APUNTES I

Esterilizacin y Desinfeccin

2015
Profesora: Dr Ilse Valderrama Heller

Parte I.
ESTERILIZACIN Y DESINFECCIN
Objetivos:

Conocer los equipos utilizados en el Laboratorio de Microbiologa, su uso y las

normas de seguridad para su manejo.
Comprender el concepto de asepsia
Conocer y comprender las tcnicas de esterilizacin y desinfeccin

Es indiscutible la importancia que tiene el procesamiento de los artculos de atencin de pacientes

al momento de prevenir infecciones intrahospitalarias. Existen tres procedimientos que nos
permiten eliminar microorganismos de las superficies de los artculos, ellos son: Lavado,
Desinfeccin y Esterilizacin. El procedimiento a aplicar depender del riesgo infeccin que
presenten los artculos al momento de ponerse en contacto con los tejidos del husped. En este
contexto, especial importancia la alcanzan los artculos que se utilizan en procedimientos invasivos
A fin de contar con una gua de accin se ha tenido en cuenta la Clasificacin de Spaulding,
que divide los artculos de atencin clnica en tres categoras: No crticos, semicrticos y
crticos.(Minsal, 2002)
Material crtico: Es el material que entra en contacto con el sistema vascular y zonas estriles
del organismo. Requiere esencialmente un procesamiento de limpieza, seguido de esterilizacin.
Ej. implantes, prtesis, catteres, sondas, agujas, instrumental quirrgico.
Material semi-crtico: Es el material que entra en contacto con mucosas intactas. El
procesamiento de este material requiere limpieza seguida de nivel alto de desinfeccin. Ej.
Maquinas de dilisis, endoscopias flexibles, termmetros rectales, especulo vaginal, etc.
Material no crtico: Es el material que entra en contacto con piel intacta, pero no con mucosas
o no toca directamente al paciente. Requiere procesamiento de limpieza seguido de un nivel
intermedio o bajo nivel de desinfeccin. EJ. Fonendos, termmetros axilares, orinales (chatas),
esfigmomanmetro, desfibriladores, etc.
Definiciones= Conceptos claves
1.- Esterilizacin: Procedimiento utilizado para destruir todas las formas de vida microbiana,
incluyendo formas resistentes, como las esporas.
2.- Desinfeccin: Procedimiento destinado a matar formas microbianas, sin eliminar formas
resistentes, slo clula vegetativa
3.- Desinfectante: Sustancia que desinfecta y se utiliza sobre objetos inanimados, por ser
altamente txico
4.- Antisptico: Sustancia que desinfecta y se utiliza sobre tejido vivo
5.- Saneamiento: Procedimiento que consiste en reducir la poblacin microbiana o concentracin
de sustancias qumicas a niveles no peligrosos para la salud pblica
6.- Sepsis: Crecimiento de microorganismos en tejidos vivos
7.- Asepsia: Ausencia de microorganismos en tejidos vivos.
8. La limpieza disminuye la carga microbiana por arrastre pero no destruye los microorganismos.
Puede realizarse a traves de metodos manuales o automaticos. Siempre debe realizarse una
prolija limpieza antes de procesar los articulos. Es la remocion mecanica de toda materia extrana
en las superficies de objetos inanimados.

Segn el grado de desinfeccin. Los desinfectantes, de acuerdo a su potencia, se clasifican en

uno u otro grupo.
Desinfeccin de alto nivel: En condiciones estrictamente controladas, este procedimiento
elimina los virus, los hongos y las formas vegetativas bacterianas, incluyendo las
micobacterias (tuberculicidas), y solamente admite la presencia de algunas esporas
bacterianas convencionalmente consideradas no patgenas

Desinfeccin de nivel intermedio: Inhibe generalmente, y en condiciones muy

controladas destruye las bacterias tuberculosas, elimina a la mayora de las bacterias
vegetativas (dependiendo de la biocarga), a la mayora de los hongos (fundamentalmente
los levaduriformes) y a la mayora de los virus, pero no necesariamente a las esporas
bacterianas.

Desinfeccin de bajo nivel: Puede inhibir o destruir (generalmente) a la mayora de las

bacterias en su estado vegetativo, algunos hongos y virus. Este procedimiento es poco
confiable si se desconoce la bio-carga o el riesgo.
Tipo

Agentes que no elimina

Frmaco

Esterilizacin

ninguno

Glutaraldehido Oxido de
etileno

Desinfeccin de nivel alto

algunas esporas

Formal-aldehido
Glutaraldehido Hipoclorito
de sodio 1%

Desinfeccin de nivel
intermedio

esporas

Alcohol etlico 70%

Desinfeccin de nivel bajo

Esporas, TBC, VIH y VHB

Compuestos de amonio
cuaternario

Etapas del proceso de esterilizacin de materiales

 Etapa 1: remocin mecnica de toda suciedad visible. Se logra a travs de agua y

detergentes.
Etapa 2: evaluacin del material procesado en bsqueda de suciedad o deterioro.
Etapa 3: Los materiales se `prepara, empaquetan y rotulan para seguridad y evitar daos.
El empaque de cada material estar determinado por la naturaleza de su uso y mtodo mas
adecuado de esterilizacin.
Etapa 4: eliminan formas vegetativas
Etapa 5: los materiales se almacenan hasta su uso, resguardando que mantenga las
condiciones (esterilizacin/desinfeccin) y su correcta distribucin y rotulacin.
Clasificacin Mtodos de esterilizacin
A.- Procedimientos Fsicos de Esterilizacin:
1.- Calor
1.1.- Calor seco: Por este procedimiento se produce la carbonizacin de toda la materia orgnica.
a) Llama al rojo( Incineracin ): Se utiliza el mechero de Bunsen, que da una temperatura media
de 1300 C en el cono reductor.
b) Flameado: Sirve para esterilizar la boca de tubos y matraces y las asas de Drigalsky.
c) Aire caliente (Horno Pasteur): Al no poseer humedad es poco penetrante, por lo tanto, para
esterilizar es necesario someter el material a altas temperaturas por un tiempo prolongado. El
aparato ms empleado para la esterilizacin por aire caliente es el HORNO PASTEUR. La
esterilizacin en este aparato se logra manteniendo la temperatura a 180 C durante, por lo menos,
2 horas.
VENTAJA
Ventajas y desventajas calor secos
LIMITACIONES

1.2.- Calor hmedo: Por este procedimiento se produce la muerte microbiana por coagulacin del
protoplasma al desnaturalizar protenas y cidos nucleicos
a) AUTOCLAVE (Vapor de agua a presin): Produce calentamiento rpido, posee alto grado de
penetracin y humedad en abundancia, lo que facilita la desnaturalizacin de las protenas. El
aparato que se utiliza para esterilizar por vapor de agua se denomina AUTOCLAVE. Este aparato
se opera por lo general a una presin de 1atm., 121 C durante 15 a 20 minutos para medios de
cultivo y materiales; y 30 minutos para materiales contaminados y cultivos de microorganismos.

b) Pasteurizacin: Es el procedimiento por el cual se logra matar algunos tipos de

microorganismos de los productos lcteos. Consiste en someterlos a calor controlado (71 C por 15
seg. o 63 C por 30 minutos), y luego se procede a enfriar rpidamente. La temperatura utilizada se
basa en el tiempo letal trmico para aquellos microorganismos ms resistentes manteniendo las
propiedades organolpticas del producto.

c) Tyndalizacin: Este mtodo implica calentamiento del material a 100 C durante tres das con
sucesivos perodos de incubacin. Las esporas resistentes germinarn durante esos perodos de
incubacin, y en la siguiente exposicin al calor las clulas vegetativas son destruidas. Este
mtodo es utilizado para aquellas sustancias que no pueden ser calentadas a ms de 100 C sin
que resulten daadas, como por ejemplo suero sanguneo y medios con huevo.
d) Ebullicin: Consiste en hervir los objetos en agua a 100 C, logrando la destruccin de las
formas vegetativas de las bacterias solamente.
Ventajas y desventajas calor hmedo

2.- Radiaciones
2.1.- Rayos no ionizantes:
Rayos U.V.: Aquellas longitudes de onda corta (260nm) son extremadamente letales. La muerte
de la clula por radiacin U.V. se debe a su accin sobre el DNA, el cual sufre una modificacin
por la formacin de dmeros de Timina con lo cual no puede realizarse la replicacin del DNA. Este
tipo de ondas tienen poca capacidad de penetrar la materia inanimada, por lo cual se utiliza slo
para esterilizar la superficie de los objetos que se exponen directamente a la accin de la luz.
2.2.- Rayos ionizantes:
Rayos X, catdicos y gamma: Se llaman radiaciones ionizantes porque tienen suficiente energa
para empujar los electrones fuera de las molculas e ionizarlas. El dao intracelular es debido a la
produccin de H2 libre, radicales hidroxilos y algunos perxidos. Al contrario de la luz U.V., stos
tienen considerable capacidad de penetracin.
3.- Filtracin
En este proceso se produce la separacin mecnica de los microorganismos contenidos en
un medio lquido. Para tal efecto se utilizan filtros estriles con una porosidad tal que los
microorganismos sean retenidos.
Existen diversos tipos de filtros que difieren segn el material de fabricacin, por ejemplo:
filtros Millipore, constituidos de acetato de celulosa, con dimetros de poros de 0,2 a 0,45.
Este mtodo es utilizado para esterilizar soluciones que contengan sustancias termolbiles
(sensibles a altas temperaturas).

B.- Procedimientos Qumicos de Esterilizacin:

Los agentes qumicos como el xido de etileno, formaldehdo o glutaraldehdo reaccionan con
gran facilidad con diferentes grupos funcionales de los cidos nuclecos y protenas alquilando
estos radicales esenciales.
a) xido de etileno (ETO): Es un gas inflamable y potencialmente explosivo, muy penetrante que
inactiva microorganismos sustituyendo tomos de hidrgeno lbiles por otros grupos como
hidroxilos, carboxilos, etc. El material se expone a esterilizar a un 5-10% de xido de etileno en
dixido de carbono a 50-60 en condiciones de humedad controlada durante 4 a 6 horas. Es
necesario someterlo despus a un perodo de aireacin debido a su carcter mutagnico. Es un
agente alquilante efectivo en la esterilizacin de material de laboratorio, material de plstico y para
la desinfeccin de frutas , material termolbil como prtesis, catteres, etc.
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b) Formol o formaldehido : Es un gas fcilmente soluble en agua que se utiliza al 40%

(formalina). Usado en forma gaseosa y en cmara cerrada se emplea en la esterilizacin
hospitalaria y en la industria farmacutica. Tambin es muy utilizado como desinfectante ambiental
de salas altamente contaminadas que una vez tratadas deben airearse.
c) Glutaraldehdo: Se emplea sumergiendo el material limpio en una solucin al 2%, se emplea
sobre todo en la esterilizacin de instrumentos pticos y los utilizados en terapia respiratoria.
Compuestos inorgnicos.
Desinfectantes y antispticos. La actividad de los compuestos derivados de metales pesados
(como plata, mercurio, etc.,) se debe a la formacin de sales que se disocian con dificultad de los
grupos sulfidrilos de las protenas.
a. Nitrato de plata y derivados agnticos El ms utilizado como desinfectante de la piel es el
mercurio cromo, no es txico y sigue siendo activo en presencia de materia orgnica. Son
buenos bactericidas. El nitrato de plata se ha utilizado en el tratamiento de quemaduras en
soluciones al 0,5% y en la profilaxis de la oftalmia neonatorum por Neisseria gonorrae.
b. Derivados mercuriales: Es un agente oxidante de efecto fugaz por ser descompuesto por
las catalasas de los tejidos.
c. Agua oxigenada (perxido de hidrgeno): Agente oxidante que se inactiva en presencia de
materia orgnica. Es poco utilizado. En dermatologa es utilizado por su propiedad
antifngica.
d. Permanganato de potasio Se inactivan en presencia de materia orgnica. El cloro y
derivados son agentes oxidantes muy usados en la potabilizacin del agua en forma de cloro
gaseoso en grandes establecimientos, y en forma de hipoclorito es utilizado para descartar
material biolgico (sangre, suero, etc.). La cloramina es un antisptico menos potente que el
hipoclorito, de accin ms lenta pero mejor tolerada en la aplicacin tpica.
e. Derivados clorados yodados. Son agentes oxidantes que se usan en forma de solucin
acuosa, combinndolos con detergentes o sustancias orgnicas. Los yodoformos son
compuestos que se liberan progresivamente. El Yodo se encuentra en la polivinilpirrolidona
(povidona yodada). Existen tambin soluciones alcohlicas.
MATERIAL A ESTERILIZAR
ROPA, CELULOSA, ALGODON
GOMAS, SILICONAS, LATEX
INSTRUMENTAL METALICO, CAJAS
PERFORADAS METALICAS
MATERIAL DE POLIETILENO, PVC Y
MATERIAL QUE NO SOPORTE To
SOBRE 57oC
MATERIAL DE VIDRIO

METODO DE ESTERILIZACION
AUTOCLAVE POR VAPOR A 132-134 oC
AUTOCLAVE POR VAPOR A 121oC
AUTOCLAVE POR VAPOR A 132-134 oC
OXIDO DE ETILENO
AUTOCLAVE POR VAPOR A 132-134 oC

Compuestos orgnicos. Desinfectantes y antispticos.

Actan desnaturalizando protenas. Su accin es rpida pero se evaporan con facilidad. El
alcohol etlico se utiliza en antisepsia a una concentracin del 70%, a esta concentracin se
reduce ms la tensin superficial de la clula bacteriana facilitando el proceso de
desnaturalizacin.

a. Alcoholes : Actan precipitando protenas. El hexaclorofeno y el fenol no se emplean por su

toxicidad. Otros derivados fenlicos son los cresoles, los que unidos a jabones originan
compuestos estables.
b. Fenoles : Es un derivado fenlico que acta alterando la permeabilidad de la membrana
celular bacteriana. Tiene inactivacin rpida y es bien tolerado por la piel. Se emplea mucho
en hospitales en el lavado de la superficie cutnea en forma de solucin (acuosa o alcohlica)
o asociada a detergentes no inicos.
c. Clorohexidina : Actan desorganizando las membranas citoplasmticas. Tienen escaso
poder bacteriosttico. Se pueden mejorar combinndolos con desinfectantes u otras
sustancias tensoactivas como laurilsulfato.
d. Detergentes anionicos: Tienen accin antisptica, se inactivan en contacto con jabn,
algodn y materia orgnica. Son poco usados.
e. Detergentes cationicos : interaccionan con las membranas y se usan como alguicidas en
piscinas. agentes que alteran las membranas y se usan en la limpieza del material mdico y
de la industria agroalimentaria
f. Glicoles. Propilenglicol y Etilenglicol, se aplican por medio de unos aparatos llamados

glicosatos o en forma de aerosoles para desinfeccin ambiental.

TAREA DE INVESTIGACION :
AVERIGUAR LA CLASIFICACION OMS RESPECTO A LA ROTULACION DE LOS
DISTINTOS TIPOS DE DESECHOS A NIVEL HOSPITALARIO ( COLOR SEGU
TPO DE RESIDUO )
ANEXO : MATERIALES DE LABORATORIO
A.- Material de vidrio
Material
1.- Tubos de ensayo
2.- Placas de petri
plstico)
3.- Pipetas graduadas
4.- Asa de Drigalsky
5.- Matraces Erlenmeyer
6.- Matraces Monod
7.- Probetas
8.- Portaobjetos
9.- Cubreobjetos
10.- Portaobjeto excavado
11.- Campanas Durham
12.- Vasos de precipitado
B.- Material diverso
1.- Asa de loop
2.- Asa recta
3.- Filtro Millipore
4.- Discos de antibiticos
5.- Mechero Bunsen
6.- Portapipetas (pipetero)

Utilizacin
Contener medios de cultivo y/o cultivos
Siembra en medio slido en superficie (tambin

existen

de

Traspaso de lquidos en volmenes exactos

Siembra homognea en placas de petri
Preparacin de medios de cultivo
Determinacin turbidimtrica de crecimiento bacteriano
Medicin de volmenes exactos
Observaciones microscpicas
Observaciones microscpicas
Observaciones microscpicas en gota pendiente
Deteccin de gas en cultivos microbianos lquidos
Contener y preparar soluciones

Siembra en estra en medio slido y siembra en medios lquidos

Siembra de microorganismos en picadura
Esterilizacin de medios lquidos termolbiles por filtracin
Valorizacin de antibiticos (antibiograma)
Esterilizacin al rojo y flameado. Proporciona ambiente asptico
del rea de trabajo
Contener pipetas estriles

7.- Cestillo metlico

8.- Cementerio
C.- Aparatos
1.- Microscopio ptico
2.- Autoclave
3.- Horno Pasteur
4.- Refrigerador
5.- Incubadora o estufa
6.- Shaker
7.- Bao de vapor
8.- Freezer

Contener material a esterilizar en autoclave

Eliminacin de pipetas sucias y/o contaminadas

Observacin de microorganismos
Esterilizacin por calor hmedo
Esterilizacin por calor seco
Mantencin de medios de cultivo y cultivos
Crecimiento de cultivos en condiciones controladas de
temperatura (calor seco)
Crecimiento de cultivos en condiciones controladas de
temperatura y aireacin
Crecimiento de cultivo en condiciones controladas de
temperatura (calor hmedo)
Almacenamiento prolongado de cultivos bacterianos y
mantencin de reactivos y soluciones