Uso de Eisenia foetida como bioindicador de la toxicidad de ripios de perforacin

base aceite generados en la industria petrolera

Eisenia foetida use as bioindicator toxicity of base oil drilling fluids cuttings generated in
the oil industry
Karoswel Castrillo1, Vctor A. Otahola2, Noris Bello Gonzlez1, Jess Otahola1 y
Ana Arenas3
1

Departamento de Ingeniera de Petrleo, Universidad de Oriente, Ncleo de Monagas,

Maturn, estado Monagas. 2 Escuela de Ingeniera Agronmica. Universidad de Oriente, Ncleo
de Monagas, Maturn, estado Monagas. Tlf 0414-7640661. votahola@gmail.com. 3 Ministerio del
Poder Popular para el Ambiente y los Recursos Naturales. Oficina Maturn, estado Monagas
Recibido: 22/08/2013

Aceptado: 05/12/2013

RESUMEN
Los ripios impregnados con fluidos base aceite producidos en el proceso de perforacin
de pozos petroleros son muy perjudiciales al ambiente dada su alta concentracin de
aceites, grasas, metales pesados, entre otros compuestos. En los ltimos aos las
exigencias de cumplimiento de medidas socio ambientales han obligado el desarrollo de
tecnologas con miras a reducir los impactos ambientales asociados a la disposicin
final de los ripios base aceite. Aunque la evaluacin de estos desechos se hace solo
desde el punto de vista fsico-qumico, llevando los niveles hasta lo exigido por la
legislacin ambiental venezolana, se desconoce el efecto que stos causan a la
microflora y microfauna de los suelos. Se desarroll un experimento con el objeto de
evaluar la sobrevivencia y crecimiento de la lombriz roja californiana al ser sometida a
diferentes concentraciones de ripios de perforacin base aceite, con mezclas de suelo
de la estacin experimental de sabana de la Universidad de Oriente y la adicin de
estircol equino como fuente de alimentacin de las lombrices. Se probaron nueve
tratamientos producto de la combinacin p/p de las proporciones suelo:ripio (2:1; 3:1 y
4:1), con tres dosis de estircol equino (5; 10 y 20%) bajo un diseo de bloques al azar
en arreglo factorial con tres repeticiones. Los datos se analizaron con ANAVA y las
diferencias entre los promedios mediante MDS al 0,05%. Los resultados obtenidos
indican mayor sobrevivencia y peso de las lombrices en las dosis menores de los ripios
de perforacin (suelo:ripio 4:1), especialmente cuando el porcentaje de estircol fue
mayor del 10%. El nmero y el peso de las lombrices disminuyen considerablemente
pasados los 45 das despus de la siembra, especialmente con dosis bajas de estircol.
Se obtuvieron valores de 24,33; 19,89 y 12,00 lombrices por tratamiento a los 45 das
de iniciado el experimento para los tratamientos con relaciones suelo:ripio 4:1, 3:1 y 2:1
respectivamente, permitiendo concluir que la relacin 2:1 de suelo:ripio afecta la
multiplicacin de las lombrices, independientemente del contenido de estircol equino
utilizado, causando una mortalidad por encima del 50 % de las lombrices, as mismo, la
relacin suelo:fluido 4:1 no afecta la poblacin de lombrices, siempre que tengan
suficiente fuente de alimentos en el sustrato. Los resultados indican la factibilidad de
utilizar esta metodologa en la evaluacin biolgica de los desechos.
Palabras clave: Eisenia foetida, ripios de perforacin, indicador biolgico

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ABSTRACT
The cuttings impregnated with oil based fluids produced in the process of oil drilling are
very harmful to the environment due to its high concentration of oils, grease, heavy
metals, among other compounds. In recent years the demands of social and
environmental compliance measures have forced the development of technologies
aimed at reducing the environmental impacts associated with the disposal of rubble
base oil. Although assessment of these wastes is done only from the point of view
physicochemical, leading to levels required by the Venezuelan environmental legislation
, the effect they cause to the microflora and microfauna of the soil is unknown. An
experiment was developed in order to evaluate the survival and growth of the California
red worm when subjected to different concentrations of gravel base oil drilling, with
mixtures of soil from the experimental station savannah of the University of Oriente and
adding horse dung as a source of power worms. With three doses of horse dung (5; 10
and 20 % ) under a block design: gravel ( 2:1; 3:1 and 4:1) nine treatments derived from
a combination w/w ratios soil tested randomized factorial arrangement with three
replications. Data were analyzed with ANOVA and the difference between the averages
0.05% by MDS. The results indicate greater survival and weight of earthworms on lower
doses of drill cuttings (soil:gravel 4:1), especially when the percentage of manure was
greater than 10 %. The number and weight of earthworms decreased significantly to
spend 45 days after planting, especially with low doses of manure. Values were
obtained 24.33; 19.89 and 12.00 worms by treatment at 45 days into the experiment for
soil treatments relations: gravel 4:1, 3:1 and 2:1 respectively. These data support the
conclusion that the 2:1 soil:gravel affects the growth of earthworms , regardless of the
content of horse dung used , causing mortalities above 50 % of the worms, likewise, soil
relationships fluent in 4:1 does not affect earthworm population, provided they have
enough food source in the substrate. The results indicate the feasibility of using this
methodology in the biological assessment of waste.
Keywords: Eisenia foetida, drill cuttings, biological indicator

INTRODUCCIN
La actividad petrolera ha sido el principal sustento para el pas y es de vital
importancia, puesto que constituye la base de la economa en Venezuela. Esta industria
a pesar de los grandes activos que genera tambin tiene efectos negativos durante y
despus de sus operaciones, perjudicando la vida del hombre y su entorno (Salas,
2000).
Para extraer el hidrocarburo se crea un canal de contacto entre la superficie y el
yacimiento mediante la perforacin. Es en este proceso donde el ambiente soporta la
remocin de la cobertura vegetal, depsito de cortes provenientes del subsuelo,
ocasionando deforestacin y prdida de la biodiversidad, interrupcin de los flujos de
agua, contaminacin por sustancias qumicas y radiactivas, entre otros (Bravo, 2007).
En la actualidad, la contaminacin por hidrocarburos es una de las principales causas
de destruccin de los ecosistemas edficos (Infante, 2005).
Durante la perforacin se usan fluidos adaptados a las caractersticas de los
distintos estratos que se atraviesan hasta llegar al punto de inters, es en las zonas de
mayor presin donde se usan ripios base aceite con el fin de contrarrestar dichas
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presiones. En esta actividad se traen a superficie ripios impregnados del fluido de

perforacin y de la formacin geolgica que son altamente contaminantes y causan
grandes daos al ambiente por su contenido de sustancias txicas y radioactivas
(Cuevas-Daz, 2012). La composicin qumica de los hidrocarburos es muy variable: en
la naturaleza normalmente se encuentran como mezclas de diferentes especies
moleculares, que en mayor o menor grado afectan a la flora, a la fauna y a los
microorganismos del suelo (Madigan et al., 1999).
De acuerdo con Varnam y Evans (2000) prcticamente todos los ecosistemas
edficos y acuticos del planeta poseen, en mayor o menor proporcin, cepas de
microorganismos capaces de responder naturalmente a los problemas de
contaminacin por medio de la biodegradacin de los contaminantes, incluyendo a los
hidrocarburos. Si bien estos procesos se dan de forma natural, la reducida cantidad de
microorganismos hace que los tiempos de degradacin sean demasiado largos como
para observar un resultado que pueda ser considerado como positivo (Solano-Serena et
al., 2000).
Las pruebas ecotoxicolgicas (bioensayos) son una buena herramienta para medir
las respuestas biolgicas que permiten estimar la presencia o concentracin de las
sustancias txicas. En stas pruebas se utilizan diferentes organismos como
microorganismos, animales o plantas, que cuando al modificarse las condiciones
ambientales sus caractersticas fisiolgicas y metablicas cambian, por lo que se les
considera bioindicadores (Cap, 2002 y Di Toro et al., 2007).
Las lombrices son de importancia en la fauna del suelo, pues constituyen una gran
parte de la biomasa animal edfica en varios ecosistemas. Desempean un papel
ecolgico primordial debido a su influencia en la descomposicin de la materia orgnica,
el desarrollo de la estructura del suelo, y el ciclo de los nutrimentos (OECD, 2004). La
prueba aguda con lombriz determina el efecto del compuesto txico mediante la
concentracin letal (CL50). El compuesto txico puede afectar a la lombriz por ingestin
o por contacto, a travs de la piel (ISO 11268-3, 1999).
Es importante considerar que la respuesta txica puede afectarse por diversos
factores abiticos y biticos, que son necesarios tomar en cuenta al momento de
evaluar la toxicidad de una muestra. Algunos factores abiticos son, la clasificacin del
suelo con sus caractersticas fisicoqumicas (temperatura, humedad, pH, materia
orgnica, nutrientes, entre otros) (Kaplan et al., 1980). Dentro de los factores intrnsecos
de los microorganismos se encuentran, enfermedades, interacciones entre los taxones,
parasitismo, estatus reproductivo, estatus nutricional y estadio de desarrollo (RicoMartnez y Martnez-Jernimo, 2009).
El Decreto N 2635 de fecha 12/02/98 Reforma parcial del decreto N 2.289
referido a las Normas para el Control de la Recuperacin de Materiales Peligrosos y
para el Manejo de Desechos Peligrosos. Tiene como objetivo regular la recuperacin
de materiales y el manejo de los desechos cuando los mismos presenten
caractersticas, composicin o condiciones peligrosas representando una fuente de
riesgos a la salud de las personas y el ambiente.
El decreto esta modificado para dar orientacin en cmo manejar la generacin, el
transporte y la disposicin o tratamiento de desechos peligrosos. Dentro de este
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decreto, se encuentra el Captulo III del Manejo de los Desechos Peligrosos de

actividades de Explotacin, Produccin de Petrleo, exploracin y explotacin de
Minerales, el cual se contempla en la seccin II, los artculos que se refieren a los
parmetros que se deben seguir para llevar a cabo las actividades de disposicin y/o
recuperacin de los materiales generados durante la perforacin (ripios de perforacin,
entre otros).
El presente ensayo se realiz con el objeto de evaluar biolgicamente a nivel de
campo los ripios de perforacin base aceite mediante la utilizacin de la lombriz roja
californiana (Eisenia fotida) de acuerdo a la norma ISO 11268.3 y adems establecer
el efecto de las diferentes mezclas (ripio suelo estircol) sobre el desarrollo de la
lombriz roja californiana, indicando desde el punto de vista biolgico la capacidad de
sobrevivencia y desarrollo de las mismas en las diferentes mezclas y estimar la dosis
letal media (DL50) de los ripios base aceite sobre la lombriz roja californiana.
MATERIALES Y MTODOS
El experimento se realiz en la sede de la Universidad de Oriente, Ncleo de
Monagas, ubicada en el Campus Juanico en la ciudad de Maturn. Se utilizaron nueve
(9) tratamientos producto de la combinacin p/p de las proporciones suelo:ripio (2:1;
3:1 y 4:1), con tres dosis de estircol equino (5; 10 y 20%), utilizado como fuente
alimenticia para los lombrices, los cuales fueron colocados en contenedores de 0,05
m3 (0,5 m x 0,5 m x 0,20 m.), utilizando para ello formaletas de hierro a las cuales se les
cubri el fondo con una lmina plstica a fin de evitar el escape de material y de las
lombrices.
Los ripios de perforacin utilizados fueron suministrados por la empresa Adriatica
C.A. extrados de la perforacin de pozos petroleros de la Finca Nuevo Limn, ubicada
en el municipio Maturn del estado Monagas. La caracterizacin fsico-qumicas de los
ripios utilizados fue realizada en el Laboratorio ENVIROTEC C.A. arrojando los
siguientes resultados: 9,60 para pH, 23,07 % para aceites y grasas y 15,89% para
hidrocarburos totales. Estos valores sobrepasan la norma establecida en el Decreto
2.635, artculo 53 que estima valores mximos de 6 a 8 para el pH, <1 para aceites y
grasas y entre 1 10% para hidrocarburos totales.
Una vez realizadas las respectivas mezclas de acuerdo a los tratamientos
establecidos y colocados los sustratos en los contenedores se colocaron cien (100)
lombrices de la especie Eisenia foetida, de tamao uniforme provenientes de la
empresa LOMBRIVEN C.A, ubicada en la localidad de Barbacoa, estado Anzotegui.
Se humedeci el sustrato antes de sembrar las lombrices y se tap con maya plstica
tipo utilizado en los cultivos de las lombrices para protegerla la luz directa de los rayos
solares, as como de pjaros y otros animales.
El experimento fue establecido bajo un diseo estadstico de bloques al azar en
arreglo factorial, donde los factores estudiados fueron: relacin suelo:ripio (2:1, 3:1, 4:1)
y contenido de estircol equino (5%, 10%, 20%), para un total de 9 tratamientos
repetidos tres veces. Los datos se analizaron mediante ANAVA convencional y las
posibles diferencias entre los promedios se estudiaron utilizando la prueba de Mnima
Diferencia Significativa al 0,05%, utilizando para ello la hoja de clculo del programa
Excel.
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A los 15, 45 y 75 das posteriores a la siembra de las lombrices se realiz un

muestreo aleatorio, tomando una porcin de 1500 cm3 (10 cm x 10 cm x 15cm)
determinndose el nmero y peso total de las lombrices/muestra. Posteriormente
haciendo una comparacin entre el nmero de lombrices iniciales y el nmero de
lombrices obtenida por tratamiento a los 75 das despus de la siembra se determin la
Dosis Letal Media (DL50).
RESULTADOS
Nmero de lombrices/tratamiento
El anlisis de los datos indic que en la evaluacin realizada a los 15 das
despus de iniciado el experimento slo se presentaron diferencias estadsticamente
significativas para el contenido de estircol equino, observndose que el mayor nmero
de lombrices se present en los tratamientos donde se coloc 20 % de estircol equino,
aunque estadsticamente igual al nmero de lombrices obtenida en los tratamientos con
10% de estircol. (Figura 1).
En la evaluacin realizada 45 das despus de la siembra se obtuvieron
diferencias estadsticas para los efectos individuales contenido de estircol y para la
relacin suelo:ripio, con la tendencia a aumentar el nmero de lombrices al
incrementarse el contenido de estircol (Figura 2) y a disminuir con el contenido de ripio
en el suelo (Figura 3). En todos los tratamientos se observ un incremento en el
nmero de lombrices al comparar con la evaluacin realizada a los 15 das, siendo
mayor el incremento en los tratamientos con 10% de estircol, donde se observ un
incremento de ms del 70,00% .

Figura 1. Efecto del contenido de estircol equino sobre el nmero de lombrices rojas
californianas (Eisenia foetida) a los 15 das al ser cultivadas en suelos mezclados con
diferentes contenidos de ripios petroleros. Letras iguales indican similitud estadstica MDS
0,05%

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Figura 2. Efecto del contenido de estircol equino sobre el nmero de lombrices rojas
californianas (Eisenia foetida) a los 45 das al ser cultivadas en suelos mezclados con
diferentes contenidos de ripios petroleros. Letras iguales indican similitud estadstica MDS
0,05%

Figura 3. Efecto de la relacin suelo:ripio sobre el nmero de lombrices rojas californianas

(Eisenia foetida) a los 45 das al ser cultivadas en suelos con diferentes contenidos de estircol
equino. Letras iguales indican similitud estadstica MDS 0,05%

En la evaluacin realizada 75 das despus de la siembra no se presentaron

diferencias estadsticamente significativas para el efecto simple de los factores bajo
estudio, as como para la interaccin entre el contenido de estircol y la relacin
suelo:ripio. Sin embargo, se evidenci una disminucin considerable en el nmero de
lombrices presentes en cada uno de los tratamientos al obtenerse valores de 8,66; 5,55
y 5,29, representando estos valores disminuciones de 62,35; 73,71 y 54,67% en los
promedios de lombrices para los tratamientos con 20, 10 y 5 % de estircol
respectivamente. Este efecto puede ser causado posiblemente por la disminucin de la
fuente de alimentacin de las lombrices (estircol) o por el efecto sobre las mismas del
ripio petrolero.
Peso de Lombrices/tratamiento
Al igual que para el nmero de lombrices se presentaron diferencias significativas
estadsticamente para el efecto del contenido de estircol en la evaluacin realizada a
los 15 das despus de la siembra, mientras que en la evaluacin realizada 45 das
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despus de iniciado el experimento se presentaron diferencias para el efecto simple

dosis de estircol y para la relacin suelo:ripio, as mismo, no se observaron diferencias
entre los tratamientos en la evaluacin realizada 75 das despus de la siembra.
Para este carcter se observaron datos muy similares estadsticamente al utilizar
10 y 20 % de estircol equino como fuente de alimentacin de las lombrices (Figuras 4
y 5) y en los tratamientos donde se utilizaron ripios en relacin 3:1 y 4:1 (Figura 6).

Figura 4. Efecto del contenido de estircol equino sobre el peso (g) de lombrices rojas
californianas (Eisenia foetida) a los 15 das al ser cultivadas en suelos mezclados con
diferentes contenidos de ripios petroleros. Letras iguales indican similitud estadstica MDS
0,05%

Figura 5. Efecto del contenido de estircol equino sobre el peso (g) de lombrices rojas
californianas (Eisenia foetida) a los 45 das al ser cultivadas en suelos mezclados con
diferentes contenidos de ripios petroleros. Letras iguales indican similitud estadstica MDS
0,05%

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Figura 6. Efecto del contenido de estircol equino sobre el peso (g) de lombrices rojas
californianas (Eisenia foetida) a los 45 das al ser cultivadas en suelos mezclados con
diferentes contenidos de ripios petroleros. Letras iguales indican similitud estadstica MDS
0,05%

Se observ un incremento en el peso de las lombrices en las dos primeras fechas

de evaluacin. Sin embargo, a los 75 das despus de iniciado el experimento el peso y
el nmero de lombrices disminuy considerablemente, esto como efecto letal de los
ripios de perforacin o agotamiento de la fuente de alimento.
Estimacin de la dosis letal media (Dl50)
Al determinar la DL50 de los ripios de perforacin, comparando el nmero de
lombrices en cada tratamiento al momento de inicio del experimento (100 lombrices)
con el nmero de presente 60 das despus de iniciado se observ que la sobrevivencia
de las lombrices fue marcada en forma determinante por el contenido de estircol
equino utilizado. As se puede observar que independientemente de la relacin
suelo:ripio, en los tratamientos donde se coloc 5% de estircol ms de la mitad de las
lombrices no lograron sobrevivir. Cuando se utiliz 10% de estircol la sobrevivencia fue
de ms del 100%, aunque baj por debajo de 100% en contenidos altos de ripio
(relacin suelo ripio 2:1). Cuando se utiliz 20% de estircol se increment el nmero
de lombrices hasta en un 50% (suelo:ripio 3:1) y hasta en 150% en la relacin suelo
ripio 4:1. (Figura 7)

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Figura 7. Dosis letal media (DL50) para el nmero de lombrices rojas californianas (Eisenia
foetida) totales/tratamiento por efecto de diferentes dosis de ripios petroleros con diferentes
concentraciones de estircol equino como fuente alimenticia.

DISCUSIONES
De acuerdo a los resultados observados el nmero y peso de las lombrices rojas
californianas son afectados por los ripios de perforacin, especialmente en
concentraciones suelo:ripio 2:1, siendo mayor su efecto cuando se utiliz menos de
10% de estircol equino como fuente de alimento de los lombrices. Estas diferencias
encontradas entre los tratamientos permiten la utilizacin de la lombriz roja californiana
(Eisenia foetida) como un bioindicador de la toxicidad de los ripios de perforacin de la
industria petrolera, metodologa que puede complementar los anlisis qumicos de los
mismos y conocer de manera ms acertada la toxicidad de los materiales. Similares
conclusiones expresa Rada (2004) al utilizar las lombrices rojas californianas como
indicadores de contaminacin por hidrocarburos en suelo. Por su parte Frnd, et al.,
(1996) al igual que Edwards y Bohlen, (1996) consideran que las lombrices son
organismos de prueba tiles para monitorear la toxicidad que provocan varios
compuestos o xenobiticos, incluyendo metales pesados, plaguicidas, contaminantes
orgnicos, mezclas complejas y desconocidas de contaminantes en suelos.
De Silva y Van Gestel (2009) al comparar el efecto de hidrocarburos en dos tipos
de suelos sobre las especies Eisenia andrei y perionix excavatus reportan respuestas
diferentes de las especies al efecto de los hidrocarburos, afectado por el tipo de suelo
utilizado y especialmente por el contenido de materia orgnica de los suelos. Similares
respuestas fueron obtenidas en este trabajo, ya que el contenido de estircol modifica el
contenido de materia orgnica del suelo y ello favorece la reproduccin y crecimiento de
las lombrices, especialmente al utilizar las relaciones suelo:ripio 3:1 y 4:1 y contenidos
de estircol equino por encima de 10% Nuez Macedo (2012) evaluando suelos
contaminados por hidrocarburos utilizando como bioindicadores lombriz roja californiana
(Eisenia foetida) y alfalfa (Medicago sativa) indica que los ensayos ecotoxicolgicos ex
situ complementan los tpicos anlisis fisicoqumicos de suelos, pues representan como

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es la interaccin entre los metales, hidrocarburos y los diferentes componentes del

suelo con la biota del ecosistema terrestre.
De acuerdo a los resultados obtenidos en este ensayo, la cantidad de producto
orgnico utilizado, en este caso estircol equino, aplicado al sustrato como fuente de
alimento de las lombrices es determinante, no solo al ser utilizado por las lombrices en
su alimentacin, sino tambin como modificador de las condiciones fisico-qumicas de
los sustratos. Lo importante es estandarizar la dosis necesaria para la alimentacin de
las lombrices y el tiempo que deben estar confinadas para que logren expresar el
efecto del hidrocarburo. As vemos que de acuerdo a los resultados obtenidos, a partir
de los 45 das y posiblemente por el agotamiento del alimento, todos los tratamientos se
comportaron estadsticamente iguales entre s. Por ello se considera que la prueba
debe mantenerse solo hasta los 45 das, o menos (30 das si se aplica 10% de estircol
al sustrato).
CONCLUSIONES
La lombriz roja californiana puede ser empleada como bioindicador de
contaminacin, acompaando las pruebas fsico-qumicas que tradicionalmente se
utilizan para determinar la toxicidad de los RIPIOS de perforacin petrolera.
La relacin 2:1 de suelo:ripio afecta la multiplicacin de las lombrices,
independientemente del contenido de estircol equino utilizado, causando una
mortalidades por encima del 50 % de las lombrices.
De acuerdo a los resultados obtenidos la relacin suelo:fluido 4:1 no afecta la
poblacin de lombrices, siempre que tengan suficiente fuente de alimentos en el
sustrato.
AGRADECIMIENTO
Los autores expresan su agradecimiento al Consejo de Investigacin de la
Universidad de Oriente por el financiamiento parcial de la investigacin mediante el
proyecto de investigacin Estudio de alternativas orgnicas e inorgnicas en la
recuperacin de suelos contaminados con hidrocarburos provenientes de la industria
petrolera. CI 04-030101-1603-09.
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