Professional Documents
Culture Documents
Marcas comerciales
ACQUITY, ACQUITY UPLC, UPLC y Waters son marcas registradas de
Waters Corporation. AutoBlend Plus, eCord, Empower, i2Valve, LAC/E,
MassLynx y THE SCIENCE OF WHATS POSSIBLE. son marcas
comerciales de Waters Corporation.
MP35N es una marca registrada de Hamilton Precision Metals.
PEEK es una marca comercial de Victrex Corporation.
TRITON es una marca comercial de Union Carbide Corporation.
TWEEN es una marca comercial de ICI Americas, Inc.
Otras marcas registradas o comerciales pertenecen exclusivamente a sus
respectivos propietarios.
ii
Informacin
Internet
Telfono y fax
Correo convencional
Waters Corporation
34 Maple Street
Milford, MA 01757
EE.UU.
iii
Consideraciones de seguridad
Algunos de los reactivos y las muestras que se utilizan con los instrumentos y
dispositivos de Waters pueden suponer un peligro radiolgico, biolgico o
qumico. Se deben conocer los efectos potencialmente peligrosos de todas las
sustancias con las que se trabaja. Hay que seguir siempre las buenas prcticas
de laboratorio y consultar las recomendaciones del responsable de seguridad
de la organizacin.
Consejos de seguridad
Consultar el Apndice A para ver una lista completa de advertencias y
precauciones.
iv
Smbolos aplicables
Smbolo
Definicin
Fabricante
Representante autorizado en la Comunidad
Europea
Garantiza que un producto fabricado cumple con
todas las directivas aplicables de la Comunidad
Europea.
Marca C de cumplimiento de CEM de Australia.
Confirma que un producto fabricado cumple con
todos los requisitos de seguridad estadounidenses
y canadienses.
Consultar las instrucciones de uso.
Destinatarios y finalidad
La presente gua est dirigida al personal encargado de la instalacin,
funcionamiento y mantenimiento de los instrumentos del Sistema biolgico
ACQUITY UPLC H-Class. Ofrece una descripcin general de la tecnologa y el
funcionamiento del sistema.
Calibracin
Para calibrar los sistemas de cromatografa lquida (LC), se deben seguir
mtodos de calibracin adecuados y utilizar por lo menos cinco estndares
para generar una curva estndar. El intervalo de concentraciones de los
estndares debe incluir la gama completa de muestras de control de calidad,
muestras habituales y muestras atpicas.
Para calibrar los espectrmetros de masas, se debe consultar la seccin de
calibracin de la gua de funcionamiento del instrumento que se desea
calibrar. En los casos en los que el mdulo no vaya acompaado de una gua de
funcionamiento, sino de una gua de mantenimiento y descripcin general,
consultar las instrucciones de calibracin en la Ayuda en lnea del mdulo.
Control de calidad
Se recomienda analizar de forma sistemtica tres muestras de QC que
representen los niveles por debajo de lo normal, normal y por encima de lo
normal de un compuesto. Los resultados del anlisis de estas muestras deben
encontrarse dentro de unos lmites aceptables y se debe evaluar la precisin
entre un da y otro, y entre un anlisis y otro. Es posible que los datos
obtenidos cuando las muestras de QC estn fuera de los lmites no sean
vlidos. Dichos datos no se deben incluir en un informe hasta asegurarse de
que el instrumento funciona satisfactoriamente.
Clasificacin ISM
Clasificacin ISM: ISM Grupo 1, Clase B
Esta clasificacin se asigna segn la CISPR 11, que contiene los requisitos de
los instrumentos industriales cientficos y mdicos (ISM). Los productos del
Grupo 1 contienen energa de radiofrecuencia acoplada conductivamente,
generada o utilizada de forma intencionada, necesaria para el funcionamiento
interno del propio equipo. Los productos de Clase B se pueden utilizar tanto
en instalaciones comerciales como residenciales, y se pueden conectar
directamente a la red de suministro elctrico de bajo voltaje.
vi
Representante autorizado en la CE
+44-161-946-2400
Fax:
+44-161-946-2480
Contacto:
Gerente de calidad
vii
viii
Contenido
Informacin sobre los derechos de autor (copyright) .................................. ii
Marcas comerciales .............................................................................................. ii
Comentarios del cliente ...................................................................................... iii
Contacto con Waters ........................................................................................... iii
Consideraciones de seguridad .......................................................................... iv
Consideraciones especficas para el Sistema biolgico
ACQUITY UPLC H-Class ............................................................................ iv
Consejos de seguridad ........................................................................................ iv
Funcionamiento de este Sistema biolgico ACQUITY UPLC H-Class ...... v
Smbolos aplicables .............................................................................................. v
Destinatarios y finalidad ..................................................................................... v
Uso previsto del Sistema biolgico ACQUITY UPLC H-Class ......................... vi
Calibracin .......................................................................................................... vi
Control de calidad ............................................................................................... vi
Clasificacin ISM ................................................................................................. vi
Clasificacin ISM: ISM Grupo 1, Clase B.......................................................... vi
Representante autorizado en la CE ................................................................ vii
Contenido
1-3
1-5
1-5
1-6
1-6
1-6
ix
3-1
3-1
3-2
3-2
3-2
3-3
3-4
3-5
Contenido
B-3
B-3
B-4
B-4
Contenido
C-2
C-2
C-2
C-2
C-2
C-2
xi
C-3
C-4
C-6
C-7
C-8
C-8
C-9
C-14
C-14
C-14
C-15
xii
Contenido
Pgina
1-1
1-9
1-1
Intervalo de funcionamiento
de la tecnologa UPLC
30
26
22
Partculas de 10 m
(1970)
18
14
Partculas de 5 m
(1980)
10
Partculas de 2.5 m
(2000)
Partculas de 1.7 m
(2004)
1-2
0.040
AU
0.030
0.020
0.010
0.000
0
0.050
6 min
5 m, columna UPLC
0.040
AU
0.030
0.020
0.010
0.000
0
2,8
10
12
14
15 min
Cada separacin se llev a cabo con una columna de 2.1 50 mm. Las
condiciones cromatogrficas de las separaciones son idnticas, a excepcin del
caudal, que ha sido escalado en funcin del tamao de las partculas.
1-3
1-4
Eluyente de lavado
El sistema de lavado utiliza un solo eluyente para limpiar la parte exterior de
la aguja de muestras y cebar el sistema de lavado. El eluyente no entra en la
trayectoria del flujo de inyeccin.
Precaucin:
No dejar las soluciones tampn almacenadas en el sistema.
Lavar todas las trayectorias del flujo, incluido el lavado de la aguja,
con una cantidad suficiente de eluyente no tamponado antes de
apagar el sistema.
Si el sistema va a apagarse durante un periodo prolongado (de ms de
24 horas), utilizar metanol al 10% - 20% en agua.
Si se utiliza un eluyente de lavado tamponado, cebarlo durante
30 segundos como mnimo.
El uso de soluciones tampn puede ocasionar la acumulacin de sales
en la aguja y el puerto de lavado, y hacer necesaria una limpieza
peridica.
Restriccin: evitar el uso de eluyentes de lavado tamponados.
1-5
Eluyente de purga
La funcin principal del eluyente de purga es transportar la muestra a lo largo
de la trayectoria de inyeccin. El eluyente de purga ceba tambin la jeringa de
muestras y la trayectoria de inyeccin. La inyeccin de eluyente en la columna
solo se produce durante la dilucin automtica, cuando se utiliza como
eluyente de dilucin.
Mejoras de software
AutoBlend Plus
AutoBlend Plus permite crear gradientes basados en el pH o en la
concentracin de sales de los eluyentes. Los eluyentes que se utilizan con
AutoBlend Plus se instalan habitualmente en las botellas de eluyente de la
siguientes forma:
El eluyente A es cido.
El eluyente B es bsico.
1-6
Time (Tiempo)
1-7
1-8
POSTERIOR
Bandeja de botellas
Detector
Horno de columnas
bioSM-FTN
bioQSM
1-9
bioQSM
El bioQSM es una bomba de alta presin con mezclador a baja presin. El
Sistema de gestin de eluyentes cuaternario suministra un flujo constante (sin
pulsos) de eluyente a caudales analticos mximos de 1 mL/min a 103 421 kPa
(1 034 bar, 15 000 psi) y hasta 2 mL/min a presiones reducidas mximas de
62 053 kPa (621 bar, 9 000 psi). El bioQSM puede bombear cuatro eluyentes
desgasificados simultneamente mediante una vlvula generadora de
gradientes (GPV) para crear de forma dinmica la composicin especificada.
bioSM-FTN
El bioSM-FTN utiliza un mecanismo de inyeccin directa para inyectar
muestras extradas de placas y viales en una columna cromatogrfica. Los
bucles de extensin opcionales (que se instalan entre la aguja de muestras y la
vlvula de inyeccin) aumentan el volumen de las inyecciones ms all de la
capacidad de la aguja de muestras. El bioSM-FTN tambin puede diluir las
muestras con la opcin Auto-dilution (Dilucin automtica).
Horno de columnas
Las variaciones en la temperatura de la columna pueden cambiar los tiempos
de retencin de los picos y modificar la forma de los picos, con lo que se
incrementa la dificultad a la hora de lograr resultados precisos. Los
compartimentos de columnas ayudan a la hora de garantizar separaciones
precisas y reproducibles mediante el control de la temperatura de la columna.
El compartimento de columnas se calienta a cualquier temperatura entre
20 C (o al menos 5 C por encima de la temperatura ambiente) y 90 C. Un
dispositivo de precalentamiento activo calienta el eluyente entrante antes de
que llegue a la columna. El horno de columnas admite columnas hasta 4 6 mm
de dimetro interno y hasta 150 mm de longitud.
Indicacin: el precalentamiento activo es la configuracin predeterminada del
Sistema biolgico ACQUITY UPLC H-Class.
1-10
Waters ha diseado el LCC para preparar los mdulos del sistema para el
funcionamiento, definir las condiciones iniciales y realizar pruebas
diagnsticas del sistema. Estas funciones bsicas se llevan a cabo
rpidamente, incluso cuando un sistema est fsicamente alejado de la
estacin de trabajo de adquisicin y control del software, o del mdulo
LAC/E32, o cuando el control en red no est disponible.
FlexCart
El elemento opcional FlexCart proporciona una plataforma mvil al Sistema
biolgico ACQUITY UPLC H-Class. Puede contener los mdulos del sistema,
as como el PC y el monitor, y proporciona salidas elctricas para los mdulos
del sistema y una gestin de desechos integrada. Cuando se utiliza con un
espectrmetro de masas, la altura ajustable del carro permite colocar la salida
de la columna cerca de la sonda de entrada, con lo que se minimiza el volumen
muerto del sistema.
Tecnologa de la columna
Las columnas ACQUITY UPLC se rellenan de partculas hbridas de alta
resistencia con puente de etilsiloxano de 1.7 m o partculas de slice de alta
resistencia de 1.8 m que pueden soportar mecnicamente condiciones de alta
presin. El hardware de la columna y los tubos de salida correspondientes
pueden soportar hasta 103 421 kPa (1 034 bar, 15 000 psi). Las dimensiones
de la columna permiten caudales ptimos compatibles con MS y los tubos de
salida correspondientes minimizan el efecto del volumen extra-columna.
Aunque el sistema trabaja con cualquier columna para anlisis HPLC, las
especialmente diseadas para ACQUITY UPLC maximizan su capacidad a
alta presin. Si se comparan con las columnas de HPLC tradicionales, las
columnas ACQUITY UPLC proporcionan una resolucin y una sensibilidad
mayores en el mismo tiempo de anlisis o una resolucin equivalente y una
sensibilidad mayor en tiempos de anlisis menores.
Tecnologa eCord
Las columnas ACQUITY UPLC incluyen un chip eCord de la columna que
registra el historial de uso de la columna. El chip eCord de la columna
interacta con el software del sistema y registra informacin de un mximo de
50 colas de muestras analizadas en la columna. En entornos regulados, el chip
eCord de la columna documenta la columna utilizada en el mtodo de
validacin.
1-11
Certificado de anlisis;
Detectores
La composicin qumica de las partculas pequeas utilizadas en la
cromatografa del sistema UPLC genera picos muy estrechos. Los Detectores
TUV, PDA, ELS y FLR para UPLC y los espectrmetros de masas SQ y TQ
obtienen datos a velocidades lo suficientemente rpidas como para definir
estos picos sin afectar a la sensibilidad o la exactitud de la medicin de los
picos. Estos detectores utilizan un volumen de cubeta de flujo menor,
volmenes de tubos minimizados y conectores especializados para controlar el
ensanchamiento y mantener estos picos estrechos.
Hay cubetas de flujo hechas de materiales biocompatibles, como titanio,
disponibles para los Detectores TUV y PDA para UPLC.
1-12
1-13
1-14
Optimizar el funcionamiento
Seguir los consejos y directrices incluidos en este captulo para
garantizar el funcionamiento ptimo del Sistema ACQUITY.
Contenido:
Tema
Pgina
Directrices generales
2-1
2-4
Dispersin
2-5
Arrastre
2-5
Precisin y exactitud
2-6
2-6
Evitar fugas
2-7
2-7
Directrices generales
Las directrices del Sistema biolgico ACQUITY UPLC H-Class difieren de las
prcticas estndar de HPLC, principalmente debido a las limitaciones del
sistema para la cromatografa de partculas pequeas (de menos de 2 m). La
cromatografa en un sistema UPLC produce una separacin de mayor
resolucin a una escala mucho menor que la de la HPLC. Adems, la duracin
del anlisis es menor con la UPLC, y el consumo de eluyente y muestra se ve
sustancialmente reducido.
El Sistema biolgico de cromatografa ACQUITY UPLC H-Class requiere el
funcionamiento ptimo del Sistema biolgico de gestin de muestras
(bioSM-FTN) puesto que la dispersin de las muestras es ms evidente cuando
se utilizan columnas ms pequeas. La reduccin del tiempo de anlisis
cromatogrfico tambin hace necesaria una gestin eficaz del tiempo de los
ciclos.
Directrices generales
2-1
Durante los anlisis UPLC rpidos, se debe tener en cuenta que un pico de
inters puede ser muy estrecho, de menos de 0.5 segundos. Se recomienda una
velocidad de adquisicin de 25 a 50 puntos a lo largo del pico, lo que
proporciona una buena cuantificacin y representacin de los picos. Las
velocidades de adquisicin superiores a 20 puntos por segundo producen un
aumento del ruido en la lnea base y, en consecuencia, hacen necesario ajustar
las constantes de tiempo del filtro. El caudal ptimo de ACQUITY UPLC es
diferente al de una columna de HPLC convencional. La siguiente tabla
muestra las directrices de funcionamiento para columnas de ACQUITY UPLC
en condiciones isocrticas y de gradiente. Los valores mostrados son
aproximaciones, y la eficacia ptima para una molcula o separacin puede
obtenerse con un caudal o presin diferentes.
Caudales ptimos por intervalo de peso molecular:
Tamao de la
columna
Peso molecular
Caudal
2.1 50 mm
<500
600 L/min
2.1 50 mm
1 000
300 L/min
2.1 50 mm
1 500
150 L/min
2.1 50 mm
2 000
100 L/min
Precaucin:
No dejar las soluciones tampn almacenadas en el sistema.
Lavar todas las trayectorias del flujo, incluido el lavado de la aguja,
con una cantidad suficiente de eluyente no tamponado antes de
apagar el sistema.
Si el sistema va a apagarse durante un periodo prolongado (de ms de
24 horas), utilizar metanol al 10% - 20% en agua.
Si se utiliza un eluyente de lavado tamponado, cebarlo durante
30 segundos como mnimo.
El uso de soluciones tampn puede ocasionar la acumulacin de sales
en la aguja y el puerto de lavado, y hacer necesaria una limpieza
peridica.
Se deben seguir estas recomendaciones generales a la hora de realizar un
anlisis UPLC:
2-2
Optimizar el funcionamiento
2-3
Iniciar los gradientes con algo de contenido orgnico (0.1%, por ejemplo)
para lograr la formacin de un gradiente ms homogneo y predecible
que cuando se inicia sin contenido orgnico.
2-4
Optimizar el funcionamiento
Dispersin
Los sistemas UPLC y los inyectores automticos muestran una dispersin
baja (una caracterstica fija del instrumento que se mide observando la
magnitud del ensanchamiento de picos debida al diseo del sistema).
La cromatografa de partculas pequeas utiliza columnas de alta eficacia
pequeas. Una columna UPLC tpica de 2.1 50 mm tiene un volumen
aproximado de 174 L, comparado con el volumen de 2.5 mL de una columna
HPLC convencional de 4.6 150 mm. Un tamao de columna y partculas
menor requiere un sistema cuya baja dispersin reduzca la dilucin y el
ensanchamiento de la banda, con lo que se conserva la forma, la altura y la
sensibilidad de los picos producidos por la columna de alta eficacia.
El Sistema biolgico ACQUITY UPLC H-Class muestra normalmente un
ensanchamiento de banda de 20 L (el valor depende de la configuracin del
sistema). Las concentraciones mximas para UPLC son ms altas que las
concentraciones para HPLC. Como los efectos de la solubilidad son ms
evidentes en los sistemas de baja dispersin y alta presin, es importante
ajustar la carga de la columna adecuadamente.
Arrastre
Se puede observar arrastre en los sistemas cromatogrficos cuando un analito
anteriormente inyectado aparece como un pico en el cromatrograma de las
siguientes muestras. El arrastre se suele producir cuando una pequea
cantidad de analito permanece en el sistema despus de inyectar una
muestra. El arrastre se puede medir mediante la observacin de los picos de
analito que aparecen cuando se analiza una muestra en blanco justo despus
de una muestra analtica.
Consultar tambin: Especificaciones del Sistema ACQUITY UPLC H-Class
para obtener informacin sobre el arrastre en el Sistema biolgico ACQUITY
UPLC H-Class.
Una causa frecuente del arrastre es el lavado inadecuado del sistema. La
seleccin de un eluyente de lavado adecuado puede reducir el arrastre en un
anlisis particular. El eluyente de lavado debe ser lo suficientemente fuerte
como para disolver cualquier resto de muestra y la duracin del lavado debe
ser la suficiente como para eliminar los residuos del sistema.
Las condiciones de los mtodos tambin pueden afectar en el arrastre. Un
tiempo de retencin demasiado corto en las condiciones finales de un
Dispersin
2-5
gradiente puede producir un fallo a la hora de eliminar todos los analitos del
sistema, en particular si el gradiente es brusco. Es importante lavar por
completo el sistema y volver a equilibrar la columna antes de proceder a un
siguiente anlisis. Se debe tener cuidado a la hora de seleccionar las opciones
Load Ahead (Carga en cabeza) y Loop Offline (Desconexin del bucle). La
inicializacin de estas opciones antes de que la parte ms orgnica del
gradiente llegue hasta la aguja puede hacer que queden residuos de muestras
en el sistema. A veces, un ahorro de tiempo puede dar lugar a una limpieza
inadecuada del sistema.
La hidrofobicidad y la solubilidad de las muestras, as como la limpieza
durante la preparacin de la muestra y la contaminacin causada por las
herramientas de preparacin de la muestra, son factores adicionales a tener
en cuenta a la hora de intentar minimizar el arrastre.
Precisin y exactitud
La precisin del volumen de inyeccin cuando se utiliza el Sistema biolgico
ACQUITY UPLC H-Class es inferior al 1% de RSD para volmenes de
inyeccin entre 0.2 y 10.0 L. La exactitud del volumen de inyeccin del
sistema es de 100 2%. (Consultar las Especificaciones del Sistema ACQUITY
UPLC H-Class para obtener ms informacin).
Optimizar el funcionamiento
Evitar fugas
La prevencin de fugas garantiza que el sistema mantenga una presin
adecuada y una integridad de muestras a lo largo del anlisis.
Las fugas se pueden producir en cualquier conexin de los tubos, en la junta
trmica de estanqueidad o en las juntas, pero son ms frecuentes en las
conexiones de los tubos. Las fugas de baja presin (en el lado de entrada de la
bomba del bioQSM) producen prdida de eluyente e introduccin de aire
durante el ciclo de entrada. Las fugas en las conexiones de alta presin
2
(situadas despus de la vlvula i ) pueden hacer que salga eluyente, pero no
que entre aire.
Para evitar fugas se deben seguir las recomendaciones de Waters para apretar
correctamente las conexiones del sistema. Debe tenerse en cuenta que la
tcnica que se utiliza para volver a apretar las conexiones es distinta a la que
se emplea para instalarlas.
Partculas
El reducido tamao del fritado de la columna (0.2 m) se puede obstruir ms
fcilmente que en el caso de los fritados mayores de las columnas HPLC
(2.0 m). Como resultado, es fundamental que los eluyentes de fase mvil y las
soluciones de muestras estn libres de partculas para el anlisis UPLC.
Consultar la seccin Directrices generales en la pgina 2-1 para obtener
recomendaciones sobre cmo seleccionar y manipular eluyentes.
Evitar fugas
2-7
2-8
Optimizar el funcionamiento
Preparar el sistema
Contenido:
Tema
Pgina
3-1
3-8
3-8
3-15
3-1
2.
3.
Tarjeta CPU
Reloj
3-2
Preparar el sistema
Descripcin
Apagado
Verde continuo
3-3
Descripcin
Verde intermitente
Rojo intermitente
Rojo continuo
3-4
Preparar el sistema
2.
En la consola, hacer clic en Control > Start up system (Control > Puesta
en marcha del sistema).
2.
3-5
Indicaciones:
3-6
Preparar el sistema
4.
5.
Parmetros de la
puesta en marcha del
sistema
Valores
predeterminados
Valores permitidos
0.500 mL/min
Composicin de A, B, C
y D (la suma debe ser
100%)
A: 100%
B,C,D: 0%
A: de 0 a 100%
B: de 0 a 100%
C: de 0 a 100%
D: de 0 a 100%
Temperatura de la
columna
Off
Depende del tipo de mdulo
(Desconectado) de compartimento de
columna
Temperatura de la
muestra
Off
Off (Desactivada), o de 4.0 a
(Desconectado) 40.0 C
Lmpara
3-7
3-8
Preparar el sistema
Estado
Presin del sistema
Caudal
Composicin de eluyentes
Detener flujo
Descripcin
Estado
Caudal
Composicin de eluyentes
(Detener flujo)
3-9
3-10
Inicia la consola.
Preparar el sistema
Ayuda
Estado
Temperatura actual
del compartimento
de muestras
Valor programado
del compartimento de
muestras
Visualizacin de la
Consola ACQUITY UPLC
Estado
3-11
(Visualizacin de la
consola)
Se puede acceder a funciones adicionales haciendo clic con el botn derecho del
ratn en cualquier lugar del panel de control del bioSM-FTN.
Funciones adicionales del panel de control del bioSM-FTN:
Funcin del panel de control Descripcin
Prime (Cebar)
3-12
Preparar el sistema
Reset SM (Reiniciar el
sistema de gestin de
muestras)
Ayuda
Indicador LED
de la lmpara
(encendida/apagada)
Encender/apagar la
lmpara del detector
3-13
La siguiente tabla describe los controles e indicadores del panel de control del
Detector TUV.
Elementos del panel de control del Detector TUV:
Elemento del panel de
control
Descripcin
UA
nm
3-14
Ayuda
Preparar el sistema
3-15
3-16
1.
2.
3.
Preparar el sistema
Consejos de seguridad
Los instrumentos de Waters muestran smbolos de peligro cuya
finalidad es advertir al usuario de los peligros implcitos en relacin con
el funcionamiento y el mantenimiento de los instrumentos. Estos
smbolos aparecen tambin en las guas del usuario correspondientes,
acompaados de un texto que describe los riesgos y la manera de
evitarlos. En este apndice se describen todos los smbolos y
advertencias de seguridad que se aplican a toda la lnea de productos de
Waters.
Contenido:
Tema
Pgina
Smbolos de advertencia
A-2
Smbolo de precaucin
A-6
A-7
A-1
Smbolos de advertencia
Los smbolos de advertencia alertan del riesgo de muerte, lesiones o reacciones
fisiolgicas adversas y graves relacionadas con el uso correcto o indebido de un
instrumento. Cuando se instale, se repare o se utilice un instrumento de
Waters, se deben tener en cuenta todas las advertencias. Waters no asume
ninguna responsabilidad por el incumplimiento de las precauciones de
seguridad por parte de las personas que instalen, reparen o manipulen sus
instrumentos.
A-2
Consejos de seguridad
Advertencias especficas
Las siguientes advertencias pueden aparecer en los manuales del usuario de
determinados instrumentos, as como en las etiquetas de los instrumentos o de
sus componentes.
Advertencia de reventn
Esta advertencia se aplica a los instrumentos de Waters con tubos no
metlicos.
Advertencia: los tubos no metlicos o de polmeros presurizados pueden
reventar. Se recomienda tener en cuenta las precauciones siguientes
cuando se trabaje cerca de estos tubos:
Utilizar proteccin ocular.
Se debe apagar cualquier llama que pueda haber en las
proximidades.
No utilizar tubos que se hayan doblado o sometido a tensiones.
No exponer los tubos no metlicos a compuestos incompatibles, como
tetrahidrofurano (THF), o los cidos ntrico o sulfrico.
Algunos compuestos, como el diclorometano y el dimetilsulfxido,
producen una expansin de los tubos no metlicos, lo que reduce
considerablemente la presin a la que pueden reventar los tubos.
Smbolos de advertencia
A-3
A-4
Consejos de seguridad
Smbolos de advertencia
A-5
Smbolo de precaucin
El smbolo de precaucin significa que el uso correcto o indebido de un
instrumento puede causar daos al instrumento o poner en peligro la
integridad de una muestra. El siguiente smbolo y el mensaje asociado son un
ejemplo tpico de los mensajes que alertan del riesgo de daar el instrumento o
la muestra.
Precaucin: para evitar que se produzcan daos, no utilizar sustancias
abrasivas ni disolventes para limpiar la cubierta en la que se aloja el
instrumento.
Consejos de seguridad
En espera
Corriente continua
Corriente alterna
Terminal de proteccin del conductor
A-7
Smbolos de manejo
Los siguientes smbolos de manejo y su texto adjunto pueden aparecer en las
etiquetas del embalaje exterior de un instrumento o componente de Waters.
No mojar
Frgil
No utilizar ganchos
A-8
Consejos de seguridad
Conexiones externas
En esta seccin se describen las conexiones externas del Sistema
Pgina
B-1
B-3
B-7
B-12
B-1
Bandeja de botellas
Detector
Posicin del regulador de
contrapresin
Horno de columnas
bioSM-FTN
Tubo de PTFE de 1/8
pulg. de dimetro exterior
(paa la lnea de purga)
Tubo, 1/8pulg. de DE,
PTFE (4 conductos para
los eluyentes A, B, C, D,
y 1 conducto para el
lavado de juntas)
bioQSM
Tubo transparente de
PTFE a la vlvula de
desechos, tubo de PEEK a
desechos
Tubo corrugado de tefln
(PTFE)
Tubo de PEEK del
bioQSM al bioSM-FTN
(para la lnea de purga)
B-2
Conexiones externas
Desechos
Bandeja de eluyentes
Detector
Cable externo de
alimentacin y
comunicaciones
Horno de columnas
Interruptor Ethernet
bioSM-FTN
Cables de Ethernet
bioQSM
TP03231
Cable
Ethernet a
PC
Cables de alimentacin
B-3
Conexiones Ethernet
El bioSM-FTN incorpora un conmutador Ethernet interno para conectar un
PC (estacin de trabajo) y un mximo de seis mdulos del Sistema biolgico
ACQUITY UPLC H-Class. Conectar los cables Ethernet blindados de cada
mdulo en las conexiones electrnicas del panel posterior del bioSM-FTN. El
bioSM-FTN est conectado internamente al conmutador Ethernet.
Si el sistema incluye un compartimento de columnas opcional (CM-A),
conectar un mximo de dos compartimentos de columnas auxiliares (CM-Aux)
opcionales al CM-A.
B-4
1.
2.
3.
Conexiones externas
CM-A con 2
columnas largas o
4 columnas cortas
Bandeja
Bandeja
Detector
Detector
CM-A
bioSM-FTN
CM-Aux
2 columnas
largas o
4 columnas
cortas
CM-A
Detector
CM-Aux
bioSM-FTN
bioSM-FTN
CM-A
bioQSM
bioQSM
bioQSM
CM-Aux
B-5
Marrn
Gris
oscuro
Tapn
Vlvula de
seleccin
de salida
Vlvula de
seleccin
de entrada
Verde oscuro
Clip de la columna
Gris claro
Negro
Horno de precalentamiento
activo
Paso
de los
tubos
Compartimento de columnas
Verde claro
Clip de la columna
Horno de precalentamiento
activo
Horno de precalentamiento
activo
Clip de la columna
Morado oscuro
Clip de la columna
Morado claro
Tablero de la mesa
B-6
Conexiones externas
Paso
de los
tubos
Conexiones de seales
Realizar las conexiones de seales
Consultar la ubicacin de las conexiones de seales mostradas en la etiqueta
serigrafiada del panel posterior de cada instrumento.
Material necesario
Destornillador plano
Conector
Cable de seal
Conector
Conexiones de seales
B-7
2.
Conector
Cable de seal
3.
Tuerca de bloqueo
Terminal
de tierra
B-8
Conexiones externas
123456
Descripcin
Conexiones de seales
B-9
123456
B-10
Conexiones externas
Descripcin
Conexiones de seales
B-11
2.
B-12
Conexiones externas
1 metro
Conector IE
C universal
1 me
tro
1m
etr
o
Regletas del
FlexCart
Conmutador
de red
Detector
bioSM-FTN
bioQSM
2 metros
Organizador de
muestras
2 metros
1m
etro
LCD/monitor
CPU
Al circuito B
Lnea CA
B-13
B-14
Conexiones externas
Consideraciones generales
sobre los eluyentes
Advertencia: para evitar los riesgos implcitos a la manipulacin
de compuestos qumicos, se recomienda cumplir siempre con las
buenas prcticas de laboratorio cuando se trabaje con el sistema,
se manipulan eluyentes o se cambian tubos. Leer las hojas de
datos sobre seguridad de materiales referentes a los eluyentes
que se van a utilizar.
La informacin que aparece en este apndice se aplica slo a los
siguientes instrumentos:
Contenido:
Tema
Pgina
Introduccin
C-2
C-3
C-9
C-11
Estabilizadores de eluyentes
C-13
C-13
C-14
C-1
Introduccin
Prevenir la contaminacin
Para obtener informacin sobre cmo prevenir la contaminacin, consultar el
documento Controlling Contamination in Ultra Performance LC/MS y
HPLC/MS Systems (Controlar la contaminacin en sistemas Ultra
Performance LC/MS y HPLC/MS), nmero de referencia 715001307, o visitar
http://www.waters.com. Visitar www.waters.com.
Eluyentes limpios
Los eluyentes limpios proporcionan resultados reproducibles y permiten un
mantenimiento mnimo de los mdulos.
Los eluyentes sucios pueden producir ruido en la lnea base y deriva, y pueden
obstruir los filtros del recipiente de eluyente, los filtros de entrada y los
conductos capilares.
Agua
Se recomienda utilizar nicamente agua procedente de un sistema de
purificacin de agua de alta calidad. Si el sistema de agua no proporciona
agua filtrada, se debe filtrar con un filtro de membrana de 0.2 m antes de
utilizarla.
C-2
Eluyentes tamponados
Al utilizar un tampn, se deben elegir reactivos de buena calidad y filtrarlos a
travs de un filtro de membrana de 0.2 m.
Recomendacin: para evitar el crecimiento microbiano, se debe cambiar el
100 % de la fase mvil acuosa cada da.
Consultar tambin: para obtener informacin sobre cmo prevenir la
contaminacin, consultar el documento Controlling Contamination in Ultra
Performance LC/MS y HPLC/MS Systems (Controlar la contaminacin en
sistemas Ultra Performance LC/MS y HPLC/MS), nmero de referencia
715001307, o visitar http://www.waters.com. Visitar www.waters.com.
C-3
Eluyentes recomendados
Acetonitrilo
Mezclas de acetonitrilo/agua
Isopropanol
Metanol
Mezclas de metanol/agua
Agua
Otros eluyentes
Se pueden utilizar los eluyentes siguientes. Sin embargo, se debe tener en
cuenta que estos eluyentes pueden reducir el tiempo de vida til del
instrumento. Si se utilizan habitualmente los eluyentes de esta lista, se
recomienda instalar el kit de compatibilidad con hexano/THF.
C-4
Tetrahidrofurano (THF)
Hexano
Acetona
Acetato de etilo
Hexafluoroisopropanol (HFIP)
Notas:
Aditivos/modificadores
10 mM de bicarbonato de amonio
10 mM de tampn fosfato
50 mM de acetato amnico
50 mM de hidrxido de amonio
Diluyentes de la muestra
Acetonitrilo
Mezclas de acetonitrilo/agua
Cloroformo
C-5
Dimetilformamida (DMF)
Dimetilsulfxido (DMSO)
Isoctano
Isopropanol
Metanol
Mezclas de metanol/agua
Diclorometano
Agua
Agentes de limpieza
Recomendacin: consultar los procedimientos de limpieza en el documento
Controlar la contaminacin en sistemas Ultra Performance LC/MS y
HPLC/MS (nmero de referencia 715001307) en la pgina web de Waters.
Visitar www.waters.com.
Eluyentes no permitidos
Se deben evitar los siguiente eluyentes:
C-6
C-7
C-8
Precaucin:
No dejar las soluciones tampn almacenadas en el sistema.
Lavar todas las trayectorias del flujo, incluido el lavado de la aguja,
con una cantidad suficiente de eluyente no tamponado antes de
apagar el sistema.
Si el sistema va a apagarse durante un periodo prolongado (de ms de
24 horas), utilizar metanol al 10% - 20% en agua.
Si se utiliza un eluyente de lavado tamponado, cebarlo durante
30 segundos como mnimo.
El uso de soluciones tampn puede ocasionar la acumulacin de sales
en la aguja y el puerto de lavado, y hacer necesaria una limpieza
peridica.
Presin de vapor
mm Hg (Torr)
Punto de
ebullicin
(C)
Punto de
inflamacin
(C)
Acetato de etilo
73 a 20 C
77.11
-4
Acetato de n-butilo
7.8 a 20 C
126.11
22
Acetona
184.5 a 20 C
56.29
-20
Acetonitrilo
88.8 a 25 C
81.6
cido trifluoroactico
97.5 a 20 C
71.8
-3
Agua
17.54 a 20 C
100.0
Alcohol etlico
43.9 a 20 C
78.32
15
Alcohol isobutlico
8.8 a 20 C
107.7
28
C-9
Presin de vapor
mm Hg (Torr)
Punto de
ebullicin
(C)
Punto de
inflamacin
(C)
Alcohol isoproplico
32.4 a 20 C
82.26
12
Alcohol n-butlico
4.4 a 20 C
117.5
37
Alcohol n-proplico
15 a 20 C
97.2
23
241.7
135
Carbonato de propileno
C-10
Ciclohexano
77.5 a 20 C
80.72
-20
Ciclopentano
400 a 20 C
49.26
-7
Clorobenceno
8.8 a 20 C
131.69
28
Cloroformo
158.4 a 20 C
61.15
Cloruro de n-butilo
80.1 a 20 C
78.44
-9
o-diclorobenceno
1.2 a 20 C
180.48
66
Diclorometano
350 a 20 C
39.75
Dicloruro de etileno
83.35 a 20 C
83.48
13
Dimetilacetamida
1.3 a 25 C
166.1
70
N,N-dimetilformamida
2.7 a 20 C
153.0
58
Dimetilsulfxido
0.6 a 25 C
189.0
88
1,4-dioxano
29 a 20 C
101.32
12
ter etlico
442 a 20C
34.55
-45
ter metil-t-butlico
240 a 20 C
55.2
-28
Heptano
35.5 a 20 C
98.43
-4
Hexano
124 a 20 C
68.7
-22
Isoctano
41 a 20 C
99.24
-12
Metanol
97 a 20 C
64.7
11
Metiletilcetona
74 a 20 C
79.64
-9
Metilisobutil cetona
16 a 20 C
117.4
18
N-metilpirrolidona
0.33 a 25 C
202.0
86
Miristato de isopropilo
<1 a 20 C
192.6
164
Pentano
420 a 20 C
36.07
-49
Piridina
18 a 25 C
115.25
20
Presin de vapor
mm Hg (Torr)
Punto de
ebullicin
(C)
Punto de
inflamacin
(C)
Tetrahidrofurano
142 a 20 C
66.0
-14
Tolueno
28.5 a 20 C
110.62
1,2,4-triclorobenceno
1 a 20 C
213.5
106
Trietilamina
57 a 25 C
89.5
-9
o-xileno
6 a 20 C
144.41
17
C-11
Viscosidad cP,
20 C
(a 1 atm)
Punto de
Nmero de
ebullicin
miscibilidad
en C
(M)
(a 1 atm)
Valor
de
corte
(nm)
0.0
N-hexano
0.313
68.7
29
1.8
Trietilamina
0.38
89.5
26
4.2
66.0
17
220
4.3
1-propanol
2.30
97.2
15
210
4.3
2-propanol
2.35
117.7
15
5.2
Etanol
1.20
78.3
14
210
5.4
Acetona
0.32
56.3
15, 17
330
5.5
Alcohol benclico
5.80
205.5
13
5.7
Metoxietanol
1.72
124.6
13
6.2
Acetonitrilo
0.37
81.6
11, 17
190
6.2
cido actico
1.26
117.9
14
6.4
Dimetilformamida
0.90
153.0
12
6.5
Dimetilsulfxido
2.24
189.0
6.6
Metanol
0.60
64.7
12
210
9.0
Agua
1.00
100.0
C-12
Por ejemplo, algunos fluorocarburos son inmiscibles con todos los eluyentes
estndar y presentan nmeros M de 0 a 32. Dos lquidos con nmeros M
dobles son generalmente miscibles entre s.
Un lquido se clasifica en el sistema de valores M mediante pruebas de
miscibilidad con una serie de eluyentes estndar. Luego se suma o se resta un
trmino de correccin de 15 unidades del punto de corte de la miscibilidad.
Estabilizadores de eluyentes
No se debe dejar que se sequen los eluyentes que contengan estabilizadores,
como THF con hidroxitolueno butilado (BHT) en la trayectoria de flujo del
sistema. Si la trayectoria de flujo, incluida la cubeta de flujo del detector, est
seca, se puede contaminar con los residuos de los estabilizadores, por lo que
deber someterse a una limpieza profunda para recuperar las condiciones
iniciales.
Estabilizadores de eluyentes
C-13
Eluyentes comunes
Valor de corte de
UV (nm)
Acetona
330
Acetonitrilo
190
Dietilamina
275
Etanol
210
ter isoproplico
220
Isopropanol
205
Metanol
205
n-propanol
210
Tetrahidrofurano
(THF)
230
C-14
Fase mvil
Valor
de
corte
de UV
(nm)
Fase mvil
Valor
de
corte
de UV
(nm)
cido actico, 1%
230
Cloruro de sodio, 1 M
207
Acetato de amonio, 10 mM
205
Citrato sdico, 10 M
225
Bicarbonato amnico, 10 mM
190
Duodecilsulfato de sodio
190
190
Formiato sdico, 10 mM
200
3-[(3-colamidopropil)-dimetilamo
nio]-1-propanosulfonato)
(CHAPS) 0.1%
215
Trietilamina, 1%
235
Fosfato diamnico, 50 mM
205
190
190
202,
212
240
190
200
cido morfolinoetanosulfnico
(MES), 10 mM, pH 6.0
215
225
Fosfato potsico:
monobsico, 10 mM
dibsico, 10 mM
190
190
Acetato sdico, 10 mM
205
190
C-15
205
210
215
220
230
Acetonitrilo
0.05
0.03
0.02
0.01
0.01
Metanol (no
desgasificado)
2.06
1.00
0.53
0.37
Metanol
(desgasificado)
1.91
0.76
0.35
Isopropanol
1.80
0.68
Tetrahidro- 2.44
furano no
estabilizado
(THF, recin
preparado)
Tetrahidrofurano no
estabilizado
(THF,
antiguo)
240
250
260
280
<0.01
0.24
0.11
0.05
0.02
<0.01
0.21
0.15
0.06
0.02
<0.01
0.34
0.24
0.19
0.08
0.04
0.03
0.02
0.02
2.57
2.31
1.80
1.54
0.94
0.42
0.21
0.09
0.05
>2.5
>2.5
>2.5
>2.5
>2.5
>2.5
>2.5
2.5
1.45
2.63
2.61
2.43
2.17
0.87
0.14
0.01
<0.01
Eluyentes
>2.5
cidos y bases
cido
actico, 1%
C-16
2.61
205
210
0.02
<0.01
215
220
230
240
250
260
280
<0.01
0.06
<0.02 <0.01
cido
1.20
trifluoroactico
0.78
0.54
0.34
0.22
Fosfato
diamnico,
50 mM
1.85
0.67
0.15
0.02
<0.01
Trietilamina, 1%
2.33
2.42
2.50
2.45
2.37
1.96
0.50
0.12
0.04
<0.01
1.88
0.94
0.53
0.29
0.15
0.02
<0.01
Bicarbonato 0.41
de amonio,
10 mM
0.10
0.01
<0.01
Etilendini0.11
trilo, sal
disdica del
cido tetraactico
(EDTA disdico), 1 mM
0.07
0.06
0.04
0.03
0.02
0.02
0.02
0.02
Tampones y sales
Acetato de
amonio,
10 mM
0.03
C-17
205
210
215
220
230
240
250
4-(2-hidroxie 2.45
tilo)-1-cido
piperazinataetanosulfnico
(HEPES),
10 mM,
pH 7.6
2.50
2.37
2.08
1.50
0.29
0.03
<0.01
2.38
1.89
0.90
0.45
0.06
<0.01
Fosfato
potsico,
monobsico
(KH2PO4),
10 mM
0.03
<0.01
Fosfato
potsico,
dibsico,
(K2HPO4),
10 mM
0.53
0.16
0.05
0.01
<0.01
Acetato
sdico,
10 mM
1.85
0.96
0.52
0.30
0.15
<0.01
Cloruro
sdico,
1M
2.00
1.67
0.40
0.10
<0.01
Citrato
sdico,
10 mM
2.48
2.84
2.31
2.02
1.49
0.12
0.03
0.02
0.01
C-18
0.03
0.54
260
280
205
210
215
220
230
240
1.00
0.73
0.53
0.33
0.20
0.03
Fosfato
1.99
sdico,
100 mM, pH
6.8
0.75
0.19
0.06
0.02
0.01
Tris HCl,
20 mM, pH
7.0
1.40
0.77
0.28
0.10
0.04
Tris HCl,
20 mM, pH
8.0
1.80
1.90
1.11
0.43
Formiato
sdico,
10 mM
250
260
280
<0.01
0.01
0.01
0.01
<0.01
<0.01
0.13
<0.01
0.02
<0.01
0.67
0.29
0.13
0.05
0.03
0.02
0.02
0.02
PIC B6, 1
vial/L
2.46
2.50
2.42
2.25
1.83
0.63
0.07
<0.01
PIC B6, UV
baja,
1 vial/L
0.01
<0.01
PIC D4,
1 vial/L
0.03
0.03
0.03
0.02
0.02
0.02
0.02
0.02
0.01
0.03
C-19
205
210
215
220
230
240
0.03
0.02
0.02
0.02
0.01
3-[(3-colami- 2.40
dopropil)dimetilamonio]-1propanosulfonato)
(CHAPS),
0.1%
2.32
1.48
0.80
0.40
Dodecil
0.02
sulfato de
sodio (SDS),
0.1%
0.01
<0.01
4-octilfenol 2.48
polietoxilato
(Triton
X-100), 0.1%
2.50
2.43
0.21
0.14
0.11
250
260
280
<0.01
0.08
0.04
0.02
0.02
0.01
2.42
2.37
2.37
0.50
0.25
0.67
1.42
0.10
0.09
0.06
0.05
0.04
0.04
0.03
Detergentes
Monolaurato de
sorbitano
polioxietileno
(Tween
20), 0.1%
C-20
Index
A
Absorbancias
cidos C-16
Bases C-16
Detergentes C-20
cidos, absorbancias C-16
Aditivos C-5
Advertencia
Descarga elctrica B-12
Advertencia de peligro biolgico A-5
Advertencia de peligro qumico A-5
Advertencia de reventn A-3
Agentes de limpieza C-6
Agua, como eluyente C-2
Index-1
Detector de absorbancia
programable
(UV variable) 3-14
Eluyentes binario 3-11
Sistema de gestin de
muestras 3-13
Control del lavado de la aguja 3-13
Cubetas de flujo
Recomendaciones C-9
Detector PDA
Conectores de seales B-11
Conectores de seales de entrada y
salida (I/O) B-11
Panel de control, utilizar 3-13
Detener flujo 3-9
Detergentes, absorbancias C-20
Diluyentes de la muestra C-5
Diluyentes, muestra C-5
Descripcin general
Chip eCord de la columna 1-11
Consideraciones generales sobre los
eluyentes C-2
Destinatarios y finalidad v
Detector
Control de la puesta a cero
automtica 3-14
Longitud de onda 3-13
Recomendaciones sobre los
eluyentes C-9
Detector de absorbancia programable
(UV variable)
Conectores de seales B-11
Conectores de seales de entrada y
salida (I/O) B-11
Lmpara, control de
encendido/apagado 3-13
LED de la lmpara 3-3, 3-14
Panel de control, utilizar 3-13
Detector ELS
Conectores de seales B-11
Conectores de seales de entrada y
salida (I/O) B-11
Detector FLR
Conectores de seales B-11
Conectores de seales de entrada y
salida (I/O) B-11
Index-2
Eluyentes
Calidad HPLC C-2
Composicin 3-9
Consideraciones sobre la
viscosidad C-13
Directrices de calidad C-2
Estabilizadores C-13
Filtrado C-2
Limpios C-2
Miscibilidad C-11
No permitidos C-6
Preparar C-2
Propiedades comunes C-9
Recomendaciones
Detector C-9
Sistema de gestin de eluyentes
cuaternario C-8
Sistema de gestin de
muestras C-8
Recomendados C-3
Sucia C-2
Tamponado C-3
Tetrahidrofurano C-4, C-5, C-6,
C-7, C-8, C-12, C-13, C-14,
C-16
THF C-4, C-5, C-6, C-7, C-8, C-12,
C-13, C-14, C-16
Fase mvil
Consideraciones sobre la
viscosidad C-13
Longitudes de onda C-15
Fases mviles mezcladas, lmite
de UV C-14
Filtrar eluyentes C-2
Finalidad y destinatarios v
FlexCart
Conexiones elctricas B-13
Fuente de alimentacin,
conexiones B-12
Funcin Start up system 3-5
Detector de absorbancia
programable (UV variable),
lmpara 3-3, 3-14
Monitorizar 3-2
I
Sistema de gestin de eluyentes
cuaternario, flujo 3-3, 3-9
Sistema de gestin de muestras,
anlisis 3-3, 3-11
Indicador LED de anlisis 3-11
Indicador LED de encendido 3-2
Indicador LED de flujo 3-9
ndice de polaridad, eluyentes C-12
Iniciar la consola
Desde el software Empower 3-15
Kit de compatibilidad
Hexano C-5
Tetrahidrofurano (THF) C-5
Kit de compatibilidad de hexano C-5
Kit de compatibilidad hexano/THF C-4
Hexafluoroisopropanol C-4
HFIP C-4
Horno de columnas
Temperatura actual 3-11
Valor programado 3-11
Lmpara
Control de encendido/apagado 3-13
LED de la lmpara 3-14
Longitud de onda
Absorbancias de la fase mvil C-15
Pantalla 3-13
Seleccin C-14
Valores de corte C-14
Miscibilidad
Eluyentes C-11
Valores C-12
Modificadores C-5
Index-3
Nmero de miscibilidad,
eluyentes C-12
Reactivos C-19
Reactivos de PIC C-19
Reactivos de PIC de Waters C-19
Recomendaciones, limpiar sistema C-7
Representante autorizado en la CE vii
Index-4
Precaucin A-6
Smbolos de advertencia A-2, A-6
Smbolos de manejo A-8
Smbolos elctricos A-7
Sistema
Encendido 3-1
Recomendaciones de limpieza C-7
Sistema ACQUITY UPLC
Calculadora de columnas 2-4
Poner en marcha 3-5
Puesta en marcha 3-10
Sistema de gestin de eluyentes
cuaternario
Conectores de seales B-9
Conectores de seales de entrada y
salida (I/O) B-9
Indicador LED de flujo 3-3, 3-9
Panel de control, utilizar 3-8
Recomendaciones sobre los
eluyentes C-8
Sistema de gestin de muestras
Compartimento de muestras,
temperatura actual 3-11
Compartimento de muestras,
temperatura
programada 3-11
Conectores de seales B-10
Conectores de seales de entrada y
salida (I/O) B-10
Estado 3-11
Indicador LED de anlisis 3-3, 3-11
Panel de control, utilizar 3-11
Recomendaciones sobre los
eluyentes C-8
Restablecer 3-13
Software Empower
Iniciar la consola 3-15
Start up (Puesta en marcha) 3-5
Uso previsto vi
V
Valor de corte de longitud de onda,
eluyentes C-12
Valor programado
Horno de columnas 3-11
Valores de absorbancia, visualizacin
de 3-13
Valores de corte de UV C-14
Valores M C-12
Viscosidad, eluyentes C-12
Index-5
Index-6