Auxiliar de Laboratorista Qumico

27 de octubre de 2015

TCNICA ASPTICA
Prctica No. 1 | Capacitacin | Auxiliar de Laboratorista Qumico

Objetivo

Introduccin

El alumno conocer y aplicar la

tcnica asptica que les
proporcionar los conocimientos
en los procedimientos habituales
en el rea de microbiologa.

E l p r o ce d i m i e n to q u e s e l l e v a r a c a b o r e q u i e r e e l
entendimiento de lo que se necesita en el mantenimiento de
un ambiente asptico cuando se manejan cultivos de
microorganismos. En esta actividad tendremos la
oportunidad de trabajar con cultivos de diferentes tipos de
medios para desarrollar aquellas habilidades que se requieren
en el mantenimiento de la asepsia.!

Acerca de la tcnica
En un laboratorio de
microbiologa todas las
manipulaciones deben ser
llevadas a cabo de tal modo que
se impida la contaminacin en el
rea de trabajo.
Los procedimientos utilizados
para conseguirlo se conocen con
el nombre de "Tcnica asptica.
La "Tcnica asptica" tiene un
doble objetivo: a) evitar que el
operador se contamine con
microorganismos procedentes
de las muestras o cultivos y b)
evitar la contaminacin de las
muestras y cultivos con
microorganismos procedentes
del ambiente o del propio
operador.

Cobach 08

La transferencia asptica de un cultivo desde un medio a

otro es exitosa solo si los microorganismos contaminantes
no son introducidos durante el proceso. Una transferencia
puede involucrar el transporte de organismos desde una
colonia aislada sobre una placa de medio slido hacia un
tubo con caldo, o inoculando varios medios (slidos o
lquidos) desde un caldo de cultivo para varios tipos de
pruebas. El procedimiento general es de la siguiente manera:!
Desinfeccin del rea de trabajo. El rea de trabajo es
primero tratada con un desinfectante para matar cualquier
microorganismo que pueda estar presente. Este paso
destruye clulas vegetativas y virus; las endosporas, sin
embargo, no son destruidas con esta breve aplicacin de
desinfectante.!
Asas y agujas. El transporte de organismos ser realizado
con una asa o aguja de inoculacin. Para esterilizar el asa o
aguja antes de tomar la muestra de organismos, requerimos
calentarlo en la flama de mechero Bunsen hasta que alcance
a brillar al rojo vivo.!
Flamear el tubo de cultivo. Antes de insertar el asa o aguja
ya fro dentro de un tubo de cultivo, el tapn del tubo ser
quitado y la boca del tubo de cultivo flameado con el
mechero. Una vez que los microorganismos han sido
removidos del tubo, la boca del tubo debe ser flameado otra
vez antes de volver a colocar la tapa del tubo.!
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Inoculacin en medio lquido. Si un tubo de medio lquido ser inoculado, la boca de dicho tubo
ser flameado antes de insertar la asa dentro del tubo. Para dispersar los organismos en el asa, sta
debe moverse de adelante hacia atrs en el medio.!
Si una aguja de inoculacin es usado para sembrar por picadura en un medio slido, la aguja ser
insertada profundamente dentro del medio.!
Flameado final. Una vez que la inoculacin este completada, la asa o aguja ser quitada del tubo,
flameada como se realiz previamente y regresada a un receptculo. Estas herramientas nunca deben
ser colocadas en la mesa de trabajo. El tubo inoculado es tambin flameado antes de colocarle la tapa.!
Inoculacin en placas de Petri. Para inocular en una placa Petri, no se aplica calor a la placa y una
asa bacteriolgica ser usado para la transferencia. Cuando generar las estras en la superficie del
medio, la cubierta (la tapa de la placa) debe estar colocada en forma diagonal con respecto a la placa
inferior para evitar la contaminacin del medio por el aire.!
Desinfeccin final. Cuando todo el trabajo este terminado, el rea de trabajo ser tratada con
desinfectantes para asegurar que cualquier microorganismo adherido en la mesa de trabajo durante
cualquiera de los procedimientos sea eliminado.!

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Materiales
Caldo de cultivo de Escherichia coli / Agar de cultivo inclinado de Escherichia coli
Tubos de caldo nutritivo estril / Tubos con agar de cultivo inclinado estriles
Asa de inoculacin
Mechero Bunchen
Desinfectante (fenol 5%; cloruro de benzalconio 5%, cloro 5%)
Marcador indeleble!

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Desarrollo
Actividades preliminares
1. Prepara tu mesa de trabajo limpindola con un desinfectante. Usa una esponja.!
2. Con un marcador indeleble etiqueta dos tubos con caldo nutritivo estril con tus iniciales y E. coli.
3. Crea un ambiente estril, dejando prendido el mechero Bunsen durante 15 min.!

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Procedimiento (Transferencia de un caldo de cultivo a otro)

Emplear bata, guantes y cubrebocas en todo momento.!
4. Ten a tu alcance los materiales a trabajar, ya que nadie te puede asistir durante el procedimiento.!
5. Esteriliza de forma completa el asa de inoculacin, es decir todo el alambre, hasta que se ponga al
rojo vivo (figura 1).!
6. Con la mano que te queda libre, agita gentilmente el tubo para dispersar el cultivo (figura 2).!
7. Presiona el tapa del tubo con el dedo meique de la mano con la cual sostienes el asa de inoculacin
y quita el tapn del tubo. Flamea la boca del tubo como se ilustra (figura 3).!

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8. Inserta el asa de inoculacin en el cultivo (figura 4).!
9. Saca el asa que contiene una muestra del cultivo, flamea la boca del tubo otra vez (figura 5) y vuelve
a colocarle la tapa al tubo (figura 6). Coloca los tubos en una gradilla.!

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10. Toma con la mano libre, un segundo tubo con caldo nutritivo estril, cuidadosamente quita la tapa
del tubo con el dedo meique y flamea la boca del tubo (figura 7).!
11. Sin flamear el asa de inoculacin, insrtalo en el caldo estril, inoculndolo (figura 8). Para dispersar
a los organismos en el medio, mueve el asa de adelanta hacia atrs en el tubo.!
12. Saca el asa del tubo y flamea la boca (figura 9). Vuelve a colocar la tapa en el tubo (figura 10).!
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13. Esteriliza el asa en el mechero (figura 11). Deja el asa en un receptculo.!

14. Incuba los cultivos que han sido inoculados a 37 grados centgrados durante 24-48 hrs.!

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Procedimiento (Transferencia de un medio de cultivo inclinado a otro)
1. Con un marcador indeleble etiqueta dos tubos con agar de cultivo inclinado estril con tus iniciales
y E. coli.!
2. Esteriliza tu asa de inoculacin, calienta todo el alambre hasta que este al rojo vivo (figura 12). Deja
que se enfre completamente el asa.!
3. Usando la mano que esta libre, toma el cultivo inclinado con E. coli y retira la tapa usando el dedo
meique de la mano que sostiene el asa (figura 13).!
4. Flamea la boca del tubo e inserta el asa, previamente enfriada, dentro del tubo. Toma una porcin
de la muestra con el asa (figura 14) y saca el asa del tubo.!
5. Flamea la boca del tubo (figuras 14 y 15) y vuelve a colocarle la tapa. Regresa el tubo a la gradilla.!
6. Toma un medio de cultivo inclinado estril con tu mano libre, retira la tapa del tubo con el dedo
meique y flamea la boca del tubo (figura 16).!

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7. Sin calentar el asa que contiene el cultivo, inserta el asa en el tubo e inocula suavemente en la
superficie del medio inclinado, moviendo el asa de adelante hacia atrs sobre la superficie del agar
(figura 17). Esto debe involucrar un tipo de movimiento para generar estras.!
8. Retira el asa del tubo, flamea la boca del tubo y vuelve a colocarle su tapa (figura 18). Coloca el tubo
en la gradilla.!

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9. Calienta el asa de inoculacin, el alambre completo hasta que se ponga al rojo vivo (figura 19), djalo
enfriar y coloca el asa en su contenedor.!
10. Incuba el agar inclinado inoculado a 30 grados centgrados durante 24-48 hrs.!

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Procedimiento (Transferencia de una placa Petri a un medio de cultivo

inclinado)
La transferencia de organismos de colonias que se encuentran sobre pacas de agar a tubos con caldo o
medios inclinados es muy similar a los procedimientos usados previamente en la prctica. Las
siguientes reglas deben observarse.!
Asas vs. Agujas. En algunos casos una asa puede ser usada. En otras circunstancias una aguja es
preferible. Cuando un inoculo grande es necesario transferir, una asa ser usada. Las agujas son
preferibles, sin embargo, cuando se realizan las transferencias en aislamientos de cultivos puros y para
cultivos por picadura.!
En aislamientos de cultivos puros, una aguja es insertada en el centro de una colonia para la
transferencia. Esta tcnica es usada, principalmente, cuando se trabajan con cultivos mezclados.!
Manejo de la placa. Los medios en placas deben estar siempre protegidos contra la contaminacin.
Para evitar la contaminacin del aire, las cubiertas siempre deben dejarse cerradas. Cuando los
organismos son trasladados de una placa de cultivo, la cubierta debe estar parcialmente abierta.!
Procedimientos de flameo. Las asas o agujas de inoculacin deben ser calentadas de la misma
manera como se ha venido realizando en esta prctica. La diferencia es cuando se trabaja con placas y
es que estas nunca deben ser flameadas.!
Etiquetado de placas. Las placas de Petri con medio de cultivo en ellas son siempre etiquetadas
sobre la parte inferior de la placa. Las placas inoculadas son preferiblemente almacenadas boca abajo.!

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