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INTRODUCCIN3
OBJETIVOS4
MARCO TEORICO.........................................................................................5
MTODOS CLSICOS DE SECUENCIACIN..5
Mtodo qumico de Maxam y Gilbert .6
Mtodo de Sanger..8
SECUENCIACIN AUTOMTICA EMPLEANDO EL METODO ENZIMTICO.10
Secuenciacin empleando cebadores fluorescentes..10
Secuenciacin por terminadores fluorescentes
SECUENCIADORES AUTOMTICOS
Secuenciadores automticos capilares
Secuenciacin
automtica
en
geles
acrilamida/bisacrilamida
desnaturalizantes
CONCLUSIONES.
de
INTRODUCCIN
La estructura de la doble hlice del ADN fue descrita por James Watson y
Francis Crick en 1953. Dicho descubrimiento ha supuesto un hito en la historia
de la biologa y su modelo propuesto ha sido ampliamente confirmado.
Segn este modelo, la molcula de ADN est constituida por dos largas
cadenas de nucletidos con polaridad opuesta, unidas entre s formando una
doble hlice. Cada nucletido est formado por un azcar: la desoxirribosa, una
base nitrogenada que puede ser de cuatro tipos diferentes: adenina (A),
guanina (G), citosina (C) y timina (T) y un grupo fosfato.
Los nucletidos se enlazan entre s a travs del grupo fosfato formando
largusimas cadenas . La estructura fosfato-pentosa recorre el esqueleto de la
hlice, mientras que las bases se disponen formando un ngulo recto con el eje
de la misma.
Las dos cadenas de polinucletidos que constituyen una molcula de ADN se
mantienen unidas entre s gracias a la formacin de puentes de hidrgeno
entre las bases nitrogenadas complementarias de ambas cadenas que quedan
enfrentadas (dos puentes de hidrgeno entre A y T, y tres puentes de hidrgeno
entre G y C)
La estructura de un determinado ADN est definida por la ordenacin o
"secuencia" de las bases nitrogenadas en la cadena de polinucletidos,
residiendo precisamente en esta secuencia de bases la informacin gentica
del ADN.
La estructura en doble hlice del ADN, con el apareamiento de bases limitado
(A-T; G-C), implica que el orden o secuencia de bases de una de las cadenas
determina automticamente el orden de la otra, por ello se dice que las
cadenas son complementarias.
OBJETIVOS:
MARCO TEORICO:
SECUENCIACION DEL ADN
La secuenciacin
del
ADN es
un
conjunto
de
mtodos
y tcnicas bioqumicas cuya finalidad es la determinacin del orden de
los nucletidos (A, C, G y T) en un oligonucletidode ADN. La secuencia de
ADN constituye la informacin gentica heredable que forman la base de los
programas de desarrollo de los seres vivos (de procariotas, de eucariotas en el
ncleo celular, y en los plsmidos, en la mitocondria y en cloroplastos de las
plantas). As pues, determinar la secuencia de ADN es til en el estudio de la
investigacin bsica de los procesos biolgicos fundamentales, as como en
campos aplicados, como la investigacin forense. Adems, se puede utilizar la
secuenciacin del ADN para conocer las mutaciones somticas, como las
sustituciones de bases, generadas entre distintos organismos.
El desarrollo de la secuenciacin del ADN ha acelerado significativamente la
investigacin y los descubrimientos en biologa. Las tcnicas actuales permiten
realizar esta secuenciacin a gran velocidad, lo cual ha sido de gran
importancia para proyectos de secuenciacin a gran escala como el Proyecto
Genoma Humano. Otros proyectos relacionados, en ocasiones fruto de la
colaboracin investigadora a escala mundial, han establecido la secuencia
completa
de
ADN
de
muchos genomas de animales, plantas y microorganismos. A pesar de las
distintas tcnicas que permiten secuenciar el ADN, no siempre se puede llegar
a conocer el genoma completo de los organismos. Esto, puede llevar a errores
en la reconstruccin de los linajes y en la estimacin del tipo de mutaciones y
del nmero de mitosis generadas.
Mtodo
Sanger
de
Este
mtodo
de
secuenciacin de ADN fue diseado por Sanger, Nicklen y Coulson tambin en
1977 y se conoce como mtodo de los terminadores de cadena o dideoxi.
Para este mtodo resulta esencial disponer de un ADN de cadena
simple (molde) y un iniciador, cebador o "primer" complementario de una regin
del ADN molde anterior a donde va a iniciarse la secuencia. Este cebador se
utiliza como sustrato de la enzima ADN polimerasa I que va a extender la
cadena copiando de forma complementaria el molde de ADN.
El mtodo dideoxi de secuenciacin ideado por Sanger est basado en el
empleo de didesoxinucletidos que carecen de uno de los grupos hidroxilo, de
manera que cuando uno de estos nucletidos se incorpora a una cadena de
ADN en crecimiento, est cadena no puede continuar elongndose ya que la
ADN polimerasa necesita un extremo 3 OH para aadir el siguiente nucletido
y el desosinucletido incorporado carece de este grupo hidroxilo.
PARTE DE GUIMEL
SECUENCIADORES AUTOMTICOS
SECUENCIADORES AUTOMTICOS CAPILARES
Basados en electroforesis capilar (CE) Los sistemas de secuenciacin
basados en electroforesis capilar son muy recientes y est claro que
representan la prxima generacin de secuenciacin automtica. Su ventaja
principal es justamente sa: el proceso se automatiza todava ms, siendo por
ello muy cmodos. Basta colocar las reacciones de secuenciacin en las
placas microtiter y la mquina se encarga del resto. Adems son mucho ms
El
capilar
Secuenciacin automtica
en geles desnaturalizantes
de acrilamida/bisacrilamida
La secuenciacin automtica
mediante
geles
desnaturalizantes, se realiza
polimerizando un gel de
acrilamida/bisacrilamida entre
dos
cristales
montados
adecuadamente
sobre
el
cassette que sirve de soporte
para los mismos y que posteriormente se acoplar en el secuenciador
automtico para proceder a la carga de la muestras.
La secuenciacin automtica mediante geles desnaturalizantes, se realiza
polimerizando un gel de acrilamida/bis entre dos cristales montados
adecuadamente sobre el cassette que sirve de soporte para los mismos y que
posteriormente se acopla en el secuenciador automtico para proceder a la
carga de la muestras.
Los
4 desoxirribonucletidos-trifosfato (dNTP),
para polimerizar nuevo ADN.
sustratos
el pH adecuado
para
el
OTROS METODOS DE SECUENCIACION:
Secuenciacin por hibridacin:
Forma en la cual se puede utilizar la hibridizacin para secuenciar. La
molcula de ADN se hibridiza contra pequeos oligonucleotidos que son
como palabras. Despus, se determina la secuencia.
Una forma en la cual puede funcionar este mtodo es utilizando
microarrays. Estos son soportes pequeos en los cuales se imobilian
pequeos fragmentos de ADN en un orden conocido. Despus se pasa la
muestra de ADN (con secuencia desconocida) y se cuantifica el grado de
hibridizacin, y por consecuencia el grado de identidad con las secuencias
fijas en el soporte.Esto parece funcionar especialmente bien en la
identificacin de SNPs. Wang et al. reportaron que es posible identificar el
genotipo de un individuo analizando 500 SNPs a la vez en un experimento
de hibridizacin con un microarray de oligonucleotidos. Una posibilidad
para la secuenciacin de acidos nucleicos a futuro, que discuten los autores
Cantor y Smith es el hacer hibridizacin contra oligonucleotidos que formen
palabras de tal forma que se pueda ir determinando la secuencia
sobrelapando los fragmentos (de 6-8 nucletidos) con los cuales hbrida el
fragmento secuenciado .
1
2
3
CONCLUSIONES:
BIBLIOGRAFIA:
http://www2.iib.uam.es/seq/tecnicas/biomed1.htm#aplicaciones
http://www2.iib.uam.es/seq/tecnicas/maxam.htm
https://es.wikipedia.org/wiki/Reacci%C3%B3n_en_cadena_de_la_polimerasa
https://www.google.com.pe/search?q=Reacci
%C3%B3n+en+cadena+de+la+polimerasa&biw=1242&bih=585&source=l
nms&tbm=isch&sa=X&ved=0ahUKEwjGuKqzg57NAhVLWx4KHZ8bDgUQ_AU
IBigB#imgrc=otriRI4Vwq4NJM%3A
https://es.wikipedia.org/wiki/Secuenciaci%C3%B3n_del_ADN
http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/secuenciacion_acidos_nucleicos.
pdf