Alves 2012

Ana Maria Rodrigues Alves
Licenciatura em Engenharia Biomdica
Desenvolvimento de nanopartculas magnticas

para tratamento de cancro: estudo da sntese e
estabilizao das solues coloidais de Fe3O4
Dissertao para obteno do Grau de Mestre em

Engenharia Biomdica
Orientador:
Co-orientador:
Professora Doutora Isabel Maria Mercs Ferreira, DCM-FCT/UNL

Professor Doutor Joo Paulo Borges, DCM-FCT/UNL
Jri:
Presidente:
Professor Doutor Mrio Antnio Basto Forjaz Secca,

Professor Associado da Faculdade de Cincias e
Tecnologia da Universidade Nova de Lisboa
Arguente:
Doutora Joana Dria Vaz Pinto, Doutorada em Fsica

pela Faculdade de cincias
Universidade Nova de Lisboa
Vogais:
tecnologia
da
Doutora Isabel Maria das Mercs Ferreira, Professora

Associada da Faculdade de Cincias e Tecnologia da
Doutor Joo Paulo Miranda Ribeiro Borges, Professor
Auxiliar da Faculdade de Cincias e Tecnologia da
Outubro, 2012
Desenvolvimento de nanopartculas magnticas para tratamento de cancro: estudo da sntese e estabilizao das solues coloidais de Fe3O4
Ana Maria Rodrigues Alves

Licenciatura em Engenharia Biomdica
Desenvolvimento de nanopartculas magnticas para

tratamento de cancro: estudo da sntese e estabilizao das
solues coloidais de Fe3O4
Dissertao para obteno do Grau de Mestre em
Engenharia Biomdica
Orientador:
Professora Doutora Isabel Maria Mercs Ferreira, DCM-FCT/UNL
Co-orientadorProfessor Doutor Joo Paulo Borges, DCM-FCT/UNL
Outubro, 2012
____________________________________________________________________________
i
Copyright - Todos os direitos reservados. Ana Maria Rodrigues Alves; Faculdade de Cincias e
Tecnologia, Universidade Nova de Lisboa.
A Faculdade de Cincias e Tecnologia e a Universidade Nova de Lisboa tm o direito, perptuo e
sem limites geogrficos, de arquivar e publicar esta dissertao atravs de exemplares impressos
reproduzidos em papel ou de forma digital, ou por qualquer outro meio conhecido ou que venha a
ser inventado, e de a divulgar atravs de repositrios cientficos e de admitir a sua cpia e
distribuio com objetivos educacionais ou de investigao, no comerciais, desde que seja dado
crdito ao autor e editor.
____________________________________________________________________________
ii
Agradecimentos
Aos meus orientadores, professora Isabel Ferreira e professor Joo Paulo Borges, por me terem
aceitado como aluna a orientar, pelas sugestes apresentadas ao longo do trabalho, pela
disponibilidade em discutir os resultados obtidos e pela partilha de conhecimentos que me
prestaram durante a realizao deste trabalho.
Paula Soares, por toda a disponibilidade demonstrada, desde o incio, para me ajudar ao longo
deste trabalho, e por toda a colaborao prestada no decurso do mesmo. Foi uma ajuda
muitssimo importante durante estes meses e fundamental para que os objetivos inicialmente
propostos fossem alcanados. Foi uma pessoa amiga, paciente e incansvel, que esteve sempre
presente nos momentos de maior angstia e nervosismo inerentes realizao deste trabalho.
Por toda a ajuda prestada, por toda a pacincia, por todo o apoio e compreenso, Paula, um Muito
Obrigada!
Ao CENIMAT pela cedncia das instalaes e equipamentos, bem como a ajuda dos seus
funcionrios, na visualizao de algumas imagens no SEM e caracterizao das NPs em DRX.
Ao Instituto Superior Tcnico, pela disponibilizao das instalaes e equipamentos, em particular
para a visualizao de imagens no TEM.
Ao Nuno, o meu companheiro de vida, pela forma como me incute a alegria de viver, como me
estimula a crescer e como me encoraja sempre a fazer tudo o melhor possvel. Acima de tudo,
pelo inestimvel apoio e confiana, que preenchem as falhas que vou tendo ao longo deste
percurso, e pela pacincia e compreenso reveladas ao longo destes anos.
Por ltimo, mas no menos importante, gostaria de agradecer a toda a minha famlia, em especial
aos meus pais, pelo apoio, incentivo e pelos diversos sacrifcios suportados ao longo destes anos
para que fosse possvel realizar esta etapa.
Gostaria tambm de agradecer a todos os colegas de laboratrio, pelo bom ambiente de trabalho,
e a todos aqueles que me foram ajudando ao longo deste trabalho.
____________________________________________________________________________
iii
____________________________________________________________________________
iv
Resumo
A nanotecnologia uma rea em crescente desenvolvimento nos dias de hoje e cuja importncia
bvia para diversas reas cientficas como a fsica, a qumica e a biologia. A capacidade de
manipular tomos e molculas e a sua interao com as molculas biolgicas torna a
nanotecnologia numa rea de grande interesse na medicina.
As nanopartculas so, por definio, partculas cujas 3 dimenses se encontram escala nano
(nano-escala). Dentro destas, as nanopartculas magnticas (mNPs) constituem uma importante
classe devido s suas propriedades nicas.
As nanopartculas magnticas so geralmente constitudas por um elemento metlico e podem ser
manipuladas
utilizando
um
campo magntico
externo.
Estas
propriedades
tornam-nas
extremamente vantajosas para a sua aplicao em medicina, tanto no diagnstico como na

teraputica.
O presente trabalho visou o Desenvolvimento de nanopartculas magnticas para tratamento de
cancro: estudo da sntese e estabilizao das solues coloidais de Fe3O4. De forma particular, o
objetivo principal deste projeto foi a produo de nanopartculas de xido de ferro, em particular de
magnetite, atravs do mtodo da precipitao qumica, focando-se no estudo da estabilidade de
vrias solues de mNPs, utilizando trs tipos de surfactantes (cido oleico, citrato de sdio e
triton X-100), em diversas concentraes.
A fim de verificar qual a concentrao que torna a soluo de mNPs estvel por um perodo de
tempo superior, realizou-se um estudo sobre a variao do espectro de absorvncia, recorrendo
tcnica de espectroscopia UV-VIS.
Estas mNPs foram caracterizadas em termos composicionais e estruturais recorrendo a outras
tcnicas: SEM, TEM, FTIR, DLS e DRX. Avaliou-se ainda a sua estabilidade em soluo por um
perodo de 2 meses.
No final deste projeto concluiu-se que a espectroscopia UV-VIS um mtodo prtico, simples e
rpido de avaliar a estabilidade das mNPs e que dos surfactantes utilizados, o citrato de sdio
aquele que mantm as NPs mais tempo em suspenso.
Palavras-chave: nanopartculas magnticas de xido de ferro, magnetite, precipitao qumica,

surfactantes, espectroscopia UV-VIS, estabilidade de suspenses.
____________________________________________________________________________
v
____________________________________________________________________________
vi
Abstract
Nanotechnology is currently a developing area and its importance is obvious to many scientific
fields such as physics, chemistry and biology. The ability to manipulate atoms and molecules and
their interaction with biological molecules makes nanotechnology an area of interest in medicine.
By definition, nanoparticles are particles whose three dimensions are at the nanoscale. Within
these, the magnetic nanoparticles (mNPs) are an important class because of their unique
properties.
Magnetic nanoparticles are composed of a metallic nucleus and can be manipulated using an
external magnetic field. These properties render them great advantages for application in medicine,
both in diagnosis and therapy.
The aim of this work was the development of magnetic nanoparticles envisaging cancer treatment:
studying of the synthesis and stabilization of Fe3O4 colloidal solutions. In particular, the main
objective of this project was the production of iron oxide nanoparticles, especially magnetite,
through the method of chemical precipitation, focusing on stability studies of various mNPs
solutions, using three types of surfactants (oleic acid, sodium citrate and triton X-100) at different
concentrations.
In order to determine the concentration in which the mNPs are stable as a colloid for a long time, it
was carried out a study about the changes of transmission spectra in the wavelength range
corresponding to the absorption of mNPs using the UV-VIS spectroscopy technique.
The structure and composition of these mNPs were characterized using other techniques: SEM,
TEM, FTIR, DLS and XRD. The stability test for a long period was also performed.
From the obtained results it was concluded that the UV-VIS is a practical, simple and quick method
to evaluate the stability of mNPs and evaluate the effect of different surfactants. Thus of the three
surfactants used, sodium citrate is one that maintains the NPs in suspension longer.
Keywords: magnetic nanoparticles of iron oxide, magnetite, chemical precipitation, surfactants,

UV-VIS, stability of suspensions
____________________________________________________________________________
vii
____________________________________________________________________________
viii
ndice
AGRADECIMENTOS ..........................................................................................................................III
RESUMO .......................................................................................................................................... V
ABSTRACT...................................................................................................................................... VII
NDICE .............................................................................................................................................IX
NDICE DE FIGURAS .........................................................................................................................XI
NDICE DE TABELAS ...................................................................................................................... XIII
LISTA DE ABREVIATURAS ............................................................................................................... XV
COMPOSTOS QUMICOS ................................................................................................................ XV
SMBOLOS .................................................................................................................................... XVI
1.
2.
3.
4.
INTRODUO ............................................................................................................................ 1
1.1.
NANOPARTCULAS MAGNTICAS .................................................................................................... 1
1.2.
MAGNETITE............................................................................................................................... 5
1.3.
APLICAES DAS MNPS NO TRATAMENTO DE CANCRO ....................................................................... 5
1.3.1.
Libertao de frmacos................................................................................................ 6
1.3.2.
Ressonncia Magntica de Imagem ............................................................................ 7
1.3.3.
Hipertermia .................................................................................................................. 8
MTODOS DE SNTESE DE MNPS ............................................................................................. 11

2.1.
PRECIPITAO QUMICA ............................................................................................................ 11
2.2.
MICROEMULSO ...................................................................................................................... 13
2.3.
SNTESE HIDROTERMAL .............................................................................................................. 19
2.4.
DECOMPOSIO TRMICA .......................................................................................................... 20
2.5.
CARACTERIZAO DAS MNPS...................................................................................................... 21
REVESTIMENTO DAS MNPS ..................................................................................................... 25

3.1.
CIDO OLEICO.......................................................................................................................... 26
3.2.
CITRATO DE SDIO .................................................................................................................... 27
3.3.
TRITON X-100 ......................................................................................................................... 27
3.4.
QUITOSANO ............................................................................................................................ 28
PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL ............................................................................................ 31

4.1.
SNTESE DAS NANOPARTCULAS DE FE3O4 ...................................................................................... 31
4.1.1.
Materiais .................................................................................................................... 31
4.1.2.
Procedimento ............................................................................................................. 31
4.2.
INFLUNCIA DE SURFACTANTES .................................................................................................... 32
____________________________________________________________________________
ix
4.2.1.
Materiais .................................................................................................................... 32
4.2.2.
Procedimento ............................................................................................................. 32
4.3.
FUNCIONALIZAO COM QUITOSANO ........................................................................................... 32
4.3.1.
Materiais .................................................................................................................... 33
4.3.2.
Procedimento ............................................................................................................. 33
4.4.
CARACTERIZAO DAS MNPS...................................................................................................... 34
4.4.1. Absoro UV-VIS ................................................................................................................ 34

4.4.2. Anlise da morfologia por SEM ......................................................................................... 35
4.4.3. Dimetro hidrodinmico das mNPs (DLS).......................................................................... 35
4.4.4. Difrao de raios-X (DRX) .................................................................................................. 35
4.4.5. Tcnica de FTIR .................................................................................................................. 35
4.4.6. Anlise da morfologia por TEM ......................................................................................... 36
5.
RESULTADOS E DISCUSSO DE RESULTADOS .......................................................................... 37

5.1.
SNTESE DE NANOPARTCULAS DE FE3O4........................................................................................ 37
5.2.
INFLUNCIA DOS SURFACTANTES .................................................................................................. 42
5.2.1.
cido oleico ................................................................................................................ 42
5.2.2.
Citrato de sdio .......................................................................................................... 43
5.3.
INFLUNCIA DA CONCENTRAO DOS SURFACTANTES ....................................................................... 44
5.3.1.
cido oleico ................................................................................................................ 45
5.3.2.
Citrato de sdio .......................................................................................................... 51
5.3.3.
Triton X-100 ............................................................................................................... 56
5.4.
FUNCIONALIZAO COM QUITOSANO ........................................................................................... 60
6.
CONCLUSES E PERSPETIVAS FUTURAS .................................................................................. 63
7.
BIBLIOGRAFIA ......................................................................................................................... 65
____________________________________________________________________________
x
ndice de figuras
[6]
FIGURA 1.1 APLICAES BIOMDICAS DAS NANOPARTCULAS MAGNTICAS (RETIRADO DE ). ............ 2

FIGURA 1.2 ESQUEMA DA ESTRATGIA TERAPUTICA UTILIZANDO MNPS QUE PODEM DIAGNOSTICAR
(IRM) E TRATAR CANCRO (HIPERTERMIA) SIMULTANEAMENTE (RETIRADO DE
FIGURA 1.3 ESTRUTURA DA MAGNETITE (OBTIDA DE
[33]
[31]
). .......................... 4
). ....................................................................... 5
FIGURA 1.4 ESQUEMA REPRESENTATIVO DE UM SISTEMA DE LIBERTAO DE FRMACOS ATRAVS DE

MNPS UTILIZANDO UM CAMPO MAGNTICO EXTERNO PARA DIRECIONAR AS MNPS PARA O LOCAL
DO TUMOR (OBTIDA DE
[37]
). ................................................................................................................ 7
FIGURA 2.1 TIPOS DE MICROEMULSES ESQUEMATIZADAS PELA FASE OLEOSA (CINZA), FASE AQUOSA
(BRANCA) E FILME INTERFACIAL DE SURFACTANTE; A) MICROEMULSO O/A; B) MICROEMULSO
A/O (RETIRADO DE
[49]
). .................................................................................................................... 15
FIGURA 2.2- ESQUEMA ILUSTRATIVO DA COPRECIPITAO DE NANOPARTCULAS DE FE3O4 VIA

MICROEMULSO A/O (ADAPTADO DE
[8]
). ......................................................................................... 16
FIGURA 2.3- ESTRATGIA DE PREPARAO DE SPIONS MONODISPERSAS DENTRO DE GOTAS DE

MICROEMULSO A/O. OS SAIS DE FERRO SO DISSOLVIDOS DENTRO DOS NCLEOS AQUOSOS DAS
MICELAS E PRECIPITAM ATRAVS DA SOLUO ALCALINA, PARA OBTER PARTCULAS COM O
TAMANHO DESEJADO (ADAPTADO DE
[2]
). ......................................................................................... 18
FIGURA 3.1 ESTRUTURA DO CIDO OLEICO (OBTIDA DE
[80]
).................................................................. 27
FIGURA 3.2 ESTRUTURA DO CITRATO DE SDIO (OBTIDA DE

FIGURA 3.3 ESTRUTURA DO TRITON X-100 (OBTIDA DE
FIGURA 3.4- ESTRUTURA DO QUITOSANO (OBTIDA DE
[90]
[83]
). ......................................................... 27
[84]
). ................................................................ 28
). ...................................................................... 29
FIGURA 4.1 TCNICA DE MONTAGEM DA GELIFICAO IONOTRPICA. .................................................. 34

FIGURA 5.1 NPS DE MAGNETITE APS A SUA SNTESE (A)), APS 15 MINUTOS DA SUA SNTESE (B)) E
APS SECAS (C))............................................................................................................................... 37
FIGURA 5.2 ESPECTRO DAS NPS DE FE3O4 AO LONGO DO TEMPO....................................................... 38

FIGURA 5.3 - IMAGEM DE SEM DAS MNPS DE FE3O4 E A RESPETIVA DISTRIBUIO DE DIMETROS
OBTIDA POR DLS. ............................................................................................................................. 39
FIGURA 5.4 DIFRATOGRAMA DE DRX DAS NANOPARTCULAS DE FE3O4. ............................................. 39

FIGURA 5.5 DIFRATOGRAMA DAS NANOPARTCULAS DE FE3O4 COM TRITON X-100. .............................. 41
FIGURA 5.6 ESPECTRO DE FTIR DAS NANOPARTCULAS DE FE3O4. ..................................................... 41
FIGURA 5.7- IMAGEM DAS MNPS OBTIDA NO SEM, COM CIDO OLEICO E 5 MINUTOS DE AGITAO. ..... 42
FIGURA 5.8 IMAGEM DAS MNPS OBTIDA NO SEM, COM CITRATO DE SDIO E 5 MINUTOS DE AGITAO.
.......................................................................................................................................................... 43
FIGURA 5.9 IMAGEM DE TEM E RESPETIVA DISTRIBUIO DE TAMANHO DAS MNPS COM CITRATO DE
SDIO (0,00125M). .......................................................................................................................... 44
FIGURA 5.10 - IMAGEM DE TEM E RESPETIVA DISTRIBUIO DE TAMANHO DAS MNPS COM TRITON X100 (0,026M). .................................................................................................................................. 45
____________________________________________________________________________
xi
FIGURA 5.11 - MEDIES EFETUADAS IMEDIATAMENTE E 24H APS A SNTESE DE MNPS COM CIDO
OLEICO EM VRIAS CONCENTRAES: A) 0,008M; B) 0,016M; C) 0,032M; D) 0,064M; E)
0,128M; F) 0,192M.......................................................................................................................... 46
FIGURA 5.12 COMPARAO DO VALOR DA ABSORVNCIA NAS DIFERENTES CONCENTRAES DE
CIDO OLEICO, NO PICO DE MAIOR INTENSIDADE (224 NM). ............................................................ 48
FIGURA 5.13 COMPORTAMENTO DA SOLUO DE CIDO OLEICO C=0,064M AO LONGO DO TEMPO, NO

PICO DE MAIOR INTENSIDADE............................................................................................................ 49
FIGURA 5.14 - PERCENTAGEM DE MASSA EM SUSPENSO, AO LONGO DO TEMPO, DAS MNPS DE FE3O4
COM DIFERENTES CONCENTRAES DE CIDO OLEICO (PONTOS CORRESPONDEM A UM VALOR
MDIO, COM N=3). ............................................................................................................................ 50
FIGURA 5.15 - MEDIES EFETUADAS IMEDIATAMENTE E 24H APS A SNTESE DE MNPS COM CITRATO
DE SDIO EM VRIAS CONCENTRAES: A) 0,00125M; B) 0,0025M; C) 0,005M; D) 0,01M; E)
0,02M; F) 0,03M. ............................................................................................................................. 52
FIGURA 5.16 COMPARAO DO VALOR DA ABSORVNCIA NAS DIFERENTES CONCENTRAES DE
CITRATO DE SDIO NO PICO DE MAIOR INTENSIDADE (300 NM). ...................................................... 53
FIGURA 5.17 COMPORTAMENTO DA SOLUO DE CITRATO DE SDIO C=0,005M AO LONGO DO

TEMPO, NO PICO DE MAIOR INTENSIDADE......................................................................................... 54
COM VRIAS CONCENTRAES DE CITRATO DE SDIO (PONTOS CORRESPONDEM A UM VALOR
MDIO, COM N=3). ............................................................................................................................ 55
FIGURA 5.19 - MEDIES EFETUADAS IMEDIATAMENTE E 24H APS A SNTESE DE MNPS COM TRITON X100 EM VRIAS CONCENTRAES: A) 0,017M, B) 0,026M, C) 0,034M, D) 0,043M, E) 0,052M, F)
0,061M. ............................................................................................................................................ 56
FIGURA 5.20 - COMPARAO DO VALOR DA ABSORVNCIA NAS DIFERENTES CONCENTRAES DE
TRITON X-100, NOS PICOS DE MAIOR INTENSIDADE (222 NM E 276 NM). ....................................... 57
FIGURA 5.21 - COMPORTAMENTO DA SOLUO DE TRITON X-100 C=0,061M AO LONGO DO TEMPO,

NOS PICOS DE MAIOR INTENSIDADE. ................................................................................................. 58
COM VRIAS CONCENTRAES DE TRITON X-100 (PONTOS CORRESPONDEM A UM VALOR MDIO,
COM N=3). ......................................................................................................................................... 59
FIGURA 5.23 - IMAGEM DE TEM E RESPETIVA DISTRIBUIO DE TAMANHO DAS MNPS COM QUITOSANO
(O QUITOSANO EST ASSINALADO COM AS SETAS VERMELHAS)...................................................... 60
____________________________________________________________________________
xii
ndice de tabelas
[3]
TABELA 1.1 SPIONS COMERCIALIZADAS ATUALMENTE (ADAPTADO DE )............................................. 3

TABELA 2.1 COMPARAO ENTRE MICROEMULSES E EMULSES (ADAPTADO DE
[49]
). ...................... 14
TABELA 2.2 RESUMO DAS PRINCIPAIS TCNICAS DE CARACTERIZAO DAS NPS COM INDICAO DA
INFORMAO FORNECIDA. X INDICA QUE A TCNICA FORNECE INFORMAES INCERTAS OU
INCOMPLETAS PARA UMA VASTA GAMA DE MATERIAIS; XX INDICA QUE A TCNICA FORNECE
INFORMAO INTERMDIA; XXX INDICA QUE A TCNICA AMPLAMENTE (MAS NO UNIVERSAL)
APLICVEL E MUITAS VEZES D INFORMAES BASTANTE FIVEIS (ADAPTADO DE
[35]
). ................. 22
TABELA 5.1 - VALOR MDIO DE CADA PONTO E RESPETIVO DESVIO-PADRO (EM %). ............................ 50
TABELA 5.2 - VALOR MDIO DE CADA PONTO E RESPETIVO DESVIO-PADRO (EM %). ............................ 55
TABELA 5.3 VALOR MDIO DE CADA PONTO E RESPETIVO DESVIO-PADRO (EM %)............................. 59
____________________________________________________________________________
xiii
____________________________________________________________________________
xiv
Lista de abreviaturas
A/O gua em leo
AOT dioctilsulfocionato de sdio
CS quitosano
CTAB brometo de cetiltrimetilamonio
DLS disperso dinmica de luz
DRX difrao de raios-X
EDS espectroscopia por disperso em energia
FTIR espectroscopia de infravermelho com transformada de Fourier
IRM Imagem de ressonncia magntica
mNP(s) nanopartcula(s) magntica(s)
NP(s) nanopartcula(s)
O/A leo em gua
PEG polietileno glicol
PEO xido de polietileno
PVA lcool polivinlico
RES sistema reticuloendotelial
RPM rotaes por minuto
SDS dodecilsulfato de sdio
SEM microscopia eletrnica de varrimento
SPION(s) nanopartcula(s) superparamagntica(s) de xido de ferro
TEM microscopia eletrnica de transmisso
TPP tripolifosfato de sdio
Compostos qumicos
Fe3O4 magnetite
Fe(acac)3 acetilacetonato de ferro III
Fe(Co)5 pentacarbonil de ferro
FeO(OH) - goetite
-Fe2O3 magmite
NaOH hidrxido de sdio
KBr brometo de potssio
____________________________________________________________________________
xv
Smbolos
K constante de forma
comprimento de onda da radiao
largura a meia altura do pico
ngulo de difrao
____________________________________________________________________________
xvi
1. Introduo
Neste captulo faz-se uma abordagem s nanopartculas magnticas de xido de ferro explicando
em que consistem, quais as suas principais caractersticas e propriedades magnticas, e quais as
suas principais aplicaes, focando este ltimo ponto no tratamento do cancro. D-se uma noo
das caractersticas e vantagens deste tipo de nanopartculas no tratamento do cancro.
1.1. Nanopartculas magnticas

A nanotecnologia tem evoludo para um campo multidisciplinar, revolucionando as cincias
bsicas (fsica aplicada, qumica, mecnica, engenharia biolgica e eltrica, robtica e medicina) e
as suas respetivas aplicaes
[1]
. As partculas nano-escala tm vindo a atrair cada vez mais
atenes e tm sido utilizadas nos campos da biocincia e da medicina desde os anos 70
[2]
A dimenso das nanopartculas torna-as candidatas ideais para a nanoengenharia de superfcies e

[3]
produo de nanoestruturas funcionais
. Devido s suas caractersticas nicas, no presentes
em outros materiais, as NPs podem ser utilizadas quase exclusivamente em algumas tcnicas
mdicas
[2]
De entre os diferentes tipos de NPs, as mNPs so uma classe importante, devido s suas
caractersticas nicas
[4]
. As propriedades magnticas das NPs surgem devido a uma combinao
da sua composio atmica, da sua estrutura cristalina e do efeito do seu tamanho
[1]
. As mNPs
so compostas por elementos magnticos, como ferro, nquel, cobalto e seus xidos, entre outros.
Podem ser manipuladas atravs de um campo magntico externo, o que apresenta uma grande
vantagem, uma vez que evita tcnicas de diagnstico e teraputica invasivas
[4]
As NPs de xido de ferro so superiores quando comparadas com NPs de outro metal, devido
sua biocompatibilidade e estabilidade
[4]
, alm da biodegrabilidade, o que tem contribudo para a
sua vasta utilizao em aplicaes biomdicas
[5]
Uma propriedade interessante das NPs de xido de ferro a sua capacidade para gerar calor
quando submetidas a um campo magntico alternado. Este fenmeno trmico pode ser devido
perda de energia durante o processo de desmagnetizao. Esta propriedade crucial para as
[6]
aplicaes na hipertermia
, nas quais necessria a aplicao de calor numa determinada zona
do organismo.
Devido a estas propriedades, as nanopartculas de xido de ferro (tambm conhecidas como
SPIONs ou nanopartculas superparamagnticas de xido de ferro) so as mais utilizadas em
aplicaes biomdicas
[7]
. As SPIONs consistem em ncleos de xido de ferro, que, quando
injetadas no organismo, podem atingir uma determinada zona-alvo atravs da aplicao de

campos magnticos externos. Apresentam propriedades interessantes como por exemplo, alm do
____________________________________________________________________________
1
superparamagnetismo, elevado campo de saturao. Estas propriedades so responsveis pela

ausncia da interao magntica quando o campo magntico retirado. Tipicamente, as SPIONs
apresentam duas configuraes estruturais: i) um ncleo usualmente de magnetite (Fe3O4) ou
magmite (-Fe2O3), revestido por um polmero biocompatvel; ii) um polmero biocompatvel
poroso, no qual as SPIONs precipitam dentro dos poros
[3]
Existe um enorme potencial para utilizar as SPIONs em aplicaes biomdicas para a libertao
controlada de frmacos, hipertermia, diagnstico por ressonncia magntica de imagem, terapia
gnica e medicina regenerativa
[8]
(figura 1.1), em particular as NPs de magnetite
[6]
IRM
Figura 1.1 Aplicaes biomdicas das nanopartculas magnticas (retirado de
[6]
).
A tabela seguinte ilustra algumas SPIONs atualmente comercializadas, que so utilizadas em

diferentes tcnicas de diagnstico e teraputica.
____________________________________________________________________________
2
[3]
Tabela 1.1 SPIONs comercializadas atualmente (adaptado de ).

Companhia
Aplicaes
Stemcell Technologies
Separao automatizada de clulas imunognicas
Entrega de frmacos, separao biomagntica,
Micromod
purificao de cidos nucleicos
Chemicell
Sistemas de bioseparao e deteo
Bioensaios para diagnstico humano animal, segurana
Magnisense
alimentar e proteo animal
Diagnostics Biosensors
Biosensores de diagnstico
Dexter Magnetic
Separao biomagntica
Technologies
Ocean Nanotech
Sntese e produo de mNPs
Imego
Diagnstico mdico
Integrated Engineering
Software de anlise eletromagntico, eletromecnico e
Software
eletrotrmico
EMD chemicals
Desenvolvimento de imunoensaios e imunoreagentes
Bioseparao, diagnstico, imunoensaio e medies
Magsense
bioanalticas
TurboBeads
Separao magntica eficiente
European Institute of Science
Hipertermia
Magnabeat Inc.
Separao de diversas e diferentes bio-substncias
nanoTherics Ltd.
Transfeo gnica magntica
SEPMAG Technologies
Grandes volumes de sistemas de separao magnticos
Magforce
Hipertermia
AMAG Pharmaceuticals
Agentes de contraste de IRM, diagnstico de doena
(Advanced Magnetics)
cardiovascular e cancro
Estapor
Aplicao de microesferas magnticas em imunoensaios
Desenvolvimento de reagentes e instrumentos para uso
Miltenyl Biotec
em imunologia, biologia celular e molecular,
bioinformtica e tecnologia de clulas estaminais
Diagnstico in vitro, purificao e separao de protenas
Invitrogen and Dynal Biotech
e clulas
Referncia
[9]
[10]
[11]
[12]
[13]
[14]
[15]
[16]
[17]
[18]
[19]
[20]
[21]
[22]
[23]
[24]
[25]
[26]
[27]
[28]
[29]
Dentro das diversas aplicaes biomdicas, as mNPs so utilizadas como agentes de contraste
para a Imagem de Ressonncia Magntica (IRM), vetores na distribuio controlada de frmacos
ou agentes para a terapia por hipertermia
[6]
. As mNPs podem, assim, ser utilizadas para a terapia
de cancro e, simultaneamente, como diagnstico (figura 1.2). As mNPs tm preferncia para se

acumular no tecido tumoral tanto pelas suas dimenses reduzidas como pela possibilidade de
serem funcionalizadas com marcadores celulares especficos. Estas partculas podem ser usadas
como ferramenta no diagnstico de cancro, pela IRM e terapia de cancro, pela hipertermia. Esta
capacidade de diagnosticar e tratar doenas em simultneo um conceito emergente e
denominada teragnstico (terapia + diagnstico)
[30]
____________________________________________________________________________
3
IRM
Figura 1.2 Esquema da estratgia teraputica utilizando mNPs que podem diagnosticar (IRM) e
[31]
tratar cancro (hipertermia) simultaneamente (retirado de ).
A biodistribuio das mNPs, in vivo, fortemente afetada pelas propriedades da superfcie de

revestimento e sob influncia de um campo magntico externo
[6]
Aps a sua introduo no organismo, as SPIONs devem ser capazes de escapar ao RES (sistema
reticuloendotelial), apresentar baixa adsoro proteica
[32]
, serem estveis em gua a pH neutro e
salinidade fisiolgica. Esta estabilidade coloidal depende das dimenses das partculas, que
devem ser suficientemente pequenas para que a precipitao, devida fora gravitacional, seja
evitada. Outro fator importante a carga e a superfcie qumica das partculas, o que conduz s
repulses estricas e colmbicas
[3]
. As SPIONs podem ainda ligar-se a uma variedade de
frmacos, protenas, enzimas, anticorpos ou outros alvos moleculares. O modo como as partculas
so produzidas influencia as caractersticas mencionadas anteriormente
[8]
. Para controlar as
propriedades da superfcie das SPIONs, elas so revestidas por um polmero biocompatvel

durante ou aps o processo de sntese, para prevenir a formao de grandes agregados,
alteraes da estrutura original e a biodegradao quando so expostas ao sistema biolgico
[3]
A biocompatibilidade e a no toxicidade das SPIONs so outros critrios igualmente importantes

quando se trata de aplicaes biomdicas. Os parmetros que determinam a biocompatibilidade e
a toxicidade so da natureza do componente magntico responsvel (ferro, nquel, cobaltoo) e do
tamanho final das partculas, incluindo o seu ncleo e revestimento. Idealmente devem apresentar
elevada magnetizao para que o seu movimento, no sangue, possa ser controlado por um campo
magntico e para que possam ser imobilizadas perto do tecido patolgico alvo
[3]
. Para que as
mNPs possam ser biocompatveis e no txicas devem ser revestidas com uma camada de
superfcie, como por exemplo, com um polmero biocompatvel como o quitosano.
____________________________________________________________________________
4
A aplicao bem sucedida das SPIONs, no campo da sade, est fortemente dependente das
suas caractersticas estruturais, tais como a capacidade de controlar o tamanho e a distribuio do
tamanho, a forma uniforme, a forte suscetibilidade magntica e uma superfcie qumica desejada
[8]
As mNPs produzidas ao longo deste trabalho visam a aplicao posterior em tratamento de

cancro.
1.2. Magnetite
De todos os xidos de ferro, a magnetite (Fe3O4), que apresenta colorao preta, possui as
propriedades mais interessantes, devido presena de caties de ferro em dois estados de
2+
valncia, Fe
3+
[4]
e Fe , em estrutura de espinela inversa .
Figura 1.3 Estrutura da magnetite (obtida de
[33]
).
2+
Na magnetite, a magnetizao decorre entre o movimento eletrnico dos ies Fe

coexistem nos stios octadricos
3+
e Fe
que
[5]
.
3+
A magnetite um material ferromagntico devido juno anti-ferromagntica entre o Fe , na sua

estrutura de espinela inversa. Contudo, nano-escala (<20 nm), as NPs de xido de ferro so
superparamagnticas ( temperatura ambiente), ou seja, devido reduo do seu tamanho, a
partcula comporta-se como um nico dipolo magntico, possuindo assim um elevado momento
magntico. Em consequncia, estas NPs so facilmente magnetizveis sob a aplicao de um
campo magntico externo e no se magnetizam quando esse campo removido
[6]
portanto, evitar a aglomerao das partculas e a formao de mbolos nos capilares
[32]
, podendo,
.
1.3. Aplicaes das mNPs no tratamento de cancro

O cancro caracterizado por uma diminuio ou perda de controlo celular e os mecanismos de
maturao normais. As suas caractersticas incluem crescimento excessivo de clulas, clulas e
____________________________________________________________________________
5
tecidos indiferenciados, e a capacidade de metstase. A escolha de tratamento inclui a remoo

completa do tecido tumoral e, possivelmente, parte dos tecidos adjacentes, a quimioterapia,
imunoterapia, radioterapia, e uma combinao destes. Uma vez que a completa erradicao de
clulas de cancro imprescindvel para o sucesso do tratamento, a ablao total o tratamento
de escolha, se aplicvel. No entanto, dependendo da localizao e do envolvimento do tumor com
os tecidos circundantes, a cirurgia pode no ser sempre possvel. Sob tais circunstncias, torna-se
necessrio recorrer radioterapia ou quimioterapia
[34]
No entanto, tm vindo a ser relatadas complicaes graves com estes tratamentos. Portanto, o
desenvolvimento de tcnicas que podem destruir as clulas tumorais, sem a destruio
concomitante dos tecidos saudveis do organismo, atualmente uma das reas mais ativas de
pesquisa do cancro
[34]
1.3.1. Libertao de frmacos

Sabe-se que a quimioterapia uma forma eficaz de tratamento contra clulas tumorais, mas, uma
vez que administrada via intravenosa, todos os rgos esto sujeitos aos seus efeitos nefastos
e, portanto, os efeitos txicos so frequentemente graves e devastadores para o paciente
[35]
A ideia de libertao controlada de substncias biologicamente ativas comeou a ser utilizada na

dcada de 50. As vantagens de sistemas de libertao controlada incluem: libertao localizada
de frmacos num compartimento particular do corpo, diminuindo, dessa forma, o nvel sistmico
do frmaco; manuteno de nveis constantes de medicamento no organismo, implicando numa
eficincia maior na utilizao do agente (ou seja, necessrio menor teor de medicamento para
produzir o mesmo efeito que os sistemas convencionais); preservao dos medicamentos que so
rapidamente destrudos pelo corpo (isso particularmente importante para molculas
biologicamente sensveis, tais como protenas) e, menor frequncia de administrao do agente
ativo, aumentando o conforto do paciente e a eficcia do tratamento
[36]
A utilizao de mNPs como agentes de libertao de frmacos uma abordagem de tratamento

promissora, principalmente para frmacos quimioteraputicos. Os principais problemas associados
aos frmacos quimioteraputicos so a sua no-especificidade e resistncia celular. Com um
transportador de frmaco possvel superar esses problemas. Neste caso, o tamanho, carga e
superfcie qumica das mNPs so particularmente importantes, uma vez que afetam o tempo de
circulao no sangue e a biodisponibilidade das mNPs
[30]
Nesta aplicao, a mNP revestida e fornece o medicamento a locais especficos do corpo. Na

prtica, o frmaco incorporado na nanopartcula transportada para o local especfico do corpo
humano atravs da aplicao de um campo magntico externo. A fora fsica criada pelo campo
magntico externo ajuda a transportar as partculas atravs da parede vascular, posicionando e
retendo o frmaco junto das clulas tumorais (figura 1.4). Isto permite que doses maiores do
____________________________________________________________________________
6
medicamento anticancergeno sejam entregues s clulas tumorais, mantendo o medicamento no

local por longos perodos de tempo
[35]
Figura 1.4 Esquema representativo de um sistema de libertao de frmacos atravs de mNPs

utilizando um campo magntico externo para direcionar as mNPs para o local do tumor (obtida de
[37]
).
Do ponto de vista do transporte de frmacos no organismo, no existe nenhuma limitao prtica

quando o dimetro de NPs tpicas tem uma dimenso menor do que o dimetro da seo cruzada
do capilar mais estreito (que cerca de 2 m). Na realidade, para um transporte eficiente, as
nanopartculas devem ser menores que 300 nm
[36]
A entrega de frmacos com recurso a mNPs pode melhorar o resultado da quimioterapia, uma vez
que permite que uma frao mxima de medicamento interaja exclusivamente com as clulas
tumorais sem efeitos adversos para as clulas normais, e uma vez que permite a distribuio
preferencial do medicamento para as clulas cancergenas
[34]
1.3.2. Ressonncia Magntica de Imagem

A Imagem de Ressonncia Magntica (IRM) uma tcnica no invasiva de diagnstico, utilizada
no estudo de tumores, leses de tecidos ou na identificao de tipos especficos de clulas do
corpo
[6]
, diferenciando tecido normal e patolgico atravs das propriedades de relaxao dos
tomos de hidrognio na gua
[8]
. Para facilitar o processo de diferenciao entre os tecidos, foi
necessrio o desenvolvimento de agentes que aumentassem o contraste
[36]
As mNPs j so utilizadas como agentes de contraste em IRM, para deteo de cancro,

diagnstico e monitorizao do tratamento
[30]
e provam ser um bom substituto para o complexo de
gadolnio (agente de contraste tipicamente utilizado em IRM)
[8]
. As nanopartculas de xido de
ferro tm sido utilizadas como agentes de contraste em IRM devido s suas propriedades de
____________________________________________________________________________
7
encurtamento de T2 (tempo de relaxao transversal, spin-spin, referente componente do vetor

magnetizao, perpendicular ao campo magntico aplicado) e T2* (curto tempo de relaxao
transversal)
[36]
A aplicao de mNPs em IRM depende do seu tamanho. As partculas com dimetros superiores a
50 nm so capturadas pelo RES assim que so injetadas no organismo, o que as torna adequadas
para a imagiologia do fgado ou bao
[8]
. A magnetite revestida com dextrano, por exemplo, tem
um tamanho mdio de 80 nm e tem sido clinicamente provado que um agente de contraste

especfico para o fgado. Estas partculas apresentam tempo de meia-vida curto, que o tempo
caracterstico para a eliminao de material estranho no sangue pelo RES
[36]
. As partculas com
dimetros inferiores a 50 nm tm um tempo de meia-vida longo (superior a 2 horas) e

permanecem na circulao sangunea tempo suficiente para serem usadas como agentes de
contraste na angiografia por ressonncia magntica
[8]
A administrao intravenosa o mtodo mais efetivo para libertar agentes de contraste, pois todas
as clulas vitais recebem os agentes atravs da circulao sangunea. Alm disso, permite a
libertao controlada de um frmaco adequado ao tratamento de rgos doentes num local
especfico. Para marcao de tumores com mNPs, um aspeto importante que tem de se levar em
conta a limitao de tamanho das NPs para sistemas injetveis. A maioria dos locais acessvel
atravs da microcirculao pelos capilares sanguneos ou atravs de poros presentes em vrias
superfcies e membranas. A maioria das aberturas de tamanho nanomtrico, logo, com o uso de
NPs, possvel alcanar o nvel subcelular
[36]
As mNPs permanecem no tecido por perodos mais longos em comparao com agentes de
contraste comuns. Isto traz o benefcio de reduzir a quantidade de agentes de contraste a ser
administrada ao paciente, minimizando, assim, os efeitos txicos adversos. Alm disso, as mNPs
so mais seletivas e mais especficas do que outros agentes de contraste, o que melhora os
resultados de IRM
[30]
[6]
e proporcionam uma melhor diferenciao entre tecido saudvel e patolgico
Devido ao seu revestimento, as mNPs possuem mais tempo de circulao no sangue, o que
melhora a eficcia na deteo de clulas tumorais. Alm disso, possibilidade de adicionar grupos
funcionais bioativos na superfcie dessas partculas (como anticorpos, enzimas, etc.) permite que
[6]
as mNPs tenham uma clula alvo especfica no organismo .
1.3.3. Hipertermia
As SPIONs desempenham um papel importante no desenvolvimento da hipertermia para o
tratamento de tumores
[32]
A hipertermia um procedimento teraputico usado para aumentar a temperatura de uma regio

do corpo afetado por um tumor maligno (cancro). uma tcnica antiga, experimentada pela
primeira vez por Hipcrates (460-370 a.C.), pai da medicina, propondo que se tratassem tumores
superficiais por cauterizao com ferro quente
[30]
. Hipcrates acreditava que qualquer doena
____________________________________________________________________________
8
poderia ser curada pelo aquecimento do corpo do paciente. Dentro desta filosofia, desde 1957 a
hipertermia, uma modalidade de tratamento de cancro com elevao de temperatura entre 41 e
45C com um tempo de tratamento de no mnimo 30 minutos, tem ganho considervel ateno
devido a sua eficcia clnica, tal como para minimizar efeitos locais clnicos e a eventual
possibilidade de destruir seletivamente tumores malignos localizados ou profundamente
enraizados
[36]
. A utilizao da hipertermia no tratamento de tumores tem como base o facto de a
uma temperatura entre 42C a 45C as clulas tumorais morrerem
[38]
. A esta temperatura, as
clulas tumorais morrem, preferencialmente, porque so clulas que vivem em condies de

hipoxia, ou seja, com baixa quantidade de oxignio. Quando a temperatura aumentada, estas
clulas no tm a capacidade de manter um pH adequado sua sobrevivncia (porque este j
naturalmente cido devido falta de oxignio) e, portanto, morrem preferencialmente.
Alm disso, os tumores so mais facilmente aquecidos do que os tecidos normais vizinhos. Desta
forma, a hipertermia um tratamento de cancro til com poucos efeitos secundrios locais
[36]
.A
combinao de hipertermia com mtodos especficos para a deteo de clulas tumorais

bastante vantajosa para tumores inoperveis, pois, nestes casos, as opes de tratamento so
limitadas. Neste tipo de tumores, a utilizao de hipertermia magntica atravs das NPs
magnticas pode produzir um resultado mais eficaz e trazer menos efeitos secundrios
[2]
Outra vantagem da hipertermia magntica o facto de o aquecimento ser restrito somente

regio do tumor. De mencionar tambm que o potencial de aquecimento, nesta terapia, est
fortemente relacionado com o tamanho e forma das NPs
O Instituto Nacional de Cancro, nos EUA
[39]
[7]
reconhece trs tipos diferentes de hipertermia: i)
hipertermia local, em que o calor aplicado numa pequena rea, como um tumor, recorrendo a
diversas tcnicas de distribuio de energia (como micro-ondas, radiofrequncias e ultrassons),
que aquecem o tumor; ii) hipertermia regional, em que o calor aplicado a grandes superfcies de
tecido; iii) hipertermia por todo o corpo, que aplicada para tratar cancro espalhado por todo o
corpo
[30]
A hipertermia dos fluidos magnticos envolve a disperso de partculas magnticas atravs do

tecido-alvo. As NPs magnticas so colocadas dentro do tumor atravs de uma injeo direta ou
atravs de um anticorpo tumoral especfico, depois de o tumor ser exposto a um campo magntico
alternado com fora e frequncia suficientes para causar aquecimento das partculas. Este campo
magntico faz com que as partculas gerem calor atravs dos mecanismos de relaxao
magnticos
[30]
A aplicao clnica da hipertermia ainda no est estabelecida como um tratamento isolado, mas
como uma forma de melhorar os resultados da quimioterapia e radioterapia, quando aplicada
repetidamente em curtos intervalos. Atualmente, a hipertermia est aprovada para cancros em
estados avanados (cancro rectal recorrente, cancro na prstata, no tero, no pescoo e cabea,
nos pulmes e na mama) em conjugao com quimioterapia e radioterapia
[30]
____________________________________________________________________________
9
____________________________________________________________________________
10
2. Mtodos de sntese de mNPs

Mtodos fsicos, como deposio de fase gasosa e litografia por feixe de eletres, so
procedimentos elaborados e que sofrem de incapacidade de controlar o tamanho das partculas na
gama de tamanho nanomtrico. Os procedimentos qumicos de sntese de nanopartculas
magnticas so mais simples e mais eficientes no controlo de tamanho, composio e, por vezes,
forma das nanopartculas
[2]
Segundo um estudo realizado por Mahmoudi e os seus colegas, em 2011
[3]
, cerca de 90% das
mNPs so sintetizadas atravs de procedimentos qumicos. Estes procedimentos tm merecido

particular ateno uma vez que permitem a sntese de partculas de tamanho e forma quase
uniformes. Este objetivo tem sido atingido por vrios mtodos de sntese de nanopartculas de
xido de ferro, sendo os mais utilizados a precipitao qumica, a microemulso, a sntese
hidrotermal e a decomposio trmica. A magnetite (Fe3O4), magmite (-Fe2O3) e hematite (Fe2O3) so os trs principais xidos de ferro que compem a categoria das SPIONs
[3]
, mas este
trabalho focou-se, somente, na produo de magnetite, devido s suas vantagens nas aplicaes
biomdicas em comparao com os outros 2 xidos de ferro.
Neste captulo abordam-se os conceitos tericos dos mtodos de sntese das mNPs.
2.1. Precipitao Qumica

O mtodo da precipitao qumica o caminho qumico mais simples, rpido e barato para a
obteno de mNPs. A coprecipitao dos sais de Fe
2+
3+
e Fe
com uma soluo alcalina a mais
comum, devido baixa temperatura de reao necessria e s propriedades hidroflicas da

superfcie das partculas resultantes
[8]
. O controlo do tamanho, forma e composio das NPs
depende do tipo de sais utilizados (cloretos, sulfatos, nitratos, percloratos, etc.), da razo entre
2+
Fe
3+
e Fe , do pH, da fora inica do meio
usada
[2]
, do tipo de agente precipitante
[35]
e da fora da base
[1]
. O controlo destes parmetros permite a formao de nanopartculas com uma
distribuio de tamanho grande (maior que 30% do tamanho mdio de partcula) e

2+
aproximadamente esfricas. A concentrao dos sais de Fe
3+
e Fe
presentes na mistura inicial
da reao tem o maior efeito sobre o tamanho global das NPs. Baixas concentraes resultam
num crescimento das partculas limitado, embora as partculas resultantes sejam, geralmente,
mais uniformes em tamanho. Quando a concentrao dos sais aumentada, existe um aumento
do crescimento das partculas, com uma subsequente perda de uniformidade de tamanho
[35]
A primeira sntese de NPs magnticas utilizando a tcnica da precipitao alcalina foi realizada por
Massart
[40]
2+
. O processo de Massart descreve a coprecipitao de cloretos de Fe
3+
e Fe
numa
____________________________________________________________________________
11
soluo alcalina. Aps o trabalho pioneiro de Massart, o mtodo da coprecipitao foi amplamente
estudado para a sntese de NPs de magnetite, devido s suas extraordinrias vantagens. De facto,
hoje em dia praticamente todas as NPs de magnetite utilizadas em pesquisas clnicas so
preparadas pelo mtodo da coprecipitao, devido ao facto da sua superfcie se poder modificar
facilmente para hidroflica, o que adequado para aplicaes biomdicas
2+
3+
Em 1992, Jolivet e equipa demonstram que a razo entre Fe
e Fe
[41]
influencia o resultado final
das NPs. Valores baixos desta razo (<0.3) formavam goethite (FeO(OH)); para propores entre
0.3 e 0.5 surgiam duas fases, constitudas por partculas de menor (4 nm) e maior dimenso. No
entanto, a razo de 0.5 correspondeu a magnetite estequiomtrica, sendo as partculas resultantes
homogneas em tamanho e composio
2+
Fe
3+
e Fe
[42]
. Wei e colegas demonstram que a razo molar entre
deveria ser mantida em 1:2 pois assim obtm-se partculas de magnetite com
qualidade mais elevada
[43]
. Tambm Babes e a sua equipa, em 1999, investigaram diferentes
propriedades tais como a concentrao dos sais de ferro, temperatura e oxignio, salientando que
2+
o parmetro mais importante era a razo molar entre Fe
3+
e Fe . Uma razo elevada produzia
partculas maiores, sugerindo que somente razes entre 0.4 e 0.6 produziam partculas
monodispersas, adequadas para utilizar como agentes de contraste em imagem de ressonncia
magntica
[44]
Em 2010, Lodhia e a sua equipa concluram que o tamanho das NPs est relacionado com o pH
2+
e/ou a razo entre Fe

3+
entre 1 e 4,o Fe
3+ [1]
e Fe
. Kim e investigadores comprovaram que, com um intervalo de pH
poderia condensar como goethite (FeO(OH)) e que a magnetite (Fe3O4) deveria
ser obtida com um pH entre 9 e 14
[45]
Em 2006, Sun e seus colaboradores provaram que a temperatura de reao influencia o tamanho
final das mNPs. Segundo estes investigadores, as nanopartculas de Fe3O4 reduziam o seu
tamanho com o aumento da temperatura, quando a temperatura de reao era inferior a 50C, e
aumentavam o seu tamanho com o aumento da temperatura, quando esta era superior a 50C
[46]
Em relao ao mtodo experimental, convencionalmente, a magnetite preparada adicionando

uma base mistura aquosa de cloretos de Fe
2+
3+
e Fe , numa razo molar de 1:2
[8]
e com um pH
[1]
entre 9 e 14 . O precipitado de magnetite surge com uma colorao preta.

A reao global pode ser descrita da seguinte forma:
2+
Fe
3+
+ 2Fe
+ 8OH Fe3O4 + 4H2O
(Equao 1)
De acordo com a termodinmica desta reao, era esperada uma precipitao completa de Fe3O4
num pH entre 9 e 14, mantendo uma razo molar de Fe
2+
3+
e Fe
de 1:2 sobre um ambiente no
oxidante e livre de oxignio. Contudo, Fe3O4 pode oxidar, como descrito na reao seguinte
Fe3O4 + 0.25O2 +4.5 H2O 3Fe(OH)3
[2]
(Equao 2)
____________________________________________________________________________
12
Os ies podem ser oxidados antes da precipitao, afetando as propriedades fsicas e qumicas
das mNPs
[1]
. A reao deve, portanto, ser realizada sob um ambiente anaerbio, por forma a
eliminar o oxignio. Borbulhar um gs inerte atravs da soluo no s protege a oxidao crtica

da magnetite, mas tambm reduz o tamanho da partcula, quando comparado com os mtodos
que no removem o oxignio
[2]
. De realar que no se consegue evitar completamente a oxidao

[4]
das mNPs, durante a sua sntese , mas pode ser limitada.

No caso da magnetite, a oxidao, normalmente, significa a formao de magmite
[1]
. A
transformao de magnetite para magmite pode representar um problema srio. Os dois diferem
entre si na estrutura cristalogrfica: na magnetite, os ies de ferro ocupam posies
maioritariamente octadricas (no octaedro, os espaos esto todos preenchidos pelos ies de
ferro); na magmite, existem vazios inicos na posio octadrica (no octaedro, existem espaos
vazios, que podem ser preenchidos por caties). Esta estrutura cristalina resulta numa
magnetizao espontnea diferente para as partculas de ferro: a 300K, 92 emu/g para a
[1]
magnetite e 78 emu/g para a magmite .

A principal vantagem das reaes de precipitao qumica que podem ser sintetizadas grandes
quantidades de nanopartculas
[35]
. No entanto, apesar do mtodo da coprecipitao ser o mais
simples e a via qumica a mais eficiente para obter NPs magnticas, tambm apresenta
desvantagens
[1]
. A reao de precipitao, em meio aquoso, para sintetizar NPs de Fe3O4 j
investigada h mais de 20 anos, mas as dificuldades que surgem na sntese com este mtodo
ainda permanecem, incluindo o controlo do tamanho da partcula, a distribuio do tamanho, a
fase resultante
[41]
, a baixa cristalinidade e a agregao
[1]
. Segundo Kim e os seus colaboradores,
a agregao das partculas pode ser justificada pela existncia de interaes van der Waals entre
as mesmas
[47]
. Contudo, Maity e a sua equipa sugerem que o principal motivo de agregao das
partculas a interao magnetosttica, como resultado da interao dipolo-dipolo
[48]
2.2. Microemulso
Desde a sua introduo, em 1943 por Hoar e Schulman, as microemulses tm atrado
considervel ateno com vista do seu uso em muitos produtos, tais como substitutos de sangue
ou solventes de frmacos hidrofbicos. Neste ltimo ramo, elas atuam incrementando a
solubilizao, dissoluo e biodisponibilidade de frmacos
[49]
O termo de emulso aplicado a uma mistura de pelo menos trs componentes: uma fase de
leo, uma fase aquosa e uma superfcie de espcies ativas, designadas surfactantes. Por vezes,
um quarto componente tambm est presente, designado co-surfactante
[50]
As diferenas entre microemulses e emulses so mais do que simples semntica, apesar de

recentemente se utilizarem estes termos alternadamente. Na tabela seguinte encontram-se as
principais diferenas entre uma microemulso e uma emulso.
____________________________________________________________________________
13
Tabela 2.1 Comparao entre microemulses e emulses (adaptado de
[49]
).
Microemulso
Emulso
10 300 nm
1 10 m
Aparncia
Transparente e translcida
Turva e leitosa
Estabilidade
Termodinamicamente estvel
Termodinamicamente instvel
Tenso interfacial
Muito baixa
Alta
Quantidade de surfactante
Alta
Baixa
Tamanho das gotculas

dispersas
A tenso interfacial de uma microemulso muito baixa quando comparada com a tenso
interfacial de uma emulso. Isso pode levar a formao espontnea das microemulses e,
consequentemente, a um pequeno tamanho das gotculas (tamanho nano-escala). As emulses
so disperses opticamente turvas e leitosas e, normalmente, s podem ser obtidas por agitao
mecnica devido a sua instabilidade termodinmica. Tambm devido ao pequeno tamanho das
gotculas, ao contrrio das emulses, as microemulses so termodinamicamente estveis. O
tamanho da gotcula de microemulso muito reduzido, tipicamente entre 10-300 nm,
aproximadamente 100 vezes menor do que o tamanho mdio das gotculas de emulses, que
em torno de 1-10 m. Por essa razo, as microemulses so relativamente translcidas, ou seja,
opticamente lmpidas, o que se justifica pelo fato de o dimetro mdio das gotculas ser menor do
que do comprimento de onda da luz incidente. Com isso, as mesmas no espalham luz e o
sistema fica transparente
[49]
Para a formao de uma microemulso, necessrio que ocorra a mistura de dois lquidos
imiscveis. Inicialmente, quando estes dois lquidos so agitados mecanicamente, um deles
disperso no interior do outro. Se um surfactante for adicionado ao sistema, o mesmo tende a
estabilizar-se, formando um sistema homogneo com a formao de uma fase interna, dispersa ou
descontnua. Sem a adio do surfactante, o sistema tende a separar as fases e possvel
visualizar novamente os dois lquidos separados
[49]
O mtodo da microemulso pode ser dividido em duas categorias, baseado na utilizao de uma
fase contnua orgnica ou aquosa. No mtodo de fase contnua orgnica, as molculas
hidrossolveis esto localizadas no interior de reduzidas gotculas esfricas de gua e envolvidas
por molculas de surfactante num meio contnuo de leo. A fase aquosa a interna, dispersa ou
descontnua, ao passo que o leo compe a fase externa, dispersante ou contnua. Nesses casos,
o sistema conhecido como A/O
[49]
. Apesar de este mtodo ter sido um dos primeiros a ser
utilizado para a produo de NPs, tem tido pouca importncia, pois requer a utilizao de
solventes orgnicos txicos e surfactantes, os quais so subsequentemente eliminados das NPs
[51, 52, 53]
. Inversamente, quando molculas lipossolveis esto localizadas no interior de reduzidas
____________________________________________________________________________
14
gotculas esfricas de leo e envolvidas por molculas de surfactante num meio contnuo de gua,
esse sistema conhecido como O/A
[49]
. Este tipo de formulao especialmente vantajoso para a
administrao de frmacos lipossolveis (por exemplo, vitaminas, hormonas, etc.) por via
intravenosa.
Figura 2.1 Tipos de microemulses esquematizadas pela fase oleosa (cinza), fase aquosa
(branca) e filme interfacial de surfactante; a) Microemulso O/A; b) Microemulso A/O (retirado de
[49]
).
As microemulses gua-em-leo (designadas por A/O, que significa gua em leo) so

transparentes, isotrpicas
e termodinamicamente estveis
em
meios
lquidos
[7]
. Nas
microemulses A/O, a fase aquosa dispersa como microgotculas (tipicamente de 1-50 nm)
rodeadas por uma monocamada de surfactantes, numa fase contnua de hidrocarbonetos
[2]
Quando um sal de metal solvel incorporado na fase aquosa da microemulso, este permanece
nas microgotculas aquosas, rodeado por leo. Estas microgotculas vo colidir continuamente,
unir-se e voltar a quebrar
[54]
. Conceptualmente, quando os reagentes A e B so dissolvidos em
duas microemulses A/O idnticas, vo formar um precipitado AB, numa mistura. O precipitado
final produzido pode ser extrado dos surfactantes
[2]
. As microemulses A/O tm sido
apresentadas como sendo um mtodo adequado, verstil e simples de preparar nanopartculas e

estas so as caractersticas que podem tornar este mtodo til tanto para aplicaes in vivo como
in vitro
[7]
Recentemente, recorreu-se microemulso A/O para sintetizar mNPs, com tamanho inferior a 15
nm
[8]
, com propriedades fsicas e qumicas uniformes
tamanho inferior a 15 nm
[55]
variavam de 4 a 12 nm
. Prez e equipa produziram NPs com
, Gupta e seus colaboradores sintetizaram NPs com tamanhos mdios
entre 10 e 15 nm de dimetro
[57]
[2]
[56]
e Pileni e equipa produziram NPs com tamanhos mdios que
Com o mtodo da microemulso, podem produzir-se SPIONs homogneas
[8]
, como se ilustra na
figura seguinte:
____________________________________________________________________________
15
.
Figura 2.2- Esquema ilustrativo da coprecipitao de nanopartculas de Fe3O4 via microemulso
[8]
A/O (adaptado de ).
Porm, por vezes, podem surgir camadas no desejveis nas microemulses, camadas no
magnticas. Prez e colegas atriburam a existncia destas camadas a dois fatores: i) dentro das
microgotas da soluo de gua, na microemulso, existe uma distribuio no homognea do pH
e da constante dieltrica (aspeto que pode ter grande influncia sobre a formao das partculas
que conduzem a fases amorfas); ii) a elevada razo superfcie/volume das NPs obtidas, devido ao
seu pequeno tamanho, favorece a presena de quantidades importantes de fases com grau de
cristalinidade baixo nas suas superfcies
[55]
. J Lee e colaboradores justificaram a presena
destas camadas devido inclinao dos spins de superfcie, uma camada anisotrpica espessa,
ou perda da ordem de longo alcance na camada superficial
[58]
As molculas de surfactante presentes na microemulso proporcionam um efeito de confinamento

que limita a nucleao da partcula, o seu crescimento e a sua aglomerao
geralmente utilizam-se surfactantes de baixo peso molecular
[50]
[59]
. Nesta tcnica,
. O primeiro e tambm o mais
utilizado sistema de surfactantes usado na sntese de NPs magnticas foi o Aerossol OT ou AOT
(dioctilsulfocinato de sdio). Outros sistemas, como CTAB (brometo de cetiltrimetilamonio), SDS
(dodecilsulfato de sdio) e polietoxilatos (Igepal, Brij, Tween, C12E5) tambm tm sido utilizados.
Alm destes, ainda outros esto a ser desenvolvidos no sentido de otimizar os parmetros
morfolgicos e qumicos. Muitas das reaes levadas a cabo em micelas so bastante
semelhantes s que ocorrem nas reaes aquosas, porm com um maior controlo no que respeita
agregao das partculas, devido ao sistema de surfactantes
[35]
Uma vez que as molculas de surfactantes possuem duas partes com capacidades de
solubilizao opostas, vo apresentar caractersticas nicas como por exemplo a tendncia para
ser adsorvidas nas superfcies e interfaces, resultando numa diminuio da tenso superficial e na
____________________________________________________________________________
16
formao de agregados dentro das solues (formao de microemulses). Tais agregados

podem solubilizar o leo numa fase aquosa (micelas) ou a gua numa fase de leo (micelas
reversas)
[50]
As micelas podem formar-se na presena ou ausncia de gua. No caso das micelas reversas
compostas por hidrocarbonetos, a gua pode ser solubilizada
[35]
. Neste caso, a coprecipitao
ocorre em pequenas gotculas de gua (chamadas water pools ou piscinas de gua)
[59]
rodeadas por surfactante, distribudas de forma homognea numa fase de leo. Estas water pools
atuam como micro-reatores na formao de nanopartculas e so termodinamicamente definidas
pela razo molar gua-surfactante
[50]
. Segundo estudos levados a cabo por Liang e seus
investigadores, o tamanho do ncleo de gua dependente da razo gua/surfactante, R. Caso R

se mantenha constante, o tamanho do ncleo de gua mantm-se inaltervel; se R aumentar,
verifica-se um aumento do tamanho desse ncleo de gua. Para R=3, as partculas apresentam
tamanho mdio de 10 nm, com bastante aglomerao; para R=5, as NPs tm tamanho mdio de
20 nm e apresentam aglomerao local; para R=6, as NPs tm tamanho mdio de 22 nm e os
ncleos de gua esto dispersos uniformemente; para R=7, as NPs formadas agregam-se
esfericamente e h interaes entre os ncleos de gua vizinhos (aumentam muito de tamanho,
diminuindo, desta forma, o espao livre entre os ncleos de gua, aumentando, portanto, este tipo
de interaes)
[60]
. As primeiras NPs magnticas formadas a partir da microemulso inversa foram
obtidas a partir da oxidao de sais de Fe
2+ [1]
, para formar Fe3O4 e -Fe2O3. Esta reao foi
levada a cabo por um sistema AOT-isooctano e formou NPs esfricas com pequena disperso de
dimenso
[35]
. Lee e colegas demonstraram que o tamanho das partculas de Fe3O4 era controlado
pela variao da temperatura e esses estudos foram confirmados por outros investigadores
[61]
Segundo um estudo realizado por Liang, em 2010, a fim de verificar a influncia da temperatura
nas NPs formadas, a 30C as partculas apresentavam-se bem dispersas e com tamanho
uniforme, entre 10-20 nm. A 60C, as partculas denotavam alguma aglomerao e, a 80C as
partculas encontravam-se bastante aglomeradas. Os autores explicam a agregao como sendo
devida sobre-elevada temperatura, o que leva as nanopartculas de Fe3O4 a aumentar de
tamanho, conduzindo a uma aglomerao das mesmas
[60]
. Lee e equipa investigaram tambm o
papel da concentrao dos surfactantes na morfologia das NPs obtidas. Verificaram que, variando
a razo entre o solvente polar utilizado e o surfactante em estudo, o tamanho final das NPs
tambm varia. Neste caso particular, medida que esta razo aumentava, o tamanho das NPs
produzidas aumentava tambm. Para razes de 3.6, 5.8, 6.5 e 8.1 obtiveram nanopartculas de 3
nm, 5 nm, 7 nm e 9 nm, respetivamente
[61]
. Segundo um estudo levado a cabo por Mori e seus
investigadores, o tamanho da partcula tambm influenciado pelo tipo de solvente utilizado.

Segundo este investigador, as partculas produzidas em ciclohexano apresentavam-se mais
pequenas do que as produzidas num sistema de octano, concluindo, assim, que a alterao no
crescimento depende do comprimento da cadeia das molculas do solvente. Com o aumento do
comprimento da cadeia, as molculas alcanas tornam-se cada vez mais enroladas, e a sua
____________________________________________________________________________
17
penetrao na camada de surfactante torna-se mais difcil. Desta forma, a interao entre o
surfactante e a molcula de solvente diminui com o aumento do comprimento da cadeia das
molculas alcanas
[62]
Atualmente, estudos sugerem que mNPs sintetizadas pelas micelas inversas podem ser utilizadas
em aplicaes de imagem de ressonncia magntica
[1]
Comparando com o mtodo simples da co-precipitao aquosa, o mtodo da microemulso

apresenta algumas vantagens, devido ao tamanho reduzido das microemulses (alguns
nanmetros), atuando como um nanoreactor, confinando nucleao das nanopartculas e
crescimento. Este mtodo produz partculas de xido de ferro monodispersas, com um melhor
controlo na distribuio do seu tamanho
[8]
, mais pequenas e mais uniformes
[55]
. Tang e seus
colaboradores demonstraram que as partculas mais pequenas e mais uniformes eram preparadas
pela precipitao da magnetite a baixas temperaturas, na presena de azoto gasoso (figura
seguinte)
[63]
Figura 2.3- Estratgia de preparao de SPIONs monodispersas dentro de gotas de microemulso

A/O. Os sais de ferro so dissolvidos dentro dos ncleos aquosos das micelas e precipitam atravs
[2]
da soluo alcalina, para obter partculas com o tamanho desejado (adaptado de ).
Porm, a microemulso tambm apresenta algumas desvantagens. A sua desvantagem principal

a toxicidade dos solventes orgnicos, sendo prejudicial para as aplicaes biomdicas. Para
alm disso, muito difcil dimensionar-se, devido enorme quantidade de leo requerida (fase
orgnica) e dificuldade em remover os surfactantes que aderem s partculas
magnticas sintetizadas pela microemulso apresentam uma baixa cristalinidade
[64]
[8]
, e as NPs
____________________________________________________________________________
18
2.3. Sntese hidrotermal

O termo hidrotermal puramente de origem geolgica e geralmente refere-se a qualquer reao
heterognea na presena de solventes aquosos, sob alta presso e sob condies de temperatura
que dissolvem e recristalizam materiais que, em condies normais, so relativamente insolveis.
O gelogo britnico Roderick Murchison (1792-1871) usou este termo para descrever a ao da
gua, a elevada temperatura e presso, que fez alteraes na crosta terrestre e conduziu
formao de vrios minerais. A versatilidade do processo hidrotrmico, devido principalmente ao
papel da mineralizao da gua, bastante evidente na forma como origina diversos minerais com
variedade estrutural considervel
[65]
Nos ltimos anos, o mtodo hidrotermal tem sido desenvolvido para sintetizar nanopartculas por
se tratar de um mtodo simples de fabricar nanocristais a partir de solues aquosas a elevadas
temperaturas
[66]
(mais de 100C)
[67]
e elevadas presses
[66]
(mais de algumas atmosferas)
[67]
Estudos anteriores sugerem que, se se trabalhar com temperaturas superiores a 160C, possvel
obter partculas com um tamanho mais elevado. A temperaturas inferiores, como 80C ou 120C,
h tendncia a obter partculas com um tamanho menor
[67]
. Alm disso, a durao do processo de
aquecimento tambm desempenha um papel importante na produo de nanopartculas de Fe3O4.

Mao e equipa sintetizaram NPs de Fe3O4 a 180C durante 24h e os seus resultados indicam que
as nanopartculas produzidas apresentavam uma forma de cristal, bem definida, e eram maiores,
devido recristalizao
[68]
. Por outro lado, Haw e colegas sintetizaram NPs de Fe3O4 a 200C
durante 1h e os seus resultados indicam a obteno de NPs de Fe3O4 esfricas e com um

dimetro mdio de 17,22 5 nm
[67]
. A durao do processo de aquecimento atua tambm ao nvel
da cristalinidade das nanopartculas. Mizutani e equipa demonstraram que, aumentando o perodo

de aquecimento, a cristalinidade das nanopartculas, bem como o seu tamanho, aumentam
tambm
[64]
Um dos parmetros mais importantes na sntese hidrotermal a razo molar entre os sais de
ferro. Mizutani e equipa comprovaram que, quando esta razo de 0,5, as NPs produzidas
apresentam tamanho inferior e uma baixa cristalinidade. Por outro lado, quando a razo molar
superior a 1, o tamanho das NPs, assim como a sua cristalinidade, aumentam
[64]
Outro aspeto importante do mtodo hidrotermal a obteno dos reagentes que, de outro modo,
so difceis de dissolver numa soluo sob ao de solventes ou mineralizantes. Isto semelhante
s reaes qumicas de transporte, o que levou definio de reaes hidrotrmicas como um
caso particular das reaes qumicas de transporte
[65]
A sntese hidrotermal envolve a gua quer como um catalisador quer, ocasionalmente, como um
componente de fases slidas na sntese
[66]
. Muitas das propriedades fsicas da gua, tais como
fugacidade, constante dieltrica, densidade, etc., sofrem alteraes considerveis ao longo do
____________________________________________________________________________
19
processo hidrotermal devido s elevadas temperaturas
[65]
. A gua funciona como um reagente
nestas condies supercrticas, acelerando a cintica da hidrlise da gua.

Este mtodo utiliza autoclaves ou reatores de alta presso, onde a presso pode ser mais de 2000
psi e a temperatura superior a 200C
[35]
. A autoclave um cilindro de ao de paredes espessas
selado hermeticamente com o intuito de resistir a elevadas temperaturas e presses, por perodos
prolongados de tempo.
A vantagem do mtodo hidrotermal, quando comparado com os restantes, inclui a capacidade
para criar fases cristalinas que no so estveis no ponto de fuso e criar materiais que tm uma
alta presso de vapor perto dos seus pontos de fuso. Alm disso, com esta tcnica consegue-se
controlar o tamanho, a forma, a composio qumica e a estequiometria das partculas
[66]
. O
domnio do tamanho e da morfologia das partculas, neste mtodo, deve-se a um controlo do

tempo e da temperatura
[35]
. Outras vantagens passam pelo facto de, com este mtodo, reagentes
orgnicos so dispensados, elevado rendimento de produtos, relatividade custo-benefcio,

excelente cristalinidade das partculas com tamanho controlvel e boa morfologia das mesmas.
Alm disso, no necessita de nenhum tratamento ps-aquecimento
2.4.
[67]
Decomposio trmica
O mtodo da decomposio trmica um mtodo bastante promissor para sintetizar mNPs

monodispersas e de elevada qualidade
[69]
.o que altamente desejvel para o controlo das
propriedades fsico-qumicas das nanopartculas
[8]
. Este mtodo utiliza vrios tipos de ies
precursores, como Fe(acac)3 (acetilacetonato de ferro III), Fe(Co)5 (pentacarbonil de ferro) e

complexos de Fe(oleato)3, sob elevadas temperaturas
[8]
. Para obter um controlo preciso do
tamanho das NPs de Fe3O4 formadas necessrio utilizar grandes quantidades de precursores
txicos e de surfactantes no solvente orgnico, portanto, antes de serem utilizadas em aplicaes
biomdicas, as NPs necessitam de um tratamento de purificao
[70]
Tipicamente, o mtodo da decomposio trmica envolve a decomposio de Fe(acac)3 num

solvente com elevado ponto de ebulio, na presena de surfactantes como cido oleico e
oleilamina
[69]
. importante que a superfcie das NPs seja funcionalizvel, para facilitar a
conjugao com o frmaco e encapsul-lo com o polmero, de modo a formar um sistema de

transporte do frmaco com a circulao, no sistema fisiolgico. A ligao da oleilamina
superfcie, que adicionada durante a sntese qumica das NPs, torna-as hidrofbicas
[71]
. Lee e
equipa sintetizaram NPs de magnetite hidrofbicas com uma camada de cido oleico e oleilamina,
obtendo nanopartculas com aproximadamente 11.71.5 nm de dimetro, esfricas e uniformes
[72]
. Contudo, a superfcie hidrofbica das partculas obtidas limita as aplicaes biomdicas, que
requerem disperso em gua e biocompatibilidade. A modificao da superfcie de tais partculas

hidrofbicas continua um desafio
[8]
. Zhen e equipa produziram SPIONs dispersveis em gua, a
____________________________________________________________________________
20
elevada temperatura, usando 2-pirridona como agente de revestimento e como meio
[73]
. Woo e
colaboradores modificaram a superfcie das SPIONs (de 11 nm) de hidrofbica para hidroflica
atravs da ligao covalente Fe-S com o bifuncional MPA (cido 3-mercatoprnico), e,
posteriormente, o grupo terminal cido carboxlico foi esterificado de modo a melhorar a
biocompatibilidade
[74]
O controlo do tamanho e forma das SPIONs produzidas pelo mtodo da decomposio trmica
dependem de parmetros como concentrao de sais de ferro, a durao de toda a reao e o
surfactante escolhido, todos testados por Chin e colegas, em 2011. Esta equipa de investigadores
sintetizou NPs de magnetite utilizando Fe(acac)3 como precursor. Verificaram que, medida que a
concentrao deste precursor aumentava, o tamanho das nanopartculas de magnetite aumentava
tambm, sendo estas partculas de forma irregular e no-esfricas. Os mesmos investigadores
sintetizaram NPs de magnetite com PEO e verificaram que aumentando o volume deste
surfactante, as partculas obtidas apresentava, tamanho sucessivamente menor. O PEO atuou
como surfactante e preveniu a aglomerao dos NPs de magnetite, e obtiveram partculas menos
esfricas. Segundo estes investigadores, este facto pode dever-se fraca interao do Fe(acac)3
com as cadeias do PEO, uma vez que o PEO no possui nenhum grupo cido carboxlico (COOH) para se ligar covalentemente ao Fe(acac)3. Estes investigadores testaram tambm a
influncia do cido oleico e verificaram que, com este surfactante, as nanopartculas eram mais
esfricas. Isto deve-se presena de um grupo de cido carboxlico (-COOH) no cido oleico,
que vai permitir que se ligue covalentemente aos tomos do ferro. Porm, o tamanho das NPs,
com a variao de concentrao do cido oleico, permaneceu igual, o que levou Chin e colegas a
concluir que a concentrao deste surfactante no tem efeito no tamanho mdio das NPs
formadas. Em relao durao da reao, estes investigadores concluram que, quanto maior o
tempo de reao maiores e mais aglomeradas as partculas so. Para tempos de reao de 1h e
2h obtiveram NPs de 4 nm e 6 nm, respetivamente
[70]
2.5. Caracterizao das mNPs

As propriedades magnticas das mNPs dependem do seu tamanho, da sua forma, e da sua
microestrutura. H vrias tcnicas que so usadas para determinar o tamanho, a composio
qumica e as propriedades da superfcie magntica das NPs, tanto em suspenso como em
estado seco. No entanto, o tamanho em suspenso que importante para as suas aplicaes,
uma vez que o tamanho em estado seco no inclui a camada de solvatao em torno das mNPs.
Alm disso, o processo de secagem pode ter um efeito na agregao das partculas
[3]
Entre as tcnicas usadas para determinar o tamanho das partculas, existe o SEM (Microscopia
Eletrnica de Varrimento), TEM (Microscopia Eletrnica de Transmisso), DLS (Disperso
____________________________________________________________________________
21
Dinmica de Luz), que determinam o tamanho das NPs, e o DRX (Difrao de Raios-X), que
[3]
permite determinar as fases presentes e o tamanho da cristalite no seu estado seco .

O SEM fornece informao acerca da estrutura da superfcie das partculas, assim como da sua
forma e tamanho. O TEM a tcnica mais poderosa para determinar o tamanho e a morfologia
das partculas
[3]
, do ncleo e das monocamadas
[1]
, reportando o tamanho total da NP e
fornecendo detalhes acerca da sua distribuio de tamanho e forma
[32]
. Em ambas as tcnicas de
microscopia eletrnica referidas, h a possibilidade de obter uma informao qumica das

nanopartculas observadas, atravs da tcnica de EDS (Espectroscopia por Disperso em
Energia).
A tcnica de DLS fornece informao acerca do tamanho mdio das partculas, baseado no
volume e intensidade de distribuio
[3]
. uma tcnica til, pois permite obter informao acerca

[1]
do tamanho e distribuio do tamanho em menos tempo e com menor custo
, quando
comparada com as tcnicas anteriores, fazendo-o com as partculas em suspenso.

A difrao de raios-X permite obter informao acerca da estrutura cristalina das partculas e
determinar o tamanho das partculas. O tamanho do cristal calculado a partir da frmula de
Scherrer
[3, 32]
(Equao 3)
Onde K a constante de forma, o comprimento de onda da radiao (em nm), a largura a

meia altura do pico (em radianos) e o ngulo de difrao (em radianos).
Na tabela seguinte apresentado um resumo da aplicabilidade relativa das vrias tcnicas de

caracterizao.
Tabela 2.2 Resumo das principais tcnicas de caracterizao das NPs com indicao da
informao fornecida. x indica que a tcnica fornece informaes incertas ou incompletas para
uma vasta gama de materiais; xx indica que a tcnica fornece informao intermdia; xxx indica
que a tcnica amplamente (mas no universal) aplicvel e muitas vezes d informaes bastante
[35]
).
fiveis (adaptado de
SEM/TEM
DLS
DRX
Tamanho
xxx
xx
xx
Morfologia
xxx
...
...
Identificao de fase
xx
xx
Ocupao local
...
Composio qumica
xxx
____________________________________________________________________________
22
A tcnica de FTIR (Espectroscopia de Infravermelho com Transformada de Fourier) uma tcnica

simples e rpida que permite obter informaes acerca do tipo de ligaes qumicas existentes
num composto. O espectro de infravermelho mostra a frequncia de vibrao dos grupos
funcionais que esto presentes na amostra em anlise
[75]
A espectroscopia UV-VIS, de onde se retira muita informao acerca do tamanho e forma das NPs
[76]
, uma tcnica til para caracterizar a absoro e transmisso de uma variedade de materiais e
solues e a faixa espectral situa-se, aproximadamente, entre 190 a 900 nm. Com esta tcnica
possvel determinar se h formao de partculas e se estas formam agregados ou no. Alm
disso, a interao da luz com comprimento de onda da ordem da dimenso da partcula d origem
a ressonncia de plasmon, absoro ou disperso da luz, podendo observar-se esse efeito
atravs de transmitncia ou absorvncia. Estes so influenciados pelo tamanho, forma, interaes
interpartculas, densidade de eletro livre e meio circundante, o que indica que uma ferramenta
eficiente para obter informao da geometria das NPs, e monitorar a sua agregao
[77]
____________________________________________________________________________
23
____________________________________________________________________________
24
3. Revestimento das mNPs

As mNPs tendem a agregar e perdem as suas propriedades superparamagnticas intrnsecas em
soluo biolgica
[8]
. Por si s, as mNPs no so muito estveis nem solveis em gua. A
solubilizao das mNPs essencial para prevenir a sua agregao e oxidao
[1]
Na ausncia de qualquer revestimento, as mNPs apresentam superfcies hidrofbicas com uma

grande rea superficial em relao ao volume. Devido s interaes hidrofbicas entre as
partculas, estas vo unir-se e formar grandes aglomerados, resultando no aumento do tamanho
da partcula. Estes aglomerados exibem forte atrao magntica dipolo-dipolo entre eles. Quando
dois grandes aglomerados se aproximam, cada um deles entra no campo magntico do vizinho.
Alm das foras de atrao entre as partculas, cada partcula est no campo magntico vizinho e
torna-se mais magnetizada. A adeso de partculas magnticas remanescentes provoca
magnetizao mtua, resultando num aumento da agregao.
Uma vez que as partculas so atradas magneticamente, para alm da floculao usual devido s
foras de van der Waals, a modificao da superfcie das partculas muitas vezes indispensvel.
Para a efetiva estabilizao das NPs de xido de ferro, aconselhvel revestir as mesmas
[2]
. As
molculas ideais para a estabilizao das mNPs devem ser biocompatveis e biodegradveis.
Contudo, as molculas mais comumente utilizadas so os surfactantes, tais como cido oleico
[3]
citrato de sdio e triton X-100, entre outros.

Os surfactantes so molculas com pelo menos duas regies, uma parte solvel em solventes
polares (parte hidroflica) e outra insolvel em solventes polares (parte hidrofbica). A parte polar
designa-se por cabea e a parte no polar designa-se por cauda da molcula de surfactante.
Dependendo da natureza destas molculas, os surfactantes podem ser categorizados em noinicos, aninicos, catinicos e anfotricos (Zwiterinicos)
[50]
As molculas de surfactante podem evitar a nucleao das partculas, o seu crescimento e a sua
aglomerao
[59]
. Tm natureza anfiflica e desempenham um papel importante na interface das

[3]
mNPs e do solvente .
Para serem utilizadas com segurana e nas aplicaes biomdicas, as mNPs devem ser
revestidas por materiais que satisfaam os seguintes requisitos: prevenir a opsonizao das
mNPs, que conduz a uma mais rpida remoo das partculas do sangue pelo RES; evitar a
aglomerao das mNPs no meio biolgico; atingir a carga de superfcie das mNPs desejada;
assegurar a biocompatibilidade das mNPs
[32]
O revestimento das mNPs protege o ncleo de ferro e tambm proporciona um caminho para a
conjugao de precursores moleculares, o que confere uma componente funcional biocompatvel
para as partculas. As NPs de magnetite podem ser revestidas com uma camada de superfcie,
geralmente material orgnico, o que proporciona uma interface entre o ncleo e o ambiente
____________________________________________________________________________
25
circundante. Esta camada superficial pode ainda ser usada para dirigir as NPs a um local-alvo. A
monocamada pode servir dois propsitos. Em primeiro lugar, para agir como uma barreira entre o
ncleo de NPs e o ambiente, para proteger e estabilizar o ncleo. Alguns materiais utilizados
para o
ncleo
tais
como xidos
de
ferro, por
si
s, no
so
estveis,
so
prontamente oxidados, alterando as propriedades valiosas das nanopartculas. Em segundo lugar,

a natureza qumica das monocamadas dita a reatividade, solubilidade e interaes interfaciais e
pode tambm determinar o manuseamento biolgico das NPs. A maior parte dos ncleos
inorgnicos no so solveis em ambientes aquosos, e a monocamada serve para superar este
problema, particularmente para aplicaes in vivo. O ncleo inorgnico, quando utilizado sozinho,
no tem um alvo especfico. No entanto, se a monocamada uma molcula precursora ou se est
[1]
conjugada a uma molcula especfica, pode dirigir a partcula a uma rea de interesse .
H diversas formas das mNPs alcanarem a solubilidade e estabilidade em gua. Alguns desses
mtodos incluem o revestimento com carboxilatos (como cido ctrico, citrato de sdio e cido
oleico), com polmeros sintticos (como PEG, PVA, PEO e triton X-100) e com polissacardeos
naturais (como dextrano e quitosano). O revestimento algo essencial para o uso in vivo das
mNPs pois aumenta a biocompatibilidade
[8]
Este trabalho experimental focou-se na utilizao de 4 surfactantes: cido oleico, citrato de sdio,
triton X-100 e quitosano.
3.1. cido oleico

O cido oleico usado para prevenir a aglomerao das NPs e ajuda a manter a sua forma
esfrica original
[78]
. frequentemente utilizado como surfactante para modificar a superfcie das
mNPs, uma vez que possui maior afinidade com a superfcie da magnetite quando comparado
com outros surfactantes
[79]
O cido oleico um cido gordo que ocorre naturalmente em vrias gorduras animais e vegetais e
em leos. um leo inodoro e incolor, apesar de apresentar uma colorao amarelada em
algumas amostras comerciais. Trata-se de um cido carboxlico, pois possui um grupo funcional
COOH. um cido gordo de cadeia longa, possuindo 18 carbonos na sua estrutura. Por
apresentar uma dupla ligao entre os carbonos, muitas vezes chamado de cido gordo
insaturado.
____________________________________________________________________________
26
Figura 3.1 Estrutura do cido oleico (obtida de
[80]
).
O cido oleico um cido gordo essencial (mega 9), o qual participa no nosso metabolismo,
desempenhando um papel fundamental na sntese das hormonas
[79]
3.2. Citrato de sdio

O citrato de sdio um surfactante bastante utilizado na sntese de NPs de prata, devido sua
fcil solubilidade em vrios solventes
repulso de carga
[81]
[77]
, e uma vez que estabiliza estas partculas atravs da
, na sntese de NPs de ouro, atravs de uma reao de reduo do cido
ctrico e na sntese de partculas de alumina
[82]
O citrato de sdio um sal do cido ctrico, que possui um sabor salino.
Figura 3.2 Estrutura do citrato de sdio (obtida de
[83]
).
3.3. Triton X-100

O triton X-100 um surfactante no inico que possui uma cadeia PEO hidroflica e um grupo
aromtico hidrofbico.
____________________________________________________________________________
27
Figura 3.3 Estrutura do triton X-100 (obtida de
[84]
).
Trata-se de um surfactante compatvel com outros surfactantes no-inicos, aninicos e

catinicos, sendo amplamente utilizado na produo de detergentes, emulsionantes, agentes
solubilizantes e dispersantes
[85]
3.4. Quitosano
O quitosano particularmente interessante para a sntese de NPs devido sua interao com os
ies metlicos e com as NP de xidos de metais. O quitosano um bom dispersante para uma
variedade de nanopartculas, incluindo as mNPs
[86]
. Tem sido considerado um bom biomaterial
para aplicaes biomdicas, devido s suas importantes propriedades biolgicas e qumicas
[84]
.O
quitosano tem propriedades antibacterianas, antifngicas, no txico, biocompatvel e

biodegradvel
[87]
. O revestimento das NPs de magnetite por quitosano dever aumentar a
compatibilidade entre a nanopartcula e o meio aquoso, prevenir a oxidao das partculas, reduzir
a toxicidade e agregao e facilitar o transporte
[88]
O quitosano um mucopolissacardeo natural de origem marinha, com caractersticas estruturais

semelhantes aos glucosaminoglicanos presentes no exosqueleto dos crustceos, artrpodes e
fungos. Trata-se de um polmero de N-acetil-glucosamina parcialmente desacetilado, obtido
atravs da desacetilao alcalina da quitina, o segundo biopolmero mais abundante a seguir
celulose
[30]
. Desta forma, o quitosano um nome coletivo que representa uma famlia de quitinas
N-acetiladas, com diferentes graus de desacetilao. No geral, quando o nmero de unidades de

N-acetil-glucosamina superior a 50%, o biopolmero denominado quitina. Por outro lado,
quando o nmero de unidades de N-glucosamina mais elevada, utilizado o termo quitosano
[89]
(figura 3.4).
O termo quitosano refere-se a um grupo de polmeros com diferentes graus de desacetilao,
definidos em termos de percentagem de grupos amina no polmero base e com diferentes pesos
moleculares.
O quitosano carregado positivamente, aderindo, assim, a superfcies carregadas negativamente.
Alm disso, solvel em diversos cidos e interage com poli-anies para formar complexos
[30]
____________________________________________________________________________
28
Figura 3.4- Estrutura do quitosano (obtida

(
de
[90]
).
____________________________________________________________________________
29
____________________________________________________________________________
30
4. Procedimento experimental
Neste captulo descrevem-se, sumariamente, os materiais e procedimento utilizado, bem como as
tcnicas de caracterizao usadas. Ao longo deste trabalho foi utilizada a tcnica da precipitao
qumica para a sntese das mNPs de xido de ferro.
4.1. Sntese das nanopartculas de Fe3O4

A sntese de mNPs realizou-se segundo o procedimento que se descreve a seguir e utilizando os
materiais em baixo indicados. Variaram-se alguns parmetros inerentes sntese qumica como o
tempo de agitao, t, com o objetivo de verificar a sua influncia no tamanho final das partculas.
4.1.1. Materiais
.
Cloreto de ferro hexahidratado, FeCl3 6H2O (Merck), cloreto de ferro tetrahidratado, FeCl2 4H2O
(Sigma Aldrich), NH4OH aquosa 25% (Scharlau) e gua Millipore (Milli-Q).
4.1.2. Procedimento
As nanopartculas de magnetite foram produzidas adaptando o mtodo j descrito por
Gnanaprakash e sua equipa
[91]
. As nanopartculas foram obtidas atravs da precipitao de sais
de ferro em meio alcalino.

.
As solues de sais de ferro foram preparadas previamente, FeCl3 6H2O (5 mmol; 1M), FeCl2 4H2O
(2.5 mmol; 1M), em meio aquoso. Estas solues apresentavam uma razo molar de 1:2
2+
3+
(Fe :Fe ) e foram misturadas, sob constante agitao magntica (1200 rpm). mistura
adicionou-se a amnia aquosa 25%, 10 ml, permanecendo em agitao um certo perodo de
tempo, t (t= 22, 40, 120, 300, 900, 1800 ou 3600 segundos). O procedimento foi realizado em
atmosfera de azoto, a fim de evitar a oxidao das partculas. Aps o tempo de agitao, t,
adicionou-se gua Milli-Q soluo e, passados alguns minutos, eliminou-se a camada superficial.
A soluo foi a centrifugar 10 minutos (4000 rpm), a fim de separar as partculas formadas da
mistura aquosa. Por fim, procedeu-se s lavagens das NPs, trs vezes, com gua Milli-Q.
____________________________________________________________________________
31
4.2. Influncia de surfactantes

A introduo de surfactantes nas solues coloidais tem como principal objetivo manter as
partculas dispersas e em suspenso, a fim de ser possvel funcionaliz-las tendo em vista a
aplicao final no tratamento de cancro. Nesse sentido foram testados o cido oleico, o citrato
de sdio e o triton X-100 como surfactantes. Variou-se o tempo de agitao, t, com o intuito de
analisar a sua influncia no tamanho final das partculas em suspenso e concluir sobre qual o
melhor surfactante e respetiva concentrao que permita obter mais nanopartculas em suspenso
e durante mais tempo.
4.2.1. Materiais
.
Cloreto de ferro hexahidratado, FeCl3 6H2O (Merck), cloreto de ferro tetrahidratado, FeCl2 4H2O
(Sigma Aldrich), NH4OH aquosa 25% (Scharlau), cido oleico (Fisher Scientific), citrato de sdio
(Prolab), triton X-100 (Seagate technology inc.) e gua Millipore (Milli-Q).
4.2.2. Procedimento
s nanopartculas sintetizadas de acordo com o procedimento referido em 4.1.2, aps 5 minutos
de agitao magntica adicionou-se o surfactante (0,064M de cido oleico- soluo 1, ou 0,01M
de citrato de sdio- soluo 2, ou triton X-100-soluo 3) soluo anterior. Aps a adio do
surfactante, a soluo permaneceu em agitao mecnica durante 1 hora. O procedimento foi
igualmente realizado em atmosfera de azoto e foi realizada tambm a etapa de centrifugao e
secagem das nanopartculas.
4.3. Funcionalizao com quitosano

Considerando ainda o objetivo final para a aplicao das nanopartculas magnticas: tratamento
de cancro, tentou-se a funcionalizao direta das nanopartculas com quitosano. Para tal, utilizouse a tcnica da gelificao ionotrpica.
____________________________________________________________________________
32
4.3.1. Materiais
cido actico (Fisher Scientific), quitosano baixo peso molecular (Cognis), tripolifosfato de sdio
(Sigma Aldrich) e gua Millipore (Milli-Q).
4.3.2. Procedimento
Na tcnica da gelificao ionotrpica, descrita pela primeira vez por Calvo, em 1997
[92]
, o
mecanismo de formao das nanopartculas revestidas com quitosano baseia-se na interao

eletrosttica entre o grupo amina do quitosano e a carga negativa do poli-anio, como o
tripolifosfato (TPP)
[93]
. Essa interao pode ser controlada pela densidade de carga do
tripolifosfato e do quitosano, o que est dependente do pH da soluo. O TPP usado na

preparao das NPs revestidas de quitosano, uma vez que no txico e multivalente
[87]
. O
mtodo da gelificao ionotrpica oferece uma preparao simples das nanopartculas, num meio
aquoso. Inicialmente, dissolve-se o quitosano em cido actico, na presena ou ausncia do
agente estabilizante (este pode ser adicionado soluo de quitosano antes ou depois da adio
do poli-anio). O poli-anio, ou polmeros aninicos, so posteriormente adicionados e as NPs so
formadas espontaneamente, sob agitao mecnica e a temperatura ambiente. O tamanho e
carga da superfcie das partculas podem ser modificados, alterando a razo entre o quitosano e o
estabilizante
[93]
Neste trabalho, para a realizao da tcnica referida anteriormente, retirou-se 5 ml da soluo de

mNPs previamente preparada (mtodo anterior) e colocou-se numa seringa, juntamente com 15
ml da soluo de quitosano (1mg/ml em cido actico 2%). Num gobel, parte, preparou-se uma
soluo de tripolifosfato de sdio (4 mg/ml). Por fim, fez-se a montagem, como representado na
figura 4.1.
____________________________________________________________________________
33
Figura 4.1 Tcnica de montagem da gelificao ionotrpica.
4.4. Caracterizao das mNPs

4.4.1. Absoro UV-VIS
Aps a sntese das mNPs, a soluo foi ao sonicador durante 1 minuto. A estabilidade da soluo
foi seguida atravs de espectroscopia UV-VIS (PG Instruments modelo T90+). Os espectros foram
feitos aps 0, 15, 30 minutos, 1, 2, 6, 8 e 24 horas do tempo de sonicao.
Mediu-se a soluo coloidal diluda, uma vez que, devido sua elevada intensidade, no podia ser
medida no espectrofotmetro. Tinha-se uma diluio da soluo coloidal com gua Millipore, na
proporo de 1:100 (no caso das nanopartculas de magnetite, e com cido oleico e citrato de
sdio) e de 1:200 (no caso de utilizar triton X-100). Colocou-se a amostra a analisar numa cuvette
de quartzo, prpria para observao em espectroscopia UV-VIS. Fez-se passar o feixe de luz pela
cuvette com a amostra nos vrios tempos acima mencionados. A amostra a medir permaneceu
sempre na mesma cuvette durante todas as medies, de forma a obter resultados o mais prximo
possvel do comportamento real da soluo coloidal.
____________________________________________________________________________
34
4.4.2. Anlise da morfologia por SEM

A avaliao da morfologia e tamanho das nanopartculas de magnetite foi obtida por microscopia
eletrnica de varrimento de alta resoluo (SEM, modelo Zeiss DSM-962). Para se observar a
amostra no SEM, esta requereu uma preparao cuidadosa. Desta forma, uma pequena gota da
amostra foi colocada num suporte prprio, sobre fita de carbono, deixando evaporar todo o
solvente da amostra. Posteriormente, o porta-amostras foi inserido na cmara de observao do
equipamento, sob vcuo, seguindo-se a observao da amostra.
4.4.3. Dimetro hidrodinmico das mNPs (DLS)

O dimetro hidrodinmico das nanopartculas de magnetite foi medido recorrendo ao aparelho de
DLS AvidNano. Inicialmente, a amostra foi diluda (1:100) e filtrada com um filtro de seringa de 200
nm. Posteriormente colocou-se uma pequena gota da amostra na Bladecell e fez-se a medio.
4.4.4. Difrao de raios-X (DRX)

As mNPs foram analisadas recorrendo ao aparelho de difrao de raios-x (difractmetro XPert
PRO da PANAlytical). A amostra, depois de bem seca, foi montada num substrato de Si 0background, apesar de nenhum movimento ter sido aplicado, uma vez que a rea irradiada no
era uniforme. Foi utilizado um tamanho de passo de 0,033 (2) numa gama 2 entre 15 e 80, e
uma radiao proveniente de uma ampola de cobre.
4.4.5. Tcnica de FTIR

As nanopartculas de magnetite foram analisadas pela tcnica de FTIR, com o intuito de identificar
as espcies qumicas que estavam presentes nas partculas produzidas. Esta tcnica foi realizada
no espectrofotmetro FTIR Nicolet 6700 Thermo Electron Corporation. Inicialmente, prepararamse as pastilhas a observar no aparelho. Fez-se uma mistura das nanopartculas de magnetite
bem secas e KBr (2%) e, aps essa mistura estar homognea, colocou-se num molde SPECAC
de 3 mm de dimetro que foi a prensar durante 30 minutos. Fez-se o mesmo somente com KBr.
Para a visualizao do espectro no equipamento, inicialmente foi traada a linha de base (a
pastilha s de KBr), colocando no suporte a pastilha de KBr. Seguidamente colocou-se a
pastilha das nanopartculas no suporte que, absorvendo de forma seletiva algumas frequncias,
apresentou uma variao da transmitncia em funo do nmero de onda da radiao que incidiu
na amostra. Esta variao, registada na forma de grfico, correspondeu ao espectro de
infravermelho da amostra
[94]
____________________________________________________________________________
35
4.4.6. Anlise da morfologia por TEM

A avaliao da morfologia e tamanho das nanopartculas de magnetite foi obtida atravs da
microscopia eletrnica de transmisso (TEM, Hitachi H-8100 II, com emisso terminica, LaB6, e
resoluo ponto a ponto de 2,7 , do Instituto Superior Tcnico). Para se observaram as amostras
no TEM, estas requereram cuidado na sua preparao. Inicialmente fez-se uma diluio das
amostras a analisar (de 1:100, no caso da soluo de mNPs com citrato de sdio e revestidas com
quitosano, e de 1:200 no caso da soluo de mNPs com triton X-100). Depois, uma pequena gota
da suspenso foi colocada numa rede prpria (rede de carbono), at evaporar todo o solvente.
Posteriormente, o porta-amostras, com as duas amostras, foi inserido na cmara de observao
do equipamento, seguindo-se a observao das amostras.
____________________________________________________________________________
36
5. Resultados e discusso de resultados

Neste captulo so apresentados e discutidos os resultados experimentais obtidos ao longo deste
trabalho.
5.1. Sntese de nanopartculas de Fe3O4

As nanopartculas magnetite sintetizadas sem adio de surfactantes mostraram terem um grau
de agregao muito elevado. Decorrido pouco tempo da sntese, verificou-se total sedimentao
das nanopartculas, como se pode observar na figura 5.1.
Figura 5.1 NPs de magnetite aps a sua sntese (a)), aps 15 minutos da sua sntese (b)) e aps
secas (c)).
Esta concluso reforada pela evoluo dos espectros de absorvncia da soluo de mNPs ao
longo do tempo, apresentada na figura 5.2.
_________________________________________________________________________
37
0,35
0,3
Absorvncia [u. a.]
0,25
Imediato
15 min
30 min
1h
2h
6h
8h
24 h
0,2
0,15
0,1
0,05
0
200
300
400
500
600
700
800
900
Comprimento de onda [nm]
Figura 5.2 Espectro das NPs de Fe3O4 ao longo do tempo.
Como se pode verificar na figura 5.2, as nanopartculas de magnetite no apresentam um pico de

absorvncia caracterstico. A absorvncia da soluo coloidal de nanopartculas de magnetite foi
medida aps sonicao (imediatamente aps e passados 15, 30 minutos aps, 1, 2, 6, 8 e 24 h).
O grfico evidencia a diminuio da absorvncia ao longo do tempo. Esta provavelmente estar
relacionada com a sedimentao das nanopartculas no fundo da cuvette levando a que a
suspenso fique mais transparente. Conclui-se, assim, que as mNPs agregam, sedimentam e no
apresentam as caractersticas desejadas.
O tempo de agitao no influencia o tamanho das mNPs, neste caso, uma vez que as mNPs
sedimentam qualquer que seja o tempo durante o qual a soluo est a agitar.
O tamanho e distribuio do tamanho das mNPs obtidas foram avaliados por SEM e DLS.
_________________________________________________________________________
38
Figura 5.3 - Imagem de SEM das mNPs de Fe3O4 e a respetiva distribuio de dimetros obtida por
DLS.
A figura 5.3. representa uma imagem de SEM das partculas de Fe3O4. Estas apresentam forma
esfrica e alguma aglomerao. Na avaliao em DLS, so visveis 2 picos bem definidos, um
com um dimetro mdio de aproximadamente 12 nm e outro com aproximadamente 85 nm. O pico
menos intenso corresponde s partculas que se encontram isoladas das suas vizinhas
(assinaladas na imagem com a seta amarela). O pico mais intenso corresponde s partculas que
agregaram (assinaladas na imagem com a seta vermelha). Para a anlise DLS foi utilizado um
filtro de 200 nm, pelo que os agregados maiores, visveis na imagem SEM, no constam da
anlise DLS.
Para avaliar a estrutura cristalina das partculas e determinar o tamanho das mesmas, recorreu-se
tcnica DRX. Na figura seguinte pode observar-se o difratograma obtido.
Figura 5.4 Difratograma de DRX das nanopartculas de Fe3O4.
_________________________________________________________________________
39
A figura 5.4. representa o difratograma de DRX das nanopartculas de Fe3O4. Observam-se uma
srie de picos caractersticos da magnetite
[88, 91]
, nomeadamente para 2 = 30.2, 35.5, 43.1, 53.4,
57 e 62.6. Os picos mais estreitos representam a estrutura cristalina da amostra. Estes picos so
consistentes com a folha padro (cdigo de referncia: ICSD 98-001-2128), com uma estrutura em
espinela inversa.
O tamanho mdio da cristalite, ,obtido para o pico mais intenso correspondente ao plano (311),
calculado usando a frmula de Scherrer:
Onde K constante de forma (K= 0,94), o comprimento de onda do raio-X utilizado (=

0,15418 nm), a largura a meia altura do pico (=0,02334 rad) e o ngulo de difrao
(17,79). O tamanho de cristalite das mNPs obtido atravs desta frmula de aproximadamente
12,74 nm.
Devido sua elevada rea de superfcie, as NPs podem apresentar vrios defeitos superfcie.
Alm disso, a elevada tenso interfacial entre as partculas pode causar distores que provocam
uma ampliao da reflexo da difrao. Juntando isto ao facto de as nanopartculas poderem ser
cristalinas, amorfas ou quasi-cristalinas, pode dizer-se que os clculos do tamanho das partculas
a partir da tcnica DRX (atravs da frmula de Scherrer) no so muito precisos, justificando a
pequena diferena entre o tamanho de cristalite calculado pela frmula de Scherrer e o tamanho
de partcula calculado pelo DLS e TEM
[95]
. Isto significa que o ncleo da nanopartcula se
comporta como um nico dipolo magntico, apresentando, desta forma, um elevado momento
magntico. Desta forma, pode afirmar-se que as nanopartculas de magnetite sintetizadas por este
mtodo tm potencial para serem superparamagnticas. Contudo, para uma correta avaliao
acerca do comportamento magntico destas partculas, deveria ser feita a sua caracterizao
magntica.
Com a adio de um surfactante, por exemplo triton X-100, os picos caractersticos da magnetite
no sofrem alterao (figura 5.5), mantendo, desta forma, a estrutura cristalina das NPs de Fe3O4.
_________________________________________________________________________
40
Figura 5.5 Difratograma das nanopartculas de Fe3O4 com triton X-100.
O espectro de FTIR da imagem seguinte usado para caracterizar os tipos de ligaes presentes
-1
nas nanopartculas de Fe3O4. Observam-se os picos caractersticos a aproximadamente 580 cm ,

-1
-1
-1
1600 cm e 3400 cm . A banda a cerca de 580 cm corresponde vibrao da ligao FeO, o

que confirma a presena de um xido de ferro
[78, 88]
(pelos dados obtidos em DRX, sabe-se que
esse xido de ferro corresponde magnetite). Durante a preparao das nanopartculas de

magnetite pelo mtodo da precipitao qumica, as suas superfcies so revestidas por grupos
hidroxilo, em ambiente aquoso. Assim, as bandas caractersticas dos grupos hidroxilo (-OH),
-1
-1
aproximadamente 1600 cm e 3400 cm , aparecem no espectro FTIR
[79]
. Surge tambm um pico
-1
na banda a cerca de 1068 cm que corresponde vibrao da ligao OH da molcula da gua.
Figura 5.6 Espectro de FTIR das nanopartculas de Fe3O4.
_________________________________________________________________________
41
5.2. Influncia dos surfactantes

Como referido anteriormente os surfactantes estudados, por serem mais biocompatveis, foram o
cido oleico, o citrato de sdio e o triton X-100. O efeito destes na disperso das mNPs est
indicado a seguir.
5.2.1. cido oleico

O pH ideal da soluo das mNPs deve ser aproximadamente neutro. Para tal, procederam-se a
vrias lavagens das partculas com etanol, com o objetivo de remover o excesso de amnia.
Contudo, com as contnuas lavagens, verificou-se sedimentao das partculas, isto porque,
juntamente com o excesso de amnia, tambm o surfactante foi eliminado da soluo (removeuse, desta forma, o efeito do surfactante, evitar a aglomerao das partculas). Quando as mNPs
com cido oleico so lavadas utilizando muito etanol, pode ocorrer uma dessoro significante do
surfactante. Se houver dessoro demais, pode ocorrer agregao irreversvel, devido s foras
de atrao van der Waals entre as partculas
[96]
. Para ir de encontro a este problema, decidiu
fazer-se somente 3 lavagens das nanopartculas, corrigindo, posteriormente, o pH com a adio

de algumas gotas de HCl diludo.
Para avaliar o tamanho e a distribuio do tamanho das mNPs, observaram-se as mesmas no
SEM (microscpio eletrnico de varrimento).
Com a anlise das imagens, concluiu-se que o melhor tempo de agitao, t, era de 300 segundos
(5 minutos), pois formou partculas com dimenses menores. De seguida so apresentadas
imagens obtidas no SEM, relativas a este tempo de agitao.
Figura 5.7- Imagem das mNPs obtida no SEM, com cido oleico e 5 minutos de agitao.
_________________________________________________________________________
42
Na figura 5.7 a) visvel a agregao das partculas, porm, mesmo assim conseguem-se
observar partculas com tamanho bastante reduzido, figura 5.7 b). Neste caso, as partculas
obtidas apresentam tamanho que varia entre 19 e 44 nm, aproximadamente e uma superfcie
rugosa.
5.2.2. Citrato de sdio

Tal como para o cido oleico, no caso do citrato de sdio procedeu-se somente a 3 lavagens das
partculas evitando, desta forma, a eliminao no surfactante em questo. No final, corrigiu-se o
pH adicionando algumas gotas de HCl diludo.
As imagens da morfologia das mNPs obtida por SEM esto representadas na figura 5.8. Das
imagens de SEM, concluiu-se que o melhor tempo de agitao, t, era de 300 segundos (5
minutos), pois formou partculas com dimenses menores.
Figura 5.8 Imagem das mNPs obtida no SEM, com citrato de sdio e 5 minutos de agitao.
Na figura anterior observa-se bastante agregao das partculas (figura 5.8.a)) porm estas
apresentam tamanhos semelhantes ao observado para o caso do cido oleico, entre 19 e 44 nm,
aproximadamente, figura 5.8 b).
Tanto para o cido oleico como para o citrato de sdio, concluiu-se que o tempo de agitao que
d origem a mNPs mais pequenas era de 300 segundos (5 minutos), este tambm referenciado
na literatura
[91]
. Com os restantes tempos de agitao, obtiveram-se mNPs com dimenses
superiores.
Contudo, concluiu-se que, tal como evidente nas imagens anteriores, ambos os surfactantes nas
concentraes usadas no impediram a agregao das partculas. Assim, resolveu-se estudar a
_________________________________________________________________________
43
influncia da concentrao do surfactante na disperso das mNPs. Nesse estudo incluiu-se,

tambm, o triton X-100.
5.3. Influncia da concentrao dos surfactantes

Com o objetivo de avaliar o efeito da concentrao do surfactante, introduziram-se diferentes
concentraes de cido oleico, citrato de sdio ou triton X-100 nas solues aquosas de mNPs, e
analisou-se a variao provocada no espectro de absorvncia de forma a encontrar a melhor
concentrao de cada surfactante, aquela que mantm a soluo coloidal estvel por mais tempo.
Aps a sntese das mNPs com os surfactantes, recorreu-se ao TEM para avaliar o tamanho e
distribuio do tamanho das partculas. Os resultados encontram-se representados nas figuras
seguintes.
Figura 5.9 Imagem de TEM e respetiva distribuio de tamanho das mNPs com citrato de sdio
(0,00125M).
A figura 5.9. representa uma imagem de TEM das partculas de Fe3O4 sintetizadas com citrato de
sdio. A maior parte das nanopartculas encontra-se separada das suas vizinhas devido ao
surfactante existente superfcie das mesmas. As mNPs apresentam forma esfrica, com
dimetros mdios entre 6 e 16 nm (a distribuio de tamanho determinada medindo vrios
dimetros no software ImageJ). Apesar de exibirem boa disperso, as partculas apresentam
alguma aglomerao devido elevada rea de superfcie e s interaes magnticas dipolo-dipolo
entre partculas.
_________________________________________________________________________
44
Figura 5.10 - Imagem de TEM e respetiva distribuio de tamanho das mNPs com triton X-100
(0,026M).
A figura 5.10. representa uma imagem de TEM das partculas de Fe3O4 sintetizadas com triton X100. A maior parte das nanopartculas encontram-se separadas das suas vizinhas devido ao
surfactante existente superfcie das mesmas. Aps a modificao de superfcie das mNPs com
triton X-100, estas apresentam forma esfrica, com dimetros entre 6 e 20 nm (a distribuio de
tamanho determinada medindo vrios dimetros no software ImageJ). Apesar de exibirem boa
disperso, as partculas apresentam alguma aglomerao devido elevada rea de superfcie e
s interaes magnticas dipolo-dipolo entre partculas.
5.3.1. cido oleico

Existem vrios fatores que influenciam a estabilidade de uma soluo coloidal: irradiao com
radiao eletromagntica, flutuaes de temperatura, etc. A estabilidade de uma soluo coloidal
resulta de uma barreira de potencial que se desenvolve como resultado de uma competio entre
as foras de atrao van der Waals e as foras de repulso de Coulomb. Em soluo, as
nanopartculas podem ser estabilizadas selecionando as condies timas de formao da
soluo, o que impede a agregao das partculas
[97]
Neste trabalho investigou-se a estabilidade das solues, com vrios surfactantes e diversas
concentraes dos mesmos, ao longo do tempo.
A influncia da concentrao de cido oleico na disperso e estabilizao das solues de mNPs
est representada nos grficos da figura 5.11.
_________________________________________________________________________
45
0,03
0,32
0,03
0,32
Imediato
Imediato
a) 0,008 M
24 h
cido oleico
0,02
24 h
0,24
0,24
cido oleico
0,02
0,20
0,20
Imediato
Imediato
Absorvncia
Absorvncia
Absorvncia [u. a.]
Absorvncia [u. a.]
b) 0,016 M
0,28
0,28
2424h h
0,16
0,16
c.
oleico
c.
oleico
0,12
0,12
0,01
0,01
0,08
0,08
0,04
0,04
0,00
200
0,00
0,00 190
190
0,00
300
400
500
600
700
800
900
200
290
290
300
390
390
490
590
690
490
590
690
Comprimento
de
onda
[nm]
400
500
600
700
790
790
890
890
800
900
0,05
0,24
Imediato
c) 0,032 M
Imediato
d) 0,064 M
24 h
0,20
0,04
24 h
cido oleico
cido oleico
0,03
Absorvncia [u. a.]
Absorvncia [u. a.]
0,16
0,02
0,01
0,00
200
0,12
0,08
0,04
0,00
300
400
500
600
700
800
200
900
300
400
500
600
700
800
900
0,18
0,32
0,18
0,14
e) 0,128 M
0,12
Imediato
0,16
0,28
0,16
24 h
0,14
0,14
0,24
24 h
cido oleico
0,08
cido oleico
Imediato
Imediato
0,12
0,12
0,20
0,10
0,10
0,16
0,16
0,08
Absorvncia
Absorvncia
Absorvncia [u. a.]
0,10
Absorvncia [u. a.]
Imediato
f) 0,192 M
24
24hh
c.
c.oleico
oleico
0,08
0,12
0,12
0,06
0,06
0,06
0,08
0,08
0,04
0,04
0,04
0,04
0,02
0,04
0,02
0,02
0,00
0,00
0,00
200
300
400
500
600
700
800
900
0,00
190
190
200
290
290
300
390
390
390
400
490
490
590
590
690
690
490
590
690
500
600
700
Comprimento
Comprimento
de
onda
[nm]
Comprimentode
deonda
onda[nm]
[nm]
790
790
790
800
Figura 5.11 - Medies efetuadas imediatamente e 24h aps a sntese de mNPs com cido oleico
em vrias concentraes: a) 0,008M; b) 0,016M; c) 0,032M; d) 0,064M; e) 0,128M; f) 0,192M.
_________________________________________________________________________
46
890
890
890
900
A figura 5.11 representa os espectros de UV-VIS para as amostras com cido oleico em diferentes
concentraes comparando o espectro imediato com 24h aps a sonicao. Alm disso, em cada
espectro est tambm representado o pico correspondente ao cido oleico (na mesma
concentrao utilizada).
Considerando que, quanto maior a intensidade do pico (aumento da absorvncia), maior a
quantidade de partculas em suspenso
[98]
, pode considerar-se que a concentrao C= 0,064M
a mais adequada, dentro do intervalo testado. Isto porque, nos 220 nm onde o pico mais
intenso. Verifica-se ainda a presena de uma bossa nos 280 nm, o que poder estar relacionado
com as partculas de maior dimenso, ou seja, os agregados.
Com o aumento da concentrao de cido oleico, os picos mais intensos tornam-se mais
definidos, devido saturao do meio. O oposto se verifica quando a concentrao de surfactante
demasiado elevada, o que torna os picos menos definidos. Ou seja, dentro do intervalo testado
parece existir uma concentrao tima de cido oleico de forma a promover a estabilidade das
nanopartculas.
Por ltimo, verifica-se que aps as 24h ocorre sedimentao em todos os casos, pois a
intensidade do pico diminui. No entanto, a posio do pico mantm-se estvel, o que leva a
concluir que no h formao de novos agregados de partculas
[98]
, apenas sedimentao dos
agregados de partculas j formados. Desta forma podemos supor que os agregados se formaram
antes da adio do surfactante.
Como j foi referido, as NPs de magnetite no apresentam um pico caracterstico. O pico que se
verifica para comprimentos de onda inferiores corresponde ao pico caracterstico do respetivo
surfactante. Existe uma diferena significativa nas intensidades dos picos do espectro do
surfactante e do espectro das NPs com surfactante, o pode ser explicado pela presena de
nanopartculas em suspenso, que contribuem para um aumento da intensidade do pico.
Na figura 5.12 apresenta-se a variao da intensidade do pico em funo da concentrao de
cido oleico. A baixas concentraes de surfactante, as NPs de magnetite sedimentam. Na
concentrao C=0,064M atinge-se um patamar ideal, no qual a quantidade de partculas em
suspenso mxima. Aps esse patamar, a quantidade de NPs em suspenso decresce um
pouco, tornando-se praticamente estvel. Confirma-se, assim, que a concentrao C=0,064M a
melhor concentrao de cido oleico, dentro das concentraes testadas.
_________________________________________________________________________
47
0,14
Imediato
0,12
24 h
Absorvncia [u. a.]
0,10
0,08
0,06
0,04
0,02
0,00
0,008
0,028
0,048
0,068
0,088
0,108
0,128
0,148
0,168
0,188
Concentrao de cido oleico [M]
Figura 5.12 Comparao do valor da absorvncia nas diferentes concentraes de cido oleico,
no pico de maior intensidade (224 nm).
Na figura 5.13 encontra-se representado o comportamento da soluo de C=0,064M, ao longo

do tempo, com evidncia no pico de maior intensidade. Pode observar-se que, ao longo do
tempo, existe sedimentao das nanopartculas, apesar de, mesmo assim, ser a concentrao
que mantm mais partculas em suspenso (mesmo aps 24 horas). As suspenses de
nanopartculas so estveis por mais tempo quando existem cargas positivas na superfcie das
NPs que anulam as cargas negativas da superfcie do surfactante, provocando estabilizao da
soluo coloidal, uma vez que previne as partculas da agregao devido forte repulso
colmbica
[77]
. Uma vez que, neste caso, no se obtm uma estabilizao total da soluo,
pode concluir-se que, na superfcie das mNPs se encontrem tambm cargas negativas. No
entanto, para uma melhor concluso acerca da carga de superfcie das nanopartculas de
magnetite, deveria ser medido o seu potencial zeta. A sedimentao ao longo do tempo
tambm pode ser justificada pelas foras de van der Waals, que se tornam dominantes, o que
resulta na formao de aglomerados
[77]
_________________________________________________________________________
48
Figura 5.13 Comportamento da soluo de cido oleico C=0,064M ao longo do tempo, no pico de
maior intensidade.
As imagens anteriores dizem respeito a um estudo de estabilidade a curto prazo, um estudo de

estabilidade para 24 horas, no mximo. A imagem seguinte representa um estudo de estabilidade
a longo prazo, feito para um perodo mximo de 8 semanas.
Na figura 5.14 encontra-se representada a percentagem de massa de NPs com cido oleico que
se mantm em suspenso ao longo de 8 semanas.
_________________________________________________________________________
49
100
cido oleico
0,008 M
% Massa em suspenso
80
0,016 M
0,032 M
0,064 M
60
0,128 M
0,192 M
40
20
0
0
4
5
Tempo [semanas]
Figura 5.14 - Percentagem de massa em suspenso, ao longo do tempo, das mNPs de Fe3O4 com
diferentes concentraes de cido oleico (pontos correspondem a um valor mdio, com n=3).
Tabela 5.1 - Valor mdio de cada ponto e respetivo desvio-padro (em %).
Tempo [semanas]
Concentrao
de cido
oleico [M]
0,008
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,016
1,28
0,66
0,96
0,37
0,71
0,36
0,51
0,46
0,21
0,37
0,00
0,00
0,00
0,032
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,064
25,29
16,45
11,82
5,24
9,84
4,65
5,98
1,58
3,38
0,90
1,95
0,40
0,95
0,23
0,00
0,128
18,97
1,60
9,54
0,74
4,62
1,00
1,70
0,83
1,18
0,13
0,81
0,14
0,45
0,18
0,00
0,192
52,91
10,12
28,47
5,54
9,36
1,61
2,32
0,74
1,62
0,72
0,90
0,68
0,46
0,13
0,00
A concentrao de 0,064M mantm-se em suspenso durante mais tempo (at 6 semanas sem
sedimentar), o que est de acordo com os resultados obtidos com a espectroscopia UV-VIS. As
mNPs com concentraes mais baixas de cido oleico so as que sedimentam mais rapidamente
_________________________________________________________________________
50
(a quantidade de surfactante pode no ser suficiente, no revestindo as partculas, o que leva a

uma agregao das mesmas e posterior sedimentao).
5.3.2. Citrato de sdio

A figura 5.15 representa os espectros de UV-VIS para as amostras com citrato de sdio em
diferentes concentraes comparando o espectro imediato com 24h aps a sonicao. Alm disso,
em cada espectro est tambm representado o pico correspondente ao citrato de sdio (na
mesma concentrao).
Tal como no caso anterior, considera-se que, quanto maior a intensidade do pico (aumento da
absorvncia), maior a quantidade de partculas em suspenso
[98]
. Sendo assim, pode considerar-
se que a concentrao C= 0,005M a mais adequada, dentro do intervalo testado. Entre os 290 e
390 nm verifica-se a presena de uma bossa, o que poder estar relacionado com a existncia de
partculas mais agregadas.
Analisando os grficos da figura 5.15, verifica-se que aps as 24h ocorre sedimentao em todos
os casos (apesar de no ocorrer tanta sedimentao como com o surfactante anterior), pois a
concluir que no h formao de novas partculas
[98]
, apenas alguma sedimentao das partculas
j formadas.
verifica para comprimentos de onda inferiores corresponde ao pico caracterstico do citrato de
sdio. A diferena da intensidade entre o espectro do surfactante e do espectro das partculas com
surfactante pode ser justificada pela presena de nanopartculas em suspenso, que contribuem
para um aumento da intensidade do pico.
_________________________________________________________________________
51
0,06
0,14
Imediato
a) 0,00125 M
0,12
0,05
24 h
24 h
Citrato de sdio
Citrato de sdio
Absorvncia [u. a.]
0,10
Absorvncia [u. a.]
Imediato
b) 0,0025 M
0,08
0,06
0,04
0,03
0,02
0,04
0,01
0,02
0,00
200
300
400
500
600
700
800
0,00
200
900
300
400
600
700
800
900
0,18
0,28
Imediato
c) 0,005 M
Imediato
d) 0,010 M
0,16
0,24
24 h
24 h
0,14
Citrato de sdio
0,20
Citrato de sdio
0,12
Absorvncia [u. a.]
Absorvncia [u. a.]
500
0,16
0,12
0,08
0,10
0,08
0,06
0,04
0,04
0,00
200
0,02
300
400
500
600
700
800
0,00
200
900
300
400
Imediato
e) 0,020 M
0,14
700
800
900
Imediato
f) 0,030 M
0,14
24 h
0,12
Citrato de sdio
0,10
0,08
0,06
0,04
24 h
0,12
Absorvncia [u. a.]
Absorvncia [u. a.]
600
0,16
0,16
Citrato de sdio
0,10
0,08
0,06
0,04
0,02
0,02
0,00
200
500
0,00
300
400
500
600
700
800
900
200
300
400
500
600
700
800
900
Figura 5.15 - Medies efetuadas imediatamente e 24h aps a sntese de mNPs com citrato de
sdio em vrias concentraes: a) 0,00125M; b) 0,0025M; c) 0,005M; d) 0,01M; e) 0,02M; f) 0,03M.
_________________________________________________________________________
52
Na figura 5.16 apresenta-se a variao da intensidade do pico em funo da concentrao de

citrato de sdio. Na concentrao mais baixa de surfactante, as NPs de magnetite sedimentam
(existe uma grande diferena de intensidades passadas 24 horas). Na concentrao C=0,005M
atinge-se um patamar ideal, no qual a quantidade de partculas em suspenso mxima. Aps
esse patamar, a quantidade de NPs em suspenso diminui significativamente, o que leva confirma
que a concentrao C=0,005M a melhor concentrao de citrato de sdio, dentro das
concentraes testadas.
Absorvncia [u. a.]
1,20
1,00
Imediato
0,80
24 h
0,60
0,40
0,20
0,00
0
0,005
0,01
0,015
0,02
0,025
0,03
Concentrao de citrato de sdio [M]
Figura 5.16 Comparao do valor da absorvncia nas diferentes concentraes de citrato de

sdio no pico de maior intensidade (300 nm).
Na figura seguinte encontra-se representado o comportamento da soluo de C=0,005M, ao longo

do tempo, com evidncia no pico de maior intensidade. Pode observar-se que, ao longo do tempo,
a sedimentao das NPs bastante inferior sedimentao verificada nas solues de
nanopartculas com cido oleico. Como j foi referido, as suspenses de nanopartculas so
estveis por mais tempo quando existem cargas positivas na superfcie das NPs que anulam as
cargas negativas da superfcie do surfactante, provocando estabilizao da soluo coloidal, uma
vez que previne as partculas da agregao devido forte repulso colmbica
[77]
. A agregao ,
desta forma, evitada, conseguindo uma estabilizao quase total da soluo.
_________________________________________________________________________
53
Figura 5.17 Comportamento da soluo de citrato de sdio C=0,005M ao longo do tempo, no pico
de maior intensidade.

Na figura 5.18 encontra-se representada a percentagem de massa de NPs com citrato de sdio
que se mantm em suspenso, ao longo de 8 semanas.
_________________________________________________________________________
54
100
Citrato de sdio
0,00125 M
0,0025 M
80
% Massa em suspenso
0,0050 M
0,0100 M
60
0,0200 M
0,0300 M
40
20
0
0
4
5
Tempo [semanas]
vrias concentraes de citrato de sdio (pontos correspondem a um valor mdio, com n=3).
Tabela 5.2 - Valor mdio de cada ponto e respetivo desvio-padro (em %).
Tempo [semanas]
Concentrao
de citrato de
sdio [M]
0,00125
97,53
2,51
26,28
13,08
6,11
6,11
3,99
3,95
1,34
0,61
0,05
0,08
0,00
0,00
0,0025
98,12
0,85
55,45
14,28
16,98
11,42
3,06
0,88
1,93
0,57
1,05
0,32
0,38
0,19
0,00
0,0050
98,85
0,53
51,83
24,60
6,15
7,89
4,31
5,46
2,96
3,77
1,84
2,43
0,52
0,70
0,00
0,0100
86,90
14,05
55,26
27,32
43,11
13,98
40,03
13,82
37,13
12,36
34,47
11,93
31,47
10,33
29,55
10,32
0,0200
95,03
4,87
53,19
5,75
44,88
3,66
41,99
0,84
40,24
0,78
38,55
0,95
36,88
1,27
35,27
2,35
0,0300
96,56
2,42
63,69
12,86
47,62
7,04
44,53
6,04
42,30
5,77
40,46
5,52
38,62
5,78
37,68
5,67
A concentrao de 0,030M mantm-se em suspenso durante mais tempo (at 8 semanas sem
sedimentar). A concentrao de 0,0050M (melhor concentrao de surfactante obtida pela
espectroscopia UV-VIS) sedimenta totalmente passadas 7 semanas. Conclui-se que esta
concentrao a melhor para uma estabilizao da soluo a curto prazo (aps uma semana
ainda mantm cerca de 99% das partculas em suspenso), no sendo, porm, a melhor para uma
estabilizao para um perodo de tempo muito longo. Para uma estabilizao deste tipo, a
concentrao de 0,030M a melhor.
_________________________________________________________________________
55
5.3.3. Triton X-100

0,5
0,4
Imediato
a) 0,017 M
24 h
24 h
0,4
Triton x-100
Triton x-100
Absorvncia [u. a.]
Absorvncia [u. a.]
0,3
Imediato
b) 0,026 M
0,2
0,1
0,3
0,2
0,1
0,0
200
300
400
500
600
700
800
0,0
200
900
300
400
500
600
700
800
900
0,6
0,8
Imediato
c) 0,034 M
24 h
0,5
Imediato
d) 0,043 M
0,7
24 h
Triton x-100
Triton x-100
0,6
Absorvncia [u. a.]
Absorvncia [u. a.]
0,4
0,3
0,2
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0,1
0,0
200
0,0
300
400
500
600
700
800
200
900
300
400
600
700
800
900
1,0 1,0
0,9
Imediato
e) 0,052 M
0,8
0,7
Imediato
f) 0,061 M
24 h
24 h
0,8 0,8
Triton x-100
Absorvncia
Absorvncia [u. a.]
Triton x-100
0,6
Absorvncia [u. a.]
500
0,6 0,6
0,5
0,4
Imediato
24 h
0,4 0,4
0,3
0,2
Triton x-100
0,2 0,2
0,1
0,0
200
300
400
500
600
700
800
900
0,0 0,0
190200
290300
390400
490500
590
690
600
700
Comprimento
Comprimentodedeonda
onda[nm]
[nm]
790
800
890
900
Figura 5.19 - Medies efetuadas imediatamente e 24h aps a sntese de mNPs com triton X-100
em vrias concentraes: a) 0,017M, b) 0,026M, c) 0,034M, d) 0,043M, e) 0,052M, f) 0,061M.
_________________________________________________________________________
56
A figura anterior representa os espectros de UV-VIS para as amostras com triton X-100 em
diferentes concentraes comparando o espectro imediato com 24h aps a sonicao. Alm disso,
em cada espectro est tambm representado o pico correspondente ao cido oleico (na mesma
concentrao).
Considerando que, quanto maior a intensidade do pico (aumento da absorvncia), maior a
quantidade de partculas em suspenso
[98]
, pode considerar-se que a concentrao C= 0,061M
a mais adequada, dentro do intervalo testado, uma vez que existe um pico mais intenso nos 222
nm. Verifica-se ainda a presena de outro pico nos 276 nm, o que poder estar relacionado com
as partculas de maior dimenso, ou seja, os agregados.
Por ltimo, verifica-se que aps as 24h ocorre sedimentao em todos os casos, pois a
concluir que no h formao de novas partculas
[98]
, apenas sedimentao das partculas j
formadas.
verifica para comprimentos de onda inferiores corresponde ao pico caracterstico do respetivo
surfactante. Existe uma diferena significativa na intensidade do espectro do surfactante e do
espectro das NPs com surfactante, o pode ser explicado pela presena de nanopartculas em
suspenso, que contribuem para um aumento da intensidade do pico.
Na figura 5.18 apresenta-se a variao da intensidade dos picos em funo da concentrao de
triton X-100. Com o aumento da concentrao de triton X-100, os picos tornam-se mais intensos,
sendo que, dentro do intervalo testado, a concentrao C=0,061M a melhor. Contudo, como a
intensidade dos picos ainda no diminuiu, pode concluir-se que esta no a concentrao ideal
para este surfactante (deveriam ser testadas concentraes superiores).
0,80
Imediato_pico 222 nm
0,70
0,60
24 h_pico 222 nm
Imediato_pico 276 nm
Absorvncia [u. a.]
24 h_pico 276 nm
0,50
0,40
0,30
0,20
0,10
0,00
0,017
0,026
0,034
0,043
0,051
0,060
Concentrao de triton x-100 [M]
Figura 5.20 - Comparao do valor da absorvncia nas diferentes concentraes de triton X-100,
nos picos de maior intensidade (222 nm e 276 nm).
_________________________________________________________________________
57
Figura 5.21 - Comportamento da soluo de triton X-100 C=0,061M ao longo do tempo, nos picos
de maior intensidade.
Na figura anterior encontra-se representado o comportamento da soluo de C=0,061M, ao longo

do tempo, com evidncia nos picos de maior intensidade. Como j foi referido, as suspenses de
nanopartculas so estveis por mais tempo quando existem cargas positivas na superfcie das
NPs que anulam as cargas negativas da superfcie do surfactante, provocando estabilizao da
soluo coloidal, uma vez que previne as partculas da agregao devido forte repulso
colmbica
[77]
. Neste caso, no se obteve uma soluo totalmente estvel, talvez por se tratar de
um surfactante no inico.
Na figura 5.22 encontra-se representada a percentagem de massa de NPs com triton X-100 que
se mantm em suspenso, ao longo de 8 semanas.
_________________________________________________________________________
58
Como se observa na figura, passadas 6 semanas todas as solues sedimentam completamente.

Porm, a concentrao de 0,061M aquela que contm mais partculas em suspenso na
primeira semana (o que confirma os resultados obtidos inicialmente).
100
Triton X-100
0,017 M
% Massa em suspenso
80
0,026 M
0,034 M
0,043 M
60
0,052 M
0,061 M
40
20
0
0
4
5
Tempo [semanas]
vrias concentraes de triton X-100 (pontos correspondem a um valor mdio, com n=3).
Tabela 5.3 Valor mdio de cada ponto e respetivo desvio-padro (em %).
Tempo [semanas]
Concentrao
de triton X-100
[M]
0,017
21,22
1,98
21,79
8,23
13,82
5,18
8,68
2,04
4,07
1,25
0,00
0,00
0,00
0,026
24,27
4,93
13,02
1,71
8,95
3,31
5,43
2,64
2,11
1,84
0,00
0,00
0,00
0,034
45,37
20,29
15,71
1,91
10,92
3,70
6,25
2,26
2,42
0,74
0,00
0,00
0,00
0,043
55,27
18,59
21,27
8,37
12,77
5,05
8,31
3,33
4,30
1,89
0,00
0,00
0,00
0,052
78,50
13,29
28,14
3,29
10,57
0,94
6,30
1,98
3,16
0,28
0,00
0,00
0,00
0,061
89,33
9,20
16,75
4,71
6,08
2,66
2,41
1,64
0,90
0,82
0,00
0,00
0,00
_________________________________________________________________________
59
Para uma estabilizao a curto prazo (mximo de 24 horas), a melhor concentrao de cido
oleico C=0,064 M, de citrato de sdio de C=0,005 M e de triton X-100 de C=0,061 M.
Para uma estabilizao a longo prazo (mximo de 8 semanas), a melhor concentrao de cido
oleico de C=0,064 M (tal como a curto prazo), de citrato de sdio de C=0,030 M (mais elevada
que a curto prazo) e de triton X-100 de C=0,061 M (tal como a curto prazo). Assim, o citrato de
sdio tambm o melhor surfactante a longo prazo, dentro dos trs testados, uma vez que
mantm uma maior quantidade de nanopartculas em suspenso durante mais tempo.
5.4. Funcionalizao com quitosano
Figura 5.23 - Imagem de TEM e respetiva distribuio de tamanho das mNPs com quitosano (o
quitosano est assinalado com as setas vermelhas).
Na figura 5.23 est representa uma imagem de TEM das partculas de Fe3O4 sintetizadas com
quitosano. A imagem mostra que o quitosano, sendo um polmero de elevado peso molecular,
forma uma rede na qual grupos de nanopartculas so encapsulados. Assim, em vez de existirem
nanopartculas individualmente revestidas com quitosano, tem-se grupos de nanopartculas,
_________________________________________________________________________
60
tornando a tcnica utilizada ineficaz para o revestimento das nanopartculas individuais com
quitosano. As partculas, tal com observado nas figuras de TEM anterior, apresentam forma
esfrica e tm tamanhos mdios semelhantes com dimetros entre 6 e 20 nm (a distribuio de
tamanho determinada medindo vrios dimetros no software ImageJ). Deste modo ter de ser
aprofundado o estudo do revestimento das mNPs por quitosano a fim de poderem ser utilizadas no
tratamento de cancro.
_________________________________________________________________________
61
_________________________________________________________________________
62
6. Concluses e perspetivas futuras

O trabalho desenvolvido teve como principal objetivo a sntese de nanopartculas de xido de
ferro, em particular de magnetite, e o estudo da estabilidade destas em solues coloidais.
Estas nanopartculas foram produzidas pela tcnica da precipitao qumica. Esta deve ser
2+
3+
realizada temperatura ambiente e em atmosfera de azoto e ter uma razo molar entre Fe :Fe
de 1:2 com pH entre 9-14.
As nanopartculas produzidas tm uma tendncia natural para agregarem. Assim, na ausncia de

qualquer surfactante, as partculas em soluo tendem a sedimentar dificultando a sua
funcionalizao, necessria tendo em vista as aplicaes pretendidas. As mNPs sintetizadas tm
uma composio (determinada pela anlise de DRX) tpica da magnetite e, portanto, possuem
potencialmente propriedades superparamagnticas.
De modo a conseguir ter partculas de Fe3O4 individualizadas e em suspenso durante um perodo
de tempo alargado foram utilizados trs surfactantes (cido oleico, citrato de sdio e triton X-100).
Para cada um dos surfactantes foram utilizadas vrias concentraes a fim de verificar qual a que
tornava a soluo coloidal estvel por um perodo de tempo maior. O mtodo utilizado para
verificar a estabilidade das nanopartculas foi a medida da variao do espectro de absorvncia no
UV-VIS. Das concentraes estudadas de cido oleico, citrato de sdio e triton X-100 as que
estabilizavam as mNPs, a curto prazo (24 horas), foram as C=0,064M, C=0,005M e C=0,061M,
respetivamente. No caso do triton X-100, uma vez que a intensidade dos picos de absorvncia, em
funo da concentrao deste surfactante, esteve sempre a aumentar, pode concluir-se que ainda
no se atingiu a concentrao ideal para o triton X-100. Desta forma, necessrio testar
concentraes superiores a C=0,061M, a fim de encontrar a concentrao mais adequada para
este surfactante. Num estudo a longo prazo (2 meses), a melhor concentrao de cido oleico,
citrato de sdio e triton X-100 de C=0,064M, C=0,030M e C=0,061M, respetivamente.
Dentro do grupo de surfactantes testados, o citrato de sdio aparenta ser o melhor surfactante,
uma vez que mantm as nanopartculas mais tempo em suspenso. O citrato de sdio torna a
soluo de nanopartculas estvel tanto a curto como a longo prazo. Uma semana aps a sntese
das mNPs revestidas por citrato de sdio, todas as solues apresentam grande parte das
partculas em suspenso e, oito semanas mais tarde, algumas dessas solues ainda se mantm
em suspenso. O citrato de sdio uma molcula inica pequena, carregada negativamente pelo
que a carga negativa do citrato de sdio neutraliza a carga das partculas, diminuindo a atrao
eletrosttica entre elas. Esta circunstncia pode justificar o facto de o citrato de sdio ser o melhor
surfactante, dentro do grupo testado.
Em relao funcionalizao com quitosano, concluiu-se que o mtodo utilizado (mtodo da
gelificao ionotrpica) no um mtodo vivel, uma vez que as partculas no ficaram
_________________________________________________________________________
63
corretamente revestidas com este polmero. Neste caso, o quitosano formou uma rede na qual
incorporou as partculas, no as revestindo uniformemente. Deste modo, ser necessria mais
investigao e dever ser aprofundado o estudo do revestimento das mNPs com quitosano, a fim
de poderem ser utilizadas no tratamento de cancro.
Este trabalho mostrou ser inovador quanto ao estudo da estabilidade das mNPs em soluo.
Embora se trate de um estudo inicial, este trabalho sugere utilizar outros mtodos de sntese
(como sntese hidrotermal, decomposio trmica) para a produo de NPs monodispersas, bem
como o estudo de outros surfactantes que permitam um controlo ainda melhor das partculas em
suspenso.
_________________________________________________________________________
64
7. Bibliografia
[1] - Lodhia, J.; Mandarano, G.; Ferris, N. J.; Eu, P.; Cowell, S. F.; Development and use of iron
oxide nanoparticles (part 1): Synthesis of iron oxide nanoparticles for MRI. Biomedical
Imaging and Intervention Journal, 6(2): 1-11, 2010.
[2] - Gupta, A. K.; Gupta, M.; Synthesis and surface engeneering of iron oxide nanoparticles
for biomedical applications. Biomaterials, 26, 3995-4021, 2005.
[3] - Mahmoudi, M.; Sant, S.; Wang, B.; Laurent, S.; Sen, T.; Superparamagnetic iron oxide
nanoparticles (SPIONs): Development, surface modification and applications in
chemotherapy. Advances Drug Delivery Reviews, 63, 24-46, 2011.
[4] - Gubin, S. P.; Introdution Magnetic Oxides, in: Gubin, S. P., eds, Magnetic Nanoparticles,
WILLEY-VCH Verlag GmbH&Co, Federal Republic of Germany, 2009.
[5] - Sun, C; Lee, J. H.; Zhang, M.; Magnetic nanoparticles in MR imaging and drug delivery.
Advanced Drug Delivery Reviews, 60, 1252-1265, 2008.
[6] - Dias, A. M. G. C.; Hussain, A.; Marcos, A. S.; Roque, A. C. a.; A biotechnological
perspective on the application of iron oxide magnetic colloids modified with
polysaccharides. Biotechonology Advances, 29: 142-145, 2011.
[7] - Tarjat, P.; Morales, M. P.; Verdaguer, S. V.; Carreo, T. G.; Serna, C. J.; The preparation of
magnetic nanoparticles for applications in biomedicine. Journal of physics D: Applied physics,
36, 182-197, 2003.
[8] - Lin, M. M.; Kim, D. K.; Haj, A. J. E.; Dobson, J.; Development of superparamagnetic iron
oxide nanoparticles (SPIONS) for translation clinical applications. IEEE Transactions on
nanobioscience, 7, 298-305, Dezembro 2008.
[9] www.stemcell.com (ltimo acesso em 15-09-2012).
[10] www.micromod.de (ltimo acesso em 15-09-2012).
[11] www.chemicell.com (ltimo acesso em 15-09-2012).
[12] www.magnisense.com (ltimo acesso em 15-09-2012).
[13] www.diagnosticbiosensors.com (ltimo acesso em 15-09-2012).
[14] www.dextermag.com (ltimo acesso em 15-09-2012).
[15] www.oceannanotech.com (ltimo acesso em 15-09-2012).
[16] www.imego.com (ltimo acesso em 15-09-2012).
[17] www.integratedsoft.com (ltimo acesso em 15-09-2012).
[18] eshop.emdchemicals.com (ltimo acesso em 15-09-2012).
[19] - www.magsenselifesci.com (ltimo acesso em 15-09-2012).
_________________________________________________________________________
65
[20] www.turbobeads.com (ltimo acesso em 15-09-2012).

[21] www.biotechniques.com (ltimo acesso em 15-09-2012).
[22] www.magnabeat.com (ltimo acesso em 15-09-2012).
[23] www.nanotherics.com (ltimo acesso em 15-09-2012).
[24] www.sepmag.eu (ltimo acesso em 15-09-2012).
[25] www.magforce.de (ltimo acesso em 15-09-2012).
[26] www.amagpharma.com (ltimo acesso em 15-09-2012).
[27] www.estapor.com (ltimo acesso em 15-09-2012).
[28] www.miltenylbiotec.com (ltimo acesso em 15-09-2012).
[29] www.imvitrogen.com (ltimo acesso em 15-09-2012).
[30] - Soares, P.; Ferreira, I.; Igreja, R.; Novo, C.; Borges, J.; Application of Hyperthermia for
Cancer Treatment: recent patents review. Recent patents on anti-cancer drug discovery, 7, 6473, 2012.
[31] Ito, A.; Shinkai, M.; Honda, H.; Kobayashi, T.; Medical Application of Functionalized
Magnetic Nanoparticles. Journal of Bioscience and Bioengineering, 100 (1): 1-11, 2005.
[32] - Laurent, S.; Dutz, S.; Hfali, U. O.; Mahmoudi, M.; Magnetic fluid hyperthermia: Focus on
superparamagnetic iron oxide nanoparticles. Advances in Colloid and Interface Science, 166,
8-23, 2011.
[33] - http://www.chemspider.com/Chemical-Structure.17215625.html (ltimo acesso em 13-092012).
[34] Lbbe, A.; Alexiou, C.; Bergemann, C.; Clinical Applications of Magnetic Drug Targeting.
Journal of Surgical Research, 95, 200-206, 2001.
[35] - Willard, M. A., Kurihara, L. K.; Carpenter, E. E.; Calvin, S.; Harris, V. G.; Chemically
prepared magnetic nanoparticles. International Materials Reviews, 49, 125-170, 2004.
[36] - Souza, K.C.; Mohallem, N.D.S.; Sousa, E.; Nanocompsitos magnticos:potencialidades
de aplicaes em biomedicina.Quim. Nova, 34 (10): 1692-1703, 2011.
[37] Dobson, J.; Magnetic Nanoparticles for Drug Delivery. Drug Development Research,
67:55-60, 2006.
[38] Kita, E.; Oda, T.; Sato, S.; Minagawa, M.; Yanagihara, H., et al., Ferromagnetic
nanoaprticles for magnetic hyperthermia and thermoablation therapy. J. Phys. D: Appl. Phys,
43: 474011, 2010.
[39] www.nci.nih.gov (ltimo acesso em 17-07-2012).
[40] - Massart, R.; Preparation of aqueous magnetic liquids in alkaline and acidic media. IEEE
Transactions on Magnetics, 17, 1981.
_________________________________________________________________________
66
[41] - Tao, K.; Dou, H.; Sun, K.; Interfacial coprecipitation to prepare magnetite nanoparticles:
concentration and temperature dependence. Colloids and Surfaces A: Physicochem. Eng,
Aspects, 320, 115-122, 2008.
[42] - Jolivet, J. P.; Belleville, P.; Tronc, E.; Influence of Fe(II) on the formation of the spinel iron
oxide in alkaline medium. Clays and Clay Minerals, 40(5): 531-539, 1992.
[43] - Wei, X.; Viadero, R. C.; Synthesis of magnetic nanoparticles with ferric iron recovered
from acid mine drainage: implications for environmental engineering. Colloids and Surfaces
A: Physicochemical and Engineering Aspects, 294, 280-286, 2007.
[44] - Babes, L.; Denizot, B.; Tanguy, G.; Synthesis of iron oxide nanoparticles used as MRI
contrast agents: a parametric study. J Colloid Interface Sci, 212: 474-482, 1999.
[45] - Kim, D. K.; Mikhaylova, M.; Zhang, Y.; Muhammed, M.; Protective coating of
superparamagnetic iron oxide nanoparticles. Chem. Mater., 15, 1617-1627, 2003.
[46] - Sun, J.; Zhou, S.; Hou, P.; Yang, Y.; Weng, J.; Li, X.; Li, M.; Synthesis and characterization
of biocompatible Fe3O4 nanoparticles. Journal of biomedical materials research part A, pp. 333341, 2006.
[47] - Kim, K. C.; Kim, E. K.; Lee, J. W.; Maeng, S. L.; Kim, Y. S.; Synthesis and characterization
of magnetite nanopowders. Current Applied Physics, 8, 758-760, 2008.
[48] - Maity, D. A.; Agrawal, D. C.; Synthesis of iron oxide nanoparticles under oxidizing
environment and their stabilization in aqueous and non-aqueous media. Journal of
Magnetism and Magnetic Materials, 308, 46-55, 2007.
[49] - Damasceno, B. P. G. L.; Silva, J. A.; Oliveira, E. E.; silveira, W. L. L.; Arajo, I. B.; Oliveira, A.
G.; Egito, E. S. T.; Microemulso: um promissor carreador para molculas insolveis. Rev.
Cinc. Farm. Apl., 32(1): 9-18, 2011.
[50] - Najjar, R.; Microemulsions_An introdution to properties and applications. InTech, 2012.
[51] - Soppimath, K. S.; Aminabhavi, T. M.M Kulkarni, A. R.; Rudzinski, W. E.; Biodegradable
polymeric nanoparticles as drug delivery devices. Journal of Controlled Released, 70 (1-2): 120, Janeiro 2010.
[52] - Reis, C. P.; Neufeld, R. J.; Ribeiro, A. J; Veiga, F.; Nanoencapsulation I. Methods for
preparation of drug-loaded polymeric nanoparticles. Nanomedicine: Nanotechnology, Biology
and Medicine, 2, 8-21, 2006.
[53] - Kumari, A.; Yadav, S. K.; Yadav, S. C.; Biodegradable polymeric nanoparticles based
drug delivery systems. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces, 75, 1-18, Janeiro 2010.
[54] - Lawrance, M. J.; Rees, G. D.; Microemulsion-based media as novel drug delivery
systems. Adv Drug Deliv Rev, 45 (1): 89-121.
[55] - Prez, J. A. L.; Quintela, M. A. L.; Mira, J.; Rivas, J.; Preparation of magnetic fluids with
particles obtained in microemulsion. IEEE Transactions on Magnetics, 33 (5): 4359-4362,
Setembro 1997.
[56] - Gupta, A. K.; Wells, S.; Surface-modified superparamagnetic nanoparticles for drug
delivery: preparation, characterization and cytotoxicity studies. IEEE Transactions on
nanobioscience, 3 (1): 66-73, Maro 2004.
_________________________________________________________________________
67
[57] - Pileni, M. P.; Duxin, N.; Micelle technology for magnetic nanosized alloys and
composites. Chem. Innov., 30 (2), 2000.
[58] - Lee, H. S.; Lee, W. C.; Furubayashi, T.; A comparison of coprecipitation with
microemulsion methods in the praparation of magnetite. Journal of Applied Physics, 85 (8):
5231-5233, Abril 1999.
[59] - Mathew, D.; Juang, R.; An overview of the structure and magnetism of spinel ferrite
nanoparticles and their synthesis in microemulsions. Chemical Engineering Journal. 129 (1-3):
51-65, 2007.
[60] - Liang, X.; Jia, X.; Cao, L.; Sun, J.; Yang, Y.; Microemulsion synthesis and
characterization of nano-Fe3O4 particles and Fe3O4 nanocrystalline. Journal of Dispersion
Science and Technology, 31, 1043-1049, 2010.
[61] - Lee, Y.; Lee, J.; Bae, C. J.; Park, J. G.; Large-Scale Synthesis of Uniform and Crystalline
Magnetite Nanoparticles Using Reverse Micelles as Nanoreactors under Reflux Conditions.
Adv. Functional Mat., 15 (3): 503-509, Maro 2005.
[62] - Mori, Y.; Okastu, Y.; Tsujimoto, Y.; Titanium dioxide nanoparticles produced in water-inoil emulsion. J. Nanopart. Res., 3, 219-225, 2001.
[63] - Tang, J.; Myers, M.; Bosnick, K. A.; Brus; L. E.; Magnetite Fe3O4 nanocrystals:
spectroscopie observation of aqueous oxidation kinetics. J. Phys. Chem. B., 107, 7501-7506,
2003.
[64] - Mizutani, N.; Iwasaki, T.; Watano, S.; Yanagida, T.; Tanaka, H.; Kawai, T.; Effect of
ferrous/ferric ions molar ratio on reaction mechanism for hydrothermal synthesis of
magnetite nanoparticles. Bull. Mater. Sci., 31 (5): 713-717, Outubro 2008.
[65] - Natarajan, S.; Mandal, S.; Mahata, P.; Rao, V. V.; Ramaswamy, P.; Banerjee, A.; Paul, A. K.;
Ramya, K. V.; The use of hydrothermal methods in the synthesis of novel open-framework
materials. J. Chem. Sci., 118 (6): 525-536, Novembro 2006.
[66] - Somiya, S.; Roy, R.; Hydrothermal synthesis of fine oxide powders. Bull. Mater. Sci. 23
(6): 453-460, Dezembro 2000.
[67] - Haw, C. Y.; Mohamed, F.; Chia, C. H.; Radiman, S.; Zakaria, S.; Huang, N. M.; Lim, H. N.;
Hidrothermal synthesis of magnetic nanoparticles as MRI contrast agents. Ceramics
International, 36, 1417-1422, 2010.
[68] - Mao, B.; Kang, Z.; Wang, E.; Lian, S.; Gao, L.; Tian, C.; Wang, C.; Synthesis of magnetite
octahedrons from iron powders through a mild hydrothermal method. Materials Research
Bulletin, 41, 2226-2231, 2006.
[69] - Maity, D.; Kale, S. N.; Ghanekar, R. K.; Xue, J. M.; Ding, J.; Studies of magnetite
nanoparticles synthesized by thermal decomposition of iron (III) acetylacetonate in
tri(ethylene glycol). Journal of Magnetism and Magnetic Materials, 321, 3093-3098, 2009.
[70] - Chin, S. F.; Pang, S. C.; Tan, C. H.; Green synthesis os magnetite nanoparticles (via
thermal secomposition method) with controllable size and shape. J. Mater. Environ. Sci., 2
(3): 299-302, 2011.
[71] - Yuan, Q.; Venkatasabramanian, R.; Hein, S.; Misra, R. D. K.; A stimulus-responsive
magnetic nanoparticle drug carrier: magnetite encapsulated by chitosan-grafted-copolymer.
Acta Biomaterialia, 4, 1024-1037, 2008.
_________________________________________________________________________
68
[72] - Lee, C. M.; Jeong, H. J.; Kim, E. M.; Kim, D. W.; Lim, S. T.; Jang, K. Y.; Jeong, Y. Y.; Nah, J.
W.; Sohn, M. H.; SPION-loaded chitosan-linoleic acid nanoparticles to target hepatocytes.
International Journal of Pharmaceutics, 371, 163-169, 2009.
[73] - Zhen, L.; Wei, L.; Gao, M.; Lei, H.; One-pot reaction to synthesize biocompatible
magnetic nanoparticles. Adv. Mater., 17, 1001-1005, 2005.
[74] - Woo, K.; Hang, J. W.; Surface modification of hydrofobic iron oxide nanoparticles for
clinical applications. IEEE Trans. Magn., 41 (10): 4137-4139, Outubro 2005.
[75] - Khosroshahi, M.E.; Ghazanfari, L.; Preparation and characterization of silica-coated iron
oxide bionanoparticles under N2 gas. Physica E, 42, 1824-1829, 2010.
[76] - Bhui, D. K.; Bar, H.; Sarkar, P.; Sahoo, G.; De, S. P.; Misra, A.; Synthesis and UVvis
spectroscopic study of silver nanoparticles in aqueous SDS solution. Journal of Molecular
Liquids ,145, 3337, 2009.
[77] - Desai, R.; Mankad, V.; Gupta, S.; Jha, P.; Size distribution of Silver Nanoparticles: UVVisible Spectroscopic Assessment. Nanoscience and Nanotechnology Letters, 4: 30-34, 2012.
[78] - Qu, J.; Liu, G.; Wang, Y.; Hong, R.; Preparation of Fe3O4-chitosan nanoparticles used for
hyperthermia. Advanced Powder Technology, 21, 461-467, 2010.
[79] - Yang, K.; Peng, H.; Wen, Y.; Li, N.; Re-examination of characteristic FTIR spectrum of
secondary layer in bilayer oleic acid-coated Fe3O4 nanoparticles. Applied Surface Science,
256, 3093-3097, 2010.
[80] http://chemistry.about.com/od/factsstructures/ig/ Chemical-Structures---O/Oleic-Acid.htm
(ltimo acesso em 10-09-2012).
[81] - Tejamaya, M.; Rmer, I.; Marrifield, R. C.; Lead, J. L.; Stability of Citrate, PVP, PEG
Coated Nanoparticles in Ecotoxicology Media. Environ. Sci. Technol., 46, 7011-7017, 2012.
[82] - Brewer, S.; Glomm, W. R.; Johnson, M. C.; Knag, M.M Frazen, S.; Probing BSA Binding to
Citrate-Coated Gold Nanoparticles and Surfaces. Langmuir, 21, 9303-9307, 2005.
[83] - http://www.chemblink.com/products/68-04-2.htm (ltimo acesso em 10-09-2012).
[84] http://www.rohmhaas.com/ionexchange/pharmaceuticals/detergent_removal.htm (ltimo
acesso em 10-09-2012).
[85] - Saien, J.; Ojaghloo, Z.; Rasoulifard, M. H.; Homogeneous and heterogeneous AOPs for
rapid degradation of Triton X-100 in aqueous media via UV light, nano titania hydrogen
peroxide and potassium persulfate. Chemical Engeneering Journal, 167, 172-182, 2011.
[86] - Tsai, Z. T.; Wang, J. F.; Kuo, H.; Shen, C.; Wang, J.; Yen, T.; In situ preparation of high
relaxivity iron oxide nanoparticles by coating with chitosan: A potencial MRI contrast agent
useful for cell tracking. Journal of magnetism and magnetic materials, 322, 208-213, 2010.
[87] Chenguang, L.; Yulong, T.; Chengsheng, L.; Xiguang, C.; Lejun, Y.; Preparations,
Characterizations and Applications of Chitosan-based Nanoparticles. Journal of Ocean
University of China, 6(3): 237-243, 2007.
[88] - Zhang, W.; Jia, S.; Wu, Q.; Ran, J.; Liu, Y.; Hou, J.; Studies of the magnetic field intensity
on the synthesis of chitosan-coated magnetite nanocomposites by co-precipitation method.
Materials Science and Engineering C, 32, 381-384, 2012.
_________________________________________________________________________
69
[89] Shi, C.; Zhu, Y.; Ran, X.; Wang, M.; Su, Y.; Cheng, T.; Therapeutic Potencial of Chitosan
and Its Derivatives in Regenerative Medicine. Journal of Surgical Research, 133, 185-192,
2006.
[90] - http://cool.conservation-us.org/jaic/articles/jaic41-03-003_2.html (ltimo acesso em 10-102012).
[91] - Gnanaprakash, G.; Philip, J.; Jayakumar, T.; Raj, B.; Effect of Diggestion Time and Alkali
Addition Rate on Physical Properties of Magnetite Nanoparticles. J. Phys. Chem. B, 111,
7978-7986, 2007.
[92] - Calvo, P.; Lpez, C.R.; Jato, J. L. V.; Alonso, M. J.; Novel hydrophilic chitosanpolyethylene oxide nanoparticles as protein carriers. Journal of Applied Polymer Science, 63:
125-132, 1997.
[93] Sailaja, A. K.; Amareshwar, P.; Chakravarty, P.; Chitosan nanoparticles as a drug
delivery system. Research Journal of Pharmaceutical, Biological and Chemical Sciences, 1(3):
474-484, 2010.
[94] Baptista, A. C.; Produo de biobaterias a partir de membranas obtidas pela tcnica de
electrofiao. Dissertao de Mestrado em Biotecnologia, FCT-UNL, 2009.
[95] Wu, S.; Sun, A.; Zhai, F.; Wang, J.; Xu, W.; Zhang, Q.; Volinsky, A.; Fe3O4 magnetic
nanoparticlessynthesis from tailings by ultrasonic chemical co-precipitation. Materials
Letters, 65, 1882-1884, 2011.
[96] - Klokkenburg, M.; Hilhorst, J.; Ern, B. H.; Surface analysis of magnetite nanoparticles in
ciclohexane solutions of oleic acid and oleylamine. Vibrational Spectroscopy, 43, 243-248,
2007.
[97] - Sileikaite, A.; Puiso, J.; Prosycevas, I.; Tamulevicius, S.; Investigation of Silver
Nanoparticles Formation Kinetics During Reduction of Silver Nitrate with Sodium Citrate;
Materials Science, 15 (1): 21-27, 2009.
[98] Sileikaite, A.; Prosycevas, I.; Puiso, J.; Juraits, A.; Guobiene, A.; Analysis of Silver
Nanoparticles produced by chemical redution of silver salt solution. Materials Science, 7(4):
287-291, 2006.
_________________________________________________________________________
70

Alves 2012

Uploaded by

Document Information

Original Title

Copyright

Available Formats

Share this document

Share or Embed Document

Sharing Options

Did you find this document useful?

Is this content inappropriate?

Copyright:

Available Formats

Alves 2012

Uploaded by

Copyright:

Available Formats

Ana Maria Rodrigues Alves

Licenciatura em Engenharia Biomdica

Desenvolvimento de nanopartculas magnticas

Dissertao para obteno do Grau de Mestre em

Professora Doutora Isabel Maria Mercs Ferreira, DCM-FCT/UNL

Professor Doutor Mrio Antnio Basto Forjaz Secca,

Doutora Joana Dria Vaz Pinto, Doutorada em Fsica

Doutora Isabel Maria das Mercs Ferreira, Professora

Ana Maria Rodrigues Alves

Desenvolvimento de nanopartculas magnticas para

Professora Doutora Isabel Maria Mercs Ferreira, DCM-FCT/UNL

Co-orientadorProfessor Doutor Joo Paulo Borges, DCM-FCT/UNL

extremamente vantajosas para a sua aplicao em medicina, tanto no diagnstico como na

Palavras-chave: nanopartculas magnticas de xido de ferro, magnetite, precipitao qumica,

Keywords: magnetic nanoparticles of iron oxide, magnetite, chemical precipitation, surfactants,

NANOPARTCULAS MAGNTICAS .................................................................................................... 1

APLICAES DAS MNPS NO TRATAMENTO DE CANCRO ....................................................................... 5

Ressonncia Magntica de Imagem ............................................................................ 7

MTODOS DE SNTESE DE MNPS ............................................................................................. 11

PRECIPITAO QUMICA ............................................................................................................ 11

SNTESE HIDROTERMAL .............................................................................................................. 19

DECOMPOSIO TRMICA .......................................................................................................... 20

CARACTERIZAO DAS MNPS...................................................................................................... 21

REVESTIMENTO DAS MNPS ..................................................................................................... 25

CITRATO DE SDIO .................................................................................................................... 27

TRITON X-100 ......................................................................................................................... 27

PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL ............................................................................................ 31

SNTESE DAS NANOPARTCULAS DE FE3O4 ...................................................................................... 31

INFLUNCIA DE SURFACTANTES .................................................................................................... 32

FUNCIONALIZAO COM QUITOSANO ........................................................................................... 32

CARACTERIZAO DAS MNPS...................................................................................................... 34

4.4.1. Absoro UV-VIS ................................................................................................................ 34

RESULTADOS E DISCUSSO DE RESULTADOS .......................................................................... 37

SNTESE DE NANOPARTCULAS DE FE3O4........................................................................................ 37

INFLUNCIA DOS SURFACTANTES .................................................................................................. 42

cido oleico ................................................................................................................ 42

Citrato de sdio .......................................................................................................... 43

INFLUNCIA DA CONCENTRAO DOS SURFACTANTES ....................................................................... 44

cido oleico ................................................................................................................ 45

Citrato de sdio .......................................................................................................... 51

Triton X-100 ............................................................................................................... 56

FUNCIONALIZAO COM QUITOSANO ........................................................................................... 60

CONCLUSES E PERSPETIVAS FUTURAS .................................................................................. 63

FIGURA 1.1 APLICAES BIOMDICAS DAS NANOPARTCULAS MAGNTICAS (RETIRADO DE ). ............ 2

FIGURA 1.4 ESQUEMA REPRESENTATIVO DE UM SISTEMA DE LIBERTAO DE FRMACOS ATRAVS DE

FIGURA 2.2- ESQUEMA ILUSTRATIVO DA COPRECIPITAO DE NANOPARTCULAS DE FE3O4 VIA

FIGURA 2.3- ESTRATGIA DE PREPARAO DE SPIONS MONODISPERSAS DENTRO DE GOTAS DE

FIGURA 3.1 ESTRUTURA DO CIDO OLEICO (OBTIDA DE

FIGURA 3.2 ESTRUTURA DO CITRATO DE SDIO (OBTIDA DE

FIGURA 4.1 TCNICA DE MONTAGEM DA GELIFICAO IONOTRPICA. .................................................. 34

FIGURA 5.2 ESPECTRO DAS NPS DE FE3O4 AO LONGO DO TEMPO....................................................... 38

FIGURA 5.4 DIFRATOGRAMA DE DRX DAS NANOPARTCULAS DE FE3O4. ............................................. 39

FIGURA 5.13 COMPORTAMENTO DA SOLUO DE CIDO OLEICO C=0,064M AO LONGO DO TEMPO, NO

FIGURA 5.17 COMPORTAMENTO DA SOLUO DE CITRATO DE SDIO C=0,005M AO LONGO DO

FIGURA 5.21 - COMPORTAMENTO DA SOLUO DE TRITON X-100 C=0,061M AO LONGO DO TEMPO,

TABELA 1.1 SPIONS COMERCIALIZADAS ATUALMENTE (ADAPTADO DE )............................................. 3

1.1. Nanopartculas magnticas

. As partculas nano-escala tm vindo a atrair cada vez mais

atenes e tm sido utilizadas nos campos da biocincia e da medicina desde os anos 70

A dimenso das nanopartculas torna-as candidatas ideais para a nanoengenharia de superfcies e

produo de nanoestruturas funcionais

. Devido s suas caractersticas nicas, no presentes

. As propriedades magnticas das NPs surgem devido a uma combinao