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AGRADECIMIENTOS
A mi padre Dios, en el poderoso nombre de Jesucristo te doy gracias por sostenerme en
mis momentos de desalientos, por ser mi fortaleza, mi gua y mi luz en el camino
hacia mi meta y por lograrla con xito.
especialmente al Bilogo Manuel Lpez Yaes por su valioso apoyo en todos los
trmites de la beca.
A los directores del CET-MAR # 12, MVZ Martn Palomera Todd, y M. en C. Ramn
Ramos Crespo por el consecuente e invaluable apoyo manifestado durante el periodo
de la realizacin de este estudio.
A todos mis compaeros que laboran en el CET- MAR # 12 por todo el apoyo.
A la Dra. Ma. del Roco Flores Bello y el Dr. Sergio Aguilar Espinosa por ser quienes me
iniciaron en ese mundo maravilloso de los hongos micorrzicos, por su asesora en
las mltiples actividades de campo y de laboratorio, sus constantes asesoras, sus
acertadas sugerencias y por su apoyo moral, durante la realizacin de este proyecto.
A la Dra. Luca Varela Fregoso por haber formado parte de mi comit tutorial (como
directora adjunta) por compartir su amplia experiencia y conocimientos
relacionados con los hongos, por su tiempo dedicado en la elaboracin de este
documento y sobre todo por su amistad.
Al Consejo Acadmico asignado al Programa donde realic mis estudios de postgrados: Dr.
Sergio Aguilar Espinosa, Dra. Ma. del Roco Flores Bello, Dr. Javier Faras Larios
y Dr. Jos Gerardo Lpez Aguirre, por sus acertados observaciones e indicaciones
que de manera sustancial contribuyeron al enriquecimiento de este trabajo.
A las Dra. Marilu Lpez Lavn, M. en C. Edelmira Galindo Velasco y al Dr. Oscar
Rebolledo Domnguez, por el apoyo brindado en esos momentos de angustia y
desaliento.
DEDICATORIAS
A mis padres:
Sara y Rafael gracias por traerme a este maravilloso camino de la vida, pap se que estas
con Dios muy contento porque alcance mi sueo.
NDICE
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NDICE DE CUADROS
NDICE DE FIGURAS
ABREVIATURAS
RESUMEN
ABSTRACT
1. INTRODUCCIN
2. ANTECEDENTES
2.1 Metales pesados
2.1.1 Metales pesados en el ambiente
2.1.2 Efecto de los metales pesados en suelos
2.2
2.3
2.4
2.5
2.6
VII
VIII
IX
X
XI
1
6
6
6
11
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23
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32
40
42
42
47
47
49
52
52
54
61
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2.7
3 MATERIALES Y MTODOS
3.1 Muestreo
3.1.1. Localizacin y descripcin de los sitios de muestreo
3.1.2. Muestreo de suelos
3.1.3. Muestreo de races
3.2 Anlisis fsico y qumicos del suelo colectado
3.2.1. Textura del suelo
3.2.2. pH del suelo
3.2.3. Conductividad elctrica
3.2.4. Materia orgnica
3.3 Determinacin de la concentracin de metales pesados en suelo
3.4
3.5
3.6
3.7
3.8
3.9
colectado
Hongos micorrzicos arbusculares y colonizacin de las
plantas
3.4.1. Cuantificacin de esporas
Determinacin del porcentaje de colonizacin micorrzica
3.4.2. arbuscular
Seleccin del suelo de estudio
Propagacin de los hongos micorrzicos arbusculares nativos
3.6.1. Cultivos trampa
3.6.2. Diversidad morfolgica de HMA presentes en el suelo
de estudio
Contribucin de Glomus intraradices en la absorcin y
translocacin de cinc y cobre
3.7.1. Desinfeccin de la semilla del girasol
3.7.2. Germinacin de la semilla del girasol
3.7.3. Transplante
3.7.4. Inoculacin
3.7.5. Duracin del experimento
3.7.6 . Preparacin y anlisis de muestras
Variables evaluadas
Anlisis estadstico
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4
RESULTADOS
4.1 Anlisis fsicos y qumicos de suelo
4.2 Concentracin de metales pesados en los suelos muestreados
4.3 Cuantificacin de esporas y determinacin de la colonizacin
micorrzica arbuscular
4.4 Diversidad morfolgica de HMA presentes en el suelo de estudio
4.5 Contribucin de G. intraradices en la absorcin y translocacin del
Cu y Zn por plantas de girasol inoculada y no inoculadas
4.6 Nmero de esporas y colonizacin micorrzica al finalizar el
experimento
DISCUSIN
5.1 Anlisis fsicos y qumicos de suelo
5.2 Concentracin de metales pesados en los suelos muestreados
5.3 Cuantificacin de esporas y determinacin de la colonizacin
micorrzica arbuscular
5.4 Diversidad morfolgica de HMA presentes en el suelo de estudio
5.5 Contribucin de G. intraradices en la absorcin y translocacin
del Cu y Zn por plantas de girasol inoculadas y no inoculadas
5,6 Nmero de esporas y colonizacin micorrzica al finalizar el
experimento
6 CONCLUSIONES
7 LITERATURA CITADA
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NDICE DE CUADROS
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Cuadro 1. Intervalos de lmites normales y mximos permisibles
de metales pesados en suelo
19
20
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NDICE DE FIGURAS
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Figura 1. Ruta de incorporacin de contaminantes del suelo a la
cadena alimenticia
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ABREVIATURAS
Cd
Cadmio
Cr
Cromo
Cu
Cobre
HCl
cido clorhdrico
HNO3
cido ntrico
H2 O2
Agua oxigenada
HMA
FAA
Formol-alcohol-cido
Gramo
Kg
Kilogramo
Km
Kilmetro
KOH
Hidrxido de potasio
MO
Materia orgnica
Pb
Plomo
pH
Potencial de hidrgeno
PVLG
Zn
Cinc
RESUMEN
En el presente estudio se llevo a cab un experimento en maceta con plantas de girasol
(Helianthus annus.L), inoculadas y no inoculadas con Glomus intraradices, para
determinar la contribucin de los hongos micorrzicos arbusculares (HMA) en la absorcin
y la translocacin de Zn y de Cu, as mismo se determin la presencia de HMA en suelos
irrigados con agua del ro Marabasco, contaminada con metales pesados por filtraciones a
su cauce procedentes de la laguna de jales en donde se depositan residuos de mina. Se
muestrearon suelos de cuatro sitios seleccionados al azar a lo largo de un gradiente de 74
Km de longitud entre la laguna de oxidacin situada en el municipio de Minatitln, Colima
y la zona agrcola del municipio de Cihuatln, Jalisco.
Se escogi el suelo con mayor concentracin de Zn y Cu y con presencia de HMA nativos,
los cuales fueron propagados para su identificacin. Posteriormente este suelo fue
esterilizado y en l se sembraron plantas de girasol inoculadas y no inoculadas con Glomus
intraradices. Al finalizar el experimento se cuantific la concentracin de Cu y Zn en la
raz y en la parte area de las plantas de girasol inoculadas y no inoculadas. De acuerdo con
los resultados, se encontr una diferencia significativa entre los dos tratamientos y se
determin que G. intraradices contribuye de manera positiva en la absorcin de esos
metales por la raz y redujo su paso hacia la parte area de la planta. El metal que se
absorbi en mayor cantidad fue el Cu y disminuy su translocacin hacia la parte area de
las plantas de girasol inoculadas. De la propagacin de los HMA nativos se identific
Glomus mosseae como la especie ms representativa.
ABSTRACT
In the present study a pot experiment was conducted with plants of sunflower (Helianthus
annus L.), inoculated and not inoculated with Glomus intraradices, to determine the
contribution of arbuscular mycorrhizal fungi (AMF) in absorption and translocation of Zn
and Cu; also the presence of AMF in soils irrigated with water of the Marabasco river,
contaminated with heavy metals by filtrations to its channel coming from the jales dam of a
mine wastes, was determined. Soils from four sites randomized throughout a gradient of 74
km in length, between the lagoon of oxidation located in the municipality of Minatitln,
Colima and the agricultural zone of the municipality of Cihuatln, Jalisco were sampled.
The soil with greater concentration of Zn and Cu and with presence of native AMF, was
chosen and native AMF were propagated for identification. Afterwards the soil was
sterilized and plants of sunflower inoculated and not inoculated with Glomus intraradices
were seeded in it. When finalizing the experiment the concentration of Cu and Zn in the
root and the aerial part of the inoculated and not inoculated plants of sunflower was
quantified. According with the results, a significant difference between both treatments was
found, and it was observed that G. intraradices contributed in a positive way in the
absorption of these metals by the root and reduced the passing towards the aerial part of the
plant. The metal that was absorbed in greater amount in the root was Cu, diminishing its
translocation towards the aerial part of the inoculated sunflower plant. The propagation of
the native populations of AMF, Glomus mosseae was identified as the most representative
species.
Keywords: arbuscular mycorrhizal fungi, Glomus, heavy metals, phytoextraction, soil
amendment
1. INTRODUCCIN
Uno de los problemas ms sealados por la sociedad a nivel mundial que ocupa un lugar
prominente en los programas sociales y polticos es la de destacar la progresiva
degradacin de los recursos naturales causada por la gran diversidad de contaminantes
txicos orgnicos e inorgnicos, tanto en la atmsfera, agua, suelo y subsuelo, procedentes
de diversas actividades naturales y antropognicas, generando un irremediable deterioro en
el ambiente (Jensen et al., 2000; Khan et al., 1997; Adriano, 1992; McNeill y Waring.,
1992; Adriano, 1986).
Entre los contaminantes inorgnicos ms nocivos para los seres vivos estn los metales
pesados derivados principalmente de actividades mineras (Khan et al., 1997; Chen et
al.,1993; Alloway, 1990) que dan lugar a la prdida irreversible de los recursos naturales
por no son biodegradables. Es necesario reducir los niveles de contaminacin, minimizar
los elevados costos de restauracin de suelos y cuerpos de agua contaminados, lo que
representa un enorme reto para la humanidad (McEldowney et al., 1993).
Con base en lo anterior existe la necesidad de desarrollar nuevas alternativas que permitan
recuperar los suelos altamente contaminados por metales pesados (Chaney et al., 2001;
Comis, 1996; Cunninghan y Lee, 1995; Chaney, 1983). Actualmente existen estudios
tendientes a resolver la contaminacin originada por metales pesados en suelos, mediante
estrategias basadas en el uso de plantas que tienen la propiedad de acumular metales
pesados; proceso denominado fitorremediacin que consiste en la remocin,
transferencia, estabilizacin y/o degradacin y neutralizacin de compuestos orgnicos,
1
inorgnicos y radioactivos que resultan txicos en suelos y agua. Esta definicin incluye
cualquier proceso biolgico, qumico o fsico, inducido por las plantas, que ayude en la
absorcin, degradacin y metabolizacin de los contaminantes, ya sea por las plantas
mismas o por los microorganismos que se desarrollan en la rizsfera (Kabatas-Pendias y
Pendias, 2000; Gonzlez, 1999; Kumar et al., 1995; Salt et al., 1995; Anderson y Coats,
1994; Baker et al., 1994; Raskin et al., 1994; Adriano, 1990).
(Meagher, 2000; Salt et al., 1999; Chaudhry et al., 1998; Raskin et al., 1997; Berthelin et
al.,1995; Brown et al., 1995; Chaney, 1983).
Este suceso puede ser cientficamente explicable tomando en cuenta que la literatura
reporta que en los afluentes de las industrias mineras existen concentraciones de metales
pesados ms all de las permisibles para un buen desarrollo de los cultivos. Estas altas
concentraciones causan fitotoxicidad interfiriendo con el desarrollo vegetal (Lasat, 2002;
Berti et al., 1995; Chaudhry et al., 1997a; Baker y Brooks, 1989). Una de las limitantes de
utilizar plantas para remediar suelos contaminados es la pobre masa radicular y entre las
poblaciones de microorganismos rizsfericos del suelo que contribuyen a aumentarla son
los hongos micorrzicos arbusculares. Por lo que el lograr maximizar la colonizacin
radicular por HMA en ambientes adversos como son los suelos contaminados con metales
pesados es ahora de gran inters (Khan et al., 2000; Chaudry et al.,1997b).
Con base en estos antecedentes en el presente trabajo, el inters de utilizar un modelo hasta
ahora no experimentado, que es la utilizacin de plantas de girasol asociadas con hongos
micorrzicos nativos para tratar de contrarrestar los efectos txicos de los metales pesados
Zn y Cu, presentes en suelos contaminados con filtraciones de residuos de minas.
Objetivo general
Objetivos particulares
2. ANTECEDENTES
2.1 Metales pesados
2.1.1. Metales pesados en el ambiente
Los metales pesados, son convencionalmente definidos como elementos con propiedades
metlicas (conductibilidad, ductilidad, etc), nmero atmico mayor de 20, y cuya densidad
es mayor a los 5 g / cm3. Se consideran metales pesados el cadmio, cromo, mercurio, zinc,
cobre, plata y arsnico. Estos elementos constituyen un grupo de gran importancia, ya que,
pese a que son esenciales para las clulas, en altas concentraciones pueden resultar txicos
para los seres vivos, como humanos, organismos del suelo, plantas y animales (Spain et al.,
2003; Liao et al., 2003).
En la atmsfera, los metales originados por las fuentes de emisin como la combustin de
nafta con plomo, se encuentran como material suspendido en el aire que respiramos. Por
otro lado, las aguas residuales no tratadas y las provenientes de minas y fbricas,
contaminan a los ros y las aguas subterrneas, y los desechos que contienen metales
txicos simplemente abandonados en el ambiente contaminando el suelo y se acumulan en
las plantas y los tejidos orgnicos (Liesko et al., 1999; Chen et al., 1992) (Fig. 1).
Debido que los metales pesados no son qumica ni biolgicamente degradables y una vez
emitidos pueden permanecer en el ambiente durante cientos de aos. Adems, su
concentracin en los seres vivos aumenta a medida que son ingeridos por otros, por lo que
la ingesta de plantas o animales contaminados puede provocar sntomas de intoxicacin
(Chaney et al., 2001; Licsko et al., 1999; McEldowney et al., 1993).
De acuerdo con Cabrera, (1999); Tunnell et al., (1996); Alloway, (1990); Sopper, (1988) la
actividad minera genera el desprendimiento de sustancias txicas, algunas de ellas
asociadas con la roca, otras utilizadas para la separacin de los minerales que se extraen y
son difundidos en el ambiente las cuales se bioacumulan en el organismo humano
ocasionando envenenamiento y una amplia variedad de enfermedades al trabajador as
como tambin
Por ejemplo los polvos de plomo provocan alteraciones al sistema nervioso central,
desestabilizando el carcter, irritabilidad, insomnio, afecta las clulas reproductivas
derivndose de esto malformaciones congnitas, abortos, partos prematuros, insuficiencias
renales. En las familias mineras los nios son principalmente afectados, ocasionndoles
prdidas de la capacidad de aprendizaje, y lento crecimiento. El plomo se acumula en los
huesos impidiendo la produccin de la sangre.
El cadmio por su semejanza qumica con el cinc provoca sntomas similares y su principal
va de acceso es la digestiva, debido al consumo de alimentos y agua contaminada. Otra va
El cobre es un elemento qumico de smbolo Cu, con nmero atmico 29; uno de los
metales de transicin e importante metal no ferroso. Su utilidad se debe a la combinacin
de sus propiedades qumicas, fsicas y mecnicas, as como a sus propiedades elctricas y
su abundancia. El cobre fue uno de los primeros metales usados por los humanos.
El cobre metlico se encuentra en mezclas (llamadas aleaciones) con otros metales tales
como latn y bronce, se encuentra como parte de otros compuestos formando sales. Las
sales de cobre ocurren naturalmente, pero tambin son manufacturadas, la ms comn es el
sulfato de cobre. La mayora de sus compuestos son de color azul-verde, son usados
comnmente en la agricultura para tratar enfermedades de las plantas, como el moho, para
tratar agua, y como preservativos para alimentos, cueros y telas.
De acuerdo con Kabata- Pendias y Pendias (2000) el cobre puede entrar al ambiente desde
minas y de otros metales y desde fbricas que manufacturan o usan cobre metlico o
compuestos de cobre, a travs de aguas residuales domsticas, la combustin de materiales
combustibles fsiles y desechos, la produccin de madera, la produccin de abonos de
fosfato, y de fuentes naturales (por ejemplo, por polvo del suelo esparcido por el viento,
volcanes, vegetacin en descomposicin, incendios forestales y del roco de agua de mar).
El cobre en el suelo se adhiere firmemente a materia orgnica y a minerales, se disuelve en
agua se une rpidamente a partculas suspendidas en el agua, generalmente no entra al agua
subterrnea. El cobre que es transportado por partculas emitidas por fundiciones y plantas
que procesan minerales regresa al suelo por la gravedad o por la lluvia o nieve.
Los metales pesados son elementos qumicos, presentes en todo tipo de suelo y sus niveles
de abundancia se reporta en porcentajes y partes por milln. Cuando el nivel de su
contenido en el suelo es por abajo de los lmites permitidos como se muestra en el cuadro
1. Presenta un efecto inocuo en la vegetacin y en las poblaciones microbianas, adems
tambin desempea un papel biolgico en diversas funciones de las clulas, lo que les ha
11
En el suelo, los metales pesados estn presentes como iones libres, compuestos metlicos
solubles, compuestos insolubles como xidos, carbonatos e hidrxidos. Su accin directa
sobre los seres vivos ocurre a travs del bloqueo de las actividades biolgicas, es decir, la
inactivacin enzimtica por la formacin de enlaces entre el metal y los grupos -SH
(sulfhidrilos) de las protenas, causando daos irreversibles en los diferentes organismos.
Para que los metales pesados puedan ejercer su toxicidad sobre un ser vivo, stos deben
encontrarse disponibles para ser captados por ste, es decir que el metal debe estar
biodisponible. El concepto de biodisponibilidad se encuentra ntimamente relacionado con
las condiciones fisicoqumicas del ambiente, que determinan la especiacin y por lo tanto la
concentracin de metal libre y lbil. Por ello es fundamental al determinar el grado de
contaminacin por metales pesados de un ambiente, conocer su biodisponibilidad, es decir,
la concentracin de metal libre presente en la muestra (Lloyd y Lovley, 2000).
12
pertenecientes a materiales de algunos suelos, pero ms del 90% llegan al suelo por
deposiciones atmosfricas secas y hmedas y como resultado de algunas prcticas
agronmicas (Adriano, 1986). Algunos de estos metales como Cr, Cu, Co y Mo, son
elementos traza esenciales para animales, microorganismos y plantas, mientras otros no lo
son como Pb, Cd, Zn; sin embargo en altas concentraciones todos ellos son considerados
txicos. Su biodisponibilidad y toxicidad a microorganismos incluyendo hongos
micorrzicos, plantas y animales son influidos por diversos factores particularmente pH,
temperatura, potencial redox, capacidad de intercambio catinico de la fase slida y
competencia entre iones (Leyval et al., 1994; Schmit y Sticher, 1991).
La contaminacin en suelos por metales pesados ocurre cuando estos son irrigados con
aguas procedentes de desechos de minas, aguas residuales contaminadas de parques
industriales y municipales, filtraciones de presas de jales (Zier et al., 1999; Wang et al.,
1992). Estos contaminantes pueden alcanzar niveles de concentracin que provocan efectos
negativos en las propiedades fsicas, qumicas y biolgicas como: reduccin del contenido
de materia orgnica, disminucin de nutrimentos, variacin del pH generando suelos
cidos, amplias fluctuaciones en la temperatura, efectos adversos en el nmero, diversidad
y actividad en los microorganismos de la rizsfera. Tambin dificultan el crecimiento de
una cubierta vegetal protectora favoreciendo la aridez, erosin del suelo, y la dispersin de
los contaminantes hacia zonas y acuferos adyacentes y como consecuencia aumenta la
vulnerabilidad de la planta al ataque por insectos, plagas y enfermedades, afectando su
desarrollo (Zhang et al., 2000; Cabrera et al., 1999).
13
La materia orgnica, reacciona con los metales formando complejos de cambio y quelatos.
Los metales, una vez que forman quelatos o complejos, pueden migran con mayor facilidad
a lo largo del perfil del suelo. La materia orgnica puede adsorber tan fuertemente a
algunos metales, como es el Cu, que pueden quedar en forma no disponible por las plantas,
motivo por el cual, algunas plantas crecidas en suelos ricos en materia orgnica, presentan
carencia de elementos como el Cu., Pb y el Zn, eso no significa que los suelos no estn
contaminados ya que las poblaciones microbianas se reducen notablemente.
14
La complejacin por la materia orgnica del suelo es una de los procesos que gobiernan la
solubilidad y la bioasimilacin de metales pesados. La toxicidad de los metales pesados se
potencia en gran medida por su fuerte tendencia a formar complejos organometlicos, lo
que facilita su solubilidad, disponibilidad y dispersin. La estabilidad de muchos de estos
complejos frente a la degradacin por los organismos del suelo es una causa muy
importante de la persistencia de la toxicidad. Pero tambin la presencia de abundantes
quelatos puede reducir la concentracin de otros iones txicos en la solucin del suelo
(Adriano, 1986; Alloway, 1990; Jackson y Alloway, 1993; Licsko et al., 1999).
Los metales pueden acumularse en tejidos vivos (bioacumularse) y luego ser transmitidos
de una especie animal a otra a travs de la cadena alimenticia. Por ejemplo, un rbol puede
alimentarse de aguas subterrneas contaminadas con metales, acumular algunos de estos
metales en sus hojas, y luego hay pjaros que se alimentan de estas hojas y que pueden
verse afectados por la toxicidad de este metal (Cobb et al., 2000; Cabrera et al., 1987). La
toxicidad de los metales en la plantas pueden causar reduccin en las races, quemaduras
en las hojas, deficiencia en los nutrimentos e incrementa su vulnerabilidad al ataque de
enfermedades e insectos (Angle et al., 1997; Kumar et al., 1995; Roane et al., 1994).
15
del trbol blanco crecidas en un suelo altamente contaminado con Cd, Pb, y Zn (Rother et
al., 1993). Otros estudios han demostrado los efectos txicos de metales pesados en la
nodulacin y actividad de la nitrogenasa (Vigue et al.,1991).
Dado que el arsnico es relativamente soluble en los cidos y sales de arsnico el mayor
factor por controlar en la toxicidad del arsnico es su biodisponibilidad en el suelo y en la
planta; el arsnico soluble en agua es ms fitotxico que otras formas estrechamente
relacionadas (Sharpley, 1994). Los cidos y sales de arsnico han sido usados en la
elaboracin de plaguicidas durante muchos aos, sin embargo esta prctica actualmente ha
dejado de utilizarse en el mundo.
La qumica y disponibilidad del cadmio en plantas de suelos agrcolas han sido estudiados,
un extenso parmetro de ndices de la actividad biolgica en suelos como la actividad
enzimtica, fijacin de nitrgeno y desnitrificacin son ampliamente investigados (Chaney
et al., 2000), comparado con otros metales, el cadmio, es ms movible en suelos en relacin
a la lixiviacin y disponibilidad en las plantas. Pero el cadmio es menos absorbido por el
suelo que el cobre, el nquel y el cinc, afortunadamente se encuentra presente en ms bajas
concentraciones en fertilizantes, estircol y bioslidos que otros metales (Vigue et al.,
1991).
Segn Chaney et al., (2000) entre los factores ms importantes encontrados que influyen en
absorcin del cadmio por las plantas son las propiedades del suelo como materia orgnica,
pH, proporcin Cd:Zn, niveles de hidruros de fierro, xidos de manganeso, el nitrgeno
16
aplicado, niveles de cadmio en fertilizantes con fosfatos. El cinc provee proteccin contra
la transferencia del cadmio hacia la cadena alimenticia, por medio de su potencial para la
fitotoxicidad e inhibicin de la absorcin y translocacin del cadmio en las plantas. Debido
a que el cinc y el cadmio son acumulados por las plantas en la proporcin que se presentan
con elevadas concentraciones de cinc y cadmio, la mxima concentracin foliar de cadmio
es limitada por la fitotoxicidad del cinc.
En la agricultura debe prestarse atencin a la contaminacin por cinc con los lodos de
clarificacin que se distribuyen sobre terrenos a cultivar, si es necesario, debe desistirse de
la explotacin agrcola, ya que las plantas pueden acumularlo y llevar de esta manera la
contaminacin al ser humano a travs de la cadena alimentara, lo que significa un riesgo
para su salud (Chaney, 1994), se puede detectar su acumulacin en los suelos hasta un radio
de varios kilmetros de distancia de las plantas metalrgicas, la acumulacin en las plantas
produce necrosis y clorosis e inhibe el crecimiento.
Con el propsito de interpretar el nivel de los metales pesados en el suelo, solo han sido
considerados los valores iniciales de su contenido: valores analticamente determinados
tanto en suelos normales no afectados por el impacto antropognico como en suelos
afectados. Los valores que representan los lmites mximos permitidos de concentracin de
metales pesados en suelos fueron establecidos, principalmente aplicable al crecimiento y
desarrollo de plantas. Los lmites mximos permitidos fueron establecidos en Alemania, de
acuerdo con los resultados obtenidos de laboratorio, invernadero y experimentos de campo
18
(Cuadro 1). De acuerdo con Kloke (1980) y Chumbley (1991) los lmites mximos
permitidos siguen siendo utilizadas en muchos pases, como Holanda, Austria, Canada,
Japn y Estados Unidos de Amrica.
Cuadro 1. Intervalos del contenidos de los lmites normal y mximo permitidos de los
metales pesados en los suelos (Kloke 1980).
Intervalo de contenido normal
Elementos
p.p.m.
qumicos
Cadmio
0.1 - 1.0
3.0
Cobalto
1 - 10
50
Cromo
2 - 50
100
Cobre
1 - 20
100
Nquel
2- 5
50
Plomo
0.1 - 20
100
3 - 50
300
Cinc
19
ndice c/p
0.1
0.10 0.25
0.26 0.50
0.51 0.75
0.76 1.00
1.1 2.0
2.1 4.0
4.1 - 8.0
8.1 16.0
16.0
Significado
Contaminacin muy leve
Contaminacin leve
Contaminacin moderada
Contaminacin severa
Contaminacin muy severa
Polucin leve
Polucin moderada
Polucin severa
Polucin muy severa
Polucin excesiva
.
Los metales pesados incorporados al suelo pueden seguir cuatro diferentes vas:
pueden quedar retenidos en el suelo, ya sea disueltos en la solucin del suelo o bien
fijados por procesos de adsorcin, complejacin y precipitacin
pueden ser absorbidos por las plantas y as incorporarse a las cadenas trficas
20
La contaminacin del suelo por metales pesados representa un grave problema a nivel
mundial, debido a ello se han desarrollado tecnologas para reducir y/o enmendar el riesgo
de la contaminacin de agua y suelos contaminados con metales pesados. La contaminacin
de suelos por metales puede ser remediada por tcnicas qumicas, fsicas y biolgicas y son
21
agrupadas en dos categoras: a) in situ, este mtodo remedia el suelo contaminado sin la
remocin del mismo y b) tcnicas ex situ, las cuales por el tratamiento los suelos
contaminados requieren ser removidos del sitio. Las tcnicas in situ tienen mayores
ventajas que las de ex situ debido a su bajo costo y a su reducido impacto en el
ecosistema (Chen et al., 1997).
La remediacin del suelo es necesaria para eliminar o disminuir los riesgos a los humanos y
al ambiente de la toxicidad de los metales. Las enfermedades en el hombre son el resultado
de la alta concentracin de Cd , Se, Zn, Cu, Cr, y Pb en suelo (Chaney et al., 1999), el
ganado y la fauna son daados por estos metales (Raskin et al., 1994). La contaminacin
del suelo con Zn, Ni y Cu causada por desechos de minas y fundidoras es conocida la
sensibilidad de las plantas (Chaney et al., 1999).
Las estrategias fsicas y qumicas de remediacin ms utilizadas para eliminar y/o reducir
los contaminantes del suelo son: extraccin, sellado, incineracin, excavacin, tratamiento
qumico y tratamiento electroqumico. No obstante, muchas de estas tecnologas son
costosas ya que su precio estimado de la recuperacin de suelos en el mercado en Estados
Unidos de Amrica fue aproximadamente de1-2 millones en 1997 incrementndose a 15-25
millones en el 2000 y probablemente 70 100 millones en 2005 (Cunninghan, 1996; Glass,
2000; McGrath et al., 2001).
Ciertas tcnicas especializadas pueden exceder sus costos de 1000 dlares por tonelada, la
excavacin de contaminantes, tiene un costo promedio de 1000 000 dlares por acre y su
22
con
radionucletidos, como por ejemplo las reas alrededor del reactor nuclear de Chernobyl.
La extraccin entre las ms conocidas son el Soil Washing lavado de suelos, se realiza
habitualmente en depsito. Se basa en una separacin o una reduccin del volumen. El
rendimiento depende de la solubilidad de los compuestos contaminantes en la solucin de
lavado que se utilice. Otra de las tcnicas es conocida como Soil Vacuum. Se produce
una extraccin de los contaminantes y se utiliza para eliminar compuestos orgnicos
voltiles y mercurio. Para potenciar la eficacia se puede utilizar adems vapor de agua, una
modificacin es la tcnica de Soil Venting, donde se combina el efecto de extraccin con
la inyeccin de aire. En este tipo de tcnicas las caractersticas fsicas y qumicas del suelo
pueden alterar la eficacia de la tcnica (Burns et al., 1996).
La tcnica del sellado trata al suelo con un agente que lo encapsula y lo asla. El suelo es
excavado, la zona se sella con un impermeabilizante y se redeposita el suelo. Para
desarrollar las barreras de aislamiento se ha utilizado diversas sustancias, como el cemento,
23
cal, plsticos, arcilla, etc. El procedimiento tiene el inconveniente que se pueden producir
grietas por las que los contaminantes pueden fugarse. Sometiendo al suelo a altas
temperaturas (1600-2300C) se consigue su vitrificacin con lo que se llegan a fundir los
materiales del suelo, produciendose una masa vtrea similar a la obsidiana. Durante el
proceso hay que controlar la volatilizacin de numerosos compuestos. La propia filosofa
de estas tcnicas (persigue la eliminacin del suelo) las hace slo recomendable en
situaciones extremas. En otras ocasiones se realiza el aislamiento directamente sobre los
niveles de aguas freticas y mediante bombeos exhaustivos se consigue deprimir los niveles
freticos para alejarlos del suelo y subsuelo contaminados (Huang et al., 1998).
La incineracin de residuos no slo se utiliza como una alternativa de tratamiento sino que
tambin para el aprovechamiento del poder calorfico contenido en los residuos. Algunos
procesos productivos, especialmente los de produccin de cemento y de cal, presentan a
nivel mundial una experiencia importante en coincineracin de residuos como combustibles
24
25
26
2.3.1. Biorremediacin
27
(McGrath, 2001; Khan, 2000; De Oliveira y Narasimha, 1999). Una gran cantidad de
contaminantes como plaguicidas, herbicidas, petrleo, gasolina y metales pesados pueden
ser eliminados por biorremediacin (Lasat, 2002; McGrath et al., 2001; Reed, 1992).
Al incremento del uso de la biorremediacin como una estrategia sostenible y econmica,
se le est prestando una particular atencin, principalmente en Europa y Estados Unidos de
Amrica (Khan y Kuek et al., 2000 ).
2.3.2. Fitorremediacin
El concepto de usar plantas para limpiar suelos contaminados no es nuevo, desde hace 300
aos las plantas fueron propuestas para el uso en el tratamiento de aguas residuales
(Hartman,1975). En Rusia en los aos 60s se realizaron investigaciones utilizando plantas
para recuperar suelos contaminados con radionucletidos. Existen reportes sobre el empleo
de plantas acuticas en aguas contaminadas con plomo, cobre, cadmio, hierro y mercurio.
La remediacin de la acumulacin de metales pesados en suelos utilizando plantas es
tambin ampliamente reconocida (Ernst, 2000).
La fitorremediacin (el prefijo fito- significa planta) es una estrategia que se utiliza en la
remediacin de suelos contaminados (Chaney, 1997), es un proceso de descontaminacin
que involucra el empleo de plantas que pueden remover, transferir, estabilizar,
descomponer y/o degradar contaminantes de suelo, sedimentos y agua, como solventes,
plaguicidas, hidrocarburos poliaromticos, metales pesados, explosivos, elementos
28
29
podran ser llevadas a una fundicin para recobrar el metal y nuevamente crear un flujo de
ingresos (Raskin et al., 1997; Salt et al., 1995; Crowley et al., 1991).
Segn Jentschke (2000), los rboles pueden realizar una accin de bombeo orgnico cuando
sus races se extienden hacia la capa fretica, formando una masa densa de races que
absorbe una gran cantidad de agua. Los lamos, por ejemplo, absorben 113 litros de agua
por da, y hay una variedad de lamo (Populus deltoides) que absorbe hasta 1325 litros por
da. La accin de bombeo de las races disminuye la tendencia de los contaminantes
superficiales al descender hacia el agua subterrnea y el agua potable.
En zonas agrcolas, los lamos plantados a lo largo de cursos de agua reducen el excedente
de fertilizantes y herbicidas que contienen dichas aguas. Asimismo, los rboles plantados
en vertederos como sustitutos orgnicos de la tradicional capa de arcilla o de plstico
absorben agua de lluvia que, de lo contrario, se filtrara por el vertedero y llegara al fondo
en forma de "lixiviado" contaminado (Drake et al., 1999; El-Dermerdash et al., 1994).
Esta novedosa tecnologa, tiene muchas ventajas con respecto a los mtodos
convencionales de tratamientos de lugares contaminados; en primer lugar es una tecnologa
econmica, de bajo costo, en segundo lugar posee un impacto regenerativo en lugares en
donde se aplica y en tercer lugar su capacidad extractiva se mantiene debido al crecimiento
vegetal. Adems es capaz de ser modificada para aumentar su capacidad y selectividad
extractiva, un caso bien conocido es la modificacin gentica de Arabodopsis thaliana para
reducir ion mercurioso (Pawlowska et al., 2000; De Olivera, 1999; Salt et al., 1998; Kumar
et al., 1995; Baker et al.,1994).
30
Los beneficios derivados de esta estrategia de fitoenmienda abarcan los sectores del
ambiente, la salud, industria y energa. Las pruebas cientficas han confirmado la validez de
esta estrategia y se han emprendido gestiones para obtener financiamiento para los
crecientes esfuerzos puestos en marcha en varios pases (Chaney, 1997).
La fitorremediacin no es un remedio para todos los suelos contaminados, antes de que esta
tecnologa pueda volverse tcnicamente eficiente y costo-eficaz, hay algunas limitaciones
que necesitan ser superadas como por ejemplo, sus mecanismos tanto moleculares,
bioqumicos y fisiolgicos son pocos conocidos e insuficientemente entendidos, sus
31
Todas las plantas poseen un potencial para absorber una amplia variedad de metales del
suelo pero la mayor parte de las plantas tienden solamente a absorber los que son esenciales
para su supervivencia y desarrollo. Existe una notable excepcin de esta regla de un
pequeo grupo de plantas que pueden tolerar, absorber, y translocar altos niveles de ciertos
metales, estas plantas reciben el nombre de hiperacumuladoras (Chen et al., 2001).
32
De acuerdo con Salt et al., (1998), se establece que el botnico A. Baumann, trabajando en
los lmites entre Blgica y Alemania observ las hojas de ciertas especies de plantas que
crecan en suelos enriquecidos naturalmente con cinc y conteniendo altas concentraciones
de este elemento. Las especies que particularmente registr fueron la violeta (Viola
aclamaria ) y la mostaza (Thlaspi calaminare) recientemente clasificada como Thlaspi
caerulescens. Las cuales contenan cerca de 1 y 1.7% de cinc en el peso seco de las hojas.
Estas fueron comparadas con los niveles de cinc entre 0.001 y 0.02% del peso seco de hojas
de otras plantas.
33
El Dr. Rufus L. Chaney encabeza en los Estados Unidos de Norteamrica los estudios para
evaluar plantas llamadas hiperacumuladoras que absorben grandes cantidades de metal de
los suelos. En esas investigaciones se encontr una especie
caerulencens, que acumula hasta 30 000 partes por milln (ppm) de zinc y hasta 6000 ppm
de cadmio en sus hojas, sin reducir el rendimiento de la planta (Brown et al., 1995).
34
el peligroso arsnico, lo ms curioso es que el helecho crece mejor en suelos que contienen
elevadas cantidades de arsnico que en los que carecen de l (Martn et al., 1996)
El cadmio se puede acumular en girasol, Helianthus annuus (Davies et al., 2001; Simn,
1998). El girasol es una rizofiltradora potencial de cadmio, nquel, cobre, cinc, cromo y
plomo; as como de radioistopos (Brooks, 1998). Existen plantas que al mismo tiempo que
son hiperacumuladoras de cobre, lo son del cobalto, entre ellas algunas especies de la
familia Asteraceae (Brooks 1998). El girasol (Helianthus annuus L.) es la especie que
absorbe los metales pesados en mayor cantidad en sus races que en sus brotes si se cosecha
la biomasa entera de la planta, por lo que se considera una planta hiperacumuladora
favorable en la fitoextraccin de Cd, Zn, Pb y elementos radiactivos (Christie et al., 2004;
Reeves, 2003; Davies, 2002; Cabrera et al., 1999; Kumar et al., 1995).
Desde el punto de vista ecolgico el papel de las plantas hiperacumuladoras no est aun
completamente claro, pero se ha sugerido que stas suministran proteccin contra el ataque
de hongos patgenos e insectos. Las recientes evidencias han confirmado la funcin de
proteccin de la acumuladora de nquel contra hongos y bacterias patgenos en Steptanthus
polygaloides e insectos herbvoros en S. polygaloides y T. montanum (Li et al., 2003). El
efecto contra los insectos herbvoros est bien demostrado en Thlaspi caerulescens, que es
una planta hiperaculadora de cinc.
Con esta extraordinaria habilidad las plantas hiperacumuladoras de metales pueden ser
usadas en actividades de remediacin en el ambiente, adems que constituyen un
importante recurso biolgico en las futuras revegetaciones y fitorremediaciones de reas
35
contaminados con metales pesados. Sin embargo las aplicaciones mximas todava no se
han logrado, una razn importante es la falta de conocimientos de los mecanismos
moleculares y procesos biolgicos involucrados que permiten tolerar, la adquisicin, el
transporte y acumulacin de los metales en las planta, incluso que se puedan alimentar de
los metales (Lovley, 1997).
36
Leyval et al., (1997) la absorcin de los metales pueden ser ayudadas por microorganismos
como hongos micorrzicos.
De acuerdo con Pilon-Smits et al., (2002) las estrategias genticas en la produccin de las
plantas transgnicas y el papel que desempean los microorganismos contribuyen a la
importancia en el proceso de fitorremediacin, as como el desciframiento completo del
genoma de Arabidopsis, adems de los intensos estudios moleculares que se estn llevando
a cabo sobre Thlaspi, y el conocimientos de algunos genes implicados en las absorcin y
en la tolerancia a algunos metales especficos, resultan muy prometedores en la obtencin
de las primeras variedades de plantas transgnicas con capacidades hiperacumuladoras
mejoradas (Zhu et al., 1999).
Otras plantas acumuladoras con abundante biomasa son micotrficas tales como girasol y
sauce, por lo que ahora reciben mayor atencin que asociadas con HMA son tolerantes a
metales y pueden por lo tanto ser consideradas para descontaminar suelos levemente
contaminados. La asociacin de las plantas con hongos micorrzicos representa una serie
de importantes ventajas entre las que destacan proteccin contra ataque de parsitos y
enfermedades, mayor rea de extensin de las races facilitando la absorcin de nutrimentos
as como tambin contaminantes inorgnicos y orgnicos (Leyval et al., 2001; Ernst, 2000).
Actualmente las plantas hiperacumuladoras identificadas son 397, este nmero puede ser
cambiado en el futuro, ya que ms plantas que crecen en suelos ricos en metales son
investigadas, en la mayora de los casos, no se trata de especies raras, sino de cultivos
comunes que se han ensayado con xito como posibles especies fitorremediadoras en el
futuro como son la alfalfa, la mostaza, el tomate, la calabaza, el esparto, el sauce y el
38
bamb. Las principales familias a las que pertenecen las plantas hiperaculadoras se
mencionan a continuacin: Asteraceae, Aceraceae, Poaceae, Brassicaceae, Betulaceae,
Convolvulaceae, Cyperaceae, Fabaceae, Malvaceae y Oleaceae. (De Oliveira y Vara,
1999)
Los recientes investigaciones sobre la glomalina que es una glucoprotena que se encuentra
en las hifas de los hongos micorrzicos (Wright y Upadhayaya, 1996), han contribuido de
manera considerable en la recuperacin de suelos contaminados por metales pesados, ya
que acuerdo con (Gonzlez-Chvez et al., 2002) la glomalina puede atrapar elementos
potencialmente txicos. El glutation es un antioxidante constituido por aminocidos
cisteina, glicina y cido glutmico que fijan los metales pesados, los cidos orgnicos
forman los complejos con los metales, un proceso de la desintoxicacin del metal por lo
que la glomalina, el glutatin y los cidos orgnicos desempean un papel dominante en
tolerancia del metal por las plantas. Las estrategias genticas y las plantas transgnicas, las
39
selecciona una de estas plantas o varias de este tipo y se plantan en un sitio segn los
metales presentes y las caractersticas del lugar. Despus de un tiempo, cuando las plantas
han crecido, se cortan y se incineran o se deja que se transformen en abono vegetal para
reciclar los metales. Este procedimiento se puede repetir la cantidad de veces que sea
necesario para reducir la concentracin de contaminantes en el suelo a lmites aceptables. Si
se incineran las plantas, las cenizas deben colocarse en un vertedero para desechos
peligrosos, pero la cantidad de ceniza ser slo alrededor del 10% del volumen de los
desechos que habra que eliminar si se excavara el suelo contaminado para tratarlo
(Robinson et al.,2002; Khan et al., 2001; Chaney et al., 1997).
42
El trmino rizsfera fue introducido por primera vez en 1904 para descubrir la
interaccin especfica entre la bacteria y las races de las leguminosas. El trminos se ha
refinado desde entonces para referirse a la regin bajo la influencia inmediata de las races
de plantas donde haya una abundante poblacin microbiana (Karthikeyan et al.,2003).
43
metales en sitios contaminados, debido a que ambos pueden extraer los contaminantes. La
resistencia o tolerancia experimentada por microorganismos es posible gracias a la accin
de
diferentes
mecanismos.
Estos
fenmenos
son:
biosorcin,
bioacumulacin,
Por lo anterior los microorganismos pueden ser considerados como reactores bioqumicos
que conducen el proceso de biodegradacin de contaminantes del suelo, esta idea es una
extensin lgica de varios estudios que demuestran que numerosos procesos bioqumicos se
llevan a cabo con la ayuda de microorganismos (Lovley, 2000).
Se conoce muy poco acerca de la enorme diversidad de las poblaciones microbianas del
suelo, sus propiedades, su comportamiento en el entorno del suelo, los microorganismos
que habitan en la rizsfera interactan con las races de las plantas formando tiles
asociaciones simbiticas que hacen posible la supervivencia de las plantas bajo condiciones
de estrs como deficiencia de nutrimentos, alta concentracin de metales pesados, sequedad
del suelo, afectan la asociacin de las races de las plantas por los hongos micorrzicos y
Rhizobium (Khan, 1997).
Algunos metales pesados son esenciales para el ser humano porque suministran cofactores
bsicos para diversas funciones de protenas y enzimas, pero en altas concentraciones los
metales pesados pueden actuar en forma nociva bloqueando los grupos funcionales
44
De acuerdo con Guider et al., (1999); Garbisu y Alkorta, (1997) los metales pesados que se
encuentran depositados en los suelos no son degradados biolgicamente ni ocurren cambios
en su estructura molecular, pero si son transformados de un estado de oxidacin a otro.
Como consecuencia de la alteracin del estado de oxidacin, los metales pueden convertirse
en: ms solubles en agua y pueden ser removidos por lixiviacin, inherentemente menos
txicos, menos solubles en agua de tal manera que se precipitan y se convierten en menos
45
biodisponibles y finalmente pueden ser volatizados, esto sucede cuando se cambia el estado
de oxidacin de los metales pesados.
Los factores fisicoqumicos como pH, superficie o radio de accin, temperatura, salinidad,
materia orgnica, disponibilidad de oxgeno, afectan el hbitat microbiano. Es fundamental
el rol de los microorganismos en los ciclos biogeoqumicos de los metales y su utilizacin
en los procesos de biorremediacin de desechos slidos y lquidos es esencial para el
cuidado del medio ambiente (Karthikeyan et al., 2003; Nies, 1999).
46
Plantas
Metales pesados en
acumuladoras
suelos
.
HMA
2.5.
Hongos micorrzicos
47
Los hongos micorrzicos son microorganismos que han permanecido asociados a las races
de las plantas desde que stas existen en el mundo, el trmino micorriza fue utilizado por
primera vez por el cientfico alemn Albert Frank en 1885, del griego: mykes (hongo) y
rhiza (races) (Harrinson, 1997). Cincuenta aos antes de Frank, estas asociaciones ya
eran consideradas, de naturaleza parastica, hasta que en 1987 se pudo demostrar que la
colonizacin de las races era ms bien simbitica en lugar de parasitaria (Hayman, 1987).
Las estructuras producidas por los hongos (HMA) dentro de la raz del hospedero incluyen:
un sistema de hifas contiguo, a travs del punto de penetracin inicial, con la red de hifas
que se extiende en el interior del suelo, arbsculos pequeos, intracelulares, cuya funcin es
la transferencia de nutrimentos entre los simbiontes; y alargadas vesculas intercalares o
terminales cuya funcin parece ser de almacn orgnico del endofito (Carlin y Brown,
1982).
48
necesite crecer un poco sobre la superficie de la raz, tal vez el nmero de propgulos para
iniciar la colonizacin deba ser pequeo, o bien, quiz deba haber un nmero mximo de
invasiones, etc. (Smith et al., 1997; Barea, 1995).
Se ha demostrado que la infeccin inicia con una serie de unidades infectivas discretas,
extendindose cada una hasta 5 mm hacia los lados del punto de entrada. estas unidades se
unen para formar la colonizacin continua. En otros reportes se ha observado una extensin
de hasta 10 mm desde el punto de entrada, independientemente del patrn seguido, los
hongos pueden ocupar ms de la mitad de la raz en 3 y 4 semanas despus de la entrada
(Carlin y Brown, 1982).
Aunque la absorcin del fsforo parece ser uno de los principales efectos que facilita la
inoculacin, existen otros nutrimentos, minerales y metales pesados que pueden estar
disponibles a travs de la asociacin planta-hongo, as como la translocacin del agua. La
produccin de hormonas y otros cambios celulares son tambin incluidos como parte de la
respuesta de la planta ante la colonizacin (Cox y Tinker, 1976).
Las plantas inoculadas son ms resistentes al estrs ambiental que las plantas no
inoculadas. Aunque en general se reconocen dos tipos de micorrizas: las endotrficas
(endomicorrizas) y las ectotrficas (ectomicorrizas), se menciona la existencia de un tercer
49
grupo, las ecto-endomicorrizas considerado como un grupo intermedio entre las otras dos
asociaciones que es frecuente en los viveros (Quilambo, 2003).
De las endomicorrizas, el 90% de las especies vegetales existentes sobre la corteza terrestre,
forman este tipo de asociacin. La caracterstica de esta asociacin es la penetracin
intracelular en las clulas corticales y epidrmicas de la raz para formar arbsculos y
vesculas que aseguran una gran superficie de contacto entre ambos asociados. El
abundante micelio, que se ramifica a travs de la raz y se extiende hacia fuera del suelo,
formando una maraa (Fig.5). Carecen de manto fngico externo visible (Morton y Benny,
1990).
50
51
FAMILIA
GNERO
Glomerales
Glomeraceae
fam. ined.
Gigasporaceae
Acaulosporaceae
Gerdemanniaceae
Diversisporaceae fam.
ined.
Paraglomeraceae
Geosiphonaceae
Archaeosporaceae
Diversisporales
Paraglomerales
Archaeosporales
Paraglomus
Geosiphon
Archaeospora
De acuerdo con Atimanav (2004) la simbiosis micorrzica se presenta en todos los hbitats
incluyendo en suelos contaminados ya sean estos, producidos o derivados de actividades
mineras y de acuerdo con con experimentos realizados por Leyval et al., (1997) pueden
mejorar la revegetacin de suelos con desechos de minas u otros sitios degradados. Las
especies de hongos que son aislados de reas contaminadas las cuales son enriquecidos
naturalmente por metales pesados o de viejos sitios de desechos industriales mineros son
ms resistentes a los metales pesados que los HMA reproducidos de sitios no contaminados
52
por lo que constituyen un componente funcional importante en la interaccin suelo-plantahongo en la recuperacin de suelos degradados por metales pesados.
Los HMA son importantes en la recuperacin de suelos contaminados debido a que juegan
un papel vital en la tolerancia (Del Val et al., 1999) y en la acumulacin (Zhu et al., 2001;
Joner et al., 1997) de metales por las plantas. El micelio externo de los HMA explora un
amplio volumen de suelo al esparcirse ms all de la zona de exploracin de las races
(Malcova et al., 2003; Khan et al., 2000) proporcionando de este modo acceso a un mayor
volumen de metales pesados presentes en la rizsfera. Una alta cantidad de metales
pesados tambin pueden almacenarse en las estructuras micorrzadas de races y en las
esporas, por ejemplo concentraciones de ms de 1200 mg / kg de cinc han sido reportados
en tejido de Glomus mosseae y sobre 600 mg / kg en G versiforme (Chen et al., 2003;
Leyval et al., 1996; Dehn y Shuepp, 1989).
Otro aspecto importante de esta simbiosis es que los HMA pueden incrementar el
establecimiento y el crecimiento de plantas sin importar los altos niveles de metales
pesados (Weissenhorn et al., 1993; Enkhtuya et al., 2002) en el suelo. Adems de una
mejor obtencin de nutrimentos del suelo, disponibilidad de agua y propiedades de
agregacin de suelo (Rilling et al., 2002; Kabir et al., 2000) aspectos asociados con la
simbiosis, los HMA son significativos en los mejoramientos ecolgicos de la rizsfera
(Medina et al., 2003; Azcn-Aguilar et al., 2003).
53
Es bien conocido que los HMA pueden ser afectados por la toxicidad de los metales en la
disminucin de su nmero de esporas en el suelo; as como en la colonizacin de las races
de las plantas, pero se ha observado que en muchos casos stas plantas acumuladoras son
54
55
Se han reportado plantas micorrizadas que crecen en los sitios contaminados por metales
pesados (Chaudhry et al.,1998; Shetty et al., 1995; Weissenhorn et al.,1995; Pawlowska et
al., 1996; Chaudhry et al., 1980); indicando que estos hongos han desarrollado una
tolerancia a los metales pesados y que pueden desempear un papel en la fitorremediacin
del sitio. Tambin se ha observado que la asociacin entre los HMA con races de las
plantas incrementan la absorcin, translocacin, metabolizacin y acumulacin de algunos
elementos traza como Cu (Gildon y Tinker, 1983), Pb (Daz et al., 1996), Cd (Guo et al.,
1996; Joner et al.,1997), Ni (Killham et al.,1983), Zn (Lambert et al., 1979; Davies et al.,
1987; (Galli et al., 1994), Zn y Ni (Jamal 2002), otros metales como Hg y Cr (Galli et al.,
1994) y Co (Killham y Firestone, 1995).
56
Dueck et al., (1986) examinaron el efecto de G. fasciculatum en dos pastos (Festuca rubra
y Calamagrostis epipejos) en dunas costeras con presencia de cinc, ellos encontraron que la
57
nativas en una pradera contaminada con hierro, se incrementaron lo cual ayud a establecer
a una comunidad sostenible de hierba nativa que significara considerables logros en la
recuperacin del sitio.
Varios autores han reportado la extraccin de esporas de HMA tales como Glomus y
Gigaspora asociadas a la mayora de las plantas que crecan en ambientes contaminados
con metales pesados. Christie (2004) y Raman et al., (1993) identificaron a Glomus y
Gigaspora spp. en micorrizsferas de catorce especies de plantas que colonizaban un
desecho de mina de magnesita en la India. Mientras que Weissenhorn y Leyval et al.,
(1994) aislaron solo a Glomus mosseae; Dueck et al., (1986) aislaron Glomus fasciculatum
de los suelos contaminados por metales pesados. Pawlowska et al., (1996) examinaron
grandes cantidades ricos en Cd, Pb y Zn en Polonia y recuperaron esporas de Glomus
aggregatum, G. fasciculatum y Entrophospora spp. de las micorrizsferas de las plantas
que crecan en los suelos.
Galli et al., (1994) dichos autores sugirieron que las micorrizas pueden desempear un
papel crucial en la proteccin de la planta contra los metales pesados. La eficacia de la
proteccin, sin embargo, difiere entre los distintos aislados de hongos micorrzicos y los
diferentes metales pesados. Joner y Leyval (1997) sealaron que las hifas extra- radicales
de los HMA Glomus mosseae pueden transportar el Cd del suelo a las plantas de trbol
creciendo en macetas seccionadas. Los autores no sealaron ninguna restriccin en el
crecimiento de las hifas en suelos con altos niveles de Cd extrable.
59
La captacin de metales por la simbiosis micorrizca obedece a varios factores tales como
las propiedades fsicas y qumicas del suelo (Wang y Chao, 1992), particularmente su nivel
de fertilidad (Lambert et al., 1979; Thompson, 1990), su pH (El-Kherbawy et al.,1989;
Killham y Firestone, 1983), la planta hospedera (Griffioen y Emst, 1989; Kucey y Janzen,
1987), el tipo de hongos involucrados (Gildon y Tinker, 1981) y, sobre todo, la
concentracin de los metales en los suelos. Bajo condiciones de deficiencia, la mayora de
los estudios sealan un aumento en la captacin de metal por las plantas micorrizadas. En
este contexto, se ha observado un aumento en la concentracin de Zn en las hojas, causada
por HMA, en suelos con altas concentraciones de este elemento (Christie, 2004; Thompson,
1990; Faber et al., 1990).
60
Cuando los suelos contienen altas cantidades potencialmente txicas de metales pesados, la
simbiosis micorrzica induce bajas concentraciones de estos metales en la parte area de la
planta y por consiguiente un efecto benfico en su crecimiento. Daz y Honrubia (1995)
detectaron un aumento en la acumulacin de plomo en las plantas micorrizadas, utilizando
poblaciones de hongos nativos, ellos observaron una disminucin en la concentracin de
plomo en la parte foliar de A. cytisoides micorrizadas creciendo en suelos con altas
concentraciones de plomo y cadmio. (Chen, 2000 y Weissenhorn et al., 1995) tambin
informaron una reduccin en la concentracin de plomo en plantas micorrizadas.
Los efectos provocados por los HMA en las plantas colonizadas en la absorcin y
traslocacin de metales son poco conocidos; pero la absorcin de metales pesados depende
de la especie de la planta, de la concentracin del metal, del medio de crecimiento y
posiblemente de la especie de hongo, pudiendo aumentar o disminuir la absorcin de
ciertos metales (Heggo et al., 1990).
61
considerarse: el primero trata de los efectos de los metales pesados sobre los hongos
micorrzicos y su simbionte, el segundo se refiere al efecto provocado en los hongos en la
absorcin del suelo para la planta y transferencia a los brotes y la tolerancia de las plantas
un exceso de metales pesados en el suelo (Nogueira, 1996; Leyva et al., 1997).
Los HMA aislados de suelos contaminados son ms tolerantes a metales pesados y pueden
disminuir la concentracin en retoos y races, o disminuir la traslocacin de races a
retoos (Joner y Leyval, 1997; Diaz et al., 1996). Lo ltimo puede ser debido a la alta
capacidad de absorcin de metal de estos hongos, lo cual podra filtrar iones de metal
durante la absorcin (Joner et al., 2000). En otro estudio realizado por Weissenhorn et al.,
(1994), la colonizacin radicular de maz en suelo contaminado aument la masa vegetal y
redujo la absorcin de Cd, Zn y Cu en la parte area y races.
62
Los HMA pueden disminuir los efectos adversos de la fitotoxicidad inducida por el exceso
de metales que no solo revisten importancia ecolgica y, ms recientemente, tecnolgica;
considerando la necesidad de rehabilitar reas contaminadas con metales pesados dispersas
por todo el mundo (Leyval et al., 1997).
Numerosos estudios han mostrado ahora que bajo condiciones moderadas de contaminacin
de cinc, las plantas hospederas de los HMA se encontraba colonizada. Los trabajos
realizados por Griffionen et al., (1994) en una parcela prxima a una refinera de cinc,
contaminada con cinc y cadmio, la especie de Agrostis capilaris utilizada en programas de
63
La colonizacin con los hongos nativos tolerantes a los metales ha mostrado que puede
proteger a las plantas contra los efectos txicos de concentraciones excesivas de metales
pesados. Los hongos MA mejoraron la incorporacin de Zn en el melocotn en los suelos
deficientes en California en maz (Zea mays L.) y trigo (Triticum aestivum L.) en algunos
suelos deficientes en la India (Christie et al., 2004).
Una reciente contribucin de los HMA en la ecologa de los suelos, se relaciona con el
descubrimiento de la glicoprotena llamada glomalina. Wright y Upadhyaya (1998)
mostraron que la abundante concentracin (comnmente varios mg/kg) de protena en el
suelo, esta altamente correlacionada con los agregados.
2.7.1. Origen
El origen del girasol se remonta a 3000 aos a.c. en el norte de Mxico y oeste de Estados
Unidos de Amrica, ya que fue cultivado por las tribus indgenas de Nuevo Mxico y
Arizona, fue uno de los principales productos agrcolas empleados en la alimentacin de
muchas comunidades americanas antes del descubrimiento. La semilla de girasol fue
introducida en Espaa por los colonizadores y despus se extendi al resto de Europa, pero
64
fue durante el siglo XIX cuando comenz la explotacin industrial de su aceite destinado a
la alimentacin.
Raz: esta formada por una raz pivotante y un sistema de races secundarias de las que
nacen las terciarias que exploran el suelo en sentido vertical y horizontal, normalmente la
longitud de la raz principal sobrepasa la altura del tallo.
65
Inflorescencia: el receptculo floral o captulo puede tener forma plana, cncava o convexa,
el captulo es solitario y rotatorio y esta rodeado por brcteas involcrales. Las flores del
exterior del captulo (ptalos amarillos) son estriles, estn dispuestos radialmente y su
funcin es atraer a los insectos polinizadores. Las flores del interior estn formadas por un
ovario inferior, dos spalos, una corola en forma de tubo compuesta por cinco ptalos y
cinco antenas unidas a la base del tubo de la corola.
Suelo: es un cultivo poco exigente en el tipo de suelo, aunque prefiere los arcillo-arenosos y
ricos en materia orgnica, es muy poco tolerante a la salinidad y contenido de aceite
disminuye cuando sta aumenta en el suelo. En suelos neutros o alcalinos la produccin de
girasol no se ve afectada, adems es una de las plantas con mayor capacidad para utilizar
residuos qumicos (Alba y Llanos, 1990).
Temperatura: es un factor muy importante en el desarrollo del girasol, adaptndose muy
bien a un amplio margen de temperatura que van desde 25-35C a 13-17 C.
67
El girasol fue escogido para este estudio por las siguiente razones:
68
El girasol es reportado con una alta biomasa radicular y capacidad de acumular metales, no
obstante una baja tolerancia al cromo comparado con otras plantas acumuladoras
(Shahanden y Hossner, 2000). Es una planta micotrfica ya que el gnero Glomus puede
colonizar al girasol (Chandrashekara et al., 1995; Davies et al., 2001). Los HMA ayudan a
desarrollar el volumen y extensin radicular aumentando el rea de descontaminacin de
suelos con metales pesados. Sin embargo el estudio de la interaccin de los HMA y el
girasol con los suelos contaminados puede proveer informacin del papel ecolgico de los
HMA en los suelos contaminados por metales pesados especialmente cinc y cobre y su
participacin en la tolerancia de estos metales.
69
3. MATERIALES Y MTODOS
2
4
Jalisco en donde se colect un suelo cultivado con pltano y limn; as como un suelo no
cultivado con presencia de plantas silvestres (Fig. 8; Cuadro 4).
.
C)
B
D)
E)
F)
72
Laguna
Municipio
Estatus
Nmero de
muestras
de Minatitln
No cultivada
Manuel vila
Minatitln
No cultivada
El Charco
Cihuatln
Pltano
El Charco
Cihuatln
No cultivada
El Centinela
Cihuatln
Pltano
El Centinela
Cihuatln
No cultivada
oxidacin
73
Las races se tomaron entre 0-25 cm de profundidad fueron colectadas de las plantas
dominantes de cada uno de los sitios muestreados. Cinco muestras de races fueron tomadas
de puntos al azar. Las races fueron cuidadosamente extradas del suelo y colocadas en
bolsas de plstico debidamente etiquetadas, posteriormente fueron llevadas al laboratorio,
una vez ah se colocaron en frascos con formol-alcohol-cido actico (FAA) hasta su
procesamiento.
La textura se determin por el mtodo del hidrmetro de Bouyoucos (Day, 1963). Se tom
una muestra de 100 g de suelo, se le agregaron 5 ml de solucin dispersante
(hexametafosfato de sodio). Despus se pas esta suspensin a una batidora y luego se pas
74
a una probeta de 250 ml. Inmediatamente se realiz la primera lectura de densidad, la cual
corresponde a la densidad de la suspensin de arcilla ms limo. Se dej en reposo y se
realiz la segunda lectura que corresponde a la arcilla. Se hicieron los clculos
correspondientes y se determin la textura utilizando el tringulo de las texturas.
El pH del suelo se determin por el mtodo propuesto por Rayment y Higginson (1992), se
pesaron 10 g de suelo el cual fue mezclado con 20 ml de agua destilada, la suspensin
suelo-agua se agit por una hora a 25 C, se dej reposar por 15 min, la medicin fue
tomada empleando un electrodo de vidrio (McLean, 1982).
La conductividad elctrica del suelo fue determinada para medir la salinidad del suelo. Se
tom una relacin suelo agua (1:1) utilizando 100 g de suelo al cual se agregaron 100 ml
de agua destilada, la suspensin suelo-agua se agit por una hora a 25 C, se dej reposar
por 15 min. La lectura fue tomada con la ayuda de un conductmetro calibrado.
El contenido de materia orgnica fue determinado por el mtodo de oxidacin del carbono
de la materia orgnica por la combinacin del dicromato de potasio y el cido sulfrico
75
3.4.1.Cuantificacin de esporas
76
Las races fueron lavadas con agua para eliminar el FAA y cortadas en fragmentos de
aproximadamente 1 cm de longitud. Una vez lavadas se procesaron de acuerdo con la
tcnica de Phillips y Hayman (1970) modificada por Kormanik et al., (1978). Las races se
colocaron en una solucin de hidrxido de potasio (KOH) al 10% hasta cubrirlas y se
metieron en autoclave, posteriormente se enjuagaron por los menos tres veces con agua
destilada para retirar el KOH y se enjuag 3 veces con agua corriente. A continuacin las
races se sumergieron en cido clorhdrico (HCl) al 1% y finalmente se agreg la solucin
colorante fucsina cida al 0.05 % y se llevaron a una temperatura de 121 C por 10 min.
Para determinar la colonizacin micorrzica arbuscular de las races, se utiliz el mtodo
sistemtico del portaobjeto (McGonigle et al. 1990). Esta evaluacin se realiz con un
microscopio compuesto Olympus modelo 1x70-MO81. Los valores se expresaron en
porcentaje de colonizacin micorrzica.
Los segmentos de races, fueron seleccionados al azar a partir de las muestras teidas y se
colocaron en lminas portaobjetos, con la ayuda de un microscopio compuesto Olympus
modelo 1x70-MO81 con un aumento de 40 X, se pudo observar la presencia de estructuras
77
Para la seleccin del suelo a utilizar en el experimento final, se eligio el que present el
mayor contenido de metales pesados y adems en el que se constat la mayor presencia de
estructuras morfolgicas de hongos micorrzicos arbusculares en las plantas silvestres.
3.6.
Para la identificacin de los HMA se propagaron utilizando como cultivo trampa una
mezcla de sorgo (Sorghum vulgare. L) y pasto de guinea (Panicum maximum). Para este
ensayo se us el suelo con mayor concentracin de metales pesados y con presencia de
hongos micorrzicos arbusculares. El suelo se mezcl con arena en una proporcin 2:1. Se
coloc en macetas de 350 g y se sembraron con una mezcla de semillas de pasto baha
(Paspalum notatum) y alfalfa (Medicagato sativa). Las macetas se colocaron en bolsas sun
bags de acuerdo con la tcnica de Walker (2001) y se mantuvieron en condiciones
semicontroladas de invernadero con una temperatura promedio de 22 C en el da y de 15
C por la noche, con una humedad relativa (H.R.) del 60-80% y con un intervalo de
78
Fig. 9. Cultivo trampa utilizado en la propagacin de HMA nativos del suelo con
mayor concentracin de Cu y Zn.
Para la identificacin de las esporas se extrajeron del suelo siguiendo la tcnica de tamizado
hmedo y decantacin (Gerdemann y Nicolson, 1963) seguida de centrifugacin en
gradiente de sacarosa (Walker, 1997). Las esporas se colocaron en una caja de Petri y
fueron observadas bajo el microscopio estereoscpio Olympus SZ40. Se separaron de
acuerdo con sus caractersticas morfolgicas principalmente color, tamao, forma,
presencia de hifas de sostn como sugieren Walker (1983) y Schenck et al., (1990).
79
3.7.
80
Una vez esterilizadas las semillas, se sembraron utilizando como sustrato polvillo de coco
se coloc en charolas de germinacin de 48.5 x 35 x 13.5 cm de polietileno de alta densidad
y con perforaciones de 3/8 de pulgadas en la base para drenaje y aireacin. Las semillas se
mantuvieron hmedas utilizando agua destilada estril y permanecieron en condiciones
semicontroladas de invernadero hasta que las plntulas presentaron el primer par de hojas
verdaderas, aproximadamente a los 15 das despus de la siembra, posteriormente se
procedi al transplante.
81
b)
a)
c)
Fig. 10. Diversas etapas de la planta de girasol: creciendo en maceta con suelos
a)germinacin b) nascencia c) despus del primer muestreo a los 40 das de
crecimiento.
82
Fig.11. Planta de girasol: creciendo en maceta con suelos despus del segundo muestreo a
los 60 das de crecimiento.
3.7.4. Inoculacin micorrzica
Al momento del transplante, las plntulas se inocularon con 1.5 g de inculo, el cual
consista de una mezcla suelo/ raz de Glomus intraradices. El inculo fue puesto en una
capa 5 cm debajo de la superficie del suelo. Las macetas se mantuvieron en condiciones de
invernadero por ocho semanas, las plantas fueron regadas con agua corriente segn se
necesit y no se aplico fertilizante, ni solucin nutritiva. La superficie de las macetas fue
cubierta con discos de papel aluminio para reducir la transpiracin del suelo y eliminar la
contaminacin.
83
De acuerdo con Davies, (2001) el lapso de tiempo para completar el estudio con plantas de
girasol es de aproximadamente 50 das, pero la duracin del presente experimento fue de 70
das con el fin de registrar el comportamiento de la absorcin del cinc y cobre por la planta
posteriormente a su fase de mayor absorcin de nutrimentos. Las fechas programadas
fueron las siguientes:
A los 25 das despus del trasplante, contando con 40 das. de crecimiento, en este
periodo la planta presenta una mayor absorcin de nutrimentos.
Al trmino del experimento, las plantas fueron cuidadosamente extradas de las macetas,
separndose la parte area y radicular, se lavaron con agua corriente para eliminar los
residuos de suelo, posteriormente se procesaron cada una de las partes de las plantas para
determinar la concentracin de los metales pesados.
84
3.8.
Variables evaluadas
Las variables evaluadas fueron: concentracin de metales pesados en la parte area y en las
races de las plantas inoculadas y no inoculadas, concentracin de metales pesados en el
suelo con la planta inoculada y no inoculada, colonizacin micorrzica y la poblacin de
esporas, al finalizar el experimento.
3.9.
Anlisis estadstico
SAS
85
4.
RESULTADOS
Los resultados obtenidos de los anlisis fsicos y qumicos de los suelos colectados y
estudiados se presentan en el Cuadro 5. Con respecto al pH, los valores se indican que los
suelos varan dentro de un intervalo de 6.4 a 7.1. El de pH 6.4 es considerado como
ligeramente cido y los que presentan un pH de 7.0 y 7.1 son neutros, por lo que de acuerdo
con Daub y Seese (1996) estos suelos se clasifican como ligeramente cidos a neutros.
Cuadro 5. Caractersticas qumicas y fsicas de los diferentes suelos muestreados. Los
datos son promedio de 3 repeticiones.
Sitio
pH (H2 O)
Laguna de oxidacin.
6.4
Materia
orgnica
CE
(mScm-1)
0.8
0.70
Textura
Areno-limo-arcilloso
(15 % arcilla 13% limo 72 %arena)
vila Camacho
7.0
1.6
0.1
Arena
(5 % arcilla 5 % limo 90% arena)
7.1
2.8
0.8
Franco Arenoso
(14% arcilla 12 % limo 74%arena)
El Charco no cultivado
6.9
1.9
0.1
Arena
(5 % arcilla 5 % limo 90% arena)
7.1
2.9
0.5
El Centinela no cultivado
6.9
2.1
0.2
Franco arenoso
(14% arcilla 12% limo 74% arena)
86
El valor de pH, dentro del cual se encuentra el suelo de la Laguna de Oxidacin (6.4) es
considerado como ligeramente cido. Mientras que en los otros suelos muestreados como
El Charco y El Centinela no cultivados, El Charco y El Centinela cultivados a s como
tambin el suelo de vila Camacho presentan un pH neutro.
Recordando que la conductividad elctrica de un suelo nos indica la salinidad del mismo y
de acuerdo con los resultados obtenidos de los suelos muestreados, nos sealan que estos
suelos no son salinos.
87
Cuadro 6. Concentracin de metales pesados (ppm) en cada uno de los suelos colectados.
Sitios
Laguna de
Muestreados oxidacin
vila
ElCharco
Camacho (cultivado)
El Charco
(sin cultivo)
ElCentinela El Centinela
( cultivado)
(sin cultivo)
Plomo
100 L.M.P
22.9
12.90
15.21
14.78
17.23
20.01
Cromo
100L.M..P
4.47
49.06
42.00
39.87
27.27
25.10
Cadmio
3.0L.M..P
2.0
1.18
1.98
2.01
1.99
2.01
Cinc
300L.M..P
270.60
72.86
64.59
69.06
69.93
89.71
Cobre
100L.M..P
592.92
42.36
54.60
88.46
110.01
44.10
Fuente: Anlisis realizados en el laboratorio de Alta Tecnologa de Xalapa (LATEX), utilizando mtodos
estandarizados de suelo y las especificaciones del PROY-NOM-021-RECNAT-2000.
(SEMARNAT,2000). Lmite mximo permitido (LMP).
Cuadro 7. Colonizacin micorrzica expontna en los suelos de los sitios muestreados. Los
datos son promedios de tres repeticiones.
Sitios
Colonizacin
micorrzica (%)
1 0.45
00
vila Camacho
59.0 9.18
505 3.62
43.3 7.41
418 2.23
48.9 2.35
432 1.48
43.6 5.67
402 1.35
32.8 6.45
344 1.14
Laguna de oxidacin
Es importante hacer notar que en suelo de la laguna de oxidacin, present una mayor
concentracin de metales pesados, no se registr la presencia de esporas y una colonizacin
radicular pobre, que no es relevante. Con respecto a los dems suelos estudiados el de vila
Camacho, como observa en el Cuadro 7 es el que muestra un mayor nmero de esporas
(505esporas/ 100g de suelo seco), as como tambin de vesculas, estableciendose que en
89
los dems sitios estudiados con el aumento de la concentracin de metales pesados en sus
suelos se disminuye el porcentaje de colonizacin y el nmero de esporas de HMA.
Una muestra de las esporas extradas de los suelos colectados se presentan en la Fig. 12.
Figura 12. Espora globosa que muestra la hifa sustentora bulbosa, extrada del suelo de
vila Camacho.
En los sitios restantes como El Charco y El Centinela con cultivo y sin cultivar, tambin se
observ la presencia de esporas (Fig. 13 y 14).
90
Figura 13. Esporas extradas del sitio El Centinela no cultivado en donde se aprecian
hifas de sostn (Fotografa tomada a 10x ).
Figura 14. Espora aprecindose la hifa en forma de embudo extrada del sitio El Centinela
no cultivado (Fotografa tomada a 20x.).
Las tinciones realizadas en las races de las plantas de los sitios muestreados, se observ la
presencia de estructuras como hifas (Fig. 15), micelio (Fig. 16) y arbsculos (Fig. 17).
91
a)
(b
a)
b)
Figura 16. Ilustracin que muestra a) micelio externo y b) esporas en el suelo colectado en
vila Camacho.
92
Figura 17. Detalles de los arbsculos del sitio El Charco (no cultivado).
Las esporas de los HMA nativos extrados del suelo con mayor contaminacin de Zn y Cu
fueron propagadas de donde se distinguieron cuatro diferentes morfotipos
de HMA,
De acuerdo con el INVAM las caractersticas morfolgicas que presenta Glomus mosseae
se describen a continuacin. Algunos cultivos en las macetas producen esporas en
agregados de 2-8 rodeado por un estrecho perdio, el color del esporocarpo vara de cafamarillas a cafs. El perdio alrededor de estas esporas es de unos 10-38 m de espesor,
con robustas hifas (con paredes de 8-18 m de ancho y unos 1.6-3.5 m de espesor)
93
mezclado con muchas finas ramificaciones de hifa (2-5 m de ancho, paredes de < 1 m de
espesor). El peridio no altera la estructura de la pared de la espora, y parece ser un carcter
inestable (generalmente se pierde despus de muchas sucesiones o cultivos sucesivos).
En las esporas completas el color varia de naranja a caf oscuro, siendo en su mayora
amarillos-caf con forma globosa a subglobosa algo irregulares, la distribucin de tamao
es de 100-260 m con un promedio de 195 m. Con respecto a la pared de la espora: estas
poseen tres capas que la forman consecutivamente, pero con diferencias (secuencia baja, de
izquierda a derecha). Las dos superficiales seguido mudan la piel, variando los grados de
madurez, o indican las esporas mas viejas. La forma de la hifa varia de acampanada a una
forma de embudo de ancho 16-32 m como promedio 24 m.
94
a)
b)
Figura 18. a) Espora globosa b) Espora subglobosa con hifa de sostn. Esporas montadas
en PVLG (Fotografas tomadas a 20x).
Figura 19. Espora rota mostrando doble pared, montada en PVLG (Fotografa tomada a
40x).
95
Figura 20. Espora con hifa en forma de embudo, fijadas en alcohol polivinilico lactoglicerol (PVLG), (Fotografa tomada 20x)
Figura 21. Espora montada en PVLG aprecindose una hifa en forma de embudo, con
pared gruesa (Fotografa tomada a 40x).
96
El suelo muestreado de El Centinela no cultivado fue elegido como sitio de estudio porque
fue el que present una mayor concentracin de cinc (89.71ppm) y cobre (110.01 ppm)
adems se observo la presencia de HMA nativos, pero debido a que su propagacin no fue
suficiente para ser empleado como inculo; se tomo la decisin de usar a Glomus
intraradices, para cuantificar su contribucin en la absorcin y translocacin del cinc y
cobre por las plantas de girasol inoculadas.
Se calendarizaron tres muestreos de acuerdo con las etapas de crecimiento de esta planta
con el fin de cuantificar la concentracin de estos metales en la raz y la parte area de la
planta; estos muestreos se realizaron en las siguientes fechas.
A los 40, a los 55 y 70 das despus de la siembra se analiz la absorcin de cobre y del
cinc en la parte area y radicular en las plantas de girasol. Los resultados de la absorcin y
la translocacin del cobre y cinc por las plantas de girasol inoculadas y no inoculadas se
muestran en el Cuadro 8.
97
Cuadro 8. Contenido del cobre y cinc en plantas de girasol M y NM en ppm a los 40, 55 y
70 das de crecimiento, como los medios de diez replicas.
Fechas
Raz
Parte area
Planta Completa
ZnM
CuM
66.6 0.84b
75.0 6.83a
38.6 2.52b
46.0 6.33a
105 1.71b
121 6.58a
ZnNM
Cu NM
43.0 2.82b
57.0 7.67a
25.5 0.78b
37.0 5.90a
68.5 1.80b
94.0 6.78a
ZnM
CuM
16.6 0.57b
26.6 0.73a
17.1 0.67a
11.6 0.94b
33.7 0.62a
36.2 0.82a
ZnNM
Cu NM
16.8 0.57b
22.4 1.27a
16.1 0.68a
11.1 0.91b
32.9 0.68a
33.5 1.09a
ZnM
CuM
15.9 0.70b
26.1 1.17a
16.3 0.91a
11.0 1.22b
32.2 0.80b
37.1 1.95a
ZnNM
Cu NM
16.3 1.06b
21.8 2.48a
15.8 1.38a
10.8 1.28b
32.1 1.22a
32.6 1.88a
40 das
55 das
70 das
Letras distintas presentan diferencia significativa (P<0.05; prueba-t) entre tratamientos (Zn y Cu Micorrizado a los 40
das; Zn y Cu no Micorrizado a los 40 das; Zn y Cu Micorrizado a los 55 das; Zn y Cu no Micorrizado a los 55
das; Zn y Cu Micorrizado a los 70 das; Zn y Cu no Micorrizado a los 70 das).
De los resultados que se exponen en el Cuadro 8, se observa a los 40 das (primer muestreo)
el anlisis estadstico mostr diferencia significativa para la absorcin y la translocacin del
cobre entre las plantas de girasol inoculadas (M) y no inoculadas (NM).
En las races de las plantas inoculadas (M) se muestra que el Cu fue absorbido en mayor
proporcin con respecto al Zn. Con referencia a las plantas no inoculadas (NM) se observa
que la absorcin de los metales fue en menor cantidad. Si se compara la absorcin de los
98
metales en las plantas completas con inculo y sin inoculacin se manifiesta las diferencias
entre los tratamientos.
Con respecto a la translocacin, es notorio que tanto el Zn como el Cu permanecieron en
mayor proporcin en la parte radicular disminuyndose as la translocacin hacia la parte
area de las plantas (M) y en menor cantidad de las plantas (NM).
Con referencia a los resultados que se muestran a los 55 y 70 das, segundo y tercer
muestreo, respectivamente; en la absorcin de Cu por las plantas de girasol inoculadas (M)
se observa que existen mnimas diferencias entre el segundo y tercer muestreo con 26.6 a
26.1 mg / kg; mostrndose diferencia significativa con el primer muestreo de 75 mg / kg.
En la translocacin tambin existen diferencias mnimas entre el segundo y tercer muestreo
entre las plantas inoculadas y no inoculadas.
Con respecto al Zn, no existi diferencia significativa entre el segundo y tercer muestreo,
entre las planta inoculadas (M) y no inoculadas (NM).
experimento
99
5. DISCUSIN
5.1 Anlisis fsicos y qumicos de los suelos colectados
Un aspecto relevante de la materia orgnica es su atraccin por los metales pesados cuando
stos se encuentran en disolucin, tiene propiedades secuestradoras ya que contiene una
gran cantidad de cargas negativas y a menudo forma complejos orgnicos solubles, que
pueden polimerizarse sobre los complejos moleculares del humus. De esta forma, la materia
orgnica del suelo a menudo acta como almacn de estos elementos, si bien puede
transferirlos a la vegetacin o a la fase acuosa si se produce su descomposicin en medio
cido u oxidante. Debido a la capacidad de la materia orgnica para formar complejos
estables con los iones metlicos, la relacin entre la materia orgnica del suelo y los
100
Un suelo con alto porcentaje de materia orgnica y un pH neutro son factores bsicos que
representan una alta capacidad amortiguadora en la disponibilidad de los metales pesados
por las plantas. De lo anterior se destaca que el sito de la Laguna de Oxidacin, es pobre en
materia orgnica y su pH tiende a cido por lo que la movilidad de los metales pesados es
elevada como se refleja en los resultados, mientras que en los suelos restantes, muestran
contenidos de materia orgnica normal y un pH neutro por lo que de acuerdo con Alloway
(1995) y Kabata-Pendias (2000) son suelos que amortiguan la disponibilidad de los metales
pesados lo que se refleja en los resultados en donde la concentracin de ellos es menor que
en la laguna de oxidacin motivo por el cual muestran una menor toxicidad debido a la
menor solubilidad de los metales.
101
Los resultados de los anlisis fsicos y qumicos realizados a los suelos colectados en este
estudio, muestran concordancia con los resultados de los experimentos realizados por
lderes en la recuperacin de suelos contaminados con metales tales como: Haselwandter et
al.,(1994); Leyval et al., (1991); Turnau, (1998); Chaney et al., (1998); Jamal et al., (2002);
Leyval et al., (2002) en donde sealan que los suelos en donde son depositados los residuos
de minas presentan un pH cido, con pobre contenido de materia orgnica. En nuestro
estudio el suelo colectado de la laguna de oxidacin, en donde son depositados los residuos
de la mina Benito Jurez muestra un pH (6.4) ligeramente cido y un pobre contenido
(0.8) de materia orgnica.
102
El suelo de vila Camacho muestra que los contenidos de cadmio, cinc, cobre, cadmio cinc
rebasan el contenido del lmite permitido, pero ningn metal se sobrepasan de los lmites
mximos permitidos.
Analizando los resultados del sitio El Centinela no cultivado, se observa que solamente el
cromo se encuentra dentro del limite permitido, en cambio el cadmio, cinc, y plomo se
encuentran extralimitados de este intervalo, se reporta solamente que el cobre se encuentra
fuera del lmite mximo permitido. Por lo que este suelo se presenta como el sitio con la
mayor concentracin en cinc, cobre y el cadmio en menor proporcin, debido a que las
propiedades fsica y qumicas del Zn y Cd son muy semejantes y de acuerdo con Chaney et
al., (2000) el Zn suministra proteccin contra la transferencia del Cd
a la cadena
y disponibilidad de metales pesados. Por lo anterior se deber considerar ese factor en los
resultados obtenidos de la concentracin de metales pesados de los suelos muestreados, y
debido a que presentan un pH neutro la concentracin de metales pesados no es elevada.
Aun bajo condiciones de contaminacin es importante hacer notar que aunque los suelos de
los sitios muestreados contenan concentraciones de metales pesados se constato la
existencia de esporas en el suelo y de vesculas en las races de las plantas endmicas
En el suelo de la laguna de oxidacin, no se encontraron esporas y el porcentaje de
colonizacin en las races no fue significativa, estos resultados muestran una semejanza con
los obtenidos por Leyval et al., (1991); Haselwandter et al., (1994); Weissenhorn et al.,
(1995); Turnau, (1998); Jamal et al., (2002); Leyval et al., (2002); Malcova et al., (2003),
ellos reportaron que en suelos en donde son depositados residuos de minas son afectadas las
poblaciones de HMA reduciendo el nmero de esporas en el suelo y la colonizacin en las
104
plantas endmicas del lugar, lo anterior tambin depende del nivel de contaminacin. Como
se observa en los resultados a medida que aumentan la concentracin de los metales
disminuyen la poblacin de hongos micorrzicos.
El suelo de El Centinela no cultivado presenta con respecto a los sitios del Centinela y El
Charco cultivados y El Charco no cultivado un menor nmero de esporas y porcentaje de
colonizacin micorrzica, por lo que es significativo hacer notar que la concentracin de los
metales pesados en este suelo es mayor que en los sitos anteriormente mencionados con
excepcin al suelo de la laguna de oxidacin por lo que, de acuerdo con Leyval et al.,
105
(2002) y Malcova et al., (2003) tambin mostraron resultados similares a los obtenidos en
este estudio con relacin al porcentaje de colonizacin y el nmero de esporas en donde se
coincide que cuando en el suelo aumenta la concentracin de metales pesados entonces se
disminuyen las poblaciones de los HMA nativos de estos suelos.
Recordando que los sitios muestreados se encuentran ubicados a lo largo de una pendiente
y es el sitio de la Laguna de Oxidacin el que se ubica en la cima, siguiendo el sitio vila
Camacho continuando con el sitio llamado El Charco y finalizando el Centinela, de acuerdo
con ellos se detecta que a medida que disminuye la pendiente se aumenta la concentracin
de Zn y Cu y disminuye el porcentaje de colonizacin micorrzica y el nmero de esporas;
tal como se menciona anteriormente el nmero de esporas de los suelos rizsfericos
disminuyen de acuerdo con el aumento de la concentracin de metales pesados de esos
suelos.
Sin embargo, aunque los suelos muestreados, con excepcin del suelo de la Laguna de
Oxidacin, presentan una leve contaminacin, pueden afectar la largo plazo al crecimiento
de las plantas, el crecimiento de las poblaciones microbianas, y el paso los metales hacia la
cadena alimenticia.
En los mirfotipos de esporas de los HMA propagados en cultivo trampa y de acuerdo con
las observaciones de las preparaciones en PVLG en el microscopio estereoscopio no se
106
En el presente estudio, no fue posible utilizar esta especie de Glomus mosseae ya que su
propagacin no se logro contar con el inculo necesario para inocular las plantas de
girasol, hecho que se lamenta por lo anteriormente mencionado.
Los principales factores que probablemente afectarn la reproduccin de los HMA nativos
pudieron ser los que se mencionan a continuacin: la concentracin de los metales pesados,
el cultivo trampa que se utilizo en la propagacinde los HMA y el tiempo de crecimiento
del cultivo trampa.
Por otra parte en nuestro estudio, la notable absorcin de Cu y Zn en las plantas inoculadas,
se deba a que el suelo fue considerado como levemente contaminado sugn Kabata Pendias, (1995), y se ha demostrado que los efectos primarios de los metales pesados se
producen en las races, lo que se traduce en una menor elongacin despus de ser expuestas
a estos metales (Lamber et al., 1998) tambin puede atribuirse al importante papel que
desempea la simbiosis micorrzica en la mejora de la disponibilidad de estos metales en el
suelo de estudio.
108
El anlisis de los resultados que se muestran en el Cuadro 8, con respecto a la absorcin del
Zn y el Cu, se denota que el cobre muestra una mayor presencia que el Zn en las races de
las plantas inoculadas. Con respecto a la translocacin del Cu y del Zn a la parte area de
las plantas inoculadas se percibe una reduccin en el transito de la raz hacia la parte area.
La comparacin entre las plantas M y las plantas NM, establece que la mayor absorcin de
cinc y cobre por las races, as como tambin la disminucin de la translocacion a la parte
area ocurri en las plantas inoculadas, estos resultados se atribuyen a la importante
funcin que desempean los HMA en la tolerancia a los metales pesados en la recuperacin
de suelos contaminados, por otra parte, la glomalina que es una glucoprotena atrapa a los
metales pesados, est puede ser la razn por la cual los contaminates permanecen la mayor
parte en las races.
Con respecto a los resultados de los dos muestreos restantes a los 55 y 70 das que se
muestran en el Cuadro 8, coinciden con lo reportado por autores como Leyval et al.,(1995),
quienes sealan concentraciones de metal significativamente ms bajas; lo cual puede
atribuirse a diversos factores que pudieron estar involucrados como son: el trmino del
periodo de mxima absorcin de la planta acumuladora, el aumento de la biomasa radicular
y area de las plantas inoculadas. Probablemente en nuestro estudio, los resultados de los
dos ltimos muestreos la concentracin del Cu y del Zn sea debido a que estos metales se
almacenaron en el micelio especficamente en la glomalina siendo esta una glicoprotena la
cual puede atrapar metales pesados. Estos resultados demuestran el delicado balance entre
los efectos micorrzicos en el crecimiento de la planta y la adquisicin de estos metales, tal
como lo establecen autores como Leyval et al., (1997); Christie et al., (2004). La
109
comprensin de la absorcin y de la translocacin del cinc y del cobre por las plantas
inoculadas es importante y se requiere resaltar diversos factores como la disponibilidad de
estos metales en el suelo para ser absorbidos por la planta y los sitios de almacenamiento en
los rganos de las plantas, su evolucin durante el ciclo de crecimiento y su fisiologa;
como es sugerido por autores como Weissenhorn et al., (1995) y Zhu et al., (2001).
Si se preguntara para que utilizar los HMA en nuestro modelo de estudiosi la planta de
girasol ya por si sola puede absorber y disminuir el paso de estos metales hacia la parte
area, la respuesta es que los HMA pueden proveer una capacidad adicional para retener
metales en la raz contribuyendo a optimizar la absorcin y la translocacin, adems de
conferir una proteccin a las plantas contra la toxicidad del Zn y Cu. Se ha demostrado que
los efectos primarios de los metales pesados se producen en las races, lo que muestra una
menor elongacin despus de ser expuestas a estos metales cuando stos superan los lmites
permisibles, lo que origina el aspecto achaparrado de las plantas por lo que es esencial el
inculo de los HMA que contribuye a aumentar la biomasa radicular, extendiendo as su
radio de accin en la absorcin de metales pesados, adems que protegen a la planta contra
el estrs presentado por la toxicidad de los metales. Por lo que las plantas de girasol
inoculadas presentan una tolerancia a estos metales y pueden ser consideradas para la
recuperacin de suelos contaminados para mejorar el crecimiento, viabilidad de las plantas
y su resistencia a stos metales.
110
111
6. CONCLUSIONES
La concentracin de metales determinada en los suelos colectados, se concluye que el suelo
de la laguna de oxidacin puede ser considerado como un suelo con severa polucin;
mientras que los restantes de acuerdo con los lmites permitidos son clasificados como
ligeramente contaminados.
Los resultados del estudio en maceta muestran que la hiptesis planteada debe ser aceptada;
ya que estos indican que la inoculacin de G. intraradices contribuye de manera positiva en
la absorcin y la translocacin de Cu y de Zn en las plantas de girasolTambin demuestra
que en las races hubo una mayor absorcin de Cu que de Zn y se encontr en estas, una
cantidad mas elevada que en la parte area, por lo que se concluye que s contribuy en la
disminucin de la translocacin de estos metales hacia la parte foliar del girasol.
112
Con respecto a las plantas de girasol no inoculadas, por ser una especie catalogada como
acumuladora de metales pesados, si se registr absorcin y translocacin de metales;
aunque en menor grado que las plantas inoculadas con G intraradices. Esto indica que la
planta tiene sus propios mecanismos de proteccin contra la toxicidad de los metales, tales
como la acumulacin en los plstidos de las clulas de las races o secuestracin por
protenas inducibles de bajo peso molecular retenedoras de metales como fitoquelatinas y
metalotioneinas.
La funcin que desempean los HMA en la resistencia de las plantas en particular de las
hiperacumuladoras, al estrs provocado por los metales y en la proteccin de la cadena
alimenticia, no debe ser ignorada por lo que es necesario realizar mas investigacin para
una mejor comprensin de la participacin de los HMA en suelos contaminados. As como
para elucidar su contribucin en los procesos de absorcin y translocacin de los metales
pesados, a travs de las hifas, al sistema radicular y posteriormente a las hojas y dems
orgnos areos de las plantas.
113
7. LITERATURA CITADA
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