo com suas
caractersticas de ocupao antrpica da rea de estudo.

57
57

A metodologia proposta foi construda a partir de informaes

processadas com ferramenta de SIG, no caso ArcGIS. O ndice que ser criado IPM (ndice de Prioridade dos Municpios) - reflete em quais municpios as aes
visando monitoramento das atividades antrpicas associadas conservao dos
recursos naturais e biodiversidade, deveriam ser priorizadas junto ao poder
pblico.
A primeira operao realizada para a elaborao do ndice foi calcular
todas as variveis supracitadas para os municpios de interesse do estudo. Aps
a atribuio de valores s variveis que comporo o ndice (tabela 7) para os
municpios de interesse do presente estudo da UGRHI 2 Paraba do Sul foram
gerados 4 documentos cartogrficos identificando os municpios, contendo a
priorizao dos locais em relao ao monitoramento de contaminao por
desreguladores endcrinos. Tal documento foi criado com base em um ndice
aritmtico operacionalizado por meio de Sistemas de Informaes Geogrficas
(doravante SIGs).
Para facilitar a operacionalizao do ndice os resultados obtidos foram
classificados, sendo distribudos em classes. As classes criadas sero as
seguintes:
Qualidade da gua - ruim, regular, bom e timo
Dinmica Populacional - inadequada, pouco adequada, adequada e ideal
Produo Pecuria - acima da mdia e abaixo da mdia
ndice de Prioridade dos Municpios ruim, regular, bom e timo
Os valores foram distribudos em classes a partir do clculo dos quartis do
conjunto de valores de IPM de cada um dos municpios.

58

58

Tabela 7 - Indicadores que compem o ndice, variveis e

respectivas fontes de referncia.
IPM - Atividade Estrognica
INDICADOR
I
II
III
IV
V
VI

Qualidade das guas

superficiais
Coleta e tratamento de
efluentes
Qualidade das guas
superficiais
Qualidade das guas
superficiais
Qualidade das guas
superficiais
Qualidade das guas
superficiais

VII
VIII

Populao total
Populao masculina e
feminina

IX

Crescimento populacional

Produo pecuria

VARIVEIS

FONTE

Coliformes termotolerantes

CETESB

ICTEM

CETESB

IQA

CETESB

IAP

CETESB

IVA

CETESB

IET

CETESB

Numero total de habitantes

IBGE

Razo de sexos

IBGE

Taxa de geomtrica de

IBGE.

crescimento

SEADE

Bovinocultura, suinocultura e
ovinocultura

IBGE

ICTEM - ndice de Coleta e Tratabilidade de Esgoto da Populao Urbana de

Municpio; IQA ndice de Qualidade das guas; IAP ndice de Qualidade das guas
Brutas para Fins de Abastecimento Pblico; IVA ndice de qualidade de gua para
proteo da Vida Aqutica; IET ndice de Estado Trfico; CETESB Companhia de
Tecnologia de Saneamento Ambiental; IBGE - Instituto Brasileiro de Geografia e
Estatstica e SEADE Fundao Sistema Estadual de Analises de Dados

O ndice criado - IPM (ndice de Prioridade dos Municpios) - reflete em quais

municpios as aes visando monitoramento das atividades antrpicas
relacionadas qualidade dos recursos hdricos deveriam ser priorizadas junto ao
poder pblico.

59
59

O ndice foi calculado da seguinte maneira:

IPM = I + II + III + IV + V + VI + VII +VIII + IX + X
Onde (tabela 8),
Tabela 8 - Indicadores que compem o ndice, variveis e respectivos
valores na equao
IPM - Atividade Estrognica
INDICADORES
I

II

III

IV

VI

VII

VIII

IX

VARIVEIS

VALORES NA EQUAO

Qualidade das guas

Coliformes

>Padro CONAMA 357/05= 1

superficiais

termotolerantes

< Padro CONAMA 357/05= 2

Coleta e tratamento de
efluentes
Qualidade das guas
superficiais
Qualidade das guas
superficiais
Qualidade das guas
superficiais
Qualidade das guas
superficiais

Populao total
Populao masculina e
feminina
Crescimento
populacional

ICTEM

IQA

IAP

IVA

Produo pecuria

>Mdia estadual= 2
Pssimo=1; Ruim= 2; Regular= 3;
Bom= 4; timo= 5
Pssimo=1; Ruim= 2; Regular= 3;
Bom= 4; timo= 5
Pssimo=1; Ruim= 2; Regular= 3;
Bom= 4; timo= 5
Hipereutrfico=1; Supereutrfico=2;

IET

Eutrfico=3; Mesotrfico=4;
Oligotrfico=5; Ultraoligotrfico=6

Nmero total de

>Mdia dos municpios estudados= 1

habitantes

<Mdia dos municpios estudados= 2

Razo de sexos
Taxa de
geomtrica de
crescimento
Bovinocultura,

<Mdia estadual= 1

suinocultura e
ovinocultura

>n mulheres= 1
<n mulheres= 2
>Mdia dos municpios estudados= 1
<Mdia dos municpios estudados= 2
>Mdia dos municpios estudados= 1
<Mdia dos municpios estudados= 2

ICTEM - ndice de Coleta e Tratabilidade de Esgoto da Populao Urbana de Municpio;

IQA ndice de Qualidade das guas; IAP ndice de Qualidade das guas Brutas para
Fins de Abastecimento Pblico; IVA ndice de qualidade de gua para proteo da Vida
Aqutica; IET ndice de Estado Trfico

60

60

Com

base

nos

resultados

obtidos

foram

desenvolvidos

mapas

demonstrando quais os municpios deveriam ser considerados prioritrios para

os estudos de monitoramento relativo contaminao por desreguladores
endcrinos.

61
61

5 RESULTADOS E DISCUSSO
5.1 Validao de mtodo analtico para a quantificao dos hormnios
sintticos 17-etinilestradiol e levonorgestrel e do hormnio natural 17estradiol utilizando-se cromatografia liquida de alta eficincia (HPLC)

Os parmetros utilizados para a validao do mtodo para a quantificao

de hormnios em amostras de gua com o emprego de HPLC foram
seletividade, limite de deteco (LD), limite de quantificao (LQ), limite inferior
de quantificao (LIQ), linearidade, preciso e exatido intra-corrida e intercorrida e por ltimo, recuperao.

Seletividade

Para demonstrar a seletividade do hormnio sinttico 17etinilestradiol

foi coletada gua de uma nascente, que em seguida foi extrada por SPE. Foi
feita tambm uma amostra de 200 mL diluindo o padro de 100 mgL-1 do
hormnio em gua ultrapura at obter a concentrao de 40 gL-1, que tambm
se extraiu por SPE (Figura 19). As amostras foram submetidas anlise por
HPLC/FLU. Para a determinao da seletividade do hormnio 17-estradiol, foi
adotado o mesmo procedimento (Figura 20).
Quando o hormnio utilizado para a determinao da seletividade o
levonorgestrel a anlise tambm utiliza gua de nascente filtrada extrada por
SPE. Entretanto para a anlise da amostra com o padro do hormnio fez-se a
diluio a partir de 100 mgL-1 do levonorgestrel em gua ultrapura at resultar na
concentrao de 100 gL-1 e no volume final de 200 mL, logo aps fez-se
extrao por SPE. As amostras foram analisadas por HPLC/DAD (Figura 21).
Os tempos de reteno obtidos foram: 8,19 min para o hormnio 17
etinilestradiol, 4,59 min para o17-estradiol e 17,41 min levonorgestrel.

62

62

branco
-1
40 g.L
300
250

LU

200
150
100
50
0
0

10

min

LU

Figura 19 - Seletividade do hormnio 17etinilestradiol analisada por HPLC/FLU.

360
340
320
300
280
260
240
220
200
180
160
140
120
100
80
60
40
20
0
-20

Branco
-1
40 g.L

10

min

Figura 20 - Seletividade do hormnio 17-estradiol analisada por HPLC/FLU.

63
63

140

Branco
-1
100 g.L

120
100

mAU

80
60
40
20
0
0

10

15

20

25

min

Figura 21 - Seletividade do hormnio levonorgestrel analisada por HPLC/DAD.

As anlises dos cromatogramas apontam que os picos que os hormnios

produzem so vlidos, pois no apresentam outros picos prximos que possam
induzir a uma interpretao errnea dos cromatogramas produzidos durante o
processo de validao do mtodo.

Limite de deteco (LD) e quantificao (LQ)

Segundo a RE- 899 de 2003 da Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria

(ANVISA, 2003) o limite de deteco deve ser de duas a trs vezes maior do que
o rudo, j o limite de quantificao tem que ser no mnimo cinco vezes maior
que o rudo e tambm deve ter preciso e exatido dentro dos limites aceitveis,
ou seja, preciso de at 20% e exatido de 80 a 120%.
Amostras foram preparadas diluindo o padro preparado com gua de
nascente filtrada, com posterior extrao em SPE e anlise por HPLC. As
concentraes analisadas foram 25; 50; 100 e 150 ngL-1 para o 17
etinilestradiol, 17estradiol e levonorgestrel (Tabela 9).
Estudos

desenvolvidos

por

diversos

autores

(GHISELLI,

2006;

RAIMUINDO 2007; MOURA, 2009; OTOMO, 2010) sugerem limites de deteco

e de quantificao dos hormnios em questo, em concentraes semelhantes
64

64

ou superiores s obtidas na Tabela 9. Alm disso, as quantidades de hormnio

detectadas, em amostras de gua destes estudos indicam que os limites de
deteco e de quantificao destacadas na Tabela 7, so adequadas proposta
apresentada pelo presente estudo.
Tabela 9 - Limite de deteco e limite de quantificao do mtodo para anlise
dos hormnios 17etinilestradiol, 17estradiol e levonorgestrel,
volume de injeo: 20 L.
Hormnio
LD (ngL-1)
LQ (ngL-1)
17 etinilestradiol

25

100

17 estradiol

100

150

Levonorgestrel

50

150

LD- limite de deteco e LQ- limite de quantificao

Limite inferior de quantificao

Prepararam-se cinco amostras diferentes com a mesma concentrao

para cada hormnio, sendo utilizada a concentrao encontrada para o LQ, ou
seja, cinco amostras de 100 ngL-1 para o 17-etinilestradiol, cinco amostras de
150 ngL-1 para 17-estradiol e cinco amostras de 150 ngL-1 para levonorgestrel.
Todas as amostras foram preparadas diluindo-se o padro preparado com gua
de nascente filtrada, com extrao e anlise por HPLC.
Como as amostras para cada hormnio apresentaram preciso menor
que 20% e exatido entre 80 a 120%, portanto a concentrao referente ao
limite de quantificao (LQ) considerada como limite inferior de quantificao
(LIQ) (Tabela 10).

65
65

Tabela 10 - Preciso e exatido do limite de quantificao dos hormnios 17etinilestradiol, 17-estradiol e levonorgestrel, volume de injeo: 20
L.
Hormnio
LIQ (ngL-1)
DPR (%)
Exatido (%)
17-etinilestradiol

100

5,48818

105,318

17-estradiol

150

5,24162

113,813

Levonorgestrel

150

7,906

88,6457

LIQ- limite inferior de quantificao e DPR- desvio padro relativo

Linearidade

Para cada curva foram feitas seis concentraes diferentes e para cada
concentrao foram feitas trs amostras.

17-etinilestradiol

A concentrao utilizada para cada soluo de 17-etinilestradiol foi: para

a primeira linearidade 0,10; 0,20; 0,40; 0,6; 0,8 e 1,0 gL-1 (Figura 22); para a
segunda linearidade 1,0; 2,0; 4,0; 6,0; 8,0 e 10,0 gL-1 (Figura 23); j para a
terceira e mais alta linearidade 10,0; 15,0; 20,0; 30,0; 40,0 e 50,0 gL-1 (Figura
24).

66

66

Figura 22 - Linearidade do hormonio 17-etinilestradiol em concentraes de

0,10 a 1,0 gL-1.

3,5

log [rea]

3
2,5
2

y = 1,159x + 2,1364
R = 0,983972

1,5
1
0,5
0

0,2

0,4

0,6

log

0,8

1,2

[g.L-1]

Figura 23 - Linearidade do hormonio17-etinilestradiol em concentraes de

1,0 a 10,0 gL-1

67
67

y = 73,443x + 1062,8
R = 0,99358

Figura

68

24 -. Linearidade do hormonio
concentraes de 10,0 a 50,0 gL-1.

17-etinilestradiol

em

68

17-estradiol

A concentrao utilizada de cada soluo para a linearidade baixa do

17-estradiol foi 0,15; 0,50; 1,50; 3,0; 4,0 e 5,0 gL-1 (Figura 25). J para a
linearidade alta utilizou-se 5,0; 7,0; 14,0; 21,0; 28,0; 35,0 e 42,0 gL-1 (Figura
26).

y = 198,46x + 42,369
R = 0,9973

Figura 25 - Linearidade do hormonio 17-estradiol em concentraes de 0,15 a

5,0 gL-1.

y = 68,197x + 784,04
R = 0,99489

Figura 26 - Linearidade do hormonio 17-estradiol em concentraes de 5,0 a 42 gL-1.

69
69

Levonorgestrel

Para determinar a linearidade do levonorgestrel foram utilizadas solues

nas seguintes concentraes para a linearidade baixa 0,15; 0,50; 1,0; 3,0; 6,0 e
10,0 gL-1 (Figura 27). J para a linearidade alta utilizou-se 10,0; 70,0; 140,0;
210,0; 280,0 e 360,0 gL-1 (Figura 28).

y = 38,416x + 20,933
R = 0,99116

Figura 27 - Linearidade do hormnio levonorgestrel em concentraes de 0,15 a

10,0 gL-1

y = 33,729x + 306,01
R = 0,98311

Figura 28 - Linearidade do hormnio levonorgestrel em concentraes de 10,0 a 360,0

gL-1.

70

70

Todas as curvas apresentaram LIQ com desvio de at 20% comparada

com a concentrao nominal e as outras concentraes desvio de at 15%,
dados de acordo com as normas da Agencia Nacional de Vigilncia Sanitria
(ANVISA, 2003). Os coeficientes de correlao linear das curvas tambm esto
dentro dos parmetros, ou seja, so superiores a 0,98.

Preciso e exatido

Para determinar a preciso e exatido do mtodo para a anlise de cada

hormnio foram preparadas cinco solues com concentraes diferentes,
abrangendo concentrao baixa, mdia e alta, sendo que para cada
concentrao preparam-se cinco amostras. Esse procedimento foi feito duas
vezes em dias diferentes (Tabelas 11 a 13).

Tabela 11 - Determinao da preciso e exatido para hormnio 17etinilestradiol em cinco solues com concentraes diferentes,
abrangendo concentrao baixa, mdia e alta.
Primeiro dia

Segundo dia

gL-1

DPR (%)

Exatido (%)

DPR (%)

Exatido (%)

0,1

6,35743

96,4983

9,01885

89,3539

1,0

0,30124

89,8335

2,7288

86,9982

10,0

2,02653

98,4252

1,17071

97,2027

20,0

3,32837

115,479

1,25749

110,623

40,0

4,66123

104,16

1,47401

116,735

DPR- desvio padro relativo

71
71

Tabela 12 - Determinao da preciso e exatido para hormnio 17-estradiol

em cinco solues com concentrao diferente abrangendo
concentrao baixa, mdia e alta.
Primeiro dia
-1

Segundo dia

gL

DPR (%)

Exatido (%)

DPR (%)

Exatido (%)

0,15

4,09172

108,425

0,15

6,68967

1,40938

99,9965

1,91738

20

5,51276

113,654

20

4,65724

35

2,56289

108,652

35

0,56995

DPR- desvio padro relativo

Tabela 13 - Determinao da preciso e exatido para hormnio Levonorgestrel

em cinco solues com concentrao diferente abrangendo
concentrao baixa, mdia e alta.
Primeiro dia

Segundo dia

gL-1

DPR (%)

Exatido (%)

DPR (%)

Exatido (%)

0,15

1,91733

114,358

0,15

2,63658

10

0,73377

104,694

10

0,32234

150

4,47935

111,797

150

0,43879

300

14,6866

88,3412

300

2,61569

DPR- desvio padro relativo

Todas as solues com diferentes concentraes apresentaram preciso

ou desvio padro relativo (DPR) de at 15%, ou seja, encontram-se dentro dos
parmetros. A exatido de todas as concentraes tambm est de acordo com
a norma que de 80 a 120% (ANVISA, 2003).

72

72

Recuperao

Para cada hormnio foram preparadas cinco solues com concentrao

diferente abrangendo concentrao baixa, mdia e alta, e para cada
concentrao prepararam-se trs amostras, que posteriormente foram extradas
e analisadas por HPLC/FLU/DAD. Foram preparadas tambm cinco solues
com concentrao diferente (Tabela 14), para 17-etinilestradiol e quatro para
17-estradiol e levonorgestrel, para cada concentrao foram feitas trs
amostras, que no foram extradas por SPE, ou seja, foram injetadas
diretamente no HPLC/FLU/DAD. Os resultados obtidos das amostras, que
devem ser precisos e exatos, com extrao e sem extrao por SPE foram
comparados.

Tabela 14 - Concentraes utilizadas para determinao da recuperao dos

hormnios 17-etinilestradiol, 17-estradiol e levonorgestrel
analisadas atravs por HPLC/FLU/DAD
17-etinilestradiol
gL

-1

17-estradiol

Recuperao (%)

gL

0,1

84,34565842

1,0

-1

Levonorgestrel
-1

Recuperao (%)

gL

Recuperao (%)

0,15

83,69035333

0,15

83,90236513

87,3191796

96,41461402

10

85,98774593

10,0

87,01146621

20

88,60509742

150

94,8447753

20,0

87,61957872

35

87,4859852

300

81,05947567

40,0

103,458294

Com a validao do mtodo de quantificao dos hormnios 17etinilestradiol,

17-estradiol

levonorgestrel

concludas,

seguindo

as

recomendaes propostas pela ANVISA (2003), foram possveis as anlises das

amostras de gua coletadas no rio Paraba do Sul. Essas amostras foram
obtidas com freqncia mensal durante o perodo de 1 ano nos dois pontos
estudados do rio Paraba do Sul, no municpio de Pindamonhangaba.

73
73

5.2

Identificao

quantificao

dos

hormnios

sintticos

17-

etinilestradiol e levonorgestrel e do hormnio natural 17-estradiol e de

amostras do rio Paraba do Sul atravs de anlise cromatogrfica

As amostras de gua do rio Paraba do Sul, aps passarem pelos

procedimentos de coleta, armazenamento, transporte, filtragem, extrao e
concentrao em fase slida (SPE), tiveram como ultima etapa para a
quantificao dos hormnios sintticos e naturais de interesse, a utilizao da
tcnica de cromatografia liquida de alta eficincia (HPLC). A quantificao dos
hormnios seguiu a metodologia validada com base na RE-899 de 2003 da
ANVISA (ANVISA, 2003).
A seguir, sero apresentados alguns cromatogramas das anlises da
gua coletada no rio Paraba do Sul. No sero apresentados todos os
cromatogramas referentes a todas as amostras, porque em sua grande maioria
no foi possvel identificar picos referentes aos compostos estudados com o
mtodo empregado.

5.2.1 Levonorgestrel

Referente ao hormnio sinttico levonorgestrel, temos o cromatograma

(Figura 29) comparando duas amostras, uma somente com gua ultra pura
(branco) e outra contendo levonorgestrel (100 gL-1). O pico referente ao
hormnio levonorgestrel tem o tempo de reteno em 17,41min.

74

74

140

Branco
-1
100 g.L

120
100

mAU

80
60
40
20
0
0

10

15

20

25

min

Figura 29 - Cromatograma demonstrando o tempo de reteno do hormnio

sinttico levonorgestrel (100gL-1) analisado por HPLC/FLU. Branco =
gua ultra pura.

Analisando os cromatogramas das amostras coletadas mensalmente

durante o perodo de 1 ano, no foi possvel observar a presena do hormnio
levonorgestrel, cujo tempo de reteno de 17,41 min, em quantidades at o
limite de deteco do mtodo. As Figuras 30 e 31 so referentes aos
cromatogramas de amostras coletadas no vero e no inverno no Ponto 1,
enquanto as figuras 32 e 33 so referentes ao Ponto 2, tambm coletadas no
perodo do vero e inverno.
Foram escolhidos os cromatogramas resultantes da anlise das amostras
do vero e inverno, pois, representam os perodos de mxima e mnima
precipitao (CIIAGRO, 2012), portanto, de maior e menor diluio dos
contaminantes presentes na gua do rio Paraba do Sul.

75
75

Figura 30 - Cromatograma do extrato da amostra de gua coletada no Ponto 1 do

rio Paraba do Sul, local prximo estao de captao de gua para
abastecimento pblico (ETA) do municpio de Pindamonhangaba, no
perodo do vero. Segundo o mtodo para anlise do hormnio
levonorgestrel.

Figura 31 - Cromatograma do extrato da amostra de gua coletada no Ponto 1 do

rio Paraba do Sul, local prximo estao de captao de gua para
abastecimento pblico (ETA) do municpio de Pindamonhangaba, no
perodo do inverno. Segundo o mtodo para anlise do hormnio
levonorgestrel.

76

76

Figura 32 - Cromatograma do extrato da amostra de gua coletada no Ponto 2

do rio Paraba do Sul, local prximo ao lanamento de efluente da
estao de tratamento de esgoto (ETE) do municpio de
Pindamonhangaba, no perodo do vero. Segundo o mtodo para
anlise do hormnio levonorgestrel.

Figura 33 - Cromatograma do extrato da amostra de gua coletada no Ponto 2

do rio Paraba do Sul, local prximo ao lanamento de efluente da
estao de tratamento de esgoto (ETE) do municpio de
Pindamonhangaba, no perodo do inverno. Segundo o mtodo para
anlise do hormnio levonorgestrel.

77
77

Seguido recomendao da resoluo ANVISA 899/2003 foi feita a

fortificao de algumas amostras. Utilizando um padro de 150 g L-1 do
hormnio sinttico levonorgestrel, onde foi confirmada a ausncia do hormnio
nas amostras dos pontos 1 e 2.
Verifica-se no cromatograma da Figura 34, que a amostra coletada no
Ponto 1 (ETA), em vermelho, e a amostra fortificada com 150 g L-1 do
hormnio, em azul, onde se observa a ausncia do pico referente aos hormnios
levonorgestrel. O mesmo resultado observado com a fortificao da amostra
do Ponto 2 (ETE), conforme ilustrado na Figura 35.

Azul 150 g L

-1

ETA

Vermelho - amostra

Figura 34 - Sobreposio da amostra do ponto 1 ETA com padro de 150 g L-1

do hormnio sinttico levonorgestrel. Segundo o mtodo para anlise
do hormnio levonorgestrel.

78

78

-1

Vermelho 150 g L ETE

Azul - amostra

Figura 35 - Sobreposio da amostra do ponto 2 ETE com padro de 150 g L-1

do hormnio sinttico levonorgestrel. Segundo o mtodo para anlise
do hormnio levonorgestrel.

79
79

5.2.2 17-estradiol

A Figura 36 ilustra a presena de um pico cromatogrfico referente ao

hormnio 17-estradiol no tempo de reteno de 4,59 min, aps a utilizao do

mtodo anteriormente validado que utiliza a cromatografia liquida de alta

LU

eficincia.

360
340
320
300
280
260
240
220
200
180
160
140
120
100
80
60
40
20
0
-20

Branco
-1
40 g.L

10

min

Figura 36 - Cromatograma demonstrando o tempo de reteno do hormnio 17estradiol (40 gL-1) analisado por HPLC/FLU. Branco= gua ultra pura.

Como pode ser verificado, nas amostras oriundas do Ponto 1 de coleta,

atravs do cromatograma da Figura 37 (coleta no vero) e 38 (coleta no
inverno), no se observa a presena do pico em 4,59 min referente ao hormnio
17-estradiol, at o limite de deteco do mtodo analtico desenvolvido neste
estudo. O mesmo foi observado em todas as amostras mensais referentes ao
Ponto 2, como observado nos cromatogramas das amostras obtidas no vero e
no inverno (Figuras 39 e 40).

80

80

Figura 37 - Cromatograma do extrato da amostra de gua coletada no Ponto 1 do

rio Paraba do Sul, local prximo estao de captao de gua
para
abastecimento
(ETA)
pblico
do
municpio
de
Pindamonhangaba, no perodo do vero. Segundo o mtodo para
anlise do hormnio 17-estradiol.

Figura 38 - Cromatograma do extrato da amostra de gua coletada no Ponto 1 do

rio Paraba do Sul, local prximo estao de captao de gua
para
abastecimento
(ETA)
pblico
do
municpio
de
Pindamonhangaba, no perodo do inverno. Segundo o mtodo para
anlise do hormnio 17-estradiol.

81
81

Figura 39 - Cromatograma do extrato da amostra de gua coletada no Ponto 2

do rio Paraba do Sul, local prximo ao lanamento de efluente da
estao de tratamento de esgoto (ETE) do municpio de
Pindamonhangaba, no perodo do vero. Segundo o mtodo para
anlise do hormnio 17-estradiol.

Figura 40 - Cromatograma do extrato da amostra de gua coletada no Ponto 2 do

rio Paraba do Sul, local prximo ao lanamento de efluente da
estao de tratamento de esgoto (ETE) do municpio de
Pindamonhangaba, no perodo do inverno. Segundo o mtodo para
anlise do hormnio 17-estradiol.

82

82

Para confirmao da ausncia do hormnio nas amostras, fez-se a

sobreposio das amostras do ponto 1(ETA) e ponto 2 (ETE) com um padro
com concentrao de 20 g L-1 do hormnio 17-estradiol (Figuras 41 e 42). Em
ambos os casos a ausncia do hormnio foi constatada.

Figura 41 - Sobreposio da amostra do ponto 1 ETA com padro de 20 g L-1

do hormnio 17-estradiol. Segundo o mtodo para anlise do
hormnio17-estradiol.

Figura 42 - Sobreposio da amostra do ponto 2 ETE com padro de 20 g L-1

do hormnio 17-estradiol. Segundo o mtodo para anlise do
hormnio17-estradiol.

83
83

5.2.3 17-etinilestradiol

Com a utilizao do mtodo de cromatografia liquida de alta eficincia

determinou-se o tempo de reteno do hormnio 17-etinilestradiol em 8,19 min
(Figura 43).

branco
-1
40 g.L
300
250

LU

200
150
100
50
0
0

10

min

Figura 43- Cromatograma demonstrando o tempo de reteno do hormnio 17

etinilestradiol (40 gL-1) analisado por HPLC/FLU. Branco= gua ultra
pura.

Como pode ser observado nos cromatogramas, Figura 44 (ETA, vero) e

45 (ETE, vero), em nenhum dos dois casos h pico corresponde ao hormnio
17-etinilestradiol. Estas duas amostras ilustram o ocorrido com a maioria das
amostras testadas para o hormnio 17-etinilestradiol.

84

84

Figura 44 - Cromatograma do extrato da amostra de gua coletada no Ponto 1

do rio Paraba do Sul, local prximo estao de captao de gua
para
abastecimento
(ETA)
pblico
do
municpio
de
Pindamonhangaba, no perodo do vero. Segundo o mtodo para
anlise do hormnio 17-etinilestradiol.

Figura 45 - Cromatograma do extrato da amostra de gua coletada no Ponto 2
do rio Paraba do Sul, local prximo ao lanamento de efluente da
estao de tratamento de esgoto (ETE) do municpio de
Pindamonhangaba, no perodo do vero. Segundo o mtodo para
anlise do hormnio 17-etinilestradiol.

85
85

Contudo, de acordo com o mtodo desenvolvido e validado, sugere-se

que, nas amostras de gua coletadas nos pontos ETA e ETE durante o inverno
(junho e julho), h indcios da presena do hormnio 17-etinilestradiol.
Nas amostras dos pontos ETA, Figura 46 (junho), e Figura 47 (julho), so
observados picos em 8.066 min e pico em 8.049 min, respectivamente. Esses
tempos so prximos ao observado quando se fortificou uma amostra do Ponto
ETA com a concentrao de 10 gL-1 de 17-etinilestradiol, pico em 8.060 min
(Figura 48). A existncia destes picos ocorreu somente nas amostras de gua
coletadas nesses dois meses.
A possvel presena do hormnio nas amostras dos meses de junho e
julho pode estar relacionada baixa precipitao que normalmente ocorre
nesses meses. O baixo ndice de chuvas faz com que os poluentes estejam em
maior concentrao devido menor diluio. Durante o perodo estudado (12
meses), considerando o ndice pluviomtrico acumulado, junho foi o 2 (8,5 mm
de chuva) e julho (45,6 mm de chuva) o 4 ms com menor quantidade de
chuvas (CIIAGRO, 2012).

Figura 46 - Cromatograma do extrato da amostra de gua coletada no Ponto 1
do rio Paraba do Sul, local prximo estao de captao de gua
para
abastecimento
(ETA)
pblico
do
municpio
de
Pindamonhangaba, no perodo do inverno (junho). Segundo o
mtodo para anlise do hormnio 17-etinilestradiol.

86

86

Figura 47 - Cromatograma do extrato da amostra de gua coletada no Ponto 1

do rio Paraba do Sul, local prximo estao de captao de gua
para
abastecimento
(ETA)
pblico
do
municpio
de
Pindamonhangaba, no perodo do inverno (julho). Segundo o
mtodo para anlise do hormnio 17-etinilestradiol.

-1

Figura 48 - Fortificao da amostra do ponto 1 ETA com padro de 10gL do

hormnio 17-etinilestradiol, pico em 8.060 min.

87
87

Considerando as amostras do Ponto 2 (ETE), no foram observados picos

referentes ao hormnio 17-etinilestradiol em praticamente todas as amostras
coletadas, exceto na referente ao ms de julho. Na Figura 49 observa-se pico de
reteno em 7.629 min, prximo ao da amostra fortificada com 10 gL-1 do 17
etinilestradiol, retido em 7.643 min. (Figura 50), o que sugere a possvel
presena do hormnio estudado nas amostras coletadas no inverno. Assim
como, no ponto ETA, a possvel ocorrncia de hormnio na amostra do ms de
julho, pode ser devida menor diluio dos contaminantes presentes na gua do
rio por conta do baixo ndice pluviomtrico do perodo.

Figura 49- Cromatograma do extrato da amostra de gua coletada no Ponto 2 do rio

Paraba do Sul, local prximo ao lanamento de efluente da estao de
tratamento de esgoto (ETE) do municpio de Pindamonhangaba, no
perodo do inverno (julho). Segundo o mtodo para anlise do hormnio
17-etinilestradiol.

88

88

Figura 50 - Fortificao da amostra do ponto 2 ETE com padro de 10 g L-1 do

hormnio 17-etinilestradiol, pico em 8.060 min.

A etapa de validao do mtodo cromatogrfico permitiu a quantificao

dos hormnios 17-etinilestradiol, levonorgestrel e 17-estradiol nas amostras
de gua coletadas no rio Paraba do Sul durante o perodo de 1 ano. Alm da
quantificao dos hormnios na gua dos pontos ETA e ETE, foram realizados
testes crnicos in situ e ex situ em um modelo vivo. Os dois pontos onde foram
coletadas as amostras para a quantificao de hormnio, coincidem com locais
utilizados para os testes crnicos cujos resultados esto apresentados a seguir.

89
89

5.3 Testes com Danio rerio

5.3.1 Aclimatao dos exemplares de Danio rerio utilizados nos testes com
gua do rio Paraba do Sul

Durante o perodo de 15 dias de aclimatao dos animais no laboratrio

do Setor de Aquicultura do Polo Regional Vale do Paraba, a sobrevivncia dos
animais utilizados no 1 perodo do estudo foi de 92,6%, durante o 2 perodo foi
de 90,3% e no 3 foi de 94,6%.
O protocolo modificado utilizado (OECD, 1996; 2006) indica algumas
condies relacionadas mortalidade dos animais na fase de aclimatao:
Mortalidade > 10% - rejeita-se o lote
Mortalidade entre 5% e 10% nos primeiros 7 dias e aps esse perodo > 5% nos
prximos 7 rejeita-se o lote
Mortalidade < 5% - se aceita o lote
A sobrevivncia dos animais no perodo de aclimatao dos trs testes
realizados, atingiu os nveis exigidos nas normas propostas pela OECD (OECD,
2006) para testes com peixes relacionados a deteco substncias que
possuem atividade endcrina (Tabela 15).

90

90

Tabela 15 - Sobrevivncia dos peixes durante a fase de aclimatao, nos

lotes utilizados durante os 3 testes.
Mortalidade 1 ao

Mortalidade 8 ao

Sobrevivncia

7 dia

15 dia

(15 dias)

Lote n animais

350

17

4,85

2,57

324

92,57

350

21

6,00

13

3,71

316

90,28

350

10

2,85

2,57

331

94,57

5.3.2 Teste crnico ex situ com espcie de peixe Danio rerio

Com a utilizao de lotes de Danio rerio devidamente aclimatados, foram

realizados 3 testes crnicos com exemplares de Danio rerio no laboratrio do
Setor de Aquicultura do Polo Regional Vale do Paraba.

Teste 1

Os resultados referentes ao monitoramento dos parmetros fsicos e

qumicos da gua no apresentaram diferena estatisticamente significativa
(p>0,05) entre as repeties e entre os diversos tratamentos. (Tabela 16).
Os parmetros avaliados atenderam s exigncias expostas no protocolo
adotado para a realizao dos experimentos (OECD, 2006). A temperatura no
sofreu uma variao maior do que 1C entre os diferentes tratamentos. O pH
esteve entre 6,5 e 8,5 e no variou mais de 0,5 entre as medies realizadas. A

91
91

quantidade de oxignio dissolvido no foi menor do que 60% da saturao

mxima, nesse caso de 5 mg L-1, calculada para a temperatura mdia de 23,8C.
Tabela 16 - Mdia e desvio padro (D.P.) dos parmetros da gua dos aqurios
utilizados para o teste crnico com Danio rerio durante o teste 1
Teste 1

Temperatura (C)

pH

Oxignio
dissolvido (mg L-1)

Mdia D.P.
Controle

23,78 0,62

7,02 0,28

5,97 0,37

ETA 100%

23,78 0,55

7,28 0,17

5,82 0,71

ETA 50%

23,75 0,52

7,17 0,28

6,03 0,44

ETE 100%

23,81 0,59

7,38 0,15

5,55 0,55

ETE 50%

23,91 0,48

7,28 0,15

5,89 0,85

pH potencial hidrogeninico. Controle- gua desclorada; ETA 100%- gua da captao para
abastecimento 100%; ETA 50%- 50% gua captao para abastecimento + 50% gua
desclorada; ETE 100%- gua do ponto de despejo do efluente da estao de tratamento de
esgoto 100% e ETE 50% - 50% gua do ponto de despejo do efluente da estao de tratamento
de esgoto+ 50% gua desclorada.

A sobrevivncia dos animais durante o teste 1 foi, em mdia, de 90,5 %

(Tabela 17), em relao ao grupo controle, a sobrevivncia foi de 92,5%,
superior mnimo de 90% determinado pelo protocolo adotado. Ao final dos
testes, os peixes foram anestesiados (banho em benzocana 4%), pesados,
apresentando peso mdio de 0,64 g e separados por sexo e tratamento a que
foram submetidos e imediatamente congelados.

92

92

Tabela 17 - Sobrevivncia dos peixes durante o perodo da realizao do Teste

1

Rplica

Teste 1

Sobrevivncia
(%)

Controle

ETA 100%

ETA
50%

ETE
100%

ETE
50%

90

90

80

100

90

90

100

90

70

90

100

80

100

90

100

90

90

90

90

90

92,5

90

90

87,5

92,5

Tratamento

Mdia

90,5%

Controle- gua desclorada; ETA 100%- gua da captao para abastecimento 100%; ETA 50%50% gua captao para abastecimento + 50% gua desclorada; ETE 100%- gua do ponto de
despejo do efluente da estao de tratamento de esgoto 100% e ETE 50% - 50% gua do ponto
de despejo do efluente da estao de tratamento de esgoto+ 50% gua desclorada.

Teste 2

Os resultados referentes ao monitoramento dos parmetros fsicos e

qumicos da gua no apresentaram diferena estatisticamente significativa
entre as repeties e entre os diversos tratamentos (Tabela 18). Os parmetros
de qualidade de gua dos diversos tratamentos testados apresentaram
resultados satisfatrios, estando dentro do limite determinado pela metodologia
aplicada (OECD, 2006).
A variao de temperatura entre os tratamentos foi inferior a 1C. O pH
esteve entre 6,5 e 8,5 e no variou mais de 0,5 entre as medies realizadas no
mesmo tratamento. Os nveis de oxignio dissolvido foram superiores aos 60%
da saturao mxima (Controle e ETA 100%= 5,56 mg L-1 / demais grupos= 5,5
mg L-1).

93
93

Tabela 18 - Mdia e desvio padro (D.P.) dos parmetros da gua dos aqurios
utilizados para o teste crnico com Danio rerio durante o teste 2
Oxignio
Teste 2
Temperatura (C)
pH
dissolvido (mg L-1)
Mdia D.P.
Controle

19,06 1,61

6,91 0,12

7,01 0,57

ETA 100%

19,03 1,42

7,49 0,05

7,07 0,11

ETA 50%

19,4 1,38

7,44 0,06

7,16 0,57

ETE 100%

19,26 1,7

7,57 0,04

7,03 0,29

ETE 50%

19,36 1,61

7,40 0,03

7,28 0,30

pH potencial hidrogeninico. Controle- gua desclorada; ETA 100%- gua da captao para
abastecimento 100%; ETA 50%- 50% gua captao para abastecimento + 50% gua
desclorada; ETE 100%- gua do ponto de despejo do efluente da estao de tratamento de
esgoto 100% e ETE 50% - 50% gua do ponto de despejo do efluente da estao de tratamento
de esgoto+ 50% gua desclorada.

No experimento denominado Teste 2, os exemplares de Dani rerio

apresentaram uma baixa mortalidade, sendo que 97% dos animais sobreviveram
(Tabela 19). A sobrevivncia do grupo controle atingiu o valor ideal de 100%.
Ao final dos testes, os peixes foram anestesiados (banho em benzocana
4%), pesados, apresentando peso mdio de 0,59 g e separados por sexo e
tratamento a que foram submetidos e imediatamente congelados.
Tabela 19 - Sobrevivncia dos peixes durante o perodo da realizao do Teste
2

Rplica

Teste 2

Sobrevivncia
(%)

Controle

ETA 100%

ETA
50%

ETE
100%

ETE
50%

100

100

90

100

100

100

100

100

90

100

100

90

100

90

100

100

100

90

100

90

Mdia

100

97,5

95

95

97,5

Tratamento

97%

Controle- gua desclorada; ETA 100%- gua da captao para abastecimento 100%; ETA 50%50% gua captao para abastecimento + 50% gua desclorada; ETE 100%- gua do ponto de
despejo do efluente da estao de tratamento de esgoto 100% e ETE 50% - 50% gua do ponto
de despejo do efluente da estao de tratamento de esgoto + 50% gua desclorada.

94

94

Teste 3

Os resultados referentes ao monitoramento dos parmetros fsicos e

qumicos da gua no apresentaram diferena estatisticamente significativa
entre as repeties e entre os diversos tratamentos. Os resultados obtidos so
apresentados na Tabela 20 e atingem as determinaes da metodologia adotada
nos testes crnicos com durao de 21 dias (OECD, 2006).
A temperatura da gua manteve-se estvel, no havendo diferena
superior a 1C entre os tratamentos testados. O pH esteve entre 6,5 e 8,5 e no
variou mais de 0,5 entre as medies realizadas no mesmo tratamento. O
mnimo de 60% da saturao mxima (5,81 mg L-1) foi superada em todos os
tratamentos.

Tabela 20 - Mdia e desvio padro (D.P.) dos parmetros da gua dos aqurios
utilizados para o teste crnico com Danio rerio durante o teste 3
Oxignio
Teste 3
Temperatura (C)
pH
dissolvido (mg L-1)
Mdia D.P.
Controle

16,96 1,96

6,92 0,06

7,97 0,55

ETA 100%

17,13 2,01

7,35 0,07

6,84 0,19

ETA 50%

17,16 2,02

7,42 0,12

7,10 0,33

ETE 100%

17,00 1,76

7,48 0,16

7,08 0,33

ETE 50%

17,03 1,84

7,34 0,05

7,16 0,15

pH potencial hidrogeninico. Controle- gua desclorada; ETA 100% - gua da captao para
abastecimento 100%; ETA 50% - 50% gua captao para abastecimento + 50% gua
desclorada; ETE 100%- gua do ponto de despejo do efluente da estao de tratamento de
esgoto 100% e ETE 50% - 50% gua do ponto de despejo do efluente da estao de tratamento
de esgoto + 50% gua desclorada.

Na ocasio do teste 3 a sobrevivncia foi de 98% dos animais (Tabela

21). A sobrevivncia do grupo controle atingiu o valor de 100%, ideal segundo o
protocolo adotado (OECD, 2006). Ao final dos testes, os peixes foram

95
95

anestesiados (banho em benzocana 4%), pesados, apresentando peso mdio

de 0,43 g e separados por sexo e tratamento a que foram submetidos e
imediatamente congelados.
Tabela 21 - Sobrevivncia dos peixes durante o perodo da realizao do Teste
3
Sobrevivncia (%)

Rplica

Teste 3

Controle

ETA 100%

ETA
50%

ETE
100%

ETE
50%

100

90

100

100

90

100

100

100

100

100

100

100

100

100

90

100

100

100

90

100

Tratamento

Mdia
100
97,5
100
97,5
95
98%
Controle- gua desclorada; ETA 100%- gua da captao para abastecimento 100%; ETA 50%50% gua captao para abastecimento + 50% gua desclorada; ETE 100%- gua do ponto de
despejo do efluente da estao de tratamento de esgoto 100% e ETE 50%- 50% gua do ponto
de despejo do efluente da estao de tratamento de esgoto+ 50% gua desclorada.

Ao final dos trs testes realizados, os parmetros de qualidade da gua

foram considerados satisfatrios e apropriados para a aceitao dos resultados
dos testes, no sendo necessrio o descarte dos resultados obtidos.

5.3.3 Teste crnico in situ com Danio rerio em tanques rede mantidos no
rio Paraba do Sul

Durante o estudo foram feitos 3 testes com durao de 21 dias, com o

auxilio de tanques rede para manter os exemplares de Danio rerio nas guas do
rio Paraba do Sul. Os tanques rede foram instalados nos Pontos 1 e 2, ETA e
ETE, respectivamente.

96

96

Teste 1

Ponto 1. A sobrevivncia dos animais foi de 73% (22/30 peixes). Aps o perodo
de 21 dias, os animais foram anestesiados com benzocana diluda a uma
concentrao de 4%, pesados e separados por sexo e tratamento a que foram
submetidos e imediatamente congelados. Os animais sobreviventes do
experimento apresentaram peso mdio de 0,51g.
Ponto 2. O tanque rede localizado no ponto prximo estao de tratamento de
esgoto do municpio de Pindamonhangaba, foi furtado durante a realizao do
teste, aps o 5 dia de experimento.

Teste 2

Ponto 1. Dos 30 exemplares de Danio rerio colocados no tanque rede, houve a

mortalidade de 100% dos animais, aps os 21 dias de manuteno nas guas
do rio Paraba do Sul.
Ponto 2. Em uma segunda tentativa da colocao do tanque rede no Ponto 2,
novamente foi observada a ocorrncia do desaparecimento do tanque utilizado.

Teste 3

Ponto 1. A sobrevivncia foi de 63% dos peixes (19/30 peixes). Aps o perodo
de 21 dias, os animais foram anestesiados com benzocana diluda a uma
concentrao de 4%, pesados e separados por sexo e tratamento a que foram
submetidos e imediatamente congelados. Os animais sobreviventes do
experimento apresentaram peso mdio de 0,46g

97
97

Ponto 2. Aps dois insucessos da manuteno dos animais nas guas do rio
Paraba do Sul, no Ponto 2, no houve uma terceira tentativa de colocao do
tanque rede, devido aos problemas com desaparecimento dos mesmos.

5.3.4 Determinao da concentrao da vitelogenina em Danio rerio

utilizados nos testes crnicos ex situ e in situ

Teste crnico ex situ com espcie de peixe Danio rerio

Para a quantificao da protena vitelogenina nas amostras de peixes que

foram submetidos aos testes em laboratrio, foi utilizado um kit padronizado para
quantificao de VTG de Danio rerio com a utilizao da tcnica de ELISA.
Foram usadas amostras de peixes mantidos durante 21 dias nas cinco diferentes
condies testadas: grupo controle, ETA 100%, ETA 50%, ETE 100% e ETE
50%.
Teste 1
Os resultados referentes ao 1 teste demonstraram a existncia de uma
maior quantidade de vitelogenina nas amostras das fmeas de Danio rerio em
comparao aos machos da mesma espcie, fato que era esperado e corrobora
com a descrio da literatura (WESTER; VOS 1994, HANSEN et al., 1998).
Machos
A quantidade de VTG determinada nos peixes machos submetidos ao
tratamento cuja gua foi proveniente do Ponto 1 (ETA), em suas duas diluies,
foi maior do que o do grupo controle (Figura 51). O nvel da protena chegou a
ser 6,4 vezes maior para ETA 100 M e 4,9 vezes maior para ETA 50 M.
Comparando as duas diluies observou-se que a amostra ETA 100 M
apresentou nveis de VTG 1,3 vezes maior do que a amostra ETA 50 M.
98

98

5,00
4,50

Teste 1 - Machos

4,60

VTG g mL-1

4,00

3,53

3,50
3,00
2,50
2,00
1,50
1,00

0,72

0,50
0,00

C M

ETA 100 M
Tratamento

ETA 50 M

Figura 51 - Concentrao de VTG em amostras de Danio rerio machos mantidos em aqurios

com gua do local de captao para abastecimento 100% (ETA 100%) e gua
do local de captao para abastecimento 50% - 50% gua do rio e 50% gua
desclorada (ETA 50%). ETA- estao de tratamento para abastecimento

Quando as amostras do tratamento ETE 100 M e ETE 50 M foram

comparadas, observou-se a mesma resposta em relao ao grupo controle,
entretanto a relao entre as duas diluies foi inversa, o tratamento 50%
apresentou nveis de VTG 1,17 vezes superior ao tratamento 100% (Figura 52).
3,50

VTG g mL-1

3,00

Teste 1 - Machos

3,20
2,73

2,50
2,00
1,50
1,00

0,72

0,50
0,00

C M

ETE 100 M

ETE 50 M

Tratamento
Figura 52 - Concentrao de VTG em amostras de Danio rerio machos mantidos em aqurios
com gua efluente da estao de tratamento de esgoto 100% (ETE 100%) e gua
efluente da estao de tratamento de esgoto 50% - 50% gua do rio e 50% gua
desclorada (ETE 50%). ETE estao de tratamento de esgoto

99
99

Fmeas

Em relao s fmeas do Teste 1, a quantificao de VTG apresentou um

resultado mais elevado nos animais do grupo controle do que nos indivduos dos
grupos ETA 100 F e ETA 50 F (Figura 53). Os resultados dos tratamentos com
gua do Ponto 1, 100% e 50% tiveram resultados semelhantes (15,96 mg mL-1 e
13,12 mg mL-1, respectivamente). Enquanto isso, os valores desses mesmos
grupos atingiram nveis correspondentes a 35,43% (ETA 100) e 29,12% (ETA
50) da concentrao de VTG registrada nas amostras do grupo controle.
A mesma tendncia apresentada nos resultados do Ponto 1 foi observada
no Ponto 2. O grupo controle apresentou uma maior quantidade de VTG do que
os tratamentos com gua do rio. Entretanto, nessa situao testada, os animais
mantidos somente com a gua do Ponto 2 (ETE 100) apresentaram uma
produo 3 vezes maior de VTG do que os exemplares do grupo ETE 50 (Figura
54).

50,00
45,00

45,06

Teste 1 - Fmeas

VTG mg mL-1

40,00
35,00
30,00
25,00
20,00

15,97

15,00

13,12

10,00
5,00
0,00

C F

ETA 100 F

ETA 50 F

Tratamentos
Figura 53 - Concentrao de VTG em amostras de Danio rerio fmeas mantidas em
aqurios com gua do local de captao para abastecimento 100% (ETA
100%) e gua do local de captao para abastecimento 50% - 50% gua do
rio e 50% gua desclorada (ETA 50%). ETA- estao de tratamento para
abastecimento

100

100

VTG mg mL-1

50,00
45,00
40,00
35,00
30,00
25,00
20,00
15,00
10,00
5,00
0,00

45,06

Teste 1 - Fmeas
36,45

12,13

C F

ETE 100 F

ETE 50 F

Tratamentos
Figura 54 - Concentrao de VTG em amostras de Danio rerio fmeas mantidas em
aqurios com gua efluente da estao de tratamento de esgoto 100% (ETE
100%) e gua efluente da estao de tratamento de esgoto 50% - 50% gua
do rio e 50% gua desclorada (ETE 50%). ETE estao de tratamento de
esgoto

Teste 2

Machos
Por ocasio do teste 2 foi quantificada a VTG de peixes seguindo os
mesmos tratamentos e procedimentos utilizados no 1 teste.
Analisando os resultados obtidos observou-se que os animais machos
submetidos manuteno com gua do rio Paraba do Sul coletada prxima
estao de captao de gua (Ponto 1), apresentaram nveis de VTG superiores
aos dos animais do grupo controle (Figura 55). Os resultados mostram uma
quantidade 11,6 vezes maior de VTG nos peixes da ETA 100 e 8,1 vezes
superior da ETA 50% em comparao ao controle. No entanto, na relao entre
as duas diferentes diluies, a ETA 100 foi 1,4 vezes maior.

101
101

8,00

Teste 2- Machos

7,53

VTG g mL-1

7,00
6,00

5,29

5,00
4,00
3,00
2,00
1,00
0,00

0,65
C M

ETA 100 M

ETA 50 M

Tratamento

Figura 55 - Concentrao de VTG em amostras de Danio rerio machos mantidos em

aqurios com gua do local de captao para abastecimento 100% (ETA
100%) e gua do local de captao para abastecimento 50% - 50% gua do
rio e 50% gua desclorada (ETA 50%). ETA- estao de tratamento para
abastecimento

A quantidade de VTG verificada nas amostras de peixes machos expostos

gua do rio contaminada pelo efluente da estao de tratamento de esgoto,
segue o mesmo padro da anlise supracitada. O grupo controle apresentou
nveis inferiores comparados aos tratamentos testados (18,2 vezes- ETE 100 e 9
vezes- ETE 50). As amostras do tratamento 100% apresentaram o dobro da
quantidade de VTG em relao s amostras do tratamento 50% (Figura 56).

102

102

14,00

Teste 2 - Machos

VTG g mL-1

12,00

11,86

10,00
8,00

5,84

6,00
4,00
2,00
0,00

0,65
C M

ETE 100 M

ETE 50 M

Tratameto
Figura 56 - Concentrao de VTG encontrada nas amostras de Danio rerio machos
mantidos em aqurios com gua efluente da estao de tratamento de
esgoto 100% (ETE 100%) e gua efluente da estao de tratamento de
esgoto 50% - 50% gua do rio e 50% gua desclorada (ETE 50%). ETE
estao de tratamento de esgoto

Fmeas

Nas fmeas expostas ao tratamento ETA 100 e 50 foi verificada uma

menor concentrao de VTG quando comparados os seus nveis com o do
grupo controle (Figura 57), 1,37 vezes maior do que ETA 100 e 2,27 vezes maior
do que ETA 50. Entre os dois tratamentos que utilizam gua do rio proveniente
do local de captao para abastecimento pblico o que apresentou maior
concentrao de VTG foi o ETA 100, com resultados 1,65 vezes maiores do que
o ETA 50.
A situao inversa ocorre quando comparados os resultados das
quantificaes de VTG realizadas com animais do tratamento ETE. O grupo
controle o que tem os menores nveis de VTG em suas amostras, sendo que
os valores so prximos aos encontrados no grupo ETE 50, 58,22 mg mL-1 e
61,91 mg mL-1 respectivamente. A amostra oriunda do grupo ETE 100 teve
como resultado uma mdia de 70,18 mg mL-1 (Figura 58).

103
103

70,00

VTG mg mL-1

60,00

58,23

Teste 2 - Fmeas

50,00

42,36

40,00
25,59

30,00
20,00
10,00
0,00

C F

ETA 100 F

ETA 50 F

Tratamentos
Figura 57 - Concentrao de VTG encontrada nas amostras de Danio rerio fmeas
mantidas em aqurios com gua do local de captao para
abastecimento 100% (ETA 100%) e gua do local de captao para
abastecimento 50% - 50% gua do rio e 50% gua desclorada (ETA
50%). ETA- estao de tratamento para abastecimento

80,00

VTG mg mL-1

70,00
60,00

Teste 2 - Fmeas

70,19
61,91

58,23

50,00
40,00
30,00
20,00
10,00
0,00

C F

ETE 100 F

ETE 50 F

Tratamentos
Figura 58 - Concentrao de VTG encontrada nas amostras de Danio rerio fmeas
mantidas em aqurios com gua efluente da estao de tratamento de
esgoto 100% (ETE 100%) e gua efluente da estao de tratamento de
esgoto 50% - 50% gua do rio e 50% gua desclorada (ETE 50%). ETE
estao de tratamento de esgoto

104

104

Teste 3
Machos
Quando analisados os resultados obtidos das amostras do 3 teste,
verificada a mdia entre os animais machos submetidos ao tratamento do grupo
controle de 0,88 g mL-1 de VTG. A quantidade de VTG presente no exemplares
de Danio rerio mantidos em aqurios contendo gua proveniente do Ponto 1 do
rio Paraba do Sul (9,34 g mL-1 ETA 100 e 9,13 g mL-1 - ETA 50) foi 10,5
vezes quando comparada com os animais do controle (0,88 g mL-1) (Figura 59).
A quantificao de VTG dos animais utilizados nos testes com gua do rio
no ponto em que o efluente da estao de tratamento de esgoto lanado
indicou uma mdia de 9,45 g mL-1 para o tratamento ETE 100; e 9,31 g mL-1
para o ETE 50 (Figura 60).

10,00
9,00

Teste 3 - Machos

9,34

9,13

ETA 100 M
Tratamento

ETA 50 M

VTG g mL-1

8,00
7,00
6,00
5,00
4,00
3,00
2,00
1,00
0,00

0,88

C M

Figura 59 - Concentrao de VTG encontrada nas amostras de Danio rerio machos

mantidos em aqurios com gua do local de captao para abastecimento
100% (ETA 100%) e gua do local de captao para abastecimento 50% 50% gua do rio e 50% gua desclorada (ETA 50%) e ETA- estao de
tratamento para abastecimento

105
105

10,00
9,00

Teste 3 - Machos

9,45

9,31

ETE 100 M
Tratamento

ETE 50 M

VTG g mL-1

8,00
7,00
6,00
5,00
4,00
3,00
2,00
1,00
0,00

0,88
C M

Figura 60 - Concentrao de VTG encontrada nas amostras de Danio rerio machos

mantidos em aqurios com gua efluente da estao de tratamento de esgoto
100% (ETE 100%) e gua efluente da estao de tratamento de esgoto 50% 50% gua do rio e 50% gua desclorada (ETE 50%). ETE estao de
tratamento de esgoto

Fmeas

As fmeas com j esperado, tiveram uma maior quantidade de VTG

presente nas amostras do que os exemplares machos. Quando as fmeas so
mantidas com gua vinda do Ponto 1, apresentam nveis de VTG prximos entre
si (ETA 100 33,86 mg mL-1 e ETA 50 34,52 mg mL-1), e aproximadamente 1,34
vezes maior do que as fmeas do mesmo lote mantidas sob o tratamento
denominado controle (25,46 mg mL-1) (Figura 61).
Os animais expostos gua contaminada pelo efluente da estao
de tratamento de esgoto no tratamento ETE 100 apresentam 52,95 mg mL-1 e no
tratamento ETE 50 chega a 57% desse valor (30,25 mg mL-1) (Figura 62).

106

106

40,00

Teste 3 - Fmeas

VTG mg mL-1

35,00
30,00

33,87

34,52

ETA 100 F

ETA 50 F

25,47

25,00
20,00
15,00
10,00
5,00
0,00

C F

Tratamentos
Figura 61 - Concentrao de VTG encontrada nas amostras de Danio rerio machos
mantidos em aqurios com gua do local de captao para abastecimento
100% (ETA 100%) e gua do local de captao para abastecimento 50% 50% gua do rio e 50% gua desclorada (ETA 50%). ETA- estao de
tratamento para abastecimento

60,00

VTG mg mL-1

50,00

Teste 3 - Fmeas

52,95

40,00
30,00

30,25

25,47

20,00
10,00
0,00

C F

ETE 100 F

ETE 50 F

Tratamentos
Figura 62 - Concentrao de VTG encontrada nas amostras de Danio rerio fmeas
mantidas em aqurios com gua efluente da estao de tratamento de esgoto
100% (ETE 100%) e gua efluente da estao de tratamento de esgoto 50% 50% gua do rio e 50% gua desclorada (ETE 50%). ETE estao de
tratamento de esgoto

107
107

Comparao entre os 3 testes ex situ

Machos
A indicao de atividade estrognica da gua utilizada nos diversos
tratamentos testados foi observada, quando da comparao dos tratamentos
com o grupo controle atravs de testes estatsticos. Para isso foi utilizado o
Teste de Dunnett, no qual, a relao entre o controle e todos os demais
tratamentos testados apresentou uma diferena estatisticamente significativa, ou
seja, P < 0,05 (Tabela 22).
Tabela 22 - Resultados da aplicao do teste de Dunnett aos resultados obtidos
nos testes ex situ com machos de Danio rerio.
Diferena entre

Mdia

LI

LS

P-Valor

ETA 100 M - CM

6221,035941

1536,209369

10905,86251

0,005825492

ETA 50 M - CM

4955,708245

270,8816734

9640,534817

0,035140867

ETE 100 M - CM

7094,846723

1989,675324

12200,01812

0,00365074

ETE 50 M - CM

5377,953958

439,7131549

10316,19476

0,028857557

Nveis

CM Grupo controle macho- gua desclorada; ETA 100M - macho, gua da captao
para abastecimento 100%; ETA 50M - macho, 50% gua captao para abastecimento +
50% gua desclorada; ETE 100M - macho, gua do ponto de despejo do efluente da
estao de tratamento de esgoto 100% e ETE 50M - macho, 50% gua do ponto de despejo
do efluente da estao de tratamento de esgoto+ 50% gua desclorada. LI limite inferior e
LS limite superior

108

108

Ao fazer a comparao entre os 4 tratamentos (ETA 100 e 50, ETE 100 e

50), por meio do Teste de Kruskal-Wallis, no foi observada diferena
estatisticamente significativa. Com base no mesmo teste, refora-se a indicao
da diferena entre os tratamentos e o grupo controle (Tabela 23).
Tabela 23 - Resultados da aplicao do teste de Kruskal-Wallis aos
resultados obtidos nos testes ex situ com machos de Danio rerio.
Diferena
Observada

Diferena Crtica

Diferena

CM - ETA 100 M

27,68181818

17,4480043

Sim

CM - ETA 50 M

22,5

17,4480043

Sim

CM - ETE 100 M

22,67045455

19,01352188

Sim

CM - ETE 50 M

21,54545455

18,39181141

Sim

ETA 100 M - ETA 50 M

5,181818182

17,4480043

No

ETA 100 M - ETE 100 M

5,011363636

19,01352188

No

ETA 100 M - ETE 50 M

6,136363636

18,39181141

No

ETA 50 M - ETE 100 M

0,170454545

19,01352188

No

ETA 50 M - ETE 50 M

0,954545455

18,39181141

No

ETE 100 M - ETE 50 M

1,125

19,88315586

No

Fatores Comparados

CM Grupo controle macho- gua desclorada; ETA 100M - macho, gua da captao para
abastecimento 100%; ETA 50M - macho, 50% gua captao para abastecimento + 50%
gua desclorada; ETE 100M - macho, gua do ponto de despejo do efluente da estao de
tratamento de esgoto 100% e ETE 50M - macho, 50% gua do ponto de despejo do efluente
da estao de tratamento de esgoto+ 50% gua desclorada.

Em relao aos exemplares machos pode-se indicar que os animais

pertencentes os grupos controle (100% gua desclorada) dos trs testes
apresentaram mdias de resultados que variaram de 0,65 a 0,88 g mL-1, tendo
como mdia 0,75 g mL-1 de VTG em suas amostras (Figura 63).
Os resultados obtidos indicaram valores que variaram abaixo do limite de
quantificao (< 0,49 ng mL-1) a 1,9 g mL-1. Em estudo realizado por Brion e
colaboradores, com machos de Danio rerio, o grupo controle apresentou valores

109
109

que variaram abaixo do limite de deteco (40 ng mL-1) at 560 ng mL-1a mdia
obtida foi de 132 ng mL-1 (BRION, et al., 2002).
No estudo desenvolvido por Fenske et al. (2001) so apresentados nveis
de VTG, em amostras de D. rerio expostos do grupo controle mantidos por um
perodo de 21 dias, na ordem de 0,84 0,73 g mg-1. Rose et al. (2002)
quantificaram entre 0,04 g e 0,06 g de VTG em suas amostras do grupo
controle de machos.
Petersen et al. (2000), detectou uma media de 702 ng g-1 (VTG peixe) em
suas amostras de peixes machos adultos no grupo controle aps 20 dias de
testes, enquanto que com 30 dias de testes esses nveis atingiram um aumento
chegando a 247 103 ng de VTG/g-1 de peixe.
Aps 3 semanas de testes com exemplares machos de D. rerio, Van den
Belt, Verheyen e Witters (2001) no conseguiram detectar nveis de VTG acima
do limite de deteco de seu teste. Os mesmos autores em um estudo posterior
(VAN DEN BELT et al., 2002), tiveram como resultado da quantificao de VTG
dos machos de seu grupo controle, 2,08 0,83 g mL-1.
Orn et al. (2003), em um estudo em que no houve a separao entre
machos e fmeas, mas sim a utilizao de juvenis de D. rerio que no deveriam
ter a expresso de VTG ativa, quantificou em 70 23 ng g-1 de peixe a VTG de
seu grupo controle.
Uma provvel causa da deteco de baixas quantidades de VTG nos
exemplares machos de Danio rerio dos grupos controle, ou seja, nos animais
que no foram expostos s substncias testadas, a presena de fmeas nos
aqurios dos testes ou nos tanques de aclimatao dos animais. Essas fmeas
liberam na gua estrgenos atravs de suas excretas, outra possibilidade a
liberao de baixos nveis de estrgeno endgenos dos prprios machos
(KRAMER et al., 1998; HARRIES et al., 2000).

110

110

1,00

C M 3T

0,90

VTG g mL-1

0,80

CM Media

C M 1T

0,70

C M 2T

0,60
0,50
0,40
0,30
0,20
0,10
0,00

Tratamentos 1

Figura 63 - Concentrao de VTG em amostras de Danio rerio machos do grupo controle.

CM Mdia controle macho mdia; CM 1T- controle macho teste1, CM 2Tcontrole macho teste 2 e CM 3T- controle macho teste 3.

A quantificao de vitelogenina das amostras dos machos de Danio rerio

pertencentes ao grupo ETA 100 (dos 3 testes realizados) apresentou uma
variao que chegou a 2 vezes quando comparamos o teste 1 (4,6 g mL-1) ao
teste 3 (9,34 g mL-1), tendo como um intermedirio o resultado do teste 2 (7,53
g mL-1) que ficou prximo a mdia obtida (Figura 64).
O mesmo padro de resultados foi observado aps analise dos resultados
da verificao dos nveis de VTG dos animais submetidos ao tratamento ETA 50
(Figura 65). Os resultados indicam os animais teste 1 como os que produziram
menores quantidades de VTG, 3,53 g mL-1, o teste 2 apresentou 5,29 g mL-1
como resultado (prximo a media de 5,98 g mL-1) e o terceiro experimento foi
que apresentou maiores quantidade de VTG em suas amostras tendo como
mdia 9,13 g mL-1 (Figura 66).

111
111

10,00

ETA 100 M 3T

9,00
8,00

ETA 100 M 2T

ETA 100 M Media

VTG g mL-1

7,00
6,00
ETA 100 M 1T

5,00
4,00
3,00
2,00
1,00
0,00

1
Tratamento

Figura 64 - Concentrao de VTG em amostras de Danio rerio machos do grupo ETA. ETA
100% - 100% gua do local de captao para abastecimento. ETA 100 M 1Tmacho teste 1; ETA 100 2T- macho teste 2 e ETA 100 3T- controle macho teste
3.

10,00

ETA 50 M 3T

9,00
8,00
VTG g mL-1

7,00
6,00

ETA 50 M Media
ETA 50 M 2T

5,00
4,00

ETA 50 M 1T

3,00
2,00
1,00
0,00

1
Tratamento

Figura 65 - Concentrao de VTG em amostras de Danio rerio machos do grupo ETA.

ETA 50% - 50% gua do local de captao para abastecimento. ETA 50 M
1T- macho teste 1; ETA 50 2T- macho teste 2 e ETA 50 3T- macho teste 3.

112

112

10,00

9,34

9,13

9,00
8,00

7,53

7,16

ETA 100 M Media

VTG g mL-1

7,00
6,00
5,00

ETA 100 M 1T

5,98
5,29

4,60

ETA 100 M 2T
ETA 100 M 3T

3,53

4,00

ETA 50 M Media

3,00

ETA 50 M 1T

2,00

ETA 50 M 2T
ETA 50 M 3T

1,00
0,00

ETA 100

ETA 50

Figura 66 - Concentrao de VTG em amostras de Danio rerio machos dos grupos ETA 100
e ETA 50. ETA 100% - 100% gua do local de captao para abastecimento.
ETA 100 M 1T- macho teste 1; ETA 100 2T- macho teste 2 e ETA 100 3Tcontrole macho teste 3. ETA 50% - 50% gua do local de captao para
abastecimento. ETA 50 M 1T- macho teste 1; ETA 50 2T- macho teste 2 e ETA
50 3T- macho teste 3.

Considerando os resultados dos 3 testes realizados com machos e gua

com contaminantes da estao de tratamento de esgoto do municpio (ETE 100)
de Pindamonhangaba, observa-se uma media de 8,02 g mL-1 de VTG. O 1
teste apresentou os menores nveis entre os 3 realizados, com 2,73 g mL-1,
4,35 vezes menor do que o apresentado no teste 2 (11,86 g mL-1). O resultado
intermedirio e mais prximo da media foi o 2 teste (9,45 g mL-1) (Figura 67).
Comparando esses resultados com os do tratamento ETE 50%,
obtiveram-se menores nveis de VTG nos experimentos em que foi utilizada
gua do rio na diluio de 50%. Os resultados mais baixos foram obtidos no 1
teste 3,20 g mL-1, seguido pelo 2 teste foi de 5,84 g mL-1 de VTG (prximos
mdia do tratamento 6,12 g mL-1), enquanto a maior produo de VTG pelos
machos de Danio rerio foi do 3 teste, 9,31 g mL-1 (figura 68).
Quando analisados os resultados obtidos com a anlise das amostras de
peixes mantidos no Ponto ETA e Ponto ETE, constata-se que em ambos a
concentrao de VTG alterada e superior ao encontrado nos respectivos

113
113

grupos controle, havendo a indicao da existncia de atividade estrognica

atuante nos peixes nas duas situaes estudadas (Figura 69).
A quantificao da concentrao da protena VTG nas amostras de peixes
machos submetidos exposio da gua do rio Paraba do Sul, considerando
seus dois pontos de coleta (ETA e ETE), variou de 1,86 a 14,10 g mL-1. Os
valores obtidos por Van der Belt, demonstraram uma maior atividade estrognica
em seus estudos em que, foram expostos durante o perodo de 24 dias,
exemplares machos de Danio rerio a uma soluo contendo o hormnio 17etinilestradiol. A demonstrao da ao estrognica do hormnio testado foi
observada, por conta do aumento de 1.500 a 15.500 vezes a quantidade de VTG
quando os animais so comparados com os resultados do grupo controle
(controle- mdia de 2,08 g mL-1) (VAN DER BELT et al., 2002).
Em outros trabalhos, autores avaliam a atividade estrognica de
hormnios como, por exemplo, Brion et al. (2002) que quantificaram a VTG de
peixes expostos ao 17-estradiol e verificaram resultados variando de 0 a 125
mg mL-1. Quando a concentrao de 17-estradiol foi aumentada 10 vezes, a
quantidade de VTG apresentou um aumento de 18.000 vezes nos machos
estudados.
Outros estudiosos apresentam aumento de VTG em machos de D. rerio
aps exposio hormnios. Fenske et al. (2001), expondo os machos por 21
dias 20 ng L-1 de 17-etinilestradiol obteve nveis de VTG na ordem de 25000
g mL-1. No trabalho realizado por Rose et al (2002), grupo testado com 17estradiol, alcanou 5100 g g-1 (VTG peixe) enquanto os animais expostos ao
tratamento com 89 ng 17-etinilestradiol/L indicou 6500 g de VTG/g-1 de peixe.
No estudo de Andersson e colaboradores publicado em 2003 (ANDERSSON et
al., 2007) a concentrao de VTG nas amostras de animais juvenis expostos por
30 dias ao tratamento contendo 15,41,4 ng 17-etinilestradiol/L-1 foi de 2,26
1,49X106 ng de VTG/g-1 de peixe. Resultado semelhante ao publicado por
Petersen et al. (2000) utilizado 20 ng 17-etinilestradiol/L-1 por 30 dias, cuja
concentrao de VTG em machos adultos foi de aproximadamente 2,27 X 106 ng
de VTG/g-1 de peixe. Van den Belt, (2001), em testes com macho expostos
17-etinilestradiol por um perodo de 3 semanas, quantificou 32,7 14,9 mg mL-1
de VTG em suas amostras. Em outro estudo produzido por Van den Belt e
114

114

colaboradores (2003), a injeo de 17-estradiol em machos de Danio rerio

provocou um aumento da concentrao de VTG no plasma de machos,
chegando a 40,3 mg mL-1
Os valores expressos de VTG em machos de Danio rerio nos artigos
citados so superiores aos identificados, no presente estudo. Embora os
resultados demonstrem a presena de VTG no organismo dos machos,
indicando

uma

alterao

endcrina,

provavelmente,

os

animais

cuja

concentrao de VTG foi menor, tiveram contato com uma menor quantidade de
desreguladores, ou ainda, j estavam em fase de reverso dos efeitos causados
por esses contaminantes. A reverso dos efeitos provocados pela exposio
durante 24 dias ao hormnio sinttico 17-etinilestradiol observada tanto em
machos quanto em fmeas de D. rerio em um perodo de recuperao de
tambm 24 dias (VAN DER BELT et al,, 2002).

14,00
ETE 100 M 2T

12,00

ETE 100 M 3T

VTG g mL-1

10,00
8,00

ETE 100 M Media

6,00
4,00

ETE 100 M 1T

2,00
0,00

1
Tratamento

Figura 67 - Concentrao de VTG em amostras de Danio rerio machos do grupo ETE 100.
ETE 100% - 100% gua do local de lanamento de efluente da estao de
tratamento de esgoto; ETE 100 M 1T - macho teste 1; ETA 100 2T- macho
teste 2 e ETA 100 3T macho teste 3.

115
115

10,00

ETE 50 M 3T

9,00
8,00
VTG g mL-1

7,00

ETE 50 M Media

ETE 50 M 2T

6,00
5,00
4,00

ETE 50 M 1T

3,00
2,00
1,00
0,00

Tratamento 1

Figura 68 - Concentrao de VTG em amostras de Danio rerio machos do grupo ETE 50.
ETE 50% - 50% gua do local de lanamento de efluente da estao de
tratamento de esgoto, ETE 50 M 1T - macho teste 1; ETA 50 2T- macho teste
2 e ETA 50 3T macho teste 3.

14,00
11,86

12,00

9,45

VTG g mL-1

10,00
8,00

9,31

ETE 100 M 1T

8,02

ETE 100 M 2T
6,12

5,84

6,00
4,00

3,20

2,73

ETE 100 M 3T
ETE 50 M Media
ETE 50 M 1T
ETE 50 M 2T
ETE 50 M 3T

2,00
0,00

ETE 100 M Media

1
Tratamentos

Figura 69 - Concentrao de VTG em amostras de Danio rerio machos dos grupos ETE 100
e ETE 50. ETE 100% - 100% gua do local de lanamento de efluente da
estao de tratamento de esgoto; ETE 100 M 1T - macho teste 1; ETA 100 2Tmacho teste 2 e ETA 100 3T macho teste 3. ETE 50% - 50% gua do local de
lanamento de efluente da estao de tratamento de esgoto, ETE 50 M 1T macho teste 1; ETA 50 2T- macho teste 2 e ETA 50 3T macho teste 3.

116

116

Fmeas
Atravs

de

testes

estatsticos

no

foi

observada

diferena

estatisticamente significativa entre os resultados obtidos dos testes crnicos com

fmeas, tanto quando comparados os tratamentos com o grupo controle por
meio do Teste de Dunnett (P > 0,05) (Tabela 24), quando comparados os
resultados entre os tratamentos com a utilizao do teste de Kruskal-Wallis
(Tabela 25).
Tabela 24 - Resultados da aplicao do teste de Dunnett aos resultados
obtidos nos testes ex situ com fmeas de Danio rerio
Diferena entre
Nveis

Mdia

LI

LS

P-Valor

ETA 100 F - CF

14057505,29

46444968,02

18329957,45

0,650177256

ETA 50 F - CF

21013953,49

53401416,22

11373509,24

0,305316441

ETE 100 F - CF

8690063,425

25449319,86

42829446,71

0,919220541

ETE 50 F - CF

9742494,715

-43881878

24396888,57

0,884611123

CF Grupo controle fmea- gua desclorada; ETA 100F - fmeas, gua da captao para
abastecimento 100%; ETA 50F - fmeas, 50% gua captao para abastecimento + 50%
gua desclorada; ETE 100F - fmeas, gua do ponto de despejo do efluente da estao de
tratamento de esgoto 100% e ETE 50F - fmeas, 50% gua do ponto de despejo do
efluente da estao de tratamento de esgoto+ 50% gua desclorada. LI limite inferior e LS
limite superior

117
117

Tabela 25 - Resultados da aplicao do teste de Kruskal-Wallis aos

resultados obtidos nos testes ex situ com fmeas de Danio rerio
Fatores Comparados

Diferena
Observada

Diferena Crtica

Diferena

CF - ETA 100 F

6,818181818

17,79354288

No

CF - ETA 50 F

8,545454545

17,79354288

No

CF - ETE 100 F

0,287878788

18,75604105

No

CF - ETE 50 F

4,434343434

18,75604105

No

ETA 100 F - ETA 50 F

1,727272727

17,79354288

No

ETA 100 F - ETE 100 F

7,106060606

18,75604105

No

ETA 100 F - ETE 50 F

2,383838384

18,75604105

No

ETA 50 F - ETE 100 F

8,833333333

18,75604105

No

ETA 50 F - ETE 50 F

4,111111111

18,75604105

No

ETE 100 F - ETE 50 F

4,722222222

19,67150181

No

CF Grupo controle fmea- gua desclorada; ETA 100F - fmeas, gua da captao para
abastecimento 100%; ETA 50F - fmeas, 50% gua captao para abastecimento + 50%
gua desclorada; ETE 100F - fmeas, gua do ponto de despejo do efluente da estao de
tratamento de esgoto 100% e ETE 50F - fmeas, 50% gua do ponto de despejo do
efluente da estao de tratamento de esgoto+ 50% gua desclorada.

O grupo controle teve como mdia de vitelogenina 42,91 mg mL-1. O 1

teste indicou como resultado valores prximos a mdia, 45,06 mg mL-1. A
diferena dos nveis do 2 e 3 testes foi de 2,3 vezes (Figura 70).
A concentrao de VTG nas fmeas dos grupos controle estudadas variou
de 16,95 mg mL-1 a 103,66 mg mL-1. Esses resultados coincidem com o intervalo
de concentrao de VTG obtido por Brion et al. (2002). Nesse estudo os autores
quantificaram a concentrao de VTG de fmeas de Danio rerio, do grupo
controle, em diferentes estgios de maturao, e obtiveram concentraes que
variaram de 3,97 mg mL-1 a 442,5 mg mL-1. A anlise desse estudo permite inferir
sobre a grande variao da quantidade de VTG encontrada nas fmeas. Esse
118

118

fato provavelmente ocorre, pois, os animais utilizados no presente estudo,

embora fossem do mesmo lote, poderiam estar em diferentes estgios de
maturao. Van den Belt, Verheyen e Witters (2001) obtiveram resultados
inferiores aos supracitados, a VTG quantificada teve mdia de 0,72 mg mL-1 nas
fmeas de seu grupo controle, em experimento com durao de 3 semanas. Os
mesmos autores em publicao de 2002 indicam que as fmeas de Danio rerio
do grupo controle tiveram media de 4,3 mg mL-1 de VTG aps 24 dias de
experimento (Van der Belt et al., 2002).
.

70
C F 2T

60

VTG mg mL-1

50

C F 1 Mdia

C F 1 T

40
30

C F 3 T

20
10
0

1
Tratamentos

Figura 70 - Concentrao de VTG em amostras de Danio rerio fmeas do grupo

controle. CF Mdia controle fmea mdia; CF 1T- controle fmea
teste1, CF 2T- controle fmea teste 2 e CF 3T- controle fmea teste 3.

A mdia da quantificao de VTG dos peixes fmeas mantidos com gua

do rio no Ponto 1 (ETA) foi menor do que a obtida na anlise do grupo controle.
Essa observao ocorre tanto no grupo ETA 100 (30,73 mg mL-1), quanto no
grupo ETA 50 (24,41 mg mL-1). Nos resultados referente ao grupo ETA 100, os
menores nveis de VTG encontrados foram nos animais do teste 1, enquanto no
Teste 2 foram 2,65 vezes mais elevados. Os animais do grupo ETA 50 do 1

119
119

teste realizado, assim como no grupo ETA 100, apresentaram as menores

concentraes de VTG (13,12 mg mL-1). Esse resultado foi 2,6 vezes menor do
que o apresentado pelo teste 3 (34,52 mg mL-1) (Figuras 71, 72 e 73).

45

ETA 100 F 2T

40

VTG mg mL-1

35

ETA 100 F 3T
ETA 100 F Mdia

30
25
20

ETA 100 F 1T

15
10
5
0

1
Tratamentos

Figura 71 - Concentrao de VTG em amostras de Danio rerio fmeas do grupo ETA. ETA
100% - 100% gua do local de captao para abastecimento. ETA 100 F 1Tfmeas teste 1; ETA 100 2T- fmeas teste 2 e ETA 100 3T- fmeas teste 3.

120

120

40
ETA 50 F 3T

35

VTG mg mL-1

30
25

ETA 50 F 2T

ETA 50 F Mdia

20
ETA 50 F 1T

15
10
5
0

Tratamentos 1

Figura 72 - Concentrao de VTG em amostras de Danio rerio fmeas do grupo ETA. ETA
50% - 50% gua do local de captao para abastecimento. ETA 50 F 1Tfmeas teste 1; ETA 50 2T- fmeas teste 2 e ETA 50 3T- fmeas teste 3.

45

42,36

40

VTG mg mL-1

35

34,52

33,87

ETA 100 F Mdia

30,73

30
25
20

ETA 100 F 1T
ETA 100 F 2T
ETA 100 F 3T
ETA 50 F Mdia

15,97
13,12

15

ETA 50 F 1T
ETA 50 F 2T

10

ETA 50 F 3T

5
0

25,59

24,41

1
Tratamentos

Figura 73 - Concentrao de VTG em amostras de Danio rerio fmeas dos grupos ETA
100 e ETA 50. . ETA 100% - 100% gua do local de captao para
abastecimento. ETA 100 F 1T- fmeas teste 1; ETA 100 2T- fmeas teste 2 e
ETA 100 3T- fmeas teste 3. ETA 50% - 50% gua do local de captao para
abastecimento. ETA 50 F 1T- fmeas teste 1; ETA 50 2T- fmeas teste 2 e
ETA 50 3T- fmeas teste 3.

121
121

Em relao ao grupo ETE 100, foi verificado que a concentrao de VTG

nas fmeas foi de 53,19 mg mL-1. Entre os testes feitos o que apresentou
maiores valores foi com animais do 2 teste, cujo resultado foi prximo ao dobro
do obtido no 1 teste. A determinao da VTG dos animais do 3 teste ficou
prximo da mdia (Figura 74).

80

ETE 100 F 2T

70

VTG mg mL-1

60

ETE 100 F Mdia

ETE 100 F 3T

50
40

ETE 100 F 1T

30
20
10
0
Tratamentos

Figura 74 - Concentrao de VTG em amostras de Danio rerio fmeas do grupo ETE 100.
100% gua do local de lanamento de efluente da estao de tratamento de
esgoto. ETE 100 F 1T- fmeas teste 1; ETE 100 2T- fmeas teste 2 e ETE 100
3T- fmeas teste 3.

A determinao de VTG das amostras de animais mantidos por 21 dias

em aqurios contendo 50% de gua proveniente do local de lanamento de
efluente da estao de tratamento de esgoto no rio Paraba do Sul variou entre
36,44 e 70,18 mg mL-1. Assim como no teste ETE 100%, os animais que
apresentaram a maior quantidade de VTG foram os do 2 teste, seguido pelo
terceiro e com as menores quantidades de VTG, os do 1 teste (Figuras 75 e
76).
A concentrao mdia obtida nos estudos de exposio de exemplares
fmeas de Danio rerio gua do rio Paraba do Sul foi de 42,91 mg mL-1. Esse
resultado superior ao demonstrado por Van den Belt et al (2001) que,
estudaram a alterao causada pela exposio de fmeas de D. rerio durante o
122

122

perodo de 3 semanas na presena do hormnio 17-etinilestradiol e a resposta

obtida foi uma concentrao mdia de 31,8 mg mL-1 de VTG nesses animais. Os
mesmos autores, em estudo posterior, indicam a induo da sntese de VTG
quantificando a protena e tendo valores de aproximadamente 17 a 47 mg mL-1,
quando fmeas de D. rerio so exposta ao 17-etinilestradiol (VAN DEN BELT et
al.,2002).

70
ETE 50 F 2T
60

VTG mg mL-1

50
40

ETE 50 F Mdia
ETE 50 F 3T

30
20

ETE 50 F 1T

10
0

1
Tratamentos

Figura 75 - Concentrao de VTG em amostras de Danio rerio fmeas do grupo ETE 50. 50%
gua do local de lanamento de efluente da estao de tratamento de esgoto. ETE
50 F 1T- fmeas teste 1; ETE 50 2T- fmeas teste 2 e ETE 50 3T- fmeas teste 3.

123
123

80
70,19

70

VTG mg mL-1

60

61,91
53,2

ETE 100 F Mdia

52,95

ETE 100 F 1T

50
40

36,45

ETE 100 F 2T

34,76

30,25

30

ETE 50 F Mdia

20

12,13

10
0

ETE 100 F 3T
ETE 50 F 1T
ETE 50 F 2T
ETE 50 F 3T

1
Tratamentos

Figura 76 - Concentrao de VTG em amostras de Danio rerio fmeas dos grupos ETE 100
e ETE 50. . ETE 100% - 100% gua do local de captao para abastecimento.
ETE 100 F 1T- fmeas teste 1; ETE 100 2T- fmeas teste 2 e ETE 100 3Tfmeas teste 3. ETE 50% - 50% gua do local de captao para
abastecimento. ETE 50 F 1T- fmeas teste 1; ETE 50 2T- fmeas teste 2 e
ETE 50 3T- fmeas teste 3.

5.4.2 Teste crnico in situ com Danio rerio em tanques rede mantidos no
rio Paraba do Sul

Os peixes mantidos em tanque rede no rio Paraba do Sul apresentaram

quantidades da VTG semelhantes s que foram encontradas nos peixes
empregados nos testes feitos em laboratrio, ou seja, machos produziram
vitelogenina, mas em quantidade inferior s fmeas. (Figura 77 e 78).

124

124

Teste 1

O primeiro teste ocorreu durante o ms de dezembro, cuja mdia de

temperatura foi de 25,9 C, com pluviosidade de 428,8 milmetros (mm),
segundo

dados

Centro

Integrado

de

Informaes

Agrometeorolgicas

(CIIAGRO, 2012).
Os animais mantidos em tanque rede no Ponto 1 apresentaram mdias de
quantificao de VTG de 7,67 g mL-1 nos exemplares machos e de 17,25 mg
mL-1 nas fmeas. No houve resultados para os animais do tanque rede
colocado no Ponto 2, devido ao furto do mesmo.

Teste 2

O segundo teste foi conduzido no ms de abril em temperatura ambiente

foi, em media, de 22C e a pluviosidade de 83,8mm (CIIAGRO, 2012).
No foi possvel obter resultados dos animais em nenhum dos dois pontos
testados. No Ponto1 houve a mortalidade da totalidade dos animais colocados
no tanque rede. Em relao ao Ponto 2, o mesmo problema ocorrido no 1 teste,
o furto do tanque rede.
Teste 3
O terceiro teste com tanques rede ocorreu no ms de julho, com a mdia
de temperatura ambiente de 19,1 C e a pluviosidade de 45,6mm (CIIAGRO,
2012).
A quantificao de VTG das amostras de animais do Ponto 1 obteve como
resultado, mdias de 8,21 g mL-1 para os peixes machos e 22,13 mg mL-1 para
as fmeas.
O teste no Ponto 2 no foi feito nesse perodo devido ao desaparecimento
dos tanques rede nos dois testes anteriores.

125
125

Quando so comparados, os resultados dos testes 1 e 3 seguiram o

mesmo padro. Os animais do Teste 3 apresentaram maiores nveis da VTG do
que o do teste 1, tanto os machos, quanto as fmeas.
Em relao aos machos, os exemplares utilizados no 1 teste, tiveram a
media da VTG quantificada em 7,67 g mL-1, valores prximos, apenas 6,6%
menor, do que os apresentados nas amostras do 3 teste (8,21 g mL-1).
Enquanto no Teste 1 as fmeas tiveram uma produo media de 17,25
mg mL-1 de VTG, nas fmeas do teste 2 a mdia foi de 22,13 mg mL-1, uma
diferena de 20,5%
8,30
8,20

Tanque Rede - Macho

8,21

VTG g mL-1

8,10
8,00
7,90
7,80
7,70

7,67

7,60
7,50
7,40
7,30

TR1 M

TR3 M

Teste 1 Teste 3
Figura 77 - Quantificao de VTG de Danio rerio machos, utilizados em teste crnico com
tanque rede no Ponto 1 do rio Paraba do Sul.

126

126

25

VTG mg mL-1

20

22,13

Tanque Rede - Fmeas

17,25

15
10
5
0

TR1F

TR2F

Teste 1 Teste 3
Figura 78 - Quantificao de VTG de Danio rerio fmeas, utilizados em teste crnico com
tanque rede no Ponto 1 do rio Paraba do Sul.

5.3.5 Comparao dos testes in situ e testes ex situ

Quando comparadas as concentraes da protena VTG nos animais

mantidos em tanques rede no interior do rio Paraba do Sul (Ponto 1 ETA) e os
animais mantidos em aqurios em laboratrio submetidos ao tratamento ETA
100, em ambos os casos o perodo de durao do teste foi o mesmo 21 dias,
verifica-se o mesmo padro de resposta. Padro esse que indica uma alterao
no sistema endcrino, sinalizada pela a induo da sntese de VTG. A
ocorrncia desse fato identificada especialmente nos exemplares machos.
Os exemplares machos de Danio rerio utilizados no teste com tanques
rede apresentaram uma concentrao de VTG com mdia de 7,67 g mL-1 no 1
teste e 8,21 g mL-1 no 3 teste, enquanto os animais mantidos em laboratrio
nas condies do tratamento ETA 100 apresentaram 7,16 g mL-1, como valores
mdios de concentrao de VTG.

Os resultados indicam uma alterao na

sntese de VTG, comparando-os com as mdias obtidas dos animais do grupo

controle ex situ.

127
127

Os valores semelhantes obtidos nos testes in situ e ex situ com machos

de D. rerio, indicam a possibilidade da reproduo dos efeitos que os
desreguladores endcrinos causam aos animais em seu ambiente natural.
Nos exemplares fmeas, os resultados indicam que os animais utilizados
no 1 teste apresentaram concentrao media de VTG com valor de 17,25 mg
mL-1, equivalente a 56,13% do resultado mdio das fmeas do tratamento ETA
100, que foi de 30,73 mg mL-1. No momento do 3 teste com tanque rede a
concentrao mdia de VTG das fmeas foi de 22,13 mg mL-1.

128

128

5.4 Estudo de dados referentes potencial contaminao de gua com

desreguladores endcrinos de 12 municpios localizados na bacia do
rio Paraba do Sul

Os resultados citados nos captulos anteriores, tanto do presente estudo

(in situ e ex situ), quanto das referncias bibliogrficas citadas, indicam a
existncia de efeitos de interferentes do sistema endcrino nos espcimes de
Danio rerio expostos gua do rio Paraba do Sul, tendo em vista que a
elevao da concentrao de VTG em peixes machos considerada uma
evidncia da exposio desreguladores endcrinos (ZERULLA et al., 2002).
Devido indicao da ocorrncia desses efeitos, entende-se que um
monitoramento da qualidade da gua do rio Paraba do Sul deveria ser
realizado, tendo como foco os desreguladores endcrinos. Para o inicio do
monitoramento necessrio definir locais prioritrios para esses estudos, tendo
em vista a grande rea de drenagem do rio Paraba do Sul.
Com o intuito de indicar quais os locais que deveriam ser selecionados
para o inicio de tal ao, desenvolveu-se um ndice de priorizao de municpios.
Essa nova etapa de estudo foi a anlise de variveis que fossem indicadores de
possveis fontes causadoras de contaminao por desreguladores endcrinos.
Essas variveis consideram a qualidade de gua, a populao e a produo
pecuria da regio estudada. Os locais destacados, com a utilizao desses
dados, poderiam ser indicados para sediar pontos de coleta para a realizao de
estudos de longa durao.
Foram feitas avaliaes dos resultados das diferentes estudos feitos por
rgos estatais, em 12 municpios pertencentes UGRHI 2 Paraba do Sul:
Aparecida,

Caapava,

Guaratinguet,

Jacare,

Lorena,

Paraibuna,

Pindamonhangaba, Queluz, Santa Branca, So Jos dos Campos, Taubat e

Trememb. Aps o estudo, chegou-se escolha de 10 variveis que indicam
potencial de causar contaminao da gua por desreguladores endcrinos:

129
129

Coliformes termotolerantes (CETESB, 2012)

ndice de Coleta e Tratabilidade de Esgoto da Populao Urbana de

Municpio ICTEM (CETESB, 2012)

ndice de Qualidade das guas IQA (CETESB, 2012)

ndice de Qualidade das guas Brutas para Fins de Abastecimento

Pblico IAP (CETESB, 2012)

ndice de qualidade de gua para proteo da Vida Aqutica

IVA

(CETESB, 2012)

ndice de Estado Trfico IET (CETESB, 2012)

Populao (SEADE, 2012)

Razo de sexos (SEADE, 2012)

Taxa Geomtrica de Crescimento Anual da Populao 2000/2010 (%

a.a.) (SEADE, 2012)

Produo Pecuria (bovinos, sunos e ovinos) (SEADE, 2012)

5.4.1 Qualidade de gua

As variveis referentes qualidade de gua foram obtidas atravs da

anlise de estudos publicados pela CETESB (CETESB, 2012). Os testes foram
feitos com gua coletada em 15 diferentes pontos, um ponto em cada municpio
supracitado, exceto Paraibuna, Santa Branca e So Jos dos Campos, onde,
130

130

foram avaliados resultados de dois pontos diferentes. Esses dois pontos de

coleta eram localizados no mesmo corpo dgua.
Os pontos estudados esto localizados em 4 corpos dgua pertencentes
Bacia do rio Paraba do Sul, estes mesmos rios recebem esgoto sanitrio dos
respectivos municpios, conforme apresentados na Tabela 26.

Tabela 26 - Localizao dos pontos estudados em relao a cada municpio

Corpo Hdrico

Municpio

Brao do rio Paraibuna

Paraibuna*

Rio Guaratinguet

Guaratinguet
Caapava
Pindamonhangaba
Santa Branca**
So Jos dos Campos**

Rio Paraba do Sul

Trememb
Aparecida
Lorena
Queluz
Jacare

Rio Una

Taubat

* Dois pontos de coleta no rio Paraibuna

** Dois pontos de coleta no rio Paraba do Sul

Anlise de coliformes termotolerantes

Os resultados apresentados no Relatrio anual de qualidade das guas

superficiais no estado de So Paulo 2011 (CETESB, 2012), em relao
coliformes termotolerantes, so referentes coletas realizadas em 2011, em um
total de 6 coletas nesse perodo. Considerar como resultado anual de cada
municpio, a mdia de vezes em que o resultado apresentado foi acima ou
abaixo do indicado na Resoluo CONAMA 357/05, levando em considerao

131
131

que cada rio apresenta um limite aceitvel de acordo com a sua classe (Tabela
27). Para os municpios de Paraibuna, Santa Branca e So Jos dos Campos
que apresentam dois pontos de coleta cada um, foi considerado a mdia dos
resultados entre os dois pontos de coleta. Os resultados indicam que em apenas
dois pontos de coleta (Paraibuna e Santa Branca) dos 12 municpios estudados
a quantificao de coliformes termotolerantes ficou abaixo do desejvel,
segundo a Resoluo CONAMA 357/05 (BRASIL, 2005) (Figura 79).
Tabela 27 - Concentrao de coliformes termotolerantes, em ponto dos 12
municpios de interesse do estudo

Coliformes
Termotolerantes (UFC/100mL) - Coletas
1
2
3
4
5
6
2
6
<1
<1
<1
5
Paraibuna
12
34
<1
18
<1
10
Guaratinguet
920
1.080
480
10.400
1.880
780.000
Caapava
6.700
18.000
4.400
3.500
1.140
4.400
Pinda.
3.400
4.900
6.500
5.200
2.400
4.200
720
112
60
288
352
156
Santa Branca
480
1.280
144
460
45
52
38.000
47.000
6.300
14.600
3.900
22.000
S. J. Campos
10.500
30.000
2.900
5.800
1.040
5.800
Trememb
6.600
5.200
1.080
7.800
3.800
2.800
Aparecida
11.000
22.000
45.000
23.000
36.000
7.300
Lorena
4.200
5.100
2.200
5.800
2.600
24.000
Queluz
22.000
6.700
1.760
840
1.520
2.500
Jacare
2.600
5.900
1.040
1.200
1.200
1.140
Taubat
92.000
25.000
2.000
5.400
3.300
3.800
Pinda= Pindamonhangaba.
Municpio

132

Padro
Conama
< 200
< 200
< 1.000
< 1.000
< 1.000
< 1.000
< 1.000
< 1.000
< 1.000
< 1.000
< 1.000
< 1.000
< 1.000
< 1.000
< 1.000

132

Coliformes Termotolerantes

Acima
GuaraDnguet
Caapava
Pinda
S. J. dos Campos
Trememb
Aparecida
Lorena
Queluz
Jacare
Taubat; 83,5

Abaixo
Paraibuna
Santa Branca;
16,5

Figura 79 - Porcentagem dos municpios que apresentaram concentraes de

coliformes termotolerantes acima ou abaixo do padro determinado
pela Resoluo CONAMA 357/2005.

ndice de Coleta e Tratabilidade de Esgoto da Populao Urbana de

Municpio - ICTEM

O ICTEM composto por dados referentes populao, porcentagem

do atendimento do servio de saneamento bsico e eficincia desse servio
prestado (Tabela 28). Os ndices referentes aos 12 municpios estudados foram
comparados mdia do Estado de So Paulo, e classificados como acima ou
abaixo da mdia (Figura 80).
A maioria dos municpios (7) apresentou o valor do ndice abaixo da
mdia estadual. Destacam-se com valores entre os mais baixos, os municpios
de Aparecida (1,19), Paraibuna (1,28), Queluz (1,01) e Santa Branca (1,51),
estes valores esto entre os menores apresentados em todo o estado de So
Paulo. No outro extremo da pontuao, encontra-se o municpio de
Pindamonhangaba com valor de 9,9, prximo ao valor mximo que 10.

133
133

Tabela 28 - Populao, atendimento da coleta e tratamento de esgoto e

carga poluidora referente aos 12 municpios de interesse do
estudo e mdia do estado de So Paulo.
Populao IBGE 2010

Atendimento
(%)

Municpio

Total

Urbana

Coleta

Aparecida

35.015

34.506

79

Caapava

85.414

73.107

87

Guara

112.675

107.338

90

Jacare

212.743

209.804

Lorena

82.886

Paraibuna

17.417

Pinda
Queluz
a

Trat.

Carga Poluidora
(kg DBO/dia)

Efici.

Pot.

Reman.

1.863

1.863

99

90

3.948

874

18

89

5.796

4.965

89

14

92

11.329

10.022

80.505

95

100

68

4.347

1.539

5.250

85

283

283

148.604

143.250

93

100

90

7.736

1.229

11.478

9.407

67

508

508

St . Branca

13.821

12.190

80

36

658

641

S.J. Campos

636.876

624.765

87

85

51

33.737

20.964

Taubat

281.336

275.268

92

100

86

14.864

3.172

Trememb

41.457

37.354

76

100

90

2.017

637

88

55

83

2 153.237

1 168.373

Estado de SP

41 586.892 39 874.754

Trat.- % tratamento do esgoto coletado; Efici eficincia da remoo da carga orgnica;

Pot.- carga orgnica potencial, Reaman. carga orgnica remanescente; Guara
Guaratinguet, Pinda- Pindamonhangaba.

12
10

ICTEM

Acima da Mdia
Abaixo da Mdia

8
Valor

Mdia

6
4
2
0

Municpios

Figura 80 - ndice de Coleta e Tratabilidade de Esgoto da Populao Urbana de

Municpio (ICTEM), referente aos 12 municpios estudados e mdia
do estado de So Paulo

134

134

IQA, IAP, IET e IVA

Em relao ao ndice de Qualidade das guas (IQA), 83% dos municpios

estudados (10) apresentam uma condio considerada boa. Apenas no
municpio de Aparecida os resultados forma considerados regulares.
Quando o ndice avaliado o ndice de Qualidade das guas Brutas para
Fins de Abastecimento Pblico (IAP), o resultado mais heterogneo, em 4
municpios os resultados so considerados bons, em 3 municpios regular e em
apenas um a condio encontrada foi ruim.
O ndice que avalia a qualidade da gua para a proteo da vida aqutica
foi considerado satisfatrio, sendo que em 5 casos foi timo e em 6 foi bom.
O ndice do estado trfico classifica os pontos amostrais em 9 municpios
como sendo ultraoligotrfico e em dois casos como oligotrfico. (Tabela 29).

135
135

Tabela 29 - ndices (IQA, IAP, IVA e IET) determinados para os 12

municpios estudados (CETESB, 2012)
Municpio

IQA

IAP

IVA

IET

Paraibuna

87

Guaratinguet
Caapava
Pindamonhangaba

63
54
57

51
46

2.9
3.3
2.1

49
42
44

Santa Branca

72

70

2.2

38

So Jos dos Campos

57

53

2.1

44

Trememb
Aparecida
Lorena
Queluz
Jacare
Taubat

59
50
54
60
67
54

52
41
61
35

2.6
2.6
2.8
1.8
2.3
3.1

44
46
48
41
40
44

IQA - ndice de Qualidade das guas; IAP- ndice de Qualidade das guas Brutas para Fins
de Abastecimento Pblico; IVA ndice de qualidade de gua para proteo da Vida
Aqutica e IET- ndice de Estado Trfico

Legenda
IQA/IAP/IVA
tima
Boa
Regular
Ruim
Pssima

136

IET
Ultraoligotrfico
Oligotrfico
Mesotrfico
Eutrfico
Supereutrfico
Hipereutrfico

136

5.4.2 Populao total, Razo de Sexos e Taxa Geomtrica de Crescimento

Anual da Populao

Os resultados analisados referentes s variveis supracitadas, obtidas

atravs de pesquisa no Sistema de Informaes dos Municpios Paulista da
Fundao SEADE (SEADE, 2012). O nmero de habitantes dos municpios e
sua taxa de crescimento anual foram comparados com a mdia obtida entre os
12 municpios estudados. Essa mdia da populao foi de 139.769 habitantes e
a media da taxa de crescimento da populao foi de 1,04%.
A maioria dos municpios (8) tem menos de 139,769 habitantes e,
portanto fica abaixo da mdia dos municpios estudados (tabela 30 e Figura 81).
Enquanto a comparao das taxas de crescimento anual da populao foi igual,
6 municpios acima da mdia e 6 municpios abaixo (Figura 82). A anlise da
varivel razo de sexos, que o nmero de homens para cada 100 mulheres na
populao residente em determinada rea, teve apenas nos municpios de
Queluz, Paraibuna e Trememb o resultado apontando um nmero de homens
maior do que o nmero de mulheres (Figura 83).
Tabela 30 - Populao total, taxa de crescimento e razo entre os sexos
masculino e feminino nos 12 municpios estudados da
UGRHI 2 Paraba do Sul
Populao Total
(habitantes)

Queluz
Aparecida
Guaratinguet
Lorena
Caapava
Jacare
Paraibuna
Santa Branca
So Jos dos Campos
Pindamonhangaba
Taubat
Trememb
Mdia

11.535
35.018
112.827
82.971
85.593
213.155
17.425
6.912
638.990
149.095
282.098
41.604
139.769

Taxa de
crescimento
(a.a.%)

2,18
0,03
0,73
0,57
1,08
1,00
0,23
0,58
1,57
1,56
1,34
1,65
1,04

Razo de
sexos
103,69
93,37
92,83
93,4
98,23
95,37
103,37
99,81
96,07
96,79
96,36
112,1

137
137

700.000

Abaixo da Mdia
Acima da Mdia
Mdia

Populao Total

600.000

Habitantes

500.000
400.000
300.000
200.000
100.000
0

Municpios

Figura 81 - Classificao quanto mdia do numero de habitantes dos 12 municpios

estudados

2,5

Taxa de crescimento

2,18

Acima da Mdia
Abaixo da Mdia
Mdia
1,65

(% a.a.)

1,57 1,56
1,5

1,34
1,08

1,04
1

0,73

0,5

1
0,58

0,57
0,23

0,03
0

Municpios
Figura 82 - Classificao quanto mdia da taxa de crescimento da populao dos
12 municpios estudados

138

138

n homens a cada 100 mulheres

Razo de sexos

Maior n de mulheres
Maior n de homens

120
100
80
60
40
20
0

Municpios

Figura 83 - Classificao quanto mdia da razo entre os sexos dos 12

municpios estudados

5.4.3 Produo Pecuria (bovinos, sunos e ovinos)

A produo pecuria dos 12 municpios de interesse foi avaliada. Atravs

de pesquisas no banco de dados da Fundao SEADE (SEADE, 2012), foram
obtidos os nmeros de cabeas de bovinos, sunos e ovinos criados. Devido
diferena da quantidade de estrognios excretados pelos animais, foi utilizado
um fator de multiplicao para que houvesse equivalncia entre os trs rebanhos
(sunos= 0,5988 e ovinos= 0,1395). Os resultados apresentado na Tabela 31
foram calculados atravs da frmula:
Produo Pecuria = n de cabeas de bovinos + (n de cabeas de sunos x
0,5988) + (n de cabeas de ovinos x 0,1395)
Os resultados obtidos com a utilizao da frmula supracitada foram
comparados com a mdia obtida da produo pecuria dos 12 municpios de

139
139

interesse do presente estudo. Constatou-se que 7 municpios apresentam uma

produo pecuria abaixo da mdia e 5 acima da mdia (Figura 84).

Tabela 31 - Produo de bovinos, sunos e ovinos nos 12 municpios de

interesse da UGRHI 2 Paraba do Sul e fator de multiplicao
para que equivalncia entre os trs rebanhos.
Bovinos

Sunos

Ovinos

Total (fator de

(n cabeas)

(n cabeas)

(n cabeas)

multiplicao)

Queluz

8.725

681

116

9.149

Aparecida

1.984

701

2.404

Guaratinguet

32.881

3.057

11

34.713

Lorena

20.186

451

11

20.458

Caapava

22.474

500

600

22.857

Jacare

20.500

815

1.581

21.209

Paraibuna

26.948

1.600

650

27.997

Santa Branca

12.000

179

12.025

S.J. dos Campos

60.812

3.680

380

63.069

Pindamonhangaba

44.899

1.118

5.620

46.352

Taubat

39.061

720

248

39.527

Trememb

8.500

380

8.728

Municpio

Mdia

140

25.707

140

Animais (*fator de multiplicao)

70.000
60.000

Pecuria

Mdia
Acima da Mdia
Abaixo da Mdia

50.000
40.000
30.000
20.000
10.000
0

Municpios

Figura 84 - Classificao quanto mdia produo pecuria dos 12 municpios

estudados. * Considerando o fator de multiplicao adotado

141
141

5.4.4 ndice de Prioridade dos Municpios IPM

Com base nos resultados dos indicadores estudados para os 12

municpios de interesse, e seguindo o descrito na metodologia, desenvolveramse mapas.

Qualidade da gua

Utilizando os dados referentes aos recursos hdricos: coliformes

termotolerantes, ICTEM, IQA, IAP, IVA e IET, um mapa foi gerado. Esse mapa
tem como possvel classificao dos municpios, 4 classes: ruim, regular,
bom e timo (Figura 85). Do total de 12 municpios, a maioria foi classificado
como ruins (5 municpios), 3 municpios como regulares, 3 como bom e apenas
um, Santa Branca, como timo.

Populao

Com a utilizao dos estudos referentes populao dos municpios

estudados foi gerado um mapa de classificao quanto a dinmica populacional
tendo como foco a contaminao por desreguladores endcrinos. Essa
classificao foi definida como inadequada, pouco adequada, adequada e
ideal (Figura 86). Analisando o resultado do mapa so observados 3
municpios classificados como inadequados quanto dinmica populacional, 2
como sendo pouco adequado, a maioria (6) como adequado e apenas Paraibuna
foi considerado ideal.

142

142

Produo Pecuria
Em relao produo pecuria dos municpios estudados, criou-se um
mapa com a utilizao do nmero de cabeas de bovinos, sunos e ovinos,
considerando o fator de multiplicao para dar equivalncia potencial
quantidade de produo de hormnio por conta desses animais. A classificao
utilizada no mapa, acima da mdia e abaixo da mdia, foi referente mdia
determinada entre os 12 municpios estudados (Figura 87). Os municpios
determinados como acima da mdia foram 42% do total (5 municpios) enquanto
a maioria, 58% (7 municpios) est abaixo da mdia entre os produtores
pecurios.

143
143

Figura 85 - Classificao dos municpios quanto aos indicadores de qualidade de gua

144

144

145

Figura 86 - Classificao dos municpios quanto aos indicadores de dados populacionais

145

Figura 87 - Classificao dos municpios quanto aos indicadores de produo pecuria

146

146

5.5 ndice de Prioridade dos Municpios IPM

Com a utilizao dos dados constantes nos 3 mapas supracitados, qualidade

de gua, populao e pecuria, construiu-se um mapa geral com o intuito de obter a
priorizao dos municpios quanto questo da potencial contaminao por
desreguladores endcrinos. Os municpios foram classificados como ruim,
regular, bom e timo (Figura 88). Quando todos os indicadores so utilizados
para a determinao da priorizao dos municpios, os resultados indicam que, 33%
dos municpios so considerados ruins (Pindamonhangaba, Aparecida, Taubat e
So Jos dos Campos), 33% regulares (Guaratinguet, Lorena, Caapava e
Queluz), 2 bons (Jacare e Paraibuna) e 2 timos (Trememb e Casa Branca).
Os resultados apresentados permitem identificar quais, entre os municpios
estudados, so prioritrios para que sejam realizados testes que indiquem possveis
efeitos causados por desreguladores endcrinos. Esse monitoramento visa avaliar
os efeitos de mdio e longo prazo em populaes naturais de espcies que ocorrem
no rio Paraba do Sul, algumas delas inclusive, ameaadas de extino no estado de
So Paulo, como por exemplo, os peixes curimbat (Prochilodus vimboides),
pirapitinga do sul (Brycon opalinus), piabanha (Brycon insignis) e surubim da
Paraba (Steindachneridion parahybae). Essas espcies constam na lista de
espcies ameaadas de extino do estado de So Paulo, conforme Decreto
56.031/2010 (SO PAULO, 2010) e so espcies alvo do Plano de Ao Nacional
da Bacia do Paraba do Sul (POLAZ et al., 2011), demonstrando assim, exemplos de
espcies importantes que seriam beneficiadas com uma possvel aplicao dos
estudos realizados.
Com os resultados do monitoramento constante desses corpos dgua,
possvel definir estratgias de como evitar que a biodiversidade dependente desse
recurso natural seja afetada negativamente, bem como a populao em geral.
Como nas normas em vigor que regem o padro do efluente lanado no
incluem poluentes especficos, como os desreguladores endcrinos estudados no
presente trabalho, necessria a alterao do modelo de gesto atual do
monitoramento para que a ameaa dos desreguladores endcrinos seja combatida.

147147

Deve-se destacar a importncia de atribuir prioridade aos locais de

monitoramento, esse exerccio anterior implementao dos estudos em campo,
essencial, pois o mesmo oneroso, tanto por conta do elevado trabalho e quanto
dos altos gastos que estes trabalhos trazem (BRACK et al., 2007).

148

148

149

Figura 88 - ndice de Prioridade dos Municpios considerando dados de qualidade de gua, populao e produo pecuria

149

150

150

6 CONCLUSES
A validao do mtodo de quantificao dos hormnios sintticos 17-etinilestradiol
e levonorgestrel e do hormnio natural 17-estradiol com a utilizao da tcnica de
cromatografia liquida de alta eficincia seguindo as recomendaes propostas pela
ANVISA (2003) foi atingida.
Os animais indicaram, atravs da alterao nos nveis de VTG, que h efeitos da
ao estrognica na gua do rio Paraba do Sul nos dois pontos testados. A
alterao da VTG ocorreu tanto nos testes in situ quanto no ex situ.
Os resultados semelhantes obtidos nos testes in situ e ex situ com machos de Danio
rerio, indicam a possibilidade da reproduo, no interior de um laboratrio, dos
efeitos causados por desreguladores endcrinos aos animais em seu ambiente
natural.
No

foram

detectados

os

hormnios

17-etinilestradiol,

17-estradiol

levonorgestrel nas amostras coletadas, entretanto esse fato no indica que se deve
negligenciar a existncia de desreguladores endcrinos nas guas do rio Paraba do
sul, pois efeitos foram detectados nos testes in vivo atravs da verificao da
induo da sntese de VTG em Danio rerio.
H a indicao da ao estrognica da gua do rio Paraba do Sul, comprovada pela
induo da sntese de VTG nos machos de Danio rerio, portanto, indicado que
haja o acompanhamento desses compostos no corpo dgua.
Sistemas de monitoramento da atividade estrognica presente nas guas do rio
Paraba do Sul devem ser instalados, tendo como prioritrios pontos localizados nos
municpios de Pindamonhangaba, So Jos dos Campos, Aparecida e Taubat.

151151

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