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Mecanismo de hidrlisis de almidones nativos y cocinados

de diferentes fuentes botnicas en la presencia de extractos


de t.
RESUMEN
Se realiz una serie de experimentos para poner de relieve el mecanismo de inhibicin de
la hidrlisis y las diferencias en la hidrlisis entre los almidones de diferentes fuentes en la
presencia de extracto de t verde o negro. El primer experimento demostr que el extracto
de t negro fue ms eficaz en la reduccin de la viscosidad final para todos los
almidones. El segundo experimento mostr que el t negro fue ms eficaz en la inhibicin
de la hidrlisis del almidn en comparacin con el t verde cuando el almidn, extracto de
t, y pancreatina se aadieron al principio de pegar. El tercer experimento, cuando
almidones fueron pre-tratados con extractos de t, mostr que ambos tratamientos
redujeron la hidrlisis del almidn. Anlisis de contenido fenlico sobrenadante libre y de
dextrina soluble mostr que la actividad amiloglucosidasa se vio afectado, con
excepciones para la fcula de patata. Estas observaciones sugieren que la hidrlisis del
almidn se ve afectada por las interacciones y tambin por el impacto sobre enzimas
especficas sobre la base de la estructura de almidn.
2012 Instituto de Tecnlogos de Alimentos

INTRODUCCION
T verde y negro son bebidas populares que tienen un alto contenido de polifenoles .
Polifenoles del T son bien conocidos por sus beneficios para la salud incluida la
reduccin del riesgo de cncer de mama, atenuada presin sangunea, disminucin del
total y colesterol de la lipoprotena de baja densidad y propiedades anticancergenas y
antimutagnico (Wang y otros 1989; Ahmad y Mukhtar 1999; Davies y otros 2003; Negishi
y otros 2004; Shrubsole y otros 2009). Adems, las catequinas en el t negro se han
notificado a ser biodisponible porque slo una pequea fraccin de las catequinas
ingeridos se excreta (Warden y otros 2001).
Los polifenoles del t son los flavonoides como catequinas y teaflavinas. El perfil de los
flavonoides presentes en el t verde o negro vara debido a los diferentes mtodos de
procesamiento utilizados en su produccin. La produccin de t negro involucra la
fermentacin, que da como resultado enzimtica la oxidacin de los polifenoles. Este
proceso produce catequina polmeros, tales como teaflavinas y tearrubiginas andmany no
caracterizados polifenoles. Estos polifenoles tienen una capacidad para inhibir enzimas
digestivas. La produccin de t verde, por otro lado, implica calefaccin que inactiva las
enzimas. Como resultado, el t verde polifenoles no se oxidan y se componen de
catequinas monomricas, tales como epicatequinas, epigallocatechins, y sus steres
galoil (Kusano y otros 2008; Koh y otros 2010).
El almidn es uno de los principales carbohidratos de la dieta y, como resultado, es una
fuente de la energa. Sin embargo, las dietas con almidn pueden conducir a un ndice

glucmico ms alto respuesta, la cual, a su vez, puede conducir a diversas enfermedades


crnicas incluyendo la diabetes, las enfermedades cardiovasculares y la obesidad
(Dickinson y Brand-Miller 2005). Por lo tanto, un aumento de la ingesta de bajo ndice
glicemico alimentos ha sido recomendado (FAO 1998). Un nmero de estudios
investigado hidrlisis enzimtica de almidones en diferentes formas cocidas y nativas
(Zhang y otros, 2006; Dona y otros 2010, Goldstein y otros, 2010). Almidones cocinados
tienden a ser hidrolizada ms rpidamente que los almidones nativos y por lo tanto, se
atribuye a un mayor ndice glucmico. Una de las estrategias para reducir la glucemia
ndice de productos alimenticios podra ser el uso de compuestos fenlicos para reducir la
digestibilidad del almidn. Muchos estudios (McDougall y otros 2005; Qiang y otros, 2007;
Hossain y otros, 2008; Kusano y otros, 2008; Koh y otros 2010, Zhang y otros, 2010) han
investigado el efecto de diferentes compuestos fenlicos en digestibilidad del almidn,
pero los resultados fueron inconsistentes. Por ejemplo, resultados contradictorios se han
reportado para la eficacia de la frambuesa extractos como inhibidor de la -amilasa
(McDougall y otros, 2005; Zhang y otros, 2010). La reduccin de la digestibilidad del
almidn se atribuy a la capacidad de los compuestos fenlicos para inhibir digestivo
enzimas. La reduccin de la digestibilidad del almidn no es el nico aspecto que se ha
estudiado. Los investigadores tambin han investigado el efecto de los compuestos
fenlicos en las propiedades de pegado de almidones (Beta y Corke 2004; Zhu y otros,
2008, 2009) y en la retrogradacin del almidn (Wu y otros, 2009). Mientras que estos
hallazgos sugirieron interaccin entre polmeros de almidn y compuestos fenlicos, los
investigadores el estudio de la digestin inhibicin de la enzima implicada y no
interacciones como un mecanismo de inhibicin de la hidrlisis. Ms recientemente, una
posible interaccin se sugiri entre amilosa y t verde polifenoles, que influyeron en la
digestin del almidn (Liu y otros 2011).
Los almidones de diferentes fuentes botnicas difieren en varios aspectos incluyendo su
morfologa y la estructura que, en consecuencia tener un impacto en sus propiedades
funcionales. Investigaciones recientes han se muestra que estas diferencias de
arquitectura, tales como la organizacin de polmeros dentro del grnulo, afectar a las
propiedades como grnulo hinchazn y el polmero lixiviacin (Dhillon y otros 2011). Por lo
tanto, es importante tener en cuenta estos factores, as como en intentar para investigar el
impacto de los polifenoles del t en la digestin del almidn. Este estudio muestra el
impacto de los extractos de t verde o negro en la hidrlisis del almidn y sugiere que el
mecanismo de inhibicin es relacionado con las interacciones entre compuestos fenlicos
y almidn y tambin pone de relieve las diferencias en la hidrlisis entre almidones de
diferentes fuentes botnicas.
MATERIALES Y MTODOS
MATERIALES

Trigo (34% de amilosa), maz (22% de amilosa), patata (22% de amilosa), y el arroz (9%
de amilosa) almidones se obtuvieron de MGP Ingredientes (Atchison, Kansas., EE.UU.),
Natl. Almidn (Bridgewater, NJ, EE.UU.), Penford Food Ingredients Co. (Centennial,
Colorado, EE.UU.) y Sigma (St. Louis, Missouri, EE.UU.), respectivamente. Verde y el t
negro se obtuvieron de un mercado local (Guelph, ON, Canad). El contenido fenlico de
los ts verde y negro eran 10 187 37 y 7319 173, respectivamente. Pancreatina
(P1625) y cido ferlico (128.708) fueron adquiridos de Sigma. Amyloglucosidase (EAMGDF100) y glucosa oxidasa / peroxidasa (GoPod) reactivo (K-GLUC) fueron adquiridos
de Megazyme (Bray, Irlanda). Todos los dems reactivos se obtuvieron de Fisher Scientific
(Ottawa, ON, Canada).

Preparacin de extractos de t y la determinacin de su contenido de fenoles


totales (TPC)
Extractos de t se prepararon mediante la exposicin de 12 g de hojas de t a 200 ml de
agua destilada a 95 C durante 30 min. TPC de t era determinado mediante el ensayo
de Folin-Ciocalteu (Beta y otras 2005). Brevemente, 1 ml de extracto de t se diluy hasta
100 ml se aadi con agua destilada y 0,1 ml de la misma a 0,75 ml de 10 veces diluido
reactivo de Folin-Ciocalteu. Despus de dejar que la mezcla que se equilibren durante 5
min, 0.75 ml de solucin de carbonato de sodio (60 g / L) se aadi. Despus de la
incubacin durante 90 minutos la absorbancia medida a 725 nm. El cido ferlico fue
utilizado como un estndar y el los resultados se expresaron como equivalentes de cido
ferlico.

Propiedades pegar
Un rpido ViscoAnalyzer (modelo RVA-4; Newport Scientific, Warriewood, Australia) se
utiliz para estudiar el efecto de los extractos de t en las propiedades de pegado de
almidones. El perfil RVA utilizado fue de la siguiente manera: la muestra se mantuvo a 37
C durante 5 min, se calent a 95 C a 10 C / min, se mantiene a 95 C durante 5 min,
y se enfri a 37 C a 10 C / min. Las muestras para el RVA se prepararon como sigue: 3
g almidn se pes en un recipiente y una mezcla de 25 g de sodio tampn de acetato (pH
5,2) y un extracto de t (100 mg de cido ferlico equivalentes) se aadi al almidn.

La hidrlisis de los almidones en RVA


El perfil RVA anterior tambin se utiliz para estudiar el efecto del t extractos sobre la
hidrlisis de diferentes almidones. Se prepararon muestras como sigue: 3 g de almidn se
pes en un recipiente seguido mediante la adicin de una mezcla de 25 g de tampn de
acetato de sodio (pH 5,2), 20 mg de equivalente de cido ferlico de extracto de t, y 0,1
ml de pancreatina (150 mg / ml). El perfil RVA se ejecute y el Se calcul la inhibicin de la
hidrlisis en RVA usando viscosidades pico.

La hidrlisis de los almidones cocinados en presencia de t


Extractos
Los almidones se calentaron usando el perfil RVA anteriormente, en presencia de
extractos de t ( 20 mg de equivalentes de cido ferlico ) . El cocido las muestras se
liofilizaron entonces . La hidrlisis de almidn cocido era realizado mediante la mezcla de
enzimas Englyst ( Englyst y otros 1992 ) , pero en menor concentracin de la enzima . De
la muestra (1,5 g) y 50 l de mezcla de enzimas se utilizaron con el fin de mantener la
misma relacin muestra - a - enzima como la utilizada en los experimentos RVA indicado
anteriormente. La hidrlisis se realiz a 37 C en un tampn de acetato de sodio ( pH
5,2 ) durante 120 min . Flotante ( 0,1 ml ) se tomaron muestras cada 20 min en 0,8 ml de
etanol al 80 % y se almacenaron a -20 C. Se determin la glucosa en el sobrenadante
utilizando el reactivo goPod . Brevemente, se centrifugaron los sobrenadantes a 1500 g
durante 3 min . A continuacin, 200 l de sobrenadante fue mezclado con 1,5 ml de
reactivo de GoPod y se incubaron a 50 C durante 20 min . Se midi la absorbancia a 510
nm . Carbohidratos solubles se determin el contenido del sobrenadante se centrifug por
el mtodo del cido fenol sulfrico. Brevemente, 0,1 ml del sobrenadante se diluy hasta 1
ml con agua destilada. A continuacin, 0,1 ml de este se mezcl con 0,4 ml de agua
seguido de la adicin de 0,5 ml de solucin de fenol ( 5 % ) y 2,5 ml de cido sulfrico
concentrado . La mezcla se incub a temperatura ambiente durante 20 min y se midi la
absorbencia a 490 nm .

El anlisis estadstico
Todos los anlisis se realizaron al menos por duplicado. Diferencias entre las medias se
compararon mediante la prueba de Tukey utilizando estadstica Software Package for
Social Sciences (SPSS) (versin 16, SPSS Inc., Chicago, Illinois, EE.UU.).

RESULTADOS
Efecto de polifenoles en las propiedades de pegado de diferentes Almidones
Las propiedades de pegado de almidones con diferentes extractos de t son se
muestra en la Figura 1.Green y extractos de t negro tienen diferentes efectos en
los perfiles de pegado y la effectswere tambin diferente para los almidones
a partir de diferentes fuentes botnicas. Adems t negro result en una menor
viscosidad final en todos los 4 almidones y la reduccin oscil entre 39% de
almidn de trigo al 19% de almidn de arroz. Adems de t verde, Sin embargo, la
reduccin de la viscosidad final a un menor grado. En patata, la reduccin fue
mnima, mientras que en otros almidones que oscil entre 18% (almidn de trigo)
a 12% (almidn de arroz). Ambos extractos tambin redujo la viscosidad a travs
de (la reduccin oscil entre 35% de almidn de arroz con t negro a 2% de
almidn de patata con el t verde) y, como En consecuencia, el aumento de las
viscosidades de degradacin para la mayora de los almidones. Mientras que la
viscosidad de pico (PV) se vio afectada tambin, los efectos fueron no
significativo. Dado que los polifenoles del t negro son ms grandes y ms

complejas que las que en el t verde, esto sugiere que el tamao y la estructura
de los compuestos fenlicos son factores muy importantes influir en las
interacciones entre los compuestos fenlicos y los almidones y
su resultado propiedades de pegado.
Efecto de los polifenoles en la hidrlisis del almidn nativo por pancreatina
La Tabla 1 resume el PV de todos los tratamientos. En presencia de enzimas pancreatina,
PV de almidn de trigo sin extractos de t fue reducido en un 88%. El almidn de patata
se vio afectada de manera similar con un 95% reduccin de la PV. PVs de almidones de
maz y arroz se han reducido a un menor grado por 21% y 41%, respectivamente.
Extracto de t verde no afect a la hidrlisis del almidn por pancreatina. Extracto de t
negro, por otra parte, era muy eficaz en la inhibicin hidrlisis por la pancreatina. Por
ejemplo, la adicin de t negro extraccin de almidn de trigo result en alta PV (3362 cP)
en comparacin a 421 cP cuando no se aadi extracto, exhibiendo as un 91,5% la
inhibicin de la hidrlisis. Los valores actuales de la papa y el maz almidones fueron 6678
cP y 3296 cP, respectivamente, en comparacin con 323 y 2.591 cP en la ausencia del
extracto que resulta en una inhibicin del 91,5% y 100% de hidrlisis, respectivamente.
Curiosamente, el extracto de t negro era menos eficaz para el almidn de arroz con slo
73,2% de inhibicin.

La hidrlisis de diferentes almidones cocinados en presencia de


t verde o negro
Para esta parte del estudio, las condiciones experimentales (el TPC de los extractos de t
y la relacin de almidn a enzima) eran los mismos como los utilizados anteriormente.
Estos experimentos investigaron el efecto de enzimas de los almidones cocinados en la
presencia de extractos de t. La cambios en la cintica de la hidrlisis de los diferentes
almidones se muestran en la
Figura 2. Tanto los extractos de t verde y negro reduce la hidrlisis
cintica de almidn. Sin embargo, las diferencias en la extensin de la hidrlisis
entre el t verde y negro slo fueron significativas para la fcula de patata (Figura 2B). La
fcula de patata a 20 min, ambos extractos redujeron el hidrlisis en un 54% (desde
0,97% a 0,45%). Sin embargo, la reduccin con t negro seguido siendo la misma hasta
120 min de hidrlisis, mientras la reduccin con t verde en 60 y 120 min fueron 23% (de
3,71% a 2,85%) y 14% (de 6,34% a 5,46%), respectivamente. Adems, los extractos
fueron los menos eficaces en almidn de arroz. Estas observaciones sugieren que la
fuente botnica de almidn y extracto fenlico tambin contribuyen a las diferencias
observadas.

DISCUSIN
Una serie de estudios recientes se han centrado en el impacto de compuestos fenlicos
en la digestin del almidn, tanto en natal y en almidones cocidos. Sin embargo, es difcil
de comparar y contrastar las inferencias a causa de las diferentes condiciones
experimentales utilizado por diferentes investigadores. Estos incluyen entorno sustrato
(tampn o agua), fuentes de almidones, compuestos fenlicos, y enzimas, relacin de
almidn a las enzimas a compuestos fenlicos, y otros condiciones experimentales. En
general, los cambios en la pegar propiedades observadas en la presencia de compuestos
fenlicos se atribuyen ya sea a la complejacin de los compuestos fenlicos con almidn
o los cambios en la intrnseca pH provocada por los cidos fenlicos (Beta y Corke

2004, Zhu y otros, 2008, 2009,. Wu y otros, 2009) Sin embargo, el impacto sobre la
digestibilidad general, se ha atribuido a la inhibicin de enzimas por parte de los
compuestos fenlicos (McDougall y otros, 2005; Qiang y otros, 2007; Hossain y otros,
2008; Kusano y otros 2008 ; Koh y otros 2010 , Zhang y otros
2010 ) .
El primer experimento de este estudio tambin mostr cambios en pegar propiedades en
la presencia de extractos de t. Sin embargo, haba diferencias significativas entre los
efectos del extracto de t verde en comparacin con extracto de t negro. Extractos de t
verde se ha informado que contienen principalmente catequinas de bajo peso molecular,
mientras que el t negro extractos contienen catequinas polimerizado ( Kusano y otros
2008 ;Koh y otros 2010 ) .
Por lo tanto, es probable que la catequinas polimerizado en el t negro interactuado con
almidn durante pegar lo que resulta en las diferencias, mientras que las catequinas del t
verde no eran tan eficaces en interactuar con el almidn durante pegar. Es importante
tener en cuenta que en estos experimentos utilizando tampones fue eliminado el efecto
del pH ; Por lo tanto , los resultados se deben probablemente a las interacciones
potenciales slo .
El almidn era significativamente hidrolizado por pancreatina durante el
pegar tratamiento ( Tabla 1 ) , como se esperaba . Por otra parte, la medida de hidrlisis
fue menor para los almidones con mayor gelatinizacin temperatura, como el arroz y el
maz en comparacin con el trigo y el patata , de nuevo como se esperaba . Cuando se
llev a cabo este experimento en la presencia de extractos de t , t negro fue
significativamente ms efectiva en la prevencin de la hidrlisis en comparacin con el t
verde . de nuevo Se observaron algunas diferencias entre los almidones , con el negro t
que es menos eficaz en el almidn de arroz en comparacin con los otros 3 almidones .
Estas observaciones sugirieron 2 posibilidades: ( 1 ) el t negro extracto fue ms eficaz en
la interaccin con el almidn y la reduccin de el nmero de sitios de unin para la enzima
o ( 2 ) el extracto de t negro era un inhibidor de la enzima mejor que el extracto de t
verde . tambin presentado una hiptesis alternativa , sobre la base de los 2 experimentos
anteriores , ocurri que la interaccin almidn con polifenoles del t negro durante la fase
de calentamiento , mientras que la interaccin con el t verde ocurrido durante la fase de
enfriamiento cuando la red de gel de almidn se establece.
El experimento siguiente investig la digestibilidad de los almidones precocinados con los
extractos de t 2. Estos resultados mostraron que tanto extractos de t negro y verde
fueron eficaces para reducir la hidrlisis del almidn .Sin embargo , esto era diferente de
la observacin en elexperimento anterior donde slo t negro era eficaz en la inhibicin
la hidrlisis del almidn . Esto plantea la cuestin del mecanismo de la inhibicin : son las
interacciones de los compuestos fenlicos con almidn resultante en la reduccin de la
accesibilidad a la enzima o enzimas son las 2 ( - amilasa y amiloglucosidasa ) inhibi ?
Se midi el contenido fenlico libre ( FPC ) en el sobrenadante durante la hidrlisis del
almidn . FPC no cambi a lo largo de la hidrlisis duracin (Tabla 2). Sin embargo, hubo
una tendencia clara entre la FPC t negro y la reduccin de la hidrlisis del almidn.
Por ejemplo, almidn de arroz tuvo los valores ms altos para el FPC negro t y tena la
menor reduccin en la hidrlisis. Por el contrario, la patata almidn cocido con el t negro
tena el FPC ms bajo y tambin tena el ms reduccin en la hidrlisis. Por lo tanto, el t
negro ms polifenoles vinculados por un almidn, el ms resistente a la hidrlisis era .
Esta tendencia, sin embargo, no era tan claro para los almidones cocinados con t verde.
Mientras que el almidn de arroz obligado los fenlicos menos t verde ( FPC ms
sobrenadante ) y se exhibi la menor reduccin en la hidrlisis del almidn , maz, trigo ,

patata y almidones tenan sobrenadante similares Valores FPC ; pero la reduccin de las
patatas para fcula hidrlisis no era tan alta como se ve en los almidones de trigo o de
maz . Estas observaciones sugieren que las diferencias estructurales entre los almidones
podra desempear un papel en el grado de interaccin y / o la hidrlisis. Estas
observaciones tambin sugieren que las interacciones starch-phenol/polyphenol influir en
la hidrlisis por probablemente dificultando las enzimas.
Sin embargo, la cuestin de cul enzima -amilasa y amiloglucosidasa , puedan verse
afectados por los extractos de t sigue abierta.
La liberacin de glucosa medido hasta ahora es el resultado de 2 enzimas: pancretica amilasa y amiloglucosidasa . Por lo tanto, para analizar el efecto de los compuestos
fenlicos en las 2 enzimas, los Tambin se analizaron los sobrenadantes que se
analizaron para la glucosa para el contenido de almidn soluble por el mtodo del fenolcido sulfrico. Productos de descomposicin - amilasa resultado en dextrinas solubles.
Si - amilasa se ve afectada por los extractos de t, la cantidad de solubles dextrina en
los sobrenadantes deben verse afectados tambin. Los datos en La figura 3 sugiere que
- amilasa no se vio afectada por cualquiera de verde o extracto de t negro cuando se
tratan con maz, trigo , arroz o almidn . Sin embargo, la actividad - amilasa pareca
estar afectada significativamente por el t negro extraer cuando se trata con la fcula de
patata. esto conduce a 2 observaciones : ( 1 ) La reduccin de la liberacin de glucosa se
muestra en la La Figura 2 para el maz , el trigo , almidn de arroz y es probablemente
debido a una reducida actividad amiloglucosidasa y no se reduce la actividad de la
amilasa ( Figura 3 ) , y ( 2 ) el tratamiento de t negro con almidn de patata como
resultado en la disminucin de la actividad de ambas enzimas . La segunda observacin
Sugiere que los compuestos polifenlicos interactan con los polmeros de almidn de
patata ; est bien reconocido que el almidn de patata cadenas ya tiene externos e
internos en comparacin con el otro almidones . Por lo tanto, se podra considerar que
esto hara almidn de patata ms susceptible a la actividad - amilasa. Sin embargo, la
Datos contrarias observadas aqu sugieren que la interaccin de las cadenas ms largas
con fenoles es probable que reduce el nmero de activo sitios disponibles para la amilasa, que a su vez reduce la sustrato disponible para la actividad amiloglucosidasa.

Conclusin
Los resultados sugieren que las interacciones compuestos almidn-fenlicos fueron los
responsables de la reduccin de la hidrlisis del almidn por el impacto enzimas
especficas en funcin de la estructura del almidn. La investigacin adicional est en
marcha para investigar y caracterizar la naturaleza de interacciones entre almidones y
compuestos fenlicos.

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