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Terapia ex vivo: la transformacin celular se lleva a cabo a partir de una biopsia del tejido del paciente y luego se le
trasplantan las clulas ya transformadas.
Como ocurre fuera del cuerpo del paciente, este tipo de terapia es mucho ms fcil de llevar a cabo y permite un control
mayor de las clulas infectadas. Esta tcnica est casi completamente reducida a
clulas hematopoyticas pues son clulas
cultivables, constituyendo as un material
transplantable.
Aplicaciones
Marcaje gnico: El marcaje gnico tiene como objetivo, no la curacin del paciente, sino hacer un seguimiento de las clulas, es decir, comprobar si en
un determinado sitio del cuerpo estn presentes las
clulas especcas que se han marcado. Un ejemplo de ello sera la puesta a punto de vectores para
ensayos clnicos, permitiendo, por ejemplo, que en
ocasiones en las que un paciente de cncer (leucemia) y al que se le ha realizado un autotransplante
recae se pueda saber de donde proceden las clulas,
si son de clulas trasplantadas o si son clulas que
han sobrevivido al tratamiento.
ra dejar de ser patgenos y portar genes de otros organismos. No obstante, existen otros tipos de vectores de origen no vrico que tambin han sido utilizados para ello.
As mismo, el ADN puede ser introducido en el paciente
mediante mtodos fsicos (no biolgicos) como electroporacin, biobalstica...
4.1 Virus
Todos los virus son capaces de introducir su material gentico en la clula husped como parte de su ciclo de
replicacin. Gracias a ello, pueden producir ms copias
de s mismos, e infectar a otras clulas.
4.1.1 Retrovirus
4.1
Virus
Adenovirus
Los adenovirus presentan un genoma de ADN bicatenario, y no integran su genoma cuando infectan a la clula
husped, sino que la molcula de ADN permanece libre
en el ncleo celular y se transcribe de forma independiente. Esto supone que el efecto posicional o la mutagnesis
por insercin no se dan en estos vectores, lo cual no quiere
decir que no tengan otros inconvenientes. Adems, debido al hecho de que en su ciclo natural se introducen en
el ncleo de la clula, pueden infectar tanto clulas en
divisin como clulas quiescentes.
Por ello, los ltimos vectores basados en adenovirus prcticamente han sido desprovistos de la mayor parte de sus
genes, con la excepcin de las regiones ITR (regiones repetidas de forma invertida), y la zona necesaria para la
encapsidacin.
miento, y su introduccin en estirpes celulares bien coinfectadas con virus silvestres o bien portadoras del resto
de genes del mismo implicados en la encapsidacin y replicacin, para permitir la formacin de partculas virales
recombinantes con las que realizar el tratamiento.
4.2.2 Oligonucletidos
El uso de oligonucletidos sintticos en la terapia gnica
tiene como objetivo la inactivacin de los genes implicados en el proceso de la enfermedad.
Existen varias estrategias para el tratamiento con oligonucletidos
Una estrategia, la terapia antisentido utiliza oligonucletidos con la secuencia complementaria al RNAm del
gen diana, lo que activa un mecanismo de silenciamiento gnico. Tambin se puede usar para alterar la transcripcin del gen defectuoso, modicando por ejemplo su
patrn de edicin de intrones y exones.
Tambin se hace uso de molculas pequeas de RNAi para activar un mecanismo de silenciamiento gnico similar
al de la terapia antisentido
Otra posibilidad es utilizar oligodesoxinucletidos como
un seuelo para los factores que se requieren en la activacin de la transcripcin de los genes diana. Los factores
de transcripcin se unen a los seuelos en lugar de al promotor del gen defectuoso, lo que reduce expresin de los
genes diana. Adems, oligonucletidos de ADN monocatenario han sido utilizados para dirigir el cambio de un
nica base dentro de la secuencia de un gen mutante.
4.2
Mtodos no virales
Estos mtodos presentan ciertas ventajas sobre los mtodos virales, tales como facilidades de produccin a gran
escala y baja inmunogenicidad. Anteriormente, los bajos niveles de transfeccin y expresin del gen mantenan
a los mtodos no virales en una situacin menos ventajosa; sin embargo, los recientes avances en la tecnologa de vectores han producido molculas y tcnicas de
transfeccin con eciencias similares a las de los virus.
4.4
4.3.1
Mtodos hbridos
Lipoplexes y poliplexes
liberar su ADN cargado al citoplasma, por lo que requieren de la contransfeccin con agentes que contribuyan a
la liss del endosoma. Existen otros elementos formadores
El vector de ADN puede ser cubierto por lpidos forman- de poliplexes, como el quitosano o la polietilamina, que
do una estructura organizada, como una micela o un li- si son capaces de liberarse del endosoma.
posoma. Cuando la estructura organizada forma un complejo con el ADN entonces se denomina lipoplexe.
Hay tres tipos de lpidos: aninicos, neutros, o catinicos.
Inicialmente, lpidos aninicos y neutros eran utilizados
en la construccin de lipoplexes para vectores sintticos.
Sin embargo, estos son relativamente txicos, incompatibles con uidos corporales y presentan la posibilidad de
adaptarse a permanecer en un tejido especco. Adems,
son complejos y requieren tiempo para producirlos, por
lo que la atencin se dirigi a las versiones catinicas. stos, debido a su carga positiva, interaccionan con el ADN,
que presenta carga negativa, de tal forma que facilita la
encapsulacin del ADN en liposomas. Ms tarde, se constat que el uso de lpidos catinicos mejoraba la estabilidad de los lipoplexes. Adems, como resultado de su
carga, los liposomas catinicos interactan tambin con
la membrana celular, y se cree que la endocitosis es la
principal va por la que las clulas absorben los lipoplexes.
6.2 2003
Un equipo de investigadores de la Universidad de California, en Los ngeles, insert genes en un cerebro utilizando liposomas recubiertos de un polmero llamado
polietilenglicol (PEG).[6] La transferencia de genes en es Fibroblastos drmicos: son clulas de fcil acceso y te rgano es un logro signicativo porque los vectores vicultivo, y pueden transformarse tanto ex vivo como rales son demasiado grandes para cruzar la barrera hemain vivo, pero suelen tener efectos transitorios.
toenceflica. Este mtodo tiene el potencial para el tratamiento de la enfermedad del Parkinson.
Clulas musculares: pueden transformarse mediante inyeccin in vivo de ADN y tambin mediante Tambin en ese ao se plante la interferencia por ARN
adenovirus, pero con un xito muy limitado en este para tratar la enfermedad de Huntington.[7]
ltimo caso.
6.3 2006
6
6.1
Principales acontecimientos en el
desarrollo de la terapia gnica
2002 y anteriores
En 1990, W. French Anderson propone el uso de clulas de mdula sea tratadas con un vector retroviral que
porta una copia correcta del gen que codica para la enzima adenosina desaminasa,[2] la cual se encuentra mutada.
Es una enfermedad que forma parte del grupo de las inmunodeciencias severas combinadas (SCID). Realiz la
transformacin ex-vivo con los linfocitos T del paciente,
que luego se volvieron a introducir en su cuerpo. Cinco
aos ms tarde, publicaron los resultados de la terapia,[3]
que contribuy a que la comunidad cientca y la sociedad consideraran las posibilidades de esta tcnica.
En noviembre del mismo ao, Preston Nix de la Universidad de Pensilvania inform sobre VRX496,[11] una inmunoterapia para el tratamiento del HIV que utiliza un vector lentiviral para transportar un DNA antisentido contra
la envuelta del HIV. Fue la primera terapia con un vector
lentiviral aprobada por la FDA para ensayos clnicos. Los
datos de la fase I/II ya estn disponibles.[12]
6.4 2007
El 1 de mayo del 2007, el hospital Moorelds Eye y la universidad College Londons Institute of Ophthalmology,
un ao despus el Hospital de Nios de Filadela anunciaron el primer ensayo de terapia gnica para la enfermedad hereditaria de retina. La primera operacin (en Inglaterra) se llev a cabo en un varn britnico de 23 aos
de edad, Robert Johnson, a principios de este ao.[13] .
6.8
Mientras que en Filadela Corey Haas fue el primer nio miento para un extrao desorden gentico - la deciencia
en obtener este tipo de terapeutica. La Amaurosis con- de lipoproteinlipasa(LPL).
gnita de Leber es una enfermedad hereditaria que causa
la ceguera por mutaciones en el gen RPE65. Los resultados de la Moorelds/UCL se publicaron en New En- 6.8 Porcentajes de ensayos de terapia gnica en la actualidad
gland Journal of Medicine. Se investig la transfeccin
subretiniana por el virus recombinante adeno-asociado
llevando el gen RPE65, y se encontraron resultados positivos. Los pacientes mostraron incremento de la visin,
y no se presentaron efectos secundarios aparentes.[14]
Los ensayos clnicos de esta terapia se encuentran en fase II.[15] Una de las etapas a realizar es la determinacin del tipo molecular que atie cada enfermedad (o
http://es.wikipedia.org/wiki/Distrofias_de_la_retina). A
nivel retiniano se realiza en Amrica Latina por la corporacin Virtual Eye Care MD, conocida y de renombre
por su calidad a realizar este trabajo de relacin entre fenotipo y genotipo. www.virtualeyecaremd.com
6.5
2008
Investigadores de la Universidad de Mchigan en Ann Arbor (Estados Unidos) desarrollaron una terapia gentica que ralentiza y recupera las encas ante el avance de
la enfermedad periodontal, la principal causa de prdida
de dientes en adultos.[16] Los investigadores descubrieron una forma de ayudar a ciertas clulas utilizando un
virus inactivado para producir ms cantidad de una protena denominada receptor TNF. Este factor se encuentra
en bajas cantidades en los pacientes con periodontitis. La
protena administrada permite disminuir los niveles excesivos de TNF, un compuesto que empeora la destruccin
sea inamatoria en pacientes que sufren de artritis, deterioro articular y periodontitis. Los resultados del trabajo
mostraron que entre el 60 y el 80 por ciento de los tejidos periodontales se libraban de la destruccin al utilizar
la terapia gnica[cita requerida] .
6.6
2009
6.7
2012
El 2 de noviembre la Comisin Europea autorizo a Glybe- Son numerosas las enfermedades objeto de la terapia gra, una empresa alemana(Amsterdam), a lanzar un trata- nica, siendo las ms caractersticas las tratadas a conti-
nuacin:
7.1
ADA
7.2
Cncer
El tratamiento del cncer hasta el momento ha implicado la destruccin de las clulas cancerosas con agentes
quimioteraputicos, radiacin o ciruga. Sin embargo, la
terapia gnica es otra estrategia que en algunos casos ha
logrado que el tamao de tumores slidos disminuya en
un porcentaje signicativo. Los principales mtodos que
utiliza la terapia gnica en el cncer son:
1. Aumento de la respuesta inmune celular antitumoral
(terapia inmunognica). Est basada en la habilidad
del sistema inmune para atacar contra el cncer. Para ello, se introducen antgenos en clulas tumorales
permitiendo que las clulas inmunes puedan reconocer a las clulas tumorales. As, se puede transformar las clulas tumorales con la protena CD80,
glicoprotena de membrana de clulas presentadoras
de antgenos que se une a linfocitos T potenciando
la respuesta inmune.
2. Introduccin de genes activadores de drogas dentro
de las clulas tumorales o terapia de genes suicidas.
Consiste en la introduccin selectiva de genes en clulas tumorales y no en las dems, que codican para la susceptibilidad a drogas que de otra manera no
seran txicas. Esto lleva a la insercin de enzimas;
como por ejemplo HSV-tk [Herpex simplex virus timidina kinasa]) y citosina desaminasa, que son enzimas inofensivas para las clulas de mamferos y convierten prodrogas (vg ganciclovir y 5-uorocitosina)
en metabolitos citotxicos que destruyen a las clulas tumorales en proliferacin.
3. Normalizacin del ciclo celular. Consiste en la inactivacin de oncogenes mutados, como el ras, o en la
reexpresin de antioncogenes o genes supresores de
tumor inactivos como el p53. Se han llevado a cabo ensayos clnicos en los que se inyecta en clulas
tumorales retrovirus que expresan p53. El problema
es que se necesitan grandes cantidades de virus para
tratar los tumores muy extendidos y los retrovirus
presentan una baja eciencia de trasfeccin.
4. Manipulacin de las clulas de la mdula sea. Es
utilizada principalmente en la terapia gnica de desrdenes hematolgicos, y consiste en transferir a
las clulas progenitoras hematopoyticas genes de
quimioproteccin o de quimiosensibilizacin, entre
otros. Este es el caso del gen MDR1 estudiado en el
cncer de mama que, trasplantado en clulas precursora de linfocitos T y NKs ( clulas CD34 positivas),
hace que las clulas transfectadas sean ms resistentes a altas dosis de quimioterapia.
5. Uso de ribozimas y tecnologa antisentido o antisense. Las ribozimas son ARN con actividad cataltica que actuaran incrementando la degradacin
del ARN recin traducido, disminuyendo protenas
especcas no deseadas, factor que a veces se asocia
a alteraciones tumorales. La tecnologa antisentido
se reere a oligonucletidos de ARN que no tienen
actividad cataltica, sino que son complementarios a
una secuencia gnica y que pueden actuar bloqueando el procesamiento del RNA, impidiendo el transporte del mRNA o bloqueando el inicio de la traduccin.
9
por medio de trasplantes de mdula sea o sangre del cordn umbilical de un donante HLA idntico o compatible.
En 2010 se publica un estudio que muestra importante
mejoras en dos nios diagnosticados con la enfermedad.
La terapia consisti en extraer las clulas madre hematopoyticas y volvrselas a trasferir tras integrarles el gen
WAS en el genoma. Tras la terapia gnica, detectaron niveles signicativos de la protena WASP en las diferentes
clulas del sistema inmune de los pacientes. El resultado
fue que los pacientes tuvieron varias mejoras signicativas: uno de ellos se recuper por completo de la anemia
autoinmune y el otro paciente redujo el eczema que sufra.
7.4
Beta Talasemia
de sus aplicaciones
Un concepto muy importante del que radican algunos aspectos de la seguridad de la terapia gnica es el de la barrera Weismann. Se reere al hecho de que la informacin
hereditaria slo va de clulas germinales a clulas somticas, y no al revs.
10
10
11
REFERENCIAS
Es un elemento fundamental en la trama de videojuegos [10] Brown BD, Venneri MA, Zingale A, Sergi Sergi L, Nalcomo Bioshock o Metal Gear Solid, y desempea un padini L (May 2006). Endogenous microRNA regulation
pel importante en la trama de pelculas como Muere otro
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otras muchas.
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11
Referencias
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Brousse, Franois Sigaux, Despina Moshous, Julia Hauer,
Arndt Borkhardt, Bernd H. Belohradsky, Uwe Wintergerst, Maria C. Velez, Lily Leiva, Ricardo Sorensen, Nicolas Wulraat, Stphane Blanche, Frederic D. Bushman,
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[5] http://www.nytimes.com/2002/10/04/us/
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[6] http://www.newscientist.com/article/
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11
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Roncarolo, M.D. Gene Therapy for Immunodeciency Due to Adenosine Deaminase Deciency.
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12
Bibliografa
13
Enlaces externos
12
14
14.1
Terapia gnica Fuente: https://es.wikipedia.org/wiki/Terapia_g%C3%A9nica?oldid=83618294 Colaboradores: Youssefsan, Gonis, Joseaperez, Moriel, Zwobot, Sms, Cookie, Cinabrium, Porao, Fmariluis, Reignerok, Yurik, Airunp, Natrix, Rembiapo pohyiete (bot), Orgullobot~eswiki, Caiserbot, Gerkijel, Yrbot, BOT-Superzerocool, FlaBot, Varano, Maleiva, YurikBot, Mortadelo2005, Ummowoa, Folkvanger,
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Manw, YHIM, Javierito92, HUB, Quijav, Eduardosalg, Leonpolanco, Petruss, Alexbot, Raulshc, Camilo, UA31, Shalbat, ArmandoMartin, AVBOT, Cvicgar, Diegusjaimes, Arjuno3, Andreasmperu, Luckas-bot, William1509, Er MaKy, Majofab, ArthurBot, Jordi domenech~eswiki, SuperBraulio13, Xqbot, Jkbw, Marco Gerardo, BOTrychium, UPO 0809 aparrod, UPO 0809 amormor, UPO 0809 sgonher,
UPO 0809 mcalocan, Botarel, AstaBOTh15, UPO 0809 mbonagu, UPO 0809 adelcan, TiriBOT, Halfdrag, Abece, Leugim1972, Ganmedes, HermanHn, Jorge c2010, Foundling, AVIADOR, Jomago, ZroBot, Allforrous, Sergio Andres Segovia, UPO666 0910 clmilneb,
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14.3
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