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Gua del Sistema biolgico

ACQUITY UPLC H-Class


Revisin A

Copyright Waters Corporation 2010


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2010 WATERS CORPORATION. IMPRESO EN LOS ESTADOS UNIDOS
DE AMRICA Y EN IRLANDA. RESERVADOS TODOS LOS DERECHOS.
QUEDA TERMINANTEMENTE PROHIBIDA LA REPRODUCCIN TOTAL
O PARCIAL DE ESTE DOCUMENTO POR PROCEDIMIENTO ALGUNO
SIN EL CONSENTIMIENTO EXPRESO DEL EDITOR.
La informacin que aparece en este documento est sujeta a modificaciones
sin previo aviso y no debe interpretarse como un compromiso contractual por
parte de Waters Corporation. Waters Corporation no asume responsabilidad
alguna por ningn error que pudiera aparecer en este documento. En el
momento de su publicacin, se considera que este manual es exacto y est
completo. Waters Corporation no ser en ningn caso responsable de los daos
accidentales o indirectos relacionados con el uso de este documento o
derivados de ste.

Marcas comerciales
ACQUITY, ACQUITY UPLC, UPLC y Waters son marcas registradas de
Waters Corporation. AutoBlend Plus, eCord, Empower, i2Valve, LAC/E,
MassLynx y THE SCIENCE OF WHATS POSSIBLE. son marcas
comerciales de Waters Corporation.
MP35N es una marca registrada de Hamilton Precision Metals.
PEEK es una marca comercial de Victrex Corporation.
TRITON es una marca comercial de Union Carbide Corporation.
TWEEN es una marca comercial de ICI Americas, Inc.
Otras marcas registradas o comerciales pertenecen exclusivamente a sus
respectivos propietarios.

ii

Comentarios del cliente


El departamento de Comunicaciones del Servicio Tcnico de Waters agradece
la comunicacin de cualquier error que se detecte en este documento, as como
las sugerencias para mejorarlo. Su ayuda para conocer mejor lo que se espera
encontrar en la documentacin nos permite mejorar de manera continua su
exactitud y utilidad.
Tenemos muy en cuenta los comentarios enviados por nuestros clientes. Para
ponerse en contacto con nosotros, enviar un mensaje a
tech_comm@waters.com.

Contacto con Waters


Contactar con Waters para presentar solicitudes de mejora o preguntas
tcnicas relativas al uso, el transporte, la retirada o la eliminacin de
cualquier producto de Waters. El contacto puede hacerse a travs de Internet,
telfono o correo convencional.
Informacin de contacto de Waters:
Medio de contacto

Informacin

Internet

El sitio web de Waters incluye informacin de


contacto de las filiales internacionales de
Waters. Visitar www.waters.com.

Telfono y fax

Desde EE. UU. o Canad, llamar al 800


252-HPLC o enviar un fax al 508 8721990.
Desde otros pases, consultar los nmeros de
telfono y fax de las filiales internacionales en
el sitio web de Waters.

Correo convencional

Waters Corporation
34 Maple Street
Milford, MA 01757
EE.UU.

iii

Consideraciones de seguridad
Algunos de los reactivos y las muestras que se utilizan con los instrumentos y
dispositivos de Waters pueden suponer un peligro radiolgico, biolgico o
qumico. Se deben conocer los efectos potencialmente peligrosos de todas las
sustancias con las que se trabaja. Hay que seguir siempre las buenas prcticas
de laboratorio y consultar las recomendaciones del responsable de seguridad
de la organizacin.

Consideraciones especficas para el Sistema biolgico ACQUITY


UPLC H-Class
Peligro de alto voltaje
Advertencia:
Para evitar descargas elctricas, se recomienda no retirar los paneles
protectores del espectrmetro de masas. Estos paneles no cubren
ningn componente que el usuario deba manipular.
Para evitar una descarga elctrica no mortal cuando el instrumento
se encuentra en modo Operate (Funcionamiento), no tocar las reas
marcadas con el smbolo de advertencia de alto voltaje. Para tocar
dichas reas hay que pasar antes al modo Standby (En espera) del
instrumento.

Consejos de seguridad
Consultar el Apndice A para ver una lista completa de advertencias y
precauciones.

iv

Funcionamiento de este Sistema biolgico ACQUITY


UPLC H-Class

Al utilizar este Sistema biolgico ACQUITY UPLC H-Class, se deben seguir


los procedimientos de control de calidad (QC) estndar y las directrices que se
indican en esta seccin.

Smbolos aplicables
Smbolo

Definicin
Fabricante
Representante autorizado en la Comunidad
Europea
Garantiza que un producto fabricado cumple con
todas las directivas aplicables de la Comunidad
Europea.
Marca C de cumplimiento de CEM de Australia.
Confirma que un producto fabricado cumple con
todos los requisitos de seguridad estadounidenses
y canadienses.
Consultar las instrucciones de uso.

Destinatarios y finalidad
La presente gua est dirigida al personal encargado de la instalacin,
funcionamiento y mantenimiento de los instrumentos del Sistema biolgico
ACQUITY UPLC H-Class. Ofrece una descripcin general de la tecnologa y el
funcionamiento del sistema.

Uso previsto del Sistema biolgico ACQUITY UPLC H-Class


El Sistema biolgico ACQUITY UPLC H-Class de Waters es para uso
exclusivo en investigacin y no est concebido para utilizarse en aplicaciones
de diagnstico.

Calibracin
Para calibrar los sistemas de cromatografa lquida (LC), se deben seguir
mtodos de calibracin adecuados y utilizar por lo menos cinco estndares
para generar una curva estndar. El intervalo de concentraciones de los
estndares debe incluir la gama completa de muestras de control de calidad,
muestras habituales y muestras atpicas.
Para calibrar los espectrmetros de masas, se debe consultar la seccin de
calibracin de la gua de funcionamiento del instrumento que se desea
calibrar. En los casos en los que el mdulo no vaya acompaado de una gua de
funcionamiento, sino de una gua de mantenimiento y descripcin general,
consultar las instrucciones de calibracin en la Ayuda en lnea del mdulo.

Control de calidad
Se recomienda analizar de forma sistemtica tres muestras de QC que
representen los niveles por debajo de lo normal, normal y por encima de lo
normal de un compuesto. Los resultados del anlisis de estas muestras deben
encontrarse dentro de unos lmites aceptables y se debe evaluar la precisin
entre un da y otro, y entre un anlisis y otro. Es posible que los datos
obtenidos cuando las muestras de QC estn fuera de los lmites no sean
vlidos. Dichos datos no se deben incluir en un informe hasta asegurarse de
que el instrumento funciona satisfactoriamente.

Clasificacin ISM
Clasificacin ISM: ISM Grupo 1, Clase B
Esta clasificacin se asigna segn la CISPR 11, que contiene los requisitos de
los instrumentos industriales cientficos y mdicos (ISM). Los productos del
Grupo 1 contienen energa de radiofrecuencia acoplada conductivamente,
generada o utilizada de forma intencionada, necesaria para el funcionamiento
interno del propio equipo. Los productos de Clase B se pueden utilizar tanto
en instalaciones comerciales como residenciales, y se pueden conectar
directamente a la red de suministro elctrico de bajo voltaje.
vi

Representante autorizado en la CE

Waters Corporation (Micromass UK Ltd.)


Floats Road
Wythenshawe
Manchester M23 9LZ
Reino Unido
Telfono:

+44-161-946-2400

Fax:

+44-161-946-2480

Contacto:

Gerente de calidad

vii

viii

Contenido
Informacin sobre los derechos de autor (copyright) .................................. ii
Marcas comerciales .............................................................................................. ii
Comentarios del cliente ...................................................................................... iii
Contacto con Waters ........................................................................................... iii
Consideraciones de seguridad .......................................................................... iv
Consideraciones especficas para el Sistema biolgico
ACQUITY UPLC H-Class ............................................................................ iv
Consejos de seguridad ........................................................................................ iv
Funcionamiento de este Sistema biolgico ACQUITY UPLC H-Class ...... v
Smbolos aplicables .............................................................................................. v
Destinatarios y finalidad ..................................................................................... v
Uso previsto del Sistema biolgico ACQUITY UPLC H-Class ......................... vi
Calibracin .......................................................................................................... vi
Control de calidad ............................................................................................... vi
Clasificacin ISM ................................................................................................. vi
Clasificacin ISM: ISM Grupo 1, Clase B.......................................................... vi
Representante autorizado en la CE ................................................................ vii

1 Sistema biolgico ACQUITY UPLC H-Class ..................................... 1-1


Cromatografa lquida UltraPerformance .................................................. 1-1
Caractersticas del Sistema biolgico ACQUITY UPLC H-Class ...........
Inyector de flujo a travs de aguja ..................................................................
Eluyente de lavado...........................................................................................
Eluyente de purga............................................................................................
Acondicionamiento del eluyente activo...........................................................
Mejoras de software .........................................................................................

Contenido

1-3
1-5
1-5
1-6
1-6
1-6

ix

Componentes del sistema ................................................................................ 1-9


Tecnologa de la columna .............................................................................. 1-11
Para obtener ms informacin ...................................................................... 1-12

2 Optimizar el funcionamiento .............................................................. 2-1


Directrices generales ....................................................................................... 2-1
Calculadora de columnas ACQUITY UPLC ................................................ 2-4
Dispersin ........................................................................................................... 2-5
Arrastre ............................................................................................................... 2-5
Precisin y exactitud ....................................................................................... 2-6
Tiempo de los ciclos (entre inyecciones) ..................................................... 2-6
Evitar fugas ........................................................................................................ 2-7
Preparacin de las muestras .......................................................................... 2-7
Partculas ......................................................................................................... 2-7
Diluyentes de muestras compatibles .............................................................. 2-7

3 Preparar el sistema ............................................................................... 3-1


Preparar el hardware del sistema ................................................................
Encender el sistema.........................................................................................
Supervisin de las pruebas iniciales...............................................................
Supervisar los indicadores LED de los mdulos del sistema.........................
Indicador LED de encendido ...........................................................................
Indicadores LED de estado..............................................................................
Activar los sensores de fugas ..........................................................................
Puesta en marcha del sistema ........................................................................

3-1
3-1
3-2
3-2
3-2
3-3
3-4
3-5

Configurar el software de datos cromatogrficos ..................................... 3-8


Paneles de control ACQUITY ......................................................................... 3-8
Panel de control del bioQSM ........................................................................... 3-8
Panel de control del bioSM-FTN ................................................................... 3-11
Panel de control del Detector de absorbancia programable (UV variable). 3-13
Puesta en marcha de la Consola ACQUITY UPLC .................................. 3-15
x

Contenido

A Consejos de seguridad ......................................................................... A-1


Smbolos de advertencia ................................................................................. A-2
Advertencias de peligro asociadas con tareas especficas.............................. A-2
Advertencias especficas .................................................................................. A-3
Smbolo de precaucin .................................................................................... A-6
Advertencias que se aplican a todos los instrumentos de Waters ......... A-6
Smbolos elctricos y de manejo .................................................................... A-7
Smbolos elctricos ........................................................................................... A-7
Smbolos de manejo ......................................................................................... A-8

B Conexiones externas ............................................................................ B-1


Conexiones de los tubos del sistema ........................................................... B-1
Conexiones de los cables externos del instrumento ................................
Conexiones de los cables externos del instrumento del Sistema biolgico
ACQUITY UPLC H-Class .........................................................................
Conexiones Ethernet .......................................................................................
Conexiones del horno de columnas .................................................................

B-3
B-3
B-4
B-4

Conexiones de la trayectoria del flujo para los compartimentos


de columnas ................................................................................................ B-5
Conexiones de seales .................................................................................... B-7
Realizar las conexiones de seales.................................................................. B-7
Conectar a la fuente de alimentacin ....................................................... B-12

C Consideraciones generales sobre los eluyentes ............................ C-1


Introduccin ......................................................................................................
Prevenir la contaminacin...............................................................................
Eluyentes limpios.............................................................................................
Calidad de los eluyentes ..................................................................................
Preparacin de los eluyentes...........................................................................
Agua..................................................................................................................

Contenido

C-2
C-2
C-2
C-2
C-2
C-2

xi

Recomendaciones sobre los eluyentes ........................................................


Directrices generales sobre los eluyentes .......................................................
Eluyentes no permitidos..................................................................................
Recomendaciones para el Sistema biolgico ACQUITY UPLC H-Class.......
Recomendaciones para el bioQSM ..................................................................
Recomendaciones para el bioSM-FTN ............................................................
Recomendaciones sobre el detector .................................................................

C-3
C-4
C-6
C-7
C-8
C-8
C-9

Propiedades comunes de los eluyentes ...................................................... C-9


Miscibilidad de los eluyentes ...................................................................... C-11
Utilizacin de los valores de miscibilidad (nmeros-M) .............................. C-12
Estabilizadores de eluyentes ....................................................................... C-13
Viscosidad de los eluyentes ......................................................................... C-13
Seleccin de la longitud de onda ................................................................
Valores de corte de UV para eluyentes comunes .........................................
Fases mviles mezcladas ...............................................................................
Absorbancia de la fase mvil .........................................................................

C-14
C-14
C-14
C-15

Index ..................................................................................................... Index-1

xii

Contenido

Sistema biolgico ACQUITY


UPLC H-Class
Contenido:
Tema

Pgina

Cromatografa lquida UltraPerformance

1-1

Caractersticas del Sistema biolgico ACQUITY UPLC H-Class 1-3


Componentes del sistema

1-9

Cromatografa lquida UltraPerformance


En 2004, Waters realiz avances significativos en el diseo de instrumentos y

columnas con el fin de introducir la tecnologa UPLC en el campo de la


ciencia de separaciones. Gracias al uso de esta tecnologa, los Sistemas

ACQUITY UPLC de Waters logran aumentar notablemente la resolucin, la


velocidad y la sensibilidad en aplicaciones de cromatografa lquida, en
comparacin con los sistemas convencionales.
La cromatografa lquida UltraPerformance emplea columnas con rellenos de
partculas redondeadas de 1.7 m de dimetro y presiones de funcionamiento
mximas de 103 421 kPa (1 034 bar, 15 000 psi). La ecuacin de van Deemter,
una frmula emprica que describe la relacin entre la velocidad lineal y la
eficacia de la columna, considera el tamao de las partculas como una de las
variables. As, la ecuacin se puede utilizar para caracterizar el rendimiento
terico a lo largo de un rango de tamaos de partcula.

Cromatografa lquida UltraPerformance

1-1

Historia del tamao de las partculas en la cromatografa lquida:

Tecnologa HPLC existente


H
E
T
P
[m]

Intervalo de funcionamiento
de la tecnologa UPLC

30

Mejor combinacin de eficacia


y velocidad

26
22

Partculas de 10 m
(1970)

18
14

Partculas de 5 m
(1980)

10

Partculas de 2.5 m
(2000)

Partculas de 1.7 m
(2004)

Velocidad lineal [U, mm/s]

Resulta evidente, a partir de la figura anterior, que la utilizacin de partculas


de 1.7 m proporciona una mayor eficacia que conduce a incrementos de
caudal (un HEPT menor indica una mayor eficacia). Cuando se trabaja en este
rea del grfico, la capacidad del pico y la velocidad de una separacin puede
establecer lmites por encima de los de la tecnologa HPLC convencional.
Waters ha definido este nuevo nivel de rendimiento como cromatografa
UltraPerformance.

1-2

Sistema biolgico ACQUITY UPLC H-Class

Comparacin de separaciones cromatogrficas utilizando partculas de


5.0 m y 1.7 m:
0.050

1.7 m, columna UPLC

0.040

AU

0.030
0.020
0.010
0.000
0

0.050

6 min

5 m, columna UPLC

0.040

AU

0.030
0.020
0.010
0.000
0

2,8

10

12

14

15 min

Cada separacin se llev a cabo con una columna de 2.1 50 mm. Las
condiciones cromatogrficas de las separaciones son idnticas, a excepcin del
caudal, que ha sido escalado en funcin del tamao de las partculas.

Caractersticas del Sistema biolgico ACQUITY UPLC


H-Class
El Sistema biolgico ACQUITY UPLC H-Class se dise para las
investigaciones biolgicas y biofarmacuticas. Est optimizado para el anlisis
de pptidos, protenas, oligonucletidos y carbohidratos. El sistema central
incluye el Sistema biolgico de gestin de muestras de flujo a travs de aguja
(bioSM-FTN) y el Sistema biolgico de gestin de eluyentes cuaternario
(bioQSM). La funcin AutoBlend Plus del software proporciona capacidades
mejoradas para el desarrollo de mtodos.

Caractersticas del Sistema biolgico ACQUITY UPLC H-Class

1-3

La trayectoria humectada del sistema contiene nicamente materiales


biocompatibles que

No interactan significativamente ni adsorben o modifican a las


biomolculas como las protenas.

No filtran iones en los eluyentes cromatogrficos recomendados


(consultar el Apndice C).

No son atacados ni daados significativamente por las fases mviles que


se describen en el Apndice C, incluidas las siguientes:

Fases mviles cidas que contienen haluros, como HCl (6 mM) y


NaCl (hasta 1 M) en tampn fosfato (de 20 a 100 mM).

Tampn fosfato a pH entre 2 y 12 en presencia de NaCl 1M.

Los materiales de la trayectoria humectada son principalmente aleaciones de


titanio y la aleacin MP35N, que es una aleacin de
nquel-cobalto-cromo-molibdeno no magntica.
El sistema admite varios tipos de mdulos de compartimento de columnas. El
Horno de precalentamiento activo de todos los mdulos de compartimento de
columnas tiene superficies humectadas hechas de materiales biocompatibles.
Los mdulos de compartimento de columnas pueden ser: un horno de
columnas con un horno de precalentamiento activo; un compartimento de
columnas con un horno de precalentamiento activo y capacidades de cambio de
columnas; un compartimento de columnas auxiliar con un horno de
precalentamiento activo; un termostatizador para columnas de 30 cm; o un
horno de columnas de 30 cm con un horno de precalentamiento activo.
El Sistema biolgico ACQUITY UPLC H-Class combina la velocidad y el
rendimiento de la UPLC con la capacidad de las separaciones HPLC.
Esta combinacin proporciona muchas ventajas, entre las que se incluyen:

1-4

Cromatografa de partculas pequeas y alta presin que permite


realizar anlisis ms rpidamente y con mayor resolucin que con la
HPLC tradicional.

Consumo reducido de eluyente (significativamente menos que la HPLC


tradicional)

Flexibilidad en la mezcla de eluyentes con un bioQSM

Un bioSM-FTN que facilita la transferencia de mtodos de HPLC a UPLC.

Mejoras en el diseo del bioQSM y el bioSM-FTN para minimizar la


dispersin y reducir la duracin de los ciclos

Sistema biolgico ACQUITY UPLC H-Class

Inyector de flujo a travs de aguja


El bioSM-FTN del Sistema biolgico ACQUITY UPLC H-Class utiliza un
mecanismo de flujo a travs de aguja totalmente diferente de los inyectores
basados en bucles que se utilizan en el Sistema ACQUITY UPLC. El
mecanismo de flujo a travs de aguja aspira una muestra y la retiene en la
aguja de muestras para preparar la inyeccin de la muestra en la columna. La
aguja forma parte de la trayectoria del flujo de inyeccin cuando se inyecta la
muestra en la columna.
Gracias al mecanismo de flujo a travs de aguja, el sistema funciona de
manera similar a la mayora de los sistemas HPLC tradicionales, lo que
facilita la transferencia de mtodos HPLC. El mecanismo de flujo a travs de
aguja tampoco requiere el aprendizaje de nuevos modos de inyeccin. Adems,
mejora la exactitud de la inyeccin y reduce la duracin del ciclo para
inyecciones de volmenes pequeos. Los gradientes pasan a travs de la aguja
durante el proceso de inyeccin, con lo que se garantiza una completa
recuperacin de la muestra.

Eluyente de lavado
El sistema de lavado utiliza un solo eluyente para limpiar la parte exterior de
la aguja de muestras y cebar el sistema de lavado. El eluyente no entra en la
trayectoria del flujo de inyeccin.
Precaucin:
No dejar las soluciones tampn almacenadas en el sistema.
Lavar todas las trayectorias del flujo, incluido el lavado de la aguja,
con una cantidad suficiente de eluyente no tamponado antes de
apagar el sistema.
Si el sistema va a apagarse durante un periodo prolongado (de ms de
24 horas), utilizar metanol al 10% - 20% en agua.
Si se utiliza un eluyente de lavado tamponado, cebarlo durante
30 segundos como mnimo.
El uso de soluciones tampn puede ocasionar la acumulacin de sales
en la aguja y el puerto de lavado, y hacer necesaria una limpieza
peridica.
Restriccin: evitar el uso de eluyentes de lavado tamponados.

Caractersticas del Sistema biolgico ACQUITY UPLC H-Class

1-5

Eluyente de purga
La funcin principal del eluyente de purga es transportar la muestra a lo largo
de la trayectoria de inyeccin. El eluyente de purga ceba tambin la jeringa de
muestras y la trayectoria de inyeccin. La inyeccin de eluyente en la columna
solo se produce durante la dilucin automtica, cuando se utiliza como
eluyente de dilucin.

Acondicionamiento del eluyente activo


Las aplicaciones HPLC y UPLC se benefician de un calentamiento adicional
de la precolumna y la fase mvil con el fin de mejorar las separaciones
cromatogrficas. El Horno de columnas biolgico ACQUITY UPLC H-Class
utiliza un Horno de precalentamiento activo para acondicionar el eluyente a
medida que entra en la columna. El Horno de precalentamiento activo
aumenta la temperatura de la fase mvil entrante (y de la muestra inyectada)
hasta la temperatura programada del compartimento de columnas.
Indicacin: el precalentamiento activo es la configuracin predeterminada del
Sistema biolgico ACQUITY UPLC H-Class.

Mejoras de software
AutoBlend Plus
AutoBlend Plus permite crear gradientes basados en el pH o en la
concentracin de sales de los eluyentes. Los eluyentes que se utilizan con
AutoBlend Plus se instalan habitualmente en las botellas de eluyente de la
siguientes forma:

El eluyente A es cido.

El eluyente B es bsico.

El eluyente C es un tampn salino.

El eluyente D es acuoso. Si el bioQSM dispone de una vlvula de


seleccin de eluyentes opcional, es posible seleccionar uno de seis
eluyentes (D1 a D6).

Se especifica (o se selecciona de un catlogo) un valor de pKa o una curva de


calibracin de pH, que se utilizan para calcular el pH. El catlogo editable
incluye soluciones de pH conocido, soluciones salinas, valores de pKa y curvas
de calibracin de pH.

1-6

Sistema biolgico ACQUITY UPLC H-Class

El cociente pH/sales de cada inyeccin se mantiene constante. Se especifica la


concentracin de pH, la curva de pH, la concentracin de sales, la curva de
sales, el caudal y uno de los siguientes parmetros para los segmentos del
gradiente:

Time (Tiempo)

Column volume (Volumen de la columna)

Total volume (Volumen total)

Quantum Synchronization (Sincronizacin cuntica)


La introduccin de una muestra de baja presin en el caudal de fluido de alta
presin durante una inyeccin ocasiona un pulso de presin que puede afectar
a los resultados cromatogrficos. La funcin Quantum Synchronization
(Sincronizacin cuntica) reduce el impacto de este pulso de presin. El
bioSM-FTN y el bioQSM se comunican para coordinar de manera automtica
la secuencia de inyeccin, permitiendo as que el bioQSM proporcione ms
presin en el momento exacto en que el bioSM-FTN cambia la posicin de la
vlvula de inyeccin a Inject (Inyeccin) para introducir la muestra a baja
presin.

Gradient Smart Start (Inicio inteligente de gradiente)


Antes de cada inyeccin de muestra, el bioSM-FTN normalmente ejecuta
secuencias de lavado y aspira el volumen de muestra adecuado. Cuando se
finalizan estas tareas, el bioQSM inicia la distribucin de gradiente hacia la
vlvula de inyeccin. El volumen de permanencia del sistema afecta a la
cantidad de tiempo que el gradiente tarda en llegar hasta la columna y puede
ser un componente significativo del tiempo de ciclos total.
La funcin Gradient Smart Start (Inicio inteligente de gradiente) coordina las
operaciones previas a la inyeccin y reduce el efecto del volumen de residencia
del bioQSM sobre la duracin de los ciclos. El gradiente se inicia antes o
durante las tareas previas a la inyeccin del bioSM-FTN, lo que permite un
ahorro de tiempo considerable.

Wash Plungers (Lavar mbolos)


El material precipitado que permanece en los mbolos de la bomba del
bioQSM puede ocasionar daos en las juntas de alta presin. La funcin Wash
Plungers (Lavar mbolos) lava las juntas con eluyente para eliminar cualquier
precipitado. Se puede utilizar la funcin Wash Plungers (Lavar mbolos)

Caractersticas del Sistema biolgico ACQUITY UPLC H-Class

1-7

segn sea necesario o bien utilizarla como parte de la funcin No-Flow


Shutdown (Apagado sin flujo).

No-Flow Shutdown (Apagado sin flujo)


La funcin No-Flow Shutdown (Apagado sin flujo) ejecuta la funcin Wash
Plungers (Lavar mbolos) despus de que el bioQSM haya permanecido
inactivo durante un intervalo de tiempo especificado. Esta funcin evita que se
depositen precipitados en los mbolos del bioQSM mientras el sistema est
inactivo.

Automatic Prime (Cebado automtico)


Cuando se habilita esta funcin del bioQSM, el sistema ceba los tubos cada vez
que se selecciona un eluyente nuevo.
Ejemplo: si una primera inyeccin utiliza el conducto D1 y una segunda
inyeccin utiliza el conducto D2, el sistema de gestin de eluyentes ceba el
conducto D2 entre la primera y la segunda inyeccin.

Elevacin del flujo


Esta funcin permite especificar la velocidad a la que el bioQSM incrementa o
disminuye el flujo.

1-8

Sistema biolgico ACQUITY UPLC H-Class

Componentes del sistema


Mdulos del instrumento:
FRONTAL

POSTERIOR

Bandeja de botellas
Detector

Horno de columnas
bioSM-FTN

bioQSM

El Sistema biolgico ACQUITY UPLC H-Class puede incluir un bioQSM


equipado con una vlvula de seleccin de eluyentes opcional de 6 puertos, un
bioSM-FTN, un mdulo de compartimento de columnas, detectores (de UV
variable, red de fotodiodos o espectrmetro de masas) y una columna
ACQUITY UPLC. Todos los materiales que entran en contacto con la muestra
son biocompatibles.
El software para cromatografa Empower o el software para espectrometra
de masas MassLynx de Waters controlan el Sistema biolgico ACQUITY
UPLC H-Class.
Componentes del sistema

1-9

bioQSM
El bioQSM es una bomba de alta presin con mezclador a baja presin. El
Sistema de gestin de eluyentes cuaternario suministra un flujo constante (sin
pulsos) de eluyente a caudales analticos mximos de 1 mL/min a 103 421 kPa
(1 034 bar, 15 000 psi) y hasta 2 mL/min a presiones reducidas mximas de
62 053 kPa (621 bar, 9 000 psi). El bioQSM puede bombear cuatro eluyentes
desgasificados simultneamente mediante una vlvula generadora de
gradientes (GPV) para crear de forma dinmica la composicin especificada.

bioSM-FTN
El bioSM-FTN utiliza un mecanismo de inyeccin directa para inyectar
muestras extradas de placas y viales en una columna cromatogrfica. Los
bucles de extensin opcionales (que se instalan entre la aguja de muestras y la
vlvula de inyeccin) aumentan el volumen de las inyecciones ms all de la
capacidad de la aguja de muestras. El bioSM-FTN tambin puede diluir las
muestras con la opcin Auto-dilution (Dilucin automtica).

Horno de columnas
Las variaciones en la temperatura de la columna pueden cambiar los tiempos
de retencin de los picos y modificar la forma de los picos, con lo que se
incrementa la dificultad a la hora de lograr resultados precisos. Los
compartimentos de columnas ayudan a la hora de garantizar separaciones
precisas y reproducibles mediante el control de la temperatura de la columna.
El compartimento de columnas se calienta a cualquier temperatura entre
20 C (o al menos 5 C por encima de la temperatura ambiente) y 90 C. Un
dispositivo de precalentamiento activo calienta el eluyente entrante antes de
que llegue a la columna. El horno de columnas admite columnas hasta 4 6 mm
de dimetro interno y hasta 150 mm de longitud.
Indicacin: el precalentamiento activo es la configuracin predeterminada del
Sistema biolgico ACQUITY UPLC H-Class.

Controlador de la consola local (opcional)


El controlador de la Consola local ACQUITY UPLC (LCC) complementa el
software del sistema de datos cromatogrficos (CDS), lo que permite controlar
los sistemas localmente. La funcionalidad mnima del LCC, diseado para que
simule un teclado sencillo, le impide funcionar como un controlador
independiente. Su instalacin en un sistema no sustituye al control del CDS.

1-10

Sistema biolgico ACQUITY UPLC H-Class

Waters ha diseado el LCC para preparar los mdulos del sistema para el
funcionamiento, definir las condiciones iniciales y realizar pruebas
diagnsticas del sistema. Estas funciones bsicas se llevan a cabo
rpidamente, incluso cuando un sistema est fsicamente alejado de la
estacin de trabajo de adquisicin y control del software, o del mdulo
LAC/E32, o cuando el control en red no est disponible.

FlexCart
El elemento opcional FlexCart proporciona una plataforma mvil al Sistema
biolgico ACQUITY UPLC H-Class. Puede contener los mdulos del sistema,
as como el PC y el monitor, y proporciona salidas elctricas para los mdulos
del sistema y una gestin de desechos integrada. Cuando se utiliza con un
espectrmetro de masas, la altura ajustable del carro permite colocar la salida
de la columna cerca de la sonda de entrada, con lo que se minimiza el volumen
muerto del sistema.

Tecnologa de la columna
Las columnas ACQUITY UPLC se rellenan de partculas hbridas de alta
resistencia con puente de etilsiloxano de 1.7 m o partculas de slice de alta
resistencia de 1.8 m que pueden soportar mecnicamente condiciones de alta
presin. El hardware de la columna y los tubos de salida correspondientes
pueden soportar hasta 103 421 kPa (1 034 bar, 15 000 psi). Las dimensiones
de la columna permiten caudales ptimos compatibles con MS y los tubos de
salida correspondientes minimizan el efecto del volumen extra-columna.
Aunque el sistema trabaja con cualquier columna para anlisis HPLC, las
especialmente diseadas para ACQUITY UPLC maximizan su capacidad a
alta presin. Si se comparan con las columnas de HPLC tradicionales, las
columnas ACQUITY UPLC proporcionan una resolucin y una sensibilidad
mayores en el mismo tiempo de anlisis o una resolucin equivalente y una
sensibilidad mayor en tiempos de anlisis menores.

Tecnologa eCord
Las columnas ACQUITY UPLC incluyen un chip eCord de la columna que
registra el historial de uso de la columna. El chip eCord de la columna
interacta con el software del sistema y registra informacin de un mximo de
50 colas de muestras analizadas en la columna. En entornos regulados, el chip
eCord de la columna documenta la columna utilizada en el mtodo de
validacin.

Componentes del sistema

1-11

Adems de los datos variables sobre el uso de la columna, el chip eCord de la


columna tambin almacena datos fijos sobre el proceso de fabricacin de la
columna, como:

Identificacin nica de la columna;

Certificado de anlisis;

Datos de las pruebas de control de calidad.

Cuando se conecta el chip eCord de la columna al receptculo correspondiente


en el compartimento de columnas, el chip registra y almacena
automticamente la informacin del sistema. No es necesario realizar
ninguna otra accin.

Detectores
La composicin qumica de las partculas pequeas utilizadas en la
cromatografa del sistema UPLC genera picos muy estrechos. Los Detectores
TUV, PDA, ELS y FLR para UPLC y los espectrmetros de masas SQ y TQ
obtienen datos a velocidades lo suficientemente rpidas como para definir
estos picos sin afectar a la sensibilidad o la exactitud de la medicin de los
picos. Estos detectores utilizan un volumen de cubeta de flujo menor,
volmenes de tubos minimizados y conectores especializados para controlar el
ensanchamiento y mantener estos picos estrechos.
Hay cubetas de flujo hechas de materiales biocompatibles, como titanio,
disponibles para los Detectores TUV y PDA para UPLC.

Para obtener ms informacin


La siguiente informacin adicional sobre el Sistema biolgico ACQUITY
H-Class se puede encontrar en el CD de documentacin del sistema:

1-12

Para el sistema ACQUITY UPLC H-Class

ACQUITY UPLC H-Class

Informacin de mantenimiento y descripcin general del funcionamiento


del compartimento de columnas

Especificaciones del sistema

Sistema biolgico ACQUITY UPLC H-Class

Visitar waters.com para obtener ms informacin y formar parte de la


comunidad en lnea de ACQUITY UPLC, en la que se puede:

Compartir informacin o hacer preguntas a los expertos y cientficos de


ACQUITY UPLC

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usuarios de todo el mundo.

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informacin.

Componentes del sistema

1-13

1-14

Sistema biolgico ACQUITY UPLC H-Class

Optimizar el funcionamiento
Seguir los consejos y directrices incluidos en este captulo para
garantizar el funcionamiento ptimo del Sistema ACQUITY.
Contenido:
Tema

Pgina

Directrices generales

2-1

Calculadora de columnas ACQUITY UPLC

2-4

Dispersin

2-5

Arrastre

2-5

Precisin y exactitud

2-6

Tiempo de los ciclos (entre inyecciones)

2-6

Evitar fugas

2-7

Preparacin de las muestras

2-7

Directrices generales
Las directrices del Sistema biolgico ACQUITY UPLC H-Class difieren de las
prcticas estndar de HPLC, principalmente debido a las limitaciones del
sistema para la cromatografa de partculas pequeas (de menos de 2 m). La
cromatografa en un sistema UPLC produce una separacin de mayor
resolucin a una escala mucho menor que la de la HPLC. Adems, la duracin
del anlisis es menor con la UPLC, y el consumo de eluyente y muestra se ve
sustancialmente reducido.
El Sistema biolgico de cromatografa ACQUITY UPLC H-Class requiere el
funcionamiento ptimo del Sistema biolgico de gestin de muestras
(bioSM-FTN) puesto que la dispersin de las muestras es ms evidente cuando
se utilizan columnas ms pequeas. La reduccin del tiempo de anlisis
cromatogrfico tambin hace necesaria una gestin eficaz del tiempo de los
ciclos.

Directrices generales

2-1

Durante los anlisis UPLC rpidos, se debe tener en cuenta que un pico de
inters puede ser muy estrecho, de menos de 0.5 segundos. Se recomienda una
velocidad de adquisicin de 25 a 50 puntos a lo largo del pico, lo que
proporciona una buena cuantificacin y representacin de los picos. Las
velocidades de adquisicin superiores a 20 puntos por segundo producen un
aumento del ruido en la lnea base y, en consecuencia, hacen necesario ajustar
las constantes de tiempo del filtro. El caudal ptimo de ACQUITY UPLC es
diferente al de una columna de HPLC convencional. La siguiente tabla
muestra las directrices de funcionamiento para columnas de ACQUITY UPLC
en condiciones isocrticas y de gradiente. Los valores mostrados son
aproximaciones, y la eficacia ptima para una molcula o separacin puede
obtenerse con un caudal o presin diferentes.
Caudales ptimos por intervalo de peso molecular:
Tamao de la
columna

Peso molecular

Caudal

2.1 50 mm

<500

600 L/min

2.1 50 mm

1 000

300 L/min

2.1 50 mm

1 500

150 L/min

2.1 50 mm

2 000

100 L/min

Precaucin:
No dejar las soluciones tampn almacenadas en el sistema.
Lavar todas las trayectorias del flujo, incluido el lavado de la aguja,
con una cantidad suficiente de eluyente no tamponado antes de
apagar el sistema.
Si el sistema va a apagarse durante un periodo prolongado (de ms de
24 horas), utilizar metanol al 10% - 20% en agua.
Si se utiliza un eluyente de lavado tamponado, cebarlo durante
30 segundos como mnimo.
El uso de soluciones tampn puede ocasionar la acumulacin de sales
en la aguja y el puerto de lavado, y hacer necesaria una limpieza
peridica.
Se deben seguir estas recomendaciones generales a la hora de realizar un
anlisis UPLC:

2-2

Optimizar el funcionamiento

Utilizar eluyentes, soluciones tampn y aditivos de alta calidad


(especficos para HPLC o MS).

Utilizar agua de alta calidad (especfica para HPLC o MS).

Se deben utilizar siempre filtros de eluyentes en los tubos de las botellas


de eluyentes.

Filtrar las soluciones tampn con un filtro de membrana de 0.2 m.

Almacenar las soluciones concentradas y utilizarlas para preparar las


soluciones de trabajo.

No superar la cantidad de solucin tampn, lo que puede producir


crecimiento microbiolgico.

No bloquear la lnea de purga del desgasificador; recortar el tubo si es


necesario.

No se deben sumergir en lquidos los conductos de evacuacin de


desechos y del desgasificador. (Consultar la Informacin de
mantenimiento y descripcin general de funcionamiento del sistema de
gestin de eluyentes cuaternario ACQUITY UPLC H-Class para obtener
informacin detallada sobre cmo dirigir los tubos).

Mantener cebados los conductos de eluyentes.

Lavar las soluciones tampn del sistema con un eluyente acuoso si se va


a dejar el sistema inactivo durante un periodo prolongado (de ms de 24
horas). Utilizar un eluyente orgnico al 10% - 20% en agua como
eluyente de almacenamiento. Cebar el bioSM-FTN con eluyente de
purga durante 10 ciclos como mnimo.

El uso de soluciones tampn en los eluyentes de lavado de la aguja puede


ocasionar la acumulacin de sales y hacer necesaria una limpieza
peridica. Cebar el eluyente de lavado durante 30 segundos como
mnimo y el eluyente de purga durante al menos 10 ciclos.

Mantener el conducto del lavado de juntas cebado.

El funcionamiento continuo con concentraciones de sales superiores a


1 M puede hacer que las juntas de la bomba deban cambiarse con ms
frecuencia que la indicada en el mantenimiento peridico programado.
Para prolongar la duracin de las juntas y evitar la acumulacin de
cristales de sales en las juntas de la bomba, se recomienda lavar
peridicamente la bomba, los tubos con altas concentraciones de sales y
el depsito. La concentracin de sales, el caudal y otros factores pueden
afectar a la frecuencia de los procedimientos de lavado. Algunas
aplicaciones pueden requerir un lavado semanal.
Directrices generales

2-3

Cebar los conductos de eluyente durante la puesta en marcha del


sistema.

Supervisar el nivel de desechos para garantizar que nunca llegue a


niveles demasiado altos.

Iniciar los gradientes con algo de contenido orgnico (0.1%, por ejemplo)
para lograr la formacin de un gradiente ms homogneo y predecible
que cuando se inicia sin contenido orgnico.

Utilizar la opcin Load Ahead (Carga en cabeza) si se desea utilizar un


tiempo de ciclos ms corto.

No utilizar la opcin Load Ahead (Carga en cabeza) p Loop offline


(Desconexin del bucle) cuando se solucionan problemas de arrastre.

Cuando se instala o se extrae una columna, se debe mantener en su sitio,


en todo momento, el conector de compresin reutilizable del
precalentador activo. Rotar la columna o el filtro en lnea opcional para
instalarlo o extraerlo.

Calculadora de columnas ACQUITY UPLC


La calculadora de columnas ACQUITY UPLC es una herramienta de software
que ayuda en la transferencia de mtodos de un sistema HPLC a un sistema
UPLC, o de un sistema UPLC a un sistema HPLC. La calculadora distingue
entre los sistemas con bombas binarias y cuaternarias.
Al introducir los valores de los parmetros para la separacin en curso, elegir
una columna objetivo que tenga un poder de resolucin (L/dp) similar. (Los
valores de L/dp se calculan y se muestran automticamente). Especificar los
volmenes de residencia para los sistemas en uso y de destino (la calculadora
recomienda las condiciones cromatogrficas para el sistema de destino). Estas
condiciones se pueden optimizar posteriormente segn los requisitos
particulares.
Consultar tambin: la documentacin de la calculadora de columnas
ACQUITY UPLC y la Ayuda en lnea de la Consola ACQUITY para obtener
ms informacin y mtodos.
Indicacin: la calculadora puede instalarse desde el CD de controladores del
Sistema ACQUITY UPLC o desde el CD del Kit de asistencia para mtodos.
Despus de la instalacin, el icono de la calculadora de columnas ACQUITY
UPLC aparece en el escritorio del ordenador.

2-4

Optimizar el funcionamiento

Dispersin
Los sistemas UPLC y los inyectores automticos muestran una dispersin
baja (una caracterstica fija del instrumento que se mide observando la
magnitud del ensanchamiento de picos debida al diseo del sistema).
La cromatografa de partculas pequeas utiliza columnas de alta eficacia
pequeas. Una columna UPLC tpica de 2.1 50 mm tiene un volumen
aproximado de 174 L, comparado con el volumen de 2.5 mL de una columna
HPLC convencional de 4.6 150 mm. Un tamao de columna y partculas
menor requiere un sistema cuya baja dispersin reduzca la dilucin y el
ensanchamiento de la banda, con lo que se conserva la forma, la altura y la
sensibilidad de los picos producidos por la columna de alta eficacia.
El Sistema biolgico ACQUITY UPLC H-Class muestra normalmente un
ensanchamiento de banda de 20 L (el valor depende de la configuracin del
sistema). Las concentraciones mximas para UPLC son ms altas que las
concentraciones para HPLC. Como los efectos de la solubilidad son ms
evidentes en los sistemas de baja dispersin y alta presin, es importante
ajustar la carga de la columna adecuadamente.

Arrastre
Se puede observar arrastre en los sistemas cromatogrficos cuando un analito
anteriormente inyectado aparece como un pico en el cromatrograma de las
siguientes muestras. El arrastre se suele producir cuando una pequea
cantidad de analito permanece en el sistema despus de inyectar una
muestra. El arrastre se puede medir mediante la observacin de los picos de
analito que aparecen cuando se analiza una muestra en blanco justo despus
de una muestra analtica.
Consultar tambin: Especificaciones del Sistema ACQUITY UPLC H-Class
para obtener informacin sobre el arrastre en el Sistema biolgico ACQUITY
UPLC H-Class.
Una causa frecuente del arrastre es el lavado inadecuado del sistema. La
seleccin de un eluyente de lavado adecuado puede reducir el arrastre en un
anlisis particular. El eluyente de lavado debe ser lo suficientemente fuerte
como para disolver cualquier resto de muestra y la duracin del lavado debe
ser la suficiente como para eliminar los residuos del sistema.
Las condiciones de los mtodos tambin pueden afectar en el arrastre. Un
tiempo de retencin demasiado corto en las condiciones finales de un
Dispersin

2-5

gradiente puede producir un fallo a la hora de eliminar todos los analitos del
sistema, en particular si el gradiente es brusco. Es importante lavar por
completo el sistema y volver a equilibrar la columna antes de proceder a un
siguiente anlisis. Se debe tener cuidado a la hora de seleccionar las opciones
Load Ahead (Carga en cabeza) y Loop Offline (Desconexin del bucle). La
inicializacin de estas opciones antes de que la parte ms orgnica del
gradiente llegue hasta la aguja puede hacer que queden residuos de muestras
en el sistema. A veces, un ahorro de tiempo puede dar lugar a una limpieza
inadecuada del sistema.
La hidrofobicidad y la solubilidad de las muestras, as como la limpieza
durante la preparacin de la muestra y la contaminacin causada por las
herramientas de preparacin de la muestra, son factores adicionales a tener
en cuenta a la hora de intentar minimizar el arrastre.

Precisin y exactitud
La precisin del volumen de inyeccin cuando se utiliza el Sistema biolgico
ACQUITY UPLC H-Class es inferior al 1% de RSD para volmenes de
inyeccin entre 0.2 y 10.0 L. La exactitud del volumen de inyeccin del
sistema es de 100 2%. (Consultar las Especificaciones del Sistema ACQUITY
UPLC H-Class para obtener ms informacin).

Tiempo de los ciclos (entre inyecciones)


El tiempo de anlisis corto de una separacin UPLC requiere un uso eficaz del
tiempo entre anlisis.
El bioSM-FTN cuenta con una opcin de carga en cabeza que puede ayudar a
reducir la duracin de los ciclos. Esta opcin indica al bioSM-FTN que aspire
la siguiente muestra mientras se analiza otra.
La opcin Loop Offline (Desconexin del bucle) del Sistema biolgico de
gestin de muestras de flujo a travs de aguja reduce el impacto del volumen
de retardo sobre la duracin de los ciclos mediante la desconexin de la aguja y
el bucle de extensin antes de que el gradiente llegue a la vlvula de inyeccin
y despus de que la muestra se transfiera hasta el puerto de inyeccin.
Una configuracin adecuada de la velocidad de aspiracin de la jeringa
tambin puede ayudar a reducir el tiempo de los ciclos. De forma
predeterminada, el sistema utiliza la informacin que recibe de un
transductor de presin para optimizar la velocidad de aspiracin de la jeringa
para obtener un funcionamiento ptimo y el mximo rendimiento.
2-6

Optimizar el funcionamiento

Evitar fugas
La prevencin de fugas garantiza que el sistema mantenga una presin
adecuada y una integridad de muestras a lo largo del anlisis.
Las fugas se pueden producir en cualquier conexin de los tubos, en la junta
trmica de estanqueidad o en las juntas, pero son ms frecuentes en las
conexiones de los tubos. Las fugas de baja presin (en el lado de entrada de la
bomba del bioQSM) producen prdida de eluyente e introduccin de aire
durante el ciclo de entrada. Las fugas en las conexiones de alta presin
2
(situadas despus de la vlvula i ) pueden hacer que salga eluyente, pero no
que entre aire.
Para evitar fugas se deben seguir las recomendaciones de Waters para apretar
correctamente las conexiones del sistema. Debe tenerse en cuenta que la
tcnica que se utiliza para volver a apretar las conexiones es distinta a la que
se emplea para instalarlas.

Preparacin de las muestras


El anlisis UPLC impone algunas restricciones adicionales en la preparacin
de las muestras.

Partculas
El reducido tamao del fritado de la columna (0.2 m) se puede obstruir ms
fcilmente que en el caso de los fritados mayores de las columnas HPLC
(2.0 m). Como resultado, es fundamental que los eluyentes de fase mvil y las
soluciones de muestras estn libres de partculas para el anlisis UPLC.
Consultar la seccin Directrices generales en la pgina 2-1 para obtener
recomendaciones sobre cmo seleccionar y manipular eluyentes.

Diluyentes de muestras compatibles


Cuando se utiliza la opcin de dilucin automtica en el bioSM-FTN, el
eluyente de purga se utiliza como diluyente de muestras. Se debe comprobar
que la solucin de muestra es soluble y miscible con el eluyente de purga
seleccionado.

Evitar fugas

2-7

2-8

Optimizar el funcionamiento

Preparar el sistema
Contenido:
Tema

Pgina

Preparar el hardware del sistema

3-1

Configurar el software de datos cromatogrficos

3-8

Paneles de control ACQUITY

3-8

Puesta en marcha de la Consola ACQUITY UPLC

3-15

Preparar el hardware del sistema


Encender el sistema
El encendido del sistema conlleva la puesta en marcha de la estacin de
trabajo del Sistema biolgico ACQUITY UPLC H-Class, los mdulos del
sistema y el software del sistema de datos cromatogrficos. Cada dispositivo o
instrumento emite tres pitidos y realiza una serie de pruebas de inicializacin.
Indicacin: si el sistema incluye un mdulo de compartimento de columnas,
ste se encender automticamente al encender el bioSM-FTN.
Para encender el sistema:
1.

Encender el bioQSM y el bioSM-FTN pulsando el interruptor de


encendido situado en la parte superior izquierda de la puerta de cada
dispositivo.
Consultar tambin: las secciones Indicador LED de encendido en la
pgina 3-2 y Indicadores LED de estado en la pgina 3-3 para obtener
informacin sobre cmo interpretar los modos del indicador LED del
estado de flujo en el dispositivo o el instrumento, o bien para comprobar
que las unidades estn encendidas.

Preparar el hardware del sistema

3-1

2.

Cuando los indicadores LED del bioQSM y el bioSM-FTN se enciendan


de color verde fijo, pulsar el interruptor de encendido situado en la parte
superior izquierda del detector (o detectores).
Indicacin: para evitar errores de inicializacin, solamente se deben
encender los detectores cuando la cubeta de flujo est mojada.

3.

Iniciar el software cromatogrfico.


Indicacin: se puede observar si en la Consola ACQUITY UPLC
aparecen mensajes e indicaciones de LED.

Supervisin de las pruebas iniciales


Estas pruebas comienzan al encender la estacin de trabajo del Sistema
biolgico ACQUITY UPLC H-Class:

Tarjeta CPU

Memoria (RAM y ROM)

Sistema de comunicaciones externo (Ethernet)

Reloj

Si las pruebas de puesta en marcha indican un funcionamiento errneo,


consultar la Ayuda en lnea de la Consola.

Supervisar los indicadores LED de los mdulos del sistema


Los diodos luminosos (LED) de que dispone cada mdulo del sistema indican
cul es su estado de funcionamiento. Los indicadores LED son especficos para
cada mdulo, por lo que el significado de sus distintos colores y modos de
funcionamiento puede variar de un mdulo a otro.

Indicador LED de encendido


El indicador LED de encendido, situado del lado izquierdo en el panel frontal
de un dispositivo o instrumento, indica si el mdulo est encendido o apagado.
El indicador LED es de color verde cuando la unidad recibe corriente y se
apaga cuando no la recibe.
Indicacin: con el fin de procurar una ventilacin adecuada, los ventiladores
del bioSM-FTN funcionan de manera continuo, incluso cuando el interruptor
de encendido se encuentra en la posicin off (desconectado). Los
ventiladores solamente se apagan cuando el cable de alimentacin se
desconecta de la parte trasera del instrumento.

3-2

Preparar el sistema

Indicadores LED de estado


Indicador LED de flujo (bioQSM)
El indicador LED de flujo, situado a la derecha del indicador LED de
encendido en el panel frontal del bioQSM, indica el estado del flujo. Un
indicador LED de flujo de color verde continuo indica que circula flujo a travs
del Sistema de gestin de eluyentes cuaternario.

Indicador LED de anlisis (bioSM-FTN)


El indicador LED de anlisis, situado a la derecha del indicador LED de
encendido en el panel frontal del bioSM-FTN, indica el estado del anlisis. Un
indicador LED de anlisis de color verde continuo indica que se estn
analizando inyecciones.

Indicador LED de la lmpara (detector)


El indicador LED de la lmpara, situado a la derecha del indicador LED de
encendido en el panel frontal del detector, indica el estado de la lmpara. Un
indicador LED de la lmpara de color verde continuo indica que la lmpara
est encendida.
Indicaciones del LED de estado:
Modo y color del
indicador LED

Descripcin

Apagado

bioQSM y bioSM-FTN: indica que el


dispositivo se encuentra inactivo.
Detector: indica que la lmpara del detector
est apagada.

Verde continuo

bioQSM: indica que est fluyendo eluyente.


bioSM-FTN: indica que el bioSM-FTN est
funcionando normalmente, intentando
analizar las muestras pendientes o realizar
las funciones de diagnstico solicitadas.
Cuando finalicen las funciones de diagnstico
y de anlisis de muestras solicitadas, el
indicador LED volver a apagarse.
Detector: indica que la lmpara del detector
est encendida.

Preparar el hardware del sistema

3-3

Indicaciones del LED de estado: (continuacin)


Modo y color del
indicador LED

Descripcin

Verde intermitente

bioQSM y bioSM-FTN: indica que el


dispositivo se est inicializando.
Detector: indica que el detector se est
inicializando o calibrando.

Rojo intermitente

Indica que un error ha detenido el instrumento o


dispositivo. Consultar la consola para obtener
informacin sobre el error.

Rojo continuo

Indica que se ha producido un fallo en un


instrumento o dispositivo que impide seguir
utilizndolo. Apagar la unidad y despus volver a
encenderla. Si el indicador LED contina de color
rojo continuo, ponerse en contacto con un
representante del Servicio Tcnico de Waters.

Activar los sensores de fugas


Regla: al encender el sistema, los sensores de fugas estarn desactivados por
defecto a menos que se hayan activado previamente.
Para activar los sensores de fugas:
1.

3-4

En la consola, seleccionar Control > Leak Sensors (Control > Sensores de


fugas).

Preparar el sistema

Cuadro de dilogo Leak Sensors:

Hacer clic para


activar o
desactivar
todos los
sensores de
fugas del
instrumento.

Hacer clic para activar o desactivar cada uno


de los sensores de fugas del instrumento.

2.

Para activar el sensor de fugas para un mdulo concreto, hacer clic en el


estado, a la izquierda de la descripcin del mdulo.
Indicacin: para activar todos los sensores de fugas, hacer clic en Enable
All (Activar todos).

Puesta en marcha del sistema


Utilizar la funcin Start up (Puesta en marcha) para cebar el bioQSM tras
cambiar la fase mvil, la aguja de muestras o bien despus de que el sistema
haya estado inactivo durante un largo periodo de tiempo (por ejemplo, durante
toda la noche). Se debe comprobar que el sistema se encuentra correctamente
configurado para su utilizacin antes de realizar este procedimiento.
Recomendacin: cebar el bioQSM durante 5 minutos como mnimo si se va a
realizar un cambio de eluyentes por otros que tengan una composicin
diferente a la de los que ya se encuentran en el sistema.
Para poner en marcha el sistema:
1.

En la consola, hacer clic en Control > Start up system (Control > Puesta
en marcha del sistema).

2.

Comprobar los ajustes de A/B/C/D Solvents (Eluyentes A/B/C/D) (fase


mvil) en la pestaa Prime Solvents (Cebar eluyentes) del cuadro de
dilogo System Startup (Puesta en marcha del sistema).

Preparar el hardware del sistema

3-5

Indicaciones:

En el rea A/B/C/D Solvents (Eluyentes A/B/C/D), se pueden


seleccionar o desactivar algunos o todos los eluyentes: A, B, C, D.

Se puede modificar la duracin del proceso de cebado de los


eluyentes A a D introduciendo un valor diferente en el campo
Duration of Prime (Duracin del cebado). Todos los eluyentes
seleccionados se cebarn durante el mismo tiempo.

Para volver a establecer los valores originales en cualquier ficha,


hacer clic en Set Defaults (Establecer valores predeterminados).

Valor predeterminado: todos los eluyentes se ceban durante 2.0 minutos


cada uno. (Intervalo: de 0.1 a 60.0 minutos).
Recomendacin: cebar durante 3 minuto durante 7 minutos despus de
cambiar de eluyentes.
Precaucin:
No dejar las soluciones tampn almacenadas en el sistema.
Lavar todas las trayectorias del flujo, incluido el lavado de la aguja,
con una cantidad suficiente de eluyente no tamponado antes de
apagar el sistema.
Si el sistema va a apagarse durante un periodo prolongado (de ms de
24 horas), utilizar metanol al 10% - 20% en agua.
Si se utiliza un eluyente de lavado tamponado, cebarlo durante
30 segundos como mnimo.
El uso de soluciones tampn puede ocasionar la acumulacin de sales
en la aguja y el puerto de lavado, y hacer necesaria una limpieza
peridica.
3.

Seleccionar o limpiar el cebado del lavado de juntas, el eluyente de


lavado y el eluyente de purga. Si es necesario, se debe modificar la
duracin especificada para cebar el lavado de juntas y el eluyente de
lavado, as como el nmero de ciclos especificado para cebar el eluyente
de purga.
Valor predeterminado: el lavado de juntas se ceba durante 2.0 minutos,
el eluyente de lavado durante 15 segundos y el eluyente de purga
durante 5 ciclos.

3-6

Preparar el sistema

4.

Seleccionar la ficha Equilibrate to Method (Equilibrar segn mtodo)


para comprobar los ajustes del caudal, la fase mvil, la composicin, las
temperaturas y el estado de la lmpara en estado de equilibrio.
Valores de la ficha Equilibrate to Method:

5.

Parmetros de la
puesta en marcha del
sistema

Valores
predeterminados

Valores permitidos

Caudal inicial del


mtodo

0.500 mL/min

De 0.1 a 2.0 mL/min

Composicin de A, B, C
y D (la suma debe ser
100%)

A: 100%
B,C,D: 0%

A: de 0 a 100%
B: de 0 a 100%
C: de 0 a 100%
D: de 0 a 100%

Temperatura de la
columna

Off
Depende del tipo de mdulo
(Desconectado) de compartimento de
columna

Temperatura de la
muestra

Off
Off (Desactivada), o de 4.0 a
(Desconectado) 40.0 C

Lmpara

On (Conectado) Encendida o apagada


Nota: para las cubetas de
flujo con paso de luz, no se
debe conectar la lmpara
del detector, ni trabajar con
ella o encenderla si no
existe flujo a travs de la
cubeta o si la cubeta de flujo
est seca.

Hacer clic en Start (Iniciar).


Resultado: se enciende la lmpara en el detector ptico, el sistema
establece la temperatura de la muestra y de la columna, y comienzan
todos los cebados. Al finalizar el cebado, el sistema de gestin de
muestras caracteriza la junta y la aguja, si se ha seleccionado esta
opcin, y luego registra los resultados de la caracterizacin en la base de
datos. Por ltimo, el sistema establece el caudal del mtodo, las
selecciones de eluyente y la composicin.

Preparar el hardware del sistema

3-7

Configurar el software de datos cromatogrficos


Configurar el software del sistema de datos cromatogrficos para utilizarlo
con ACQUITY:

Iniciar el software del sistema de datos cromatogrficos e iniciar una


sesin.

Seleccionar los instrumentos del sistema y darle un nombre al sistema


(consultar la Ayuda de Empower o MassLynx para obtener informacin
detallada).

Abrir la consola ACQUITY y los paneles de control.

Paneles de control ACQUITY


Se pueden supervisar los paneles de control del bioQSM, el bioSM-FTN y el
detector desde el sistema de datos cromatogrficos.
Paneles de control:

Si el sistema est controlado por el software Empower, los paneles de control


aparecen en la parte inferior de la ventana Run Samples (Analizar muestras).
Si el software MassLynx controla el sistema, los paneles de control aparecen
en la ficha Additional Status (Estado adicional) de la ventana Inlet Editor
(Editor de entrada).

Panel de control del bioQSM


El panel de control del bioQSM muestra los parmetros de estado del flujo,
presin del sistema, caudal total y composicin del eluyente.
Regla: estos parmetros se pueden modificar cuando el sistema est inactivo,
haciendo clic en el valor subrayado. Los parmetros del sistema de gestin de
eluyentes cuaternario no se pueden modificar durante el anlisis de muestras.

3-8

Preparar el sistema

Panel de control del bioQSM:


Indicador LED de
caudal

Estado
Presin del sistema

Caudal

Composicin de eluyentes

Detener flujo

Elementos del panel de control del bioQSM:


Elemento del panel de
control

Descripcin

Indicador LED de caudal

Muestra el LED de flujo real situado en el


panel frontal del bioQSM, a menos que se
haya perdido la comunicacin con el bioQSM.

Estado

Muestra el estado de funcionamiento actual.

Presin del sistema

Muestra la presin del sistema en kPa, bar o


psi. Las unidades de presin se pueden
personalizar a travs de la consola.

Caudal

Muestra el caudal de eluyente que pasa por


todos los tubos del bioQSM: de 0.000 a 2.000
mL/min en condiciones de funcionamiento
normales y de 0.000 a 4.000 mL/min cuando
se realiza el cebado.

Composicin de eluyentes

Muestra el porcentaje de eluyente que se va a


extraer de los conductos de eluyentes (A a D).
Los valores de la composicin oscilan entre
0.0% y 100.0%.

(Detener flujo)

Detiene por completo el flujo procedente del


bioQSM.

Paneles de control ACQUITY

3-9

Se puede acceder a estas funciones adicionales haciendo clic con el botn


derecho del ratn en cualquier lugar del panel de control del bioQSM:
Funciones adicionales del panel de control del bioQSM:
Funcin del panel de control Descripcin

3-10

Start up system (Poner en


marcha el sistema)

Pone el sistema en funcionamiento despus


de un perodo de inactividad prolongado o
cuando se cambia a un eluyente distinto.
Consultar la seccin Puesta en marcha del
sistema del documento Informacin de
mantenimiento y descripcin general de
funcionamiento del sistema de gestin de
eluyentes cuaternario.

Prime solvents (Cebar


eluyentes)

Muestra el cuadro de dilogo Prime Solvents


(Cebar eluyentes).
Consultar la seccin Cebar el sistema de
gestin de eluyentes cuaternario del
documento Informacin de mantenimiento y
descripcin general de funcionamiento del
sistema de gestin de eluyentes cuaternario.

Prime seal wash (Cebar el


lavado de las juntas)

Inicia el cebado del lavado de juntas.


Consultar la seccin Cebar el sistema de
lavado de juntas del documento Informacin
de mantenimiento y descripcin general de
funcionamiento del sistema de gestin de
eluyentes cuaternario.

Wash plungers (Lavar


mbolos)

Inicia la secuencia de lavado del mbolo, que


llena y luego vaca lentamente las cmaras
primaria y del acumulador (con la
composicin de eluyente utilizada) mientras
se realiza el lavado de juntas de alta
velocidad/volumen elevado. De esta manera
se evita la acumulacin de precipitados en los
mbolos de la bomba, los cuales pueden
daar las juntas de alta presin.

Launch ACQUITY UPLC


Console (Ejecutar la Consola
ACQUITY UPLC)

Inicia la consola.

Preparar el sistema

Funciones adicionales del panel de control del bioQSM: (continuacin)


Funcin del panel de control Descripcin
Reset QGM (Reiniciar el
QGM)

Restablece el bioQSM tras un error.

Ayuda

Muestra la Ayuda en lnea de la consola.

Panel de control del bioSM-FTN


El panel de control del bioSM-FTN indica las temperaturas programadas y reales
del compartimento de muestras y del mdulo de compartimento de columnas.
Estos valores se pueden modificar cuando el sistema est inactivo, haciendo clic
en el valor subrayado. En cambio, los valores programados del sistema de gestin
de muestras no se pueden modificar durante el anlisis de muestras.
Indicaciones:

Para mantener el compartimento de muestras a una temperatura


constante, abrir la puerta slo cuando sea necesario.

Los ventiladores del bioSM-FTN dejan de proyectar aire cuando se abre


la puerta del compartimento de muestras.

Panel de control del bioSM-FTN:


Indicador LED de anlisis

Estado

Temperatura actual
del compartimento
de muestras
Valor programado
del compartimento de
muestras

Temperatura actual del


horno de columnas

Valor programado del


horno de columnas

Visualizacin de la
Consola ACQUITY UPLC

Elementos del panel de control del bioSM-FTN:


Elemento del panel de control Descripcin
Indicador LED de anlisis

Muestra el indicador LED de anlisis real en


el panel frontal, a menos que se produzca una
prdida de comunicaciones.

Estado

Muestra el estado de funcionamiento actual.

Paneles de control ACQUITY

3-11

Elementos del panel de control del bioSM-FTN: (continuacin)


Elemento del panel de control Descripcin
Temperatura actual del
compartimento de muestras

Muestra la temperatura actual del


compartimento de muestras con una
resolucin de 0.1 C, aunque est
deshabilitado el control de temperatura
activo.

Valor programado del


compartimento de muestras

Muestra el valor programado actual del


compartimento de muestras con una
resolucin de 0.1 C. Cuando el control de
temperatura activo est deshabilitado, este
campo muestra Off (Desactivado).

Temperatura actual del horno Muestra la temperatura actual del horno de


de columnas
columnas con una resolucin de 0.1 C,
aunque est deshabilitado el control de
temperatura activo.
Valor programado del horno
de columnas

(Visualizacin de la
consola)

Muestra el valor programado actual del horno


de columnas con una resolucin de 0.1 C.
Cuando el control de temperatura activo est
deshabilitado, este campo muestra Off
(Desactivado).
Muestra la Consola ACQUITY UPLC.

Se puede acceder a funciones adicionales haciendo clic con el botn derecho del
ratn en cualquier lugar del panel de control del bioSM-FTN.
Funciones adicionales del panel de control del bioSM-FTN:
Funcin del panel de control Descripcin
Prime (Cebar)

3-12

Preparar el sistema

Muestra el cuadro de dilogo Prime (Cebar).


Consultar la seccin Cebar la SM-FTN del
documento Informacin de mantenimiento y
descripcin general de funcionamiento del
sistema de gestin de muestras con flujo a
travs de aguja.

Funciones adicionales del panel de control del bioSM-FTN: (continuacin)


Funcin del panel de control Descripcin
Wash needle (Lavar aguja)

Muestra el cuadro de dilogo Wash Needle


(Lavar aguja).
Consultar la seccin Lavar la aguja del
SM-FTN del documento Informacin de
mantenimiento y descripcin general de
funcionamiento del sistema de gestin de
muestras con flujo a travs de aguja.

Reset SM (Reiniciar el
sistema de gestin de
muestras)

Restablece el sistema de gestin de muestras


tras un error.

Ayuda

Muestra la Ayuda en lnea de la consola.

Panel de control del Detector de absorbancia programable


(UV variable)
El panel de control del Detector TUV muestra las unidades de absorbancia y
los valores de longitud de onda, parmetros que se pueden modificar cuando el
sistema se encuentra en inactivo haciendo clic en el valor subrayado. No
obstante, los parmetros del detector no se pueden modificar durante el
anlisis de muestras.
Los paneles de control de otros detectores funcionan de manera similar. Si el
sistema incluye un detector PDA, se recomienda consultar la Gua de
iniciacin al Detector de red de fotodiodos UPLC para ACQUITY.
Panel de control del Detector TUV:
Estado
Unidades de
absorbancia
Valor de longitud
de onda A

Indicador LED
de la lmpara
(encendida/apagada)

Encender/apagar la
lmpara del detector

Paneles de control ACQUITY

3-13

La siguiente tabla describe los controles e indicadores del panel de control del
Detector TUV.
Elementos del panel de control del Detector TUV:
Elemento del panel de
control

Descripcin

Indicador LED de la lmpara Muestra el LED de encendido/apagado de la


(encendida/apagada)
lmpara situado en el panel frontal del
detector, a menos que se haya perdido la
comunicacin con el detector.
Estado

Muestra el estado de funcionamiento actual.

UA

Muestra las unidades de absorbancia.

nm

Muestra el valor de la longitud de onda A, en


nm. Si el detector se encuentra en el modo de
longitud de onda doble, tambin aparece el
valor de la longitud de onda B.
(Encender lmpara)
(Apagar lmpara)

Enciende la lmpara del detector.


Apaga la lmpara del detector.

Se puede acceder a funciones adicionales descritas en la siguiente tabla


haciendo clic con el botn derecho del ratn en cualquier lugar del panel de
control del detector:
Funciones adicionales del panel de control del detector:
Funcin del panel de control Descripcin

3-14

Auto Zero (Puesta a cero


automtica)

Restablece el valor de absorbancia en 0.

Reset TUV (Reiniciar el


Detector de absorbancia
programable [UV variable])

Si est disponible, restablece el detector tras


un error.

Ayuda

Muestra la Ayuda en lnea de la consola.

Preparar el sistema

Puesta en marcha de la Consola ACQUITY UPLC


La Consola ACQUITY UPLC es una aplicacin de software que permite
configurar los valores, supervisar el funcionamiento, realizar pruebas de
diagnstico, y mantener el sistema y sus mdulos de manera sencilla.
Sustituye a los teclados y a las pequeas pantallas que se encuentran
habitualmente en la parte frontal de los instrumentos del sistema. La Consola
ACQUITY UPLC funciona independientemente a las aplicaciones de datos y
no los reconoce ni los controla.
Desde la interfaz de la Consola ACQUITY UPLC se puede acceder
rpidamente a las representaciones grficas de cada mdulo del sistema y de
sus componentes. Tambin se pueden ver diagramas interactivos en los que se
muestran las conexiones que existen entre los mdulos y que permiten utilizar
herramientas de diagnstico para resolver problemas.
Para iniciar la Consola ACQUITY UPLC desde el software Empower:
En la ventana Run samples (Analizar muestras), hacer clic en el botn de
visualizacin de la consola

del panel de control del bioSM-FTN.

Ventana ACQUITY UPLC Console (Consola ACQUITY UPLC):

Puesta en marcha de la Consola ACQUITY UPLC

3-15

Para iniciar la Consola ACQUITY UPLC desde el software MassLynx:

3-16

1.

En la ventana MassLynx, hacer clic en Inlet Method (Mtodo de


entrada).

2.

En la ventana Inlet Method (Mtodo de entrada), hacer clic en la ficha


ACQUITY Additional Status (Estado adicional de ACQUITY).

3.

Hacer clic en el botn de visualizacin de la consola

Preparar el sistema

Consejos de seguridad
Los instrumentos de Waters muestran smbolos de peligro cuya
finalidad es advertir al usuario de los peligros implcitos en relacin con
el funcionamiento y el mantenimiento de los instrumentos. Estos
smbolos aparecen tambin en las guas del usuario correspondientes,
acompaados de un texto que describe los riesgos y la manera de
evitarlos. En este apndice se describen todos los smbolos y
advertencias de seguridad que se aplican a toda la lnea de productos de
Waters.
Contenido:
Tema

Pgina

Smbolos de advertencia

A-2

Smbolo de precaucin

A-6

Advertencias que se aplican a todos los instrumentos de Waters A-6


Smbolos elctricos y de manejo

A-7

A-1

Smbolos de advertencia
Los smbolos de advertencia alertan del riesgo de muerte, lesiones o reacciones
fisiolgicas adversas y graves relacionadas con el uso correcto o indebido de un
instrumento. Cuando se instale, se repare o se utilice un instrumento de
Waters, se deben tener en cuenta todas las advertencias. Waters no asume
ninguna responsabilidad por el incumplimiento de las precauciones de
seguridad por parte de las personas que instalen, reparen o manipulen sus
instrumentos.

Advertencias de peligro asociadas con tareas especficas


Los siguientes smbolos de advertencia avisan de los riesgos que se pueden
producir durante el funcionamiento o el mantenimiento de un instrumento o
componente. Estos riesgos incluyen quemaduras, descargas elctricas,
exposicin a radiacin ultravioleta y otros peligros.
Cuando estos smbolos aparecen en las descripciones o en los procedimientos
de un manual, el texto adjunto identifica el riesgo especfico y explica la
manera de evitarlo.
Advertencia: (riesgo general de peligro. Si este smbolo aparece en un
instrumento, se recomienda consultar la informacin importante sobre
seguridad que se incluye en la documentacin del usuario del
instrumento antes de su utilizacin).
Advertencia: (riesgo de quemaduras producidas por contacto con
superficies calientes).
Advertencia: (riesgo de descarga elctrica).
Advertencia: (riesgo de incendio).
Advertencia: (riesgo de lesiones por objetos punzantes).
Advertencia: (riesgo de lesiones por aplastamiento de la mano).
Advertencia: (riesgo de exposicin a radiacin ultravioleta).
Advertencia: (riesgo de contacto con sustancias corrosivas).

A-2

Consejos de seguridad

Advertencia: (riesgo de exposicin a sustancias txicas).


Advertencia: (riesgo de exposicin a radiacin lser).
Advertencia: (riesgo de exposicin a agentes biolgicos que pueden
suponer un grave peligro para la salud).
Advertencia: (riesgo de vuelco).
Advertencia: (riesgo de explosin).
Advertencia: (riesgo de lesiones oculares).

Advertencias especficas
Las siguientes advertencias pueden aparecer en los manuales del usuario de
determinados instrumentos, as como en las etiquetas de los instrumentos o de
sus componentes.

Advertencia de reventn
Esta advertencia se aplica a los instrumentos de Waters con tubos no
metlicos.
Advertencia: los tubos no metlicos o de polmeros presurizados pueden
reventar. Se recomienda tener en cuenta las precauciones siguientes
cuando se trabaje cerca de estos tubos:
Utilizar proteccin ocular.
Se debe apagar cualquier llama que pueda haber en las
proximidades.
No utilizar tubos que se hayan doblado o sometido a tensiones.
No exponer los tubos no metlicos a compuestos incompatibles, como
tetrahidrofurano (THF), o los cidos ntrico o sulfrico.
Algunos compuestos, como el diclorometano y el dimetilsulfxido,
producen una expansin de los tubos no metlicos, lo que reduce
considerablemente la presin a la que pueden reventar los tubos.

Smbolos de advertencia

A-3

Advertencia de eluyentes inflamables en el espectrmetro de masas


Esta advertencia se aplica a los instrumentos que se utilizan con eluyentes
inflamables.
Advertencia: cuando haya una cantidad importante de eluyentes
inflamables, se requerir un flujo continuo de nitrgeno en el interior de
la fuente de ionizacin para evitar su posible ignicin en este espacio
cerrado.
Es importante comprobar que la presin del suministro de nitrgeno no
descienda nunca por debajo de los 690 kPa (6.9 bar, 100 psi) durante un
anlisis en el que se utilicen eluyentes inflamables. Tambin es
importante comprobar que haya una conexin de seguridad para el gas
en el sistema de LC, con el fin de detener el flujo de eluyente de LC si
falla el suministro de nitrgeno.

Peligro de descarga elctrica del espectrmetro de masas


Esta advertencia se aplica a todos los espectrmetros de masas de Waters.
Advertencia: para evitar descargas elctricas, se recomienda no retirar
los paneles protectores del espectrmetro de masas. Estos paneles no
cubren ningn componente que el usuario deba manipular.
Esta advertencia se aplica a determinados instrumentos cuando estn en
funcionamiento.
Advertencia: puede haber voltajes altos en ciertas superficies externas
del espectrmetro de masas cuando el instrumento est en
funcionamiento. Para evitar una descarga elctrica no mortal,
asegurarse de que los instrumentos estn en modo Standby (En espera)
antes de tocar las piezas con el smbolo de advertencia de alto voltaje.

A-4

Consejos de seguridad

Advertencia de peligro biolgico


Esta advertencia se aplica a los instrumentos de Waters que se pueden
utilizar para procesar materiales con posible riesgo biolgico, como las
sustancias que contienen agentes biolgicos que pueden producir efectos
nocivos en las personas.
Advertencia: los instrumentos y el software de Waters se pueden
utilizar para el anlisis o procesamiento de productos de origen humano
potencialmente infecciosos, microorganismos inactivados y otros
materiales de origen biolgico. Con el fin de evitar infecciones con estos
agentes, se debe considerar que todos los lquidos biolgicos son
infecciosos, as como cumplir con las buenas prcticas de laboratorio y
consultar al responsable de seguridad biolgica de la organizacin para
obtener informacin sobre su uso y manipulacin correctos. La ltima
edicin de la publicacin Biosafety in Microbiological and Biomedical
Laboratories (BMBL) de los NIH (Institutos Nacionales de Salud) de
Estados Unidos incluye precauciones especficas.

Advertencia de peligro qumico


Esta advertencia se aplica a los instrumentos de Waters que pueden procesar
material corrosivo, txico, inflamable o cualquier otro tipo de material
peligroso.
Advertencia: los instrumentos de Waters se pueden utilizar
para analizar o procesar sustancias potencialmente
peligrosas. Para evitar lesiones con cualquiera de estos
materiales, el usuario debe familiarizarse con los materiales
y sus riesgos, cumplir con las buenas prcticas de laboratorio
(GLP), y consultar cualquier duda respecto a la utilizacin y
la manipulacin correctas de estos materiales al responsable
de seguridad de la organizacin. La ltima edicin de la
publicacin Prudent Practices in the Laboratory: Handling
and Disposal of Chemicals, del Consejo Nacional de
Investigacin de Estados Unidos incluye indicaciones
generales.

Smbolos de advertencia

A-5

Smbolo de precaucin
El smbolo de precaucin significa que el uso correcto o indebido de un
instrumento puede causar daos al instrumento o poner en peligro la
integridad de una muestra. El siguiente smbolo y el mensaje asociado son un
ejemplo tpico de los mensajes que alertan del riesgo de daar el instrumento o
la muestra.
Precaucin: para evitar que se produzcan daos, no utilizar sustancias
abrasivas ni disolventes para limpiar la cubierta en la que se aloja el
instrumento.

Advertencias que se aplican a todos los instrumentos de


Waters
Al utilizar este dispositivo se deben seguir los procedimientos estndar de
control de calidad y las indicaciones de uso del equipo detalladas en esta
seccin.
Atencin: los cambios o modificaciones hechos a esta unidad que no hayan sido
expresamente aprobados y conformados por la entidad responsable pueden
anular la autorizacin al usuario para manejar el equipo.
Advertencia: se debe tener cuidado cuando se trabaje con tubos de polmeros
bajo presin:
El usuario deber protegerse siempre los ojos cuando trabaje cerca de tubos
de polmero sometidos a presin.
Se debe apagar cualquier llama que pueda haber en las proximidades.
No se debe trabajar con tubos que se hayan doblado o sometido a altas
presiones.
Es necesario utilizar tubos de metal cuando se trabaje con tetrahidrofurano
(THF) o cido ntrico o sulfrico concentrado.
Hay que tener en cuenta que el diclorometano y el dimetilsulfxido dilatan
los tubos no metlicos, lo que reduce la presin de ruptura de los tubos.

Advertencia: el usuario deber saber que si el equipo se utiliza de forma


distinta a la especificada por el fabricante, las medidas de proteccin del equipo
podran ser insuficientes.
A-6

Consejos de seguridad

Smbolos elctricos y de manejo


Smbolos elctricos
Estos smbolos pueden aparecer en los manuales del usuario y en los paneles
frontales o posteriores de un instrumento.
Encendido
Apagado

En espera

Corriente continua
Corriente alterna
Terminal de proteccin del conductor

Terminal del chasis o armazn


Fusible
Smbolo de reciclaje: no desechar en los
contenedores de residuos municipales.

Smbolos elctricos y de manejo

A-7

Smbolos de manejo
Los siguientes smbolos de manejo y su texto adjunto pueden aparecer en las
etiquetas del embalaje exterior de un instrumento o componente de Waters.

Mantener en posicin vertical

No mojar

Frgil

No utilizar ganchos

A-8

Consejos de seguridad

Conexiones externas
En esta seccin se describen las conexiones externas del Sistema

biolgico ACQUITY UPLC H-Class.


Indicacin: un representante del servicio tcnico de Waters debe
desembalar e instalar los instrumentos del Sistema biolgico ACQUITY
UPLC H-Class.
Advertencia: para evitar lesiones de espalda, no se debe intentar
levantar los instrumentos sin ayuda.
Precaucin:
Llamar al servicio tcnico de Waters al telfono 902 254 254
antes de mover los instrumentos del Sistema biolgico
ACQUITY UPLC H-Class.
Si se es necesario transportar el mdulo o dejar de utilizarlo,
llamar al servicio tcnico de Waters al telfono 902 254 254
para obtener informacin sobre los procedimientos de limpieza,
aclarado y embalado recomendados.
Contenido:
Tema

Pgina

Conexiones de los tubos del sistema

B-1

Conexiones de los cables externos del instrumento

B-3

Conexiones de la trayectoria del flujo para los compartimentos


de columnas
B-5
Conexiones de seales

B-7

Conectar a la fuente de alimentacin

B-12

Conexiones de los tubos del sistema


A continuacin se muestran las conexiones de los tubos exteriores del sistema,
utilizados para el flujo de eluyente y el drenaje.

Conexiones de los tubos del sistema

B-1

Flujo de eluyente y drenaje:

Bandeja de botellas
Detector
Posicin del regulador de
contrapresin

Horno de columnas

bioSM-FTN, tubo de PTFE


de 1/8 pulg de dimetro
exterior, para el lavado de
la aguja
Posicin de la cubeta de
flujo
Posicin del horno de
precalentamiento activo

bioSM-FTN
Tubo de PTFE de 1/8
pulg. de dimetro exterior
(paa la lnea de purga)
Tubo, 1/8pulg. de DE,
PTFE (4 conductos para
los eluyentes A, B, C, D,
y 1 conducto para el
lavado de juntas)
bioQSM

Tubo transparente de
PTFE a la vlvula de
desechos, tubo de PEEK a
desechos
Tubo corrugado de tefln
(PTFE)
Tubo de PEEK del
bioQSM al bioSM-FTN
(para la lnea de purga)

Flujo del sistema


Drenaje del sistema
Detector de fugas

B-2

Tubo MP35N del


bioQSM al bioSM-FTN

Conexiones externas

Desechos

Conexiones de los cables externos del instrumento


Conexiones de los cables externos del instrumento del Sistema
biolgico ACQUITY UPLC H-Class
A continuacin se muestran las conexiones del panel posterior de los
instrumentos del Sistema biolgico ACQUITY UPLC H-Class.

Bandeja de eluyentes

Detector
Cable externo de
alimentacin y
comunicaciones

Horno de columnas

Interruptor Ethernet

bioSM-FTN

Cables de Ethernet

bioQSM

TP03231

Cable
Ethernet a
PC

Cables de alimentacin

Conexiones de los cables externos del instrumento

B-3

Conexiones Ethernet
El bioSM-FTN incorpora un conmutador Ethernet interno para conectar un
PC (estacin de trabajo) y un mximo de seis mdulos del Sistema biolgico
ACQUITY UPLC H-Class. Conectar los cables Ethernet blindados de cada
mdulo en las conexiones electrnicas del panel posterior del bioSM-FTN. El
bioSM-FTN est conectado internamente al conmutador Ethernet.
Si el sistema incluye un compartimento de columnas opcional (CM-A),
conectar un mximo de dos compartimentos de columnas auxiliares (CM-Aux)
opcionales al CM-A.

Conexiones del horno de columnas


El bioSM-FTN suministra alimentacin elctrica al horno de columnas y se
comunica con l. El cable de comunicaciones externo se debe conectar al panel
posterior del horno de columnas y el bioSM-FTN.
Para realizar las conexiones del horno de columnas:
Precaucin: para evitar daos en las piezas elctricas, no se debe
desconectar nunca un componente elctrico mientras el mdulo
est conectado a la alimentacin. Para interrumpir el suministro
elctrico a un mdulo, situar el interruptor de encendido en la
posicin Off (Apagado) y despus desenchufar el cable de
alimentacin de la toma de CA. Una vez desconectado de la
alimentacin, se debe esperar unos 10 segundos antes de
desconectar cualquier componente.

B-4

1.

Comprobar que el bioSM-FTN y el horno de columnas estn apagados.

2.

Conectar el cable de comunicaciones externo al puerto de alta densidad


(HD) del panel posterior del horno de columnas.

3.

Conectar el otro extremo del cable de comunicaciones externo al puerto


QSPI del panel posterior del bioSM-FTN.

Conexiones externas

Conexiones de la trayectoria del flujo para los


compartimentos de columnas
Mdulos del compartimento de columnas en tres configuraciones del
sistema:
CM-A y CM-Aux
inferior con
4 columnas

CM-A con 2
columnas largas o
4 columnas cortas

Bandeja

Bandeja

Detector

Detector

CM-A

bioSM-FTN

CM-Aux
2 columnas
largas o
4 columnas
cortas

CM-Aux superior, CM-A y CM-Aux


inferior con 6 columnas
Bandeja

CM-A

Detector
CM-Aux

bioSM-FTN

bioSM-FTN
CM-A

bioQSM

bioQSM

bioQSM

CM-Aux

Conexiones de la trayectoria del flujo para los compartimentos de columnas

B-5

Compartimento de columnas con hornos de precalentamiento activo del


lado derecho:
Detector

Marrn
Gris
oscuro

Tapn

Vlvula de
seleccin
de salida

Vlvula de
seleccin
de entrada

Verde oscuro

Clip de la columna

Gris claro
Negro

Horno de precalentamiento
activo

Paso
de los
tubos

Compartimento de columnas
Verde claro

Clip de la columna

Horno de precalentamiento
activo

Compartimento de columnas auxiliar con hornos de precalentamiento


activo del lado izquierdo:

Horno de precalentamiento
activo

Clip de la columna

Morado oscuro

Compartimento de columnas AUX inferior


Horno de precalentamiento
activo

Clip de la columna

Morado claro

Tablero de la mesa

B-6

Conexiones externas

Paso
de los
tubos

Conexiones de seales
Realizar las conexiones de seales
Consultar la ubicacin de las conexiones de seales mostradas en la etiqueta
serigrafiada del panel posterior de cada instrumento.

Material necesario

Llave de tuercas de 9/32 pulg.

Destornillador plano

Conector

Cable de seal

Para realizar las conexiones de la seal:


1.

Insertar el conector en el puerto de la parte posterior del instrumento.

Puerto del conector

Conector

Conexiones de seales

B-7

2.

Usar el desatornillador plano para conectar los extremos positivo y


negativo del cable de seales al conector.
Tornillo

Conector

Cable de seal

3.

Acoplar el terminal de horquilla del cable de tierra al perno de tierra del


panel posterior y asegurarlo con la tueca de bloqueo.
Indicacin: utilizar la llave de tuercas de 9/32 pulg. para apretar la
tuerca de bloqueo hasta que el terminal de horquilla no se mueva.
Terminal de horquilla

Tuerca de bloqueo

Terminal
de tierra

B-8

Conexiones externas

Conectores de seales de E/S del bioQSM


El panel posterior del bioQSM tiene un conector extrable con bornes de
tornillo para los cables de las seales de entrada y salida (I/O). Este conector
est adaptado para que se pueda insertar slo de una manera.
Conexiones de seales de E/S del bioQSM:

Gradient Start + (Inicio de gradiente +)


Gradient Start - (Inicio de gradiente -)
Ground (Toma de tierra)
Ground (Toma de tierra)
Stop Flow + (Detener flujo +)
Stop Flow - (Detener flujo -)

123456

Para obtener informacin sobre las especificaciones elctricas, consultar la


seccin Especificaciones del sistema ACQUITY UPLC H-Class.
Conexiones de entrada de eventos del bioQSM:
Conexin de seal

Descripcin

Gradient Start (Inicio de Pone en marcha la bomba para comenzar la


gradiente)
operacin de gradiente debido a una entrada de
cierre de contacto o bien a una de 0 voltios.
Stop Flow (Detener
flujo)

Permite detener el flujo proveniente del sistema


de gestin de eluyentes cuaternario cuando recibe
una entrada de cierre de contactor o una entrada
de 0 voltios (por ejemplo, una condicin de error o
un fallo de hardware de otro instrumento).

Conexiones de seales

B-9

Conectores de seales de E/S del bioSM-FTN


El panel posterior del bioSM-FTN tiene un conector extrable con bornes de
tornillo para los cables de las seales de entrada y salida (I/O). Este conector
presenta unas ranuras determinadas para que slo se puedan insertar los
cables de seales de una manera concreta.
Requisito: se debe configurar una conexin de salida de cierre de contacto
(Inject Start Out [Salida de inicio de inyeccin]) desde el bioSM-FTN para
activar e iniciar un espectrmetro de masas, un Detector PDA 2996 para
ACQUITY o un Detector ELS para ACQUITY controlados por el software
MassLynx.
Conectores de seales de E/S del bioSM-FTN:

Inject Start Out + (Salida de inicio de inyeccin +)


Inject Start Out - (Salida de inicio de inyeccin -)
Ground (Toma de tierra)
Ground (Toma de tierra)
Inject Hold In + (Inhibicin de la inyeccin +)
Inject Hold In - (Inhibicin de la inyeccin -)

123456

B-10

Conexiones externas

Para obtener informacin sobre las especificaciones elctricas, consultar la


seccin Especificaciones del sistema ACQUITY UPLC H-Class.
Conexiones de entrada/salida de eventos del bioSM-FTN:
Conexiones de
seales

Descripcin

Inject Start (Inicio de


inyeccin)

Indica (mediante una salida de cierre de contacto)


que se ha iniciado una inyeccin.

Inject Hold (Retener


inyeccin)

Retrasa la siguiente inyeccin cuando el bioSM-FTN


recibe una entrada de cierre de contacto (proveniente
de otro instrumento del sistema, por ejemplo).

Conectores de la seal del Detector TUV


Si el sistema incluye un detector TUV, se recomienda consultar la ACQUITY
UPLC Tunable Ultraviolet Detector Getting Started Guide (Gua de iniciacin
al Detector UV variable ACQUITY UPLC) para obtener informacin acerca de
los conectores de la seal.

Conectores de la seal del detector PDA


Si el sistema incluye un detector PDA, se recomienda consultar la ACQUITY
UPLC Photodiode Array Detector Getting Started Guide (Gua de iniciacin al
Detector de red de fotodiodos ACQUITY UPLC) para obtener informacin
acerca de los conectores de la seal.

Conectores de la seal del detector ELS


Si el sistema incluye un detector ELS, se recomienda consultar la ACQUITY
UPLC Evaporative Light Scattering Detector Getting Started Guide (Gua de
iniciacin al Detector de dispersin de la luz por evaporacin ACQUITY
UPLC) para obtener informacin acerca de los conectores de la seal.

Conectores de la seal del detector FLR


Si el sistema incluye un detector FLR, se recomienda consultar la Gua de
inicio rpido del Detector de fluorescencia ACQUITY UPLC para obtener
informacin sobre los conectores de la seal.

Conexiones de seales

B-11

Conectar a la fuente de alimentacin


Cada mdulo que compone el sistema requiere una fuente de alimentacin
independiente con conexin a tierra. La conexin a tierra de todas las tomas
de corriente debe ser comn y encontrarse cerca del sistema.
Advertencia: para evitar una descarga elctrica:
Utilizar cable de alimentacin del tipo SVT en los Estados Unidos y
del tipo HAR o superior en Europa. Para obtener informacin sobre
los requisitos de otros pases, contactar con el distribuidor local de
Waters.
Hay que apagar y desconectar cada sistema antes de realizar tareas
de mantenimiento en el instrumento.
Conectar cada instrumento del sistema a una toma de tierra comn.
Para conectarse a la fuente de alimentacin:
Recomendacin: usar un acondicionador de lnea y un sistema de
alimentacin ininterrumpida (UPS) para lograr la mxima estabilidad posible
del voltaje de entrada a largo plazo.
1.

Conectar el extremo hembra del cable de alimentacin al conector del


panel posterior de cada mdulo.

2.

Conectar el extremo macho del cable a una toma de corriente adecuada.


Alternativa: si el sistema incluye el FlexCart opcional, conectar el
extremo hembra de los cables elctricos del FlexCart (que se incluyen en
el kit de inicio) al conector del panel posterior de cada instrumento.
Conectar el extremo macho encapuchado de los cables elctricos del
FlexCart a las regletas de la parte trasera del carro. Finalmente,
conectar el cable de cada regleta a una toma elctrica de pared que
funcione con un circuito propio.

B-12

Conexiones externas

Conexiones elctricas del FlexCart:


Al circuito A
Lnea CA
1 metro

1 metro
Conector IE
C universal
1 me
tro
1m
etr
o

Regletas del
FlexCart

Conmutador
de red

Detector

bioSM-FTN

bioQSM

2 metros

Organizador de
muestras

2 metros

1m
etro

LCD/monitor

CPU

Al circuito B
Lnea CA

Conectar a la fuente de alimentacin

B-13

B-14

Conexiones externas

Consideraciones generales
sobre los eluyentes
Advertencia: para evitar los riesgos implcitos a la manipulacin
de compuestos qumicos, se recomienda cumplir siempre con las
buenas prcticas de laboratorio cuando se trabaje con el sistema,
se manipulan eluyentes o se cambian tubos. Leer las hojas de
datos sobre seguridad de materiales referentes a los eluyentes
que se van a utilizar.
La informacin que aparece en este apndice se aplica slo a los
siguientes instrumentos:

Mdulos del Sistema biolgico ACQUITY UPLC H-Class

Detector PDA ACQUITY UPLC

Detector ACQUITY UPLC PDA e

Detector de absorbancia programable (UV variable) ACQUITY


UPLC

Contenido:
Tema

Pgina

Introduccin

C-2

Recomendaciones sobre los eluyentes

C-3

Propiedades comunes de los eluyentes

C-9

Miscibilidad de los eluyentes

C-11

Estabilizadores de eluyentes

C-13

Viscosidad de los eluyentes

C-13

Seleccin de la longitud de onda

C-14

C-1

Introduccin
Prevenir la contaminacin
Para obtener informacin sobre cmo prevenir la contaminacin, consultar el
documento Controlling Contamination in Ultra Performance LC/MS y
HPLC/MS Systems (Controlar la contaminacin en sistemas Ultra
Performance LC/MS y HPLC/MS), nmero de referencia 715001307, o visitar
http://www.waters.com. Visitar www.waters.com.

Eluyentes limpios
Los eluyentes limpios proporcionan resultados reproducibles y permiten un
mantenimiento mnimo de los mdulos.
Los eluyentes sucios pueden producir ruido en la lnea base y deriva, y pueden
obstruir los filtros del recipiente de eluyente, los filtros de entrada y los
conductos capilares.

Calidad de los eluyentes


Para obtener los mejores resultados posibles se deben utilizar eluyentes de
calidad MS, el requisito mnimo es calidad HPLC. Es necesario filtrar los
eluyentes a travs de un filtro de membrana apropiado.
Recomendacin: comprobar que el eluyente seleccionado es compatible con
las recomendaciones del fabricante o el proveedor del filtro de membrana.

Preparacin de los eluyentes


Mediante una preparacin adecuada de los eluyentes, principalmente
mediante filtracin, se pueden evitar muchos problemas de bombeo.
Recomendacin: siempre se debe utilizar material de vidrio topacio para
inhibir el crecimiento microbiano.

Agua
Se recomienda utilizar nicamente agua procedente de un sistema de
purificacin de agua de alta calidad. Si el sistema de agua no proporciona
agua filtrada, se debe filtrar con un filtro de membrana de 0.2 m antes de
utilizarla.

C-2

Consideraciones generales sobre los eluyentes

Precaucin: el uso de agua al 100% puede producir crecimiento


microbiano. Se recomienda cambiar las soluciones que contengan
agua al 100% cada da. Si se aade una pequea cantidad de eluyente
orgnico (~10%) se evita el crecimiento microbiano.

Utilizar soluciones tampn


Ajustar el pH de los tampones acuosos. Filtrarlos para eliminar el material
insoluble y, a continuacin, mezclarlos con los modificadores orgnicos
adecuados. Tras utilizar un tampn, se debe enjuagar la bomba mediante un
cebado en hmedo de, al menos, cinco volmenes del sistema con agua
destilada o desionizada de calidad HPLC.
Si la bomba ha estado parada durante ms de un da, debe enjuagarse con una
solucin de metanol/agua al 20% para evitar el desarrollo de microorganismos.
Precaucin: algunas soluciones tampn pueden ser incompatibles
con los espectrmetros de masas. Se recomienda consultar la
documentacin que acompaa al instrumento para conocer las
soluciones tampn compatibles.
Indicacin: para evitar las precipitaciones salinas, la concentracin de las
soluciones tampn no voltiles no debe ser superiores a 100 mM.

Eluyentes tamponados
Al utilizar un tampn, se deben elegir reactivos de buena calidad y filtrarlos a
travs de un filtro de membrana de 0.2 m.
Recomendacin: para evitar el crecimiento microbiano, se debe cambiar el
100 % de la fase mvil acuosa cada da.
Consultar tambin: para obtener informacin sobre cmo prevenir la
contaminacin, consultar el documento Controlling Contamination in Ultra
Performance LC/MS y HPLC/MS Systems (Controlar la contaminacin en
sistemas Ultra Performance LC/MS y HPLC/MS), nmero de referencia
715001307, o visitar http://www.waters.com. Visitar www.waters.com.

Recomendaciones sobre los eluyentes


El Sistema biolgico ACQUITY UPLC H-Class ha sido diseado para la
cromatografa en fase inversa y la qumica de columnas ACQUITY UPLC
BEH. Waters ha evaluado la fiabilidad del sistema utilizando los eluyentes de
fase reversa ms habituales.

Recomendaciones sobre los eluyentes

C-3

En esta seccin se indican los eluyentes recomendados para el Sistema


biolgico ACQUITY UPLC H-Class. Contactar con el Servicio tcnico de
Waters llamando al telfono 902 254 254 para determinar si es posible utilizar
eluyentes que no aparezcan en la lista sin afectar gravemente el
funcionamiento del instrumento o del sistema.

Directrices generales sobre los eluyentes


Se deben seguir siempre las siguientes directrices generales sobre eluyentes:

Utilizar material de vidrio topacio para inhibir el crecimiento microbiano.

Filtrar los eluyentes. Las partculas pequeas pueden bloquear los


conductos capilares del sistema. Filtrar los eluyentes tambin mejora el
rendimiento de la vlvula de retencin.

Eluyentes recomendados

Acetonitrilo

Mezclas de acetonitrilo/agua

Isopropanol

Metanol

Mezclas de metanol/agua

Agua

Otros eluyentes
Se pueden utilizar los eluyentes siguientes. Sin embargo, se debe tener en
cuenta que estos eluyentes pueden reducir el tiempo de vida til del
instrumento. Si se utilizan habitualmente los eluyentes de esta lista, se
recomienda instalar el kit de compatibilidad con hexano/THF.

C-4

Tetrahidrofurano (THF)

Hexano

Acetona

Acetato de etilo

Hexafluoroisopropanol (HFIP)

Consideraciones generales sobre los eluyentes

Notas:

1-4% de soluciones acuosas de HFIP para aplicaciones de


oligonucletidos.

El HFIP no se debe utilizar nunca en eluyentes de lavado.

Para obtener informacin adicional, consultar la seccin pgina C-7.


Al cambiar los eluyentes de fase reversa habituales se debe tener en cuenta la
polaridad del eluyente. Aclarar el sistema con un eluyente de polaridad
intermedia (como isopropanol) antes de introducir eluyentes no polares como
el THF o el hexano.

Kit de compatibilidad hexano/THF


El Kit de compatibilidad hexano/THF del sistema ACQUITY UPLC (ponerse
en contacto con Waters para consultar el nmero de referencia) se puede
instalar en los sistemas ACQUITY UPLC con un sistema cerrado de gestin de
desechos. Ha sido diseado para usuarios que necesiten utilizar sus sistemas
con hexano o THF a concentraciones y presiones elevadas, y se recomienda
para muchas aplicaciones con detector ELS en las que se utilice THF a altas
concentraciones en la fase mvil.

Aditivos/modificadores

cido etilendiaminotetraactico al 0.1% (EDTA)

cido heptafluorobutrico al 0.1%

Trietilamina (TEA) al 0.1 %

cido trifluoroactico (TFA) al 0.1 %

cido frmico al 0.2%

cido actico al 0.3%

10 mM de bicarbonato de amonio

10 mM de tampn fosfato

50 mM de acetato amnico

50 mM de hidrxido de amonio

Diluyentes de la muestra

Acetonitrilo

Mezclas de acetonitrilo/agua

Cloroformo

Recomendaciones sobre los eluyentes

C-5

Dimetilformamida (DMF)

Dimetilsulfxido (DMSO)

Isoctano

Isopropanol

Metanol

Mezclas de metanol/agua

Diclorometano

Agua

Recomendacin: evitar el uso de soluciones tampn para el lavado de la


aguja.

Agentes de limpieza
Recomendacin: consultar los procedimientos de limpieza en el documento
Controlar la contaminacin en sistemas Ultra Performance LC/MS y
HPLC/MS (nmero de referencia 715001307) en la pgina web de Waters.
Visitar www.waters.com.

cido fosfrico (30%)

Hidrxido de sodio (1)

cido frmico (10%)

Eluyentes no permitidos
Se deben evitar los siguiente eluyentes:

C-6

Tolueno, cloruro de metilo, triclorobenceno

Eluyentes que contengan halgenos: flor, bromo o yodo.

cidos fuertes. (Utilizarlos slo con una concentracin baja, <5%, a


menos que sea como agentes de limpieza. Evitar utilizar cidos como
fases mviles cuando su pH sea <1.0.)

Los compuestos peroxidables como los teres de calidad UV, THF no


estabilizado, dioxano y diisopropilter. (Si se tienen que utilizar
compuestos peroxidables, es necesario comprobar que se filtran a
travs de xido de aluminio seco para adsorber los perxidos que se
han formado.)

Soluciones que contengan concentraciones elevadas de agentes


complejantes como el cido etilendiaminotetraactico (EDTA).

Consideraciones generales sobre los eluyentes

Recomendaciones para el Sistema biolgico ACQUITY UPLC


H-Class
Contactar con el Servicio tcnico de Waters llamando al telfono 902 254 254
para obtener informacin sobre los procedimientos de limpieza y aclarado del
sistema recomendados.
Lavar las soluciones tampn del sistema con un eluyente acuoso si se va a
dejar el sistema inactivo durante un periodo prolongado (de ms de 24 horas).
Utilizar un eluyente orgnico al 10% - 20% en agua como eluyente de
almacenamiento. Cebar el Sistema de gestin de muestras de flujo a travs
de aguja con eluyente de lavado durante 30 segundos como mnimo y purgar el
eluyente durante al menos 10 ciclos.
Consultar tambin: Controlar la contaminacin en los sistemas Ultra
Performance LC/MS y HPLC/MS (nmero de referencia 715001307) en la
pgina web de Waters. Visitar www.waters.com.
Advertencia: peligro de explosin: los contaminantes de perxido en
THF pueden explotar espontneamente y de forma destructiva
cuando el THF se evapora total o parcialmente.
Advertencia: peligro para la salud: el hexano es una neurotoxina y el
THF puede irritar los ojos, la piel y las membranas mucosas y
producir efectos neurolgicos nocivos. Si se utiliza uno de estos
eluyentes voltiles (o ambos), el Sistema biolgico ACQUITY UPLC
H-Class debe colocarse dentro de una campana extractora o cmara
de preparacin para minimizar la exposicin a los vapores nocivos del
eluyente.

El THF, el hexano, el acetato de etilo y la acetona se pueden utilizar


como fases mviles en los Sistemas biolgicos ACQUITY UPLC H-Class.
Sin embargo, como ocurre con muchos eluyentes que no contienen agua,
pueden acortar la vida til del sistema y el instrumento comparados con
los equipos que utilizan eluyentes de fase reversa habituales. Si se
utiliza habitualmente THF, hexano, acetato de etilo o acetona, se
recomienda instalar el kit de compatibilidad con hexano/THF.

Cuando se utilice THF no estabilizado, se debe comprobar que el


eluyente sea reciente. Las botellas de tetrahidrofurano que se hayan
abierto previamente contienen perxidos, que son contaminantes y
producen deriva en la lnea base.

Recomendaciones sobre los eluyentes

C-7

Por lo general, no se recomienda utilizar cloroformo, diclorometano,


eluyentes halogenados ni tolueno en los Sistemas biolgicos ACQUITY
UPLC H-Class. No obstante, se pueden utilizar estos eluyentes en
disoluciones dbiles (<10%) como aditivos, diluyentes de la muestra o
modificadores.

Ponerse en contacto con el representante de ventas de Waters llamando


al telfono 902 254 254 o con el departamento de asistencia tcnica local
para determinar si un mtodo especfico es adecuado para ser utilizado
con los componentes e instrumentos del Sistema biolgico ACQUITY
UPLC H-Class.

Cuando se utiliza THF o hexano, se deben instalar tubos de acero


inoxidable y minimizar el uso de los componentes de PEEK.

Los eluyentes acuosos no deben permanecer en un sistema cerrado ya


que se utilizan como substrato para las colonias microbianas. Los
microbios pueden obstruir los filtros del sistema y los conductos
capilares. Para evitar su prolilferacin, se debe agregar una pequea
cantidad (~10%) de un eluyente orgnico tales como acetonitrilo o
metanol.

No se recomienda utilizar cido metanosulfnico en los Sistemas


biolgicos ACQUITY UPLC H-Class.

Recomendaciones para el bioQSM

El sistema de lavado de las juntas del mbolo no debe secarse nunca,


especialmente durante las separaciones que utilizan una fase mvil
polar.

El alcohol isoproplico o las mezclas de metanol y agua, como un 20% de


metanol/agua, son eluyentes de lavado de las juntas efectivos para las
mezclas de eluyentes de THF.

Para las aplicaciones de fase reversa, utilizar soluciones de lavado de las


juntas acuosas con un componente orgnico dbil (por ejemplo:
metanol/agua en una proporcin de 1:9).

No utilizar soluciones de lavado de las juntas orgnicas al 100%.

Recomendaciones para el bioSM-FTN

C-8

No utilizar concentraciones de THF o hexano superiores al 10% como


eluyente de purga.

Se admite el uso de diluyentes orgnicos de la muestra habituales como


el dimetilsulfxido (DMSO) y la dimetilformamida (DMF).

Consideraciones generales sobre los eluyentes

Precaucin:
No dejar las soluciones tampn almacenadas en el sistema.
Lavar todas las trayectorias del flujo, incluido el lavado de la aguja,
con una cantidad suficiente de eluyente no tamponado antes de
apagar el sistema.
Si el sistema va a apagarse durante un periodo prolongado (de ms de
24 horas), utilizar metanol al 10% - 20% en agua.
Si se utiliza un eluyente de lavado tamponado, cebarlo durante
30 segundos como mnimo.
El uso de soluciones tampn puede ocasionar la acumulacin de sales
en la aguja y el puerto de lavado, y hacer necesaria una limpieza
peridica.

Recomendaciones sobre el detector


Para transportar una cubeta de flujo a temperaturas por debajo de los 5 C, se
debe llenar con alcohol.

Propiedades comunes de los eluyentes


La siguiente tabla contiene una lista con las propiedades de algunos de los
eluyentes de uso comn en cromatografa.
Propiedades de los eluyentes comunes:
Eluyente

Presin de vapor
mm Hg (Torr)

Punto de
ebullicin
(C)

Punto de
inflamacin
(C)

Acetato de etilo

73 a 20 C

77.11

-4

Acetato de n-butilo

7.8 a 20 C

126.11

22

Acetona

184.5 a 20 C

56.29

-20

Acetonitrilo

88.8 a 25 C

81.6

cido trifluoroactico

97.5 a 20 C

71.8

-3

Agua

17.54 a 20 C

100.0

Alcohol etlico

43.9 a 20 C

78.32

15

Alcohol isobutlico

8.8 a 20 C

107.7

28

Propiedades comunes de los eluyentes

C-9

Propiedades de los eluyentes comunes: (continuacin)


Eluyente

Presin de vapor
mm Hg (Torr)

Punto de
ebullicin
(C)

Punto de
inflamacin
(C)

Alcohol isoproplico

32.4 a 20 C

82.26

12

Alcohol n-butlico

4.4 a 20 C

117.5

37

Alcohol n-proplico

15 a 20 C

97.2

23

241.7

135

Carbonato de propileno

C-10

Ciclohexano

77.5 a 20 C

80.72

-20

Ciclopentano

400 a 20 C

49.26

-7

Clorobenceno

8.8 a 20 C

131.69

28

Cloroformo

158.4 a 20 C

61.15

Cloruro de n-butilo

80.1 a 20 C

78.44

-9

o-diclorobenceno

1.2 a 20 C

180.48

66

Diclorometano

350 a 20 C

39.75

Dicloruro de etileno

83.35 a 20 C

83.48

13

Dimetilacetamida

1.3 a 25 C

166.1

70

N,N-dimetilformamida

2.7 a 20 C

153.0

58

Dimetilsulfxido

0.6 a 25 C

189.0

88

1,4-dioxano

29 a 20 C

101.32

12

ter etlico

442 a 20C

34.55

-45

ter metil-t-butlico

240 a 20 C

55.2

-28

Heptano

35.5 a 20 C

98.43

-4

Hexano

124 a 20 C

68.7

-22

Isoctano

41 a 20 C

99.24

-12

Metanol

97 a 20 C

64.7

11

Metiletilcetona

74 a 20 C

79.64

-9

Metilisobutil cetona

16 a 20 C

117.4

18

N-metilpirrolidona

0.33 a 25 C

202.0

86

Miristato de isopropilo

<1 a 20 C

192.6

164

Pentano

420 a 20 C

36.07

-49

Piridina

18 a 25 C

115.25

20

Consideraciones generales sobre los eluyentes

Propiedades de los eluyentes comunes: (continuacin)


Eluyente

Presin de vapor
mm Hg (Torr)

Punto de
ebullicin
(C)

Punto de
inflamacin
(C)

Tetrahidrofurano

142 a 20 C

66.0

-14

Tolueno

28.5 a 20 C

110.62

1,2,4-triclorobenceno

1 a 20 C

213.5

106

Trietilamina

57 a 25 C

89.5

-9

o-xileno

6 a 20 C

144.41

17

Miscibilidad de los eluyentes


Antes de cambiar los eluyentes, se debe consultar la tabla siguiente para
determinar su miscibilidad. Se deben tener en cuenta los efectos siguientes:

Los cambios en los que se empleen dos eluyentes miscibles se pueden


realizar de manera directa. Los cambios en los que estn involucrados
dos eluyentes que no sean totalmente miscibles (por ejemplo, de
cloroformo a agua), requieren un eluyente intermedio, como el
n-propanol.

La temperatura puede afectar a la miscibilidad de los eluyentes. Si se


est trabajando con una aplicacin a alta temperatura, se debe tener en
cuenta el efecto de la temperatura sobre la solubilidad del eluyente.

Las soluciones tampn disueltas en agua se pueden precipitar cuando se


mezclan con eluyentes orgnicos.

Cuando se cambia de una solucin tampn fuerte a un eluyente orgnico, se


debe enjuagar a fondo el sistema con agua destilada antes de incorporar el
eluyente orgnico.

Miscibilidad de los eluyentes

C-11

Miscibilidad de los eluyentes:


ndice de
Eluyente
polaridad

Viscosidad cP,
20 C
(a 1 atm)

Punto de
Nmero de
ebullicin
miscibilidad
en C
(M)
(a 1 atm)

Valor
de
corte
(nm)

0.0

N-hexano

0.313

68.7

29

1.8

Trietilamina

0.38

89.5

26

4.2

Tetrahidrofurano (THF) 0.55

66.0

17

220

4.3

1-propanol

2.30

97.2

15

210

4.3

2-propanol

2.35

117.7

15

5.2

Etanol

1.20

78.3

14

210

5.4

Acetona

0.32

56.3

15, 17

330

5.5

Alcohol benclico

5.80

205.5

13

5.7

Metoxietanol

1.72

124.6

13

6.2

Acetonitrilo

0.37

81.6

11, 17

190

6.2

cido actico

1.26

117.9

14

6.4

Dimetilformamida

0.90

153.0

12

6.5

Dimetilsulfxido

2.24

189.0

6.6

Metanol

0.60

64.7

12

210

9.0

Agua

1.00

100.0

Utilizacin de los valores de miscibilidad (nmeros-M)


Los valores de miscibilidad (nmeros M) se deben utilizar para predecir la
miscibilidad de un lquido con un eluyente estndar.
Para predecir la miscibilidad de dos lquidos, se debe restar el valor M ms
pequeo del valor M ms grande.

C-12

Si la diferencia entre los dos valores M es de 15 o menos, los dos lquidos


son miscibles en todas las proporciones a 15 C.

Una diferencia de 16 indica una temperatura de solucin crtica entre


25 y 75 C, con 50 C como temperatura ptima.

Si la diferencia es de 17 o ms, los lquidos son inmiscibles o su


temperatura de solucin crtica se encuentra por encima de los 75 C.

Consideraciones generales sobre los eluyentes

Algunos eluyentes son inmiscibles con los eluyentes que se encuentran en


cualquiera de los extremos de la escala de lipofilicidad. Estos eluyentes
reciben un valor M doble.

El primer valor, siempre menor que 16, indica el grado de miscibilidad


con eluyentes muy lipoflicos.

El segundo valor se aplica al extremo opuesto de la escala. Una gran


diferencia entre estos dos valores indica un rango limitado de
miscibilidad.

Por ejemplo, algunos fluorocarburos son inmiscibles con todos los eluyentes
estndar y presentan nmeros M de 0 a 32. Dos lquidos con nmeros M
dobles son generalmente miscibles entre s.
Un lquido se clasifica en el sistema de valores M mediante pruebas de
miscibilidad con una serie de eluyentes estndar. Luego se suma o se resta un
trmino de correccin de 15 unidades del punto de corte de la miscibilidad.

Estabilizadores de eluyentes
No se debe dejar que se sequen los eluyentes que contengan estabilizadores,
como THF con hidroxitolueno butilado (BHT) en la trayectoria de flujo del
sistema. Si la trayectoria de flujo, incluida la cubeta de flujo del detector, est
seca, se puede contaminar con los residuos de los estabilizadores, por lo que
deber someterse a una limpieza profunda para recuperar las condiciones
iniciales.

Viscosidad de los eluyentes


Por lo general, la viscosidad no es importante cuando se trabaja con un solo
eluyente o con una presin baja. No obstante, con una cromatografa en
gradiente, los cambios de viscosidad que tienen lugar cuando se mezclan los
eluyentes en distintas proporciones pueden producir cambios de presin
durante el anlisis. Por ejemplo, una mezcla de agua/metanol 1:1 produce una
presin dos veces mayor que el agua o el metanol por separado.
Si no se conoce hasta qu punto afectarn al anlisis, los cambios de presin se
debe controlar la presin durante el proceso.

Estabilizadores de eluyentes

C-13

Seleccin de la longitud de onda


Las tablas de esta seccin proporcionan los valores lmite de UV para:

Eluyentes comunes

Fases mviles mezcladas comunes

Valores de corte de UV para eluyentes comunes


En la tabla siguiente se muestran los lmites de UV para algunos eluyentes
cromatogrficos habituales (se trata de la longitud de onda a la que la
absorbancia del eluyente es igual a 1 UA). El funcionamiento a una longitud
de onda cercana o por debajo del valor lmite aumenta el ruido de la lnea base
debido a la absorbancia del eluyente.
Longitudes de onda del valor de corte de UV para eluyentes
cromatogrficos comunes:
Eluyente

Valor de corte de
UV (nm)

Acetona

330

Acetonitrilo

190

Dietilamina

275

Etanol

210

ter isoproplico

220

Isopropanol

205

Metanol

205

n-propanol

210

Tetrahidrofurano
(THF)

230

Fases mviles mezcladas


La tabla siguiente contiene los valores de longitud de onda lmite aproximados
para otros eluyentes, soluciones tampn, detergentes y fases mviles. Las
concentraciones de eluyentes representadas son las que se utilizan con ms
frecuencia. Si se desea utilizar una concentracin diferente, se puede
determinar la absorbancia aproximada utilizando la ley de Beer, ya que la
absorbancia es proporcional a la concentracin.

C-14

Consideraciones generales sobre los eluyentes

Valores de corte de la longitud de onda para diferentes fases mviles:

Fase mvil

Valor
de
corte
de UV
(nm)

Fase mvil

Valor
de
corte
de UV
(nm)

cido actico, 1%

230

Cloruro de sodio, 1 M

207

Acetato de amonio, 10 mM

205

Citrato sdico, 10 M

225

Bicarbonato amnico, 10 mM

190

Duodecilsulfato de sodio

190

Polioxietileno (35) lauril ter


(BRIJ 35), 0.1%

190

Formiato sdico, 10 mM

200

3-[(3-colamidopropil)-dimetilamo
nio]-1-propanosulfonato)
(CHAPS) 0.1%

215

Trietilamina, 1%

235

Fosfato diamnico, 50 mM

205

cido trifluoroactico, 0.1%

190

(Etilendiamina) sal disdica del


cido tetraactico (EDTA
disdico), 1 mM

190

TRIS HCl, 20 mM, pH 7.0,


pH 8,0

202,
212

cido 4-(2-hidroxietil)-1-piperazin 225


etanosulfnico (HEPES), 10 mM,
pH 7.6

Triton X-100, 0,1%

240

cido clorhdrico, 0.1%

190

Reactivo A PIC de Waters,


1 vial/litro

200

cido morfolinoetanosulfnico
(MES), 10 mM, pH 6.0

215

Reactivo B-6 PIC de


Waters, 1 vial/litro

225

Fosfato potsico:
monobsico, 10 mM
dibsico, 10 mM

190
190

Acetato sdico, 10 mM

205

Reactivo B-6 PIC de


190
Waters, UV baja, 1 vial/litro
Reactivo D-4 PIC de
Waters, 1 vial/litro

190

Absorbancia de la fase mvil


En esta seccin se muestran las absorbancias a diferentes longitudes de onda
para las fases mviles ms utilizadas. La fase mvil se debe elegir con
precaucin para reducir el ruido de la lnea base.

Seleccin de la longitud de onda

C-15

La mejor fase mvil para una aplicacin determinada es la que es


transparente en las longitudes de onda de deteccin elegidas. Una fase mvil
de estas caractersticas garantiza que cualquier absorbancia se deba
nicamente a la muestra. La absorbancia de la fase mvil tambin reduce el
rango dinmico lineal del detector en la cantidad de absorbancia que cancela
la puesta a cero automtica. La longitud de onda, el pH y la concentracin de
la fase mvil afectan a su absorbancia. En la tabla siguiente se pueden ver
ejemplos de diferentes fases mviles.
Las absorbancias que se muestran en la tabla siguiente se basan en una
longitud de la trayectoria de 10 mm.
Absorbancia de la fase mvil medida con referencia a aire o agua:
Absorbancia en la longitud de onda especificada (nm)
200

205

210

215

220

230

Acetonitrilo

0.05

0.03

0.02

0.01

0.01

Metanol (no
desgasificado)

2.06

1.00

0.53

0.37

Metanol
(desgasificado)

1.91

0.76

0.35

Isopropanol

1.80

0.68

Tetrahidro- 2.44
furano no
estabilizado
(THF, recin
preparado)
Tetrahidrofurano no
estabilizado
(THF,
antiguo)

240

250

260

280

<0.01

0.24

0.11

0.05

0.02

<0.01

0.21

0.15

0.06

0.02

<0.01

0.34

0.24

0.19

0.08

0.04

0.03

0.02

0.02

2.57

2.31

1.80

1.54

0.94

0.42

0.21

0.09

0.05

>2.5

>2.5

>2.5

>2.5

>2.5

>2.5

>2.5

2.5

1.45

2.63

2.61

2.43

2.17

0.87

0.14

0.01

<0.01

Eluyentes

>2.5

cidos y bases
cido
actico, 1%

C-16

2.61

Consideraciones generales sobre los eluyentes

Absorbancia de la fase mvil medida con referencia a aire o agua:


Absorbancia en la longitud de onda especificada (nm)
200

205

210

cido clorh- 0.11


drico, 0.1%

0.02

cido fosfrico, 0.1%

<0.01

215

220

230

240

250

260

280

<0.01

0.06

<0.02 <0.01

cido
1.20
trifluoroactico

0.78

0.54

0.34

0.22

Fosfato
diamnico,
50 mM

1.85

0.67

0.15

0.02

<0.01

Trietilamina, 1%

2.33

2.42

2.50

2.45

2.37

1.96

0.50

0.12

0.04

<0.01

1.88

0.94

0.53

0.29

0.15

0.02

<0.01

Bicarbonato 0.41
de amonio,
10 mM

0.10

0.01

<0.01

Etilendini0.11
trilo, sal
disdica del
cido tetraactico
(EDTA disdico), 1 mM

0.07

0.06

0.04

0.03

0.02

0.02

0.02

0.02

Tampones y sales
Acetato de
amonio,
10 mM

0.03

Seleccin de la longitud de onda

C-17

Absorbancia de la fase mvil medida con referencia a aire o agua:


Absorbancia en la longitud de onda especificada (nm)
200

205

210

215

220

230

240

250

4-(2-hidroxie 2.45
tilo)-1-cido
piperazinataetanosulfnico
(HEPES),
10 mM,
pH 7.6

2.50

2.37

2.08

1.50

0.29

0.03

<0.01

cido morfo- 2.42


linoetanosulfnico
(MES),
10 mM,
pH 6.0

2.38

1.89

0.90

0.45

0.06

<0.01

Fosfato
potsico,
monobsico
(KH2PO4),
10 mM

0.03

<0.01

Fosfato
potsico,
dibsico,
(K2HPO4),
10 mM

0.53

0.16

0.05

0.01

<0.01

Acetato
sdico,
10 mM

1.85

0.96

0.52

0.30

0.15

<0.01

Cloruro
sdico,
1M

2.00

1.67

0.40

0.10

<0.01

Citrato
sdico,
10 mM

2.48

2.84

2.31

2.02

1.49

0.12

0.03

0.02

0.01

C-18

Consideraciones generales sobre los eluyentes

0.03

0.54

260

280

Absorbancia de la fase mvil medida con referencia a aire o agua:


Absorbancia en la longitud de onda especificada (nm)
200

205

210

215

220

230

240

1.00

0.73

0.53

0.33

0.20

0.03

Fosfato
1.99
sdico,
100 mM, pH
6.8

0.75

0.19

0.06

0.02

0.01

Tris HCl,
20 mM, pH
7.0

1.40

0.77

0.28

0.10

0.04

Tris HCl,
20 mM, pH
8.0

1.80

1.90

1.11

0.43

Formiato
sdico,
10 mM

250

260

280

<0.01

0.01

0.01

0.01

<0.01

<0.01

0.13

<0.01

0.02

<0.01

Reactivos PIC de Waters


PIC A,
1 vial/L

0.67

0.29

0.13

0.05

0.03

0.02

0.02

0.02

PIC B6, 1
vial/L

2.46

2.50

2.42

2.25

1.83

0.63

0.07

<0.01

PIC B6, UV
baja,
1 vial/L

0.01

<0.01

PIC D4,
1 vial/L

0.03

0.03

0.03

0.02

0.02

0.02

0.02

0.02

0.01

0.03

Seleccin de la longitud de onda

C-19

Absorbancia de la fase mvil medida con referencia a aire o agua:


Absorbancia en la longitud de onda especificada (nm)
200

205

210

215

220

230

240

BRI J 35, 1% 0.06

0.03

0.02

0.02

0.02

0.01

3-[(3-colami- 2.40
dopropil)dimetilamonio]-1propanosulfonato)
(CHAPS),
0.1%

2.32

1.48

0.80

0.40

Dodecil
0.02
sulfato de
sodio (SDS),
0.1%

0.01

<0.01

4-octilfenol 2.48
polietoxilato
(Triton
X-100), 0.1%

2.50

2.43

0.21

0.14

0.11

250

260

280

<0.01

0.08

0.04

0.02

0.02

0.01

2.42

2.37

2.37

0.50

0.25

0.67

1.42

0.10

0.09

0.06

0.05

0.04

0.04

0.03

Detergentes

Monolaurato de
sorbitano
polioxietileno
(Tween
20), 0.1%

C-20

Consideraciones generales sobre los eluyentes

Index
A

Absorbancias
cidos C-16
Bases C-16
Detergentes C-20
cidos, absorbancias C-16
Aditivos C-5
Advertencia
Descarga elctrica B-12
Advertencia de peligro biolgico A-5
Advertencia de peligro qumico A-5
Advertencia de reventn A-3
Agentes de limpieza C-6
Agua, como eluyente C-2

Bases, absorbancias C-16

Cable de alimentacin B-12


Calculadora, Columnas 2-4
Caudal
Total 3-9
Caudal total 3-9
Cebar
Control de eluyentes 3-10
Control de lavado de juntas 3-10
Control del sistema de gestin de
muestras 3-12
Chip eCord de la columna
Descripcin general 1-11
Clasificacin ISM vi
Columna
Calculadora 2-4
Compatibilidad 1-11
Descripcin general 1-11

Informacin, consultar Chip eCord


de la columna
Composicin porcentual de los
eluyentes 3-9
Composicin, eluyentes 3-9
Conectores de seales de entrada y
salida (I/O)
Detector ELS B-11
Detector FLR B-11
Detector PDA B-11
Sistema de gestin de eluyentes
cuaternario B-9
Sistema de gestin de
muestras B-10
Conexiones
Ethernet, realizar B-4
Fuente de alimentacin B-12
Seales, realizar B-7
Conexiones de seales, realizar B-7
Conexiones elctricas
FlexCart B-13
Conexiones Ethernet, realizar B-4
Configurar
Software Empower 3-8
Consejos de seguridad A-1
Consideraciones sobre la
viscosidad C-13
Consola
Iniciar desde el software
Empower 3-15
Contaminacin, prevenir C-2
Control de la puesta a cero
automtica 3-14
Control de la puesta en marcha 3-10
Control de reinicio

Index-1

Detector de absorbancia
programable
(UV variable) 3-14
Eluyentes binario 3-11
Sistema de gestin de
muestras 3-13
Control del lavado de la aguja 3-13
Cubetas de flujo
Recomendaciones C-9

Detector PDA
Conectores de seales B-11
Conectores de seales de entrada y
salida (I/O) B-11
Panel de control, utilizar 3-13
Detener flujo 3-9
Detergentes, absorbancias C-20
Diluyentes de la muestra C-5
Diluyentes, muestra C-5

Descripcin general
Chip eCord de la columna 1-11
Consideraciones generales sobre los
eluyentes C-2
Destinatarios y finalidad v
Detector
Control de la puesta a cero
automtica 3-14
Longitud de onda 3-13
Recomendaciones sobre los
eluyentes C-9
Detector de absorbancia programable
(UV variable)
Conectores de seales B-11
Conectores de seales de entrada y
salida (I/O) B-11
Lmpara, control de
encendido/apagado 3-13
LED de la lmpara 3-3, 3-14
Panel de control, utilizar 3-13
Detector ELS
Conectores de seales B-11
Conectores de seales de entrada y
salida (I/O) B-11
Detector FLR
Conectores de seales B-11
Conectores de seales de entrada y
salida (I/O) B-11

Index-2

Eluyentes
Calidad HPLC C-2
Composicin 3-9
Consideraciones sobre la
viscosidad C-13
Directrices de calidad C-2
Estabilizadores C-13
Filtrado C-2
Limpios C-2
Miscibilidad C-11
No permitidos C-6
Preparar C-2
Propiedades comunes C-9
Recomendaciones
Detector C-9
Sistema de gestin de eluyentes
cuaternario C-8
Sistema de gestin de
muestras C-8
Recomendados C-3
Sucia C-2
Tamponado C-3
Tetrahidrofurano C-4, C-5, C-6,
C-7, C-8, C-12, C-13, C-14,
C-16
THF C-4, C-5, C-6, C-7, C-8, C-12,
C-13, C-14, C-16

Utilizar con el kit de


hexano/THF C-4
Valor de corte de UV C-14
Valores de miscibilidad C-12
Eluyentes de calidad MS C-2
Eluyentes inflamables A-4
Eluyentes tamponados C-3
Encendido 3-1
Estabilizadores, eluyentes C-13

Fase mvil
Consideraciones sobre la
viscosidad C-13
Longitudes de onda C-15
Fases mviles mezcladas, lmite
de UV C-14
Filtrar eluyentes C-2
Finalidad y destinatarios v
FlexCart
Conexiones elctricas B-13
Fuente de alimentacin,
conexiones B-12
Funcin Start up system 3-5

Detector de absorbancia
programable (UV variable),
lmpara 3-3, 3-14
Monitorizar 3-2
I
Sistema de gestin de eluyentes
cuaternario, flujo 3-3, 3-9
Sistema de gestin de muestras,
anlisis 3-3, 3-11
Indicador LED de anlisis 3-11
Indicador LED de encendido 3-2
Indicador LED de flujo 3-9
ndice de polaridad, eluyentes C-12
Iniciar la consola
Desde el software Empower 3-15

Kit de compatibilidad
Hexano C-5
Tetrahidrofurano (THF) C-5
Kit de compatibilidad de hexano C-5
Kit de compatibilidad hexano/THF C-4

Hexafluoroisopropanol C-4
HFIP C-4
Horno de columnas
Temperatura actual 3-11
Valor programado 3-11

Lmpara
Control de encendido/apagado 3-13
LED de la lmpara 3-14
Longitud de onda
Absorbancias de la fase mvil C-15
Pantalla 3-13
Seleccin C-14
Valores de corte C-14

I/O signal connectors


Detector de absorbancia
programable
(UV variable) B-11
Indicaciones de uso del equipo v, A-6
Indicador LED
Alimentacin 3-2

Miscibilidad
Eluyentes C-11
Valores C-12
Modificadores C-5

Index-3

Nmero de miscibilidad,
eluyentes C-12

Panel de control 3-8


Detector de absorbancia
programable
(UV variable) 3-13
Detector PDA 3-13
Sistema de gestin de eluyentes
cuaternario 3-8
Sistema de gestin de
muestras 3-11
Peligro de descarga elctrica del
espectrmetro de masas A-4
Presin de vapor, eluyentes C-9
Presin del sistema 3-9
Presin, sistema 3-9
Pruebas, puesta en marcha 3-2
Puesta en marcha, pruebas 3-2
Puesta en marcha, Sistema ACQUITY
UPLC 3-5
Punto de ebullicin,
eluyentes C-9, C-12
Punto de inflamacin, eluyentes C-9

Reactivos C-19
Reactivos de PIC C-19
Reactivos de PIC de Waters C-19
Recomendaciones, limpiar sistema C-7
Representante autorizado en la CE vii

Smbolo de precaucin A-6


Smbolos
Advertencia A-2
Elctricos A-7
Manejo A-8

Index-4

Precaucin A-6
Smbolos de advertencia A-2, A-6
Smbolos de manejo A-8
Smbolos elctricos A-7
Sistema
Encendido 3-1
Recomendaciones de limpieza C-7
Sistema ACQUITY UPLC
Calculadora de columnas 2-4
Poner en marcha 3-5
Puesta en marcha 3-10
Sistema de gestin de eluyentes
cuaternario
Conectores de seales B-9
Conectores de seales de entrada y
salida (I/O) B-9
Indicador LED de flujo 3-3, 3-9
Panel de control, utilizar 3-8
Recomendaciones sobre los
eluyentes C-8
Sistema de gestin de muestras
Compartimento de muestras,
temperatura actual 3-11
Compartimento de muestras,
temperatura
programada 3-11
Conectores de seales B-10
Conectores de seales de entrada y
salida (I/O) B-10
Estado 3-11
Indicador LED de anlisis 3-3, 3-11
Panel de control, utilizar 3-11
Recomendaciones sobre los
eluyentes C-8
Restablecer 3-13
Software Empower
Iniciar la consola 3-15
Start up (Puesta en marcha) 3-5

Startup, sistema ACQUITY


UPLC 3-10
Supervisar los indicadores LED de los
mdulos del sistema 3-2

Tecnologa qumica 1-11


Temperatura
Horno de columnas 3-11
Tetrahidrofurano C-4, C-5, C-6, C-7,
C-8, C-12, C-13, C-14, C-16
Kit de compatibilidad C-5
THF C-4, C-5, C-6, C-7, C-8, C-12,
C-13, C-14, C-16
Kit de compatibilidad C-5

Uso previsto vi

V
Valor de corte de longitud de onda,
eluyentes C-12
Valor programado
Horno de columnas 3-11
Valores de absorbancia, visualizacin
de 3-13
Valores de corte de UV C-14
Valores M C-12
Viscosidad, eluyentes C-12

Index-5

Index-6

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