Causas de ausencia de una seal de fusin en FISH para t(9;22) en Leucemia

Granuloctica Crnica (LGC).

No encontr reportes de monosoma 9 por prdida de un cromosoma 9 derivativo en casos de
LGC con t(9;22)(q24;q11.2) que explicarn el patrn de FISH con sonda de doble fusin en el que
existe una sola seal de fusin.
Lo que si se reportan son deleciones de naturaleza submicroscpica en regiones adyacentes al
punto de ruptura (q34) en el cromosoma derivativo 9 y que no se asocian con cambios morfolgicas
detectables en este mismo. Durante el anlisis FISH con sondas de doble-doble fusin (F-FISH)
estas deleciones resultan en falta de una seal de fusin en el cromosoma 9 derivativo. Las
deleciones son grandes, extendindose a partir del punto de ruptura a ms de 5.5 Mb hacia la regin
de cromosoma 9 y a ms de 17Mb hacia la regin del cromosoma 22. La regin del cromosoma 9
contiene 44 genes conocidos y la regin del cromosoma 22 contiene 138 genes conocidos
(incluyendo 3 GST: SNF/INI1, NF2, y MNI/MGCR1-PEN).
Estas deleciones se encuentran en un 15% de los pacientes con LGC, y ocurren durante el
momento de formacin de la translocacin (9;22) segn diversas lneas de evidencia. La presencia
de estas deleciones confiere un mal pronstico para pacientes con LGC.
Mecanismo: Respecto a si se originan durante la progresin de la enfermedad como
consecuencia de inestabilidad genmica, o al momento de la ocurrencia de la translocacin 9;22, la
evidencia sugiere que la ltima opcin es la ms probable, resultando en una heterogeneidad
gentica, previamente no sospechada, del mecanismo de inicio de la enfermedad. En un estudio de
cohorte 253 pacientes con LGC, se por D-FISH una frecuencia de delecin en el derivativo 9 del
15%; al analizar la frecuencia de deleciones en diferentes fases de la enfermedad encontraron que
14% (22/160) de las muestras tomadas al diagnstico presentaban tales deleciones, en comparacin
con 16% (10/64) de las muestras tomadas tras la progresin a fase acelerada o blstica; al analizar
muestras secuenciales, 34 pacientes analizados inicialmente en la fase crnica que no tuvieron
delecin no mostraron evidencia de haber adquirido una delecin en 1306 metafases Ph+ obtenidas
tras la progresin de la enfermedad (30 crisis blsticas y 4 fases aceleradas).
Todo lo anterior indica que el evento de recombinacin, productor de una translocacin
aparentemente recproca, resulta en deleciones genmicas grandes dando lugar a una
heterogeneidad gentica previamente no sospechada.
Pronstico: El estado de la delecin al momento del diagnstico es un indicador pronstico
poderoso e independiente para pacientes con LGC. La sobrevida media de los pacientes en la
cohorte previamente mecionada, con y sin deleciones fue de 38 y 88 meses, respectivamente
(p=0.0001). Existe diversos modelos respecto al pronstico que confieren estas deleciones:
1) Las deleciones resultan en prdida del gen de fusin recproco ABL-BCR: poco probable
porque la protena ABL-BCR a sido detectada en pacientes con este tipo de deleciones y
adems la expresin de ABL-BCR no correlaciona con el pronstico al ser analizado por la
respuesta citogentica.
2) Una delecin en el cromosoma derivativo 9 puede actuar como un marcador para
deleciones intrnicas ms pequeas en el cromsoma Ph, que puede influir en el nivel de
expresin de BCR-ABL. La crisis blstica a veces se asocia con la adquisicin de un
cromosoma Ph adicional sugiriendo que la dosis de BCR-ABL puede ser importante.
3) La prdida de uno o ms genes dentro de la regin deletada sera suficiente para producir un
efecto neoplsico (haploinsuficiencia) o podra requerir de una inactivacin subsecuente en
el alelo correspondiente normal.

Ejemplo: A) Cariotipo bandas GTG muestran t(9;22)(q34;q11.2). B) FISH en clulas en interfase

con sondas doble color-doble fusin, mostrando ausencia de una seal de fusin. C) FISH en
clulas en interfase con sonda de doble color-fusin sencilla, mostrando la presencia normal de una
fusin BCR-ABL (amarillo). D-E) FISH en metafase sobre una metafase de bandas G, usando
sonda D-FISH. No se detecta seal de fusin ABL-BCR en el cromosoma 9 derivativo (flecha
blanca).
A la izquierda esquema del patrn de seales resultantes de
delecin en el cromosoma 9 derivativo detectado por D-FISH.
A) Patrn tpica en una clula BCR-ABL positiva. B) Patrn
atpico en una clula BCR-ABL positiva con una delecin
recproca ABL-BCR, mostrando una seal para cada alelo
silvestre y solo una seal de fusin (lo normal son 2).
Estudios que correlacionan la citogentica

convencional con anlisis de FISH en metafase

muestran que las deleciones no se asocian con
cambios morfolgicas detectables en el cromosoma
derivativo 9, siendo por tanto de naturaleza
submicroscpica. Algunos argumentan que una sola seal de fusin en el D-FISH en inteferfase, a
diferencia del FISH en metafase, puede representar la fusin ya sea BCR-ABL o la ABL-BCR, y
que no se debera interpretar como positiva en ausencia de otra evidencia de apoyo de fusin gnica
BCR-ABL. Sin citogentica convencional o datos de gentica molecular, la forma ms simple sera
realizar un FISH con sonda de fusin sencilla para confirmar la presencia de fusin gnica BCRABL.
Bibliografa:

1. Huntly BJ, Reid AG, Bench AJ, et al. Deletions of the derivative chromosome 9 occur at
the time of the Philadelphia translocation and provide a powerful and independent
prognostic factor in chronic myeloid leukemia. Blood 2001;98:17328.
2. Huntly BJ, Bench AG, Delabesse E, et al. Derivative chromosome 9 deletions in chronic
myeloid leukemia: poor prognosis is not associated with loss of ABLBCR expression,
elevated BCRABL levels, or karyotypic instability. Blood 2002;99:454753
3. Wan TS, Ma SK, Au WY, Chan LC. Derivative chromosome 9 deletions in chronic myeloid
leukaemia: interpretation of atypical D-FISH pattern. J Clin Pathol. 2003 June; 56(6): 471
474.
Gabriela Ortiz Cruz.