Universidad de Chile

Departamento de Microbiologa
Agentes Vivos de la Enfermedad

Informe de laboratorio de microbiologa:

Actividad nmero 6

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Introduccin
Uno de los ms grandes avances en la medicina ha sido el descubrimiento de los antibiticos
a principios del siglo XX; la variedad de mecanismos de accin que poseen nos permiten
combatir infecciones bacterianas que en el pasado solan ser mortales en la poblacin. Sin
embargo, existen microorganismos que al encontrarse con un hospedero sano no causan
enfermedad, ejemplos de estas son las especies Staphylococcus Aureus y Pseudomona
aeruginosa.
En el presente informe se plantean los resultados de un antibiograma de las bacterias antes
mencionadas frente a distintos antibiticos con diversos mecanismos de accin. Mediante un
antibiograma (tambin conocido como Test de Difusin) se busca registrar la susceptibilidad
bacteriana frente a diversos antimicrobianos, a travs del surgimiento de halos de inhibicin
(o la falta de estos) y su posterior medicin de tamao, que los clasificar en especies
sensibles, medianamente sensibles y resistentes segn la tabla CLSI 2013, proporcionada
para la actividad.
La tcnica utilizada en el antibiograma es conocida como mtodo de Kirby-Bauer, y
corresponde a un tipo de difusin en disco. El disco contiene una cantidad especfica de
antimicrobiano (medido en g/ml), que es colocada sobre el agar con especies bacterianas.
Posteriormente el antibitico difunde del disco al medio generando o no, el halo de
inhibicin1. Esta tcnica es altamente utilizada en el estudio de Pseudomona aeruginosa y
Staphylococcus spp. , adecundose a los microorganismos utilizados durante la actividad.

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Materiales y mtodos
Materiales
-

Dos placas agar de tipo Mller-Hinton

Cultivo lquido estandarizado (Mac Farland 0.5) de bacterias Staphylococcus Aureus y

Pseudomona aeruginosa
Cinco sensidiscos para muestra S. Aureus
Seis sensidiscos para muestra P. Aeruginosa
Dos pinzas
Tabla CLSI 2013

Mtodo
Susceptibilidad antimicrobiana por difusin in vitro utilizando el mtodo de Kirby-Bauer, a
base de difusin en discos antimicrobianos (sensidiscos).
Procedimiento
-

Sembrar uniformemente en dos agar Mller-Hinton, un cultivo estandarizado de P.

Aeruginosa y uno de S. Aureus.

Disponer de forma equidistante los sensidiscos correspondiente a cada cultivo sobre

el agar.
Incubar ambos agar a 37C durante 24 horas.
Medir halos de inhibicin generados e interpretarlos segn recomendaciones CLSI.

Resultados
Para la bacteria Pseudomona Aeruginosa se presentan tres zonas de inhibicin ntidas
correspondiente a antimicrobianos ATM, AK e IMI. A la vez existen dos zonas de inhibicin

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difusa: MEM y CAZ. En relacin a la medida de los halos, los resultados fueron los
siguientes:
Sensidiscos
Meropenem
Ceftazidima
Imipenem
Amikacina
Aztreonam
Segn la tabla proporcionada

Sigla
MEM
CAZ
IMI
AK
ATM
en la actividad proveniente de

Halo (mm)
16
25
21
19
30
CLSI (Clinical and Laboratory

Standards Institute) del ao 2013, Pseudomona Aeruginosa present sensibilidad con los
antimicrobianos Ceftazidima, Imipenem, Amikacina y Aztreonam. Sin embargo, la bacteria
present sensibilidad intermedia frente al antimicrobiano Meropenem.
Durante el cultivo, P. Aeruginosa liber un pigmento verdoso hidrosoluble correspondiente
mayormente a pioverdina 2.
En el agar Mller-Hinton cultivado con Staphylococcus Aureus, se disponen dos halos de
inhibicin ntidos (GM y FOX) y cuatro de disposicin ms difusa (T, DA, E y TS). Los
resultados de la medicin de halos fueron los siguientes:
Sensidiscos
Sigla
Tetraciclina
T
Clindamicina
DA
Eritromicina
E
Gentamicina
GM
Sulfametoxazol-trimetopim
TS
Cefoxitina
FOX
Segn la tabla CLSI 2013, Staphylococcus Aureus present
antimicrobianos utilizados en este cultivo.

Halo (mm)
28
32
28
26
28
23
sensibilidad frente a todos los

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Fotografa de los resultados obtenidos en los cultivos de P. Aeruginosa (Izquierda) y S.

Aureus (derecha).
Discusin y conclusiones
P. Aeruginosa corresponde a un bacilo gram negativo, que en cultivo in vitro produce
pigmentos caractersticos como piocianina o pioverdina. Es un microorganismo no fastidioso
catalasa (+), oxidasa (+) y citrato (+) 3. Es un microorganismo ambiental, principal causante
de infecciones intrahospitalarias.
En relacin al cultivo de Pseudomona Aeruginosa, se proporcionaron cuatro antimicrobianos
de tipo -lactnidos (actan inhibiendo sntesis de pared celular): Meropenem, Imipenem,

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Ceftazidima y Aztreonam. Dentro de las subclasificaciones de los -lactnidos, los
dos primeros correponden a carbopenmicos, el tercero a cefalosporina de tercera
generacin y la ltima a un antimicrobiano monocclico. Amikacina corresponde a un
antibitico de tipo aminoglucosdico, por tanto acta sobre la sntesis proteica a nivel
ribosomal 30S.
La cepa cultivada de P. Aeruginosa es menormente sensible a los -lactnidos de tipo
carbopenmicos, este comportamiento puede estar explicado gracias a mecanismos de
resistencia por parte de esta, donde destaca la prdida de permeabilidad en la membrana
externa debido a la disminucin de porinas OprD, utilizadas como puente de entrada en los
carbapenmicos. Si disminuyen entonces estas porinas, disminuye la sensibilidad a este tipo
de -lactnidos 4. Su menor sensibilidad puede explicarse, a la vez, por presencia de betalactamasas que hidrolicen el antibitico o por el desarrollo de sistemas de expulsin de tipo
MexAB-OprM, los cuales eliminan Meropenem, pero no Imipenem, lo que explicara el por
qu la cepa fue ms sensible a Imipenem que a Meropenem 4.
La Ceftazidima, siendo un -lactnido como los dos antimicrobianos anteriores, en la cepa
obtuvo mayor sensibilidad en relacin a los anteriores, ya que al ser una cefalosporina de
tercera generacin, su actividad frente a microorganismos gram negativo in vitro es ms
eficiente en comparacin a cefalosporinas de primera o segunda generacin 5.
La cepa de Pseudomona present mayor sensibilidad en -lactnidos con el Aztreonam. Este
resultado puede explicarse en el caso de que la cepa no posea un mecanismo de resistencia
contra este antimicrobiano, como uso de beta-lactamasas 4.
La Amikacina es el nico antimicrobiano aminoglucsido en el Antibiograma y Pseudomona
presento sensibilidad frente a este. Una explicacin frente a este resultado es la falta de
enzimas que modifiquen la accin del antimicrobiano o la falta del sistema de expulsin
MexXY-OprM, presente en algunas cepas descritas en investigacin 4.
En relacin a Staphylococcus Aureus, corresponde a cocos gram positivo agrupados como
racimo de uvas. Son bacterias no fastidiosas, no mviles, que no forman esporas o cpsula y
se definen como catalasa (+). Dentro del cuerpo puede encontrarse colonizando la regin

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nasal, sin embargo su localizacin en otros lugares anatmicos es causa de
infecciones que van desde foliculitis hasta meningitis, endocarditis o bacteriemias 6.
Durante su cultivo se proporcionaron seis antimicrobianos: Tetraciclina (inhibe sntesis
proteica a nivel ribosomal 30S), Clindamicina (inhibe sntesis proteica a nivel ribosomal 50S),
Eritromicina (similar a Clindamicina), Gentamicina (similar a Clindamicina), Sulfametoxazoltrimetopin (de tipo sulfamida, acta sobre precursores del cido flico, disminuyendo su
produccin) y Cefoxitina (cefalosporina de tercera generacin).
La cepa cultivada de S. Aureus mostr gran sensibilidad contra antimicrobianos que afectan
la sntesis proteica (Tetraciclina, Clindamicina, Eritromicina y Gentamicina). Semejante
resultado es esperable ya que truncan la formacin de protenas, impidiendo en algunos
casos la replicacin (Bacteriostticas, como Tetraciclina) y en otros la formacin de protenas
vitales (Bactericidas, como la Gentamicina). Se infiere que la cepa no posee mecanismos de
resistencia contra estos antimicrobianos.
El cultivo fue muy sensible contra Sulfametoxazol-trimetopin (tambin conocido como
Cotrimoxazol), que consta de una accin sinrgica entre dos antimicrobianos que actan
inhibiendo competitivamente la produccin de cido flico, metabolito importante a la hora de
producir DNA/RNA y aminocidos como metionina. Como el cultivo se mostr altamente
sensible, se infiere que tampoco existen mecanismos de resistividad eficientes contra este
antimicrobiano.
S. Aureus tambin se present sensible contra cefoxitina. Su respuesta se concibe gracias a
su accin especfica contra la sntesis de pared celular, elemento importante en la estructura
de gram positivos. Cabe destacar que la sensibilidad contra cefoxitina no permite englobar
sensibilidad frente a cualquier -lactnido, ya que la cefoxitina pertenece al subgrupo de
cefalosporinas de segunda generacin 5. Uno de los objetivos en esta generacin de
cefalosporinas es el enfrentar las infecciones producidas por S. Aureus meticilino resistentes
(SAMR), preponderante en ambientes intrahospitalarios 7.
El nacimiento de colonias SAMR viene desde los primeros microorganismos resistentes a
penicilina en 1946, propicindose el uso de penicilinas semi-sintticas como la meticilina.

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Hacia 1960, ya se describen bacterias resistentes a este antimicrobiano, entrando
en accin cefalosporinas de primera y segunda generacin en el tratamiento de SAMR 8.
A modo de conclusin, existen grandes probabilidades de que la cepa de Pseudomona
Aeruginosa posea mecanismos de resistividad contra -lactnidos de subtipo Carbapenems
(sistemas de expulsin de tipo MexAB-OprM). Sin embargo, al presentar mayor sensibilidad
contra los -lactnidos restantes, es probable que la cepa no utilice -lactamasas u porinas.
En relacin a Staphylococcus Aureus, es probable que no existan mecanismos de
resistividad contra los antimicrobianos empleados. Segn los antimicrobianos usados,
tampoco podemos englobar a la cepa como SAMR, ya que no tenemos datos sobre
sensibilidad en relacin a otros -lactnidos como penicilina o meticilina.
A la vez, existen casos donde resultados in vitro de S. Aureus difieren de su efectividad
clnica. Un ejemplo son los SAMR, que aunque se muestran resistentes a -lactnidos
clnicamente, pueden presentar sensibilidad frente a ellos por mtodo in vitro9.
Es importante destacar que los resultados obtenidos dependen de factores como la
concentracin del Antimicrobiano, su solubilidad en agua, pH y carga del agar, entre otros.
Los resultados obtenidos del antibiograma nos aportan solo datos cualitativos, por tanto no
nos permite determinar valores como concentracin inhibitoria mnima (CIM) o concentracin
inhibitoria bactericida (CIB).

Bibliografa
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