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Laboratorio de Microbiologa

CUESTIONARIO

1. LISTEN 5 MICROORGANISMOS REPRESENTATIVOS MENCIONAR


LA IMPORTANCIA QUE REPRESENTA PARA LAS REAS DE
FORMACIN.
M.lactucum
Microorganismo perteneciente al gnero (microbacterium) y tiene una
supervivencia a la pasteurizacin del 100%.
Strptococcus Thermoplulus
Microorganismo til para la fermentacin del yogur.
Clostridium butiricuan
Responsable de la hinchamiento tardo de los quesos.
Erwinia
Interviene en la produccin de alteraciones en frutas y verduras.
Salmonera
A este grupo pertenece a los agentes productores de la fiebre tifoidea y
paratifoidea, que se transmite mediante los alimentos.

2. COMO DEMUESTRAN LA EFICACIA DE LA ESTERELIZACION DE


LOS MATERIALES EN EL LABORATORIO?

Controles de
Esterilizacin
Controles de
Esterilidad

Controles fisico-qumicos
Controles biolgicos
Transferencia a medios de cultivo
Test de promocin del crecimiento
Test de bacteriostsis
Filtracin por membranas

Monitorean el proceso de
esterilizacin
Monitorean el material
esterilizado

Controles de Esterilizacin
Son controles que se realizan sobre el mtodo de esterilizacin.
Monitorean o controlan si el proceso de esterilizacin funciona
correctamente.
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Controles Biolgicos
Utiliza indicadores biolgicos como controles del proceso de
esterilizacin. Estos indicadores son preparaciones estandarizadas de
microorganismos relativamente resistentes al mtodo de esterilizacin
que se emplea. Los indicadores se procesan en forma conjunta con el
material a esterilizar y el nmero de microorganismos presentes en el
indicador es mayor que el que se encuentra en el material.
Una vez concluido el proceso de esterilizacin los indicadores son
inoculados en medios de cultivo adecuados e incubados durante un
determinado perodo de tiempo. Si el proceso de esterilizacin fue
correctamente empleado y funciona bien no debe observarse desarrollo
del indicador incubado.

Controles fisicoqumicos
Termocuplas: son mtodos directos que registran la temperatura a la
que se desarrolla la esterilizacin.
Sustancias de punto de fusin conocido: se utilizan en autoclaves
generalmente, son sustancias con un punto de fusin similar al de la
temperatura de esterilizacin del proceso. Estas sustancias estn
mezcladas con un colorante y al fundir indican si se alcanz la
temperatura ptima de esterilizacin y el tiempo que se mantuvo.
Controles de Esterilidad
Permite controlar en forma probabilstica si el material qued
completamente esterilizado pues se testea un porcentaje representativo
de todo el material.
Transferencia
Directa
a
Medios
de
Cultivo
Se transfiere una parte de la muestra a medios de cultivos apropiados
que permitan el crecimiento de cualquier contaminante.
Tioglicolato para anaerobios y aerobios (37C)
Tripticasa-Soja para aerobios (25C)
Las muestras representativas se incuban en estos medios durante un
perodo de 14 das, al cabo del cual no se debe observar ningn tipo de
crecimiento.
Puede ocurrir que la muestra no se encuentre estril pero que no se
produzca crecimiento durante la incubacin por algn motivo inherente al
medio o a la muestra, por ejemplo presencia de algn inhibidor, etc.
Test de Promocin del Crecimiento
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Es un testigo del control de esterilidad. Son testigos que se utilizan para


los medios de crecimiento del control ya que estos medios tienen
capacidad de promover el crecimiento. Para estos testigos se utilizan
microorganismos con exigencias nutricionales. Los medios deben ser
inoculados con un bajo nmero de microorganismos, se incuban durante
7 das, al cabo de los que se debe observar un abundante crecimiento.

Test de Bacteriostasis
Es un control que se realiza para determinar si la muestra
supuestamente estril no posee propiedades bacteriostticas. De esta
forma se previenen falsos negativos pues no se produce crecimiento
habiendo en la muestra microorganismos viables. Para este test se
toman los medios de cultivo con microorganismos de ensayo y se
siembran en las muestras a testear. Se incuban durante 7 das. Si se
produce crecimiento esto indica que el material no contena inhibidores.

Filtracin por Membranas


Se utiliza para determinar la esterilidad de medios de cultivo, soluciones
de antibiticos, etc.
Se filtran los medios y se procesa el filtro como en un control de
esterilidad para determinar si hay microorganismos presentes.

3. QU METODOLOGA DE ESTERILIZACIN ES ADECUADA PARA


C/U DE LAS SIGUIENTES MUESTRAS AMBIENTALES?

Medios de cultivo contaminados con salmonella.


METODO FISICO: CALOR HMEDO. La utilizacin del calor y su
eficacia depende de dos factores: el tiempo de exposicin y la
temperatura. Todos los microorganismos son susceptibles, en distinto
grado, a la accin del calor. El calor provoca desnaturalizacin de
protenas, fusin y desorganizacin de las membranas y/o procesos
oxidantes irreversibles en los microorganismos. El calor hmedo
produce desnaturalizacin y coagulacin de protenas. Estos efectos se
deben principalmente a dos razones:
131) El agua es una especie qumica muy reactiva y muchas estructuras

biolgicas son producidas por reacciones que eliminan agua.

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2) El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor


mucho ms elevado que el aire.
PROCEDIMIENTO
Pasteurizacin: Es la aplicacin de una temperatura inferior a 110 C
durante 30 minutos. La aplicacin del calor va seguida de un rpido
enfriamiento. Se usa para prevenir las infecciones de origen lcteo y
retasar la descomposicin de la leche, ya que las bacterias de la leche
no forman esporas (bacilo tuberculoso, salmonella, estreptococo y
brcela).

Muestra de agua residual domstica.


METODO
FISICO:
ESTERILIZACIN
ULTRAVIOLETA.
La
desinfeccin de lquidos mediante uso de luz ultravioleta tiene muchas
ventajas, ya que no deja residuos y tampoco altera su composicin o
propiedades como hacen otros tratamientos de carcter qumico.
La aplicacin ms comn consiste en la colocacin de un filtro UV en un
tramo del conducto por donde circula el lquido. Al tratarse de una parte
del proceso tampoco se invierte tiempo extra en tratamientos especiales
ni pasos intermedios.
Estos filtros UV interceptan e inoculan los grmenes a su paso por la luz
ultravioleta; adems la radiacin UV destruye algas y protozoos e
inhabilita as su expansin y contaminacin.

Hisopos utilizados en muestras de manipulacin de alimentos.


METODO: CALOR SECO. El calor seco produce desecacin de la
clula, es esto txico por niveles elevados de electrolitos, fusin de
membranas. Estos efectos se deben a la transferencia de calor desde
los materiales a los microorganismos que estn en contacto con stos.
La accin destructiva del calor sobre protenas y lpidos requiere mayor
temperatura cuando el material est seco o la actividad de agua del
medio es baja.
Incineracin: Consiste en someter el material contaminado a altas
temperaturas en hornos especiales para reducirlo prcticamente a
cenizas. Su fin es evitar el vertido de material de alto riesgo en la basura.

Tejidos de origen animal y desconocidos.


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METODO: RAYOS GAMMA. La eficiencia de la radiacin ionizante

radica en su capacidad para penetrar la materia, especialmente los

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rayos gamma y en su alta efectividad para inactivar los


microorganismos. La radiacin causa una elevacin moderada en la
temperatura, lo que permite que materiales sensibles al calor, como es el
caso de los tejidos biolgicos, puedan ser esterilizados. Asimismo la
radiacin es eficiente tanto a temperatura ambiente como a
temperaturas por debajo de cero, como es el caso de los tejidos
congelados, los cuales son irradiados a una temperatura entre -50 y -70
C, aproximadamente6. La irradiacin permite que los materiales sean
esterilizados en su empaque final, ya cerrado, lo que evita una posible
recontaminacin.

Suelos.
METODO FISICO: SOLARIZACIN
El terreno desnudo se labra con un motocultor y se retiran los restos
vegetales y las piedras gruesas que salgan.
A continuacin se le da un riego muy abundante que cale bien, que
moje a una profundidad de 40 centmetros.
Se cubre el suelo con un plstico transparente fino (polietileno entre
100 y 200 galgas de espesor).
La lmina debe quedar tensa y con los bordes perfectamente
enterrados para que no se escape el calor.
En general, se considera necesario dejarlo as, de 4 a 6 semanas
como mnimo. Si no est haciendo mucho calor, deja ms tiempo.
Se puede aplicar al aire libre y tambin en el interior de un invernadero.
Las plagas y enfermedades disminuirn en el cultivo siguiente.
Quizs a los 3 4 aos haya que repetirlo.
Es un mtodo eficaz, sencillo y no contaminante. No es de desinfeccin
tan fuerte como las fumigaciones qumicas, pero es una alternativa
buena y ecolgica.

Suelos inoculados con patgenos de plantas.


METODO: VAPOR A PRESION (AUTOCLAVE). Se realiza la
esterilizacin por el vapor de agua a presin. El modelo ms usado es el
de Chamberland. Esteriliza a 120 a una atmsfera de presin (estas
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condiciones pueden variar) y se deja el material durante 20 a 30

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minutos. El vapor a presin proporciona temperaturas altas con


penetracin y humedad en abundancia que facilitan la coagulacin de
las protenas.

Antibiticos.
METODO: QUIMICO.
Aldehdos: Son agentes alquilantes que actan sobre las protenas,
provocando una modificacin irreversible en enzimas e inhiben la
actividad enzimtica. Estos compuestos destruyen las esporas.
Glutaraldehdo: Consiste en preparar una solucin alcalina al 2% y
sumergir el material a esterilizar de 20 a 30 minutos, y luego un
enjuague de 10 minutos. Este mtodo tiene la ventaja de ser rpido y ser
el nico esterilizante efectivo fro. Puede esterilizar plstico, goma, vidrio,
metal, etc.

4. DEFINE LIOFILIZACIN
Mtodo de desecacin en el que se elimina el agua por congelacin del
producto hmedo y posterior sublimacin del hielo en condiciones de
vaco. Al suministrar calor el hielo sublima y se evita el paso por la fase
lquida.
LIOFILIZACIN - CONCEPTO
Una sustancia pura puede existir como slido, lquido o gas y puede
cambiar de estado por
medio de un proceso en el cual libera o absorbe calor a temperatura
constante (calor latente), de
esto depende hacia donde se direcciona dicho cambio.
El cambio de fase de slido a gas o sublimacin, debe realizarse en
condiciones de presin
y temperatura menores a las del punto triple (punto en el que conviven
los tres estados de la
materia), ya que por debajo de ste no existe la fase lquida. En el caso
del agua el punto triple se
encuentra a 4,58 Torr y 0,008 C. Por ejemplo si se tiene agua
congelada, al calentarla a una presin
menor a la de dicho punto el hielo sublima.
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Las sustancias moleculares disueltas en el agua disminuyen su punto de


fusin (descenso crioscpico), por esto es conveniente describir el
enfriamiento y posterior congelacin de una solucin de este tipo en
varias etapas. Al bajar la temperatura de una solucin, inicialmente se
produce un subenfriamiento que origina los ncleos de cristalizacin,
luego la temperatura aumenta hasta la de equilibrio. A partir de ese
momento comienzan a desprenderse los cristales de hielo puro, por lo
que la solucin se concentra hasta alcanzar la menor temperatura a la
cual puede existir solucin en equilibrio con hielo, denominada
temperatura eutctica. Por debajo de esta temperatura debera existir,
idealmente, equilibrio entre hielo y soluto.
Sin embargo las soluciones que contienen polmeros naturales como
azcares no cristalizan en este punto, sino que aumentan su viscosidad
a medida que disminuye la temperatura y el agua se congela. Esta etapa
finaliza cuando el sistema alcanza su temperatura de transicin vtrea,
donde su viscosidad aumenta significativamente en un pequeo rango
de temperatura dando lugar a un slido amorfo y frgil. Con relacin a la
conservacin de alimentos, es importante destacar que el flujo viscoso
dentro de este slido es prcticamente nulo, casi no existe flujo de
materia, lo que evita que ocurran reacciones qumicas.
Cabe aclarar que no toda el agua que compone un alimento est
disponible para que los microorganismos puedan llevar a cabo sus
actividades metablicas, solo el agua libre cumple dicho propsito. El
contenido de agua libre en un alimento se define como aw actividad de
agua. Al deshidratar un producto su disponibilidad de agua (libre)
disminuye drsticamente.
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Para eliminar entonces la mayor parte del agua libre contenida en el


slido obtenido, se le debe entregar calor a fin de lograr la sublimacin
total del hielo, cuidando que la temperatura del producto se mantenga
siempre por debajo de su temperatura de transicin vtrea. Al final de
este cambio de fase se obtiene un producto que conserva el volumen y
tamao original, presentado la forma de un vidrio altamente poroso.

La ventaja de esta estructura es que permite una rpida rehidratacin,


no obstante es frgil por lo que requiere de una proteccin que prevenga
los posibles daos ocasionados por una inadecuada manipulacin.
Asimismo, debido a la porosidad de dicha estructura es necesario
realizar el empaque del producto de forma tal que se evite la penetracin
de oxgeno, a fin de impedir procesos oxidativos sobre los lpidos.

5.

DEFINA Y EXPLIQUE Q ES LA BIOSEGURIDAD

DEFINICIN Y PRINCIPIOS DE BIOSEGURIDAD


Es un trmino que ha sido utilizado para definir y congregar las normas
de comportamiento y manejo preventivo, del personal de salud, frente a
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microorganismos potencialmente infecciosos, con el propsito de

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disminuir la probabilidad de adquirir infecciones en el medio laboral,


haciendo nfasis en la PREVENCIN, mediante la asepsia y el
aislamiento

OBJETIVO DE LA BIOSEGURIDAD
Contribuir a la construccin y apropiacin de una cultura de
comportamiento dentro del ambiente de Laboratorio (u otra rea de
riesgo) por parte del personal de salud, mediante la aplicacin de
normas de comportamiento tendientes a evitar los riesgos de infeccin,
con el fin de proteger al paciente, al personal de salud, y a la comunidad
en general preservando la calidad del medio ambiente. Contribuir a
adoptar conductas a seguir frente a un accidente por exposicin a
sangre y otros lquidos biolgicos.
El concepto de bioseguridad puede ser definido desde la perspectiva de
Biotica como un conjunto de actitudes de tipo preventivo que tiene
como base el conocimiento cientfico, motivacin y conjunto de valores
asumido desde la responsabilidad. Estas actitudes se operacionalizan en
un conjunto de normas con el objetivo de que el trabajador en salud se
cuide, cuide al paciente, a los que trabajan en su entorno inmediato y
cuide el medio ambiente en el presente y para el futuro. Una base de
sustentacin constituye la siguiente frase: La Bioseguridad como una
obligacin y un derecho

6. QUE MATERIALES Y EQUIPOS QUE


LABORATORIO DE MICROBIOLOGA?
MATERIALES Y METODOS
Tubos de ensayo
Beaker
Matraz Erlenmeyer
Matraz de fondo plano
Matraz de fondo redondo
Matraz aforado
Embudo
Vidrio reloj
Agitador
Pipeta volumtrica
Pipeta graduada
Bureta
Probeta
Placa o caja de Petri
Capsula de porcelana
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Crisol

SE

USAN

EN

EL

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Mortero
Esptula
Soporte universal
Rejilla metlica
Aro metlico
Pinza para soporte universal
Rejilla metlica
Pinza para crisol
Mechero

Realizar la siguiente lectura, identificar el material simultneamente y registra lo


observado:

1. Tubo de ensayo. Ah se observan las reacciones de las sustancias que se


depositan en l. Los hay de diferentes medidas y tambin sirven para preparar
cultivos de bacterias y hongos.
2. Caja de Petri. En ella se cultivan microorganismos, como hongos o bacterias;
tambin puede usarse para seleccionar muestras de animales.
3. Embudo. Es til para separar sustancias por medio de filtracin y para evitar
su desperdicio o derramamiento al ser cambiadas de un recipiente a otro.
4. Portaobjetos. Son laminillas de cristal planas pero tambien pueden ser
cncavas, en ellas se depositan sustancias para su observacin.
5. Cubreobjetos. Cubren y protegen las preparaciones u objetos que se
observarn al microscopio e impiden que se desprendan o muevan al ser
observados.
6. Lupas. Son lentes convexos para la observacin detallada de objetos
pequeos; como partes de plantas, insectos, etctera.
7. Lmpara de alcohol. Se emplea como fuente de calor cuando se requiere
calentamiento lento. Al usarla debe cuidarse que la mecha est limpia y
recortada para que el calor que proporcione sea adecuado
8. Vidrio de reloj. Sobre l se depositan sustancias en pequea cantidad. Son
tiles para cubrir vasos de precipitados y para colocar en agua cortes
transversales muy delgados, los cuales, sern seleccionados con una aguja de
diseccin para ser observados al microscopio.

9. Mechero de gas. Se emplea para el calentamiento rpido de sustancias.


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10. Microscopio. Hace visibles al ojo humano objetos diminutos. Es de suma


importancia en un laboratorio. Con l se han hecho avances notables en
medicina, qumica, biologa, etctera.
11. Mortero. Sirve para moler, triturar slidos o mezclar dos o ms sustancias
slidas.
12. Estuche de diseccin. Contiene bistur, agujas de diseccin, pinzas, tijeras,
etctera.
13. Beaker: Se usan para preparar, disolver o calentar directamente sobre
rejillas o planchas de calentamiento
14. Matraz Erlenmeyer: Se utiliza para montar sistemas generadores de gases
15. Matraz Aforado: Sirve para preparar volmenes exactos de concentraciones
16. Bureta: Son tubos de vidrios calibrados que suelen terminar en una llave y
sirven para medir volmenes de lquidos con mayor preescisin y exactitud.
17. Termmetro. Con l se mide la temperatura a diversas sustancias
reaccionantes (reactivos).
18. Balanza. Con ella se conoce el peso de objetos
19. Bao Mara. Es un dispositivo que permite calentar sustancias en forma
indirecta, es decir, sustancias que no pueden ser expuestos a fuego directo.
20. Vasos de precipitados. Permite calentar sustancias y obtener precipitados
de ellas.
21. Matraz de fondo plano: Se utiliza para calentar lquido.
22. Matraz de fondo redondo: Se utiliza para poner volmenes exactos de
soluciones
23. Agitador: Se usa para agitar mezclas reactivas y como accesorio en el
trasvase de lquidos
24. Cpsula de porcelana: Sirve para calentar y evaporar lquidos, fundir
cristalizar slidos
25. Crisol: Sirve para calcinar sustancias, fundir slidos.
26. Mortero: Sirve para triturar, pulverizar y mezclar slidos.
27. Esptula: Sirve para trasegar slidos y tomar nuestras de slidos.
28. Soporte universal: Pieza bsica en el montaje de los sistemas y aparatos
como pinzas y anillos de metal
29. Rejilla de Metal con Centro de Asbesto: Sirve para calentar indirectamente
ya que la llama del mechero se concentra en el anillo.
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30. Trpode:
Soporte de vaso de precipitado, matraces, etc

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31. Pinza para soporte universal: Sirve para sujetar instrumentos en el montaje
de sistemas
32. Gradilla: Se utiliza para colocar los tubos de ensayo.
33. Estufa de incubacin: Se utiliza para facilitar el desarrollo de los
microorganismos a su temperatura ptima de crecimiento
34. Frigorfico o cmaras refrigeradas: Se utilizan para conservar tanto
materiales (medios de cultivo, reactivos) como microorganismos.
35. Centrfuga. Aparato que aplica sobre los tubos una fuerza centrfuga lo que
permite la separacin de los distintos componentes de la muestra mediante la
precipitacin en el fondo del tubo de las partculas en suspensin.
36. Cmaras de seguridad biolgica
37. Contador de colonias: Es un aparato que mediante la iluminacin de la
placa y una lupa, nos permite observar con mayor nitidez las colonias y por
tanto facilita su recuento.
38. Agitador/ mezclador
39. Asas de siembra: Se utilizan para sembrar. Pueden ser metlicas o de
plstico, curvas o rectas (para la siembra por picadura).
40. Autoclave. Es el equipo ms utilizado.
Es un procedimiento de esterilizacin mediante calor hmedo.

En el laboratorio es importante el uso de colorantes y reactivos especiales;


como: El azul de metileno y el verde de metilo actico, tiles para colorear
tejidos y partes especficas de la clula para luego ser observados al
microscopio. Asimismo, existen reactivos qumicos para diversos usos; como:
cido clorhdrico, agua oxigenada, alcohol etlico, cloroformo y ter.

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REFERENCIAS
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http://www.swisscontact.bo/sw_files/mvhvmxjnomq.pdf
http://www.alimentosargentinos.gov.ar/contenido/sectores/tecnologia/ficha_03_l
iofilizados.pdf
http://www.biotalde.com/contenido/289/control-microbiologico-deesterilizacion.aspx
http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/Seminarioesterilizacion.htm

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