PRACTICA #9

SEPARACION DE AMINAOCIDOS
POR CROMATOGRAFIA EN
PAPEL

Alumno: Correa Cortes

Francisco

Universidad Autnoma del

Estado de Morelos
Facultad de Medicina

LABORATORIO DE
BIOQUIMICA
Catedrtico: Leticia Garca Gmez

PRACTICA No.9
SEPARACION DE
AMINAOCIDOS POR
CROMATOGRAFIA EN
PAPEL

Alumno: Correa Cortes Francisco

Equipo 6

Grupo: 1 A

PRACTICA #9
SEPARACION DE AMINAOCIDOS
POR CROMATOGRAFIA EN
PAPEL

Alumno: Correa Cortes

Francisco

OBJETIVO
Al finalizar de est practica el alumno deber conocer el mtodo cromatografa por
el cual se pueden separar de una mezcla los compuestos qumicamente
semejantes para su identificacin, en relacin con los conceptos de cromatografa.
HIPTESIS
Los aminocidos con un mayor peso molecular y con una mayor afinidad a la fase
estacionaria quedarn en las partes ms bajas de la tira de papel, mientras que
los ms livianos y con mayor afinidad por la fase mvil lograrn alcanzar una
mayor altura dentro de la tira de papel.
INTRODUCCIN
La cromatografa es un mtodo de anlisis que permite separar, aislar e identificar
componentes estrechamente relacionados presentes en mezclas complejos.
Existen diferentes tipos cromatografa en los cuales se utilizan una fase mvil y
una fase estacionaria. De acuerdo a los tipos de fase estacionaria y mvil, los
tipos de cromatografa pueden ser: en papel, en capa fina, gas, lquido, en gel y de
afinidad. En la cromatografa, la separacin de las molculas en la mezcla
depende de la tendencia relativa de ellas a asociarse con ms fuerza a la fase
mvil o a la estacionaria. La diferencia interaccin se manifiesta por un movimiento
diferencial.
FUNDAMENTO
El proceso cromatogrfico implica la distribucin diferencial de un soluto o
sustancia absorbible entre dos fase, una de las cuales est inmvil o estacionaria
y la mvil. En la cromatografa en papel para la separacin de los aminocidos, los
solventes utilizados son mezclas de agua, alcoholes y cidos o bases (por
ejemplo, butanol, cido actico, agua). El papel filtro utilizados sirve de soporte al
componente ms polar del solvente (agua) formando as la fase estacionaria. Los
componentes menos polares del solvente (alcohol y cido actico) constituyen la
fase mvil que arrastra diferencialmente las molculas disueltas en la fase
estacionaria. Durante el proceso cromatogrfico los aminocidos son separados
de acuerdo a su afinidad con la fase estacionaria o la fase mvil. Para permitir la
visualizacin de los aminocidos separados se hace uso de un revelador como
es la ninhidrina, la que reacciona con los alfa- aminocidos libres o combinados,
formando un compuesto de color azul (con excepcin de la prolina e hidroxiprolina
que forman un compuesto de color amarillo), que permite identificar a los
aminocidos al ser comprados con un estndar apropiado. Tambin en el valor Rf
Que es la relacin entre la distancia recorrido por un aminocidos y la distancia
que viaja el frente del solvente, medidas ambas desde el punto de aplicacin de la
muestra, es de utilidad para la identificacin de los aminocidos.

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SEPARACION DE AMINAOCIDOS
POR CROMATOGRAFIA EN
PAPEL

Alumno: Correa Cortes

Francisco

MATERIAL, REACTIVOS Y APARATOS.

Acido asprtico, 1 milimol (133 mgr %)
Leucina, 1 milimol (131 mgr %)
Butanol, cido actico, agua (4:1:1)
Ninhidrina al 0.05 %
Tubos de ensayo 13 x 100
Pipetas pasteur 2
Atomizador
Papel filtro en tira
Parrilla para secado de papel.
METODO
1. A un extremo de papel filtro en tira haga una pequea marca con lpiz a un cm de
distancia.
2. Ponga un gota en la marca antes sealada, del aminocidos cido nmero un
(c. Aspartico).
3. Repetir la misma operacin con el patrn de aminocidos nmero dos (Leucina).
4. En otro papel repetir lo mismo, pero primeramente se colocar el aminocido uno
y sobre este aplicar el aminocido dos.
5. En tres tubos de ensaye 0.75 mL de la mezcla butanol, cido actico, agua en
cada uno, introduciendo las tiras de papel independientemente una en cada tubo.
6. Tapar los tubos de ensaye con papel aluminio.
7. Dejar avanzar el frente del solvente aproximadamente hasta 2 cm. antes de
llegar al borde superior. Sacarlos y sealar con un lpiz el lugar donde lleg el
solvente.
8. Una vez seco el papel roce con una solucin de ninhidrina al 0.05 %. Dejndolo
secar nuevamente.
9. Calentar las hojas de papel en la parrilla, teniendo cuidado de no quemarlas,
hasta que aparezcan una manchas de color, que representar el lugar donde se
encuentran los aminocidos que reaccionaron con la anihidrina.
Rf = Distancia recorrida por aminocidos / distancia recorrido por el frente del
solvente.
Comparar los resultados obtenidos con los estndares correspondientes. Cuadro que
indica los valores de Rf de los aminocidos presentes en el estndar, utilizando como
solvente una mezcla de butanol: cido actico, agua (4:1:1), a una temperatura de 25
C.
AMINOCIDOS DEL ESTNDAR # 1
RF APROXIMADO

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Alumno: Correa Cortes

Francisco

SEPARACION DE AMINAOCIDOS
POR CROMATOGRAFIA EN
PAPEL

Acido asprtico
Prolina
Leucina

0.17
0.29
0.59

RESULTADOS
Aminocidos
cido sprtico
Leucina
Mezcla D y L

Recorrido
aminocidos
6.4 cm
4.7 cm
5 cm

de Recorrido
solvente
7.1 cm
5.7 cm
8 cm

de RF
0.901
0.824
0.625

DISCUSIN
Comparando los resultados obtenidos con los resultados estandarizados, se puede
decir que difieren mucho entre s. En los resultados estandarizados se nota que la
leucina tiene un RF aproximadamente del triple del RF del cido asprtico, mientras
que en los resultados obtenidos se nota que el cido asprtico tiene un RF mayor al
RF de la Leucina, aunque ambos estn muy aproximados.
En primer lugar, esto se debe a nuestra inexperiencia en este tipo de pruebas, puesto
que fue nuestro primer experimento de este tipo. Adems, al observar la tira, algunas
manchas de color llegaban ms distalmente que el color total, por lo que se tomaron
mediciones hasta ese extremo. Otro factor que pudo influir fue que no se tomaron
mediciones del solvente inmediatamente, sino que hasta que ya estaba ms seco,
por lo que no se pudo observar muy bien la marca.
Independientemente de los errores, tomando en cuenta el solvente utilizado, al ser no
polar, se supone que el aminocido no polar (Leucina) tendra un mayor RF, al ser
mayor su distancia recorrida.
CONCLUSIN
Las pruebas para identificar aminocidos, como la cromatografa, se basan en
caractersticas propias de cada aminocido, como es su punto isoelctrico y su RF.
Mediante un buen uso de la tcnica de cromatografa, se puede separar una mezcla
compleja de aminocidos. El problema en este experimento fue que se llev a cabo
un mal manejo de las muestras, debido a la inexperiencia y falta de cuidado.
Teniendo en cuenta los datos tericos se nota que la Leucina tiene una mayor
afinidad por la fase mvil que el cido asprtico, quien siempre debe tener un menor
RF.

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PAPEL

Alumno: Correa Cortes

Francisco

CUESTIONARIO
1.

Qu es la cromatografa?
Es un mtodo fsico o de separacin para la caracterizacin de mezclas complejas.
Existe cromatografa de papel y de columna. Entre la cromatografa de papel se
encuentra la de papel y capa fina. Entre la cromatografa de columna est la de
filtracin, intercambio inico, hidrofbica y afinidad.

2.

Mencionar que tipo de cromatografa se us en esta prctica?

Cromatografa de papel.
BIBLIOGRAFA
http://es.wikipedia.org/wiki/Cromatograf%C3%ADa