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1. Dfinition:
Llectrophorse est une mthode de sparation de particules charges
lectriquement par migration diffrentielle sous laction dun champ lectrique.
a. Llectrophorse libre, en veine liquide.
1927: Ralise dans un tube section carr (mesures optiques au travers du
tube): la sparation nest pas totale, mais les frontires qui se forment sont
mises en vidence par des mthodes optiques (absorption UV, indice de
rfraction, fluorescence,...).
Mesure de la mobilit lectrophortique.
Vrification de la puret des protines.
Schma 1
b. Llectrophorse son support en lectrophorse de zones: permet de
stabiliser la phase liquide grce lutilisation dun support poreux imprgn dun
solvant tamponn.
Schma 2
Le support doit tre homogne, poreux et inerte. On peut utiliser du papier, de
lactate de cellulose, du gel de polyacrylamide, dagarrose, damidon, de silice,...
Principe de migration, lectrophorse.
La migration dpend de:
La mobilit lectrophortique. Il est fonction de la charge et de la gomtrie de
la particule. Une particule de charge lectrique Q place dans un champ
lectrique E, est soumise une force F qui lentrane vers llectrode de signe
oppos.
F= Q.E
f= 6 rv
Schma 3
Les deux forces squilibrent, et la particule se dplace alors vitesse
constante.
QE= 6 rv
v= QE/( 6 r)
La mobilit :
= v/E= Q/( 6 r)
La mobilit est une caractristique de chaque particule. La charge Q est
fonction
isolectrique
+
+
quilibre qui est vrifi pour Cl presque pour K et pas du tout pour Na .
2.4.3 Hypothse de Boyle et Conway.
Suppose la membrane impermable
au sodium.
Argument favorable:
+
Si lon fait varier la concentration en Na , pas de changement pour Vm.
Argument contre:
+
-Le calcul de V pour K donne 5mV dcart.
Flux sortant < flux entrant.
-Exprience avec les ions radioactifs: permis de comprendre les phnomnes, de
mesurer la permabilit
Pompe sodium-potassium:
Schma 8
ATPase membranaire utilise lnergie libre de lhydrolyse dune molcule dATP
pour transporter:
+
-3 ions Na du milieu intra-cellulaire vers lextrieur.
+
-2 ions K en sens inverse.
+
-La prsence de Mg est indispensable.
Il ny a pas
dtat dquilibre mais rgime permanent quilibre les flux.
Rgime permanent consomme de lnergie.
Rq: Diffrents canaux ioniques de la membrane:
-Pompe sodium-potassium.
-Canaux ioniques slectifs lectro-sensible.
3. Caractristiques lectriques de la membrane.
3.1 Stimulation lectrique.
Schma 9
Le circuit de stimulation lectrique:
Onde rectangulaire du courant:
Schma 10
3.2 Rsistance membranaire en courant continu.
Loi dOhm: U= RI
effective de lion x.
logarithme naturel et [ X ] la concentration
1
e
maintenant ln( [ X ]e / [ X ]i ) en -ln ( [ X ]i / [ X ]e ) et galement ln en log (ln= 2,3.log ),
lquation peut alors scrire:
2. Repolarisation.
Les canaux sodium se ferment donc le sodium ne rentre plus.
+
Les canaux potassium souvrent: les ions K sortent pour compenser lentre du
+
Na . La face externe de la membrane redevient alors lectropositive, et la face
interne redevient lectrongative: la membrane est nouveau polarise.
3. Hyperpolarisation.
+
+
Le rtablissement de ltat initial est actif: La pompe ATPase Na , K
+
+
dpendante, expulse les ions Na et fait entrer K . Cette tape ncessite de
lnergie obtenue par lhydrolyse de lATP, qui est la forme de stockage de
aufait que pour 2K +
lnergie cellulaire: Lhyperpolarisation transitoire est due
+
Temps utile: dure minimale du crneau qui provoque un effet de pointe pour une
intensit gale la rhobase.
Schma 20
Si lon coupe le stimulus ce moment, la pointe se produit quand mme.
Si lon coupe le stimulus avant ce moment, pas de PA.
Cest la loi du tout ou rien.
Schma 21
Chronaxie (1909-Lapicque): dure dune onde rectangulaire de courant dune
intensit de deux rhobase:
-notion arbitraire.
2.5 Excitabilit aprs un PA-priode rfractaire.
Modifications locales de lexcitabilit de la fibre.
On distingue trois phases:
Schma 22
PRA: Priode rfractaire absolue. Limite du nombre dinflux que peut
transmettre la fibre.
PRR: Priode rfractaire relative, il faut une intensit supraliminaire pour
obtenir un PA.
PSN: Priode supranormale. Lexcitabilit est augmente (7%). Intensit
infraliminaire.
PSN correspond une phase hyper excitable hypo excitable.
Rq: Les variations dexcitabilit vont conditionner le sens de propagation des PA.
Seule la pointe se propage; prpotentiel
et postpotentiel sont des phnomnes
locaux.
3. Thorie ionique des PA.
1. Hodgkin-Huxley (prix nobel de 1952).
+
Pointe: Brusque augmentation de la permabilit de la membrane pour les Na ,
pour un seuil de polarisation donn.
-Tout ou rien.
-Transitoire.
Schma 24
Plateau expliqu par la conductance pour le Ca.
Cellules nodales au niveau cardiaque:
Schma 25
Pas de pointe.
Les canaux Na et K sont indpendants.
On peut les bloquer sparment.
+
La trtodotoxine (TDT) bloque le canal Na .
+
Le ttrathylamonium
(TEA) bloque le canal K .
+
Canaux ioniques:
M= 270 000 Daltons.
Ouvert/ferm: La conformation (orientation des groupements dipolaires) est
fonction du potentiel transmembranaire. On dit quils sont voltage-dpendants
sous linfluence dune charge lectrique.
4. Propagation.
Caractristiques essentielles de la pointe, qui apparat selon le mode tout ou
rien.
4.1 Mcanismes: fibres non mylines.
Mcanisme dautoexcitation d un dplacement des charges de proche en
proche.
courants locaux.
Changement de polarit de la membrane courants locaux dpolarisation des
zones adjacentes PA.
un PA.
Le PA sepropage thoriquement dans les deux sens.
Schma 26
La rgion proche de la zone excite layant t juste avant, est inexcitable. La
pointe ne peut revenir en arrire cause des priodes rfractaires.
un sens de propagation.
Pendant le PA et un peu aprs, la zone active de la membrane ne peut pas tre
stimule nouveau (priode rfractaire).
4.2 Fibres mylinises.
Schma 27
Le processus de propagation est identique au prcdent.
La rsistance en dehors des noeuds de Ranvier tant trs grande: les courants
locaux sexercent dun noeud lautre.
Les pointes sautent dun noeud lautre, la conduction est saltatoire vitesse
plus grande.
Fibres mylinises entoures de myline avec intervalles rguliers
des zones
sans mylines, les noeuds de Ranvier. Les fibres de mylines (une seule cellule).
Le PA nexiste que dans les noeuds de Ranvier.
4.3 Clrit.
Dpend du diamtre (plus le diamtre est grand et plus la clrit est
importante), de prsence de myline (si myline, la vitesse est plus grande).
EXPLORATIONS FONCTIONNELLES EN LECTROPHYSIOLOGIE
lectrocardiographie.
1. Gnralits.
Mthode trs utilise.
Mesure des potentiels distance.
But partir:
-de la mesure des potentiels en diffrents points.
-de lanalyse des lments physiques, lectronique qui explore la cration de ces
potentiels partir dun ensemble de courants locaux.
Principe de la mesure:
Schma 28
lectrode de surface.
Oesophagien.
Endocavitaire.
2. Electrocardiographie.
Excitabilit, conduction, automatisme, contractilit.
2.1 Rappels.
On distingue:
Tissu nodal: Noeud sinusal auriculaire (Keith et Flack). Noeud
auriculoventriculaire (Tawara). Le tronc et les branches du faisceau de His, le
rseau Purkinje.
Conditionne lactivit du coeur.
laboration et conduction de linflux.
= qd
M
Sens -q +q
V+= (1.(+q))/(4 0 .r1)
Vp= (q/4 0 )((1/r1)-(1/r2))
0 : permittivit du vide ou constante dilectrique.
Schma 32
et
Up
M
vecteur unitaire Up et le produit scalaire de
:
. Le module de
Si P >> a.
2
2
dM
sous lequel
estvu du
point P le diple lmentaire.
2
Vp=K(( S cos
)/r )
2
S . U
K
Vp= (K/r )
Le potentiel cr par un feuillet est identique au potentiel cr par un diple de
moment
S
perpendiculaire au feuillet orient de la face ngative vers la face
positive.
2e hypothse:
Lorigine du vecteur diple est fixe au cours du cycle cardiaque= centre
lectrique du coeur.
Pour le ventricule:
Lextrmit du vecteur diple quivalent dcrit une courbe
Vectocardiogramme.
La position moyenne axe lectrique.
Schma 39
3e hypothse:
Soit U R , U L et U F
les trois vecteurs unitaires:
UR
+ UL + UF = 0
. U
R,L ,F
M
V R,L,F = K
U
V R -V L + V F =
( UR +
UL
F
M
K
+
)= 0
chaque instant, la somme gomtrique des potentiels est nulle (0: centre
de rfrence).
potentiel
chaque
instant,
la valeur
du potentiel
Schma 42
Loi des noeuds de Kirchoff.
i = 0 (somme algbrique des courants)
((V R - V W )/r) + ((V L - V W )/r) + ((V F - V W )/r)= 0
3V W = V R + V L + V F (= 0)
V W = 0 ; potentiel de rfrence.
Drivations
bipolaires:
Schma 43
D1= V L - V R
D2= V F - V R
D3= V F - V L
UR
(
D1=
V L - V R = K
UL
M
)
Schma
44
Schma
45
UL
R
= 2 U R cos 30= 2( 3 /2)= 3
. U
R,L
M
D1= 3 .K.
Dans les drivations bipolaires:
de proportionnalit K.
Augmentation
dun facteur 3 du coeff
Consquences:
Drivations augmentes
de Golberger (1942).
V R aV R
V L aV L
V F aV F
Schma 46
drivations bipolaires ( 3 ).
aV F = V F - V
GF = (3/2)V F
= (3/2)V
F,L,R
aV F,L,R
Lutilisation
utilise selon Golberger (facteur 3/2).
de aV R , est
5. lectrocardiogramme.
5.1 Formegnrale.
Schma 47
P: Activation auriculaire.
QRS: Complexe dactivation ventriculaire.
T: Onde T restauration des ventricules.
Rq: Pas de restauration auriculaire.
5.2 Drivations frontales.
D1, D2, D3
aV R , aV L , aV F
Trois lectrodes; Six drivations.
Rgle:
Les 6 drivations reprsentent les variations au cours du temps dans projection
sur les 6 axes de Bailey.
M
du vecteur
Schma 48
lectrocardiogramme: