PRCTICAS DE LABORATORIO

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INFORMACIN BSICA
NOMBRE DE LA PRCTICA:
Anlisis qumico de la casena presente en leche descremada-deslactosada.

PRCTICA No.

14

ASIGNATURA: Bioqumica.
TEMA DE LA PRCTICA: Extraccin, purificacin y cuantificacin de protenas.
LABORATORIO A UTILIZAR: Laboratorio de Qumica y Bioqumica.
CONTENIDO DE LA GUA
OBJETIVOS
Extraer y purificar la protena casena presente en una muestra de leche de vaca descremada-deslactosada,
llevndola a su punto de menor solubilidad (punto isoelctrico); para cuantificarla por un mtodo
espectrofotomtrico que utiliza el reactivo de Biuret.
INTRODUCCIN
La casena es una fosfoprotena que se separa de la leche por acidificacin y forma una masa blanca. Las
fosfoprotenas son un grupo de protenas que estn qumicamente unidas a una sustancia que contiene cido
fosfrico; por lo tanto, su molcula contiene el elemento fsforo. La casena representa cerca del 74 al 82% de
las protenas presentes en la leche y el nmero de aminocidos en la casena de la leche vara entre 199 y 209.
Cuando se coagula la casena de la leche empleando quimosina (rennina), es llamada paracasena, y cuando
coagula a travs de la reduccin del pH es llamada casena cida. Cuando no est coagulada se le llama
caseingeno. La casena es un slido blanco-amarillento, sin sabor ni olor, insoluble en agua.
En esta prctica de Laboratorio se precipitar la casena por acidificacin con una solucin diluida de cido
actico. El producto obtenido, se disolver en una solucin tampn pH 8, luego se determinar el contenido
de casena por medio de un mtodo espectrofotomtrico empleando Biuret y se comparar el porcentaje
encontrado experimentalmente con el reportado en la literatura.
MARCO TERICO
1. LA LECHE
La leche es un fluido de origen biolgico que posee una alta complejidad y que est constituido principalmente
por agua en la que se encuentran compuestos inorgnicos, lactosa y protenas sricas que son totalmente
solubles; pero tambin se encuentran dispersas molculas insolubles que son: protenas casenicas y grasas
(Veloso, Teixeira, & Ferreira, 2002). Estas dos ltimas son las responsables del color blanco de la leche y se
encuentran formando un sistema coloidal, caracterizados por presentar dos fases, una continua y otra
dispersa, en dnde las partculas de la fase dispersa tienen un tamao de partcula entre 1nm y 10 m; Estas
partculas se encuentran diseminadas de forma estable y homognea en la fase continua, debido en gran parte
a que su superficie se encuentra uniformemente cargada, lo que causa que se repelan entre s evitando que
se aglomeren unas con otras formando partculas de mayor tamao que pueden ser decantadas por la
gravedad (Universidad Autnoma de Madrid, 2009).
2. PROTENAS DE LA LECHE
Como se mencion anteriormente, uno de los componentes principales de la leche son las protenas,
compuestos orgnicos constituidos por aminocidos dispuestos en una cadena lineal y unidos entre s por
enlaces peptdicos, como se muestra en la figura 1.

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Figura 1: Formacin de un Enlace Peptdico.

La secuencia de aminocidos en una protena est definida por la secuencia de un gen, que est contenido
dentro del material gentico en el ncleo de la clula. Los aminocidos que componen las protenas, son
codificados en el ADN, en el que una secuencia de tres bases nitrogenadas especficas codifica para un
aminocido. En los eucariotas, normalmente se encuentran 20 aminocidos que forman la mayora de las
protenas conocidas, sin embargo en algunos organismos el cdigo gentico puede incluir selenocistina y
pirrolisina que hacen parte de los aminocidos no convencionales.
Las protenas cumplen mltiples funciones, de tipo enzimtico donde catalizan reacciones bioqumicas que son
vitales para el metabolismo, de tipo estructural o mecnico, como la actina y la miosina en los msculos o las
protenas del citoesqueleto. Otras protenas son importantes en la sealizacin celular, la respuesta inmune,
la adhesin celular y el ciclo celular. Las protenas son tambin necesarias en la dieta de los animales ya que
estos no pueden sintetizar todos los aminocidos que necesitan y deben obtener los aminocidos esenciales
de los alimentos; a travs del proceso de la digestin, los animales descomponen las protenas en aminocidos
libres que se utilizan en el metabolismo (Bohinski, 1991).
2.1. CASENA
La casena, como todas las protenas, est compuesta por la unin de aminocidos individuales, cada uno de
los cuales est cargado positiva y negativamente y cuya carga neta depende de los residuos que acompaen
la estructura bsica de los aminocidos (cadenas laterales). Por lo tanto, las protenas tambin tendrn una
carga positiva o negativa que depender de los aminocidos que la conformen y del pH al que se encuentre en
sistema.
El pH en el cual que la protena posee carga neta igual a cero y precipita se conoce como punto isoelctrico. En
casi todas las protenas, los residuos son dbilmente cidos, por lo que stas suelen tener una carga positiva
por debajo del pH del punto isoelctrico y una carga negativa por encima, por lo tanto a pH neutro tienen una
carga neta negativa. A nivel bioqumico, el punto isoelctrico es una herramienta muy empleada para la
purificacin de protenas, ya que el pH al que la protena no tiene carga neta suele ser el mismo al que la
solubilidad es la ms baja (Murray et al., 2005). Para la casena el punto isoelctrico es aproximadamente de
4,6 y es el valor al que sta precipita.
La leche tiene un pH cercano a 6,6, en el cual las micelas de casena tienen una carga neta negativa y se
encuentran dispersas muy establemente. Cuando se le adiciona cido a la leche, las cargas negativas de la
superficie externa de las micelas se neutralizan entre si (los grupos fosfato se protonan), provocando que haya
una atraccin entre las superficies de las micelas con cargas opuestas propiciando la formacin de partculas
ms grandes que precipiten (Virtual Amrita laboratories Universalizing Education, 2013), este proceso es
mostrado en la figura 2.

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Figura 2: Dependencia de la solubilidad de la casena respecto al pH

Muchos alimentos son fuente de protena y aminocidos esenciales. Una de las principales fuentes de estos es
la leche la cual; adems, tambin es fuente de vitaminas (principalmente tiamina, riboflavina, cido pantotico
y vitaminas A, D y K), minerales (calcio, potasio, sodio, fsforo y metales en pequeas cantidades),
carbohidratos (lactosa) y lpidos. Los nicos nutrientes importantes de los que carece la leche son el hierro y
la vitamina C.
En cuanto a las protenas que contiene la leche su concentracin total vara de 3.0 a 4.0% (30-40 gramos por
litro), cuyo porcentaje vara con la especie de la vaca y con la cantidad de grasa en la leche; estas protenas se
pueden clasificar de manera general en protenas globulares y fibrosas. Particularmente en la leche, hay tres
clases de protenas: casena, lactoalbminas y lactoglobulinas. En la siguiente tabla se puede observar una
clasificacin ms especfica de las protenas que contiene la leche (Agrobit, 2012):
PORCENTAJE DE PROTENA EN LA LECHE

_g Protena_
Kg leche

p/p de
Nitrgeno

Casena
Alfa-s1-casena
10,0
30,6
Alfa-s2-casena
2,6
8,0
Beta-casena
10,1
30,8
Gamma-casena
3,3
10,1
Casena total
26,0
79,5
PROTENAS DEL SUERO DE LA LECHE
Beta-lactoalbmina
1,2
3,7
Beta-lactoglobulina
3,2
9,8
Albminas del suero de leche
0,4
1,2
Inmunoglobulinas
0,7
2,1
Miscelneos
0,8
2,4
Protenas totales del suero de la leche
6,3
19,3
PROTENAS DE LAS MEMBRANAS DE LOS
0,4
1,2
GLBULOS GRASOS
PROTENAS TOTALES
32,7
100
Tabla 1: Composicin protica de la leche de vaca tomado de (Agrobit, 2012)

La Casena se dispersa bien en un medio alcalino, como una solucin acuosa de hidrxido de sodio (NaOH),
formando caseinatos de sodio, o un buffer bsico. Dentro de las principales aplicaciones que tiene la casena,
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estn la fabricacin de pinturas especiales (usadas desde la antigedad por los egipcios) y de tejidos,
clarificacin de vino, elaboracin de preparados farmacuticos, fabricacin de plsticos (botonera, peines y
mangos de utensilios), pegamento en relojera, carpintera (recomendadas para maderas terciadas), papel,
vidrio y porcelana (Murray et al., 2005).
3.

LA ESPECTROFOTOMETRA

La espectrofotometra es uno de los mtodos de anlisis instrumental ms empleado en las investigaciones

qumicas y biolgicas. Se caracteriza principalmente por su precisin, sensibilidad y aplicabilidad a molculas
de diversa naturaleza qumica (Metales, contaminantes, biomolculas, etc.) y estado de agregacin (slido,
lquido, gas). El fundamento de este mtodo analtico se basa en la propiedad que tienen las sustancias para
absorber energa radiante (por ejemplo, en forma de luz visible), la cual permite ser utilizada para su
identificacin y cuantificacin.
Todas las sustancias absorben energa en alguna regin del espectro electromagntico, ya sea en la regin
Visible (400nm a 760nm), en la regin del Ultravioleta (UV) lejano o cercano (4nm a 400nm), o el Infrarrojo
(IR) (0,7 m a 100 m), etc. La absorcin de energa depende de la estructura qumica del compuesto a analizar,
y en especial ciertos grupos funcionales presentes en las molculas, de modo que es posible identificar un
compuesto por medio de las caractersticas de su espectro de absorcin.
3.1. LEY DE BEER-LAMBERT
Esta ley postula que la absorbancia, definida como la medida de la disminucin en la potencia de una fuente
radiante despus de incidir en una sustancia (skoog, 2005), es directamente proporcional su concentracin, la
longitud del paso de luz (espesor de la solucin) y una constante denominada coeficiente de extincin o
coeficiente de absorcin, el cual es caracterstico de cada sustancia a una longitud de onda determinada.
La ecuacin simplificada de esta ley se muestra en la figura 3.
Donde:

l c

A es la Absorbacia de la muestra

l es la longitud atravesada por la luz en un medio (espesor de la solucin)

c es la concentracin de la muestra.
es el coeficiente de extincin o coeficiente de absorcin.
Es caracterstica para cada sustancia a una longitud de onda () determinada.

Figura 3: Ecuacin simplificada de la ley de Beer-Lambert.

Todo mtodo espectrofotomtrico est basado en la comparacin entre la absorbancia de una sustancia de
concentracin desconocida y la de una solucin de la misma sustancia cuya concentracin es conocida,
denominada solucin patrn o estndar.
La absorbancia de una solucin es la resultante de la sumatoria de la absorbancia del soluto cuya concentracin
se desea conocer y la de los otros componentes del sistema (solventes, reactivos) que absorben tambin a esa
longitud de onda. Estos otros compuestos se denominan interferencias, y deben ser descartadas sus
absorbancias. Para ello es necesario hacer siempre una muestra que contenga todos los componentes del
sistema menos aquel que se desea medir; Esta muestra se llama blanco y la absorbancia de ste debe restarse
a las muestras problema y a los patrones, o bien, realizar la calibracin del instrumento con el blanco para
asegurar que su absorbancia sea igual a 0, o sea 100% en el caso de trabajar en trminos de transmitancia.
3.2. EL ESPECTROFOTMETRO
Es un instrumento que permite comparar la radiacin absorbida o transmitida por una solucin que contiene
una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia. Posee
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la capacidad de manejar un haz de radiacin electromagntica (REM), comnmente denominado luz,

separndolo para facilitar la identificacin, calificacin y cuantificacin de su energa. Su eficiencia, resolucin,
sensibilidad y rango espectral, dependern de las variables de diseo y de la seleccin de los componentes
pticos que lo conforman. A continuacin se presentan los componentes generales del equipo.
3.2.1.

FUENTE DE LUZ

Una fuente apropiada para estudios espectrofotomtricos debe generar un haz de radiacin suficientemente
energtico para que su deteccin y medida sean fciles de realizar. Adems, el voltaje de salida debe ser
estable durante periodos de tiempo razonables. Las fuentes espectrofotomtricas son de dos tipos: Fuentes
continuas que emiten radiaciones constantes y Fuentes pulsantes que emiten radiacin interrumpida a modo
de rfagas (Skoog, 2005).
3.2.2.

MONOCROMADOR

Es un dispositivo que contiene una rendija de entrada y una rendija de salida. Esta ltima se utiliza para separar
y aislar el haz de luz en pequeas rangos de longitudes de onda, es decir, asla las radiaciones de longitud de
onda deseada que inciden o se reflejan desde el conjunto total. (Skoog, 2005).
3.2.3. COMPARTIMIENTO DE MUESTRA
Es donde tiene lugar la interaccin de la radiacin electromagntica (REM) con la materia, es decir con la
muestra que se quiere medir. Es importante destacar, que durante este proceso, se aplica la ley de BeerLambert en su mxima expresin, basada en las leyes de absorcin en el cual se presenta el paso de la molcula
de un estado de baja energa (fundamental) a un estado de mayor energa (excitado).
3.2.4. FOTODETECTORES
Son los encargados de recibir la luz que ha sido emitida por la fuente de luz y que ha atravesado la muestra. El
fotodetector convierte la intensidad lumnica en seales elctricas que despus pueden ser amplificadas,
manipuladas y convertidas finalmente en nmeros proporcionales a la magnitud de la cantidad original (Skoog,
2005).
3.3. CURVA DE CALIBRACIN
La curva de calibracin se obtiene midiendo la absorbancia de una serie de soluciones de concentraciones
conocidas (patrones) de una misma sustancia, las cuales son realizadas bajo las mismas condiciones e
instrumento (espectrofotmetro). Para determinar la concentracin de los patrones y las muestras a analizar,
por lo general, se define la longitud de onda de mxima absorcin para la sustancia de inters, denominada
longitud de onda analtica.
El resultado se expresa en una grfica donde la absorbancia (A) est en funcin de la concentracin (C). Si el
sistema sigue la ley de Beer-Lambert se obtiene una lnea recta que pasa cerca del origen; de cuya pendiente
se puede obtener el coeficiente de extincin (). Es posible determinar grficamente la concentracin de una
muestra desconocida (cx) midiendo la absorbancia de la muestra (Ax) e interpolando en la curva de calibracin
como se muestra en la figura 4.

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Figura 4: Interpolacin de una muestra desconocida en una Curva de Calibracin.

Sin embargo, la concentracin se estima con mayor exactitud, a partir de la ecuacin que describe la curva de
calibracin, que es la ecuacin que representa una lnea recta, esto se muestra en la figura 5.
Donde:

Y mx + b

Y es la variable dependiente (Absorbacia de la muestra problema).

m es la pendiente de la recta.

x es la variable controlada (concentracin de la muestra problema).

b es el intercepto.

Figura 5: Ecuacin de la Recta descrita para una curva de calibracin.

4. MTODO DE BIURET
Existen diversos mtodos que permiten cuantificar la concentracin de protena presente en muestras
biolgicas, los cuales estn basados en las propiedades que muestran las protenas en solucin. Entre estos
mtodos se encuentra el mtodo espectrofotomtrico basado en la reaccin con el reactivo de Biuret.
El nombre de la reaccin procede del compuesto coloreado formado por la condensacin de dos molculas de
urea con eliminacin de amonaco, como se muestra en la figura 6.

Figura 6: Reaccin del Biuret.

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El Reactivo del Biuret se prepara con hidrxido de sodio (NaOH), sulfato

del cobre (II) (CuSO4) y tartrato de sodio y de potasio (KNaC4H4O64H2O).
Este mtodo se fundamenta en la formacin de un complejo coloreado
(Prpura Violeta) entre el in cprico (Cu+2) del reactivo y los
Nitrgenos Amdicos de los enlaces peptdicos de las protenas, como se
muestra en la figura 7. Por lo tanto, este reactivo reconoce
especficamente la presencia de enlaces peptdicos.
El ensayo de Biuret se usa usualmente con mtodos colorimtrico, ya que
permite determinar la concentracin de protenas de una muestra
problema mediante la espectroscopia ultravioleta-visible a una longitud
de onda de 540nm (donde se detecta el in Cu2+).
Figura 7: Complejo Prpura

CONSULTA PREVIA
1. Para determinar la concentracin de colgeno en un tejido capilar, se prepararon 4 soluciones a partir
mediante disoluciones realizadas de una solucin patrn de colgeno al 0,05% m/v (0,05g/100ml).
Teniendo en cuenta el siguiente diagrama, calcule la concentracin de cada uno de los patrones de
colgeno en mg/L (ppm). (1,0/5,0)

2. A 1 mL de cada una de las soluciones del punto anterior, se le adicion 1 mL del reactivo de Biuret, pasados
20 minutos se procedi a realizar la determinaron de las medidas de absorbancia en el espectrofotmetro
a 540nm, obtenindose los siguientes resultados.(1,5/5,0)

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Celda
Patrn 1
Patrn 2
Patrn 3
Patrn 4
Patrn 5

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Concentracin *** (ppm)

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Absorbancia
0,967
0,755
0,696
0,589
0,446

***Debe colocar la concentracin de los patrones que hall en el punto anterior.

Realice la regresin lineal de los datos (Concentracin en X y Absorbancia en Y)
Puede observar alguno de los siguientes videos para hacer este procedimiento con su calculadora:
https://www.youtube.com/watch?v=_lOalXduXGE
https://www.youtube.com/watch?v=r_fbbIQ_Xk0
Ahora complete la siguiente tabla:
RESULTADOS DE LA REGRESIN LINEAL
ECUACIN DE LA RECTA
COEFICIENTE DE REGRESIN LINEAL (R2)

3. Siguiendo los parmetros del punto anterior, se determin la absorbancia de una muestra desconocida
piel que contiene colgeno y cuyo valor de absorbancia obtenida fue 0,843. Calcule la concentracin (en
ppm) de la muestra problema, mediante el despeje de la ecuacin de la recta. (1,0/5,0)

4. En una ocasin dos grupos de trabajo realizaron un proceso muy parecido al anterior obteniendo cada uno
un resultado diferente en su coeficiente de regresin. El primer grupo obtuvo un coeficiente igual a 0,977,
mientras que el segundo grupo obtuvo un coeficiente de 0,936.
Acorde con los resultados obtenidos cul de los dos grupos obtuvo un mejor valor en la correlacin en su
proceso, cmo se puede explicar que ese valor sea mejor (0,5/5,0)
_____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
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_____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
RIESGOS Y SEGURIDAD (1,0/5,0)
cido Actico
H226-H314
P280-P301+P330+P331-P305+P351+P338

cido Ctrico (Presente en el buffer pH 8,0)

H390
P305+P351+P338

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Hidrxido de Sodio (Presente en el buffer pH 8,0)

H314-H290
P280-P301+P330+P331-P305+P351+P338

Hidrxido de Potasio (Presente en reactivo de Biuret)

H314-H302-H290
P280-P301+P330+P331-P305+P351+P338

Sulfato de Cobre II (Presente en reactivo de Biuret)

H302-H319-H315-H410
P273-P302+P352-P305+P351+P338

Acetona
H225-H319-H336-EUH066
P210-P233-P305+P351+P338

Frases H
H225:____________________________________________________________________________________
H226:____________________________________________________________________________________
H290:____________________________________________________________________________________
H302:____________________________________________________________________________________
H314:____________________________________________________________________________________
H315:____________________________________________________________________________________
H319:____________________________________________________________________________________
H336:____________________________________________________________________________________
H410:____________________________________________________________________________________
EUH066:__________________________________________________________________________________
Frases P
P210:____________________________________________________________________________________
P233:____________________________________________________________________________________
P273:____________________________________________________________________________________
P280:____________________________________________________________________________________
P302+P352:_______________________________________________________________________________
P301+P330+P331:__________________________________________________________________________
P305+P351+P338:__________________________________________________________________________
METODOLOGA
1. Ingreso de los estudiantes a la prctica (Cada uno debe tener sus elementos de bioseguridad: Guantes,
Tapabocas y Bata).
2. Entrega y revisin de la consulta previa.
3. Presentacin de Quiz sobre los objetivos, introduccin, el marco terico y la consulta previa.
4. Retroalimentacin de consulta previa, la cual incluye aclaracin de las posibles dudas que tengan los
estudiantes.
5. Explicacin del procedimiento de la prctica por parte del docente.
6. Entrega del material de laboratorio.
7. Desarrollo de la prctica.
8. Puesta en comn de los resultados obtenidos, posibles causas de error y conclusiones.
9. Realizacin y entrega del Informe de Laboratorio.
10. Entrega y revisin del material de Laboratorio.
MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS A UTILIZAR
MATERIALES Y EQUIPOS

1
3

REACTIVOS

Beaker de 250 mL
0,5 mL cido Actico 10%
Tubos de centrifuga de 2mL
0,5 mL Acetato de sodio 1M
con tapa (eppendorf)

MATERIALES ESTUDIANTE

Elementos de Bioseguridad
3

Paos absorbentes
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1
6
1
1
1
1
1
7
1
1
4
1
7

Micropipeta de 100-1000uL
Puntas azules
Bao termosttico
Probeta de 25mL
Micro centrfuga
Baln aforado de 25mL
Gradilla
Tubos de Ensayo
Balanza
Termmetro
Pipetas Pasteur
espectrofotmetro
Celdas para
espectrofotmetro

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2 mL Acetona
15 mL Reactivo de Biuret
30 mL Buffer pH 8,0
Patrn casena 1% en
5 mL
Buffer pH 8,0
20 mL Agua Destilada

1
1
1
1
5 mL

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Marcador Sharpie
Calculadora o computador
Regla
Lpiz
*** Leche DESCREMADA y
DESLACTOSADA

Lpices de Colores

*** La muestra de leche debe cumplir con las 2 condiciones a la vez.

PRECAUCIONES Y MANEJO DE MATERIALES Y EQUIPOS. CONSULTA DE EQUIPO ESPECIALIZADO.

Usar elementos de proteccin bata, tapabocas, guantes y gafas como requisitos mnimos de seguridad al
ingresar al laboratorio.
NUNCA escriba ni raye sobre las celdas espectrofotomtricas.
Al manipular la centrifuga, verifique que sta se encuentre bien nivelada, con las muestras distribuidas
uniformemente y tapada antes de iniciar la centrifugacin.
NUNCA corra o juegue en el Laboratorio, puede ocasionar un accidente.
No utilizar la misma pipeta para varios reactivos ya que los contamina.
Dejar el lugar de trabajo limpio, seco y organizado.
Lavar cuidadosamente todo el material al iniciar y al finalizar la prctica.
Al emplear la plancha de calentamiento tenga precaucin de que el cable NO toque superficies calientes.
No coloque sustancias directamente sobre el plato de la balanza, utilice un vidrio de reloj o el material
indicado. Antes de pesar verifique que la balanza est en gramos. No olvide TARAR.
NUNCA cambie de lugar la balanza, esto la descalibra. Al utilizarla verifique primero la toma donde debe
conectarse.
Disponga los residuos en los frascos de correspondientes y NUNCA cuando estn calientes.

PROCEDIMIENTO A UTILIZAR

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PRIMERA SESIN: AISLAMIENTO DE CASENA

3 Tubos Centrifuga
2ml con tapa
Pesar vacos

Adicionar 1,0 mL de leche descremada Y

deslactosada en cada tubo

Pesar
Calentar durante 10
min entre 38 y 40C
Adicionar 300 L de
cido actico 10%

Adicionar 300 L de
acetato de sodio 1M

1
Descartar el
sobrenadante

1
2
3

Descartar el
sobrenadante

Centrifugar a 7000
RPM por 10 min.

2
Lavar casena con 500
L de acetona 2 veces

Centrifugar a 7000
RPM por 5 min.

Dispersar la casena en
Buffer pH 8,0

3
Puede invertir el tubo para retirar el sobrenadante.
Despus de cada lavado siga con la centrifugacin.
Rena la casena de los tres tubos de centrifuga y disprsela en el buffer pH 8,0 y llvela a 25 mL en un baln
aforado, completando el volumen con el buffer.

SEGUNDA SESIN: DETERMINACIN CUANTITATIVA DE CASENA

Tubo 1

Tubo 7

Tubo 2

Tubo 3

Tubo 4

Tubo 5

Tubo 6

2mL Biuret

2mL Biuret

2mL Biuret

2mL Biuret

2mL Biuret

2mL Biuret

2mL Biuret

0,0mL Patrn

1,0mL Patrn

0,8mL Patrn

0,6mL Patrn

0,4mL Patrn

0,2mL Patrn

1mL muestra

1mL Buffer

0,0 mL Buffer

0,2mL Buffer

0,4mL Buffer

0,6mL Buffer

0,8mL Buffer

0,0 mL Buffer

BLANCO

MUESTRA

Agitar
Dejar en Reposo 20 min.
Llenar Celdas

Espectrofotmetro

Medir y Ajustar BLANCO

Leer Absorbancia a 540nm

1
2
3
4

3
4

Dejar hasta formacin de complejo coloreado.

Pasar el contenido de cada tubo a una celda. NO CONFUNDA las celdas. Ni las marque.
El BLANCO es el TUBO 1, en l estn todos los componentes menos la solucin patrn (Sln de casena al 1%).
Leer TODOS los patrones y la MUESTRA PROBLEMA (tubo 7).

BIBLIOGRAFA.

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Agrobit. (2012). Composicin de la Leche y Valor Nutritivo. Recuperado el 28/01/2013 de:

http://www.agrobit.com/Info_tecnica/Ganaderia/prod_lechera/GA000002pr.htm
Bohinski, R. C. (1991). Bioqumica. Quinta Edicin. Pearson Educacin.
Murray, R. M., Mayes, P., Granner, D., Rodwell, V. Bioqumica ilustrada Harper (14 Edicin ed.). Mxico: Manual
Moderno. (2005).
Skoog, West, Holler, Crouch. Fundamentos de Qumica Analtica. 8 Edicin. Editorial Thomson, Mxico. (2005)
Universidad Autnoma de Madrid. Coloides. (2009)
Recuperado el 25 de enero de 2013 de: http://www.uam.es/personal_pdi/ciencias/evelasco/Coloides.pdf
Veloso, A., Teixeira, N. & Ferreira, I. Separation and quantification of the major casein fractions by reverse-phase
high-performance liquid chromatography and ureapolyacrylamide gel electrophoresis: Detection of milk
adulterations. Journal of Chromatography A, 967, 209218. (2002)
recuperado de http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0021967302007872
ELABOR

Firma:
Nombre: Profesores de Laboratorio de
Qumica y Bioqumica
Fecha: Julio de 2015

REVIS

APROB

Firma:
Firma:
Nombre: Lic. Csar Andrs Gutirrez Nombre: Ing. Claudia
Zapata.
Fernndez
Fecha: Julio de 2015
Fecha: Julio de 2015

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Patricia

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INFORME DE LABORATORIO
ESTUDIANTES:

GRUPO:

NOTA:

CARRERA:
Formule tres objetivos que desee cumplir con la Prctica de Laboratorio (0,5/5,0).
1. ______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________

2. ______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________

3. ______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________

Mapa conceptual (0,5/5,0)

Elabore un mapa conceptual sobre esta prctica de laboratorio.

PRIMERA SESIN
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TABLA DE RESULTADOS (0,6/5,0)

MASA (g)

MASA DE TUBO CENTRIFUGA VACO

MASA DE TUBO CENTRIFUGA LLENO DE LECHE
MASA DE LA LECHE

CUESTIONARIO
1. Para qu emplea el concepto de punto isoelctrico en esta prctica? Explique su respuesta (0,85/5,0)
_____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________

2. Por qu se emplea leche descremada para la extraccin de casena? Explique su respuesta (0,85/5,0)
______________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________

3. Por qu la casena se dispersa en un buffer de pH bsico? Explique su respuesta (0,85/5,0)

______________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________

4. Qu sucede si la muestra dispersa en buffer pH 8,0 no se refrigera? Explique su respuesta (0,85/5,0)

_____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
SEGUNDA SESIN
TABLA DE RESULTADOS (0,8/5,0)

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TUBO

PATRN (mL)

BUFFER pH 8,0 (mL)

BIURET (mL)

1
2
3
4
5
6
Muestra

0,0
1,0
0,8
0,6
0,4
0,2
1,0

1,0
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
0,0

2,0
2,0
2,0
2,0
2,0
2,0
2,0

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CONCENTRACIN DE
PROTENA (g/mL)

ABSORBANCIA

0,0

0,000

RESULTADOS DE LA REGRESIN LINEAL

ECUACIN DE LA RECTA
COEFICIENTE DE REGRESIN (R2)
CONCENTRACIN DE LA MUESTRA

CUESTIONARIO
1. Calcular la concentracin en g/mL de las diluciones realizadas a la solucin estndar de casena en cada
tubo patrn (0,7/5,0).
Tenga en cuenta que la solucin estndar de casena est al 1%, (es decir 1g/100mL),
a. Concentracin en g/mL de la solucin estndar. Este es el Patrn en el tubo 2.

b. Concentracin en g/mL de la solucin patrn en cada tubo. Puede utilizar la siguiente ecuacin.

C1 V1 C2 V2
PATRN EN EL TUBO 3

PATRN EN EL TUBO 4

PATRN EN EL TUBO 5

PATRN EN EL TUBO 6

2. Con los datos obtenidos, construir sobre papel milimetrado una grfica de Absorbancia vs. Concentracin.
La grfica debe incluir: (0,7/5,0)
a. Tabla con los datos de las concentraciones y las absorbancias.
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b. Ttulo de la grfica.
c. La concentracin aproximada de la muestra problema interpolando el dato de la absorbancia.
3. Determine la concentracin de la Muestra Problema empleando la ecuacin de la recta (0,5/5,0).
Donde:

Y mx + b

Y es la variable dependiente (Absorbacia de la muestra problema).

m es la pendiente de la recta.

x es la variable controlada (concentracin de la muestra problema).

b es el intercepto.

4. Analizando el valor del coeficiente de regresin lineal (R2), establezcan si deben o no descartar algn punto
de la curva de calibracin. Justifiquen la razn que tienen para hacerlo o para no hacerlo. En caso de
descarte de datos mencionen qu punto fue. (0,5/5,0)
______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________

5. Calcule el valor de casena presente en la muestra de leche analizada en g casena/Kg de Leche (0,5/5,0).

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CAUSAS DE ERROR Y ACCIONES PARA OBTENER MEJORES RESULTADOS: (0,3/5,0)

Explique una posible causa de error en la cantidad de casena obtenida experimentalmente para la muestra de
leche y lo reportado en la literatura.
Causa 1:___________________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________

CONCLUSIONES (0,5/5,0)
1.

______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________

2.

______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________

3.

______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________

APLICACIN PROFESIONAL DE LA PRCTICA REALIZADA (0,25/5,0)

__________________________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________

BIBLIOGRAFA UTILIZADA (0,25/5,0)

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