III.

ETAPAS DEL PROCESO DE INFECCIN

Adsorcin y penetracin
Leccin 4.
Curva de multiplicacin de un solo paso (Ellis y Delbruck, 1939)
Experimento de Alfred Hershey y Martha Chase (1952)
Etapas del proceso de infeccin
Etapa de adsorcin y etapa de penetracin en Bacterifagos
Etapa de adsorcin, penetracin y desnudamiento en Virus de
animales. (Transporte del genoma vrico al ncleo de la clula )
- Adenovirus
- Poliovirus/Rhinovirus
- Influenza Virus A
- Retrovirus

Virologa

Curva de multiplicacin del fago T4 (Ellis y Delbruck, 1939)

La clave de este experimento es que todas las bacterias sean infectadas al mismo tiempo

Retirar los fagos que

no
se hayan unido a las
bacteria
Tiempo corto de
infeccin

Se cogen muestras
a distintos tiempos
(Centrifugamos)

En cada tiempo se cogen 2 muestras:

M2

M1
Se centrifuga y
estudiamos si en el
sobrenadante hay
fagos
[=VIRUS
EXTRACELULARES]

Lisamos las clulas

con cloroformo y
estudiamos si existen
fagos [=VIRUS
TOTALES]

1000

Virus extracelulares
u.f.p./ clula

Virus totales
100

PERIODO DE LATENCIA

ETAPA DE LIBERACIN

PRODUCCIN
VRICA

10
PERIODO DE
ECLIPSE

INFECCIN

Virologa
10

20
ACUMULACIN
INTRACELULAR

30

Tiempo (min)

Experimento de Hershey y
Chase (1952)
Marcaje del DNA de los fagos con

32P

Se mezclan
las bacterias y
los fagos

El ADN
del fago
incorpora
32P

En el sobrenadante
aparece muy poca
cantidad de 32P

32P-ADN

Se
c

El fago
infecta
a la
bacteria
Lisis de la
bacteria

ent
ri

Lisis de la
bacteria
fug
a

Mediante agitacin se
separan los virus que
estn unidos a la
superficie celular

ADN del fago

marcado con 32P

32P-DNA

en la
progenie del
fago

Marcaje de las protenas de la cpsida de los

fagos con 35S

Las protenas de
la cpsida
incorporan 35S

La mayora del 35S

se encuentra en el
sobrenadante

35S-cpsidas

Se
c

El fago
infecta
a la
bacteria

ent
ri

Lisis de la bacteria
fug
a

Se mezclan
las bacterias
y los fagos

Lisis de la
bacteria
Cpsidas
marcadas
con 35S

Mediante
agitacin se
separan los
virus que
estn unidos a
la superficie
celular

Ninguna de las cpsidas de

la nueva progenie de fagos
est marcada con 35S
Virologa

Etapas del proceso de infeccin

Adsorcin
Penetracin (Desnudamiento en Virus de Animales)
Expresin de la informacin gnica
Replicacin
Ensamble, maduracin
Liberacin
ETAPA DE ADSORCIN-PENETRACIN

Bacterifagos
Receptores
Pared celular: Lipopolisacridos (LPS)
Protenas
Pili
Flagelos
Cpsula

Estructura del lipopolisacrido en Salmonella

Estirpe

Polisacrido O-especfico

Ncleo
polisacardico

Lpido A

Smooth
(Estirpe
silvestre)

rfc

rfb T

rfa H

gal E

Virologa

rfa G

Sensibilidad de distintos mutantes en LPS de

Salmonella a varios a fagos
Fagos P22 FelixO 6SR C21 Br60 Br2
Liso (wt)
rfc
rfb T
rfa H
gal E
rfa G

S
R
R
R
R
R

S
S
S
R
R
R

R
R
S
R
R
R

R
R
R
S
S
S

R
R
S
S
S
S

R
R
S
S
R
S

Bacterifago T4
Protenas que forman la cpsida (gene product, gp)

Cabeza
23, 24,hoc, soc,IP I, II, III
Alt, DNA

Tubo central
19
Cola

Vaina
18

Espinas o fibras
cortas
12

Cuello
20, 13, 14
wac
Fibras de la cola
34, 35, 36, 37

Placa basal
7, 8, 9, 10, 11, 6, 25,
53, 5, 27, 26, 28, 48, 54
3 y 15 (sellan el tubo y la vaina)

Imgenes CryoEM

Espinas
(gp12)

Virologa

Adsorcin del Fago T4

Protenas que forman la placa basal

y el tubo central

Unin reversible

Espinas o fibras cortas (gp12)

Forma hexagonal de la placa

basal
Unin irreversible
Estructura de la cola contrada
Forma de estrella de la placa basal

Vista desde la base

Vista de lado

Virologa

Vista desde la base y con inclinacin

Seccin transversal

Fotografa al microscopio
electrnico del fago T4
adsorbido a la pared celular de
E. coli . La flecha seala cmo
el tubo de una de las partculas
de T4 atraviesa la pared celular
de la bacteria

Ejemplos de la adsorcin de otros fagos

Bacterifago al filamento del flagelo de una bacteria.

Bacterifago al filamento del flagelo

de una bacteria.

Virologa

Adsorcin del fago M13 a la punta del pilus F de E. coli


Virus de animales
Endocitosis mediada por receptor

Membrana plasmtica

Ligando
Receptor

Citoplasma

Vescula
recubierta
de clatrina
ENDOCITOSIS

Vescula
cubierta de
clatrina

Separacin
de la
clatrina

Reciclaje del receptor a la

membrana plasmtica

Desprendimiento
de vesculas de
transporte

pH 7.0

Fusin
con un
endosoma

ENDOSOMA TEMPRANO
H+

pH 6.0
ENDOSOMA TARDO
Lisosoma
Fusin con un lisosoma

Fotografas al microscopio electrnico de 4 estados secuenciales en la formacin de vesculas recubiertas de clatrina

Virologa

 ETAPA DE ADSORCIN, PENETRACIN Y DESNUDAMIENTO

Molculas usadas por virus de animales como receptor

MOLCULA

FUNCIN NORMAL

VIRUS

Protena
ICAM-1
Inmunoglobulinas
MHC I

MHC II

CR2
CD4
IgM
Receptor para
la Acetilcolina

Adhesin a otras clulas

Desconocida
Ligando para CD8
Presenta pptidos

Rhinovirus (Picornaviridae)
Poliovirus (Picornaviridae)
Virus de Semliki Forest (Togaviridae)
Adenovirus (Adenoviridae)
Citomegalovirus humano (Herpesviridae)

Ligando para CD4

Arterivirus (Arteriviridae)
Presenta pptidos
a las clulas T
Receptor para el componente
Epstein-Barr virus
3Cd del complemento
(Herpesviridae)
Ligando para MHC II
HIV-1, HIV-2, SIV (Retroviridae)
Receptor para la clula B
Murine leukaemia virus (Retroviridae)
Se une al neurotransmisor
acetilcolina

Rabies virus (Rhabdoviridae)

Carbohidratos
cido N-acetilneuramnico Proporciona a la superficie Influenza virus A,B,C, (Orthomyxoviridae)
de las clulas su
Paramyxovirus, (Paramyxoviridae)
carga negativa
Bovine enterovirus (Picornavirus)
Reovirus (Reoviridae)

Lpidos
Fosfotidilserina
Fosfoinositol

Componentes de la
membrana celular

Vesicular stomatitis virus

(Rhabdoviridae)

Clula susceptible

Posee receptores para un virus en su

superficie

Clulas permisiva

Clula en la que el virus se puede multiplicar

Tropismo

Tipos de tejidos o clulas hospedadoras en

las que un virus se puede multiplicar Virologa

Ejemplos :
Familia Picornaviridae :
Esquema de molculas de la superfamilia IgSF

ICAM-1

rhinovirus humano (HRVs) y

coxsackievirus A21 (CAV21);

CAR

coxsackie B virus (CVB)

PVR

poliovirus (PV),

Rhinovirus
Membrana
citoplasmtica

Anticuerpo
Cpsida
Receptor
ICAM-1

Can en el que interacciona con ICAM-1

Exterior

Virologa

Interior del virin

(ARN + VP4)

Estrategias de penetracin y desnudamiento

A) Fusin de la envoltura vrica con la membrana plasmtica
Desnudamiento

Ej. Paramyxoviridae
Retroviridae

Desnudamiento

Microtbulos

Ej. Herpesviridae

B) Endocitosis (fusin de la envoltura vrica con la membrana del

endosoma)
Endosoma
Desnudamiento

Microtbulos
Ej. Orthomyxoviridae

Endocitosis (desnudamiento en la membrana del ncleo)

Endosoma
Lisis

Ej. Adenoviridae

Desnudamiento a nivel de la
Virologa
membrana nuclear

 VIRUS DESNUDOS
Adenovirus

FIBRA (IV)
CORE

PENTMERO
III
IIIa

VII
TP

HEXMERO

ADN

II
VI
VIII
IX

VIII

VI
IIIa

II(MONMERO)
IX
PROTENAS DE LA CPSIDA DE UN ADENOVIRUS
NOMBRE
II
III
IIIa
IV

LOCALIZACIN
Monmero del hexmero
Pentmero
Asociada al pentmero
Fibra

Core: asociada con el DNA

VI

Parte interna del hexmero

Protena minoritaria
Core
Conectando a las protenas VI

VII
VIII
IX
TP

Conectando a los hexmeros

por su mitad
Protena terminal del genoma

FUNCIONES
Estructural
Penetracin
Penetracin
Unin al receptor,
hemaglutinacin
Parecida a Histonas
empaquetamiento?
Estabilizacin/ensamblaje
del virin?
Parecida a Histonas
Estabilizacin/ensamblaje
del virin?
Estabilizacin/ensamblaje
Virologa
del virin?
Replicacin del genoma

Etapas de adsorcin, penetracin y desnudamiento de adenovirus

Unin del adenovirus a la superficie celular

CITOPLASMA

Receptor

Hueco
recubierto

Integrina
Endocitosis

Se disocian
Fibras
IIIa
VIII

Endosoma

10 min

H+
15 min

20-30 min

Se disocian
Pentmero base III
IX
Degradacin de las
protenas VI

Unin al poro del ncleo

>35-45 min
Disociacin de la cpsida

Ncleo
Contacto de la
histona HI con un
hexmero de la
cpsida

Unin de la Importina
7 y la Importina a
HI

Importacin del
hexmero de la
cpsida

Importacin del ADN

Virologa
unido a las protenas
VII y TP del virus

Modelo de entrada de poliovirus en las clulas (adsorcin,

penetracin y desnudamiento)
Virion
160S
Posibilidad A

Pvr
Desnudamiento
Endocitosis

Desnudamiento

Posibilidad B

Modelo de la formacin de un poro en la membrana

plasmtica despus de la unin del poliovirus
Unin del Poliovirus al receptor Pvr

VP3

VP1

VP4

Pvr

Virologa

 VIRUS CON ENVOLTURA

Virus Influenza A y B (Fam. Orthomyxoviridae)

HA Hemaglutinina
NA Neuraminidasa
M2 Canal de iones
M1 Protena de matriz
NP Nucleoprotena
PA , PB1, PB2 RNA polimerasa
cido silico (flechas rojas)

Sitio de rotura mediado por la

protena NA del Influenza virus
Glicoprotena

cido silico

Galactosa

Etapas de adsorcin, penetracin y

desnudamiento de Influenza Virus

Endosoma

Virologa

Hemaglutinina
(HA)

HA1

Homotrmero, en el que
cada subunidad consta de
2 polipptidos (HA1 y HA2)
unidos por un puente
disulfuro

HA2

Virus Influenza dentro del endosoma

Insercin del pptido fusin en la

membrana del endosoma

citoplasma
Trmero HA
Pptido fusin
de HA

Pptido fusin
de HA
Anclaje en la
membrana del
virus

Envoltura del virus

Interior del virus

Repleglamiento de las -hlices de HA

Fusin de ambas membranas

Pptido fusin de HA
Anclaje en la
membrana del
virus
Formacin del poro de fusin
poro de fusin

Virologa

 Lentivirus (VIH)
Etapas de adsorcin y penetracin VIH en su clula
husped

Espina = multmero de

glicosilaciones

Virin de VIH tipo 1

Gp120 (SU)

Envoltura del virin

Diagrama de un monmero de la glicoprotena de

la envoltura del VIH tipo 1. ( C ) regiones
conservadas (V) y variables de la protena SU. F
es el pptido fusin. Las regiones de los dominios
C que contactan con el receptor estn sombradas
con crculos grises.

1:
Interaccin
Gp120:CD4

VIH

2:
Cambio
conformacional

gp41 (TM)

3:
4:
Reclutamiento Insercin de
de CCR-5
gp41 en la
membrana

5:
Fusion de
ambas
membranas

6:
Penetracin

gp41
gp120
CD4

CCR-5

citoplasma

Necesidad de una molcula accesoria

Virologa