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Orgnica

Gua de Prcticas de Microbiologa General y Aplicada

PRCTICA N 1
I. BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGA
1.

Objetivos:
- Conocer las normas fundamentales y acciones que permitan prevenir o reducir
accidentes y enfermedades en el laboratorio de Microbiologa derivado del manejo
de material biolgico, en base al conocimiento de los riesgos existentes.

2. Introduccin:
Desde hace tiempo la Organizacin Mundial de la Salud (OMS) reconoce que la seguridad y,
en particular, la seguridad biolgica son importantes cuestiones de inters mundial.
Los errores humanos, las prcticas incorrectas de laboratorio y el empleo inapropiado del
material de experimentacin son causa de la mayor parte de accidentes de laboratorio e
infecciones afines.
Los laboratorios de microbiologa se clasifican en niveles de bioseguridad, los cuales
corresponden a una combinacin de caractersticas de diseo, construccin, medios de
contencin, equipo, prcticas y procedimientos de operacin necesarios para trabajar con
agentes patgenos de distintos grupos de riesgo. Se clasifican como sigue: laboratorio
bsico nivel de bioseguridad 1; laboratorio bsico nivel de bioseguridad 2; laboratorio de
contencin nivel de bioseguridad 3, y laboratorio de contencin mxima nivel de
bioseguridad 4.
En el siguiente cuadro se relacionan, los grupos de riesgo, el riesgo relativo que entraan los
microorganismos infectantes, que se clasifican en: Grupo de riesgo I, II, III y IV y los
laboratorios donde se trabaja con microorganismos se dividen segn sus caractersticas de
diseo, construccin y medios de contencin en tres tipos de laboratorio: bsico, de
contencin y contencin mxima.
GRUPO DE RIESGO I
Nivel de Bioseguridad 1
Tipo de laboratorio
Tipo de microorganismos
Prcticas de Laboratorio
Equipo de seguridad

GRUPO DE RIEGO II
Nivel de Bioseguridad 2
Tipo de laboratorio

Escaso riego individual y comunitario.

Microorganismos con pocas probabilidades de
provocar enfermedades en el ser humano o animales.
Bsico: Enseanza bsica, investigacin
Bacillus subtilis, Escherichia coli
Tcnicas microbiolgicas apropiadas.
Ninguno; Trabajo de mesa de laboratorio al
descubierto
Riesgo individual moderado y comunitario moderado.
Agente patgeno que puede provocar enfermedades
en humanos, el riego de propagacin es limitado.
Bsico: Cmaras de seguridad, dispositivos de
proteccin personal.

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Tipo de microorganismos

Ejemplo: Servicios primarios de salud, laboratorios de

diagnstico, de enseanza universitaria, consultorios
mdicos.
Salmonella typhi, virus de la Hepatitis B,
Mycobacterium tuberculosis.

Prcticas de Laboratorio

Tcnicas microbiolgicas apropiadas, ropa apropiada,

seal de riesgo biolgico.
Trabajo de mesa al descubierto y Cmara de Seguridad
Biolgica para posibles aerosoles.

Equipo de seguridad

GRUPO DE RIESGO III

Nivel de Bioseguridad 3
Tipo de laboratorio
Tipo de microorganismos
Prcticas de Laboratorio
Equipo de seguridad

GRUPO DE RIESGO IV
Tipo de laboratorio

Tipo de microorganismos
Prcticas de Laboratorio

Equipo de seguridad

Riesgo individual elevado y riesgo comunitario escaso.

Agentes patgenos que provocan enfermedades graves
en humanos, pero no se propagan de una persona a
otra.
Contencin. Ejemplo: Laboratorios de diagnstico
especializado, investigacin.
Brucella sp, Histoplasma capsulatum
Prcticas del nivel 2 ms ropa especial, acceso
controlado y flujo direccional del aire.
Cmara de seguridad Biolgica adems de otros
medios de contencin primaria para todas las
actividades.
Elevado riesgo individual y comunitario
Contencin mxima. Unidades de patgenos
peligrosos. Agentes patgenos que provocan
enfermedades graves en personas y que se pueden
propagar
Virus Hanta
Virus fiebre aftosa
Prcticas de nivel 3 ms cmara de entrada con cierre
hermtica, salida con ducha y eliminacin especial de
residuos.
Cmara de seguridad Biolgica de clase III o trajes
presurizados junto con cmara de seguridad biolgica
de clase II, autoclave de doble puerta (a travs de la
pared), aire filtrado.

Definiciones:
Bioseguridad: Es el conjunto de mtodos, principios y procedimientos cientfico organizados
que incluyen las tcnicas arquitectnicas, destinados a implementar barreras de contencin
para la proteccin del operador, la comunidad y el ambiente de los riesgos que implica la
manipulacin de agentes biolgicos, ya sean estos exticos, nativos, manipulados
genticamente o no y de qumicos o la liberacin de estos al medio ambiente para reducir al
mnimo o suprimir los efectos adversos que pueda generar escapes inadvertidos.

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Contencin: Describe los mtodos seguros para manejar materiales infecciosos en el

ambiente del laboratorio donde son manipulados o conservados, con el objetivo de eliminar
o reducir hasta lmites mnimos, la exposicin de quienes trabajan en el laboratorio, otras
personas y del ambiente externo a agentes potencialmente peligrosos.
- Contencin primaria: es la proteccin personal y del ambiente inmediato del
laboratorio a la exposicin de agentes infecciosos, a travs de la prctica e buenas
tcnicas microbiolgicas y del empleo de equipos de seguridad adecuados.
- Contencin secundaria: es la proteccin del ambiente externo al laboratorio de la
exposicin de agentes biolgicos, a travs de una combinacin del diseo de la
instalacin y prcticas operativas.
Agentes biolgicos: microorganismos patgenos (hongos, bacterias, virus, viroides,
fitoplasmas) los que pueden ser inhalados, inoculados y por contacto directo a travs de la
piel o mucosas. En funcin del riesgo de infeccin, los agentes infecciosos se clasifican del
siguiente modo:
- Agente biolgico del grupo 1: Aquel que resulta poco probable que cause una
enfermedad en el ser humano. Son agentes de bajo riesgo: nemtodos, caros,
bacterias y hongos ambientales.
- Agente biolgico del grupo 2: Aquel que puede causar una enfermedad en el ser
humano y puede suponer un peligro para los operadores, siendo poco probable que
se propague a la colectividad y existiendo probablemente profilaxis o tratamiento
eficaz. Son agentes de riesgo moderado: hongos, bacterias, virus.
- Agente biolgico del grupo 3: Aquel que puede causar una enfermedad grave y
presenta un serio peligro para los operadores, con riesgo que se propague a la
colectividad y existiendo generalmente una profilaxis o tratamiento eficaz. Son
agentes de riesgo alto bacterias como Bacillus anthracis, Brucella suis,
Mycabacterium leprae.
- Agente biolgico del grupo 4: Aquel que causando una enfermedad grave en el ser
humano, supone un serio peligro para los operadores, con muchas probabilidades
que se propague a la colectividad y sin que exista una profilaxis o tratamiento eficaz.
Son agentes de riesgo intenso: Virus LASSA, virus Ebola, Virus Marburg.
Agentes fsicos y mecnicos: como temperaturas extremas, contactos elctricos o
conexiones defectuosas y vidrios resquebrajados de recipientes daados o tubos rotos.
Agentes qumicos: pueden ser:
- Corrosivos, que causan destruccin o alteracin de tejidos.
- Txicos, cuyos efectos se manifiestan, segn la va de exposicin, por inhalacin,
ingestin o contacto directo con mucosas o piel;
- Cancergenos;
- Teratognicos;
- Inflamables;
- Explosivos.
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CONCEPCIN GENERAL DEL LABORATORIO

El laboratorio bsico comprende todos aquellos que trabajan con agentes que entraan un
riesgo escaso o moderado para el personal de laboratorio, por lo cual habr que prestar
atencin a los factores conocidos por plantear problemas:
- La formacin de aerosoles.
- El trabajo con grandes cantidades y/o concentraciones elevadas de
microorganismos.
- Exceso de personal y material.
- Infestacin por roedores e insectos.
- La entrada de personas no autorizadas.
Material de Bioseguridad Recomendado
-

Dispositivos manuales de pipeteo, para no utilizar la boca. Est prohibido el uso de la

boca para succionar cualquier sustancia qumica o microbiana y llenar las pipetas de
trabajo.
Cmaras de seguridad biolgica que se utilizaran cuando apliquen procedimientos
con grandes probabilidades de producir aerosoles peligrosos y cuando se manejen
concentraciones elevadas de agentes infecciosos.
Microincineradores de asa.
Frascos y tubos con tapa rosca
Autoclaves
Siempre que sea necesario deber llevar guantes de proteccin; este debe ser
elegido segn la necesidad (consulte con el profesor). Asegrese que estos no estn
defectuosos antes de usarlos.
Siempre que sea necesario se debe utilizar una mascarilla de proteccin.
Antes de salir del laboratorio, lavarse las manos escrupulosamente.

Decontaminacin y eliminacin de desechos

La Decontaminacin y la eliminacin de desechos son operaciones de laboratorio
ntimamente relacionadas, ya que la desinfeccin o la esterilizacin constituyen la primera
fase de la eliminacin. El tratamiento en autoclaves constituye el procedimiento de eleccin
para todos los procesos de Decontaminacin. Si no se dispone de este elemento, se puede
recurrir a los siguientes mtodos:
- Ebullicin en agua que contenga bicarbonato.
- Empleo de una olla a presin a nivel mximo de presin de trabajo.
Hay que establecer un sistema de identificacin y separacin de material contaminado:
- Desechos no contaminados que pueden eliminarse con la basura.
- Objetos aguzados y cortantes.
- Material contaminado para tratamiento en autoclave y reutilizacin.
- Material contaminando para eliminacin.
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Riesgos qumicos:
La instalacin excesiva de vapores de solventes puede tener efectos txicos como
embotamiento, falta de coordinacin. En otros casos pueden producirse consecuencias
adversas como lesiones en sangre, pulmones, hgado, riones y aparato gastrointestinal.

Seguridad qumica, elctrica, radiolgica y proteccin contra incendios

Los incendios o los accidentes de origen qumico, elctrico o radiolgico pueden tener como
consecuencia indirecta un fallo de las medidas de contencin de microorganismos
patgenos. Es por ese menester mantener un elevado nivel de seguridad en estos aspectos.

NORMAS BSICAS DE TRABAJO EN EL LABORATORIO:

1.

2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.

Antes de iniciar el experimento debe limpiar la superficie de la mesa de trabajo

utilizando leja al 5 % o alcohol al 70 %; as tambin, debe verificar que todo el material
biolgico, de vidrio limpio, seco y sin daos, y reactivos necesarios estn presentes para
la realizacin de la prctica.
El material de vidrio roto debe lavarse, secarse y guardarse en un solo lugar para luego
ser separado o desechado definitivamente.
Los reactivos y soluciones preparadas deben de estar perfectamente etiquetados.
No debe usarse material de vidrio daado o roto. Verificar que los bordes de todo
material de vidrio estn pulidos y redondeados.
Hacer uso de embudos para el trasvase de lquidos de un recipiente a otro. Si el
derrame ocurriera evite que se extienda.
No dejar nunca las pipetas libres sobre la mesa, cuide de guardarlas siempre en el porta
pipetas.
Nunca coloque un termmetro en contacto directo con una plancha de calentamiento,
ya que puede estallar.
Para introducir un tubo de vidrio a un tapn de jebe, es necesario humedecerlos con
agua y protegerse las manos con guantes apropiados o por lo menos una toalla.
Al finalizar con cualquier prctica, deje su lugar de trabajo limpio, seco y ordenado.
Al terminar los experimentos, cierre todas las vlvulas de gas, agua, desconecte los
equipos elctricos, as como la llave general de energa elctrica.
Antes de iniciar cualquier trabajo, controlar los balones de gas, el mechero y planchas
de calentamiento.
Evite la presencia de sustancias voltiles cerca de mecheros encendidos o cocinillas
elctricas con resistencias visibles.
Las planchas de calentamiento deben ser conectadas solo a tomacorrientes con
amperaje adecuado. Nunca usar tomacorrientes caseros.
El calentamiento y los reflujos de solventes orgnicos deben hacerse con mantas de
calentamiento, nunca con mecheros o cocinillas elctricas.
Considerar que algunos compuestos qumicos explotan por efectos del calor o shock
mecnico; por ejemplo: cidos.
Si va a manipular balones con gases comprimidos, use las vlvulas de seguridad
adecuada para cada gas. No fuerce las vlvulas.
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17. Si se produce fuego que no puede controlar, aljese del peligro, de aviso y active la
alarma. Toda persona que escuche la alarma de incendio debe evacuar el edificio.
18. Si el fuego es pequeo y controlable, use extintor para controlar y extinguir el fuego. En
caso de fuego en un recipiente pequeo tapar el recipiente con una luna de reloj, un
trapo hmedo o con una rejilla de cermica.

DE LOS DERRAMES:
1.

2.
3.
4.

5.

6.

Si se produce un pequeo derrame de un compuesto qumico o suspensin

microbiana, avise al profesor y en lo posible evite que se extienda por la mesa o
caiga al piso.
Retirar los materiales, reactivos y equipos que se encuentren cerca.
Use lentes de seguridad, guantes y en lo posible mascarillas de respiracin de
acuerdo al tipo de compuesto.
Para el caso de derrame pequeo de lquidos o suspensiones:
a) Confinar el derrame en un rea pequea.
b) Si se trata de una suspensin microbiana debe ser limpiado de inmediato
vertiendo sobre ella leja al 5% o alcohol al 96% y retirar cuidadosamente con la
ayuda de un pao o trozo de algodn.
c) Si se trata de un cido inorgnico neutralizar soda o carbonatos.
d) Si se trata de una base inorgnica neutralizar sulfato cido de sodio.
e) Si se trata de otros compuestos usar material no reactivo como arena seca o
arcilla.
Para el caso de derrames mayores de lquidos, avise al profesor y si est preparado
realice las siguientes acciones:
a) Si se trata de cido o bases inorgnicas, usar grandes cantidades de agua; si es
que el agua no causa un dao mayor.
b) Si se trata de lquidos con vapores no txicos y miscibles en agua, limpiar con
absorbente de algodn (toalla), posteriormente lavar el absorbente con
abundante agua.
c) Si se trata de lquidos con vapores txicos.- Protegido con una mascarilla
adecuada, absorbe el lquido con un absorbente de algodn (toalla), traslade el
absorbente dentro de un recipiente hacia una campana extractora, donde lo
transferir a un recipiente de residuos lquidos peligrosos.
Para el caso de derrames de slidos, avise al profesor y si est preparado realice las
siguientes acciones:
Colocarse guantes, mascarilla y luego barrer el slido con una brocha para luego
colocrselo en el recipiente de desechos qumicos slidos.

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CUESTIONARIO
1. Observe el laboratorio donde efectuar las prcticas de Microbiologa y determine el
tipo de laboratorio, el nivel de bioseguridad y grupo de riesgo al que pertenece.
Fundamente su respuesta.
2. Si se utilizan en el laboratorio lquidos inflamables Es suficiente la ventilacin
mecnica para expulsar los vapores?
3. Dibuje los smbolos de riesgo qumico presentes en las etiquetas de los productos
qumicos que indican el tipo de peligro que involucra su uso, mencione su significado
(precaucin y significado) de cada uno de ellos y ejemplos de reactivos donde son
utilizados.
4. Cul sera la disposicin final de los reactivos qumicos cuando su fecha de
vencimiento caduca? Explique su respuesta.

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II. UTILIDAD Y PREPARACION DE MATERIALES USADOS EN MICROBIOLOGIA

OBJETIVOS:
-

Familiarizar al alumno con el material de vidrio y de otra naturaleza de uso frecuente

en Microbiologa.
Adiestrar al alumno en la limpieza y preparacin del material para su esterilizacin.
Confeccin de tapones de algodn para tubos y matraces, envolturas de placas
Petri, tubos de ensayo, pipetas, matraces Erlenmeyer, frascos, jeringas, etc.

I. MATERIAL DE VIDRIO
Aparte del instrumental y variado equipo que se requiere en todo laboratorio de
Microbiologa, el MATERIAL DE VIDRIO constituye una de las principales herramientas de
esta disciplina.
Como requisito general, el MATERIAL DE VIDRIO debe ser: de vidrio neutro, resistente a
cambios de temperatura, transparente, de superficie lisa, sin rajaduras, que contenga una
mnima calidad de lcali libre y de bajo coeficiente de dilatacin. Actualmente existen
marcas con estas propiedades. Como: PIREX, KIMAX, KIMBLE, GENA, GLASS, ASSISTENT y
otros. Se describe el material indispensable para el funcionamiento de un Laboratorio de
Microbiologa.
1.- TUBOS DE PRUEBA: Condiciones.- que sean de paredes gruesas, bien equilibrados, de
preferencia sin reborde para facilitar el taponamiento. Medidas.- de 16 x 150 mm y 15 x 125
mm para cultivos microbianos puros y para diluciones de anlisis cuantitativos. Para
efectuar estudios de fermentacin, hemlisis y utilizacin de sustratos se recomienda usar
tubos de 13x 100 mm y para estudios serolgicos de 10 x 75 mm.
Tubos de centrfuga.De vidrio.- Pueden ser de varias medidas, desde 10mL hasta 25 mL, graduados en cc o en
mm. Pueden ser de fondo cnico o redondo y siempre de paredes gruesas.
De polietileno: De idnticas medidas a las anteriores, se utilizan para centrifugaciones a
altas revoluciones (p.e. en ultracentrfugas).
Tubos Leishton, de las medidas antes indicadas para cultivos de clulas.
2.- CAPSULAS O PLACAS DE PETRI: Compuestas de dos cristalizadores, de los cuales el
ms grande hace de tapa. Las ms usadas son de 10, 12 20 mm x 100 mm y se
emplean para el cultivo y aislamiento de microorganismos. La tapa puede ser reemplazada
por material de porcelana o metal sin esmalte en la superficie interna.

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3.- PLACA DE BREWER: Para el cultivo y aislamiento de microorganismos anaerobios.

Son idnticos a los anteriores, con excepcin de las tapas, que adems de pesadas tienen
una depresin central que impide la acumulacin de aire, ayudando a mantener la
anaerobiosis.
4.- PIPETAS: Las primeras son terminales y con capacidad de 0.1 a 25mL. Las mejor
aforadas, son las de las marcas PIREX Y EXAX. Las de mayor uso son:
-

Para medidas de lquidos en pequeos volmenes:

Pipetas de 10 mL

5 mL

1 mL

0.1 mL

5.- PIPETAS PASTEUR: Confeccionadas de varillas de vidrio de 4mm de dimetro y de 20

30 cm de longitud. La calidad del vidrio debe facilitar reblandecimientos a la accin directa
de la llama del mechero, para conseguir por estiramiento la capilaridad deseada; es decir,
es una pipeta con porcin capilar. Se las emplea para la toma de pequeos inculos de
siembra.
NOTA: La tcnica de preparacin se especifica en el procedimiento respectivo.
6.- MATRACES Y BALONES: Recipientes volumtricos de gran utilidad para la
preparacin y almacenamiento de soluciones, colorantes, reactivos, medios de cultivo,
etc. La calidad debe ser la misma, recomendada en los requisitos generales.
Los balones se diferencian de los matraces por tener una base esfrica con fondo plano. En
ambos los cuellos terminan en un discreto reborde los que les confiere resistencia.
Los ms comunes son: 100, 250, 500, 1000 y 2000 mL. Hay de menores medidas a las de
100mL.
7.- ESPATULAS DRIGALSKY: Se confeccionan a partir de varillas de vidrio macizo, la
fraccin recta y horizontal facilita la siembra y aislamiento de bacterias por diseminacin.
NOTA: La tcnica de preparacin se especifica en el procedimiento respectivo.
8.- FIOLAS: Idnticas a los balones, estn calibradas a medidas exactas mediante un aforo
en la parte media del cuello del recipiente en el que se indica la medida. Se emplea
exclusivamente para la preparacin de soluciones molares y normales.
9.- KITASATO: Es un matraz que adems de la boca tiene una salida lateral corta para
unirla a la bomba de vaco. Se utiliza como parte del equipo de filtracin (esterilizacin en
fro).
Las medidas son las mismas que la de los matraces comunes.
10.- PROBETAS: Recipientes cilndricos con base para la estabilidad, sus paredes son ms
gruesas que el material antes indicado. Pueden estar o no graduadas; las primeras para
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medidas de lquidos en la preparacin de cualquier solucin y las segundas, como depsito

de desinfectantes para pipetas, baguetas, etc. Las hay de diferentes capacidades; las de
100, 250, 500 y 1000 son las de mayor uso en el laboratorio.
11.- VARILLAS DE VIDRIO MACIZO: fragmentos de 30 a 60 cm, que sirven la confeccin
de agitadores o baguetas y esptulas de Drigalsky; los ms cortos son empleados
regularmente como mangos para asas de siembra.
12.- BEAKER o VASOS DE PRECIPITACION: Recipientes cilndricos de amplia utilidad en la
preparacin de soluciones y medios de cultivo. Se fabrican en varias medidas. El vidrio debe
ser necesariamente resistente al calor.
13.- FRASCOS VIALES PARA HEMOCULTIVOS, VACUNAS, CULTIVOS DE TEJIDOS: Son de
vidrio neutro, resistentes al calor, transparentes y con tapa de rosca. Con capacidad de 50,
100 y 150 mL.
Los frascos de vidrio neutro de 50 y 100 mL, blancos o de color mbar pueden ser
aprovechados para la reserva de soluciones y medios de cultivo en stock, previamente
taponados con algodn esterilizado.
OBSERVACION: El material de vidrio restante por ser muy conocido en variedad y usos en
todo laboratorio microbiolgico, solo lo mencionaremos:
MORTEROS, con PILON DE VIDRIO o PORCELANA; PORTAOBJETOS Y CUBREOBJETOS;
LUNAS DE RELOJ de diversos dimetros; TERMOMETROS CLINICOS y de AMBIENTE;
ampolletas para almacenar cultivos, sueros y vacunas en lquido o liofilizado; CAPSULAS
DE PORCELANA con fondo redondo o plano; CAMARA y PIPETAS CUENTAGLOBULOS,etc.

II. MATERIAL DE OTRA NATURALEZA

La lista tambin es enorme; mencionaremos los que ms se utilizan:
1.- MANGOS DE KOHLE: Vstagos de metal con su cubierta de ebonita aislante del
calor y en el extremo proximal una tuerca para insertar el alambre de platino o nicrom en
el asa de siembra. Pueden ser reemplazados por mangos de vidrio, ya descritos
anteriormente.
2.- ESPATULAS DE METAL CON MANGOS DE MADERA: de preferencia de material
inoxidable, su uso es muy conocido.
3.- TRIPOIDES: son de metal, de preferencia de fierro, muy buenos soportes de
recipientes sometidos al calentamiento. Hay de varias alturas y dimetros.
4.- ESTUCHES CILINDRICOS O CUBICULARES: De cobre estaado, para esterilizar pipetas.
Los hay cilndricos, solamente para la esterilizacin de Placas Petri.
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5.- MECHEROS DE BUNSEN: Imprescindibles en Microbiologa. Son de metal con una

tuerca movediza para medir la intensidad de la llama. Algunos modelos llevan una
llave de control ad-hoc.
6.- CANASTILLAS O CESTOS DE METAL: Las mejores son de aluminio. Favorecen el
mejor almacenamiento de tubos de prueba en medidas conocidas. Sin riesgos de rotura.
7.- SOPORTES UNIVERSALES: Con tenazas y aros de metal, para asegurar cuellos y bases
de matraces, balones, beakers, etc.
8.RECIPIENTES DE POLIETILENO O DE METAL: Cilndricos con bases circulares o
cuadrangulares, para lavado de pipetas. Puede ser de manejo manual o automtico.
9.- ADEMAS: Gradillas de madera o metal para tubos de prueba de varios tamaos y para
frascos, goteros, rejillas de asbesto, hilos de platino, aplicadores o vstagos de metal o
madera para confeccin de hisopos, tapones de jebe o corcho para tubos, algodn, papel
filtro, papel kraft envolvente, papel engomado en tiras, papel platina, lpiz graso para
escribir en fro o plumones de tinta indeleble, mangueras de jebe de 10 20 cm. De
dimetro, bandejas de fierro enlozado, instrumental quirrgico, hilo de sutura, papel
indicador de pH, etc.
PREPARACION DEL MATERIAL PARA SU ESTERILIZACION - LIMPIEZA
El material de vidrio nuevo o usado, debe limpiarse en forma tal que elimine toda huella de
suciedad original. Se evita as la precipitacin y depsito de los agentes que ejercen poder
limpiador. El cristal de borosilicato (PYREX) o los instrumentos de vidrio sdico lavados en
fbrica, no requieren tratamiento alguno antes de su utilizacin, salvo el lavado normal. El
material de vidrio sdico nuevo debe sumergirse en HCI durante una noche, para
neutralizar el lcali contenido en el vidrio.
Es importante:
a.- Conocer el grado de dureza del agua (exceso de Ca, Fe, Mg, Cu).
b.- Usar detergentes que no contengan lcalis, que ablanden el agua, que sean fcilmente
soluble en agua tibia y no precipiten en agua fra, tibia o caliente.
c.- Eliminar los residuos ms tenaces: protenas y grasas con facilidad y por completo.
d.- No producir deterioro alguno en los materiales de los instrumentos ni en la piel.
e.- No usar jabn ni detergentes no garantizados.
NOTA: En caso de material de vidrio usado, la limpieza debe hacerse tan pronto como
sea posible.
RECOMENDACIONES GENERALES

Elegir la mesa de trabajo, de preferencia cercana al equipo de esterilizacin.

Colocar sobre la mesa y en forma ordenada todo el equipo a prepararse: matraces,
tubos de prueba, pipetas, etc. trozos de papel engomado y de pabilo, lpiz grazo.

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Rotular los materiales con datos de: medidas, fecha y nombre del grupo o persona a
quien pertenecen.
No manipular bruscamente el material a fin de evitar posibles roturas.
Nunca taponar o envolver los recipientes sin un previo y total secado de los mismos.
Caso contrario aparecern manchas negras despus de la esterilizacin, sobre las
zonas donde qued humedad.

A. PREPARACIN DEL MATERIAL CONTAMINADO PARA SU ESTERILIZACIN

Se recomienda el uso de guantes de jebe de tamao adecuado a las manos del alumno. Los
pasos a seguir son:
1.- Borrar con algodn empapado con alcohol de 96, el rotulado de las placas Petri y de
los tubos de ensayo.
2.- Recipientes con cultivos descartados o contaminados, deben descontaminarse en
autoclave, quitando luego tapones y contenido en caliente. Los restos de agar deben ser
removidos de las placas Petri o tubos de ensayo y colocados en bolsas para su eliminacin.
Las pipetas u otros dispositivos se deben desinfectar en las probetas cilndricas sin graduar
conteniendo solucin bactericida sulfocrmica o detergentes ms 1% de fenol, durante 24
horas.
3.- Remojar en una solucin de agua con detergente todos los materiales de vidrio.
Limpiar el material por dentro frotando con escobilla a la medida. Cuando la escobilla por el
uso queda en alambre en su extremo distal, se recomienda desechar para evitar roturas.
4.- Enjuagar con agua de cao a chorro continuo hasta eliminar el detergente o agente
bactericida. Continuar el enjuague con 2 3 cambios de agua destilada.
5.- Escurrir el agua del material colocndolos sobre soportes sin rajaduras con la boca
hacia abajo y esperar que sequen por si solos. De ninguna manera se deben usar lienzos
para el secado, por los restos de hilachas que quedaran sobre la superficie del material. En
caso de porta y cubre objetos, como paso final se pasan por alcohol de 70 para su
desengrase.
Las lminas portaobjeto, se deben:
Frotar con papel toalla para retirar el aceite en caso el portaobjeto este cubierto con
residuos de aceite de inmersin.
Retirar el cubreobjeto de los portaobjetos con una pinza.
Remojar los porta y cubreobjetos en una solucin de agua con detergente durante 24
horas.
Frotar las lminas con una esponja en la misma solucin de detergente.
Enjuagar las lminas por separado en abundante agua a chorro contino en la grifera.
Enjaguar las lminas con agua destilada, retirarlas y dejarlas secar.
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B. PREPARACIN DEL MATERIAL LIMPIO PARA SU ESTERILIZACIN

Material.1.- Trozos de algodn de varias dimensiones.
2.- Papel Kraft en tiras y trozos rectangulares y cuadrados.
3.- Pabilo
4.- 10 a 12 tubos de prueba de 16 x 150 mm.
10 a 12 tubos de prueba de 13 x 100 mm.
10 a 12 tubos de prueba de 10 x 75 mm.
5.- Matraces Erlenmeyer y Kitasato de 1000, 500 y 250 mL. Uno de cada uno.
6.- Probetas de 1000, 500 y 100 mL, dos de cada una.
7.- Pipetas graduadas de 10, 5, y 1 mL, dos de cada una. Pipeta volumtrica de 100
50 mL.
8.- 4 5 placas Petri de 10 x 100 mm/
9.- Jeringas hipodrmicas de 10, 5 y 2 cc.
10.- Varillas de vidrio hueco de 20 a 30 cm. De longitud por 4 a 6 cm de calibre.
11.- Varillas de vidrio macizo de 40 a 60 cm.
12.- Alambre de platino o nicrom
13.- Lpiz graso o plumn de tinta indeleble (marcador)
PROCEDIMIENTO.I. CONFECCION DE TAPONES DE ALGODN
Mtodo N 1
a.- Tomar un trozo rectangular de tamao adecuado para adaptar al dimetro de
la
boca del recipiente a taponar.
b.- Practicar un doblez en tres a lo largo de la fibra.
c.- Hacer una torsin de 90 en el primer tercio, doblar sobre el tercio medio y
plegar
el ltimo tercio sobre el primero.
d.- Rotar con los dedos el trozo confeccionando para darle forma y dimetro a la
medida de los tubos y matraces.
Mtodo N 2
Tomar un trozo rectangular, practicar a lo largo el doblez en tres y enrollarlo
transversalmente a su eje longitudinal hasta darle la medida y dimetro deseado. Para
mejor duracin del tapn, amoldar un trozo de gasa que lo cubra totalmente. El tapn en
los tubos, matraces u otro recipiente debe quedar introducido en sus dos terceras partes;
no muy ajustado ni muy flojo, para evitar contaminaciones y dificultades en su
manipulacin.

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II. PREPARACION DE TUBOS DE PRUEBA

Hacer manojos de tubos taponados (10 a 12) sujetos con pabilo y cubrir por sus bordes con
el papel envolvente asegurando el paquete con pabilo o papel engomado. Los paquetes
deben corresponder a tubos de iguales medidas. Se colocan en latitas o canastillas para
facilitar su esterilizacin.
III. PARA LOS MATRACES, KITASATOS, FRASCOS Y PROBETAS
Despus de su taponamiento, cubrirlos aisladamente con un capuchn de papel. Para la
confeccin seguir instrucciones del profesor. Se puede prescindir de los tapones y del
papel Kraft, cubriendo las bocas de los recipientes con trozos de papel platina ajustados
ntimamente a su superficie.
PREPARACION DE MATRAZ KITASATO
La tcnica es idntica a la de los matraces. En este caso, se tapona adems la tubuladura
lateral y se cubre con un papel. Aparte se envuelve el tapn de jebe correspondiente, que
despus de esterilizarse se adaptar al Kitasato para la filtracin.
IV. PREPARACION DE PIPETAS SEROLOGICAS Y VOLUMETRICAS
a.- Colocar tapones de algodn a manera de filtros moderadamente ajustados, en las
boquillas de las pipetas.
b.- Colocar oblicuamente la pipeta serolgica a una tira de papel y hacer un
doblez
de ste en un extremo, cubrir el extremo proximal (punta de la pipeta). El extremo donde
se coloca la punta de la pipeta debe tener un doblez para evitar la exposicin del material
por roturas accidentales del papel.
c.- Deslizar el papel en espiral sobre la longitud de la pipeta hasta la boquilla.
Hacer torsin de la tira de papel para permitir la proteccin completa. Evitar queden
vacos.
Preparacin de la Pipeta Volumtrica:
Seguir la misma tcnica con dos tiras de papel para cubrir las partes delgadas de la pipeta.
Se aseguran los extremos proximales, con trozos de papel engomado. Queda sin cubrir la
porcin bulbosa de la pipeta.
Mediante otra tcnica, se protege toda la pipeta con tiras de papel (ms anchas y largas) en
tal forma que el papel envolvente la cubra como estuche. Se hace torsin del papel a la
altura de las regiones delgadas de la pipeta, hasta el remate a ambos extremos.
V. PREPARACION DE LAS PLACAS PETRI
Se pueden envolver aisladamente o en nmero de 2, con los trozos rectangulares de papel
Kraft.

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a.- Colocar las placas sobre el papel en posicin invertida y doblar los mrgenes uno sobre
otro, a manera de cubrirla.
b.- Completar el doblez con los extremos del papel sobrante asegurndolos con papel
engomado. Los bordes de las placas deben quedar ntimamente adheridos al papel que
los cubre, para evitar vacos.
VI. PREPARACION DE PIPETAS PASTEUR
a.- Lisar los extremos de la varilla de vidrio hueco a la llama del mechero. Introducir los
taponcitos de algodn en 2/3 quemndose el excedente.
b.- Calentar el centro de la varilla en forma continuada, rotando a la vez ambos extremos
para evitar el cierre de la luz interna del tubo reblandecido.
c.- Retirar de la llama la regin calentada y reblandecida de la varilla y tirar de los
extremos para obtener la capilaridad. El calibre vara con el tiempo de estiramiento
d.- Separar las dos pipetas por estiramiento brusco despus del calentamiento y
refrendar el cierre a la llama de la porcin distal capilar.
ESTERILIZACIN
Ordenar el material a esterilizar dentro del autoclave, de manera que haya el suficiente
espacio para que el aire caliente circule alrededor de todos los materiales.
Es recomendable el uso de estufa para la esterilizacin del material de vidrio, si en caso no
se cuenta con este equipo se puede utilizar el autoclave para lo cual las placas Petri y
pipetas deben colocarse dentro de bolsas plsticas de polipropileno para evitar que estas se
humedezcan. Al final, el material debe secarse de un da para otro dentro de espacios
limpios.
III.- EQUIPO DE LABORATORIO
1. CABINA DE FLUJO LAMINAR: Emplea un ventilador para forzar el paso de aire a travs de
un filtro HEPA o ULPA y proporcionar aire limpio a la zona de trabajo libre de partculas de
hasta 0.1 micras. Este tipo de equipo presenta una nica cara libre (la frontal) que da acceso
al interior, donde se localiza la superficie de trabajo, que normalmente permanece limpia y
estril. La esterilidad de la superficie de trabajo se logra por la accin germicida de la luz
ultravioleta emitida desde un fluorescente presente en el interior del equipo. Dentro de
estas cabinas o campanas se trabaja con medios de cultivo para el crecimiento de
microorganismos o cultivos celulares y en el cual es vital evitar la contaminacin con
partculas minsculas. Estas cabinas estn diseadas para proporcionar un aire limpio y
constante a una velocidad de paso de aire de 0.30 a 0.50 metros por segundo para as
barrer la superficie de la zona de trabajo y evitar la suspensin de partculas as como una
posible contaminacin de las muestras. El aire es inyectado a la zona de trabajo a travs del
filtro HEPA o ULPA e insuflado en forma de un flujo laminar o flujo unidireccional, muy
suave, hacia el usuario. La superficie de trabajo de la cabina se construye generalmente de
acero inoxidable grado 304 o superior para facilitar su limpieza y aumentar su durabilidad
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por el uso, con acabados sanitarios, sin espacios o juntas donde las esporas pueden llegar a
acumularse. Dentro del laboratorio, la cabina de flujo laminar debe instalarse lo ms lejos
posible de las rejillas de aire acondicionado, campanas de gases, puertas y zonas de trnsito
intensivo de personal, que pueda interferir en el flujo de aire en la cabina.
El adecuado manejo de la cabina de flujo laminar consiste en:
- Poner en marcha la cabina durante 5 minutos antes de empezar a trabajar, de esta
forma se forma un barrido de partculas de la zona de trabajo.
- Limpiar la superficie de trabajo y las paredes laterales con un pao estril (que no
desprenda partculas ni fibras) o de un solo uso, embebido en alcohol de 70.
- Encender la luz ultravioleta y mantenerla durante por 10 minutos para esterilizar el
interior del equipo.
- Encender la luz fluorescente de la cabina.
- Antes y despus de realizar el trabajo en la cabina de flujo laminar se realiza el lavado
de manos y uas con jabn germicida. Evitar tocarse la boca, as como los ojos.
- Es recomendable usar guantes de ltex para minimizar el desplazamiento de
contaminantes cutneos hacia el interior del rea de trabajo y la vez proteger el
operador.
- Usar mascarillas descartables evitando dejar descubierta la boca y nariz, debido a que
este tipo de cabina solo protege a la muestra.
- Colocar el material a utilizar en la zona de trabajo antes de empezar, situando el
material contaminado en un extremo de la superficie de trabajo y el no contaminado
en el extremo opuesto de la misma.
- Es recomendable trabajar a unos 5 a 10 cm alejado de los bordes de la superficie de
trabajo, procure no obstruir las rejillas de aire con materiales o residuos.
- No use nunca la cabina de flujo laminar cuando este sonando algunas de sus alarmas.
- Al finalizar el trabajo, retire el material e instrumentos contaminados.
- Limpiar y descontaminar la superficie de trabajo retirando cualquier materia orgnica
que se haya adherido a la superficie y que sirve de sustrato a los microorganismos.
Utilizar un pao embebido con alcohol de 70.
- Apagar.

2. AUTOCLAVE: Recipiente de presin metlico de paredes gruesas con un cierre hermtico

que permite trabajar a alta presin para realizar la esterilizacin con vapor de agua. Su
construccin permite su resistencia a presin y temperatura elevada desarrollada en su
interior. Las autoclaves funcionan permitiendo la entrada o generacin de vapor de agua
pero restringiendo su salida, hasta obtener una presin interna de 1 atmsfera, lo cual
provoca que el vapor alcance una temperatura de 121 grados Celsius, condiciones tpicas de
esterilizacin en tiempo de 15-20 minutos. La presin elevada permite que el agua alcance
temperaturas superiores a los 100 C. La accin conjunta de la temperatura y el vapor
produce la coagulacin de las protenas de los microorganismos, entre ellas las esenciales
para la vida y la reproduccin de stos, cosa que lleva a su destruccin. Para esterilizar se
aplica los siguientes pasos:
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Cerrar la llave del agua y del vapor.

Llenar con agua el fondo del autoclave hasta el soporte de la canasta evitando el
contacto con el agua.
Colocar la canasta de malla metlica con los materiales que se van a esterilizar
dejando el espacio adecuado para que el vapor tenga libre acceso.
Cerrar la puerta del autoclave con presin leve.
Encender el autoclave
Calibrar el control de presin a 15 lb o 1 atm en el manmetro.
Cuando la temperatura llegue a 121 C, mantenerlo por 30 minutos.
El autoclave disminuye la presin despus del tiempo requerido por el material a
esterilizar.
Apagar el autoclave.
Una vez que la presin haya bajado totalmente a cero, abrir lentamente la llave del
vapor hasta que el vapor haya escapado por completo.
Abrir lentamente la compuerta y dejarla entreabierta para dejar que los materiales
enfren ligeramente, evitndose la rotura de la cristalera y peligros para el operador
por cambios bruscos de temperatura.

3.- CONTADOR DE COLONIAS: Instrumento utilizado para contar colonias de bacterias o

de otros microorganismos que crecen en una placa de medio de cultivo. Cuenta con una
superficie iluminada sobre la que se coloca la placa permitiendo marcar las colonias con un
rotulador en la superficie externa de la placa, de tal manera que cada vez que se marca una
colonia el instrumento emite una seal audible y en la pantalla numrica.
4.- POTENCIOMETRO: Requerido para las mediciones del pH de las soluciones buffer y
medios de cultivo. Constituido por un par de electrodos sensibles a concentraciones de
hidrogeniones, conectado a un circuito elctrico que mide las fuerzas electromagnticas y a
un potencimetro que indica las mediciones.
Los potencimetros emplean un electrodo de vidrio, unido a un electrodo de calomel como
standard. El electrodo de vidrio es una delgada membrana de vidrio especial colocado entre
una media celda de Plata-Cloruro de Plata y la solucin cuyo pH se quiere conocer, el
electrodo de calomel est formado por HgCl slido sobre Mercurio metlico. Dentro de la
celda de vidrio que contiene el electrodo Ag-AgCl, se encuentra HCl 0.1 M lo que
establece en uno de los lados de la membrana de vidrio un pH constante y conocido con
exactitud. La solucin de pH desconocido y la media celda estn unidas por un puente de
KCl. El electrodo de vidrio vara con los cambios de pH de la solucin problema, este
potencial es una funcin lineal de pH.
Debe tenerse extremado cuidado en el manejo de electrodos, especialmente con la
membrana del electrodo de vidrio que es muy delicada y se rompe al primer contacto con
punzo-cortantes. El electrodo de calomel debe estar siempre lleno con solucin adecuada
de sal, usualmente cloruro potsico saturado.

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5.- CENTRIFUGACION: Aceleracin del proceso de sedimentacin, donde la clula o

partcula a sedimentar se ve sujeta a dos fuerzas de sentido opuesto: una dirigida al centro
del tubo y la otra que se opone debido a la viscosidad del medio. La primera responde a la
frmula: f1=my, donde y es la aceleracin debido al peso, y = 1g (unidad de gravitacin);
m es la masa de la partcula.
La segunda es donada por la frmula de Stockes: f2 =6 nrv y depende del radio (r) de la
partcula, de la viscosidad del medio (n) y de la velocidad de migracin (v). Cuando se
acelera el valor de y utilizando la fuerza centrfuga, slidas suspendidas en lquidos. La
velocidad de la cual sedimentarn las partculas en un lquido depende de varios factores:
_ Tamao de la partcula.
_ Peso de la partcula.
_ Viscosidad del lquido.
_ Fuerza gravitacional
La fuerza gravitacional es incrementada mecnicamente. El grado de incremento de la
fuerza gravitacional se mide por comparacin con una fuerza centrfuga relativa (FCR
expresada en G) del siguiente modo:
F C R = 1.118 x 10-5 x R x rpm2
Donde R es el radio de la centrfuga en cm; rpm es la relacin del nmero de
revoluciones por minuto.
El radio corresponde a la distancia del tubo al eje de rotacin.
Factores que influyen en la centrifugacin eficiente:
TIEMPO: El desplazamiento de una partcula en el tubo est en funcin de la duracin de la
centrifugacin.
TEMPERATURA: Las centrfugas refrigeradas se emplean para aquellos productos que se
deterioran fcilmente por el calor desprendido por la friccin de los tubos.
ULTRACENTRIFUGACION.- Para obtener aceleraciones elevadas (mayores o iguales a 50,000
G) se necesitan motores que establezcan un vaco a fin de evitar el calentamiento del rotor
por friccin con el aire. Existen dos tipos:
- Ultracentrifugacin Analtica: Para determinacin de caractersticas fsicas de
protenas o de cidos nucleicos. La migracin de estas molculas es seguida gracias a
un estroboscopio.
- Ultracentrifugacin Preparativa: Permite la separacin de organelas (mitocondrias,
microsomas). La separacin de macromolculas se debe efectuar en gradiente de
densidad.

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6.- INCUBADORAS Y HORNOS: Se basan en el mismo principio. Son gabinetes provistos

de un calentador interconstrudo. La temperatura requerida puede controlarse mediante
un termostato. El termostato se compone de una tira bimetlica que opera como un
conmutador o interruptor elctrico conectado a un aparato de calentamiento. Si se sueldan
entre s dos metales con ndices de expansin diferentes, uno de ellos se dilatar ms
rpidamente que el otro, haciendo que toda la tira se doble; esta tira est conectada a un
interruptor elctrico; se interrumpir el circuito y el calentador dejar de funcionar hasta
que la temperatura descienda o suficiente para que la tira metlica vuelva a su posicin
original.
La diferencia entre los hornos y las incubadoras radica simplemente en la temperatura que
puede obtenerse en el interior. Un aparato capaz de soportar temperaturas de 100 C o
mayores se denomina usualmente HORNO.
Hay dos tipos bsicos de incubadoras: en el tipo de conveccin por gravedad, se hace
calcular el aire por medio de las corrientes de conveccin, son inadecuadas para circular
aire caliente a travs de toda la cmara, cuando debe elevarse la temperatura slo muy
ligeramente sobre la del exterior. Cuando la incubadora es ms grande, ms serio es el
problema. En los tipos de corriente mecnica de conveccin, el aire circula por accin de un
ventilador.
Un punto importante que con frecuencia se descuida, es la carga de las incubadoras. Si se
colocan los paquetes que van a esterilizarse o los cultivos para su incubacin, en
recipientes que no permiten un precalentamiento adecuado disminuye la eficacia del
instrumento.
Las incubadoras ms costosas vienen provistas de un humedecedor, pues los
microorganismos desarrollan mejor en una atmsfera hmeda.
7.- BAOS DE AGUA: Estn constituidos por una bandeja que posee un dispositivo
enrollable que puede sumergirse en ella para calentarlo. Estos dispositivos estn protegidos
por una rejilla que impide el contacto directo entre enrollamiento y los objetos que van a
incubarse, adems de promover una distribucin ms uniforme en las corrientes de
conveccin formadas. Un buen bao de agua es la incubadora ms sensible que pueda
tenerse.
Bajo condiciones ptimas puede regularse la temperatura dentro de lmites. La cubierta o
tapa de la incubadora tiene la finalidad doble de mantener la temperatura requerida en el
interior del aparato y reducir el ndice de evaporacin. El agua de condensacin se
acumular en la parte interior de la tapa, para impedir que esta agua gotee a los tubos de
ensayo, debe tener una tapadera que permita un adecuado drenaje.
Para evitar la formacin de precipitados o costras debe emplearse siempre agua destilada;
para impedir la contaminacin con algas y bacterias puede agregarse 1 mL al 10% de
Zafiran por cada galn (3.785 lt) de agua. Se debe comprobar a diario la temperatura y
nivel de agua.
8.- REFRIGERADORAS Y CONGELADORAS: Son incubadoras de temperatura fra. Se
requiere para almacenar medios de cultivo, sueros y reactivos perecederos. Las
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congeladoras se requieren para almacenamiento ms prolongado de sueros, enzimas, etc.

Debe localizarse lejos de los hornos de aire caliente, de radiadores, de tuberas de agua
caliente.
9.- FILTRACION.- La filtracin bacteriolgica generalmente libera los lquidos de
partculas no deseadas. Se ve favorecida por la aplicacin de presin a travs del filtro, bien
sea presin positiva sobre el lquido no filtrado. Se emplean para lquidos y soluciones que
resultaran alterados por el calor.
En la actualidad su utilizan generalmente tres tipos de filtros para la esterilizacin:
- Filtros de Membrana: Discos de elevada porosidad de steres de celulosa (acetato
de celulosa), con gama de formas, dimetros y poros. Retienen en su superficie aquellas
partculas que sobrepasan el tamao dado. El tamao del poro ms grande es menor que
las pequeas partculas retenidas. La retencin de partculas se efecta por medio de
poros y no por atraccin o adsorcin electrosttica.
Ejm.
Millipore grado 08, dimetro de poro 0.22-0.02 u, 0.45 u para bacterias. Las
membranas de nitrato de celulosa se conocan con el nombre de Oradocel, dimetro 3-10
u son usadas para determinar el tamao de muchos virus.
ULTRAFILTRACION.- La ultrafiltracin bajo membrana de permeabilidad selectiva permite la
separacin de sustancias segn su tamao molecular, las membranas juegan un papel de
filtros a nivel molecular.
Las membranas ms utilizadas son de Digflo (Amicon), fuerza que permite la ultrafiltracin,
es una presin ejercida sobre el lquido a filtrar por el nitrgeno. La ultrafiltracin puede
ser utilizada con centrifugacin, la fuerza motriz de la ultrafiltracin ser entonces la fuerza
centrfuga. APLICACIONES:
1.- Concentracin de macromolculas
2.-Eliminacin de sustancias de bajo peso molecular
3.-Separacin de virus, con utilizacin de membranas especiales cuyos lmites alcanzan
pesos moleculares de 300,000.
10.- LIOFILIZADOR: Procedimiento de conservacin que es acompaado de una
transformacin de la sustancia a conservar, la que contiene al principio una concentracin
elevada.
El principio de liofilizacin consiste en congelar bruscamente a bajas temperaturas. El
procedimiento comprende varias etapas: Congelacin, eliminacin del agua (directamente
del estado slido al vapor, sin pasar por lquido). Este procedimiento permite conservar al
estado seco un nmero de productos que pueden reconstituirse por hidratacin. Para la
congelacin es necesario que el solvente sea acuoso, ya que la mayor parte de solventes
disminuyen el punto de congelacin bajo el riesgo de desnaturalizacin, sobre todo si el
material es proteico.

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El liofilizador comprende una o dos bombas de vaco (la segunda bomba permite obtener
presiones residuales inferiores a 0.1 mm Hg y un sistema que permite obtener el vapor de
agua).
11.- ESPECTROFOTOMETRO.- Es un instrumento que permite medir la intensidad de la luz
transmitida; se utiliza mucho en anlisis bioqumicos. Comprende un espectrmetro y un
fotmetro. Mediante una fuente de luz y un dispositivo de monocroma el espectrmetro
puede emitir frecuencias luminosas conocidas que varan segn el tipo de aparato
empleado pero que corresponden a la regin del espectro visible entre 400 y 700 nm. El
fotmetro es una clula fotoelctrica sensible a la gama de longitudes de onda de la luz
emitida y un galvanmetro que registra las potenciales originados por la clula
fotoelctrica. Estos potenciales son transcritos a una escala donde figuran lecturas por 100
de transmitancia o de absorbancia.
Las sustancias disueltas tienen determinados colores porque absorben ciertas longitudes
de onda de la luz y dejan pasar otras. Cada sustancia absorbe energa radiante de una u otra
longitud de onda.
Ejm. La hemoglobina tiene color rojo porque absorbe los colores complementarios del rojo,
es decir las longitudes de onda ms cortas del azul y del verde.
IV. CONFECCION DE ESPATULAS DE DRIGALSKY
Se preparan a partir de la pipeta Pasteur.
a.- Calentar en un punto del tercio anterior de la zona capilar doblando en ngulo el resto
de la fraccin capilar.
b.- Mediante dos calentamientos sucesivos en dos puntos equidistantes del tercio medio,
formar una varilla capilar horizontal, de manera que los bordes de la esptula formen un
tringulo abierto, entre la fraccin capilar distal y el ngulo del tercio anterior.
V.

CONFECCION DE AGITADORES O BAGUETAS

a.- Lisar los bordes cortantes de la varilla de vidrio macizo a la llama del mechero.
b.- Calentar uno de los extremos al rojo vivo y con una pinza de extremos romos,
presionar fuertemente sin retirar de la llama. Este quedar aplanado y corresponder al
extremo distal de la bagueta.

VI.

CONFECCION DE ASAS DE SIEMBRA

a.- Fijar el fragmento de alambre nicrom o platino de 6 a 8 cm en el extremo proximal
del mango de Kolhe, mediante la tuerca.
b.- Doblar en crculo, ngulo o rombo al extremo libre del alambre mediante una pinza.
El conjunto constituye el ASA DE SIEMBRA.
Puede quedar simplemente en aguja. El asa en crculo se puede moldear en una varilla de
vidrio. El dimetro vara de 2 a 8 mm segn el tipo de inculo a sembrar.

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CUESTIONARIO.1.

Dibujar todos los materiales de vidrio vistos en prctica y mencionar brevemente el

uso de cada uno.

2.

Por qu es necesario preparar el material de vidrio antes de hacer los cultivos?

3.

Por qu no se pueden usar tubos con tapones de jebe?

4.

Qu efecto tendra el algodn

microorganismos?

5.

Por qu no se puede utilizar material de vidrio roto con rayaduras?

6.

Cul es la longitud de onda de la luz ultravioleta con efecto germicida y en que

consiste este efecto?

7.

Mencione otros tipos de esterilizacin adicionales al uso del calor hmedo o seco
utilizados en los laboratorios de Microbiologa. Explique el fundamento de cada
tcnica.

Defina:
- Esterilizacin
- Asepsia
- Solucin sulfocrmica
- Propgulos
- Inculo

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quemado sobre el crecimiento de los