CONCEPTOS:

Dado el pequeo tamao de los microorganismos, la cantidad de informacin que

puede obtenerse de un individuo es muy limitada. Por ello es necesario el estudio de
poblaciones, que contienen miles o millones de individuos. Estas poblaciones se obtienen al
hacer crecer los microorganismos bajo condiciones ms o menos bien definidas, se
conocen como cultivos.

La mezcla de sustancias, naturales, sintticas o ambas, que permite el crecimiento y la

reproduccin de microorganismos o bien que permite mantener su viabilidad es lo que
conocemos como Medio de Cultivo

Medio
de
cultivo
Cultivo

El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparacin de medios de

cultivo. Se lica completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al
enfriarse a 40 grados. Con mnimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de
las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en l.

AGAR
DISUELTO

AGAR
PRESIPITADO
( SIN DISOLVER)

Tambin se aaden colorantes que actan como indicadores

para detectar, por ejemplo, la formacin de cido o como
inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de otras (el
Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH bsico
y amarillo en pH cido. La Violeta de Genciana se usa como
inhibidor ya que impide el crecimiento de la mayoria de las
bacterias Gram-positivas).

CONDICIONES
GENERALES PARA EL
CULTIVO DE
MICROORGANISMOS
El desarrollo adecuado de los
microorganismos en un medio
de cultivo se ve afectado por
una serie de factores de gran
importancia y que, en algunos
casos, son ajenos por completo
al propio medio.

TEMPERATURA

NUTRIENTES Y
FACTORES DE
CRECIMIENTO

ACIDEZ O
ALCALINIDAD

GRADO DE
HUMEDAD

PRESIN DE
OXGENO

DISPONIBILIDAD DE
NUTRIENTES
ADECUADOS

CONSISTENCIA
ADECUADA DEL
MEDIO

PRESENCIA (O
AUSENCIA) DE
OXGENO Y OTROS
GASES

Un medio de cultivo adecuado ha de contener como mnimo, carbono,

nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas, vitaminas y otras sustancia inductoras
del crecimiento; sustancias adecuadas para ejercer de donantes o captadores
de electrones para las reacciones qumicas que tengan lugar.
Actualmente, la forma ms extendida de aportar estas sustancias a los medios es
utilizar peptona que, adems, representa una fuente fcilmente asequible de
nitrgeno y carbno

Partiendo de un medio lquido podemos modificar su consistencia aadiendo

productos como albmina, gelatina o agar, con lo que obtendramos medios en
estado semislido
Actualmente los medios slidos son de uso universal, por su versatilidad y
comodidad, su inconveniente es que muchos microorganismos no se desarrollan
adecuadamente sino a temperaturas inferiores al punto de fusin de este
solidificante

Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmsfera con tensin de

oxgeno normal. Algunas pueden obtener el oxgeno directamente de variados
sustratos. Pero los microorganismos anaerobios estrictos slo se desarrollarn
adecuadamente en una atmsfera sin oxgeno ambiental. En un punto
intermedio, los microorganismos microaerfilos crecen mejor en condiciones
atmosfricas parcialmente anaerobias (tensin de oxgeno muy reducida),
mientras los anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a
cualquiera de las citadas condiciones.

MEDIO DE CULTIVO SOLIDO

MEDIO DE CULTIVO
SEMI SOLIDO

MEDIO DE CULTIVO LIQUIDO

CONDICIONES
ADECUADAS DE
HUMEDAD

Un nivel mnimo de humedad, tanto en el medio como en la atmsfera, es imprescindible para

un buen desarrollo de las clulas vegetativas microbianas en los cultivos. Hay que prever el
mantenimiento de estas condiciones mnimas en las estufas de cultivo a 35-37C
proporcionando una fuente adecuada de agua que mantenga la humedad necesaria para el
crecimiento de los cultivos y evitar as que se deseque el medio.

La mayora de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en presencia de

luz solar. Hay excepciones evidentes como sera el caso de los microorganismos fotosintticos
LUZ AMBIENTAL

pH

La concentracin de iones hidrgeno es muy importante para el crecimiento de los

microorganismos. La mayora de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH neutro, aunque
los hay que requieren medios ms o menos cidos. No se debe olvidar que la presencia de
cidos o bases en cantidades que no impiden el crecimiento bacteriano pueden sin embargo
inhibirlo o incluso alterar sus procesos metablicos normales

Los microorganismos mesfilos crecen de forma ptima a temperaturas entre 15 y 43C. Otros
como los psicrfilos crecen a 0C y los temfilos a 80C o incluso a temperaturas superiores
(hipertemfilos). En lneas generales, los patgenos humanos crecen en rangos de temperatura
mucho ms cortos, alrededor de 37C, y los saproftos tienen rangos ms amplios.
TEMPERATURA

ESTERILIDAD DEL
MEDIO

Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estriles para evitar la aparicin de
formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el crecimiento microbiano
normal del o de los especimenes inoculados en dichos medios. El sistema clsico para esterilizar
los medios de cultivo es el autoclave (que utiliza vapor de agua a presin como agente
esterilizante)

Tipos de medios de
cultivo

* MEDIOS DE
CULTIVO GENERALES.
Permiten
el
crecimiento deuna
gran variedad de
microorganismos.
Pertenecen a esta
categora
las
infusiones
de
extractos de carne
y peptona, una
mezcla
de
composicin similar
a la de los lquidos
orgnicos, que se
utiliza para muchas
bacterias
patgenas

* MEDIOS DE
CULTIVO
SELECTIVOS.
llevan
incorporadas
determinadas
sustancias
que
inhiben
el
crecimiento de un
microorganismo y
facilita
el
crecimiento
del
microorganismo
que nos interesa.
Pertenecen a esta
categora el caldo
lactosa bilis verde
brillanteo el agar
Salmonella-Shigella.

M EDIOS DE CULTIVO
DIFERENCIALES.
incorpora
determinadas
sustancias que nos
permiten
diferenciar
entre
dos
tipos
de
microorganismos.
Ej. El agar de sal y
manitol:
nos
permite diferenciar
en el caso de los
Staphylococos, los
que
utilizan
el
manitol
en
su
metabolismo
de
los que no.

MEDIOS DE
ENRIQUECIMIENTO.
son aquellos medios
en los cuales a un
medio base se le
aaden
determinadas
sustancias nutritivas
que son necesarias
para el crecimiento
de
un
microorganismo
exigente..
Por
ejemplo el caldo
selenito cistina o el
caldo agar sangre.

ALMACENAMIENTO DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Los medios de cultivo deshidratados se deben almacenar en
envases sellados bajo las condiciones que seale el
fabricante. Generalmente se almacenan en un lugar fresco
(entre 15 y 25), con poca humedad y protegidos de la luz
solar directa. Nunca se deben almacenar cerca de
autoclaves, hornos, ni otra fuente de calor o vapor.

Cada lote de medio de cultivo, una vez

preparado,
esterilizado,
revisado
y en su presentacin final, se identifica
mediante una etiqueta con el nombre
del
medio
de
cultivo correspondiente, el nmero de lo
te y la fecha de caducidad. Se
almacenan en frigorfico a 4C

PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO

REVISIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Es importante comprobar que el medio se comporta correctamente.

Las pruebas que debes hacer para tener seguridad son:

Revisin macroscpica: Se examina el medio a simple vista, atendiendo

a su color, a su opalescencia y transparencia, a la humedad en las
placas ya preparadas y a la posible aparicin de precipitados.

Vigilancia de Ph: Porque la mayora de los microorganismos se

desarrollan mejor en medios con un pH neutro.

Vigilancia de la esterilidad: Se lleva a cabo incubando a 30 C durante

72 horas una pequea porcin, representativa del lote de medio
preparado, para comprobar que all no crecen grmenes.

Prueba de la eficacia: En una pequea porcin representativa del medio

preparado, se inocula un microorganismo, normalmente el propio
fabricante aconseja el ms adecuado y se cultiva. As se comprueba si
en el medio de cultivo preparado el moo inoculado se desarrolla
correctamente.

MTODO DE SIEMBRA POR ESTRA

Se toma una muestra de la poblacin mixta

Se hacen estras sobre la superficie de un medio slido

preparado en una placa Petr. Conforme se van haciendo
estras en zigzag con el asa, cada vez se van depositando
en la superficie del medio menos microorganismos.

Se flamea el asa, se toca en la regin donde se han

realizado las ltimas estras y se contina la siembra con la
misma tcnica, en la superficie de medio sin sembrar an.
Repitiendo este proceso varias veces se logra separar
clulas individuales.

Se incuba a temperatura adeucuada

Mtodo de siembra en
profundidad

A partir de las diluciones seriadas preparadas tomamos

1mL de cada una de ellas y lo depositamos en distintas
placas de Petri vacas y estriles.

Despus aadimos un determinado volumen del medio

de cultivo (10-20 mL) que tenemos en un bao Mara
para evitar que se solidifique.

Dejamos solidificar y luego incubamos en la estufa

durante 24 horas a 37C.

Transcurrido el tiempo realizamos el recuento

Mtodo de siembra en superficie

El medio de cultivo ya est solidificado en la placa.

Preparamos las diluciones seriadas y aadimos a

cada placa 1 mL

Para extender sobre la superficie de la placa la

muestra se utiliza un asa de vidrio