ESCUELA POLITCNICA DEL EJRCITO

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA

CARRERA DE INGENIERA EN BIOTECNOLOGA
INMUNOLOGA

Nombres: Lpez Nathaly Paz Johanna

Fecha: 15 de mayo del 2015
1. Tema: Clulas del linaje inmunolgico / Inmunidad Natural y Efectos
Indeseables de la Inmunidad.
2. Informe de laboratorio N 1
3. Introduccin:
El xito evolutivo de los vertebrados fue debido en gran parte al desarrollo de
un eficaz sistema de defensa, organizado en clulas, tejidos y rganos
linfoides, este sistema es capaz de responder especficamente y con memoria
inmunolgica a los patgenos. Estas clulas del sistema inmunitario se originan
a partir de las clulas hematopoyticas pluripotenciales del hgado y medula
sea (fetal y del adulto) (Villena, 1995). Los leucocitos o glbulos blancos son
clulas sanguneas nucleadas, la cantidad normal de leucocitos por mm 3 se de
4500 a 11000, constituyen el 1% del volumen sanguneo, a diferencia de los
eritrocitos, los leucocitos no funcionan dentro del torrente sanguneo solo lo
utilizan para desplazarse, cuando llegan a su destino migran entre las clulas
endoteliales de los vasos sanguneos en un proceso denominado diapdesis,
penetran en el tejido conjuntivo y llevan a cabo su funcin (Pharman, 2006).
Son parte del sistema inmune adaptativo y el innato Se dividen en dos grupos:
los granulocitos (con enzimas) y agranulocitos (Pharman, 2006).
Granulocitos

Neutrfilos (60-70%): constituyen la mayor parte de la poblacin de

leucocitos, poseen un dimetro de 9-12 mm, y contienen un ncleo
multilobular, su funcin es de fagocitosis de patgenos

Eosinfilos (4%): clulas redondas en suspensin y en frotis

sanguneos, su membrana tiene receptores para inmunoglobulina IgG
IgE y complemento, ncleo bilobulado, su principal funcin es la
destruccin de parsitos y estn presentes en alergias

Basfilos (>1%): clulas redondas en suspensin, ncleo en forma de S

que suele ocultarse por grnulos especficos que se encuentran en el
citoplasma ,(Zamora, A.2015.

Agranulocitos

Linfocitos (20-25%): son clulas redondas en frotis, su ncleo es

redondo que ocupa la mayor parte de la clula, se subdividen en
linfocitos B, y T; se encargan del funcionamiento apropiado del sistema
inmunitario,(Zamora, A.2015).
o Linfocitos T: se encargan del sistema inmunitario de mediacin
celular, se dividen en Clulas T citotxicas, colaboradoras y
reguladoras
o Linfocitos B se encargan del sistema inmunitario de medicin
humoral, encargadas de producir anticuerpos contra antgenos.

Monocitos (3-8%): son las clulas ms grandes de la sangre circulante,

se caracterizan por su ncleo grande, acntrico en forma de rin o
hendidura, entre sus principales funciones se encuentra la fagocitosis,
destruccin de clulas muertas y agnicas, produccin de citocinas en la
activacin de respuestas inflamatorias, (Zamora, A.2015).

El sistema ABO y el factor Rh

El descubrimiento del sistema ABO para el grupo sanguneo fue fundamental
en la evolucin de la transfusin sangunea. Se supo entonces que si los
eritrocitos de un grupo eran mezclados con el suero de otro grupo, seria
aglutinados o hemolisados, aun cuando provinieran de individuos con un
parentesco cercano. El grupo sanguneo de cada persona, va a estar
determinado por una serie de antgenos, en su interior van a encontrarse
plaquetas, leucocitos, hemates. El descubrimiento del sistema ABO fue en
1901, por Landsteiner, se basa en 2 antgenos glucognicos presentes en los
eritrocitos de forma natural, de esta forma podemos tener 4 grupos.
Grupo A: Presenta aglutingeno A, aglutinina anti B y se encuentra en
el 42% de la poblacin.
Grupo B: Presenta aglutingeno B, aglutinina anti A y se encuentra en
el 10% de la poblacin.
Grupo AB: Presenta aglutingeno A y B, no posee aglutinina y se
encuentra en el 4% de la poblacin.
Grupo O: No presenta aglutingeno, contiene aglutinina anti A y B
y se encuentra en el 46% de la poblacin.
Por otro lado el factor Rh engloba a personas que tengan el grupo de antgenos
D o tambin conocidos como factor Rhesus, si el individuo tiene en sangre los
factores Rhesus se clasifican como Rh positivas y caso contrario son Rh
negativas (MedlinePlus, 2014).
4. Objetivo general:
Observar clulas del linaje inmunolgico, determinar el grupo sanguneo
y factor Rh mediante una reaccin antgeno - anticuerpo.
5. Objetivos especficos:

Obtener una muestra de sangre perifrica en los tubos con

anticoagulante EDTA.

Realizar un frotis sanguneo para las tres muestras e identificar al

microscopio las clulas de linaje inmunolgico.
Determinar la compatibilidad sangunea con otros tipos y observar la
reaccin Ag-Ac.

6. Materiales y mtodos:
Instrumentos y Equipos
Agujas
Jeringas
Torundas
Torniquete
Mandil
Tubos de 15ml
Pipetas Pasteur

Portaobjetos
Marcador permanente
Cubreobjetos
Microscopio ptico
Aplicadores de madera
Ac anti A anti B anti D

Reactivos
Alcohol
Tincin de Giemsa
Tincin de Eosina
Tincin de Wright
Aceite de Inmersin
Ac anti A anti B anti D
Antiglobulina
especfica
IgG
Solucin salina

Obtencin de muestras

Se recolecto tres muestras de sangre perifrica en tubos con anticoagulante

EDTA. Se tom tres portaobjetos bien lavados con agua y alcohol, y se
procedi a colocar una gota de sangre en tres portaobjetos y se realiz un
frotis
Se dej secar y despus se coloreo con diferentes colorantes de
diferenciacin por 10 minutos, se lav con agua de la piceta y se dej secar.
Se observ en el microscopio bajo los objetivos de 40X y 100X. Se identific
y se anot los resultados.

Grupo sanguneo y Rh

Se coloc una gota de sangre en cada crculo.

Se agreg a cada crculo una gota de reactivo distinto Anti A, B, D.
Se mezcl inmediatamente el contenido de cada crculo con palillos de
madera distintos.
Se dej por un corto tiempo y se observ la presencia o ausencia de
aglutinacin.
7. Resultados:
Tabla 1: Clulas observadas de la muestra tomada de sangre perifrica.

TIPOS
CELULARE
S
Neutrfilos

Monocitos

Linfocitos

TAMAO
CELULA
R
(m)
10-15

12-20

7-18

NCLEO

CITOPLASM
A

TINCI
N

2-5
ncleos
conectado
s
por
filamentos
delgados,
no
se
observa
cromatina
Variable;
puede ser
redondo,
en
herradura
o en forma
de rin
Redondo
ha
ovalado.

Azul palido a Eosina

rosa

FOTOGRAFA

100x

Gris, azulado

Wright

100x

Escazo
a Giemsa
moderado,
celeste cielo

100x

Basfilo

Redondas

Escazo
a Wright
moderado,
celeste cielo

10-13
100x

Eosinfilos

0.5-1.5

Redondas
y
granuladas

Azul palido a Eosina

rosa

100x

(Arvalo,V.2015)

El sistema ABO y el factor Rh

Grfico 1. Tipificacin sangunea de tres tipos de sangre

8.Discusin
Segn (Abbas, 2012), los neutrfilos son las clulas con ncleos segmentados
que se encuentran en mayor cantidad en la sangre, esto se debe a que son la
primera lnea de defenza ante un agente o sustancia extraa, en la
observacin de las placas se identific con mayor frecuencia a los neutrfilos
corroborndose lo dicho anteriormente. El mismo autor describe a los
monocitos como clulas esfricas con ncleos arrionados. Lo enunciado por
Abbas cumple con las observaciones realizadas ya que el monocito observado
present esas caractersticas.
Los frotis de sangre se realizan mediante la colocacin de una gota de sangre
en un extremo de un portaobjetos, y el uso de un cubreobjetos para dispersar
la sangre con el objetivo de conseguir una regin llamada monocapa, donde las
clulas estn espaciados lo suficientemente
para ser observadas y
diferenciados,(Docsetools,2015).
La realizacin correcta de los frotis permiti que en dos de las tres placas se
visualice la monocapa y a continuacin se procedi a poner los respectivos
colorantes para la tincin; en las dos primeras placas con Eosina y Giemsa
permite se ven las clulas diferenciadas como se puede ver en la tabla 1,
mientras que en la tercera capa con Wright como no se hizo adecuadamente el
frotis se ven aglomeradas impidiendo la fcil diferenciacin de monocitos y
basfilos.
El anlisis rutinario de sangre en laboratorios mdicos se realiza generalmente
en frotis de sangre teidos con Eosina, Wright o Giemsa. Estas manchas
permiten la deteccin de glbulos blancos, glbulos rojos, y anormalidades de
las plaquetas,(Docsetools,2015).

En la muestra de sangre se aplic las tres tinciones y se identificaron

diferentes tipos de glbulos blancos. Se pudo observar neutrfilos los cuales
presentan divisiones en su ncleo, son la defensa innata y presentan enzimas
para combatir contra bacterias y hongos,(Kindt et al, 2007). Monocitos se hace
evidente debido a que se colorean de gris-azulado y tiene una forma de rin,
la principal funcin de los monocitos es la de fagocitar a diferentes
microorganismos o restos celulares, (Villena, 1995). Los linfocitos estos se
tien de color celeste cielo completamente, ya que tienen citoplasma escaso, la
principal funcin de estos son la inmunidad especifica o adquirida,(Zamora,
A.2015). Por ltimo los eosinfilos se tien de color celeste cielo y presentan
mltiples Granulocitos,(Zamora, A.2015).
Se realiz pruebas de tipificacin para tres posibles tipos de sangre, obtenida
por extraccin venosa. En la primera fila luego de agregar los reactivos anti A,
B y D, se esper un tiempo aproximado de 3 minutos y se obtuv aglutinacin
en A y posteriormente en D, lo que segn Iglesias (2007), confirma que la
sangre es de tipo A Rh+. Si se tratara de una prueba realizada con objetivos
diansticos, se podra decir que la persona con este tipo de sangre puede pude
donar a fenotipos A y AB, y ser receptor de A y O; este tipo de sangre se da en
el 34% de la poblacin mundial, siendo el segundo tipo de sangre ms comn.
Adems la estructura del grupo sanguneo es una molcula de galactosa unida
a N-acetilglucosamina y una de fucosa, junto a una molcula de Nacetilgalactosamina que determina el tipo sanguneo (Parham, 2006). En la
segunda fila luego de colocar los reactivos anti A, B y D, se esper un tiempo
aproximado de 3 minutos y se observ aglutinacin en B y posteriormente en
D, lo que segn Iglesias (2007), confirma que la sangre es de tipo B Rh+.
Siendo este tipo de personas donante para B+ y AB+, y ser receptor para B y
O. La estructura del grupo sanguneo es una molcula de galactosa unida a Nacetilglucosamina y una de fucosa, junto a una molcula de galactosa que
determina el tipo sanguneo, (Parham, 2006). En la tercera fila luego de colocar
los reactivos anti A, B y D, se esper un tiempo aproximado de 3 minutos y solo
se obtuvo aglutinacin en D, lo cual segn Rojas (2006) corresponde al grupo
O Rh+, que es el tipo de sangre ms comn en el mundo con un 37% de
prevalencia, es tambin llamado donante universal pues todos los fenotipos
pueden recibir este tipo de sangre, sin embargo solo recepta tipo O. La
estructura del grupo sanguneo es una unidad de N-acetilglucosamina,
galactosa y fucosa.
Conclusiones

Se observ clulas del linaje inmunolgico, se determin el grupo

sanguneo de cada muestra.
Se obtuvo una muestra de sangre perifrica en tubos anticoagulantes
EDTA, aproximadamente 10mL de tres extracciones.
Se realiz un frotis sanguneo y las tinciones respectivas para la
identificacin de clulas del linaje inmunolgico, las tinciones empleadas
fueron con Eosina, Giemsa y Wright.
Se logr observar y distinguir en el microscopio neutrfilos, eosinfilos,
monocitos y basfilos.

En la primera fila se obtuvo aglutinacin en A y posteriormente en D, se

confirma que el tipo de sangre es A Rh+, en la segunda fila se produce
aglutinacin en B y posteriormente en D y se confirma que la sangre es
de tipo B Rh+, en la tercera fila solo se obtuvo aglutinacin en D,
corresponde al grupo O Rh+.

9.Recomendaciones
Se recomienda aplicar de manera rigurosa las normas de bioseguridad
descritas en el CDC para manipulacin y transporte de muestras con
fluidos humanos como sangre.
Se recomienda realizar correctamente el frotis, para poder identificar las
clulas con facilidad en el microscopio.
Se recomienda que en la tincin se lave con cuidado, para evitar dao
en la muestra teida en la placa.
10. Cuestionario
Explique la ley de Stokes
Cuando un slido se desplaza verticalmente y en sentido descendente
de un fluido, en el que actan las fuerzas: de peso de slido, en sentido
hacia abajo la fuerza de empuje y en sentido la fuerza de resistencia
(Fernndez et al, 2014).
Esta ltima depende de la naturaleza del fluido (viscosa) de la seccin
transversal, de la forma del slido y directamente de una potencia de la
velocidad v con que se desplaza. Para el caso de slidos esfricos dicha
fuerza podr expresarse como:
2

Fr=C D r nv

Explique la centrifugacin zonal y isopicnica

Centrifugacin Zonal
En esta tcnica la muestra
analizar se deposita en la parte
superior, despus de haber
realizado una gradiente de
densidades antes formadas.
A causa de la fuerza de
centrifuga
las partculas se
mueven a velocidades que
dependen de la masa y
sedimentacin
en
distintas
zonas del gradiente (Angurell,
2005).

Centrifugacin Isopicnica
Esta
tcnica
separa
las
partculas en relacin a las
densidades. Por este motivo la
sedimentacin final no se
produce si se controlan las
condiciones de centrifugacin,
ya que las partculas flotan
sobre un "colchn" de material
que posee una densidad
superior (Angurell, 2005).

 Medidas de bioseguridad en tomas de sangre en humanos y en animales,

as como el transporte de muestras
Practique las precauciones universales mnimas con todo paciente a ser
atendido.
Toda muestra debe ser considerada potencialmente infecciosa y se
deben tomar las precauciones que garanticen la seguridad del
flebotomista y de los pacientes.
Limpie su mesa antes de iniciar sus labores.
Si el paciente tose con frecuencia, colquese una mascarilla.
Evite tocar reas visiblemente infectadas del paciente.
Tome precauciones al manipular las agujas y lancetas.
No deje agujas y lancetas usadas en la mesa de trabajo. Descartar
inmediatamente en su contenedor
apropiado.
No coloque el protector a la aguja.
Si hay derrame de sangre, limpie con Hipoclorito de sodio al 10%.
Limpie el torniquete con alcohol etlico despus de cada extraccin.
Cambie los guantes si se han manchado de sangre u otros fluidos
corporales.
Siempre que sea posible, cambie los guantes entre pacientes.
Al terminar su labor, qutese los guantes y lvese bien las manos.
Si ocurre un pinchazo con aguja conteniendo sangre de un paciente HIV
positivo, informe inmediatamente al jefe del laboratorio y dirjase a la
clnica del empleado o a riesgos profesionales.
Esta exposicin debe quedar registrada. El uso profilctico de
Zidovudine ha sido efectivo en estos
casos (79%) para evitar la seroconversin.
Evite que los nios toquen o jueguen con los equipos de la flebotoma
(Demar, 2010).

Clasificacin de la ontogenia de las clulas inmunes

(Buenaventura,2015).
11. Bibliografa
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