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Introduccin
MUESTRA
Emplear suero (Puede ser inactivado) o plasma sin inactivar. No
emplear muestras hemolizadas, contaminadas o lipemicas. Si el
anlisis no se va a realizar en el momento, se pueden conservar las
muestras a -20 C durante un mximo de 4 6 semanas.
PROCEDIMIENTO
1.
P
r
e
p
a
r
a
el PBS buffer: disolver el sobre proporcionado en un litro de
agua destilada.
2. Preparar una dilucin 1:5 de los sueros controles y las muestras
con el sorbente ( Ejm. 10 uL de muestra + 40 uL del sorbente).
Dejar reaccionar +/- 15 minutos.
3. Sacar los portaobjetos (substrato), emplear las improntas
necesarias.
4. Cubrir las reas reactivas con las diluciones de controles y
muestras problema.
5. Incubar en cmara hmeda por 30 minutos a temperatura
ambiente.
6. Lavar con PBS, usando pizeta. Luego realizar 2 lavados de 5
c/u, colocando el portaobjetos en el vaso Coplin, conteniendo
PBS, agitarlo suavemente en forma rotatoria.
7. Diluir la Anti gammaglobulina humana conjugada. Teniendo en
cuenta la dilucin sugerida por el fabricante.
8. Sacar las improntas del PBS, sacudir el exceso con un papel
toalla, pero manteniendo hmedas las reas reactivas.
9. Cubrir cada rea reactiva
con la dilucin de anti
gammaglobulina humana, e incubar en cmara hmeda 30 a
temperatura ambiente.
10.
Lavar como en el paso 6. Secar como en el paso 8.
11.
Colocar medio de montaje en las reas reactivas y
cubrirlas con el cubre-objetos presionando suavemente y
evitando la formacin de burbujas de aire.
12.
Se recomienda leer inmediatamente en el microscopio de
fluorescencia o dentro de las 24 horas conservados entre 2 8
C en oscuridad.
INTERPRETACION DE RESULTADOS
SUEROS REACTIVOS: Los treponemas se observan teidos en
forma homognea con una tpica fluorescencia verde manzana
brillante.
SUEROS NO REATIVOS: Ausencia total de fluorescencia o coloracin
verde amarilla muy dbil opaca y no fluorescente.
ESQUEMA
DEL
FLUORESCENCIA.
Profesora Encargada del Curso de
Acasiete.
MICROSCOPIO
DE