DISCUSIN

La utilizacin de un medio lquido, slido o semislido radica en que necesitamos saber, en

un medio semislido, podemos observar si la bacteria tiene motilidad, en un medio lquido se
puede hacer un conteo celular a travs de un mtodo indirecto por medio de la turbidez, en
un espectrofotmetro y en un medio slido se puede apreciar la morfologa de las colonias
bacterianas.
En la siembra de E.coli en medio slido en superficie inclinada se observ crecimiento en
ambos, ya que son medios nutritivos, compuestos por polmeros de azcares donde E.coli
tiene la capacidad de utilizarlas para desarrollarse y crecer de igual forma en medio lquido,
donde el caldo nutritivo comnmente usado est compuesto principalmente de extracto de
carne, peptona y agua, observndose turbidez en el tubo, indicando la presencia de la
bacteria.
En el medio agar nutritivo constituido de pluripeptona, extracto de carne, cloruro de sodio,
agar y agua purificada, la pluripeptona y el extracto de carne (1) constituyen la fuente de
carbono, nitrgeno y aportan nutrientes para el desarrollo bacteriano. El agregado de cloruro
de sodio mantiene el balance osmtico y el agar es el agente solidificante, En el cultivo mixto
A compuesto de S. aureus y P. aeruginosa, hubo crecimiento, observndose un pigmento de
color verde debido a que P. aeruginosa posee la capacidad de sintetizar diferentes pigmentos
hidrosolubles, entre los cuales se incluye el compuesto fluorescente pioverdina, como
producto de su metabolismo. Adems que la pioverdina tiene efectos antimicrobianos
pudiendo ser una razn por la cual no se observ la morfologa presente de S. aureus. (2) la
cual es puntiforme debido a que S .aureus es un coco, que forma grupos semejantes a
racimos de uvas y la morfologa de P. aeruginosa es irregular. Con respecto al cultivo mixto
B que est compuesto de e. coli y Salmonella typhimurium hubo crecimiento de ambas,
observando las diferente morfologas coloniales, en E. coli tiene morfologa circular (3) y S.
typhimurium puntiforme. (4)
En el medio manitol sal compuesto de manitol (1%), NaCl (7.5%), rojo fenol y peptonas, (5)
igualmente se inoculo el cultivo mixto A. La elevada concentracin de sal inhibe el
crecimiento de bacterias que no son halfilas, adems de aportar un pH>8 al medio, de all
que el rojo fenol se encuentre dando una coloracin roja. Este medio de cultivo favorece el
crecimiento de S. aureus y cuando ste comienza a desarrollarse fermenta el manitol
produciendo cidos, virando el rojo fenol a un tono amarillo, (esto sucede cuando el pH es
inferior o igual a 6.8) (6), por lo que slo se observan colonias caractersticas de esta especie.
En el cultivo mixto B segn la bibliografa consultada, ninguna de las bacterias debi haber
crecido ya que no es un medio favorable para estas 2 bacterias, (7) pero observamos poco
crecimiento de una bacteria con morfologa circular, probablemente por una contaminacin
debido a una mala esterilizacin, mal manejo de los instrumentos, etc.

En el medio Cetrimida compuesto por peptona de gelatina, cloruro de magnesio, sulfato de

potasio, cetrimida y agar(8), se observa un pigmento de color verde, debido a que la
formulacin estimula el crecimiento selectivo de P. aeuruginosa produciendo pioverdina,(2) la
cual se ve favorecida por la presencia de el cloruro de magnesio y el sulfato de potasio.
Adems por la cetrimida que es un compuesto cuaternario de amonio (penetran en las
membranas de los microorganismos gracias a las cadenas carbonadas (hidrfobas). A travs
del nitrgeno catinico (hidrfilo) interaccionan con los fosfatos de los fosfolpidos, causando
la salida al exterior del material vital citoplasmtico), (9) inhibe el crecimiento de gram
positivas(10), por este motivo no se observ S. aureus. En el cultivo mixto B segn la
bibliografa consultada, en este medio no crece E. coli ni S. typhimurium
En el medio MacConkey compuesto de: peptona de carne, triptena, lactosa, mezcla de sales
biliares, cloruro de sodio, rojo neutro, cristal violeta y agar, con un pH final de 7.1. (11) Las
peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, la lactosa es el
hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los
agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva (son
agentes tensioactivos que desorganizan muchas membranas externas). (12) Debido a esto,
observamos una coloracin verde debido a la pioverdina producida por la P. aeruginosa ya
que esta es gram negativa y no fermenta lactosa para que el indicador rojo neutro (pH 6.8 =
rojo, pH 8 = amarillo) vire a un rojo intenso por la produccin de cidos y tampoco se logra
ver color amarillo, probablemente porque la pioverdina tiene un color ms dominante. En el
cultivo mixto B se observa una coloracin roja-morada debido a la fermentacin de lactosa
de E.coli, la intensidad del color depender de la cantidad de cido producido y S.
typhimurium con coloracin amarilla debido a que no fermentan lactosa, alcalinizando el
medio y rojo neutro vira a color amarillo.
En el medio Xilosa-Lisina-Desoxicolato (XLD) que contiene: Xilosa, L-Lisina, Lactosa,
Sacarosa, Cloruro sdico, Extracto de levadura, Rojo fenol, Desoxicolato de Sodio (inhibe
muchos bacilos Gram negativos que no son patgenos entricos e inhibe a los
microorganismos Gram positivos),(13) Tiosulfato sdico, Citraro frrico de amonio y agar con
pH final de 7.4.(14) Observamos un color amarillo, debido a que el rojo fenol en pH cidos es
amarillo, esto debido a los productos secretados por alguna bacteria que probablemente se
inocul ah debido a alguna contaminacin, ya que S. aureus aunque produce cidos, no
crece en este medio. Con respecto al cultivo mixto B observamos color amarillo, por los
cidos producidos por E.coli. Por otra parte, Salmonella Typhimurium descarboxila a la lisina,
aumentando el pH virando a un color rojo y con un punto central negro, por la produccin de
H2S.(15)
En el medio Eosin Methylene Blue (EMB) compuesto por peptona, lactosa, sacarosa, fosfato
dipotsico, agar, eosina y azul de metileno. Es un medio selectivo que permite el crecimiento
de bacilos gramnegativos, principalmente de la Familia Enterobacteriaceae, inhibiendo el
crecimiento de las bacterias gram positivas (La combinacin utilizada de eosina y azul de

metileno, inhibe el desarrollo de microorganismos Gram positivos). Tambin es un medio

diferencial ya que nos permite saber por la coloracin de las colonias si los
microorganismos que crecen fermentan lactosa o sacarosa. Si las bacterias fermentan
lactosa o sacarosa, acidifican el medio y la eosina vira dando lugar a la aparicin de
colonias oscuras, de color rosado a verde brillante (Ej: Escherichia, Klebsiella,
Enterobacter). Las bacterias que no fermentan ni lactosa ni sacarosa originan colonias
claras o transparentes (Ej: Salmonella, Proteus, Pseudomonas). (16) Al revisar la bibliografa,
encontramos que lo que observamos es correcto, pues en mixto B se observ un color verde
brillante correspondiente a E.coli y colonias incoloras correspondiente a Salmonella y a
Pseudomonas (en cultivo mixto A).
CONCLUSIN
Se logr observar el crecimiento bacteriano para E.coli en medio lquido como un aumento
en la turbidez del caldo y la formacin de colonias en la superficie del agar de medio slido
Se realiz de manera exitosa la siembra en los distintos tipos de agares para diferenciar
unas bacterias de otras, as como para permitir el crecimiento exclusivamente de un solo tipo
de bacteria, lo anterior es posible debido a los componentes (nutrientes, indicadores,
inhibidores, sales, vitaminas y minerales, etc.) presentes en el agar y al metabolismo de
dichas bacterias.
Y en la tincin de Gram realizada, se identific del cultivo mixto A en agar nutritivo a S.
aureus gram positiva (observndose de color azul) y P. aeruginosa gram negativa (de color
rosa) y del cultivo mixto B en medio EMB se tom una colonia de color verde brillante la cual
corresponde a E. Coli observndola en la tincin de color rosa, confirmando que es gram
negativa.
CUESTIONARIO SESIN A
1. Determinar el nmero relativo de bacterias encontrado en su caja mediante la
tcnica de aislamiento.
Agar cetrimida se logr contabilizar 4 colonias pertenecientes a P. aeruginosa, el
resto era incontable debido a que se encontraban en una capa homognea.
En agar XLD se contabiliz 60 colonias de Salmonella y 7 colonias de E.coli en un
cuadrante del medio.
2. Explique cul es la importancia en el laboratorio de microbiologa de la tcnica
de aislamiento en cultivo puro.
Debido a que la tcnica nos permite obtener cultivos con colonias diferenciadas (es decir
perteneciente a cada especie de bacteria) en una mezcla de bacterias, nos ayudara en la
identificacin (a partir de la morfologa colonial) y cuantificacin de una bacteria con
importancia mdica, principalmente patolgica.(17)

3. Explique la importancia mdica de las especies bacterianas trabajadas.

Staphylococcus aureus: agente etiolgico de un gran nmero de infecciones en el
hombre. Pueden producir procesos inflamatorios supurativos en casi cualquier tejido,
los cuales son desde muy leves, hasta de alta gravedad y muerte. Adems son
fabricantes de toxinas que provocan cuadros clnicos de muy diversas
manifestaciones. Otro aspecto muy importante es que con gran facilidad puede
desarrollar resistencia a una gran variedad de antimicrobianos, lo que significa que la
colonizacin en el hombre es un gran peligro.(18)
Pseudomona aeruginosa: produce infecciones nosocomiales y adquiridas en la
comunidad. Puede manifestarse como infeccin de vas urinarias nosocomial (en
pacientes con sondas), meningitis, septicemia, bacteriemia, ectima gangrenoso,
enterocolitis, infecciones de quemaduras y heridas, neumona primaria y
necrotizantes, infecciones pulmonares crnicas, osteomielitis, infecciones de piel y
tejidos blandos, otitis crnica externa, otitis media crnica y otitis externa maligna
endocarditis, infecciones oculares.(18)
Escherichia coli: es considerada parte de la flora normal de aparato digestivo del
hombre y muchos animales pero, al mismo tiempo, es la enterobacteria que con
frecuencia causa sepsis bacteriana, meningitis neonatal, infeccin del tracto urinario y
gastroenteritis. La gastroenteritis se produce por entrada de cepas patgenas al
aparato digestivo; el resto son infecciones endgenas.
o E. coli enterotoxignica: produce exotoxinas que dan lugar a un cuadro de
diarrea y vmitos de corta duracin.
o E. coli enteroinvasiva: cepa de este microorganismo con capacidad para
invadir el epitelio de colon. Se produce un cuadro de diarrea con sangre y
leucocitos.
o E. coli enteropatognica: afecta a nios. Cepas con capacidad especial
(producen pilis de adhesin por plsmidos) para adherirse a la membrana
plasmtica del enterocito y producir una destruccin de los microvilli del
epitelio.
o E. coli enterohemorrgica: producen una enteroxina (verotoxina) que origina
colitis hemorrgica en nios menores de 5 aos.(17)
Salmonella typhimurium: provoca fiebre tifoidea. En la primera semana se presenta
fiebre, malestar general, mialgias, cefalea, anorexia y dolor abdominal la fiebre
alcanza los 40-40.5C. En la segunda semana continua la constipacin o puede
desarrollar diarrea y tos. Podra presentarse manchas rosas en el pecho.(18)

CUESTIONARIO SESIN B
1. Mencione las diferencias que existen entre los siguientes medios de cultivo:
bsico, enriquecido, diferencial, selectivo, de enriquecimiento y de transporte.
Cite tres ejemplos de cada tipo de medio.
Medio

Bsico.

Enriquecido.

Diferencial.

Caracterstica particular.
Contienen sustancias nutritivas bsicas
para el crecimiento de bacterias
metablicamente no exigentes, su
preparacin es a base de carne,
aadiendo agar y se le puede aadir
una pequea cantidad de peptona,
extracto de levadura y glucosa(19).
Medios bsicos a los que se les aaden
suero, sangre o factores esenciales
especficos, como vitaminas o
cofactores. Permiten el crecimiento de
bacterias exigentes en requerimientos
nutritivos(19).
Permiten la diferenciacin de colonias
de microorganismos semejantes, sobre
la base de alguna propiedad bioqumica
del germen desarrollado(21).

Permiten el crecimiento de un
determinado
grupo
de
Selectivo
microorganismos, mientras inhibe el
desarrollo
de
la
microbiota
acompaante en la muestra a
estudiar(21).
Medio lquido que favorece la
De enriquecimiento. multiplicacin de bacterias cuando la
muestra obtenida es muy pobre(20).
Se utiliza para asegurar la viabilidad de

Ejemplos

Agar nutritivo, caldo

nutritivo y agar de soya.
(20)

Agar sangre, medio de

Lwestein Jensen y
agar desoxicolatolactosa (DLA)(20).
Medio base de rojo
fenol, agar eosina azul
de metileno (EMB) y
agar SS (Salmonella
Shiguella).(21)
Medio
manitol-sal,
medio Sabouraud y el
medio de rogosa(21).

Caldo
thioglicolato,
caldo tetrationato y
caldo de agua o
peptona alcalina(20).

De transporte.

las bacterias y evitar que se Medio de Stuart, medio

reproduzcan alterando el nmero de de transporte VMGA III
bacterias iniciales, desde el momento y Cary Blair(20).
de toma de la muestra hasta su
posterior siembra en el laboratorio (20).

2. Mencione un mnimo de 5 sustancias inhibitorias utilizadas en los medios de

cultivo y explique su accin.
Citrato-desoxicolato-agar (CD): que contiene desoxicolato una sal biliar que puede alterar
la superficie de los neumococos lo cual activa una amidasa autoltica que rompe las
uniones las uniones entre el cido murmico y el aminocido alanina (22).
Agar anaerobio de lecitina-lactosa: que contiene azida de sodio, un potente inhibidor de
sistemas enzimticos bacterianos implicados en el transporte de electrones y sulfato de
neomicina, inhibe la sntesis de protenas bacterianas mediante su unin irreversible a la
subunidad ribosmica 30S de las bacterias susceptibles (23).
Agar cicloserina-cefoxitina-fructosa-yema de huevo (CCFA): contiene cicloserina inhibe la
formacin de la pared celular, al ser un interferente en la formacin de los precursores en
el citoplasma, inhibe la conversin de L-alanina a D-alanina (23). Mientras que la cefoxitina
se fija a una o ms protenas fijadoras de penicilina (PBP) que son transpeptidasas y de
esta forma se inhibe la unin cruzada de las uniones de peptidoglucano (24).
3. Explique por qu no todas sus cepas crecieron en los medios inoculados.
Existen inhibidores? Cules son? Cmo actan?
Agar manitol-sal: agar selectivo que inhibe el crecimiento en este experimento de
Pseudomona aeruginosa, debido a la concentracin de sal elevada (7.5%) slo
organismos que puedan soportar la presin osmtica sobreviven, por tanto slo se
obtiene crecimiento de Staphylococcus aureus.
Agar cetrimida: derivado de amonio cuaternario con capacidad emulsionante y
detergente, con actividad bactericida Gram+ y Gram-. Inhibe el crecimiento de
Staphylococcus aureus pero propicia el crecimiento de Pseudomona aeruginosa (25).
Agar MacConkey: separa las bacterias fermentadoras de lactosa de las no
fermentadoras. Contiene sales biliares (propician la autolisis de la bacteria al
deteriorar la superficie bacteriana) y cristal violeta que inhiben a bacterias Gram+ y
Gram- que no pertenecen a la familia Enterobacteriaceae.
Agar XLD: medio selectivo para Salmonella typhimurium inhibe el crecimiento de E.
coli debido a la presencia de desoxicolato (mecanismo expuesto anteriormente) (26).

 Agar Verde Brillante: contiene tetrationato (inhibe el crecimiento de E. coli) es un

compuesto toxico y todo microorganismo que no cuente con la enzima tetrationato
reductasa, algunos colorantes (azul de metileno y verde brillante) tiene una accin
selectiva bacteriosttica o bactericida segn la concentracin, el verde brillante inhibe
fundamentalmente el desarrollo de Gram+ y Gram-(27).

BIBLIOGRAFAS:
1) A Merino. Pseudomonas aeruginosa: una bacteria con personalidades mltiples
[Internet]. 2007. [Consultado el 4 de julio del 2015]. Disponible en:
http://www.scielo.org.ar/scielo.php?pid=S032575412007000300004&script=sci_arttext
2) Laboratorios Britania. Agar nutritivo. [Internet]. [Consultado el 4 de julio del 2015].
Disponible en: http://www.britanialab.com/productos/234_inserto_es.pdf
3) Abigail R. Escherichia Coli. [Internet]. [Consultado el 4 de Julio del 2015]. Disponible
en: http://www.uv.mx/personal/sbonilla/files/2011/06/Escherichia-coli-I.pdf
4) Edmundo Calva. Salmonella typhi y la fiebre tifoidea: de la biologa molecular a la
salud pblica: Instituto de biotecnologa, UNAM. [Internet]. [Consultado el 4 de julio
del 2015]. Disponible en: http://www.biblioweb.tic.unam.mx/libros/microbios/Cap4/
5) Agar Manitol Sal. [Internet]. [Consultado el 4 de julio del 2015]. Disponible en:
http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/manitolsalagar.htm
6) Koneman E. Diagnstico microbiano microbiolgico: texto y atlas en color. 6 edicin.
Buenos Aires: Editorial Mdica Panamericana; 2006.
7) Donald W, et al. Effect of NaCl, pH, Temperature, and Atmosphere on Growth of
Salmonella typhimurium in Glucose-Mineral Salts Medium. [Internet]. 1987.
[Consultado
el
4
de
Julio
del
2015].
Disponible
en:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC203861/pdf/aem00123-0115.pdf
8) Agar Cetrimida. [Internet]. [Consultado el 4 de julio del 2015]. Disponible en:
http://www.britanialab.com/productos/304_hoja_tecnica_es.pdf
9) Compuestos de amonio cuaternario. [Internet]. [Consultado el 4 de julio del 2015].
Disponible en: http://www.scfarmclin.org/docs/higiene/part4/434.pdf
10) Rueda J. Evaluacin de desinfectantes de amonio cuaternario sobre cepas
bacterianas de origen animal. 2003 [Internet]. [Consultado el 4 de julio del 2015].
Disponible en: http://www.oie.int/doc/en_document.php?numrec=1052603
11) Agar MacConkey. [Internet]. [Consultado el 4 de Julio del 2015]. Disponible en:
http://www.britanialab.com/productos/302_hoja_tecnica_es.pdf
12) Enrique Iaez. Nutricin Microbiana: Medios de cultivo. [Internet]. [Consultado el 4 de
Julio
del
2015].
Disponible
en
http://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/11nutrientes.htm

13) Agar XLD. [Internet]. [Consultado el 4 de Julio del 2015]. Disponible en

http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_Agar_XL
D.pdf
14) BD XLD Agar (Xylose-Lysine-Desoxycholate Agar). [Internet]. 2013. [Consultado el 4
de Julio del 2015]. Disponible en: http://www.bd.com/resource.aspx%3FIDX%3D8783
15) Medios de cultivo. [Internet]. [Consultado el 4 de julio del 2015]. Disponible en:
http://asignatura.us.es/mbclinica/docs/recursos/34/medios-de-cultivo.pdf
16) Diagnostico Bacteriolgico. [Internet]. [Consultado el 4 de julio del 2015]. Disponible
en:
http://ecaths1.s3.amazonaws.com/catmicromed/Clase%202%20%20Seminario.pdf
17) De la Rosa M, Prieto J. Microbiologa en ciencias de la salud: conceptos y
aplicaciones. 1 edicin. Madrid: El Sevier; 1997.
18) Romero R. Microbiologa y parasitologa humana: bases etiolgicas de las
enfermedades infecciosas y parasitarias. 3 edicin. Mxico: Editorial Mdica
Panamericana; 2007
19) Prats G. Microbiologa clnica. 1 edicin. Buenos Aires: Editorial Mdica
Panamericana; 2005.
20) Montoya H. Microbiologa bsica para el rea de la salud y afines. 2 edicin.
Colombia: Editorial Universidad de Antioquia; 2008.
21) Negroni M. Microbiologa estomatolgica: fundamentos y gua prctica. 2 edicin.
Buenos Aires: Editorial Mdica Panamericana; 2009.
22) Olivas E. Manual de prcticas de microbiologa I, II y parasitologa. 1 edicin.
Mxico: Editorial Universidad Autnoma de Ciudad Jurez; 2004.
23) MacFaddin J. Pruebas bioqumicas para la identificacin de bacterias de importancia
clnica. 3 edicin. Buenos Aires: Editorial Mdica Panamericana; 2003.
24) Gennato A. Remington farmacia. 20 edicin. Buenos Aires: Editorial Mdica
Panamericana; 2003.
25) Airas J, Aller M, Fernndez E, Arias I, Lorente L. Propedutica quirrgica. Espaa:
editorial Tbar; 2004.
26) Garca J, Silva M. Tcnico especialista en laboratorio. Espaa: Editorial Mad; 2006.
27) .- Granados R, Villaverde M. Microbiologa. 1 edicin. Madrid: Editorial Thomson;
2003.