Avances de la investigacin

en la Amazona
Iquitos, 12 y 13 de diciembre del 2012

NOMBRE DE LA INVESTIGACIN
ANLISIS DE DIVERSIDAD GENTICA DE UNA COLECCIN DE AGUAJE DE Mauritia
flexuosa (Aracaceae: Lepidocaryeae) MEDIANTE MARCADORES MICROSATELITES
Olivera, J. E.1, M.S. Gonzales1. K. Meja 2,JC, Pintaud3, R. Ramirez4.
1. Lab. Gentica Molecular. Centro de Investigacin de Bioqumica y Nutricin
Alberto Guzmn Barrn. Facultad de Medicina San Fernando. UNMSM. 2. Instituto
de Investigaciones de la Amazona Peruana. 3. Institud de recherche pour
dvelopment. 4. Lab. Filografia y Sistematica, Facultad Ciencias Biolgicas. UNMSM
e-mail: joliverag@unmsm.edu.pe

FAMILIA: Arecaceae
SUBFAMILIA:Calamoideae
TRIBU: Lepidocaryeae
SUBTRIBU: Mauritiinae
GENEROS: Lepidocaryum, Mauritia, Mauritiella

Lepidocaryum
tenue

Fuente: www.palmweb.org

Mauritia
carana

Fuente: www.palmweb.org

Mauritia
flexuosa

Fuente: J Olivera

Mauritiella
acuelata

Fuente:
www.rarepalmseeds.com

Mauritiella
armata

Fuente: www.palmweb.org

Mauritiella
macroclada

Fuente:
www.watergardenersinternat
ional.org

DISTRIBUCION
Fuente: www.palmweb.org

Mauritia flexuosa

Bolivia, Brasil (Norte, noreste, sureste y oeste-central ), Colombia, Ecuador, Guyana Francesa,
Guyana, Surinam, Trinidad-Tobago, Venezuela, Per.

Autores: Dennis del Castillo Torres, Erasmo Otrola

Acevedo, Luis Freitas Alvarado. Ao publicacin 2006

Autor(es): Ernesto Gonzales Davila

Ao de Publicacin: 2009

OBJETIVO GENERAL

valuar la diversidad gentica de 20 individuos de Mauritia flexuosa (10 hembras y 10

machos de la coleccin del banco de germoplasma Alpahuayo-IIAP) mediante la
seleccin de 6 pares de cebadores microsatlite.
MATERIALES, METODOS Y RESULTADOS
Se enviaron de Iquitos a Lima, hojas verdes de 20 muestras de aguaje, en frascos de
centrifuga de 50 ml,. con deshumedecedor comercial (bola seca).
Las hojas fueron trituradas en mortero con nitrgeno liquido, y el polvo guardado en
tubos de 1.5 ml en congelacin. Luego se procedi a la extraccin de ADN total por el
mtodo CTAB (Doyle & Doyle, 1990) .
Las hojas fueron trituradas en mortero con nitrgeno liquido, y el polvo guardado en
tubos de 1.5 ml en congelacin. Luego se procedi a la extraccin de ADN total por el
mtodo CTAB (Doyle & Doyle, 1990) .
Se realizaron corridas en agarosa al 1% con SYBR Safe DNA Gel Stain para ver la
calidad del ADN; y el material se cuantifico en un en un espectrofotmetro
NanoDrop.
El PCR (reaccin en cadena de la polimersa se ejecuto siguiendo las recomendaciones
del articulo de Ferderman y col, 2012)

Deshumedecedor usado para traer

las hojas de aguaje, de Iquitos a
Lima.

Corrida de ADN en un gel de agarosa por

electroforesis horizontal

Pocillos: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18

Pocillos: 1

Calidad del ADN extrado,

por el mtodo CTAB

8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18

Cdi
go

Tm

Tamao
pb

Secuencia
repetitiva

Iniciador izquierdo

Iniciador derecho

57C

N
Alelo
s
10

Mf13

230-264

(CT)14

TTACAAGCGACCCCTCGTC

CGTCGAATAGGGTTTCAGTGG

Mf17

54C

10

210-232

(GA)18

GACAGCTTGTCATCCTCGC

TTCCATCCCAGTTCTCCCC

Mf19

57C

239-261

(CT)10

AGCCACGTGACACTCTACC

CTATAGGACCGGCCACCTG

Mf28

57C

184-200

TCCCACACTCTCTTGCCAC

TGAGGGCTGCGTTATGGTC

Mf30
Mf33

57C
57C

6
6

231-245
215-229

(GA)9(GC)(
GA)11
(CT)14
(CT)10

GAGGGGAGCTTCCTTGCTG
TGCCGCATTTAGGCTTTGG

ATTGGCGAAGGTCCAGGG
GGCCGGCGATTTATAACGG

Fuente: Ferdeman, S., Ch. Hyseni, W. Clement, A. Caccone. Conserv. Genet. Res. 2012 4(2) 355 -357.

INGREDIENTES
DEL PCR

Ingredientes

Concentracin final

Agua

Buffer

1X

dNTP

0.2 mM

Foward

0.2 uM

Reverse

0.2 uM

MgCl2

1.5 mM

Taq polimerasa

0.5 U/ul

ADN

20-60 ng

Carril:

1 2

3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

Carril: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
0
0
0
0
0
0
0
1

mf13
RANGO PESO MOLECULAR: 230-260 pb)

0
0
0
0
0
1
0
1

0
1
0
0
0
0
0
1

0
0
0
0
0
0
0
1

0
1
1
0
0
0
0
0

0
0
0
0
0
1
1
0

0
0
0
0
0
1
0
1

0
0
0
0
0
1
0
1

0
0
0
0
0
0
0
1

1
0
0
0
0
0
0
1

0
0
0
0
1
0
0
1

0
0
0
0
0
1
0
1

Carril:

12

MW
250

200
150

mf30

RANGO PESO MOLECULAR: 230-250 pb)

MW
300
250
200

mf33
RANGO PESO MOLECULAR: 200-270 pb)

Numero de alelos detectados por locus

microsatlite
Marcador

N Alelos

Referencia

Mf13

10

Mf19

Mf30

Mf33

Total

20

29

Promedio

3.33

DS

ndices de diversidad para cada locus de microsatlite

Locus

PIC

Ho

Hs

Fst

Fis

Fit

Mf13

0.71

0.80

0.710

0.051

-0.195

-0.026

Mf19

0.69

0.70

0.694

0.035

-0.045

0.139

Mf30

0.71

0.65

0.714

0.062

0.029

0.102

Mf33

0.65

0.45

0.651

-0.028

0.328

0.227

Promedio

0.433

0.462

0.021

0.020

0.074

DS

0.147

0.011

0.015

0.114

0.086

CONCLUSIONES
1. Se han evaluado 4 marcadores micro satlite de seis escogidos, del articulo de
Federman y col (2012).
2. Se observa una variacin alelica de 3.3 alelos por locus, bajo a lo esperado en el
articulo de Federman para los 4 alelos evaluados (4.83).
3. Hay una alta heterocigocidad en los individuos evaluados (4.33 en promedio),
4. Sin embargo, se pueden diferenciar dos grupos muy similares entre si, con poca
distancia gentica entre ellos.
5. Esto ultimo se corrobora con bajo valor Fst (0.015) indicando poca diferenciacin
gentica entre individuos.
6. Existe poca endogamia (Fit=0.086).

ESTE TRABAJO ES PARTE DE UN ESTUDIO DOCTORAL DE LA SUBTRIBU

MAURITIINAE, Y ESTA EN EL MARCO DEL PROYECTO PALMS (www.fp7palms.org)

AGRADECIMIENTOS
Dra. BETTY MILLAN, Lder del Proyecto PALMS en el Per

MUCHAS GRACIAS POR SU

ATENCION