"Ao de la Inversin para el Desarrollo Rural y la Seguridad

Alimentaria"

INFORMES DE LABORATORIO
Curso:
Microbiologa Ambiental
Docente:
Blgo. Huberto Noriega Crdova
Facultad:
Ingeniera Agraria, Industrias Alimentarias y Ambiental
Escuela:
Ingeniera Ambiental
Ciclo:
VI
Alumnas:
- Depaz Echeverra Laura
- Lamas Hernndez, Karina
- Vsquez Jara, Midory
Huacho 2013

AMBIENTAL

INFORME
N 01
PREPARADO
EN FRESCO
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1 INTRODUCCIN

El preparados en seco, son mtodos de anlisis que nos van a permitir, gracias al
microscopio y otras herramientas de laboratorio, la visualizacin de una
complejidad de elementos que a simple vista no son captados por el ojo humano.
Desde la invencin del primer microscopio, se tena una idea de la existencia de
organismos cuantiosamente pequeos, pero con el tiempo surgi algo ms
sofisticado: el microscopio electrnico. Ahora s era posible visualizar
subestructuras, lquidos e incluso la verdadera forma del objeto en observacin;
cosas que no se podan apreciar con verdadera exactitud antiguamente.
Pero no solo este instrumento ayudaba en la visualizacin de elementos muy
pequeos. Haba que valerse de ciertos procedimientos que permitieran una mejor
proyeccin de la imagen en la lente del microscopio. Uno de ellos vendra a ser
los preparados, ya sea en fresco o en seco, y que iban a jugar, por separado, un
papel preponderante en una investigacin microscpica.
El microscopio ptico tiene por lo general varios objetivos que van de 4X, 10X,
40X y 100X, stos son los aumentos o nmeros de veces que puedes ver el objeto
a observar. Podemos utilizar los dos tipos de preparados, solo que al utilizar
muestras en fresco, la observacin la realizamos en los objetivos 4X, 10X y 40X.
2 OBJETIVOS

Aprender a montar preparaciones frescas.

Observar clulas animales y procariotas describiendo las estructuras

visibles al microscopio ptico.

Reconocer la estructura bsica de las clulas animales y sus asociaciones

para la formacin de los tejidos, rganos y sistemas de rganos.

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Reconocer algunas caractersticas morfolgicas generales de las clulas

representativas como los son clulas de la mucosa oral y organismos
procariotas.

3. FUNDAMENTO TERICO
Si no hacemos ninguna especie de preparado antes de hacer una observancia
de cualquier elemento al microscopio, no sera posible la completa visualizacin
del objeto en mencin.
Por ejemplo, esto ha servido de gran ayuda en el campo de la medicina y la
biologa; principalmente en lo que a pruebas y anlisis de sangre se refiere, un
preparado en fresco permita hacer un recuento de sus diversos elementos
formes y as poder descartar cualquier anormalidad en el principal fluido corporal.
A la vez, permiti hacer un reconocimiento del ADN de cada individuo con un
simple raspado bucal, gracias al gran aumento de la lente y al preparado en
seco, las cuales nos daban una identificacin de cada persona con su respectivo
cdigo gentico.
La utilizacin de los instrumentos en el laboratorio, son de gran ayuda no solo en
un campo cientfico sino en muchos, ya que cualquier mtodo de observacin
microscpica va a tener como base a un preparado y a la utilizacin de materiales
que se van a complementar con el microscopio.
El microscopio ptico tiene por lo general varios objetivos que van de 4X, 10X,
40X y 100X, stos son los aumentos o nmeros de veces que puedes ver el objeto
a observar. Podemos utilizar los dos tipos de preparados, solo que al utilizar
muestras en fresco, la observacin la realizamos en los objetivos 4X, 10X y 40X.
Como bien sabemos que con los siguientes objetivos se ven el siguiente
microorganismo:

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4X Es panormico para el mejor campo microscopio.

10X. Se observa protozoarios, algas microscpicas.
40X.Hongos filamentosos (mohos).
100X. Bacterias.

4. MATERIALES Y REACTIVOS

Microscopio

Laminas portaobjetos

Laminas cubreobjetos

Agua destilada

Goteros

Agua residuales

Guantes quirrgicos

Asa de siembra

mechero
5. PROCEDIMIENTO
Homogenizacin de la muestra de agua residual.
Esterilizacin del asa de siembre, en el mechero.
Colocar una gota de agua de agua residual sobre un portaobjetos.
Cubrirla con un cubreobjetos dejndolo caer suavemente para que no se
formen burbujas
Llevar la preparacin al microscopio y observarla en los objetivos de 4x, 10x
y 40x
Ver sus caractersticas fsicas y analizar que tipo de microorganismos se
encuentran.
6. RESULTADO
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En el preparado en fresco se visualiz con el objetivo 40x, unos

microorganismos como algas y cianobacterias.
7. CONCLUSIONES
El preparado en fresco hecho en el laboratorio nos permiti visualizar de
manera significativa a las algas de las aguas residuales de HUACHO.
La observacin que haramos con un microscopio compuesto nunca va a
ser la misma de la que podramos hacer con un microscopio electrnico. El
segundo supera ampliamente al primero, incluso hasta en 1000 veces
mayor su poder de resolucin. Pero fue gracias al primero que permiti dar
a conocer al hombre un micro mundo que nunca se hubiese podido
imaginar.
Para poder observar al microscopio clulas, tejidos animales o vegetales y
microorganismos es necesario hacer preparaciones sobre portaobjetos.
Hacer una preparacin consiste por lo tanto en colocar y extender el tejido o
la

muestra

sobre

un

portaobjetos,

cubrindolo

despus

con

un

cubreobjetos.
Las preparaciones frescas

son temporales, solo para la prctica y

posteriormente se lava.
8. BIBLIOGRAFIA
http://uni-biologia.blogspot.com/2011/01/preparaciones-en-fresco.html
http://www.biblioteca.upibi.ipn.mx/Archivos/Material%20Didactico/T
%C3%A9cnicas%20microbiol%C3%B3gicas/T%C3%A9cnicas%20Microbiol
%C3%B3gicas%20Parte%201.pdf
https://cv2.sim.ucm.es/moodle/file.php/21298/Practicas/PracMicro07-08.pdf

9. ANEXOS (FOTOS)

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Hongos

Cianobacterias

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INFORME
N 02
COLORACION
DE GRAM
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1. INTRODUCCIN
La coloracin Gram es de gran importancia en Microbiologa porque permite
diferenciar dos grandes grupos de bacterias (Gram+ y Gram-), segn se
comporten ante esta tincin. El fundamento radica en la diferente estructura
de la pared celular de ambos grupos: las bacterias Gram+ tienen una
gruesa capa de peptidoglicano en su pared, mientras que las bacterias
Gram- tienen una capa de peptidoglicano ms fina y una capa
lipopolisacardica externa. Tras la tincin con el primer colorante (Cristal
violeta) se efecta un lavado conetanol que arrastrar al colorante slo en
las Gram (-), mientras que en las Gram (+) el colorante queda retenido y las
clulas permanecern azules. Las clulas Gram (-) se teirn despus con
un colorante de contraste (safranina) para que puedan observarse.
2. OBJETIVOS
Utilizacin

de

tcnicas

sencillas

para

la

observacin

de

microorganismos.

Conocer o manejo del microscopio ptico para la observacin de

bacterias (importancia del objetivo de inmersin).

3. FUNDAMENTO TERICO
La tincin de Gram es usada para clasificar bacterias sobre la base de sus
formas, tamaos, morfologas celulares y reaccin Gram (color). A nivel del
laboratorio es til como test para un rpido diagnstico presuntivo de
agentes infecciosos, tanto en muestras como en cultivos en crecimiento, y
adicionalmente sirve para valorar la calidad de la muestra clnica. Las
bacterias se tien gram positivas (+), gram negativas () o no se tien
debido a sus diferencias en la composicin de su pared y arquitectura
celular.
Las bacterias gram (+) tienen una gruesa capa de pptidoglucano y gran
cantidad de cidos teicicos que no son afectados por la decoloracin con
alcohol y/o acetona, reteniendo el colorante inicial acomplejado con iodo y
visualizndose en distintos grados de tonos desde el violeta al azul claro,

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dependiendo de si la naturaleza de su pared celular est intacta o daada

(por tratamientos antibiticos, edad celular).
Las bacterias gram () tienen en su pared celular una delgada capa de
peptidoglucano ligada a una membrana externa por molculas de
lipopolisacridos. Esta membrana externa es daada por el alcohol y/o
acetona de la decoloracin, permitiendo que el primer colorante
acomplejado con iodo escape y sea reemplazado por el contracolorante.
Clsicamente los reactivos utilizados para la realizacin de la tincin de
Gram han sido el cristal violeta como colorante inicial, la solucin de lugol
para acomplejar a ste, el alcohol y/o acetona para la decoloracin y la
safranina o fucsina bsica como contracolorante.
Existen una serie de puntos con respecto a un buen control de calidad de
las tinciones de Gram, y que deben ser tenidas en cuenta antes de su
realizacin, a saber:
-

Diariamente se debe comprobar que no existen precipitados ni cristales

en la solucin de cristal violeta. Si los hay, filtrar antes de su uso.

La estabilidad de la solucin de cristal violeta, alcohol y/o acetona,

safranina o fucsina bsica es de 1 ao y la de la solucin de lugol de 6
meses, todas ellas conservadas en frascos cerrados (la evaporacin

puede alterar su efectividad) a temperatura ambiente.

Cada nuevo lote, aunque lo recomendable sera diariamente, preparar
tinciones con cepas de coleccin de E.coli, S.aureus o S.epidermidis
para comprobar los resultados esperados.

Ciertos procedimientos de laboratorio pueden dificultar la interpretacin

microscpica de la tincin, como son la preparacin de extensiones
demasiado gruesas, uso de portas que no han sido prelavados o
desengrasados, sobrecalentamiento en la fijacin y excesivos lavados
durante la tincin. Todos los anteriores son causas comunes de pobres
resultados en la tincin de Gram.

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Debe tenerse en cuenta que no todos los microorganismos observados

en una tincin pueden ser cultivados, y al contrario, algunos no
observados pero presentes consiguen ser recuperados en el cultivo.

Supervisin diaria de unas cuantas tinciones elegidas al azar por

personal especializado, para confirmacin de coincidencias y posibles
discrepancias.

4. MATERIALES Y REACTIVOS
MATERIALES
Mechero
Asa de siembra
Portaobjetos
Microscopio
REACTIVOS
Cristal violeta
Lugol
Alcohol acetona
Safranina
Aceite de inmersin
5. PROCEDIMIENTO
- Lavar adecuadamente el portaobjetos, dejar secar.
- Encender el mechero y esterilizar el asa de siembra.
- Tomar la muestra con el asa de siembra y colocarla en la lmina
-

portaobjetos, extendindolo de manera circular.

Esterilizar el asa de siembra nuevamente.
Fijar la muestra al calor flamendola en el mechero, cuidando de no

quemar la muestra.
Cubrir la muestra con cristal violeta. Esperar que transurra 3 minutos.

Escurrir y enjuagar.
Cubrir la muestra con solucin lugol y esperar que transcurra 1 minuto.

Escurrir.
Lavar la muestra con alcohol cetona. Escurrir y enjuagar.
Cubrir la muestra con safranina y esperar que transcurra 1 minuto.

Escurrir y fijar la muestra al calor.

Observar en el microscopio.

6. RESULTADO
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En el microscopio pudimos observar que la coloracin en mayor proporcin

era gram (+) con la presencia de bacilos, de la muestra tomada en el Puerto
de Huacho.
7. CONCLUSIONES
El tamao de las bacterias dificulta su visin al microscopio, por eso
la coloracin de estas es un apartado sumamente importante para su
observacin.

Cabe resaltar la importancia del microscopio como instrumento de laboratorio.

Sin su utilizacin como objeto de visualizacin no se podra observar a los
microorganismos ms minsculos que puedan existir. Sus partes y sus
funciones estn en especial, elaboradas para este tipo de experimentos. Con su
amplia gama de aumentos nos es posible saber de mundos que el ojo humano
no puede darnos a conocer.

8. BIBLIOGRAFA
http://www.a14.san.gva.es/laboratorio/Web/gram.htm
http://es.scribd.com/doc/38902417/PREPARACION-EN-FRESCO-YEN-SECO
http://facultadsalud.unicauca.edu.co/Documentos2010/DptoMedInt/T
encion_de_gram.pdf
9. ANEXO (FOTOS)

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INFORME
N 03
CULTIVO DE
BACTERIAS
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1 INTRODUCCIN
Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de
microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias
artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que
crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los
microorganismos es el Cultivo.
Podemos decir que la microbiologa empieza su verdadero desarrollo como
ciencia en el momento en que se descubre el microscopio y comienza la
observacin de los primeros microorganismos, pero es indudable que la
puesta a punto de los medios de cultivo y la utilizacin del agar como
solidificante, marcan dos importantes puntos de inflexin en su evolucin.
Los medios de cultivo son un mtodo fundamental para estudiar las
bacterias es cultivarlas en un medio lquido o en la superficie de un medio
2. OBJETIVOS
-

Encontrar los tipos de microorganismos presentes en aguas residuales

de Huacho.

Observar el crecimiento de los microorganismos.

Aprender a usar correctamente el mtodo de cultivo de bacterias en

agar nutritivo.

3. FUNDAMENTO TERICO
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo
artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado
de humedad y presin de oxgeno adecuadas, as como un grado correcto
de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y
factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo
microorganismo contaminante.

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La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos

similares en composicin a los lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por
eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusin de extractos de
carne y Peptona a la que se aadirn otros ingredientes.
El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparacin de
medios de cultivo. Se lica completamente a la temperatura del agua
hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mnimas excepciones
no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado por
aquellas que crecen en l.
Agar nutritivo:
El Agar o Agar-Agar es un polisacrido sin ramificaciones obtenido de la
pared celular de varias especies de algas rojas de los gneros Gelidium,
Euchema y Gracilaria entre otros actuando como pigmento que da un color
caracterstico a cada una. La palabra agar viene del malayo agar-agar, que
significa jalea.
Qumicamente el agar es un polmero de subunidades de galactosa; en
realidad es una mezcla heterognea de dos clases de polisacridos:
agaropectina y agarosa.
Tambin es conocido por los siguientes nombres: gelosa, gelosina, gelatina
vegetal, gelatina china, gelatina japonesa, cola de pescado japonesa, etc.
Su uso principal es como medio de cultivo en microbiologa, otros usos son
como laxante, espesante para sopas, gelatinas vegetales, helados y
algunos postres y como agente aclarador de la cerveza.

4. MATERIALES Y REACTIVOS

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Agar nutritivo
Agua destilada
Ron de quemar
Muestra de sanguaza
Placas Petri
Olla a presin
Cocina
Asa de siembra
Mechero

5. PROCEDIMIENTO
-

Das antes del cultivo, hemos de esterilizado nuestras placas petris

envolvindolas con papel craft y ponindolas en la estufa a un
aproximado de 120C para que pudieran perecer todos los indicios de
elementos no deseados para poder iniciar nuestro cultivo de bacterias.

Primero se procede a poner el envase de los 100 ml del agar nutritivo

dentro de la olla a presin, haciendo un bao mara, con agua destilada
para que no genere sarro en la olla, este procedimiento es necesario
para licuar el agar que est en medio acuoso, para cuando se convierta
a estado lquido podamos verter en las diferentes placas para poder

hacer nuestro cultivo.

Luego de aproximadamente una hora el agar nutritivo ya est en estado
lquido, se procede a retirarlo de la olla a presin y verterlo a las placas
Petri.

Se espera que el agar nutritivo seque en la placa Petri para poder iniciar
nuestro cultivo de la muestra.

Del frasco donde hemos llevado nuestra muestra de sanguaza,

realizamos homogeneidad y luego con el asa de siembra primeramente
se esteriliza acercndola al fuego del mechero y luego sacando la
muestra de sanguaza con ciertos movimientos ondulatorios se siembra
en el agar nutritivo.

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Se empaqueta con el papel craft y se deja por unos das para que el
cultivo de bacterias progrese.

6. RESULTADO
-

Luego de unos 7 das aproximadamente se revisa el cultivo de

microorganismos.

Se puede ver los resultados en las fotos adjuntas en anexos.

Al observarlas al microscopio se encontr algas y ciertas bacterias

estreptococos.

7. CONCLUSIONES
-

El resultado, bajo nuestro trabajo de cultivo, llega a la conclusin de

que los microorganismos, sobre todo las bacterias se reproducen
rpidamente y se multiplican en ambientes hmedos y con nutrientes
como es el agar nutritivo.

Adems en el experimento, no solo aparecieron bacterias, si no

algas y hongos, lo que nos da a entender que los microrganismos se
propagan fcil y rpidamente.

8. BIBLIOGRAFA
-

www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/nutritivoagar.htm
http://www.slideshare.net/fer2895/cultivo-de-bacterias-hipotesis

9. ANEXOS (FOTOS)

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Primera

fase:

Esterilizacin de materiales

Olla

a
presin
donde

se
introducir en agar nutritivo

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Muestra
de

bacterias
luego de 5 das

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1 INTRODUCCIN

INFORME
N 04
CULTIVO DE
HONGOS
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Los hongos son microorganismos eucariotes de mayor tamao y complejidad que

las bacterias. Segn su morfologa los hongos se pueden dividir en dos grupos:
mohos (hongos filamentosos) y levaduras. Las levaduras son unicelulares y
generalmente presentan reproduccin asexual por gemacin.
Los mohos presentan una estructura vegetativa denominada micelio, el cual est
formado por una serie de tubos rgidos ramificados, dentro de los cuales se
encuentra el citoplasma multinucleado. Estos tubos reciben el nombre de hifas. De
esta forma a partir de una espora en germinacin se desarrolla una hifa, esta se
ramifica y forma un micelio.
El crecimiento del hongo se prolonga hasta que los nutrientes desaparezcan. Las
hifas pueden ser de dos tipos: vegetativas que penetran el substrato con el fin de
absorber nutrientes e hifas areas que son las portadoras de las estructuras
reproductoras.
La clasificacin de los hongos se hace segn las caractersticas de las hifas, la
formacin de esporas asexuales, las estructuras que contienen stas y la
capacidad de producir esporas sexuales.
En el presente informe se detallar como se realiz el cultivo de hongos para su
posterior observacin en el microscopio.
2 OBJETIVOS
-

Aislar en medio de cultivo los diferentes gneros de hongos que frecuenta el

medio ambiente y determine sus caractersticas.

Observar en el microscopio una pequea parte de las colonias que se formen

en nuestro medio de cultivo con hongos

3 FUNDAMENTO TEORICO:

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La rama de la microbiologa que estudia los hongos (reino Fungi) se conoce como
la micologa. Los hongos se clasifican en 4 grupos principales a base de su modo
de reproduccin sexual:
1. Phycomycetes:

mohos

(molds)

del

agua,

del

pan

trerrestres.

Las esporas reproductivas son externas y descubiertas.

2. Ascomycetes:

levaduras

(yeast)

mohos. Poseen

esporas

sexuales llamadas ascoesporas. Estas se producen en sacos llamados ascos.

3. Basidiomycetes:

setas.

Forman

esporas

reproductivas

conocidas

como basidioesporas en estructuras llamadas basidios.

4. Deuteromycetes: Tambin llamados hongos imperfectos porque no tienen
fase reproductive sexual.
Los hongos son organismos heterotrficos, eucariotas capaces de metabolizar
gran variedad de sustratos orgnicos. Los hongos pueden ser de gran beneficio
as como tambin perjudiciales al ser humano. Aquellos que habitan en el suelo
ayudan a descomponer plantas y animales muertos, manteniendo frtil el
terreno. Los hongos que llevan a cabo fermentacin son de gran importancia
industrial. La industria de la cerveza, el vino, los quesos, los antibiticos, las
enzimas,

la

repostera,

dependen

de

los

hongos. Algunas

actividades

detrimentales de los hongos son por ejemplo: el moho que le d a

las frutas , vegetales y granos, el dao a los alimentos en general. Algunas
especies son capaces de producir drogas como toxinas y halucingenos. Algunas
especies pueden causar enfermedades al hombre, ejemplo de stos son
las micosis superficiales (en piel, pelo y uas) y las micosis sistmicas (en
pulmones, sistema nervioso, genitales).
La asociacin entre la densidad de hongos y las descargas orgnicas a cuerpos
de agua o en el suelo, sugieren que los hongos pueden ser indicadores de

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contaminacin. Desafortunadamente no se han identificado especies o grupos de

hongos importantes en este rol. Algunas especies de levaduras y hongos
filamentosos son caractersticas de aguas calientes y pueden ser indicadores
tiles de contaminacin termal.
La identificacin de hongos es dependiente de la morfologa (forma) de las
colonias cuando se crecen en medio slido, as como su crecimiento y morfologa
de estructuras reproductivas. Para la identificacin de las levaduras es importante
la actividad fisiolgica en cultivos en el laboratorio.
Medios de Cultivo:
Es donde se ponen a crecer los hongos. Se pueden usar los siguientes medios:

Agar Sabouraud
Agar Neopeptone-glucose-rose Bengal-aureomycin
Agar Czapek (para Aspergillus, penicillium y hongos relacionedos
Agar Yeast extract-malt extract-glucose
Agar Diamalt (para levaduras)

En el medio de cultivo, la peptona, la triptena y la glucosa son los nutrientes para

el desarrollo de microorganismos. El alto contenido de glucosa, la presencia de
cloranfenicol y el pH cido, inhiben el

desarrollo bacteriano y favorecen el

crecimiento de hongos y levaduras. El agar es el agente solidificante.

Puede ser suplementado con otros agentes selectivos de crecimiento
4 MATERIALES:

AGAR GLUCOSA 4%
Esptula
Matraz
Balanza triple brazo
Estufa
Olla a presin
Algodn
Aceite
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Cubre objeto y porta objeto

Asa de siembra
Azul de metileno
Agua destilada
Materiales para la limpieza del laboratorio
Placa Petri
Frascos de penicilina

5 PROCEDIMIENTO
-

Se procede a pesar la cantidad deseada de agar sabouraud para la

cantidad de placas petris que tenemos, luego de esto se diluye en agua
destilada en un matraz se le pone un tampn de algodn y luego se
procede a llevarlo a la olla a presin.

Luego de esto se procede a agarrar cuidadosamente el matraz y se lo

vierte a las placas petris, el enfriamiento y coagulacin del agar es a los
pocos minutos.

Luego para poder atrapar los hongos se procede a ir por zonas de la

universidad donde corriera el viento fuertemente para poder atrapar asi
hongos presentes en el aire.

Se envuelve en papel craft luego de tener 3 minutos en la corriente de

aire y se procede a dejar unos das la muestra para que el hongo aflore
en nuestra placa Petri.

6 RESULTADOS
- A los 7 das de la muestra, sacamos nuestra placa Petri y no se observa
muestra de hongos; lo que nos da como deduccin que la zona de la
Universidad cerca al tanque de agua, no presentaba hongos en el aire
en el momento del muestreo.
-

Finalmente en las muestras anteriores de bacterias podemos encontrar

afloramiento de un hongo que en la parte de anexos procederemos a
mostrar.

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Actualmente estamos realizando una muestra de hongos dentro del

Laboratorio Multifuncional de microbiologa al da 11 de Julio del 2013,
por lo cual esperamos un resultado positivo a nuestra muestra.

7 CONCLUSIONES
-

Pudimos encontrar diversos tipos de hongos en los diversos puntos de

la universidad.

Los hongos en el medio ambiente pueden tener una gran importancia ya

que interactan con los dems microorganismos y seres vivos presentes

8 BIBLIOGRAFIA
-

http://facultad.bayamon.inter.edu/amlugo/biol2013/cultihongos.htm http://
es.scribd.com/doc/39929921/PRACTICA-6-ANALISISMICROBIOLOGICO-DE-LOS-HONGOS

9 ANEXOS (FOTOS)

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Muestra con bacterias y hongos

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Vista

en el

microscopio

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