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MANUAL PROCEDIMIENTOS TECNICOS HEMATOLOGIA

LABORATORIO CLINICO
DR. MAURICIO SALAS LINARES

SAN JOSE DE CUCUTA


2012

INDICE
1.
2.
3.

INTRODUCCION
TOMA DE MUESTRAS
CUADRO HEMATICO
HEMOGLOBINA (Hb)
HEMATOCRITO
NDICES ERITROCITARIOS
RECUENTO CELULARES
RECUENTO HEMATIES
RECUENTO DE LEUCOCITOS
RECUENTO DE PLAQUETAS
VELOCIDAD DE SEDIMENTACION GLOBULAR (VSG)
MONTAJE E INTERPRETACION
ALTERACIONES
NDICES ERITROCITARIOS SECUNDARIOS
CUADRO HEMATICO AUTOMATIZADO
PARAMETROS CALCULADOS
DIFERENCIAL LEUCOCITARIO
HISTOGRAMAS
PLAQUETAS
ERITROCITOS

4.

LEUCOCITOS
PARAMETROS ERITROCITARIOS
PARAMETROS LEUCOCITARIOS
PARAMETROS PLAQUETARIOS
VALORES DE REFERENCIA
FROTIS DE SANGRE PERIFERICA
METODO DE LOS DOS PORTA OBJETOS
REACTIVOS PARA LA COLORACION
COLORACION
LECTURA DEL RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS
CARACTERISTICAS MORFOLOGICAS DE LOS
LEUCOCITOS
MORFOLOGIA DE LOS GLOBULOS ROJOS
ALATERACIONES MORFOLOGICAS ERITROCITARIAS
ALTERACIONES DEL TAMAO
(Anisocitosis)
MACROCITOSIS

MICROCITOSIS
ALTERACIONES MORFOLOGICAS (Poiquilocitosis)
ALTERACIONES DEL COLOR
HIPOCROMIA
POLICROMATOFILIA

5.

6.

9.

RANGOS DE ANISOCITOSIS DE A CUERDO AL VCM


RANGOS DE CUNATIFICACION DE LOS GLOBULOS ROJOS
NORMOBLASTOS
RECUENTO DE RETICULOSITOS
FUNDAMENTOS DE METODO
REACTIVOS
MUESTRA
PROCEDIMIENTO
HEMOSTASIA Y COAGULACION
TIEMPO PARCIAL DETROMBOPLASTINA
TIEMPO DE PROTROMBINA (PT)
7. CALIBRACION DEL TIEMPO DE PROTROMBINA
PROCESAMIENTO DE MUESTRAS
BIBLIOGRAFIA

HEMATOLOGIA CLINICA
1.

INTRODUCCION

Un correcto procedimiento, en el anlisis de los diferentes


compuestos sanguneos, proporciona una ayuda eficaz en el
diagnstico de las diferentes patologas. Este procedimiento, inicia
desde la toma de la muestra hasta la entrega del resultado al medico.
Este manual, es una gua practica de los procedimientos,
recomendaciones, y explicaciones, de cmo es el manejo y los pasos
a seguir, de las muestras que llegan para ser analizadas en
parmetros referentes a la hematologa.
2. TOMA DE MUESTRAS
La responsabilidad de un buen anlisis de los componentes
sanguneos, comienza en la toma de la muestra, este es el paso ms
importante, pues, de la cantidad de muestra y rapidez con que llegue
al laboratorio depende un adecuado anlisis.
La persona encargada de la toma de la muestra, debe tener una serie
de precauciones para su recoleccin manteniendo las reglas de
esterilidad, de bioseguridad y evitarle perturbaciones al paciente.
Los materiales utilizados para la recoleccin de la muestra de un
anlisis hematolgico son:
Agujas estriles y desechables.
Tubos al vaco, si se utiliza el sistema venojet, y a presin
atmosfrica si se utilizan agujas normales.
Anticoagulantes EDTA 1-2 mg/ml sangre o citrato de sodio
3.8%.
Alcohol
Algodn

Lo primero e indispensable que se debe realizar, es rotular el tubo de


recoleccin con el nombre del paciente, historia clnica, servicio que
procede, fecha y nmero de radicacin asignado en el laboratorio.
La puncin se realiza, por lo general, en la parte anterior del brazo,
en el pliegue del codo. Se debe limpiar la zona de venopuncin, con
un algodn impregnado de alcohol, del centro hacia fuera en crculos.
Las muestras deben ser procesadas en el menor tiempo posible y lo
ms conveniente es refrigerarlas mientras esto sucede.
3. CUADRO HEMATICO
Sin duda alguna el cuadro hemtico (CH), es de las pruebas ms
solicitadas al laboratorio clnico como un
perfil de exmenes
relacionados con los diferentes elementos celulares en la sangre y
seguimiento de entidades hematolgicas como no hematolgicas.
El CH se basa en la determinacin de hemoglobina, hematocrito,
recuentos celulares, morfologa globular, velocidad de sedimentacin,
e ndices eritrocitarios secundarios.
3.1 Hemoglobina (Hb): Es un pigmento respiratorio de la
naturaleza proteica que constituye el 95% del peso seco eritrocitario.
A travs de esta, el hemate, realiza su funcin transportadora de
oxgeno desde los pulmones a los tejidos.
La determinacin de concentracin de hemoglobina, es de criterio
fundamental, para el diagnstico de una anemia. Los mtodos, se
basan en las propiedades fsico-qumicas de la hemoglobina. Desde
1967,
se
recomienda
el
mtodo
colormetro
de
la
cianometahemoglobina (Hb + k3Fe(CN)6 Hi + CNKHiCN) como el
mas fiable.
3.2 Hematocrito: Es la relacin, entre el volumen de la masa de
eritrocitos y la masa total de la sangre. Refleja la concentracin de los
eritrocitos, ms no la masa total de estos. El hematocrito se expresa
en porcentaje o preferiblemente de acuerdo al sistema internacional
de unidades. La relacin entre el Hto. Y Hb. En la clnica contribuye al
diagnstico de la anemia.

Montaje manual: Llenar un capilar hasta las 2/3 partes


aprox., sellando la parte inferior con plastilina y llevarlo a la
micro centrfuga, por 5 a 10 minutos entre 10000 y 5000 rpm
respectivamente. Se lee con una tabla estndar, y se informa
en porcentaje %.

3.3 ndices eritrocitarios: El hematocrito, la concentracin de


hemoglobina y el recuento de glbulos rojos, se relacionan entre s
mediante los llamados ndices eritrocitarios, de gran utilidad en la
orientacin diagnostica de una anemia. Estos ndices son:
* Volumen Corpuscular Medio (VCM).
* Hemoglobina Corpuscular Media (HCM).
* Concentracin Corpuscular Media de Hemoglobina (CHCM).
El tamao d los glbulos rojos, ser otra variable que influye en la
valoracin del hematocrito, si los glbulos rojos son muy pequeos,
ocupan menor volumen y de igual manera si son mas grandes
ocuparan mayor volumen, ambas situaciones de hecho son
patolgicas y cursarn con estado anmico.
3.4 Recuento celulares: Los estudios cuantitativos de los elementos
formes de la sangre (eritrocitos, leucocitos y plaquetas), se refieren a
la concentracin de cada uno de ellos en un microlito de sangre.
3.4.1 Recuento de hemates: El mtodo tradicional, es mediante la
cmara cuenta glbulos, presentando un error excesivo. En
actualidad el empleo de mtodos electrnicos para el recuento celular
da una mayor precisin y exactitud. El descenso del numero de
hemates, va con una disminucin de la concentracin de
hemoglobina y puede ser debido a una hemorragia, hemlisis o a una
falta de formacin celular a nivel de mdula sea.
3.4.2 Recuento de leucocitos: Se utiliza la solucin de Turk (1:10),
que tie ligeramente el ncleo y elimina los hemates por hemlisis.
Las proporciones son: 0.38ml de solucin de Turk y 20 de sangre,
se mezcla, se monta en la cmara de Neubauer, en el microscopio se
hace el conteo, se multiplica por 50 y obtenemos el recuento de
leucocitos.

3.4.3 Recuento de plaquetas: Las plaquetas son fragmentos de


clulas de 2 a 4 micras de dimetro, son de color azul con grnulos
prpura centrales. El recuento de plaquetas se basa en la observacin
en un frotis de sangre y el conteo de las plaquetas en 10 campos del
mismo, en una zona donde los glbulos apenas se toquen entre s y
en nmero sean mas o menos cien. Se hace la sumatoria de las
plaquetas contadas en los 10 campos y se realiza el promedio y este
resultado se multiplica por 22.000. El resultado se informa como
nmero de plaquetas/mm3.

3.5 Velocidad de sedimentacin globular (VSG): Las propiedades


fsico-qumicas en hematologa son fundamentales tres:
1. La velocidad de sedimentacin globular.
2. La viscosidad plasmtica y de la sangre total.
3. El volumen total de la sangre, el volumen plasmtico y el
eritrocitarios.
Desde el punto de vista fsico, la velocidad de sedimentacin globular
constituye una medida de agregabilidad de los hemates y depende
fundamentalmente de los siguientes factores:

Tamao de los hemates o VCM.


Diferencia de densidad entre los hemates y el plasma.
Viscosidad plasmtica (concentracin de fibringeno y/o
globulinas).
Temperatura ambiente.

LA VSG es constante, gracias al equilibrio entre el efecto de la


albmina y de las restantes protenas del plasma.
3.5.1 Montaje e interpretacin: Se llena el tubo de Wintrobe de
sangre sin burbujas, con la ayuda de la aguja de Pasteur, y una
jeringa, hasta la marca O. Colocar en un soporte vertical y al cabo
de una hora, se lee en la escala descenderte, la cantidad de
milmetros cbicos que sedimento la sangre.
La sedimentacin globular se realiza en tres etapas:
1. Periodo inicial: agregacin (10 minutos) hemoaglutinacin o
tendencia de los hemates a formar agregados en forma de
pilas de monedas.
2. Sedimentacin rpida o desplazamiento de los hemates hacia
el fondo del recipiente, a velocidad constante (40 minutos).
3. Perodo final: acumulo de hemates en el fondo del recipiente
(10 minutos).
La etapa ms importante es la hemoaglutinacin porque de esta
depende todo el proceso.
Alteraciones: Los hemates pequeos, o en nmero bajo, y
el aumento de la concentracin plasmtica de ciertas
protenas como: el fibringeno, y las globulinas, la sfilis,
la artritis, TBC, y la hemodilucin son las principales
causas de un aumento.

La
VSG
disminuye
en:
insuficiencia
cardiaca
congestiva,
hipofibrinogenemia y alteraciones congnitas eritrocitarias, entre
otras patologas.
ndices eritrocitarios secundarios: Los ndices eritrocitarios
llamados secundarios, son los que relacionan el hematocrito
con el nmero de hemates y la concentracin de
hemoglobina, denominada a su vez ndices eritrocitarios
primarios. Son fundamentalmente tres:
a. Volumen Corpuscular Medio (VCM): Es el valor medio del
volumen de cada hemate. Se calcula a partir del
hematocrito y el valor de hemates as:
VCM = Hematocrito / Recuento de glbulos rojos.
La unidad es el fentolitro (fl) y la cifra normal es de 85+-10fl.
b. Hemoglobina Corpuscular media (HCM): Expresa el valor
medio contenido de hemoglobina que existe en cada
hemate.
Se determina mediante el HCM = concentracin de la hemoglobina en
sangre total y el numero de hemates por litro. La unidad es el pico
gramo.
c. Concentracin de Hemoglobina Corpuscular Media (CHMC):
Es la concentracin de hemoglobina de un decilitro de
hemates, y se calcula con la concentracin de hemoglobina
por litro de sangre y el valor del hematocrito.
Cuadro hemtico automatizado: A travs de la historia
tecnolgica, el CH, ha ganado un nivel de precisin como de
lo
parmetros
que
lo
constituyen.
Los
mtodos
convencionales conocidos tambin como manuales, aparte
de ser poco exactos aportan pocos parmetros.
Varias tecnologas realizan el CH electrnico, informando parmetros
internacionales tales como: RBC (recuento de rojos), WBC (recuentos
de leucocitos), PLT (recuento de plaquetas), HGB (hemoglobina) y
HCT (hematocrito).
3.7.1 Parmetros calculados: El VCM, MCH, MCHC, amplitud de
distancia Eritrocitaria (RWD), su aumento indica una poblacin de
eritrocitos con anisocitosis, volumen plaquetario medio (MVP), sus

valores elevados indican, una adecuada respuesta medular en caso


de Trombocitopenia.
El MCV y RDW tienen una gran utilidad clnica ya que permiten
enfocar el diagnstico del paciente con anemia.

MCV bajo, RDW normal: deben descartarse anemias de


enfermedad crnica y talasemia.
MCV bajo, RDW alto: debe descartarse anemias de enfermedad
crnica, leucemia, hemorragia aguda.
MCV normal, RDW alta: deben descartarse anemia aplsica y
poblacin heterognea.
MCV alto, RDW alto: deben descartarse anemia megaloblstica,
linfoctica crnica.

3.7.2 Diferencial leucocitario: Distingue tres poblaciones, estas


son:
1. Linfocitos (LYMPH).
2. Neutrfilos (NEUT).
3. Clulas mixtas (MXD): Sumatoria de los eosinfilos, basfilos y
monocitos. Si estas clulas son ms de un 6% de los leucocitos
o se detecte otra anormalidad, el laboratorio informara un
diferencial manual.
Histogramas: Suministran datos sobre el tamao promedio de las partculas
o clulas, la distribucin de las mismas sobre el tamao y la
presencia de subpoblaciones. En estas condiciones el histograma
puede ser considerado como una forma grfica de reportar el CH. Los
histogramas muestran el tamao y frecuencia relativa de las
plaquetas, eritrocitos y leucocitos.
Plaquetas: aparicin de un nuevo pico a la derecha de las plaquetas,
deben descartarse eritrocitos, Microcitos y fragmentos Plaquetarios.
Eritrocitos: Detecta transfusin reciente o anemia por diferencia nutricional
bajo tratamiento.
Leucocitos: aumento del pico de linfocitos, deben descartarse linfocitos.
Aumento de clulas medianas, descartar Eosinofilia, Basofilia o
Monocitosis. Aumento del pico de Neutrfilos, descartar Neutrofilia y
desviacin a la izquierda de granulositos.
Convencionalmente, los parmetros del Hemograma pueden ser
reunidos en tres grupos de acuerdo con los componentes celulares de
la sangre. Son los parmetros eritrocitarios, Leucocitarios y
Plaquetarios.

Parmetros Eritrociatrios: Son aquellos relacionados ntimamente con los


eritrocitos. En combinacin de los parmetros eritrocitarios es el
punto de partida para la clasificacin morfolgica de las anemias,
estos son:

Recuento de Eritrocitos.
Hemoglobina.
Hematocrito: El hematocrito electrnico es el resultado de
relacionar el nmero de eritrocitos con el tamao de los
mismos.
Promedio Eritrocitario: Conocido como promedios corpusculares
este se obtiene por mediacin directa de los glbulos rojos al
momento de hacer el recuento de eritrocitos, en un promedio
de 75.000 clulas.
El promedio de Hemoglobina corpuscular (PCPC): Se obtiene
con frmulas matemticas incorporadas al computador del
equipo sobre la base del recuento de eritrocitos, el hematocrito
y hemoglobina.
Ancho de distribucin de los eritrocitos (ADE): Corresponde al
coeficiente de variacin en el tamao de los eritrocitos que se
obtiene por mtodos electrnicos, clasificando morfolgica las
anemias.

El histograma de eritrocitos da la informacin necesaria para


determinar el promedio volumen corpuscular (PVC) y el ADE. Muestra
el tamao normal de las clulas rojas. El histograma tpico, muestra
una poblacin entre 30 y 130fl con una distribucin Gaussiana, y una
segunda poblacin, ms pequea, conocida como dedo entre 130 y
185fl que aparece a la derecha de la poblacin principal. Los dedos
del histograma presentan eritrocitos aglutinados o artefactos.
Mediante el histograma es posible identificar varias poblaciones de
eritrocitos cunado se presentan.
Parmetros leucocitarios: Conocido como leucograma, corresponden al
recuento total y diferencial de leucocitos, siendo este, criterio
indispensable para definir las leucocitosis y la leucopenia. Son bien
conocidas las alteraciones en el recuento total de leucocitos en los
procesos infecciosos.

Recuento diferencial de leucocitos: Los leucocitos son sometidos


a un agente ltico que acta sobre la
membrana
y el
citoplasma, provocando un encogimiento de la membrana
celular alrededor del ncleo. De acuerdo al volumen del ncleo,
el histograma de leucocitos muestra tres poblaciones.
La primera poblacin ncleos entre 30 y 90 fl, constituida por
linfocitos. La segunda poblacin ncleos entre 90 y 160 fl en la

parte baja del histograma y representa los monocelulares


(monolitos). La tercera poblacin, con ncleos entre 160 y 450
fl. Es la zona ms amplia del histograma y corresponde a los
granulocitos.
A travs de estas tres poblaciones celulares se pueden ubicar otras
poblaciones (anormales), que son sealizadas por el instrumento. De
acuerdo a la distribucin de los histogramas se obtiene el recuento
diferencial electrnico de leucocitos. El recuento diferencial obtenido
por esta tecnologa se caracteriza por una alta especificidad y
sensibilidad (97%), muy superiores a los mtodos convencionales.
Parmetros plaquetarios. El CH convencional no ha considerado el estudio
de las plaquetas como parte integral del mismo, el CH electrnico no
solo a recuperado el recuento plaquetario, sino que ha aportado
nuevos parmetros que han demostrado ser de utilidad clnica. Los
parmetros plaquetarios de nuevos hemogramas son:

Recuento de plaquetas los nuevos parmetros plaquetarios son


importantes en diferentes entidades clnicas como alteraciones
en el recuento de plaquetas pro infeccin y en los estados
anmicos. El recuento de plaquetas por medios electrnicos se
caracteriza por su alto grado de precisin (CV 4%) comparado
con el de los mtodos convencionales (hasta mas de 60%).
Volumen Medio Plaquetario (VMP).Es el tamao de la plaqueta
expresado en la unidad de volumen fl. su resultado promedio es
la medida electrnica del tamao de unas 3000 plaquetas. La
utilidad clnica, est en la clasificacin etiolgica de las
diferentes alteraciones plaquetarias como trombocitopenicas y
no trombocitopenicas.
Ancho de distribucin de las plaquetas (ADP): Presenta el
coeficiente de variacin en el tamao de las mismas. El ancho
de distribucin de las plaquetas desde el punto de vista
morfolgico, representa una forma electrnica de cuantificar el
tamao plaquetario.
Plaquetocrito (Pto): Equivalente al Hto., se define como la
relacin entre el volumen de la masa de plaquetas con la masa
total de la sangre. Refleja la concentracin de las plaquetas,
mas no la masa total de estas. El plaquetocrito se obtiene para
clculos matemticos que relacionan el nmero de plaquetas
por volumen y tamao de las mismas.
Histograma de plaquetas: Se define como plaquetas las
partculas con volumen entre 2 y 20 fl. El histograma
plaquetario
es
ms
sensible
para
determinar
las
trombocitopatias que los estudios convencionales de visin
directa en los extendidos de sangre perifrica.

valores de referencia:
PARAMETROS
WBC
NEUTROFILOS
LINFOCITOS
MONOCITOS
EOSINOFILOS
BASOFILOS
RBC
HB
g/dl
HTO
VCM
HCM
CHCM
PLAQUETAS

NEONATOS
6000-19000/mm3
VA 6000-18000
VR 45-75 %
VA 2500-10500
VR 41-61 %
VA 0-3500
VR 0-10 %
VA 0-2000
VR 0-5 %
VA 0-400
VR 0-2 %
4.1-6.7X10/6
15-22 g/dl
44-66 %
102-115 fl
33-39 pg
28-36 g/dl
150000-450000

1MES-11 AOS

ADULTOS

4500-12000/mm3
5000-10000
1100-6600
2000-7000
31-51 %
54-62 %
1000-7000
1500-4000
38-42 %
30-40 %
0-1000
200-800
0-10 %
4-10 %
0-700
0-450
0-5 %
1-3 %
0-100
0-200
0-2 %
0-1 %
3.8-5.3X10/6
4.5-5.5 10/6
10.5-14.4 g/dl M
M 12-16 g/dl
H 14-18
32-43 %
72-90 fl
24-32 pg
28-36 g/dl
150000-450000

M 40-44 %
H 46-50 %
80-100 fl
27-32 pg
32-36 g/dl
150000-450000

4. FROTIS DE SANGRE PERIFERICA


La observacin de la morfologa celular es de gran utilidad en el
diagnstico de diversas patologas como son: anemias, leucemias,
prpuras parsitos, etc. La realizacin de la lamina de frotis de
sangre perifrica debe ser impecable, procurando que este no sea
excesivamente grueso, con ello se conseguir una distribucin
acertada de las clulas en diferentes reas del frotis cuyo
conocimiento es fundamental, tanto para la morfologa eritrocitaria
como para la realizacin de la formula leucocitaria o recuento
diferencial.
En cualquier mtodo que se utilice para la realizacin del frotis,
deber tenerse en cuenta las siguientes precauciones:
Todo el material que se utiliza debe estar limpio y
desengrasado.
Si es de puncin digital, no deber emplearse la primera gota.
Si es de puncin venosa, se deber hacerse con la mxima
rapidez posible.
5.1 Mtodo de los dos porta objetos: se debe colocar una gota de
sangre en la parte anterior de la superficie del porta objeto.
Formando un ngulo de aproximadamente

45 o, colocar el otro porta objeto sobre la gota de sangre, esperando


que por capilaridad toda la sangre se distribuya, no dejando que
llegue al extremo y luego desplazarlo suavemente, a velocidad
moderada, en sentido longitudinal hasta que la gota de sangre quede
bien extendida.
El grosor del frotis sanguneo, varia segn el ngulo que se forme
entre los dos porta objetos. El frotis se deja sacar a temperatura
ambiente y en posicin horizontal, este tendr tres reas de diferente
grosor y con diferente distribucin de componentes formes de la
sangre.
Zona excesivamente gruesa(cabeza): se halla en la regin
inmediata al punto de partida de la extensin.
Zona excesivamente fina: corresponde al final de la extensin
es un rea donde las clulas terminan con una disposicin
acordonada. En esta zona existe un exceso de granulocitos y
monocitos.
Zona ideal: corresponde a la regin intermedia del frotis y en
ella existe una distribucin equilibrada de las clulas.

5.2 Reactivos para la coloracin


Colorante de Wright .
Solucion de buffer
5.2.1 Coloracin: Para conseguir los mejores resultados hay que
colorear las extensiones en cuanto se hayan secado al aire, sin dejar
en ningn caso mas de una hora.
El frotis secado al aire se coloca sobre una gradilla de tincin.
La extensin se cubre en su totalidad con el colorante sin diluir
durante un minuto. El alcohol metlico fija la sangre.
Se diluye el colorante con el buffer, aproximadamente el mismo
volumen hasta que aparezca la escarcha metlica, para
conseguir la mezcla del colorante con el diluyente se sopla con
suavidad en varios puntos de la placa, para establecer
corrientes suaves, igualando as la distribucin.
Se deja actuar este colorante diluido durante dos minutos.
Sin mover el porta objetos se lava con agua destilada hasta que
las partes mas delgadas sean de un color rosado. El colorante
que haya quedado en el vidrio de la lmina se limpia con una
gasa limpia y se deja en forma vertical hasta que seque.

5.2.2 Lectura del recuento diferencial de leucocitos: Con


objetivo de 100x del microscopio ptico, en la parte media del frotis,
se comienza en un punto no muy cercano al borde y se va
recorriendo a lo ancho del frotis, hasta llegar a contar un total de 100
leucocitos consecutivos diferencindolos morfolgicamente. Se
realizan siempre a muestras de bebes y a muestras que se quiera
confirmar el resultado.
A diferencia de otros tejidos, la sangre esta constituida por tres tipos
de clulas muy diferentes entre s, tanto del punto de vista
morfolgico, estructural y de funcional.
Clulas nucleadas(leucocitos), con funcin diversa.
Clulas anucleadas (hemates) con funcin respiratoria.
Seudo fragmentos citoplasmticos(plaquetas),con funcin
hemosttica.
Los leucocitos o glbulos blancos, constituyen un conjunto de clulas
con funcin diversa, como la defensa del organismo frente a diversas
sustancias o agentes patolgicos, estas clulas tienen en comn las
caractersticas de tener ncleo y organelos citoplasmticos, lo que
permite su fcil diferenciacin morfolgica con los hemates y las
plaquetas.
Desde el punto de vista morfolgico, los leucocitos se han clasificado
en dos grupos:
Polinucleares: Cuyo ncleo es lobulado de apariencia mltiple
(neutrfilo,eosinfilo y basfilo)
Mononucleares: Con ncleo nico (linfocito y monocito)

5.2.2.1 CARACTERISTICAS MORFOLOGICAS DE LOS


LEUCOCITOS
Neutrofilo: Es el 60-65 % de los leucocitos. Su dimetro est entre
10 y 14 micras. El citoplasma es ligeramente acidfilo, con
granulaciones de carcter neutro, distribuidas en el citoplasma. El
ncleo de color violeta oscuro y cromatina densa se caracteriza
morfolgicamente por presentar lbulos fragmentados o separados
entre s, por puentes de cromatina.
Eosinofilos: es el 1-3 % de los leucocitos. Su dimetro es de 10-12
micras. El citoplasma repleto de granulaciones, constituidas por
grnulos redondos y de gran tamao, casi nunca cubren el ncleo;
estos contienen sustancias de carcter bsico, fijando colorantes

cidos como la eosina, dando un color pardo o anaranjado. El ncleo


posee una coloracin violeta, es bilobulado, forma masas simtricas
unidas por uno de sus extremos.
Basofilos: Su proporcin, es inferior al 1% de los leucocitos. Su
dimetro es de 12-14 micras. El citoplasma acidfilo, forma grnulos
irregulares, fijando colorantes bsicos como el azul de metileno. Las
granulaciones, cubren el ncleo, el cual es de forma irregular con
lobulaciones.
Linfocito: Constituye el 20-40 % del total de los leucocitos, su
dimetro es de 7-18 micras. El citoplasma es escaso o abundante; su
coloracin es azul plida, debido a su Basofilia, que le confiere el
contenido elevado de RNA, la granulacin azurfila puede ser escasa
y se encuentra en el citoplasma. El ncleo redondo, cromatina
homognea.
Monolitos: Del 2-10 % del total de leucocitos; el dimetro es de 1420 micras. El citoplasma es abundante y gris azulado: en ocasiones
se halla vacuolado, con granulaciones finas azurfilas. El ncleo
localizado en el centro, casi siempre es redondeado con
invaginaciones, presentando variaciones dado su gran tamao, ocupa
gran parte del citoplasma y su cromatina es laxa, filamentosa e
irregular, formando una trama reticular.
5.3 Morfologa de los glbulos rojos: Para el diagnostico de
algunas anemias, presentan alteraciones caractersticas esferocitosis
hereditaria, hemoglobinopatia S, eliptocitosis congnita. Asimismo,
ante cualquier anemia de origen desconocido, resulta til valorar la
intensidad de la policromatofilia, presencia de normoblastos,
punteado basfilo, anillos de Cabott, cuerpos de Howell-Joly.
5.3.1 Alteraciones morfolgicas eritrocitarias: Se pueden
clasificar en cuatro grandes grupos: alteraciones de tamao, forma,
color y policromatofilia adems de la presencia de inclusiones.
5.3.1.1 ALTERACIONES DE TAMAO (anisocitosis): Son de dos
tipos fundamentales:
5.3.1.2 Macrocitosis: Cuando el hemate es de tamao y VCM,
superior al glbulo9 rojo normal. Se observa en anemias
diseritropoyeticas, cuando hay un aumento de eritropoyesis,
enfermedades hepticas.
5.3.1.3 Microcitosis: Es la existencia de hemates cuyo tamao y
VCM es inferior al del glbulo rojo normal, las causas mas frecuentes
es la anemia ferropnica y la talasemia.

5.3.1.4 Las alteraciones morfolgicas (Poiquilocitosis): Las


ms frecuentes son: esferocitos codocitos drepanocitos, eliptocitos,
equinocitos, acantocitos, dacriocitos, esquistocitos, estomatocitos.
5.3.1.5 Las alteraciones del color: Reflejan las anormalidades en
el contenido hemoglobnico.
5.3.1.6 Hipocromia: Los hemates se tien dbilmente, por la
disminucin de hemoglobina. Si no existe una enfermedad que la
explique, se debe pensar en una anemia ferropenica o en una
talasemia.
5.3.1.7 Policromatofilia: Los hemates con tonalidad gris azulada,
esto es signo de inmadurez celular, observndose en ciertas anemias
acompaadas de reticulocitos en sangre perifrica. Los hemates se
caracterizan por ser de mayor tamao y su coloracin azulada, debido
al contenido de ARN.
5.4 Rangos de Anisocitosis de acuerdo al VCM.
Ligera: 95-108 ft (macrocitos), 76-80 ft(microcitos)
Moderada: 109-120 ft(macrocitos),66-75 ft(microcitos)
Marcada: mayor de 120(macrocitos),Menor de 65(microcitos)
5.5 Rangos de cuantificacin de los glbulos rojos:
Normal: anisocitosis e hipocromia: 0-5, poiquilocitosis 0-5,
policromatofilia 0-2
Ligera: anisocitosis 6- 15,poiquilocitosis 1-5, policromatofilia 2-3
Moderada: anisocitosis 16-30,poiquilocitosis 6-15, policromatofilia 3-4
Marcada: anisocitosis e hipocromia mayor de 30, poiquilocitosis
mayor de 30, policromatofilia mayor de 4.
La anisocitosis e hipocromia y la policromatofilia se lee en 10 campos.
La poiquilocitosis se informa la que predomina.
5.6 Normoblastos: Se informan por porcentaje su presencia. Si se
encuentran ms del 10 %, se realizar correccin al recuento
leucocitario empleando la siguiente formula:
Leucocitos corregidos: ____Nmero de leucocitos contados x 100
______________________________
___
Nmero de normoblastos + 100

El recuento de normoblastos ser, nmero de normoblastos


observados por 100 leucocitos, esta relacin se hace con el diferencial
en el FSP.
Para confirmar el recuento de leucocitos se cuentan en pequeo
aumento (10 X) 3 campos donde los glbulos rojos apenas se toquen
entre s, se promedian por campo y se multiplica por 300.

6. RECUENTO DE RETICULOCITOS
Un Reticulocito es un eritrocito que se halla circulando en sangre
perifrica en estado inmaduro o sea que aun posee restos de
cromatina nuclear.
6.1 Fundamentos de Mtodo: Esta tcnica de coloracin se basa
en la precipitacin de dichos restos de cidos nucleicos por medio del
NEW METHYLENE BLUE, formando una red granulada dentro del
eritrocito, sin destruirlo.
6.2 Reactivos: Colorante Reticulocitos: New Methylene Blue, listo
para usar.
6.3 Muestra: Sangre Venosa anticoagulada o Sangre Capilar.

6.4 Procedimiento: Usando una pipeta para glbulos tome sangre


capilar o venosa hasta la marca 0.5 y luego a 1.0 con el colorante.
Lleve la mezcla al bulbo de la pipeta, mezcle bien y deje en reposo 10
minutos.
Pasado el tiempo y descartando la primeras gotas, coloque una gota
de la mezcla en una lamina portaobjetos limpia y efecte un
extendido de la manera usual.
Deje secar y examine directamente al microscopio usando aceite de
inmersin y objetivo 100x
Calculo:
% Reticulocitos= No reticulocitos por 500 Eritrocitos X0.2
% Reticulocitos=

No de reticulocitos x 100
----------------------------------1000

Interpretacin: Mediante este mtodo normalmente se encuentran


valores comprendidos entre 0.5 y 1.5 % en adultos. En recin nacidos
entre 3 y 6 %
Notas
Una buena coloracin depende del extendido, este no debe ser muy
grueso y se debe evitar la formacin de grumos y estras.
Usar placas preferiblemente nuevas, sin ralladuras y libres de grasa.
7. HEMOSTASIA Y COAGULACION
Complejo proceso mediante el cual la sangre se mantiene en estado
fluido dentro de los vasos sanguneos. Es dependiente de la
integridad vascular, el recuento de plaquetas, su funcin y las
protenas plasmticas de la coagulacin. La definicin incluye una
interaccin entre estos tres compartimientos adems de los sistemas.
7.1 Tiempo parcial de Tromboplastina (PTT): Al aadir
fosfolpidos plaquetarios al plasma, se activan los factores de la
coagulacin necesarios para la formacin de protrombinasa
intrnseca; esta activa la protrombina y la trombina convirtiendo el
fibringeno en fibrina. El tiempo parcial de tromboplastina (PTT),
evala anormalidades de los factores de la va intrnseca,
especialmente detecta deficiencias del factor VIII,IX,XI,XII,
precalicreina y kiningeno, y tambin en factores II,V,X o fibringeno.

La prueba se emplea principalmente para


Monitoreo de pacientes con heparina, donde la formacin del coagulo
es proporcional al nivel de heparina utilizado.
En pacientes que reciben anticoagulantes orales, los factores
II,VII,IX,X, se disminuyen y el PTT se puede prolongar.
La presencia de inhibidores no especficos, tales como anticoagulante
lpido puede prolongar el PTT
El PTT es una importante prueba clnica, con amplia aplicacin en el
diagnstico de desordenes de coagulacin y monitoreo teraputico de
enfermedades hemorrgicas o trombticas.
7.2 Tiempo de protrombina (PT): La tromboplastina mstica y
calcio adicionados a plasma citratado, reacciona con los factores
V,VII,X, para formar un compuesto activo que convierte la
protrombina en trombina. La trombina al actuar sobre el fibringeno
forma la fibrina.
El reactivo inicia la va extrnseca de la coagulacin y las vas
comunes. Despus de la adicin de la tromboplastina y el calcio, el
tiempo de coagulacin obtenido refleja la actividad de los factores
II,V,VII,X, fibringeno.
La prueba se emplea principalmente para
Detectar deficiencias simples o combinadas del sistema de
coagulacin extrnseco, indicativos de trastornos en la coagulacin
hereditarios o adquiridos, enfermedad heptica o deficiencia de
vitamina K.
Control de terapia con anticoagulantes orales.
La organizacin mundial de la salud unida al comit internacional de
trombosis y hemostasis ha recomendado reportar el resultado del PT
en pacientes con anticoagulantes orales usando los valores INR
(Radio Internacional Normalizado).
INR=R (isi)
Dnde

PT del paciente
---------------------PT control

El valor del ISI es determinado para cada reactivo y en la mayora va


de acuerdo con las normas de l OMS.

8. CALIBRACION DEL TIEMPO DE PROTROMBINA

S un reactivo es de diferente lote y el valor de fibringeno


del plasma calibrador cambia, se debe calibrar.
Verifique el nivel de la solucin de referencia. Realice una
purga con la funcin PGR: Seleccionar PRIME.
Reconstituya 1 vial de plasma calibrador con 1 ml de agua
destilada. Hidratar por 30 minutos, agitar suavemente.
Actualice los datos del ISI y nmero de lotes de los reactivos
en la opcin PGR: DATOS DE REFERENCIA.
Sirva el plasma calibrador en una copilla de 0.5 ML y
ubquelo en la posicin Pool del rotor de muestras. Sirva 2 Ml
del plasma calibrador en una copilla de 0.5 ml y ubquelo en
la posicin Pool del rotor de muestras. Sirva 2 ml de
emulsin de referencia en la posicin Dil del rotor de
muestras. Dispensar el reactivo de Pt en el reservorio 1.
Colocar rotor nuevo.

Seleccionar la prueba de PT-FIB en pantalla. Enter.


Con el cursor seleccionar la opcin Calibracin enter.
Actualizar los datos de ISI y nmero de lotes. Enter.
Seleccionar Start con el cursor.
El equipo imprime la curva de calibracin con los datos de la
Media, CV y coeficiente de correlacin r2
Se obtiene los siguientes valores de coeficientes de
variacin:
CV(PT)=

CV(FIB)=

100 %
50 %
25%
300 mg/dl
150 mg/dl
75 mg/dl

</=
</=
</=

1.5 %
2%
2%

</=
</=
</=

8%
12 %
12 %.

Si cualquiera de los valores antes mencionados se encuentra


sombreado, nos indica que algn paso de la calibracin estuvo
mal realizado, por lo que se proceder a repetirla.
Si los resultados obtenidos se encuentran dentro de rango se
aceptar quedando grabada la calibraci0n en el equipo hasta
que no se realice una nueva.
8.1 PROCESAMIENTO DE MUESTRAS:

Seleccione en el Men las pruebas a correr: PT-FIB y/o


PTT
Coloque el plasma calibrador en la posicin Pool.
Verifique el estado de los reactivos en los reservorios,
solucin de referencia y rotor.
Digite la lista de muestras.
Con el cursor seleccione la opcin Star.
Los resultados aparecen en pantalla y se imprimen
automticamente.
Verificar diariamente los procedimientos del protocolo de
mantenimiento.

8.2 MANTENIMIENTO
1. Limpieza del reservorio de desage: el reservorio de desage
es aquel donde se colocan las agujas cuando el equipo no se
encuentra en trabajo, para su limpieza slo debemos colocar las
agujas en la posicin de calibracin de puntas (entrando a lista
de chequeos), de esta forma estarn desplazadas de la posicin
original y podremos retirar el reservorio para su lavado, en el
hueco dejado, por medio de una jeringa de 10 ml agregamos a
presin cloro diluido al 10 % para limpiar la lnea de desage,

una vez realizada esta operacin regresaremos el reservorio y


las puntas a su posicin original.
2. Limpieza de los sensores pticos: abriremos la tapa donde se
lleva a cabo la reaccin, se limpiar el LED (foco rojo) con un
istopo hmedo y despus secaremos, lo mismo se realizara
con el foto detector que se encuentra en el primer pozo
enfrente del LED.
3. Limpieza del filtro de aire: este se encuentra en el costado
izquierdo del ACL, para su limpieza se apaga el instrumento, se
retira el filtro, se lava al chorro de agua, se deja secar y se
vuelve a colocar, hasta este momento se vuelve a encender el
instrumento.
4. Limpieza y lavado de los reservorios de reactivos: solo se
vaciar el contenido de los reservorios y se lavaran con agua
destilada.
5. Ciclo de limpieza: este ciclo consiste en:
3 purgados sustituyendo la emulsin de referencia con
cloro diluido al 10 %
3 purgados sustituyendo el cloro al 10 % con agua
destilada y
3 purgados sustituyendo el agua destilada con la
Emulsin de referencia original
La calendarizacin de los mantenimientos se indica en el mismo
instrumento dentro de la bitcora de mantenimiento.

9. BIBLIOGRAFIA

CORTES, Armando. ABC de la medicina transfusional. Cruz roja


Colombiana. 1 Edicin, Bogot 1994

GAMBOA, MARIA CRISTINA. Manual Hemostasia y


coagulacin.1992

LINARES, S.G. Principios de Inmunologa y transfusin. 2


Edicin Caracas 1986

RESTREPO, Alberto. Hematologia 1994

RUIZ ARGUELLES. Fundamentos de Hematologa, Editorial


Mdica Panamericana , Mxico 1994

SABRAFEN, Sans J. Hematologa clnica. Barcelona, Espaa.


1990

VIVES, Joan Lus Tcnicas de Laboratorio en Hematologa.


Editorial Salvat 1996

WILLIAMS, Hematologa. Editorial Salvat 1995

WINTROBE. Hematologa clnica. Buenos Aires, Interamericana


editores 1995