Cromatografa HPLC: Deteccin de cafena en t

supremo Tea with Lemon Flavor.

Integrantes: Tiara Araya, Brbara Cornejo, Javiera Retamal, Paula Salazar.

Escuela de Tecnologa Mdica, Universidad de Talca, 24 de junio 2016
Profesor: Ivn Razmilic Bonilla.
RESUMEN
En cromatografa liquida de alta eficiencia el compuesto a analizar pasa por la columna cromatogrfica a
travs de la fase estacionaria mediante el bombeo de la fase mvil que se encuentra a alta presin. En el
laboratorio se analiz una muestra de t supremo Tea with Lemon Flavor, la cual se procedi a medir la
concentracin de cafena correspondiente por bolsa de t; dicho anlisis comenz con el peso de la muestra y
luego untarlo en 200 ml de agua hervida, posteriormente se filtr y extrajo 100 l la cual fue inyectado al
HPLC; el detector arroj valores de rea y tiempos de retencin expresados en el cromatograma. Dichos
valores fueron tabulados, interpolados y comparados con los valores de estndar. Finalmente, con datos
obtenidos en la web se compararon las cantidades de cafena usados en la industria con los obtenidos en el
laboratorio.
Palabras claves: Cromatografa, fase estacionaria, fase mvil, cafena.
INTRODUCCION La cromatografa es una tcnica
que consta de la separacin de componentes en
una muestra a travs de propiedades tanto fsicas
como qumicas que poseen. Dicha tcnica es
ampliamente utilizada en distintos mbitos de la
ciencia dando rapidez y alta resolucin en los
resultados. El fundamento de esta tcnica se basa
en que los componentes interaccionan entre dos
fases las cuales son la fase mvil (inerte) y una
fase estacionaria (inmvil), en donde da como
resultado una serie de procesos de adsorcin y
desorcin en los movimientos de los componentes
de la muestra a analizar, los cuales son arrastrados
por la fase mvil a lo largo de la fase estacionaria
contenida en la columna del cromatograma,
producindose la separacin gracias a la diferencia
de las constantes de distribucin de los
componentes.
La cafena es un estimulante del sistema nervioso
central, siendo la droga ms consumida en el
mundo, cuando se consume en grandes
cantidades se vincula a un mayor riesgo de
cardiopatas, hipertensin arterial, osteoporosis,
defectos de nacimiento y cncer (Roberts, O
Brien. 2003). Esta droga ha sido consumida

durante siglos, en la actualidad las formas de

consumo estn dadas a travs de bebidas
gaseosas, caf instantneos, t, entre otros
productos. Dentro de los efectos positivos de la
ingesta moderada de cafena incluyen un mayor
estado de alerta y manejo de la funcin cognitiva.
Mientras que la menor fatiga es quizs su efecto
ms distintivo (
Luis Molina, 2012). Es
importante el anlisis de la cantidad de cafena que
contienen los productos que se consumen a diario,
en sta prctica se analiz el contenido de cafena
de una bolsa de t supremo Tea with Lemon Flavor
entregada por los docentes del laboratorio.
MATERIALES:
Cromatograma HPLC, muestra de T Supremo
Tea with Lemon Flavor, agua en ebullicin, soporte
universal, filtro, Erlenmeyer, matraz, vidrio reloj,
balanza analtica, bageta, jeringa, eppendorf, filtro
Millipore Miller GN nylon 0,20 m.

PROCEDIMIENTO:

En primer lugar se hizo la entrega de la muestra

analizar correspondiente a cada grupo del
laboratorio, nuestra muestra fue t supremo Tea
with Lemon Flavor. Se entregaron 2 muestras en
donde una de ellas se procedi a pesar su
contenido en una balanza analtica mientras con la
otra
bolsa
era
preparada
la
infusin
correspondiente en un Erlenmeyer con 200 ml de
agua hirviendo, se revolvi durante 3 minutos con
una bagueta hasta obtener un color caf intenso.
Posteriormente se enfri en agua y hielo para
luego filtrar la muestra y depositarla en un matraz
de aforo de 250 ml. Con una jeringa se extrajo 1 ml
y se traspas a un eppendorf filtrndola con
Millipore Miller GN nylon
# muestra
Tiempo de
0,20 m, finalmente se
retencin (RT)
analiz la muestra en el
1
0,67
equipo HPLC.
RESULTADOS:
Descripcin de la muestra:

2
3
4
5

0,75
0,83
1,33
2,77

rea
545518
6506
205176
292900
2939403

T supremo Tea with Lemon Flavor

- Peso bolsa ms muestra: 2,3 gramos
- Peso muestra del t: 2,1 gramos
Tabla N1: Estndares de cafena con un RT de
3,35
Estnd Concentrac
minutos,
ar
in
N
En ppm
rea
1

10

176.882

20

349.468,5

50

881.034

100

200

1.757.483
,5
3.644.309

250

4.385.647

300

5.289.320

expresados en ppm (mg/L), en una fase mvil de

Metanol- agua (70:30)

Grfico N1: Curva de calibracin de cafena,

obtenida a travs de los datos de la Tabla N1
considerando punto 0,0.

Tabla N2: Datos obtenidos de la Muestra

problema
analizada
con
la
tcnica
de
Cromatografa liquida de alta resolucin (HPLC).

(Ver anexos)

El rea referente a la cafena se encontr a los

2,77 min de retencin, se escoge entonces la
muestra N 5 para seguir el estudio.
A partir del grfico de los estndares de cafena se
puede determinar la concentracin en nuestra
muestra al extrapolar.
El rea obtenida del el cromatograma es de

2939403

Al reemplazar en la ecuacin de la recta tenemos:

Y= 17706 x - 2191,9
2939403 = 17706x 2191,g
x= 166,135 ppm (mg/L)
166,135 mg/L ----------- 1000 mL
X mg/L----------------- 250 mL
X = 41,534 mg/L

Entonces se tiene 41,534 mg en 250 ml. Pero

se quiere saber cunta cafena hay en la
muestra slida. Por lo tanto:
1 gr ------- 1000 mg
X gr ------- 41,534 mg
X = 0,041534 gr
Como la masa del te fue de 2,1 gr se calcula el
porcentaje de cafena presente en la muestra:
2,1 gr ------- 100%
0,041534 gr ------- x %
X = 1,9778%
Se dice entonces que 1,9778% de la muestra
problema de t corresponda a cafena.

utilizada frecuentemente en bioqumica y qumica

analtica utilizada para separar los componentes
de una mezcla basndose en diferentes tipos de
interacciones qumicas entre las sustancias
analizadas y la columna cromatografa (P. Yfera,
2007) en este caso la sustancia a medir
correspondi a la cafena.
Antes de realizar la medicin para saber la
concentracin de la muestra problema que
correspondi a una bolsa de t supremo sabor
limn hubo que realizarle una serie procesos, como
disolver el contenido, filtrarlo y aforarlo a 250 mL,
para finalmente transladarlo a un tubo eppendorf
para llevarlo a su medicin.
Se encontr que la concentracin de cafena en la
muestra problema fue de 41,534 mg/L,
correspondiente a un 1,9778%, de la muestra total,
esta concentracin se pudo calcular gracias a
soluciones estndar otorgadas por el profesor a
cargo que relacionaban la concentracin en ppm y
rea. La relacin que existe entre la variable
dependiente
(rea)
e
independiente
(concentracin)
analizadas
mostraron
una
dependencia lineal con la concentracin, lo que
facilita el clculo al interpolar en los grficos
presentes en los resultados anteriormente
presentados.
De acuerdo al Reglamento Sanitario de los
alimentos sobre los estimulantes o frutivos (D.S.
977/96), el t debe contener un mnimo,
expresado en base seca de: 1% de cafena
(Departemento de alimentos y nutricin,2010), de
acuerdo con este decreto, la cantidad de cafena
presente en esa bolsa de t estara respetando los
lmites establecidos por la ley.
Se busc informacin por la web para realizar una
comparacin de resultados con la informacin del
fabricante y la de nuestro laboratorio, la cual no se
logr, ya que, la informacin que proporciona el
fabricante no seala la cantidad o % de cafena por
bolsa de t.
CONCLUSIN

DISCUSIN
La HPLC es una tcnica precisa y sensible puesto
que Es un tipo de cromatografa en columna

Al trmino del prctico se determin que la tcnica

de HPLC es precisa y sensible, es una de las ms

certeras y de mayor aplicacin para confirmar

investigaciones, debido a su sensibilidad, su fcil
adaptacin a las determinaciones cuantitativas
exactas, su idoneidad para la separacin de
especies no voltiles o termolbiles y sobre todo,
su gran aplicabilidad a las sustancias que son de
gran inters en la industria. Cabe destacar que
genera
menos errores en comparacin con
antiguos instrumentos que eran manuales.

BIBLIOGRAFIA:

Arthur Roberts, Mary OBrien, Genell SubakSharpe. (2003). Enciclopedia de la medicina

ortomolecular Nutricuticos. Barcelona : Robin
Book.

Divisin de polticas pblicas saludables y

promocin departamento de alimentos y nutricin.
(2010). consolidado de consulta pblica propuesta
de modificacin de los artculos 452 al 464, del
reglamento sanitario de los alimentos sobre los
estimulantes o fruitivos (D.S. 977/96) . 24/06/2016,
de
Gobierno
de
Chile
Sitio
web:
http://www.minsal.cl/portal/url/item/9e890ba3147a2
d67e04001011e016e47.pdf

Luis Molina, C. A. (01 de Marzo de 2012)

Actualizacin sobre los efectos de la cafena y su
perfil de seguridad en alimentos y bebidas.
Obtenido
de
www.elsevier.es:
http://zl.elsevier.es/es/revista/revista-medicahospital-general-mexico-325/actualizacion-losefectos-cafeina-su-perfil-seguridad-90123160comunicaciones-breves-2012

Primo Yfera, E. Qumica organica basica y

aplicada. Revert, S.A. 2007.

Los resultados de nuestro trabajo arrojaron una

concentracin de 41,534 mg/L de cafena por bolsa
de t, la cual es similar a los estndares de
referencia. El contenido que se informa
oficialmente referente a la cafena es aproximada,
por lo que nuestro procedimiento y resultados
estaran efectuados correctamente, cumpliendo de
esta manera los objetivos del prctico.
Segn las informacin que proporciona el
Ministerio de Salud de Chile a travs de El
reglamento sanitario de los alimentos las
concentraciones de cafena que son permitidos en
los alimentos y bebestibles para el consumo del ser
humano estan muy por debajo de las
concentraciones de cafeina que proporcionaron
algunos t que fueron analizados en el laboratorio
por otros compaeros, los cuales salen de los
margenes de lo permitido produciendo a la larga
posibles complicaciones para la salud de las
personas.