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Ao 2013
Captulo 6
RECUENTO DE MICROORGANISMOS HETEROTROFOS TOTALES
EN SUELO
Objetivo
Determinar el tamao de la poblacin de diferentes tipos de suelo mediante la Tcnica
de Recuento del Nmero ms Probable (NMP).
Introduccin
El suelo representa uno de los hbitats microbianos ms significativos, tanto en trminos de
biomasa como de actividad microbiana. El suelo alberga gran riqueza de especies vegetales,
animales y microbianas. Los microorganismos del suelo son los que mantienen activo el ciclo
de los nutrientes de los compuestos qumicos ms importantes C, N, S, P que las plantas
requieren para su crecimiento. Entre los organismos del suelo se establecen interacciones que
contribuyen en las caractersticas propias del suelo.
La actividad microbiana del suelo refleja las reacciones bioqumicas que suceden dentro de
este complejo y heterogneo sistema. Los mismos tienen funciones claves en el equilibrio del
ecosistema.
Este ambiente alberga una gran cantidad de microorganismos que se nutren de los exudados
radiculares, ricos en aminocidos, cidos orgnicos y factores de crecimiento, como as
tambin favorece distintos tipos de interacciones biolgicas. Los microorganismos son
fundamentales en los procesos biolgicos y como promotores del crecimiento vegetal.
La distribucin de los microorganismos en el suelo siguen patrones de agregacin y es muy
dinmica. En ella influyen factores intrnsecos (relacionados con caractersticas de cada
microorganismo) y factores extrnsecos (aquellos que proceden del ambiente). Esto factores
que regulan la distribucin de los microorganismos desde el ambiente son: estructura del suelo,
disponibilidad de agua, el pH, la temperatura, el potencial redox y la disponibilidad de materia
orgnica.
La rizsfera es la regin del suelo cercano a las races de las plantas, y es considerado un
ambiente apropiado para el desarrollo de los microorganismos por la presencia exudados
radicales y humedad, como dos principales caractersticas. En la rizsfera ocurren importantes
interacciones microbianas que implican el intercambio o la competencia por nutrientes y hbitat.
Algunas son relaciones simbiticas, por ejemplo entre bacterias u hongos con las races de las
plantas (micorrizas, ndulos para la fijacin de nitrgeno) y otras son relaciones antagnicas,
como ser predacin (protozoos bacteria), amensalismo (produccin de antibiticos) y
parasitismo (hongos que atacan las races de las plantas).
La composicin de los microorganismos del suelo es muy diversa, encontrndose bacterias,
hongos, actinomicetos, protozoos y algas. La poblacin bacteriana hetertrofa aerobia est
compuesta principalmente por gneros gram positivos, siendo la mayora de los gneros
Clostridium, Bacillus, Arthobacter. La poblacin gram negativa generalmente est compuesta
por los gneros Pseudomonas, Flavobacterium, Rizobium, Azospirilum, entre otros. Los
actinomicetes caractersticos del suelo pertenecen al gnero Streptomices y Nocardia, tienen
funciones importantes en la descomposicin de materia orgnica y produccin de antibiticos.
Los hongos contribuyen en gran medida a la biomasa microbiana del suelo, en cuanto a tamao
de la poblacin, diversidad y funciones. Los gneros ms comunes son Penicillium, Aspergillus,
Fusarium, Cladosporium, Mucor, entre muchos otros.
Es importante, adems, tener en cuenta que cuando microorganismos indeseables penetran en
el suelo pueden cambiar sus propiedades, desequilibrando la distribucin y el orden de la
comunidad nativa. La presencia de microorganismos patgenos implica un riesgo para la salud,
por la posible transmisin de enfermedades por el contacto con dicho suelo
Ao 2013
5 gr
3 gr
1000 ml
Procedimiento
Se pesa 1 g de la muestra de suelo a examinar y se diluye en un tubo de ensayo que contenga
-1
9 ml de agua destilada (A.D) estril. A dicho tubo se lo rotular 10 . Esto corresponde al
primer nivel de dilucin (1:10).
Se agita en el vrtex la primer dilucin y se toma 1 ml del sobrenadante con una pipeta estril,
-2
agregando dicho volumen a un segundo tubo con A.D estril. Este tubo ser rotulado como 10
(1:100), correspondiente al segundo nivel de dilucin.
Se procede realizando las diluciones sucesivas hasta obtener una dilucin 1:10.000.000.000,
-10
que ser la dilucin 10 .
De esta manera se espera que los primeros tubos tengan mayor concentracin microbiana y
que en los ltimos tienda a cero.
Una vez que se dispone de las diluciones de las muestras, estos 10 tubos conteniendo la
solucin del suelo, se procede a sembrar una alcuota de cada uno de ellos en caldo nutritivo
(fig 1). Se toma con una pipeta automtica 0,1 ml de cada dilucin, el procedimiento se realiza
por triplicado. En este caso se siembran tres tubos para cada dilucin aunque se pueden utilizar
tambin cinco rplicas de cada uno de ellos, lo que disminuye el desvo.
Los tubos sembrados se incuban durante 7 das a 20 C. Finalizado este tiempo se procede a
realizar el recuento.
Ao 2013
Nmero de
M.O.*
0,0
0,3
0,3
Nmero
caracterstico
201
202
210
Nmero de
M.O.*
1,4
2,0
1,5
Nmero
caracterstico
302
310
311
Nmero de
M.O.*
6,5
4,5
7,5
0,6
0,6
0,4
0,7
1,1
0,7
1,1
1,1
1,5
1,6
0,9
211
212
220
221
222
223
230
231
232
300
301
2,0
3,0
2,0
3,0
3,5
4,0
3,0
3,5
4,0
2,5
4,0
Ao 2013
312
11,5
313
16,0
320
9,5
321
15,0
322
20,0
323
30,0
330
23,0
331
45,0
332
110,0
333
140,0
* M.O : microorganismos
En la siguiente tabla se indican, a modo de ejemplo, los resultados obtenidos para dos siembras
distintas con tres repeticiones para cada nivel de dilucin.
-1
Nivel de dilucin
Ejemplo 1
10
+++
(3)
+++
(3)
Ejemplo 2
-2
10
+++
(3)
++(2)
-3
10
+++
(3)
++(2)
-4
10
+++
(3)
--(0)
10
+-(1)
--(0)
-5
10
--(0)
--(0)
-6
10
--(0)
--(0)
-7
10
--(0)
--(0)
-8
10
--(0)
--(0)
-9
10
--(0)
--(0)
-10
-4
Ejemplo 1
Ejemplo 2
N.M.P de microorganismos
4,5
20
A este nmero obtenido de la tabla debe multiplicrselo por la inversa de la menor dilucin en
la que se han hallado 3 (+), es decir que corresponde a la dilucin de la primer cifra del nmero
caracterstico.
4